Vésicule extra-cellulaire

- microparticules on ne parle pas uniquement de composé

biologique pour cela on les appelle les microvésicules

-les corps apoptotique (+ gros que la microvésicule)

- ces différentes catégories de vésicules se différencient

selon leur forme... Lorsque la cellule bourgeonne, les
vésicules entrainent un panel de molécules présente à leur
membrane pour permettre d'agir à distance (ADN Arn, protéine, récepteur) Par rapport aux
exozozomes le mécanisme de formation est différent, pas de
phénomène d'exocytose.

1. Définition

Par définition toutes les vésicules extra-cellulaire sont des vésicules

sécrétées par les membranes cellulaires. Ce sont des particules
hétérogènes (de différentes tailles) et entourées par une double couche
de phospholipides. Les vésicules sont libérées dans le MEC et ont un
rôle dans la communication intercellulaire - rôle paracrine pour agir à
distance.

Microvésicules = vésicules membranaires libérées suite à l'activation cellulaire ou

l'apoptose. Éléments retrouvés dans le culot de centrifugation d'un plasma déplété en cellules.

MV action procoagulante

2. Mécanismes cellulaires

Mécanisme principale de formation des microvésicules (et corps apoptotique) = par

bourgeonnement « membrane blebs » on l’appel mécanisme d’externalisation de PS

Description : à l'état quiescent la C va avoir une asymétrie de la bicouche phospholipidique.

Translocase + flippase + scramblase = enzyme qui sont capable de réguler et maintenir
l'asymétrie de la bicouche et d'effectuer des switchs/ Flip-flop de phospholipides lorsque les
phospholipides négatifs essayer de passer vers l'extérieur. En cas
de phénomène d'activation cellulaire par le mécanisme
d'apoptose = augmentation de calcium intracellulaire qui
augmente  donc active l'enzyme la calpain.--> C'est une
enzyme qui clive les filaments du cytosquelette qui permet le
maintient de la forme sphérique de la C. De plus cette
augmentation de calcium va venir déréguler et inhiber l'action
des 3 enzymes. Par conséquence : il y aura ++ de phspholipides

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négatifs vers le feuillet externe et donc va faire commencer de bourgeonner la membrane.

3. Les inducteurs de la vésiculation:

• Agonistes plaquettaires : ADP, thrombine/collagène

• Complexe terminal d’attaque membranaire (C5b-9)
• Médiateurs inflammatoires (cytokines, thrombine, LPS, CRP, TNF…)
• Anticorps
• Contraintes de flux
• Inducteurs d’apoptose
• Radicaux libres de l’oxygène
• Toxines urémiques.

4. Rôle biologique :

Au niveau de ces microvésicules on retrouve beaucoup d'information = vecteurs

d'information effecteurs biologiques = elles Jouent un rôle biologique qui dépend du
contexte.
Les microvésicules larguée par des cellules circulantes mais aussi des c qui tapissent la paroi
des vaisseaux (endothéliales et musculaires lisse).
Les MV plasmatiques sont impliquées dans plusieurs mécanismes physiologiques :
 coagulation
 inflammation
 dysfonctionnement endothéliale
 angiogenèse.

a) Rôle dans la coagulation et dans la formation du thrombus.

Des études ont pu identifier que les structures adjacentes des vésicules provenant des
membranes plaquettaires expriment le TF. Sous Microscope électronique le thrombus est
accompagné de structures vésiculaires qui porte du TF et donc contribuerai à la formation du
thrombus. En effet les MV exposent à leur surface la phosphatidylserine (PS) en plus du TF
ce qui peut initier la cascade de coagulation.

 in vivo on peut prendre des MP humain injecté dans le porc qui est sacrifié 30 min
après  observation de la carotide = bouché pour les porcs ayant eu l'injection
donc thrombus formé.

 -Ils ont injecté des MP humain de sujets normaux chez le rat + observer leur FT par
cytométrie + injection + prélèvement des thrombus des rats  évaluation du poids du
thrombus  Ils ont corrélé la poids du thrombus et la quantité de TF exprimé
par la vésicule (sont bien proportionnels).

 injection de c tumorale fluorescente dans la souris - 5 semaines après ils ont induit un
thrombus. Les MV dérivées de c cancéreuses s'accumulent au site de formation du
thrombus in vivo (par microscopie intravitale)  montre qu’elles agissent distance

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 et dans le temps. Et agissent localement, les MV exposant le FT (montrer par son
présence dans la plaque d'athérosclérose).

