MODULE :

ANALYSES BIOCHIMIQUE
ET MICROBIOLOGIQUE

ANALYSES MICROBIOLOGIQUES

Pr. ZERDANI ILHAM

 ANALYSE MICROBIOLOGIQUE

OBJECTIFS DU COURS

 L’étudiant doit être capable de décrire et distinguer le

monde microbien et ses particularités.

 L’étudiant doit connaître et savoir utiliser les différents

outils et appareils impliqués dans les manipulations de base
en microbiologie

 L’étudiant doit comprendre et appliquer le protocole

général suivi pour étudier et identifier les bactéries
 ANALYSES MICROBIOLOGIQUES

• GÉNÉRALITÉS SUR LE MONDE MICROBIEN

• Introduction au monde microbien
• Caractéristiques morphologiques des bactéries
• Caractéristiques physiologiques des bactéries
• Croissance bactérienne
• Paramètres agissant sur la croissance bactérienne

• TECHNIQUES DE BASE EN BACTERIOLOGIE

• Préparation des milieux de culture
• Moyens de stérilisation
• Techniques d’ensemencement
• Etude macroscopique et microscopique
• Numération bactérienne
 Microbiologie ?
Etude des microorganismes
 Qu’est ce qu’un microorganisme
Organisme microscopique existant sous forme de cellule*
unique ou en groupe

Ne sont pas visible à l’œil nu

*cellule: unité fondatrice de la vie

Exemples de microorganismes

Bactérie 1µ

Moisissure

Protozoaire 1mm

Virus 10mµ
Levure
 Types cellulaires des microorganismes
acellulaire

Présence de noyau

Absence de
noyau
 Exemples de virus
acellulaires, parasites obligatoires

oreillon
grippe

Virus SARS COV 2

Mosaïque du tabac
 Exemples de protozoaires

Protozoaire
unicellulaires, eucaryotes

Paludisme ou malaria:
Plasmodium falciparum
Paramécie

Amibiase:
Entamoeba histolytica
Exemples de champignons
Unicellulaires ou pluricellulaires, eucaryotes

Moisissure Levure

Fabrication du pain,
fromage, du vin, de
la bière…
 Exemples de Bactéries
unicellulaires, procaryotes

Microbiote

Salmonelle
(fièvre typhoïde)

Vibrion cholérique
(Choléra)
Classification phylogénétique du monde vivant
 IMPORTANCE DES MICROORGANIMES

Constitution des premiers écosystèmes et la biosphère

(première de forme de vie)
Cycles biogéochimiques

Activités essentielles pour toute vie sur terre:

Exp: Production d’oxygène par cyanobactéries,

Colonisation de tout les écosystèmes (diversité métabolique)

Outil de comprehension des processus de vie

 IMPORTANCE DES MICROORGANISMES

 Rôles dans les processus pathologiques

 Flore commensale: sol , homme, animx et végx (extr. et intr.)

 Industrie agroalimentaire: fromage, yogourt, picklets, lben,

 Industrie pharmaceutique: Production Antibiotiques

 Outil de recherche : génie génétique, recherche médicale….

 ANALYSE MICROBIOLOGIQUE

• GÉNÉRALITÉS SUR LE MONDE MICROBIEN

• Introduction au monde microbien
• Caractéristiques morphologiques des bactéries
• Caractéristiques physiologiques des bactéries
• Croissance bactérienne
• Paramètres agissant sur la croissance bactérienne

• TECHNIQUES DE BASE EN BACTERIOLOGIE

• Préparation des milieux de culture
• Moyens de stérilisation
• Techniques d’ensemencement
• Etude macroscopique et microscopique
• Numération bactérienne
LES BACTERIES
 Qu’est ce qu’une bactérie
Microorganisme unicellulaire, procaryote

Présence : presque partout

Caractéristiques Morphologiques
 forme Types de Aspects et groupements
bactéries
isolés Chaînettes Amas

Sphérique Coques
(ronde) ou
cocci

Streptocoques staphylocoques

Cylindrique Bacilles
(bâtonnet)

Salmonella, colibacille, Clostridium, Listeria, Bacillus

Formes et modes de groupement
 staphylocoques

streptocoques

Listeria Bacillus
micrococcus Bacilles sporulés
Forme spiralée : Forme filamenteuse :

