TUTORAT PASS 2020/2021

UNIVERSITÉ DE PARIS

UE3 : Biologie Cellulaire

FICHE 10
L’apoptose
Il s’agit d’une fiche récapitulative non exhaustive des notions essentielles
concernant vos cours. Cela ne remplace pas les supports qui vous sont donnés
en cours et vos notes se rapportant aux explications des professeurs.

Il est absolument nécessaire d’avoir compris ces notions avant tout

apprentissage «par cœur» qui se révèlerait absolument improductif. Le meilleur
moyen de réussir reste la compréhension, un apprentissage consciencieux des
diapositives et un entraînement régulier (nous vous conseillons de vous rendre
régulièrement aux examens blancs du tutorat)

ASSOCIATION POUR L'ACCÈS SANTÉ UNIVERSITÉ DE PARIS

A2SUP

Bureau T203 – 45 rue des Saints-Pères, 75006 Paris

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A2SUP 2020-2021 L’apoptose 2
 Plan de la fiche
I- Définition et généralités .................................................................................... 4
1- Définitions .................................................................................................................. 4
2- Les différentes formes de mort cellulaire .................................................................... 4
II- Les protéines de l’apoptose ............................................................................. 6
1- Les caspases ............................................................................................................. 6
a) Les fonctions des caspases effectrices ................................................................... 6
b) Voie extrinsèque ..................................................................................................... 7
c) Voie intrinsèque ...................................................................................................... 7
2- La famille BCL-BAX .................................................................................................... 8
3- Cas de la protéine p53 ............................................................................................... 8
III- Caractérisation morphologique et biochimique des cellules en apoptose ou
en nécrose ................................................................................................................ 9
IV- Apoptose et cancer ......................................................................................... 10
QCM d’entrainement .............................................................................................. 11

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I- Définition et généralités

1- Définitions

L’apoptose correspond à la mort cellulaire programmée. C’est un programme

constant. C’est un peu comme le suicide de la cellule. Les mécanismes sont initiés dans le
noyau et ont pour but de cliver l’ADN, ce qui empêche la cellule de se reproduire et de pouvoir
être dégradée. L’organisme a besoin de programmer la mort de ses cellules, c’est
indispensable. C’est un phénomène qui n’est pas très couteux en termes d’énergie. Les
cellules vieillissent et l’on fabrique constamment de nouvelles cellules, il faut donc faire mourir
les anciennes. Cela permet de maintenir un stock de cellules saines afin d’assurer ses
fonctions physiologiques et d’éliminer les cellules endommagées afin d’éviter un mauvais
fonctionnement. Ainsi les cellules de notre organisme ont une durée de vie moyenne bien
définie en fonction de l’organe qu’elles composent :
 Cellules intestinales : 7 jours, ça veut dire qu’on a un nouveau tube digestif tous les 7 jours
 Hématies (globules rouges) : 3 mois, mais pour ces cellules, on ne parle pas d’apoptose
car les hématies n’ont pas de mitochondries.
 Globules blancs et neutrophiles : 5 jours
 Plaquettes : 8 jours
 Peau : 2à 3 semaines
 Cellules osseuses : 30 ans
 Neurones : jamais ou très peu remplacés
 Cellules souches : meme durée de vie que nous

Les cellules de notre corps suivent généralement le chemin suivant :

Cellule souche => différenciation => prolifération => survie => mort
Rappel : un organe se forme suite à la prolifération de différentes cellules qui se sont
différenciées.
Différenciation : processus irréversible durant lequel une cellule acquiert une fonction
spécifique.
Prolifération : production de cellules différenciées. Une absence de prolifération peut causer
des maladies (durant la croissance d’organes ou le remplacement de certaines cellules
notamment) et trop de prolifération peut causer des maladies comme des cancers.
Survie : maintien des cellules différenciées vivantes. Une absence peut causer des apoptoses
massives et donc des maladies et trop de survie peut favoriser le maintien de cellules
endommagées et être aussi la cause de maladies.
Il est donc nécessaire que la différenciation, la prolifération et la survie soient
contrôlées et régulées !!