NB : Localement les MP qui sont présent dans la plaque sont 2 fois plus coagulantes
comparées à celles circulantes.
Rq : les MV génèrent de l'uPA à leur surface = pouvoir anti coagulant participant ainsi
comme activateur de la fibrinolyse en portant de l'uPA.

b) découverte de leur rôle dans l'inflammation

Les MV sont capablent d'activer l'endothélium avec une libération de cytokines pro
inflammatoire. C'est l'IL6 qui est sécrété par les MV et en fonction du contexte clinique il va
avoir un pouvoir + ou - pro inflammatoire.
Les MV sont capable d'induire l'expression de molécules d'adhérence pour attraper et fixer les
globules blanc et donc joue un rôle dans la diapédèse leucocytaire.

c) rôle dans la fonction vasculaire

Notamment dans le dysfonctionnement endothélial. Lorsqu’on parle de la DE on se réfère
souvent à la diminution de la vasodilatation dépendante de la relaxation des CML sous
l'influence du NO libéré par les C endothéliale. Le flux active toujours l'enzyme eNOS pour
toujours libéré NO qui va pouvoir agir sur la relaxation des cellules musculaires selon le flux
mais aussi va venir inhiber l'agrégation plaquettaire au niveau de l'endothélium pour éviter le
développement des thrombus à tout moment.
→ Méthode d'étude de la fonction vasculaire en réponse aux MV : technique de réactivité de
l’anneau aortique
→ Les MV circulantes induisent un dysfonctionnement endotheliale in vitro : ajout de
vésicules de patient atteint Les MV du patient atteint agissent sur la voie de NOS donc
dérégulation soit dans une vasodilatation vasoconstriction.

d) rôle dans l'angiogenèse.

Angiogenèse = formation de nouveaux vaisseaux sanguins important au cours de
l'organogenèse embryonnaire mais aussi au stade adulte dans l'endothelium qui est
majoritairement quiescent. C'est un processus activé en situations
pathologique tel qu’ischémie ou cancer.

Il y a 3 étapes cruciales
 Dégradation matricielle,
 recrutement et différenciation des progeniteurs endothéliales,
 prolifération et migration des cellules endothéliales

NB : Les MV intervient dans les 3 étapes d’Angiogenèse

1- les MV exposent des MMP (métalloprotéases) à leur surface et donc
est capable de dégrader la matrice.
2- →les MV générées in situ après l'ischémie sont le signal endogéne
nécessaire à la néovascularisation.

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3- Les MV générées par l'ischémie induisent la différenciation des c progéntrices et la
néovascularisaiton via la production de radicaux libres de l'O2.

5. Mécanisme d'action des MV

 Il y a stimulation des cellules cibles par simple fusion à la membrane
 transfert des protéines / récepteurs de surface à la c cible
 libération de protéines dans la c cible
 reprogramming génétique de la c cible par transfert ARN/miRNA.

6. Étude des microvilosités:

On peut étudier leur propriétés biochimiques (exposent à leur surface, contenance..) et

physiologiques (tailles, formes...). Certaines technologies peuvent étudier les deux -
techniques intermédiaires tel que cytométrie de flux qui permet d'étudier leur taille et de voir
ce qu'elles expriment. Ou alors la microscopie électronique de voir la taille et de cibler par
marqueur leur contenance (mais +++ compliqué). Selon le matériel du laboratoire on a
d'autres différentes techniques. Quand on travaille sur des MV le mieux est de montré avec un
papier qui utilise un plusieurs type de techniques (2-3 méthodes par étude).

7. Détection des microvillosités

 Microscopie à balayage
 ME à transmission
 méthode de choix - cytométrie de flux (taille avec bille de calibration, ajout des ac
pour avoir des graphes spécifiques selon ce qu'on veut observer).

Pour la cytométrie de flux-attention marqueur à choisir :

Annexin V n'est pas le meilleur marqueur.
mais selon le sous type cellulaire la c d'origine étudié on peut choisir des anticorps
spécifique.
8. Questions et challenges pour le futur

-les MV sont des vecteurs d'information cellulaires jouant un rôle majeur dans
l'inflammation, la thrombose et l'angiogenèse.
-Utiliser des modèles animaux pour mieux comprendre le rôle physiopathologique des MP

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-mieux comprendre et étudier les mécanismes moléculaires qui contrôlent la vésiculation
cellulaire et la clairance des MV afin de manipuler la génération de MV en utilisant des
approches pharmacologiques.
-mieux comprendre les mécanismes d'action des MV afin de cibler certains effets délétères en
pathologie en bloquant l'action de ces MV.

9. Thérapie vésiculaire dans les maladies cardiométaboliques

→injecté des MV d'origine de c souches qui sont capable de regénéré c de la rétine, des
neurones, du coeur, des poumons, des reins et du pancréas. régénération tissulaire et
vasculaire amélioré dans différents modèles animaux
→injecté des médicaments / ARNm / micro ARN dans les MV : car ce sont des vecteurs
naturels pour le transport de substrats thérapeutique.
1- production de MV à partir de c saines ou de c de donneur
2- introduction de thérapie dans MV isolées purifiées puis réinsertion avantages:
biocompatibles, immnologiquement inertes, capacité de traverser la membrane
biologiques.  médecine personnalisée.

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