Mettre en œuvre un protocole pour extraire et colorer l’ADN

Le matériel nécessaire sur la paillasse:

- matériel frais : choux-fleur, oignon, kiwi,…
- une cuillère à soupe ou équivalent, un scalpel, un mortier et son pilon,
- du gros sel (pour améliorer le broyage et favoriser la dilution de l'ADN),
- liquide vaisselle (pour dissoudre les membranes cellulaires),
- un morceau de gaze (pour le filtrage),
- un entonnoir sur un tube à essais, dans un portoir,
- de l'éthanol ou de l'alcool à brûler (pour favoriser la précipitation de l'ADN),
- une pipette Pasteur ou une aiguille montée à bout recourbé,
- un verre de montre contenant quelques gouttes de vert de méthyle acétique (colorant de l'ADN),
- un verre de montre contenant quelques gouttes d'eau.

Le protocole:
1- Prélevez environ une cuillère à soupe de matériel frais dont on veut extraire l'ADN.
2- Déposez le dans le mortier puis le fragmenter en utilisant le scalpel
3- Ajoutez une grosse pincée de gros sel et 7 à 8 gouttes de liquide vaisselle
4- Broyez le mélange avec le pilon
5- Déposez le broyat sur la gaze et pressez au-dessus de l'entonnoir
6- Ajoutez lentement l'éthanol dans le tube à essais, en quantité égale au broyat.
7- Agitez très lentement (quelques rotations du tube), et attendez quelques minutes. Des filaments
blancs se forment et remontent: c'est « la méduse".
8- Enroulez ces filaments avec une pipette (ou une aiguille montée...) à bout recourbé et déposez-les sur
le verre de montre contenant le vert de méthyle.
9- Rincez « la méduse » en la transvasant dans le verre de montre contenant quelques gouttes d'eau.
10- Observez la coloration de « la méduse » sur un fond blanc

Mettre en œuvre un protocole pour colorer les noyaux cellulaires

Le matériel nécessaire sur la paillasse:

- une pince fine, des ciseaux fins, un scalpel,
- une lame, une lamelle,
- un petit agitateur
- un verre de montre contenant le colorant (vert de méthyl),
- un verre de montre contenant de l’eau,
- une écaille d'oignon ou d’un autre végétal dont l’épiderme se prélève facilement.

Le protocole:
1- Repérez la face interne, en creux, de l'écaille.
2- Avec les pinces fines, soulevez l'épiderme: c'est une peau fine et transparente.
3- Avec les ciseaux, coupez un morceau d'épiderme de quelques millimètres de côté.
4- Placez ce morceau dans le verre de montre contenant le colorant pendant une trentaine de secondes
puis placez le dans l’eau pour le rinçage.
5- Déposez sur la lame, au centre, une goutte d’eau et une goutte de colorant à l’aide de l’agitateur.
6- Posez ce morceau sur la goutte de colorant, sur la lame. Attention: l'épiderme a tendance à s'enrouler
si le morceau est trop grand.
7- Tenez la lamelle inclinée entre deux doigts, posez-la sur la préparation.
8- Vérifiez par transparence que le morceau d'épiderme n'est pas replié ou froissé. Si c'est le cas, il vaut
mieux recommencer.
9- Si le colorant déborde de la lamelle, aspirez un peu de colorant en posant du papier absorbant à côté
de la lamelle.
Protocole sur le site académique : http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/ress/genetique/extract_adn/
adn1.html
Protocole sur le site académique : http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biologie/ress/genetique/extract_adn/
adn1.html