2- Les différentes formes de mort cellulaire

Il existe deux principaux types de signaux envoyés aux cellules : signaux de maintien de
survie cellulaire et des signaux de mort cellulaire ou d’inhibition des signaux de vie. Ils
sont dus à deux types de facteurs :
Facteurs internes Facteurs externes
Programme génétique Apport en O2 : pas de vie sans O2
Etat de différenciation de la cellule Nutriments
Age Signaux externes par exemple les cytokines qui
Etat d’avancée du cycle cellulaire peuvent induire une prolifération de cellules
Métabolisme Interaction entre les cellules : donner des signaux
Etat du génome, car si abimé, processus pour de prolifération comme de mort
tuer les cellules car une cellule avec un génome Substrats toxiques
abimé c’est pas très cool Stress environnemental ou cellulaire

A2SUP 2020-2021 L’apoptose 4

Ces facteurs sont reçus par la cellule. Il en résultera une réponse qui en fonction des signaux
pourra être la prolifération, la quiescence, la différenciation, la sénescence ou bien des
morts programmées. Il existe environ une dizaine de différents types de morts cellulaires
mais nous ne verrons que 3 exemples ici :
Mort cellulaire Modifications morphologiques
1. Condensation de la chromatine le long de l’enveloppe nucléaire
2. Condensation cytoplasmique
3. Bourgeonnement de l’enveloppe nucléaire
4. Fragmentations de l’ADN
5. Formation de corps apoptotiques
6. Phagocytose par les cellules avoisinantes

Apoptose

Absence de condensation de la chromatine.

Vacuolisation importante du cytoplasme =
Autophagie accumulation de ces vacuoles autophagiques, c’est
ça qui tue la cellule.
Peu de phagocytose des cellules avoisinantes in vivo.

Condensation au hasard de la chromatine, noyau très hétérogène.

Gonflement irréversible du cytoplasme.
Rupture des membranes, des trous se forment dans la membrane, donc il y a
relargage de contenu qui peut nuire aux cellules autour.
Désintégration des organelles intracellulaires
Création d’une inflammation autour de la cellule nécrosée.
Apport de cellules extérieures qui viennent sur ce lieu inflammatoire .

Nécrose

Ex : Dans la leucémie myélo-chronique, on utilisait des chimiothérapies, ce qui induisaient des

cassures des cellules, donc une nécrose du tissu tumoral donc la libération de pleins de
produits dans le sang, produits toxiques. Pour empêcher cette toxicité il fallait hyperhydrater
les malades pour neutraliser les acides cellulaires. Maintenant, on utilise des médicaments
pro apoptotique donc pas besoins de faire ça.

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II- Les protéines de l’apoptose

1- Les caspases

Les caspases sont des protéases indispensables au déroulement de la mort cellulaire.

Chez l’homme, il en existe environ 11 : 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 et 14 (la 11e se nomme donc
la caspase 14). Les caspases "coupent" les protéines après l’acide aminé Aspartate (= acide
aspartique = Asp). Elles existent sous forme inactive : les pro-caspases. Leur activation
nécessite :
 Le clivage du prodomaine qui induit la révélation d’un domaine actif
 La séparation en sous-unités
 La liaison des sous-unités par des sites de liaison protéine-protéine sous une nouvelle
forme
 La formation d’un complexe
Ce sont des mécanisme très régulé et très contrôlé !

a) Les fonctions des caspases effectrices

Caspase 3
Lors de l’apoptose, l’ADN est clivé en fragments de
180 à 200 paires de bases. Ce clivage est réalisé
par CAD = une DNAse dépendante des caspases en
présence de Mg2+. A l’état basal, CAD est lié à ICAD,
un inhibiteur CAD mais lors du mécanisme
d’apoptose la caspase 3 vient libérer ICAD ce qui
libère par conséquent CAD et l’active (d’où son nom
caspase activated DNAse ^^), déclenchant la
fragmentation de l’ADN. Elle inactive aussi les enzymes de réparation de l’ADN, les PARP
(=Poly-ADP Ribose Polymérase).
Avant, pour cette fragmentation, on faisait migrer l’ADN. Chaque ADN a une certaine taille ce
qui donnait des sortes de barreaux.