Spirochète Streptomyces
Ultrastructure des bactéries
 Éléments Éléments
constants facultatifs
Membrane
cytoplasmique

Paroi flagelle
bactérienne
Chromosome Pilis sexuels

Cytoplasme

Capsule

Ultrastructure d’une bactérie

Observation microscopique d’une
bactérie à l’état frais

Vidéo
 CRACTERISTIQUES

*Croissance rapide: 20min à 45min

*Petite taille
*Diversité métabolique

Colonisation de divers milieux

ENNEMIS OU ALLIÉS?
Les Bactéries présentes partout sur terre, même dans les
milieux les plus extrêmes, ils peuvent êtres utiles ou
nuisibles selon les circonstances,
 Bactéries en Médecine
* Flore intestinale
(Microbiote)

* Production d’antibiotiques

Actinomycétes
 Bactéries en Médecine

Flore Pathogène

Elle provoque des maladies chez les différents organismes par

exemple des infections alimentaires : Salmonellose, botulisme,
listériose,……..

Vibrion
cholérique
Salmonelle
 Bactéries en Agroalimentaire
*Industrie alimentaire

 Fabrication de Produits laitiers:

yaourt , Lben, fromages…

Fabrication de Produits carnés:

Charcuterie, saucisson..

Conservation des aliments

 Bactéries en Agroalimentaire

Flore d’altération

Elle assure la biodégradation des tissus végétaux et des

animaux grâce à deux grands processus : la putréfaction
(protéolyse = dégradation des protéines) et le rancissement
(lipolyse = dégradation des lipides) par les microorganismes de
l’environnement.
 Bactéries au service de l’environnement

* Reines du recyclage de la matière organique

* Dégradation polluants

* Lutte biologique
 ANALYSE MICROBIOLOGIQUE

• GÉNÉRALITÉS SUR LE MONDE MICROBIEN

• Introduction au monde microbien
• Caractéristiques morphologiques des bactéries
• Caractéristiques physiologiques des bactéries
• Croissance bactérienne
• Paramètres agissant sur la croissance bactérienne

• TECHNIQUES DE BASE EN BACTERIOLOGIE

• Préparation des milieux de culture
• Moyens de stérilisation
• Techniques d’ensemencement
• Etude macroscopique et microscopique
• Numération bacterienne
 CARACTERISTIQUES
PHYSIOLOGIQUES DES
BACTERIES
 Multiplication Augmentation nombre

BESOINS

Conditions
Nutritionnels Energie
physicochimiques
*Lumière *Oxygène
*R° chimiques *Température
Vaste gamme de *pH
composés:
Minéral ou organique *Humidité
BESOINS NUTRITIONNELS
ET ÉNERGETIQUES
Une source d’ENERGIE (lumière du soleil ou nutriments)

Une source de CARBONE (CO2 ou carbone des nutriments)

Une source d’AZOTE et de SOUFRE

D’ELEMENTS MINERAUX
-fer, sodium, cuivre, zinc…
 ANALYSE MICROBIOLOGIQUE

• GÉNÉRALITÉS SUR LE MONDE MICROBIEN

• Introduction au monde microbien
• Caractéristiques morphologiques des bactéries
• Caractéristiques physiologiques des bactéries
• Croissance bactérienne
• Paramètres agissant sur la croissance bactérienne

• TECHNIQUES DE BASE EN BACTERIOLOGIE

• Préparation des milieux de culture
• Moyens de stérilisation
• Techniques d’ensemencement
• Etude macroscopique et microscopique
• Numération bactérienne
LA CROISSANCE BACTERIENNE
La multiplication bactérienne
La multiplication bactérienne
La multiplication bactérienne
LA COURBE DE CROISSANCE
BACTERIENNE
Courbe de croissance
Courbe de croissance
Courbe de croissance
Courbe de croissance
Courbe de croissance
 LA SPORULATION
En situation de carence ou de stress, la bactérie peut
adopter une stratégie pour sa survie :

se différencie vers une forme de résistance

métaboliquement inactive: spore
 LA SPORULATION

BACTERIE
VEGETATIVE
(forme normale)
-multiplication +
-toxinogénèse +

SPORE
(forme de survie)
-pas de multiplication
-pas de toxinogénèse

Appareil génétique de la
bactérie protégé par une
coque constituée de plusieurs
épaisseurs d’enveloppes
 ENDOSPORE

SPORE A L’EXTREMITE

• Critère d’identification

• Coloration spécial
LES PARAMETRES AGISSANT
SUR LA CROISSANCE
BACTERIENNE
LA PRESSION EN OXYGÈNE:

LE TYPE RESPIRATOIRE
 TYPES RESPIRATOIRES

1 - Les bactéries aérobies strictes 3 - Les bactéries aéro-anaérobies

ne se développent qu'en présence d'air. se développent avec ou sans air.

