Dr.

Boudemagh kenza

Cytotoxicité : Nécrose- Apoptose

Introduction :

I-Cytotoxicité :
I.1. Définition = propriété d’un agent toxique à détruire des cellules vivantes, par exemple :
les médicaments cytostatiques.4 systèmes sont atteints :
1. Intégrité des membranes cellulaires :

Peroxydation des lipides insaturés par les CCl4 / NO / Paraquat : dégradation des acides gras
radicaux libres membranaire
Perte du contrôle de flux ionique Digitalique :inhibition de la pompe ATPase Na+ /K+.
Fluidification de la membrane Solvant organique : chloroforme, éther

2. Respiration aérobie :
❑ Phosphorylation oxydative
❑ Béta-oxydation des acides gras
❑ Cycle de krebs
3. Synthèse protéique :
❑ Réticulum endoplasmique est une des principales cibles de la toxicité du
cadmium.
❑ CCl4 conduit à une dégranulation du RE

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4. Intégrité de l’appareil génétique de la cellule :
Origine des altérations de l’ADN par la formation des adduits ou des cassures :
❑ Benzéne, Hg et Cd
❑ Bromouracile.
❑ Colchicine :
❑ Rayons X, gamma, ultraviolets (UV).

II. Nécrose :

II.1. Définition = Une mort cellulaire “désordonnée” qui affecte en général des groupes
de cellules.
=Modifications morphologiques irréversibles accidentelle.
=La conséquence d’une lésion initiale, spécifique ou non, causée par des
agressions extérieures.
=Secondaire à des conditions pathologiques et se caractérise de façon constante
par une réaction inflammatoire.

II.2. Causes de la nécrose :

II.3 Mécanisme de la nécrose :

On considère trois désordres ultimes :
1. Déplétion en ATP
2. Augmentation de taux de Ca++ cytosolique
3. Surproduction des radicaux libre

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II.4. Phases de la nécrose :
On distingue 2 phases :

Phase I: lésions cellulaires réversibles une diminution de l'apport en ATP:

❑ Arrêt de fonctionnement des pompes membranaires, il s'en suit une accumulation de

sodium donc d'eau et de calcium
❑ Augmentation de la glycolyse anaérobie, diminution des réserves en glycogène et
diminution du pH intracellulaire
❑ Désorganisation du système de synthèse protéique

Morphologie :
❑ Gonflement cellulaire
❑ Gonflement des mitochondries
❑ Dilatation du réticulum endoplasmique et dispersion des ribosomes

Phase II: lésions cellulaires irréversibles Le point du "non retour"

❑ Dysfonctions mitochondriales irréversibles avec augmentation du calcium
intramitochondrial,
❑ Perte des phospholipides membranaires par activation de phospholipases endogènes
calcium-dépendantes ;
❑ Anomalies du cytosquelette par activation de protéases calcium-dépendantes ;
❑ Lésions des membranes et constituants cellulaires par excès de radicaux
❑ La lésion des membranes lysosomiales libère leurs enzymes => digestion enzymatique
des constituants.

Morphologie :
❑ Gonflement des mitochondries
❑ Lésions des membranes cellulaires (zones de rupture)
❑ Rupture des lysosomes

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III. Apoptose :
III.1. Définition = le nom apoptose fait référence à la chute programmée des feuilles à
l'automne: Apo = éloignement ptôsis =chute
=Processus systématique génétiquement programmé ,irréversible
=Mort cellulaire active ,organisé et conservé des cellules isolés
=un mécanisme physiologique de « suicide cellulaire » essentiel au
développement, à la maturation, et au renouvellement normal des tissus.

III.2. Déroulement de l’apoptose :

1) Acteurs de l’apoptose :

a) Caspases= Cystine ASPartyl-specific proteASES

❑ Famille des protéases possédant des cystéine dans leurs site actif
❑ Existent sous forme de pro-enzyme inactive ( zymogène )
❑ Présentant une spécificité stricte de clivage de leurs substrats après un résidu acide
aspartique
❑ Activation en cascades
❑ Effecteur ultime et principale de toutes les voies de transduction de signal
apoptotique
❑ Rôles des caspases dans l'apoptose :
• Activation d’un nucléase => clivage chromatine
• Clivage structure membranaire => bourgeonnement cellulaire
• Civage protéine du cytosquelette (actine , kératine) => déformation
cellulaire

