Module Physiologie Cellulaire, BCM6

APOPOTOSE
Prof. Mohamed NEJMEDDINE

Département de Biologie, Faculté des Sciences,

Université Ibn Zohr

Semestre P-2022

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES : TEXTBOOKS

DEFINITION ET HISTORIQUE

Le développement, la croissance et la maintenance des

organismes multicellulaire dépend :

i) La production de nouvelles cellules

ii) Et du mécanismes pour les détruire

Pour maintenir la taille des tissus constante dans organisme

vivants, il doit y avoir une équilibre entre le taux de
mortalité cellulaire et le taux de production cellulaire

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 DEFINITION ET HISTORIQUE
Le terme Apoptose vient du grec
apo- (« distant, éloigné ») /
ptôsis (« chute ») ;

En grec ancien, le mot apoptosis désignait la chute des feuilles des arbres en
automne.

Cette idée de mort cellulaire programmée est apparue à la fin des année 70’,
est devenu acceptable vers le milieu des années 90’, notamment grâce aux
travaux réalisés chez les nématodes C. elegans, qui ont permis d’identifier
les gènes impliques dans l’apoptose.
Sydney Brenner , H. Robert Horvitz and John E. Sulston
Prix Nobel de Physiology and Medicine, 2002

DEFINITION ET HISTORIQUE
 Durant l’apoptose, des agents cellulaires coupent l’ADN et fragmentent les
organites et autres composants cytoplasmiques.
 La cellule se rétrécit et forme des lobes (appelés protubérances)

Leucocyte normal et leucocyte en Apoptose

SOMMAIRE

1. Quelle est le rôle de l’apoptose ?

2. Comment reconnaitre les cellules apoptotiques ?
3. Mécanismes moléculaire de l’apoptose : Les Caspases.
4. La voie extrinsèque de l’apoptose : Récepteurs a la surface cellulaire.
5. La voie intrinsèque de l’apoptose : Mitochondrie.
6. La régulation de l’apoptose : Les protéines de la famille Bcl-2.
7. Inhibition de l’apoptose.
8. Pathologies due a un taux élevé ou insuffisant d’apoptose.
9. Conclusion.

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 QUEL EST LE ROLE DE L’APOPTOSE ?

LA MORT CELLULAIRE PROGRAMMÉE ÉLIMINE LES CELLULES INDÉSIRABLES :

Chez les animaux, adultes ou lors du développement, le nombre de cellules qui
sont éliminées par apoptose est considérable.

En effet,
 Lors du développement du système nerveux chez les vertébrés, plus de la
moitié des cellules nerveuses meurent juste après leur formation.
 Lors du développement embryonnaire, l’apoptose permet de sculpter (ou
dessiner) les doigts de la main et les oreilles des pieds.
 Lors développement des cellules immunitaire et dans la régulation de la
réponse immune.
 Un défaut de réparation de l’ADN, à l’origine des cancers, peut déclencher
une mort cellulaire programmée si la cellule n’arrive pas à réparer les
dommages.

QUEL EST LE ROLE DE L’APOPTOSE ?

Développement embryonnaire des pattes chez la souris

Métamorphose du têtard en grenouille

MARQUEURS MORPHOLOGIQUE DE L’APOPTOSE

NECROSE
APOPTOSE
• Désagrégation de la chromatine
• Convolution de la membrane plasmique
• Augmentation du volume des organelles, en
• La chromatine devient compacte
particulier les mitochondries
• Ségrégation et Condensation du cytoplasme
• Désintégration de la cellule et libération du
• Fragmentation du noyau
contenu cytoplasmique dans le milieu
• Bourgeonnement des corps apoptotiques
extérieur.

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 Marqueurs Biochimiques de l’Apoptose

FRAGMENTATION DE L’ADN

 Clivage de l’ADN génomique par une

endonucléase activée lors de l’apoptose

 L’ADN génomique est clive en des

positions spécifiques dans les régions
« linkers » entre les nucléosomes.

 Le produit de ce clivage peut être visualisé

sous forme de fragments d’ADN de taille
croissantes qui apparaissent sous forme
d’échelle

Marqueurs Biochimiques de l’Apoptose

Le Test TUNEL

 les fragments d’ADN clivés, vont générer

de nouvelles terminaisons d’ADN qui
sont facilement détectables par un test
spécifique, dit TUNEL (TdT-mediated
dUTP Nick End Labeling).

 Dans cette technique, l’enzyme Terminal

deoxynucleotid Transferase (TdT)
rajoute des chaines de dUTP marquées
(fluorescent) à l’extrémité 3’-OH de
l’ADN fragmenté.

Marqueurs Biochimiques de l’Apoptose

Potentiel de membrane et libération du Cytochrome C

 Les cellules en apoptose perdent leur potentiel de membrane au niveau

de la mitochondrie.
Ce potentiel est facilement mesurable en utilisant des marqueurs fluorescent
de charge positive qui seront attirées vers les cellules dont le potentiel
membranaire des mitochondries devient négatif.
 Les mitochondries endommagées libèrent le cytochrome C dans le
cytosol.
Le dosage du cytochrome C ainsi libéré par mitochondries endommagées
peut également permettre d’identifier les cellules en apoptose.