2 - Les bactéries microaérophiles 4 - Les bactéries anaérobies strictes

se développent lorsque la pression ne se développent qu'en absence totale
partielle d'oxygène est inférieure à celle ou presque d'oxygène qui est le plus
de l'air souvent toxique.
 TYPES RESPIRATOIRES
HOTTE ENCEINTE D'ANAÉROBIE

Jarre d’anaérobiose

sachet plastique

Exemples de moyens utilisés pour la culture des bactéries

anaérobies strictes
TYPES RESPIRATOIRES

Jarre d’anaérobiose
TEMPERATURE
 LA TEMPERATURE
T°croissance > 80°C.
Température de croissance proche de
celle du corps humain

T° de croissance Entre45 et 70°C

proche de 0°C
µorg

µorg
 LA TEMPERATURE

Etuve de laboratoire avec température intérieure réglable

Le PH
 pH

Bactéries Bactéries Bactéries

Acidophiles Neutrophiles Basophiles
La plupart des bactéries
médicalement importantes
 L’activité en eau :
AW (Activity Water)
Paramètre rendant compte de la disponibilité de l’eau d’un milieu est l ’Aw
= Activity water (activité en eau)
 Définition de l’Aw
Rapport de la pression partielle en eau d’un milieu et de
celle de l’eau pure.

0 <Aw< 1

Formule permettant de calculer l’Aw:

aw = n1/(n1 + n2)
n1 = nombre de moles du solvant (eau).
n2 = nombre de moles du soluté
 L’activité en eau :AW (Activity Water)

ralentit ou stoppe le
développement

1 = eau pure aw<0,5 (Moins de 10% en eau)

0.85 Aucune croissance

Méthode de conservation:
déshydratation et confisage
LA PRESSION OSMOTIQUE
 PRESSION OSMOTIQUE

non halophile halophile

Concentration
en sel

9 g/L 12 g/L 290 g/L

Méthode de conservation par

CONCENTRATION:
Concentration
physiologique Le salage et le confisage

Inversement proportionnelle à l'activité de l'eau (aw)

 Préparation des
milieux de culture
 Milieux de culture
Définition

Préparation solide ou liquide utilisée pour faire croître,

transporter ou conserver des µorganismes. Elle doit
répondre à leurs exigences nutritionnelles (Source
d’énergie, C, N,P, S..).
 Milieux de culture
l’état physique: liquide ou solide

La composition Classification selon L’utilisation

Milieux complexes/naturels /empiriques Milieux de bases ou usuels

Milieux synthétiques ou définis Milieux d’enrichissement
Milieux sélectifs
Milieux différentiels
Milieux de conservation
Milieux de transport
 Milieux de culture
Classification selon l’état physique

Liquide Solide

 Milieux solides contiennent un agent gélifiant appelé agar ou gélose

(généralement à la concentration de 15g/l), c’est un polysaccharide
obtenu à partir des algues rouges.

- N’est pas dégradée par la majorité des bactéries

- Se liquéfie à la température de stérilisation et reste liquide jusqu’à 45°C
- Se solidifie lorsque T°< 45°C.

 L’utilisation des milieux de culture solides permet l’immobilisation des

cellules et leur développement sous forme d’amas isolés
appelés « colonies ».

 Les milieux solides ou semi-solides, à base d'agar (gélose), sont utilisés

pour l'isolement de bactéries
 Milieux de culture
Classification selon la composition
Milieux complexes, naturels
ou empiriques:
• Milieux contenants des
hydrolysats préparés à
partir des tissus animaux ou
végétaux,
• Exemples de certains milieux
complexes : Bouillon nutritif,
Eau peptonée…
Milieux synthétiques ou
définis :
• Ce sont des milieux,
quantitativement et
qualitativement bien définis.
• Ils sont préparés en ajoutant
à de l’eau distillée des
quantités connues d’éléments
chimiques inorganiques ou
organiques hautement
purifiés.
• Ils sont utilisés
essentiellement pour l’étude
physiologique des
µorganismes
 Milieux de culture
Classification selon l’utilisation
Milieux de bases ou usuels