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❑ Classification :

b) Famille Bcl2 :
une famille de gènes dont le rôle est la régulation de l’apoptose par contrôle de la formation de
l’apoptosome, par modulation de la fuite mitochondriale du cytochrome C.donc ils
contrôlent l’intégrité de la membrane mitochondriale.
selon rôle biologique :
❑ Bcl-2 pro-apoptotiques (Bax, Bak, Bad, Bid, etc)
❑ Bcl-2 anti-apoptotiques (Bcl-2, Bcl-xL, Mcl-1, etc).

c) Récepteurs de mort cellulaire :

Appartiennent à la superfamille du TNFR (Tumor Necrosis
Factor Receptor) :le récepteur FAS (ou CD95) qui fixe le
ligand FAS-L.

d) p53 = Gardien du génome:

❑ Arrêt de Cycle Cellulaire => réparation de ADN
avant la réplication
❑ Si Dommage Important => élimination de la cellule
endommagée par l’apoptose

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e) Granzymes /Perforines:
❑ LT cytotoxiques
❑ Activer des enzymes apoptotiques

2) Phases d’apoptose:

❑ Phase de déclenchement ou d’initiation : signaux de mort ou des dommages

internes de la cellule
❑ Phase d’exécution ou effectrice : Par les caspases ou par un facteur inducteur
d’apoptose (AIF) mitochondriale.

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Voie caspases-dépendante :
1) Phase de déclenchement ou d’engagement : est gouvernée par deux voies principales
d’activation :

a) Voie extrinsèque : implique des récepteurs appartenant à la superfamille des

récepteurs au TNF (Tumor Necrosis Factor)= Fas. La liaison récepteur-ligand
=Fas-L induit l’activation du récepteur et le recrutement de protéines adaptatrices
qui établissent des liens facilitant le clivage et l’activation des caspases initiatrices
caspase 8 qui à leur tour clivent et activent les caspases effectrices caspase 3qui
hydrolysent des substrats spécifiques conduisant à l’apoptose.

b) Voie intrinsèque (voie de mitochondrie) : met particulièrement en jeu la

mitochondrie, cette voie est gouvernée par des protéines appartenant à la
superfamille de Bcl-2 elle est activé par l’hypoxie, les radiations ionisantes, les
radicaux libres, et certains toxiques.Il y a libération des cytochromes c dans le
cytoplasme, qui s’associent au complexe APAf1 (Apoptotic Protease Activating
factor 1) et forment le cyt c-APAf1 appelé l’apoptosome, il s’en suit une activation
des caspases-9 qui activent à leur tour les caspases-3 induisant l’apoptose.

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2) Phase d’exécution : Les caspases sont l’élément clé de cette phase, elles sont présentes
sous formes inactives, leur activation va être à l’origine de deux éléments essentiels
permettant d’identifier l’apoptose : le clivage de l’ADN et le clivage protéique.

a) Clivage de l’ADN : se fait par clivage internucléosomique en fragments de 180 à 200

paires de bases par des endonucléases dépendantes du Ca2+ et du Mg2+. Ces fragments
sont visibles après migration sur gel d’agarose. Leur apparition précède l’apparition
des anomalies morphologiques.

b) Clivage protéique : à l’origine des anomalies morphologiques, il se traduit par une

fragmentation du noyau et du cytosquelette entraînant la formation de corps
apoptotiques phagocytés par les cellules.

La cellule apoptotique, par exposition de phosphatidylsérine à la surface de la membrane

cellulaire, explique sa reconnaissance précoce par le système phagocytaire et l’absence de
processus inflammatoire.

Voie caspases- indépendante :

❑ AIF ( Apoptosis Inducing Factor) :Molécule apoptogènes possédant une activité
protéasique (facteur apoptogène).Initialement dans l’espace inter-membranaire
mitochondrial, est libérée dans le cytoplasme et transloquée dans le noyau suite à un
stimulus pro-apoptotique.
❑ Endonucléase G : nucléase libéré par la membrane mitochondriale dans le cytosol et
est transloquée vers le noyau suite à un signal pro-apoptotique.Ils sont responsables de
clivage de l'ADN nucléaire au niveau des sites d'attachement des boucles de chromatine
à la matrice nucléaire et préférentiellement au niveau des nucléosomes.

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Apoptose ≠ Nécrose

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