Caspase 6
Elle dégrade les lamines (protéines participant à la structure du noyau et aux liaisons entre
la membrane nucléaire et la chromatine Cf cours sur le noyau). Elle induit donc la disparition
de la membrane nucléaire.

La mort cellulaire est déclenchée par des signaux :

 Extracellulaires : FAS ligand
 Intracellulaires : dommages de l’ADN, stress intracellulaire (signal mitochondrial)…
On a donc une voie extrinsèque et une voie intrinsèque de déclenchement de
l’apoptose.

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 b) Voie extrinsèque

1. Le signal extracellulaire est protéine se liant à

un récepteur membranaire spécifique
2. Liaison à un domaine de mort appelé le death
domaine (DD)
3. Avec le récepteur et ses partenaires, formation
du DISC (Death Inducting Signaling Complex)
4. DISC clive la partie Nter de la procaspase 8 au
niveau des linkers
5. Production d’une caspase 8 fonctionnelle
6. Formation de caspase 3 et de caspase 6 à
partir des procaspase
7. APOPTOSE
Types de signaux extra-cellulaires : TNF (tumor necrosing factor), FAS ligand, TRAIL…
NB : la caspase 8 est spécifique de la voie extrinsèque.

c) Voie intrinsèque

Elle correspond à la libération du cytochrome C de la

mitochondrie par des protéines telles que BAX qui modifient la
perméabilité de la membrane mitochondriale. Normalement le
cytochrome C se trouve dans l’espace intermembranaire de la
mitochondrie.
1. Libération du cytochrome C
2. Fixation du cytochrome C sur APAF-1 pour la formation de
l’apoptosome
3. L’apoptosome permet le recrutement de la procaspase 9
4. Activation de la caspase 9
5. Qui active la procaspase 3 en caspase 3
6. Mort cellulaire par apoptose
NB : la caspase 9 est spécifique de la voie intrinsèque

Les voies extrinsèque et intrinsèque interagissent entre elles, ce qui veut dire que lors de
l’apoptose, une voie peut en déclencher une autre. Cela peut se faire par l’intermédiaire de la
caspase 8 qui avec la protéine Bid qui peut activer BAX. Donc renforcement de la mort
cellulaire. permet la fuite du cytochrome C et donc l’activation de la voie intrinsèque.

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 2- La famille BCL-BAX

Le système régulateur de la voie intrinsèque de la mitochondrie correspond à

l’équilibre des protéines BCL et BAX. Les BCL favorisent la survie cellulaire (elles sont
anti-apoptotiques) et les BAX favorisent la mort des cellules (pro-apoptotiques).

Les BCL et BAX peuvent se lier entre elles, formant des homodimères ou des hétérodimères
(BCL-BCL, BCL-BAX ou BAX-BAX) qui se lient à la membrane externe de la mitochondrie
et vont soit inhiber, soit favoriser le relargage du cytochrome C.

Comment le cytochrome C est-il relargué ?

Pour faire sortir la protéine il faut créer des pores spécifiques à partir des protéines BAX qui
se regroupent dans la membrane externe de la mitochondrie. En réalité, les BAX sont
normalement liées aux BCL, mais lorsqu’il y a un déséquilibre de quantité, il y a plus de BAX
libres. Elles se regroupent alors les unes aux autres pour faire des pores et faire sortir le
cytochrome C.