Développement de la plupart des bactéries exp: Gélose nutritive

Milieux d’enrichissement
Utilisés lorsque l’échantillon ou la concentration de la bactérie
recherchée sont faibles. Exp: cas recherche de la salmonelle

Milieux Sélectifs
Favorisent développement de certaines bactéries au détriment des
autres.
Exp : Bouillon MacConkey contient des sels biliaires inhibant les
bactéries non entériques sans affecter la croissance des espèces
entériques.
Milieu à forte concentration en sel : recherche des Staphylocoque
 Milieux de culture
Classification selon l’utilisation

Milieux différentiels

Milieux sur lesquels on peut distinguer différentes espèces de

bactéries d’après les caractéristiques de leurs colonies.

Milieux de conservation
Milieux énergétiquement pauvres, ce qui permet le maintien des
bactéries en vie ralentie et prévient l’accumulation des déchets
toxiques.

Milieux de transport
Milieux qui servent au transport et à la conservation d’un matériel (tel
qu’un prélèvement biologique) à partir duquel on se propose d’isoler un
ou des µorganismes. Maintien les germes en vie sans favoriser leur
croissance.
 Gélose MacConkey
Utilité: isolement et distinction des coliformes

Composition :

• Peptones
• Lactose ( sucre) : élément différentiel
• Sels biliaires et cristal violet : éléments
sélectifs
• NaCl
• Agar
• Rouge neutre: indicateur de pH

Milieu MacConkey : m. sélectif ( présence d’éléments sélectifs)

Milieu MacConkey : m. différentiel (colonies rouges/ colonies incolores en fonction
de la fermentation du lactose
Stérilisation
 Stérilisation
Règle indispensable :
Travailler en milieu stérile
- Le manipulateur doit préserver toutes les manipulations
qu'il réalise de la contamination bactérienne.
- Il doit travailler en milieu stérile:

* Milieux de cultures stériles, matériel stérile

* Manipulations bactériologiques en milieu stérile.

La moindre contamination par les germes atmosphériques

ou apportée par les instruments entraîne des résultats
faux et aberrants.
 Moyens de stérilisation
Pour effectuer ces stérilisations, il existe plusieurs moyens :

• la chaleur

• la filtration

• les agents chimiques

• les radiations.
 Stérilisation
Chaleur humide Stérilisation par la chaleur Chaleur sèche

-Four Pasteur (enceinte thermostatée).

-surtout utilisée pour la stérilisation de
la verrerie type pyrex (160°C pendant 2h
/180°C pendant 30 min ).
-La verrerie à stériliser doit être propre
et parfaitement sèche, éventuellement
bouchée avec du coton.

-Bec Bunsen : pour la stérilisation extemporanée (pour utilisation immédiate):

flambage des anses, des ouvertures des tubes, erlens, etc..
- Flamme bleue, la plus chaude, crée une zone de stérilité d'un diamètre d'environ
20 cm, par ascendance de l'air de cette zone.

- Pour que cette zone soit effectivement stérile, les courants d'air et déplacements
de personnes sont à proscrire.
 Stérilisation
Chaleur humide Stérilisation par la chaleur Chaleur sèche

stérilisation en atmosphère saturée en vapeur d'eau dans un autoclave

-Utilisée pour les milieux de culture et les solutions.
- (T°:120°C et pression:1bar pendant 15 à 20min).
- La durée peut varier en fonction du milieu et du volume des récipients.

Indispensable dans une unité de microbiologie

 Stérilisation par filtration
Consiste à faire passer la solution à stériliser à travers une
membrane de porosité < Ø bactérien (0,45 ou 0,22 micromètre)

Technique est utilisée particulièrement pour les milieux sensibles

à la chaleur ( contiennent des substances thermolabiles tq :
vitamines, protéines..).
La viscosité de ces milieux doit être faible
 Stérilisation par les agents chimiques
Ils sont utilisés en général pour la désinfection des salles et plans de
travail et pour la destruction des germes portés par des instruments
souillés tq: lames..

* les halogènes (Hypochlorite de Sodium, Chlore, Brome),

* les alcools aliphatiques,
* les aldéhydes (formaldéhyde ou formol),
* les phénols,
* l'hexachlorophène,
* détergents cationiques, etc...
Toutes ces substances sont bactéricides c'est-à-dire qu'elles tuent les
bactéries.

