α-amylase

Test cinétique-colorimétrique
avec CNPG3.
Code HBE03 20 x 2 ml

Conserver entre 2-8°C. Liquide

Principe = Δ Abs/min x 3954 = U/l pour sérum ou plasma

La determination cinétique-colorimétrique de l’activité de l’α- = Δ Abs/min x 7908 = U/l pour urine
amylase se fait suivant la réaction: Une unité internationale (UI) est la quantité d’enzyme qui
α-amylase transforme 1 µmol de substrat par minute, dans des conditions
10 CNPG3 −−−−−−→ 9 CNP + 1 CNPG 2 +G3 + G standard. La concentration est exprimée en unités par litre
d’échantillon (U/l).
α Amylase hydrolyse le 2 – chloro- 4- nitrophenol - α D-
maltotrioside (CNPG3) afin de donner du 2- chloro – 4- Facteur de conversion : U/l x 0.01667 = µkat/l
nitrophonol (CNP) et 2-chloro-4-nitrophenol-α D—maltoside Contrôle de qualité
(CNPG2) maltotriose (G3) and glucose (G). Il est recommandé d’utiliser des contrôles pour contrôler le
La vitesse de production de CNP peut être lue par un lecteur à fonctionnement de la méthode.. Si les valeurs de contrôle se
405 nm et est proportionnelle à l’activité de l’alpha amylase situent en dehors de la plage définie, contrôlez si l’instrument,
dans l’échantillon. les réactifs et le calibreur ne présentent pas d’anomalies.
Composition de réactifs Chaque laboratoire doit élaborer son propre système de
contrôle de la qualité et des mesures correctives si les
Réactif Tampon MES pH 6.0 100 mmol/L
contrôles ne sont pas conformes aux tolérances admissibles.
CNPG3 2.25 mmol/L
Sodium Chloride 350 mmol/L Sérums normale et pathologique humains (HBC01, HBC02) ou
Calcium Acetate 6 mmol/L bovins (HBC04, HBC05) sont disponible.
Potassium Thiocyanate 900 mmol/L Valeurs de référence
Azoture de sodium 0.95 g/l Sérum ou plasma <90 U/l
Pour le diagnostic in vitro. Urine <450 U/l
Préparation Ces valeurs sont données à titre indicatif. Chaque laboratoire
Le réactif amylase est prêt à l’emploie doit élaborer sa propre plage de référence.

Conservation et stabilité Charactéristiques de fonctionnement

Tous les réactifs sont stables entre 2 et 8°C jusqu'à la date de Plage de mesure: de 1 U/l (limit de détection) jusqu’à 2000 U/l
péremption indiquée, à condition d’être conservés dans un (limit de linéarité). Si les résultats obtenus sont supérieurs à
récipient fermé hermétiquement et à l’abri de la lumière et 2000 U/l, diluez l’échantillon 1 :2 avec une solution saline,
d’éviter les contaminations lors de leur utilisation. Après répétez la mesure et multipliez le résultat par le facteur 2.
l’ouverture, la réactif reste stable pendant 60 jours si fermé Présicion:
immédiatement après l’emploie et conservée entre 2-8°C, Intra-assai (n=20) Inter-assai (n=20)
Le réactif doit se présenter sous l’aspect d’une solution Moyenne (U/l) 61,2 165 65,1 172
limpide. Jetez le réactif, si vous constatez une turbidité ou une SD 1,00 2,44 2,84 4,57
précipitation ou si l’absorbance à blanc à 405 nm est ≥ 0,50. CV (%) 1,64 1,47 4,36 2,65
Sensibilité: 1 U/l = 0,0003 ΔA/min
Équipment supplémentaire
Exactidute: les résultats obtenus à l’aide des réactifs CYPRESS
- Spectrophotomètre ou colorimètre permettant des mesures à
DIAGNOSTICS n’ont pas présenté de différence systématique
405 nm
par rapport aux autres réactifs disponibles dans le commerce.
- Bain thermostatique à 37°C (Note 1)
- Cuvettes assorties (trajet optique 1,0 cm) Interférences
- Équipement général de laboratoire Hémolyse interfère dans les résultats.
Échantillon Une liste de médicaments et d’autres substances interférant
Sérum ou plasma, séparé des cellules le plus vite possible. Il avec la détermination d’α-amylase a été publiée par Young et al.
est recommandé d’utiliser héparine comme anticoagulant. Notes
- urine, ajustez approximativement à pH 7.0 avant la
1. L’activité d’α-amylase dépend de la température. Les essaies
conservation.
à des températures <37°C ou >37°C auront des valeurs
Stabilité :1 mois entre 2-8°C.
diminuées ou élevées.
Méthode 2. La salive et la sueur contiennent de l’alpha amylase. Pour
1. Longueur d’onde 405 nm; Température 37°C; Cuvette trajet diminuer les risques de résultats faussement élevés, éviter de
optique 1 cm. pipeter le produit par la bouche et porter de gants.
2. Ajustez le zéro de l’instrument avec de l’eau distillée.
3. Pipetez dans une cuvette:
Bibliographie
Ying Foo et al. Clin Chim 272, 1998: 137-147.
Sérum ou plasma Urine McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby CO. St Louis.
Solution de travail 1,0 ml 1,0 ml Torronto. Princeton 1984; 1112-1116
Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press 1995
Échantillon 20 µl 10 µl Young DS. Effects of diseases on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001
Mélangez et attendez pendant 30 secondes. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
Lisez l’absorbance (abs) initiale, démarrez le chrono et lisez Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory tests, 3rd ed AACC 1995.
les absorbances toutes les minutes pendant 3 minutes. Langdorp, 10. 2005.
Calculez la différence entre les absorbances et les
différences d’absorbance moyenne par minute (Δ abs./min).
Calculation
L’activité α-amylase (U/l)
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