Université de constantine 3, faculté de médecine, département de pharmacie, laboratoire de toxicologie

Cours de 5ème année pharmacie 2022/2023

EVALUATION DE LA TOXICITÉ AIGUE

I-LA TOXICITE AIGUE

Désigne les effets nocifs (aigus) résultant de l'exposition à une seule forte dose d'un produit ou
de multiples doses sur une période ne dépassant pas 24 heures.
II. EVALUATION DE LA TOXICITE AIGUE
1. Études expérimentales in vivo(systémique)
A. Détermination de la DMM
C’est la dose minimale de substance capable de tuer un animal par administration intraveineuse
lente.
• Intérêt : La DMM aide l’expérimentateur à choisir les doses à tester pour la
détermination de la DL50.
B. La DL50 :
« Estimation statistique d’une dose unique de produit supposée tuer 50% des animaux,
exprimée en mg de substance/kg de poids ».
NB : Quand l’exposition se fait par inhalation, la valeur retenue est la CL50 pour une durée
d’exposition déterminée et le TL50 pour une concentration déterminée du toxique dans l’air.
Ø Dispositif expérimental pour détermination de la DL50
o La substance :
ü Son identité ;
ü Structure chimique ;
ü Propriétés physico-chimiques ;
ü Résultats de tous les autres essais de toxicité in vitro et in vivo ;
ü Données toxicologiques sur des analogues de structure ou des mélanges semblables.
o Sélection de l’espèce animale :
=> Généralement deux espèces

=> Des deux sexes, jeunes et âgés.

o Voie d’administration :
- Celle de l’exposition humaine:
L’administration orale par gavage est la plus fréquente.
- cutanée et respiratoire sont de plus en plus utilisées
-On utilise également une administration parentérale : pour déterminer la vitesse et
l’importance de l’absorption par les voies cutanées et orales.
o La dose :
Pour déterminer correctement la DL50, il est important de sélectionner :
* Une dose qui tuera environ la moitié des animaux ;
* Une dose qui en tuera plus de la moitié, mais de préférence moins de 90% ;
* Une dose qui en tuera moins de la moitié, mais de préférence plus de 10%.
o Le nombre des animaux :
L’essai est pratiqué sur 5 à 6 lots.
Tous les animaux du même lot reçoivent la même dose (dose unique).
La plupart des expérimentateurs utilisent 40 à 50 animaux et des rapports allant de 1,2 et 1,5.
o Examens :
Après l’administration, les animaux sont observés pendant 14 jours au cours desquels les
examens cliniques sont fréquents.

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Les animaux demeurés vivants à la fin de l’essai sont sacrifiés.

Tous les animaux (morts en cours d’essai et sacrifiés en fin d’essai) font l’objet d’une autopsie.
o Méthodes de détermination de la DL50 :

1-Méthode de Trévan (1927)

Principe :
Administration de doses croissantes de la substance à tester chez
tous les animaux du lot tout en notant le pourcentage de mortalité.
=> Obtention d’une courbe sigmoïde.
Courbe de Trevan :
% de mortalité = f(dose)

Elle présente deux inconvénients :

-Une grande partie de la courbe n’est pas exploitable (DL05 et DL95).
-Le nombre d’animaux utilisés est très élevé. Selon Trévan un nombre de 30 animaux constitue
un minimum.

Courbe de Trévan
2-Méthode de Bliss (1938)
Principe :
Linéarisation de la courbe de Trévan.
=> Les pourcentages de mortalité sont remplacés par
les « probits ».
=> La dose est remplacé par le logarythme décimal de
la dose.
Bliss : Probits = f(LogDose)

Avantage :
Suffisamment précise et peut être utilisée avantageusement en première analyse.
Inconvénient :
Le tracé de la droite de régression entraine des erreurs parfois notables.
3-Méthode de Litchfeild et Wilcoxon (1943)
Principe :
Tracer le graphique : probit en fonction du Log de la concentration. Une
méthode semi-graphique.
Détermine : DL16, DL50, DL84.
Le calcul de la pente du graphique (S) :
permet de définir l’intervalle de confiance. Ensuite on détermine le
facteur de correction (f DL50).
4-Méthode de Miller et Tainter (1944)
Principe :
C’est une méthode graphique.
Sur un papier logarythme probit:
% mortalité (probit) = f(LogDose).
Avec correction des valeurs 100% et 00% là où le probit tend vers l’infini.
C’est une méthode : pratique, simple et rapide.
5-Méthode de Kraber et Behens
Principe : C’est une méthode arithmétique. Basée sur l’approximation par calcul rapproché de
la DL50.