Désinfectants: Utilisation objets inertes

Antiseptiques : Utilisation tissus vivants
 Stérilisation par rayons électromagnétiques

 Les rayons UV: stérilisation de l'air des locaux (laboratoires, blocs

opératoires, etc...).

 Les radiations γ sont utilisées pour la stérilisation de dispositifs

médicaux, produits cosmétiques et certains aliments.
 Techniques
d’ensemencement
 Techniques d’ensemencement

L'ensemencement est la mise en culture d’un germe

dans un milieu nutritif

 Doit être pratiqué sur des milieux stériles avec des

instruments stériles dans une zone stérile ( près de la flamme
d'un bec BUNSEN ou sous la hotte) .

Ensemencement par étalement

Ensemencement en masse

Ensemencement en stries
 Techniques d’ensemencement
Ensemencement par étalement

Etaloir

Ensemencement en masse

But: Utilisées surtout pour la numération bactérienne

 Techniques d’ensemencement
Ensemencement en stries

But est l'isolement des bactéries.

Réalisé à l’aide d’une anse

Technique des quadrans

Etude macroscopique
et
microscopique
 ETUDE MACROSCOPIQUE

Décrire les critères morphologiques macroscopiques des

différents types de bactéries

La description des colonies doit mentionner :

-La taille/ la forme/ la couleur/ le contour/ L’aspect de la surface/
l’opacité/ le relief/ la consistance.
 ETUDE MICROSCOPIQUE
EXAMEN A I’ETAT FRAIS

Pour observer les bactéries à l’état vivant et en particulier

pour mettre en évidence leur mobilité .
Mode opératoire
•Déposer une goutte de culture bactérienne à l’aide d’une
pipette ou anse sur une lame propre et recouvrir d’une lamelle.

•Observation au microscope optique objectif x100 .

Observation microscopique
d’une bactérie à l’état frais
 ETUDE MICROSCOPIQUE

Coloration de Gram

 C'est la coloration de base en bactériologie .

Cette coloration permet de différencier les bactéries selon
deux critères :

- leur forme ,

- leur affinité pour les colorants . (Gram+ et Gram-)

(Différence dans la structure de la paroi)

 Pour réaliser cette coloration, on doit d’abord préparer

un frottis fixé
 1. Etalement

2. Séchage

3. Fixation

Étapes de préparation d’un frottis fixé

A Coloration de Gram B

Coloration avec violet de Gentiane

(1 min)

Rinçage suivi d’un traitement

avec le Luguol ( 30 s)

Traitement avec un mélange

d’alcool/acétone ( 10 s)

Coloration avec la fushine ou

safranine ( 1 min)

Gram + Gram -
 ETUDE MICROSCOPIQUE
Coloration de Gram
Observarvation au microscope optique objectifx 100
(grossissement ×1000),avec une goutte d'huile à immersion

Paramètres à définir::

Forme,( cocci ou bacuille)

Type de Gram (Gram+ et Gram-)
Mode de groupement.
 ETUDE MICROSCOPIQUE
Coloration de Gram
Observarvation au microscope optique objectifx 100
(grossissement ×1000),avec une goutte d'huile à immersion

Cocci Gram + en grappe de raisin Cocci Gram - en amas

 ETUDE MICROSCOPIQUE
Coloration de Gram
Observarvation au microscope optique objectifx 100
(grossissement ×1000),avec une goutte d'huile à immersion

Cocci Gram + en chainette Bacilles Gram – isolés ou en chainette

 ETUDE MICROSCOPIQUE
Coloration de Gram
Observarvation au microscope optique objectifx 100
(grossissement ×1000),avec une goutte d'huile à immersion

Bacilles Gram - en amas Bacilles Gram + en chainette

Numération
bactérienne
 NUMÉRATION BACTÉRIENNE

Dénombrer les bactéries = donner le nombre de bactéries

par unité de volume ( ml de culture analysée)
Applications:

 Contrôle de qualité d’un aliment Le nombre de bactéries existant dans un

échantillon d’un lait est comparé à des seuils à ne pas dépasser (normes de
qualité d’un lait)

 Evaluer la fertilité d’un sol : (en se basant sur son activité

microbiologique) Déterminer le nombre de bactéries par gramme de sol
peut renseigner sur sa fertilité, spécialement les bactéries intervenant
dans les cycles bio-géo-chimiques du carbone, de l’azote, du soufre, etc…

 Déterminer le degré de pollution d’un milieu aquatique : Le dénombrement

certaines bactéries (coliformes ) renseigne sur la qualité microbiologique
du milieu étudié et son degré de pollution.