Exemples de signaux inhibant la mort cellulaire par la voie intrinsèque : Bcl2, Akt, IAP, Hsc71

3- Cas de la protéine p53

Lors d’une instabilité cellulaire, un stress interne, on a des signaux comme la protéine
p53 qui s’activent. p53 est une protéine pro-apoptotique activée lors d’un stress cellulaire,
de dommages de l’ADN, de radiations ionisantes ou encore, d’oncoprotéines (protéines
cancéreuses). Régulateur essentiel, elle joue sur le cycle cellulaire et l’apoptose intrinsèque.
p53 active la transcription de gènes déclenchant l’apoptose (BAX). En effet, comme vu
précédemment, plus y a de BAX, plus il y a de pores, donc plus de cytochromes C. Elle peut
activer BIM (de la famille BAX), qui peut chélater BCL2 et le retenir ce qui favorise le
déséquilibre entre BCL2 et BAX. Il y aura encore plus de BAX libre donc plus d’apoptose.

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III- Caractérisation morphologique et biochimique des cellules en
apoptose ou en nécrose

On peut savoir grâce à certains colorants si une cellule est vivante ou non. En effet, à
la fin de la vie d’une cellule, la perméabilité des membranes augmente. Donc les échanges
passifs entre l’extracellulaire et l’intracellulaire augmentent également. Certains colorants
vitaux peuvent alors rentrer dans la cellule : le bleu de Trypan ou May Grunwald Giemsa
marquent ainsi les cellules qui meurent.
Colorants vitaux => cellules qui meurent

Normalement, on observe sur la membrane des phosphatidylsérines orientées

uniquement vers la face interne de la cellule. Au moment de l’apoptose, il y a un flip flop, donc
une externalisation des phosphatidylsérines qui peuvent donc être sur la face interne ou
externe. Cette externalisation est mise en évidence par l’Annexine V, une protéine qui a une
forte affinité pour la phosphatidylsérine. Elle est marquée à un fluorochrome (le FITC). Si on
voit le FITC, alors l’annexine V s’est fixé à la cellule, il y a donc une apoptose. Mais attention,
si on est en nécrose, on observe des trous dans la membrane. L’annexine V peut passer à
travers ces trous et reconnaitre potentiellement la phosphatidylsérine de la face interne. Donc,
elle ne permet de marquer spécifiquement l’apoptose. Dans la nécrose, il y a des trous donc
on utilise l’iodure de propidium, qui est un colorant qui se fixe à l’ADN. S’il se fixe, alors il y
a des trous dans la membrane.
On peut distinguer 3 cas :
 Si la cellule est vivante : les
phosphatidylsérines ne sont pas extériorisées
et l’IP ne peut pas rentrer dans la cellule (les
membranes sont intactes) donc elle est
Annexine V – et IP –
 Si la cellule est en apoptose : les
phosphatidylsérines sont extériorisées mais l’IP
ne peut pas rentrer dans la cellule donc elle est
Annexine V + et IP –
 Si la cellule est en nécrose : l’IP peut rentrer
dans la cellule et l’Annexine V peut marquer ou
pas les phosphatidylsérines qui sont à l’intérieur
de la cellule, celles de la bicouche interne. Donc
elle est Annexine V - ou + et IP +
La mesure de la viabilité cellulaire et donc de l’intensité de fluorescence émise par l’IP et
l’Annexine V se fait par la méthode de cytométrie en flux en absence de perméabilisation
membranaire au préalable.

Comment lit-on une cytométrie en flux ?

On lit en abscisse l’intensité de fluorescence de
l’Annexine V et en ordonnée l’intensité de
fluorescence de l’iodure de propidium (IP). Les
cellules dans le carré en bas à gauche sont donc
négatives à Annexine V et l’IP, c’est-à-dire
qu’elles sont vivantes. Les cellules qui sont dans
les deux cases du haut sont positives à l’IP et
positives ou non à l’Annexine V, donc elles sont
en nécrose. Enfin, les cellules qui sont dans le
carré en bas à droite sont positives à l’Annexine
V et négatives à l’IP, elles sont donc en
apoptose.