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 L’APOPTOSE EST UNE CHAINE DE RÉACTIONS
PROTÉOLYTIQUES EN CASCADE

LES CASPASES

 La machinerie cellulaire responsable du déclenchement de

l’apoptose est commune a toutes les cellules animales.

 Elle dépend d’une famille de protéases qui possèdent une Cystéine

dans leur site actif, capable de cliver les protéines cibles au niveau de
l’Acide Aspartique,

d’où le nom de Caspases.

 Les caspases sont présentes dans les cellules sous formes inactives
dites procaspases

LES CASPASES

 La machinerie cellulaire responsable du déclenchement de

l’apoptose est commune a toutes les cellules animales.

 Certaines caspases agissent au début de la protéolyse et de ce fait

sont dites des caspases initiatrices.

• Lorsqu’elles sont clivées, celle-ci activent des caspases effectrices qui

vont exécuter le programme d’apoptose en clivant non seulement
d’autres caspases, mais également des protéines cellulaires (i.e.
Lamin et endonucléases nucléaires).

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 FAMILLES DE CASPASES

Caspases de l’Inflammation Caspases 1, 4 et 5

Caspases impliquées dans l’apoptose

- Caspases Initiateurs Caspases 2, 8, 9 et 10

- Caspases effectrices « exécutrices » Caspases 3, 6 et 7

CIBLES CELLULAIRES DES CASPASES

 D’autres protéines seront ciblées par les caspases; en particulier,

- le cytosquelette et les molécules d’adhésions :
permet de détacher la cellule en apoptose de son environnement cellulaire,
les cellules saines vont contenir la cellule en apoptose ou bien la repousser,
(e.g. cas des cellules épithéliales).
 La cascades de réaction induites par les caspases s’amplifie au fur et
mesure et elle est irréversible.
 La machinerie de l’apoptose est disponible dans la cellule, et est
toujours en attente d’être activée (e.g. Les étapes précoces du
développement embryonnaire, les cellules saines fabriquent, de façon
continue, des procaspases et des protéines requises pour l’apoptose).

INITIATION DES CASPASES

Comment se fait l’initiation de la cascade de caspases ?

 Les caspases initiatrices possèdent un domaine d’initiation dit,
CARD « CAspases Recruitment Domain », permettant la fixation
d’adaptateurs protéiques formant des complexes d’activation.
 Lorsque ces complexes sont assez proches de aux procaspases,
permet leur activation par clivage les uns des autres. Induisant un
phénomène irréversible.
• La caspase initiatrice, clive ensuite la procaspases effectrice,
induisant une réaction protéolytique en cascade, amplifiant le signal
de la mort cellulaire et se propage dans la cellule.

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VOIE EXTRINSÈQUE DE L’INDUCTION DE L’APOPTOSE

 L’apoptose par voie extrinsèque

est déclenchée par les protéines
extracellulaires qui se fixent sur
les récepteurs de la mort cellulaire.
 Ces récepteurs sont des
homotrimers est appartiennent à
la famille des TNF « Tumor
Necrosis Factors », qui incluent un
récepteur pour le TNF et un
récepteur pour Fas.
 Les ligands qui activent les
récepteurs sont également
homotrimeriques et appartiennent à
la même famille des TNFs
 « Death receptors » sont des
protéines transmembranaires
contenant un domaine
extracellulaire « ligant-binding
domain », un domaine
transmembranaire et un domine
intracellulaire.

Voie intrinsèque de
l’induction de l’Apoptose

 Les cellules peuvent activer le programme de

l’apoptose de l’intérieur, souvent en réponse à
un stress.
 La voie intrinsèque de l’apoptose est
déclenchée par la libération de cytochrome c
par les mitochondries dans le cytosol.
 Le cytochrome c se fixe sur les « procaspase-
activating adaptor protein » Apaf-1 «
apoptotic protease activating factor-1 »,
induisant la formation de rosettes en formes
d’heptamètres appelées apoptosomes.
 Ces derniers recrutent la procaspase 9, qui
sera activée en caspase 9, qui a son tour
activent les procaspases 8 et 10 en caspases 8
et 10, respectivement.
 Celles-ci vont ensuite activer les caspase 3 et
7 qui exécutent le programme de la mort
cellulaire.

RÉGULATION DE L’APOPTOSE PAR VOIE INTRINSÈQUE

 La voie intrinsèque de l’apoptose est régulée afin de s’assurer que les

cellules se suicident seulement lorsque cela est nécessaire.
 Ce rôle de régulation est assuré par une famille de protéines dites, Bcl-2.
 Les protéines Bcl-2 régulent l’apoptose essentiellement par le control de
la libération du cytochrome c dans le cytosol.
 Certaines Bcl-2 sont pro-apoptotiques.
Par contre,
 d’autres sont anti-apoptotiques.
 La vie de la cellule sera conditionnée par un équilibre entre la fonction
anti-apoptotique et pro-apoptotique des protéines Bcl-2.

