Université Sidi Mohamed Ben Abdellah

Faculté des Sciences et Techniques-Fès

Filière ingénieur : Industries Agroalimentaires

Compte rendu de la biotechnologie

Réalisé par : Responsable :

Abdelmoumen ER-RAJOUANY Pr. A. LAZRAQ
Abdelkader LAALOU
Rabii ASSENSOU
Adil BENCHEBAN
2017/2018
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 A. Principe de la culture in vitro
La totipotence cellulaire propriété caractérisant le mode végétal, est à l’origine de la culture
in vitro. Toute cellule végétale, après dédifférenciation, peut engendrer, grâce à la culture in
vitro, un très grand nombre de plantes identiques à celle sur laquelle elle a été prélevée.
B. Matériel préconise pour la culture in vitro
 Liquide détergent
 Eau de javel (hypochlorite de sodium)
 Bécher ou erlen meyers à large ouverture
 Eau distillée stérile
 Scalpel
 Papier absorbant
 Bain marie
 Bec bunsen ou hotte à flux laminaire
 Autoclave
 Armoire à culture ou bio serre
C. Préparation du milieu de culture
Le milieu de culture est constitué d’éléments minéraux, organiques et éventuellement de
régulateurs de croissance (hormones).
 Composition de milieu de culture : milieu de Murashige& Skoog (M.S)
Pour un litre de solution : ce milieu est la base de la composition de nombreux milieux de
culture.
 Les macroéléments :
 NH4NO3 1.650g
 KNO3 1.9g
 CaCl2H2O 0.44g
 MgSO4 7H2O 0.370g
 KH2PO4 0.170g
 Les micro éléments
 H3BO 6.2mg
 MnSO4 H2O 22.3mg
 ZnSO4 7H2O 8.6mg
 Kl 0.83mg
 NaMo4 2 H2O 0.25mg
 CuSO4 5 H2O 0.025mg
 CoCl2 6H2O 0.025mg
 FeSO4 7H2O 2.78g
 Na2 EDTA 3.73g

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  Culture in vitro de la carotte
 GENERALIRES
La carotte potagère est connue pour la racine que l’on mange .Il est facile de se procurer, des
plantes entières avec racine et feuilles.
La carotte potagère présente :
-Une racine principale pivotante, épaisse et rouge, portant des fines radicelles en 4rangées
longitudinales.
-un bouquet de feuilles vertes profondément découpées, semblant partir de la racine.
Une coupe longitudinale et médiane de l’organe souterrain montre que les feuilles sont porté par
un tige très courte et verdâtre comme encastré dans la racine, dont on peut distinguer, à la loupe, le
bourgeon terminal.
Une racine anormalement épaisse (la racine principale) est dite racine tubéreuse.
On consomme la racine de la carotte parce qu’elle renferme des substances nutritive sucrées.
La carotte cultivée est bisannuelle : pendant la première année, elle forme une racine tubéreuse
riche en sucre et la tige rudimentaire.
C’est au printemps de l’année suivante seulement que la tige s’allonge, fleurit et fructifie aux dépens
des matières de réserve de la racine. C’est une plante bisannuelle grâce à sa racine tubéreuse.
Par des soins appropriés, L’Homme a transformé la carotte sauvage à la racine peu comestible, à
une plante à racine gorgée de sucre.
En sachant que la carotte sauvage naît au printemps à partir d’une graine, développe rapidement sa
racine et ses feuilles, accumule des réserves dans la racine principale, que servent l’été de la même
année à la formation de nouvelles feuilles, des fruits, La plante meurt en automne, elle résiste à l’hiver
et fructifie seulement au printemps suivant. Elle se comporte comme une plante bisannuelle.
Pendant la première partie de leur vie, les carottes des réserves dans leur racine, qui serviront ensuite
à la croissance de la tige et à la formation des fleurs, des fruits et des graines, à moins que l’homme ne
les utilise.
 Protocole expérimental
 On prépare le milieu de culture ;
 On choisit le champ de travail à l’alcool et à la flamme ;
 On désinfecte les mains et les avant-bras ;
 On choisit une tige d’aspect sain, lavée à l’eau
 On coupe une rondelle saine puis la placet respectivement
dans :
 L’alcool à 70° pendant 20 s ; L’alcool eau de javel eau distillée stérile
 L’eau de javel pendant 5 min ;
 On rince 3 fois dans l’eau distillée stérile ;

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 Enfoncer la partie rondelle de carotte dans la gélose ;
 Reboucher avec du couton ;
 Les flacons sont conservés à 25°C, avec une photopériode de 12L/12D
 Observer après un temps d’incubation de 15 jours.
 CULTURE IN VITRO DE LA MENTHE
 Matériel à utiliser :
Tubes à essais, gélose, saccharose, solution de Knop, alcool à 70°, eau de Javel et eau distillée.

 Mise en culture :
 On choisit le champ de travail à l’alcool et à la flamme
 On désinfecte les mains et les avant-bras
 On Choisit une tige d’aspect sain, lavée à l’eau au préalable et sèche
 On coupe des micro boutures (2 mm de part et d’autre d’un nœud)
 On place les boutures dans :
 L’alcool à 70° pendant 20 s
 L’eau de Javel pendant 5 min
 Rincer 3 fois dans l’eau distillée stérile
 Enfoncer la micro bouture dans la gélose sans se tromper de sens
 Reboucher avec du coton, couvrir d’un carré de papier aluminium
 Les tubes sont conservés à 25°C, éclairés à 5000 lux, 16h par jour
 3 à 6 semaines plus tard on peut repiquer les jeunes plants dans une mini serre dans un
mélange terreau – tourbe non stérile.
 Le résultat avant 15 jours

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  Le résultat après 15 jours

 Conclusion

Normalement on doit avoir l’apparition des cals ou de plantule normalement mais dans notre
expérience, on n’arrive pas à ce résultat de cause que les échantillons peuvent être dans des
conditions non bien stérilisées ou bien les échantillons sont infectés au cours du protocole.