STACLOT LA

Détection des lupus anticoagulants

1. Intérêt :
La neutralisation par des phospholipides purifiés en phase hexagonale pour la détection des
anticoagulants de type lupique (1, 2) dans le plasma.

Les lupus anticoagulants (LA) présentent la capacité d’allonger les temps de coagulation des tests
dépendant des phospholipides et sont cliniquement associer à : lupus, thromboses et
avortements spontanés. Leur présence peut être persistante ou transitoire.

La nécessiter de différencier les LA des anticorps anti facteurs et/ou de l’héparine.

2. Principe :
À 37°C les phosphatidyléthanolamine purifié en phase hexagonale sont reconnues par les
anticorps anti-phospholipides de type lupique.
L’allongement du temps de céphaline + activateur (TCA) est corrigé par cet apport de
phosphatidyléthanolamine HII,ce qui prouve la présence d’anticoagulants de type lupique.

3. Etape pré-analytique :
Prélèvement sur tube citraté.
Centrifugations pour bien déplaquetter le plasma, une 1ere fois 15min à 2000-2500g prélever le
surnageant et le centrifuger une 2e fois 15min à 2000-2500g (plaquettes résiduelles ‹10G/L).
Si conservation du plasma :
4h à 20 +/- 5°C.
1mois à -20°C (décongélation à 37°C).

4. Réactifs et matériels :
Réactif 1 (R1) : Buffer = 1ml tampon
Réactif 2 (R2) : Phosphatidyléthanolamine HII lyophilisé
Réactif 3 (R3) : plasma normal lyophilisé + inhibiteur Héparine
Réactif 4 (R4) : PTT-LS céphaline + activateur particulaire (Silice) lyophilisé
Réactif 5 (R5) : 1,5 ml de diluant pour le R4.
STA CaCl2 0,025M
STA control LA 1 et 2 : control négatif et positif en LA
Bain-marie à 37+/- 5°C
Et équipements habituel aux laboratoires (centrifugeuse, chronomètre, pipette, eau distillé..).

5. Préparation et conservation des réactifs :

Conservation sous l’état d’origine des réactifs, intact à 2-8°C jusqu’à date de péremption.
 R1 R2 R3 R4 R5 Control 1 et 2
reconstitution Prêt à 0,25 ml d’eau 0,5 ml d’eau 1 ml du R5 Prêt à 1 ml d’eau distillée
l’emploi distillée distillée Agitation l’emploi
intermittente
Stabiliser 3Omin à température ambiante avant l’emploi
Stabilité après 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C 8h à 20 +/-5°C
reconstitution 24h à 2-8°C Ne pas congeler 24h à 2-8°C
Ne pas congeler Ne pas congeler

6. Mode opératoire :

Tube 1 Tube 2 :
50 𝜇𝑙 plasma pur (patient ou
contrôle)
+

50 𝝁𝒍 R1 50 𝝁𝒍 R2

Mélanger incuber 9 min

50 𝝁𝒍 R3

Mélanger incuber 1 min

100 𝝁𝒍 R4

Mélanger incuber 5 min

Déclencher le chronomètre en ajoutant 100 μl STA-CaCl2 0,025M pré-

incubé à 37°C
7. Résultats :
La diminution du temps de coagulation (TC) du plasma du tube 2 ≥ à 8 sec par apport à celui du
tube 1 est significative d’une neutralisation des anticorps anti-phospholipides.

TC Tube 1 – TC Tube 2 Résultats

‹ 8 secondes -
≥ 8 secondes +

Avec control LA 1 et 2 respectivement négatif et positif.

8. Limites de la méthode :
 Insensibilité aux taux d’héparine ‹1 UI/ml de plasma.
 Certain anticorps anti-facteur peuvent interférer dans le test vu l’hétérogénéité de ces
anticorps, si doute effectuer un test spécifique pour leur mise en évidence.
 Donne un résultat faussement positif en cas de prise d’inhibiteurs de la thrombine (ex
hirudine, argatroban..).