Stabilit Microbiologique des produits

cosmtiques De la formule au packaging

Les mthodes de dnombrement et

didentification des microorganismes

Evreux 14 juin 2012

Hlne Lesouhaitier
Bioadmetys

A.D.M.E

Pharmaceutique
Cosmtique

- Etude de permabilit
- Profil Physico-Chimique
- Cintique & Profil Mtabolique
(Partenariat Biogalenys)

Microbiologie

Toxicologie

- Dtermination Qualit
Microbiologique
- Dtermination Efficacit
Microbiologique
- Risk Assessment
- Irritation oculaire et cutane
- Interaction contenant-contenu
- Phototoxicit
- Sensibilisation
- Risk Assessment

Contrle qualit microbiologique

Enjeu majeur :
Dnombrer et identifier rapidement et simultanment les
bactries vivantes prsentes dans un milieu

Contrle microbiologique
- Essais qualitatifs de prsence/absence de microorganismes
viables
- Essais quantitatifs de dnombrement des microorganismes
viables
- Essais didentification

Contrle qualit microbiologique

-ISO 21149 : Dnombrement et dtection des bactries
arobies msophiles
-ISO 16212 : Dnombrement des levures et moisissures
-ISO 18415 : Dtection des micro-organismes spcifis
absences de microorganismes pathognes
(Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Candida albicans)

Evaluation de lefficacit dantimicrobiens

-Procds de dcontamination

-Traitement de surfaces (plastiques, inox)

-Dsinfectants, antiseptiques

Mthodes conventionnelles
dnombrement
Techniques fondes sur la croissance en milieu de
culture
-Plaque (surface ou profondeur)
-Filtration
-NPP (nombre le plus probable)

dtection uniquement des microorganismes viables

temps de culture peut tre long (mycobactries)

Mthodes alternatives (PE)

Mthodes fondes sur la croissance
-Mthodes lectrochimiques
-Mesure de la consommation ou production de gaz
-Bioluminescence (ATP)
-Microcalorimtrie
-Turbidimtrie
-Milieux chromognes

Mthodes alternatives (PE)

-Mesures directes (en temps rel)
-Indicateurs de viabilit (cytomtrie)
-Techniques de filtration et pifluorescence directe

-Analyse de composants cellulaires

- Phnotype

(ELISA, composition en acide gras)

- Gnotype (amplification des acides nucliques par PCR)

Mthodes alternatives (PE)

Ncessit de valider la mthode
-Limite de dtection
-Limite de quantification
-Fidlit
-Linarit
-Exactitude
.

Autres mthodes
Viabilit cellulaire
Test Live Dead
Activit enzymatique : marqueurs fluorescents
Activit enzymatique : marqueurs colorimtriques

Mthodes didentification microbienne

Mthodes biochimiques (phnotype)
-Galeries API
-Systmes automatiss
mthode longue en cas durgence

Mthodes molculaires (gnotype)

-PCR
-Squenage ARN 16 s
8 24 heures ou +

Mthodes didentification microbienne

Spectromtrie de masse
MALDI-TOF-MS
Matrix-assisted-laser desorption / ionisation-time-of-flight
mass spectrometry)
-Technique base sur le profil protique
-Technique facile, rapide, haut dbit, peu couteuse (hors cot
de lappareil!), efficace
-Limite : bases de donnes incompltes pour certains genres

Mthodes didentification microbienne

Spectromtrie de masse
travaux pour une utilisation en routine dans les laboratoires
de contrle
espoir pour les bactries anarobies