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DL50= (DL100-AB) N
A=la différence entre 2 doses successives
B=moyenne de morts entre 2 doses successives
N=nombre moyen d’animaux par lot.
=> Cette méthode manque de précision.
6-Méthode de Lorcke (1983)
La moyenne géométrique entre la dose minimale qui tue les souris et la dose maximale qui ne
tue pas les souris représente la DL50.
Avantage : sacrifie peu d’animaux (13 animaux au maximum).
Inconvénients : l’exactitude, la reproductibilité, la fiabilité sont remises en questions.
Intérêt de la DL50
ü Classification des substances selon leurs toxicité, échelle de Glossin Smith et Hodge
ü Détermination de l’effet toxique spécifique au produit, l’organe cible.
ü Détermination des doses à utilisées dans les études à long terme.
ü Programmation des essais thérapeutiques chez l’homme.
ü Évaluation du danger en cas de surdosage.
ü Contrôle de qualité.
ü Médicaments : calcul d'un « index thérapeutique ».
Limites de la DL50
o Ne concerne que la mortalité et ne donne aucune information sur les mécanismes et la
nature des lésions.
o Résultats obtenus ne préjugent pas forcement de ce qui pourrait être observé après
administration chez l’homme (différence de réactivité biologique entre l’homme et
l’animal).
o Appréciation grossière et préliminaire, influencée par plusieurs facteurs (espèce
animale, sexe, âge).
o La DL50 est critiquée sur le plan éthique vu la souffrance et le nombre de mortalité
importante qu’elle engendre aux animaux de laboratoire.

*Lignes directrices de l’OCDE

1) Méthode de la dose prédéterminée
ü La mort n’est pas l’effet observé.
ü Méthode séquentielle, s'appuie sur l'observation de signes manifestes de toxicité
apparaissant après traitement à une dose prédéterminée.
ü La dose initiale est choisie sur la base d’une étude d'orientation.
ü Les autres groupes d’animaux reçoivent des doses plus fortes ou moins fortes en
fonction de l’absence ou de la présence d’effets toxiques.
Avantages :
ü Reproductible.
ü Utilise moins d’animaux.
ü Occasionnant moins de souffrance que les méthodes traditionnelles.
ü Permet de classer des substances par ordre de toxicité.
Inconvénients :
ü Ne permet pas de définir une valeur précise de la DL50.
2) Méthodes par classe de toxicité aigue :
ü Ce test se réalise de façon séquentielle.
ü Lots de 3 animaux par substance.

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ü Administration d’une dose d’orientation : son effet déterminera le choix de la dose

