FICHE PROTOCOLE :

L'extraction et la coloration de la molécule d'ADN

Principe de l'expérience : Il s'agit d'extraire le contenu du noyau. Il faut pour cela casser la membrane plasmique et la membrane qui est autour du noyau. Comme le
contenu du noyau est fragile, toutes les réactions se passent à froid pour limiter les dégâts.

Matériel à disposition :
- mortier et pilon - entonnoir -ciseaux
- pipette
- sel
- béchers - matériel frais : banane, kiwi... - morceau de gaze (papier de filtration)
- un tube à essai - agitateur en verre - produit vaisselle
- eau distillée - cuillère - alcool
- verre de montre - vert de méthyle : colorant

Protocole : PRÉVOIR DE NETTOYER LA TABLE APRÈS L'EXTRACTION !!!

1- A l'aide des ciseaux couper des très petits morceaux et les mettre dans le mortier.
2- A l'aide du mortier et pilon, broie le matériel frais à ta disposition en écrasant et sans choc
pour ne pas casser le mortier.
3-Ajoute 3-4 pincées de sel et 2 gouttes de liquide vaisselle, puis broie de nouveau. Dilue le
tout en ajoutant 2 ou 3 cuillères à soupe d'eau distillée.
4-A l'aide de l'entonnoir, muni d'une gaze surmontant un tube à essai, filtre la préparation pour
récupérer les gros résidus.
5- Incline le tube à essai et ajoute avec une pipette 2-3 mL d'alcool (environ 2 cm sur le tube)
en le faisant couler doucement le long de la paroi du tube. NE PAS SECOUER !!!
L'alcool est moins dense que l'eau, il va donc se former deux phases (l'eau et l'alcool ne se
mélangent pas) : une sorte de « méduse » blanche se soulève dans l'alcool.
∆Appelle le professeur pour vérification
6- Avec une pipette propre, prélève délicatement la « méduse » et dépose-là dans le verre de
montre.
7- Ajoute 2 gouttes de vert de méthyle (colorant spécifique de la molécule d'ADN) et
attend 2 minutes.
8- Rince délicatement pour faire partir le colorant en versant de l'eau distillée.