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 FAMILLE DE PROTEINES BCL-2

COMMUNICATION “CROSS-TALK” ENTRE LA VOIE INTRINSÈQUE

ET LA VOIE EXTRINSÈQUE DE L’APOPTOSE
 La protéine clef est la caspase-8, qui
intervient dans la voie extrinsèque
de l’apoptose,

De même,
 Elle peut cliver et activé la protéine
pro-apoptotique Bid (famille Bcl-2)

 Bid stimule la voie intrinsèque

directement en activant Bax et Bak,
facilitant la libération du
cytochrome c mitochondrial dans le
cytoplasme.

 Par conséquent l’activation de la

réaction en cascades des caspases.

INHIBITION DE L’APOPTOSE
 L’activation des caspases induit la mort cellulaire,
 La cellule emploie des mécanismes robustes et multiples pour s’assurer que
les caspases sont actives seulement lorsqu’il est nécessaire.
 Cette ligne de défense est contrôlée par une famille de protéines Inhibitrices
de l’apoptose (IAPs).
 Ces protéines ont été identifiées chez certains virus d’insectes
(baculoviruses), qui empêchent la cellule hôte de déclencher l’apoptose.
 Les IAPs possèdent un ou plusieurs domaines dits BIR “Baculovirus IAP
repeat” domaine, qui se fixe sur les caspases et inhibe leur activation.

 Certaines IAPs peuvent polyubiquitinyler les caspases induisant leur

destruction par le protéasome. Les IAPs installent un niveau d’inhibition
que les casapses doivent depasse pour declencher l’apoptose

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RÉGULATION DE L’APOPTOSE PAR LES IAPS ET LES ANTI-IAPS

 Chez la Drosophile, la barrière d’inhibition apportée par les IAPs peut

être neutralisée par des anti-IAPs ; eux mêmes produits en réponse a des
stimulus pro-apoptotique

 Il existe plusieurs anti-IAPs chez la drosophile, les plus connus sont

Reaper, Grim, and Hid,

 Elles presentent toutes un court N-terminal binding Motif, qui se fixe sur
le domaine BIR des IAPs, empêchant la fixation et ensuite l’activation
des caspases
En effet,
 La délétion des gènes Reaper, Grim et Hid bloque l’apoptose chez la
drosophile. Toutefois, la délétion de seulement un des trois gènes induit
l’apoptose.

INHIBITION DE L’APOPTOSE PAR LES FACTEURS DE SURVIE

 La compétition sur les facteurs de survie secrétés par les cellules cibles
conditionne la mort cellulaire par apoptose.
 Les facteurs de survie, se fixent sur leurs récepteurs à la surface de la
cellule, et activent les voies de signalisation intracellulaires qui inhibent le
programme de l’apoptose; ceci à travers les protéines de la famille Bcl-2.

INHIBITION DE L’APOPTOSE PAR LES FACTEURS DE SURVIE

Trois configurations sont possibles

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 PATHOLOGIES DUE A TROP OU INSUFFISAMMENT D’APOPTOSE
 Cas de la mort excessive de cellules
Lors d’une crise cardiaque aigu un grand nombre de cellules meurent par nécrose,
en raison d’ischemie (mauvaise irrigation par le sang) et d’autres meurent par
apoptose.
 Cas de l’élimination insuffisante des cellules
La mutations de gènes qui codent pour Fas ou Fas-L, empêchent la mort cellulaire
de certains lymphocytes, ce qui conduit a des maladies auto-immunes.
 Cas du cancer
- La baisse de l’apoptose peut aussi contribuer a la persistance de certain cancers.
Bcl-2 est une protéine anti-apoptotique, mais peut aussi diminuer la sensibilité
des cellules cancéreuse au traitement par chimiothérapie. Le gène Bcl-2, a été
identifie pour la première fois dans le B Cell Lymphoma.
- p53 « tumor suppressor protein », mutée dans 50% des cancers humains, il ne
peut pas induire l’apoptose ou l’arrêt du cycle cellulaire.
Par conséquent, les cellules cancéreuses survivent, même quand leur ADN est
endommagé; leur permettant d’accumuler plus de mutations

CONCLUSION

 Les cellules animales déclenchent le programme de la mort cellulaire

programmée “apoptose” quand elles sont endommagées ou ne sont plus
nécessaires ou lorsqu'elles constituent un danger pour l’organisme.

 L’apoptose est caractérisée par une rétrécissement de la taille de la cellules, sa

condensation et sa fragmentation, finissant par être phagocytée, avant qu’elle
libère son contenu.

 L’apoptose est médiée par une cascade de réaction prénéolithique, impliquant des
protéines spécialisées dites : Caspases.

 Les caspases sont active par deux voies distinctes : la voie intrinsèque ou bien la
voie extrinsèque.

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES : TEXTBOOKS

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