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IV- Apoptose et cancer

Au cours du développement embryonnaire, on a de la peau entre les doigts, des doigts

palmés. Cet espace rentre en apoptose avant la naissance. Donc, si jamais on a un défaut en
apoptose, on a des doigts palmés à la naissance. On appelle ça la syndactylie (1/2000
naissance), il y a un facteur héréditaire. L’apoptose est donc un phénomène physiologique.
On fabrique des cellules qui peuvent se détruire. On fabrique aussi des cellules qui peuvent
nous détruire nous-mêmes. Et si on ne peut pas détruire ces cellules qui nous détruisent nous-
mêmes, on développe des maladies auto-immunes.
Avec le vieillissement, on peut notamment observer une modification de la régulation de
l’apoptose chez les individus. L’apoptose des neurones et des cellules de la moelle osseuse
augmente avec l’âge, pouvant causer des maladies neurodégénératives. Au contraire, un
défaut d’apoptose empêche l’élimination des cellules endommagées et donc favorise
l’apparition de cancers (plus de cancers chez le sujet âgé).
Dans certains cancers, on peut observer :
 Une forte expression de BCL2 (BCLXL) permettant d’augmenter la survie des cellules
cancéreuses. BCL-BAX est déséquilibré, on a moins de relargage de cytochrome C, donc
un mécanisme anti apoptotique.
 P53 mutée expliquant une apoptose diminuée, il ne peut plus réguler correctement
BAX.
→ les cancers accumulent des cassures de l’ADN, une instabilité génomique et des anomalies
de p53.

Certains traitements anticancéreux visent à augmenter l’apoptose des cellules cancéreuses

en inhibant l’oncoprotéine responsable (BCL2 ou BCLX) de la prolifération cellulaire
anarchique. Dans la leucémie myélo chronique, on utilise l’Imatinib qui inhibe l’oncoprotéine
BRCABL. Cette dernière pouvait donner un signal de survie cellulaire → une diminution de
BCL-XL → une augmentation de BAX → le relargage du cytochrome C → la mort cellulaire.
Les nouveaux médicaments sont des médicaments pro apoptotique

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QCM d’entrainement

Question 1. Concernant l’apoptose :

A- Elle induit une inflammation de l’environnement cellulaire

B- Elle peut être due à des facteurs externes et internes
C- La voie intrinsèque implique la mitochondrie
D- Elle prend place dans les hématies
E- Ce n’est pas un mécanisme régulé

Question 2. Concernant les protéines de l’apoptose :

A- Les caspases existent sous une forme inactive appelée procaspase

B- La formation du DISC permet la liaison au DD
C- BCL est une protéines pro apoptotique
D- BCL permet le relargage du cytochrome C
E- p53 active la transcription de gène déclenchant l’apoptose

Question 3. Concernant les cellules en apoptose

A- On peut observer un flip-flop des phosphatidylsérines

B- Elles possèdent des trous dans leur membrane
C- On peut les détecter grâce au bleu de Trypan
D- Comme les cellules en nécrose, on peut les détecter grâce à l’Annexine V
E- Elles sont positives à l’Iodure de propidium

Bravo, tu es arrivé.e à la fin de cette fiche sur l’apoptose N’hésite pas à la relire si besoin.
C’est un chapitre qui est souvent l’objet d’exercice avec les chapitres d’avant, noyau et
mitochondries. Tu peux voir maintenant que les cours sont liés Je te laisse en compagnie
de TROIS memes biologiques, c’est qu’on s’arrête plus ici.

1 : B/C 2 : A/E 3 : A/C/D

A2SUP 2020-2021 L’apoptose 11

 Cette fiche a été réalisée par :

Rédacteur : Alicia Matran (DFGSM2)

Relecteurs : Elia Belkacemi (DFGSM2), Sarah Gaïdi (DFGSM2), Benji El Medioni
(DFGSP2), Nicolas Do Khac (DFGSM2)

Un grand merci aux VP Tutorat PASS : Armelle Godet (DFGSM2)

et Alexandre Grange (DFGSM2).

Et enfin un immense merci aux tuteurs et tutrices de la team Tutornithorynque

Sous la coordination de Lina Szendy (DFGSP2, RM2T biologie cellulaire 2020-2021)

et Maria Horvat (DFGSM2, RMGT biologie cellulaire 2020-2021)

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