associée à la posologie ultérieure.
è Si mortalité < 2 animaux : la dose X 10 à l’étape suivante.
è Si mortalité >2 animaux la dose est réduite.
è Avantage : reproductible, utilise peu d’animaux (de 7 à 8 animaux suffisent), permet
de classer les substances par ordre de toxicité.
3) Méthode d’ajustement de dose :
ü Basée sur l’utilisation d’un minimum d'animaux. Et applique une progression de doses
uniques sur les animaux, un par un, à des intervalles d'au moins 48 heures.
ü La méthode permet d'estimer la DL50 avec un intervalle de confiance.
ü Ses résultats autorisent le classement qualitatif et quantitatif de la substance dans le
Système général harmonisé (SGH) de classification des produits chimiques entraînant
une toxicité aiguë.
*Toxicité aiguë par inhalation
ü Concerne les gaz, vapeur, d’aérosol ou une forme mixte:
ü Animal entier est placé dans une chambre ou « nez seul ».
ü Exposition durant un temps déterminé (4H selon OCDE) à concentration prédéfinie.
1. Études expérimentales in vivo (locale)
Test de Draize
Ø Déterminer les produits irritants par leur application sur la peau ou la muqueuse
conjonctivale de l’animal.
Ø Des tables d’évaluation permettent de déterminer les scores, chaque score correspond à
une intensité de la réaction.
Ø L’index d’irritation correspond à la somme des scores obtenus pour : la cornée, l’iris,
les conjonctives palpébrales et bulbaires.
Problème de transposition des résultats des études in vivo
ü Les différences dans le système ADME entre l’homme et animal.
ü Differences anatomiques.
ü Les susceptibilités individuelles qui conduisent à des réponses différentes.
ü Certains effets ne peuvent être mis en évidence chez l’animal par exp: Céphalées,
vertiges, nausées.
Relation de transposition
Concentration Equivalente en Toxicité Humaine «CETH»:
CETH=DL50 /(Vd*1000) (mg/l)
2. Etudes expérimentales in vitro
Les tests de culture de cellules humaines :
ü Sont plus précis que les DL50 chez les animaux.
ü Les systèmes de culture cellulaire peuvent être améliorés mais ce n’est pas le cas de
l’expérimentation animal.
ü Cellules humaines donc éviter les différences d’espèces.
ü Elles peuvent être prélevées à partir d’un tissu susceptible d’être affecté par une
substance particulière.
ü Elles permettent d’étudier le mécanisme de toxicité moléculaire.
ü Elles permettent d’éviter de faire souffrir et de tuer des animaux.
Eyetex
ü Mesure l’irritation oculaire par une protéine végétale extraite du pois sabre.
ü Comme la cornée ce gel protéinique clair devient vitreux lorsqu’il est en contact avec
une substance irritante.

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Avantages :
ü Avec le test Eyetex, le degré d’opacité (dégâts) peut être mesuré par un
spectrophotomètre è bien plus fiable que le test de DRAIZE.
Epiderme humain reconstitué
ü Couches de peau humaine cultivées en laboratoire pour les tests d’irritation cutanée.
ü Commercialisés sous les noms de « Skin Squared» ou « Episkin ».
Évaluation:
Examiner les cellules au microscope
=> observer les dégâts au niveau des membranes (extraction des enzymes)
=> déterminer une inflammation ( libération d’interleukine) .
Avantage :
Mesure du résultat avec précision. (dans les études animales on estime les dégâts en observant
la rougeur ou l’enflure).
Test de fixation du rouge
ü Les cellules normales absorbent et retiennent le rouge neutre.

ü Si la membrane cellulaire ou les lysosomes sont endommagés par une substance

chimique irritante, la teinture s’échappe par les membranes perméables.
ü Un spectrophotomètre mesure la quantité de teinture échappée.
3. Études épidémiologiques
L’épidémiologie est l’étude de l’évolution des maladies ou les décès au sein des populations.
Avantages :
• Conditions d'exposition réelles ;
• Effets mesurés chez l'homme.
Inconvénients :
• Essais coûteux, et de longue durée ;
• Études rétrospectives;
• Effets difficiles à quantifier.
En cosmétologie :
• Utilisation de volontaires humains pour tester les nouvelles formulations.
• C’est le test le plus fiable.
• Grâce à un patch. On place les substances sur des petites zones en haut du dos (2
jours).
4. Études in silico
Les systémes informatiques professionnels prévoient la toxicité de nouvelles substances à
partir d’une banque de données de molécules dont le profil toxicologique est déjà déterminé.
Ces systèmes se basent sur la relation structure activité.
CONCLUSION
Les études expérimentales in vivo reste la méthode la plus utilisée, malgré :
_ le problème éthique,
_ le problème de transposition.
Les méthodes informatiques et de cultures cellulaires peuvent être plus largement pratiqués en
raison de leur simplicité et leur fiabilité.

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