MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT

SUPÉRIEUR ET DE LA RECHERCHE
UNIVERSITÉ 20 AOÛT 1955
SCIENTIFIQUE SKIKDA
FACULTÉ DE SCIENCE
Département de Science de la nature et de la vie
Specialité: Microbiologie
TP D’outil de microbiologie biochimiques et moléculaires

Membres de travail:
-Khemici Rahma Encadrée par:
-Ghaceb Selma
-Ramdane Rayane Dr.;
-Guettari Djihane
-Amrouche Nour El Houda
Année universitaire: 2022/2023
 Introduction
L'examen microscopique tout seul n’est suffisant pour caractérise un germe, pour cela il est nécessaire de mise
en culture et d’ensemencer le micro-organismes sur des milieu de culture
Tout d’abord , le mise en culture est la propagation des bactéries est d’autres micro-organismes dans des milieu
nutritifs artificiels

L’ensemencement procédé consistant à introduire, dans un milieu de

culture préparé, des germes microbiens des bactéries ou un produit
organique sur pecté de contenir des bactéries pathogènes afin de les mettre
en évidence, on remarque 2 type d'ensemencements

1)Sur un milieu liquide: soit à partir d’un

2)Sur un milieu solide: est la technique des 4
produit solide, écraser la colonie prélevé à
quadrants qui consiste à disperser le
l’aide d’une anse de platine ou pipette de
microorganisme à la surface d’un milieu
paster sur la paroi du tube, pour obtenir des
solide afin d’obtenir des colonies séparés
colonies séparés
Objectif: Extraire et voir à l’ œil nu l’ADN d’un oignon
Principe:
La technique utilisée permet de mettre en évidence de façon simple l’amas
appelée « méduse » qui pourra être coloré avec le vert de méthyle

Matériels et Réactifs
Ø Ethanol Ø Entonnoir
Ø Sel de cuisine (NACL ) Ø Papier filtre (compresse)
Ø Liquide vaisselle (détergent) Ø Une cuillère
Ø L’eau distillé Ø Mortier et pilon
Ø Vert de méthyl Ø Pipette
Eau Sel de
Ø Oignon distillé cuisine
Détergen
Ø Bécher Entonnoir t
Et Bécher
Ethanol
Ø Tube à essai

Pipette
Cuillère Mortier
 MODE OPERATOIRE/LE PROTOCOL
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Ø Eplucher et couper ou o Au fur et à mesure que vous broyer, ajouter une demi
rapper l’oignon en petits cuillère du sel (NaCl).
morceaux. o Ajouter quelques gouttes de liquid vaisselle (detergent)
Ø Placer les morceaux Le NaCl et le détergent
d’oignons dans un dégradent la membrane
portier et broyer jusqu’à cellulaire et nucléaire, et
obtenir une purée les protéines liées à
épaisse. l’ADN.

3
v Ajouter quatre cuillère (͌≈20mL) d’eau
distillée à la soupe.
v Continuer à broyer les composants
jusqu’à ce que la purée soit homogène
 4
q Filtrer le mélange purée d’oignon dans un bécher en compressant le
contenu d’une manière à recueillir la solution de lyse (le filtrat).
q Verser le filtrat dans un tube à essai (1/3 de volume du tube).
.
q Ajouter lentement de l’alcool (de la même quantité que le filtrat) en le
faisant couler le long de la paroi du tube.
 Observation
Au bout de quelques secondes,
une pelote blanche apparait dans
l’éthanol. C’est l’ADN le
précipitât.
L’ADN est insoluble dans l’alcool et
precipite donc pour former l’amas
blanc appelé la “Méduse”.
v Prélever à la pipette et ajouter
quelques gouttes de Vert de
Méthyle (colorant spécifique de
l’ADN) dans le tube à essai de
l’étape précédent.
Après quelques secondes a une minute,
on observe la méduse colorée en bleu-
vert.
 conclusion

L’Acide DésoxyriboNucléique (ADN) est constitué de petites

séquences appelées gènes. Plusieurs recherches impliquent la
manipulation de l’ADN, y compris son extraction.
L’ADN extrait peut servir à des fins diverses, dès enquêtes
criminelles, diagnostique des maladies infectieuses et génétiques, la
classification et l’identification des nouvelles espèces animales et
végétales, ou encore dans la génie génétique.