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Ralisation de prparations microscopiques de mitose

Introduction
Prparation
Protocole
Rsultats
Solutions
Fournisseur

Introduction

La mitose ou division cellulaire est un mode de reproduction asexue des cellules eucaryotes
permettant leur multiplication. Elle conduit, partir d'une cellule mre, la formation de
deux cellules filles identiques gntiquement, entre elles et avec la cellule mre, car au cours
de ce processus, les chromosomes de la cellule mre sont dupliqus et rpartis galement
entre les cellules filles. Chez les organismes pluricellulaires, c'est le principal facteur
responsable de la croissance des tissus.
Pour observer aisment les diffrentes phases de la mitose et les chromosomes, il est
prfrable d'utiliser de jeunes organes en croissance dans lesquels les mitoses sont
nombreuses. En outre, les cellules vgtales tant gnralement plus grosses que les cellules
animales et donc plus faciles observer au microscope et l'utilisation d'organes vgtaux ne
soulevant pas de problmes thiques, il est aussi prfrable d'utiliser des organes vgtaux.
Un matriel biologique particulirement adapt, facile obtenir et peu coteux est constitu
par les jeunes racines obtenues la base de bulbes de diverses plantes (ail, oignon, chalote,
jacinthe).

Prparation

Pour obtenir le dveloppement des racines en quelques jours (gnralement 2 5 jours), il


suffit de placer les bulbes quelques jours avant la manipulation sur un rcipient rempli d'eau
de faon ce que le plateau du bulbe (sa base) baigne dans l'eau. Pour maintenir un niveau
d'eau suffisant en dpit de l'vaporation, il suffit de rajouter chaque jour un peu d'eau dans les
flacons.
La photographie ci-dessous montre le rsultat obtenu en quelques jours pour diffrents bulbes.
La croissance des racines est rapide, de l'ordre de quelques mm par jour. Elle rsulte des
mitoses qui se produisent dans le mristme racinaire, zone de croissance situe dans la zone
sub-apicale de la racine.
Bulbes d'oignon, d'ail et d'chalottes aprs croissance des racines

Le mristme forme une petite tche visible lil nu, proche de l'extrmit des racines,
comme on le voit dans le clich ci-dessous. C'est la rgion qu'il convient de prlever pour
raliser la prparation.

Protocole
1. Prlever avec des ciseaux une jeune racine en
croissance sur un bulbe. Couper le segment terminal
5 mm de l'extrmit et le dposer sur une lame porte-
objet. On doit observer prs de l'extrmit le
mristme qui forme une petite tache.
Plus le fragment prlev est petit, dans l'idal limit
au mristme, plus le rapport du nombre de cellules
en mitose par rapport au nombre total de cellules est
lev, facilitant ainsi l'identification des figures de
mitose dans la prparation microscopique finale.

2. Recouvrir l'chantillon d'acide chlorhydrique 1


mol.L-1. Laisser agir 5 minutes pendant lesquelles
l'acide hydrolyse le ciment pectique qui relie les
parois cellulaires. Ceci facilitera ensuite la
dissociation des cellules.

3. Enlever l'acide avec un essuie tout utilis comme


papier buvard en faisant attention de ne pas coller
lchantillon sur le papier.

4. Recouvrir l'chantillon d'une solution d'orcine et


laisser agir pendant 20 minutes.

5. liminer le colorant avec un essuie tout en faisant


attention de ne pas entraner l'chantillon.

6. Recouvrir d'une goutte d'acide actique 45 % et


poser une lamelle couvre-objet.

7. Appuyer doucement sur la lamelle (attention,


fragile !) pour aplatir l'chantillon de faon former
une couche monocellulaire en dplaant lgrement la
lamelle tout en appuyant pour provoquer la
dissociation des cellules.
Rsultats
L'identification des figures de mitose ncessite d'explorer soigneusement
l'ensemble de la prparation car les cellules sont dissocies la suite des
traitements subis et le nombre de cellules en division par rapport au nombre total de
cellules est faible.
Les clichs ci-dessous ont t raliss avec un grossissement du microscope x 400
et un zoom numrique x 2. Ils prsentent dans l'ordre chronologique du
droulement les phases caractristiques de la mitose, prophase, mtaphase,
anaphase, tlophase. La plupart des clichs montrent aussi des cellules en
interphase.

Interphase (en bas) et prophases Interphase ( gauche) et mtaphase

Anaphase ( gauche) et interphase Tlophase

Solutions

Acide chlorhydrique 1 mol.L-1 Orcine actique, solution mre


Dans une fiole jauge de 1 L, verser 914 mL Dissoudre 1 g dorcine dans 45 mL
deau distille. dacide actique pur.
Complter 1 L avec de lacide chlorhydrique Faire bouillir jusqu dissolution et laisser
36 % (densit 1,178). refroidir.
Filtrer et conserver le filtrat au rfrigrateur.
Solution dilue prparer
extemporanment
Mlanger 9 mL de solution mre avec 11 mL
deau distille et rpartir dans des flacons
compte-goutte