Industrie pharmaceutiques: Efficacité des ATB

 MÉTHODES DE DÉNOMBREMENT
Méthodes directes
• Lecture au microscope
Compte aussi bien les cellules mortes
que les cellules vivantes.
Compte directement les cellules, le
résultat est rapide,
Méthodes indirectes :
(après culture)
• Numération sur milieu solide
• Numération sur milieu liquide
(méthode du NPP)
• Filtration sur membrane
Ne comptent que les cellules viables et
cultuvables dans un milieu de culture,
Demandent du temps (minimum 24h).
 MÉTHODES DE DÉNOMBREMENT
Hématimètre
Le comptage direct des cellules se fait au microscope à l’aide d’un hématimètre
appelé Lame de Thoma, de Malassez..
(c’est une lame munie au centre d’un quadrillage de dimensions bien déterminées),

Vue de face Vue de profil

 MÉTHODES DE DÉNOMBREMENT
Dénombrement après culture

C’est la méthode la plus utilisée, elle se fait de différentes

façons:

• Culture en milieu solide

• Méthode du nombre le plus probable (NPP)

• Méthode de filtration sur membrane

 Numération sur milieu solide

incubation

-Une colonie provient d’une seule cellule ou d’un amas de cellules, on exprime le
résultat en UFC/ volume de l'échantillon
- Choisir les boites contenant entre 30 et 300 colonies
 MÉTHODES DE DÉNOMBREMENT
Numération par la méthode du nombre le plus probable (NPP)
ou numération sur milieu liquide

 Ce dénombrement se fait en milieu liquide

 Le calcul du nombre le plus probable utilise des dilutions

de l'échantillon et pour l'interprétation fait appel à des
calculs de probabilité.

* La précision de cette méthode est nettement inférieure à

celle du milieu solide
Numération par la méthode du nombre le plus probable (NPP)

Préparation des dilutions

 Numération par la méthode du nombre le plus
probable (NPP)

Dilution 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7

Tubes +++ +++ +++ +++ ++- +-- ---

positifs
Nombre 3 3 3 3 2 1 0
caractéri
stique

Le nombre caractéristique est 321 à la dilution 10-4.

Le nombre le plus probable qui lui correspond dans la table de

Mac Grady est : 15
Donc le nombre de bactéries = 15x 104 (Dilution ayant donné
3+) germes/ml

N= NPPx Fd/Ve
 MÉTHODES DE DÉNOMBREMENT
Méthode de filtration sur membrane

• Elle consiste à filtrer un volume déterminé d’une suspension sur

une membrane filtrante de cellulose qui est ensuite déposée sur un

Milieu de culture solide.

1 : entonnoir stérile (250 ml)

2 : membrane (0,45µ de porosité)
3 : support en acier
4 : levier (pour casser le vide)
5 : vanne à vide

Appareil de filtration
 Membrane de Appareil de filtration
filtration

Dépôt de la membrane
filtrante sur le support
Stérilisation de la surface Positionnement de l'entonnoir
en acier de l'appareil de
de l'appareil de filtration filtration sur l'appareil de filtration

L'échantillon est versé dans Récupération de Dépôt de la membrane sur un milieu

l'entonnoir La membrane solide
1 2 3 4

5 6 7
 Numération bactérienne par spectrophotométrie
Principe
C’est une méthode optique fondée sur la propriété que
présente toute suspension de diffracter une partie de
l’intensité d’un faisceau de lumière qui la traverse en ligne
droite.
Identification
des bactéries
Echantillon Enrichissement et Identification
- biologique (sang, urines...) Isolement (culture pure)
- eaux (milieux sélectifs,T°...)
- aliments

Caractères morphologiques :
Forme et taille des cellules, morphologie des colonies, type de
Gram, morphologie et localisation des spores...

Caractères physiologiques et métaboliques :

Relation avec l’O2 ,sources de C et N, produits de
fermentation, optimum et gamme de température et pH de
croissance, mobilité, pigments, ...
Système de Galerie API