Université Saad Dahleb – Blida1

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie

Département de Biologie
M2/BPR/S1

Module: Pathologie

TP 03 : Evaluation de la qualité de la
semence dans l’espèce bovine

Dr. DJOUAHRA N. Année universitaire 2023-2024

 Objectifs:

 Rappels sur l’anatomie, l’histologie et physiologie de l’appareil génital mâle.

 Enoncer les divers paramètres de l'examen macroscopique du sperme.
 Enoncer les caractéristiques macroscopiques normales du sperme.
 Enoncer les divers paramètres de l'examen microscopique du sperme.
 Enoncer les caractéristiques microscopiques normales du sperme.
 Enoncer la concentration normale en SPZ du sperme.
 Citer les principales anomalies des SPZ.
 01Rappels: Appareil génital mâle

PLAN 02Infertilité masculine

021. Définition
022. Causes & types
023. Diagnostic: Evaluation de la qualité de la semence dans
l’espèce bovine
 Analyse macroscopique
 Analyse microscopique
03Etude des illustrations
01Rappels: Appareil génital mâle
1 Réservoir aux SPZ dans l'intervalle des éjaculations

1
2 Elabore le liquide séminale
2
3
3 Production d'enzymes de liquéfaction du sperme, spermine
(mobilité & inhibition de la capacitation)
4
5 4 Neutralise & élimine l’urine dans l’urètre

5 Excrétion de l'urine et du liquide spermatique

Transport, stockage, survie et maturation fonctionnelle (acquisition

6 du pouvoir fécondant & mobilité fléchante) des SPZ
7 6
Spermatogenèse (production des SPZ & stéroïdogenèse (production
7 d’hormones)
01Généralités: Appareil génital mâle

Représentation schématique d’une coupe transversale Représentation schématique de l’épithélium séminifère

du testicule
01Généralités: Appareil génital mâle
Le spermatozoïde mature se compose de 3 parties :
• Tête: contient le noyau + le matériel génétique paternel + l'acrosome (sac d'enzymes qui seront libérées lors de la
fécondation et permettront la pénétration du SPZ dans l'ovule.
• Pièce intermédiaire: plus étroite avec le centriole qui donne naissance au flagelle + mitochondries disposées en
hélice autour du flagelle, formant une gaine et fournissant l'énergie nécessaire aux mouvements du flagelle.
• Flagelle ou queue: conférant au spermatozoïde sa mobilité.
02Infertilité masculine
0201. Définition
L’infertilité masculine se définie par une anomalie dans la production de SPZ par les testicules ou de leur
mobilité dans les voies génitales mâles ou femelles

0202. Causes & types

Les causes sont diverses et difficiles à classer car parfois elles sont complexes et associées:
- Elles peuvent concerner différentes étapes de la production spermatique et/ou du transport des SPZ.
- Elles peuvent être acquises ou congénitales.

Anomalie de formation et de production des SPZ

CAUSES conduisant à une azoospermie ou à des perturbations
SECRETOIRES OU • Causes sécrétoires centrales
quantitatives et/ou qualitatives qui se traduisent par des
NON • Causes sécrétoires testiculaires
OBSTRUCTIVES anomalies de nombre, de mobilité, de morphologie ou
fonctionnelles.

• Causes congénitales
CAUSES SECRETOIRES • Causes acquises Obstacle au niveau des voies génitales empêchant les SPZ
OU OBSTRUCTIVES de se mélanger au liquide séminal pendant l’éjaculation
• Dysfonctions sexuelles
02Infertilité masculine
0202. Causes & types

Les causes d’infertilité masculine entraînent un problème d’émission/circulation du sperme ou un trouble de la

spermatogenèse (production du sperme) du type :
 Azoospermie: absence de SPZ.
 Oligospermie: quantité insuffisante de SPZ.
 Asthénospermie: mobilité trop faible des SPZ.
 Tératospermie: trop de SPZ anormaux dans le sperme.
 Oligoasthénotératospermie ou OATS: trois anomalies en même temps.
02Infertilité masculine
0203. Diagnostic: Evaluation de la qualité de la semence dans l’espèce bovine
Le diagnostic d’infertilité chez le mâle repose avant tout sur l’analyse du sperme. Le
spermogramme-spermocytogramme est un examen très simple à réaliser, mais nécessite une
méthodologie standardisée, précise et rigoureuse.

Il permet de connaitre le % de SPZ de forme typique (normale) ou atypique (anormale). En effet

les gamètes peuvent présenter des anomalies morphologiques:

- De tête
- De flagelle
- De pièce intermédiaire
02Infertilité masculine
0203. Diagnostic: Evaluation de la qualité de la semence dans l’espèce bovine

Analyse macroscopique Analyse microscopique

• Volume • Mobilité massale

• Couleur • Mobilité individuelle
• Viscosité •   de SPZ
• % de SPZ vivants
  Analyse macroscopique
Immédiatement après la récolte, on procède à un examen visuel du sperme dans le tube de
récolte qui permet d’apprécier le volume, la couleur et la consistance de l’éjaculat.
• Volume: Le volume de semence recueilli par vagin artificiel varie entre les valeurs extrêmes de 0,5 à
14 ml avec une moyenne de 4 ml. Il est mesuré le plus souvent par lecture directe du tube de
collecte.

• Couleur:
 Blanchâtre: couleur classique du sperme.
 Jaunâtre: présence de pus ou d’urine dans le sperme.
 Rosée: présence de sang et peut signer une lésion urétrale ou de la verge.
 Brunâtre: signe d’une affection du tractus génital engendrant une hémorragie.
 Grisâtre: peut être due à une contamination par du pus.

• Viscosité:
 Corrélée à la concentration en SPZ, en effet l’éjaculat est d’autant plus visqueux que le nombre
de SPZ est élevé. Le sperme a généralement une consistance « laiteuse » à « crémeuse ».
 La présence de grumeaux dans l’échantillon ou la formation d’un filament glaireux à l’extrémité
de la pipette signe une pathologie.
• On peut également évaluer l’opacité du sperme qui est liée la concentration en SPZ de l’éjaculat:

Tableau: Classement du sperme en fonction de l’examen macroscopique :

Recommandations de la société de Theriogenology (Elmore, 1985).
  Analyse microscopique
Elle permet d’évaluer la mobilité massale, motilité individuelle, concentration en SPZ, % de
SPZ, morphologie de SPZ.
 • Motilité massale: Elle est évaluée immédiatement après la collecte du sperme.
 L’éjaculat est maintenu à une T° de 37°C et l’examen est réalisé sur une platine chauffée à 37°C.
 Elle est estimée au microscope à contraste de phase au GR x100.
 Une microgoutte de sperme est déposée sur une lame et le mouvement global des SPZ est apprécié en
fonction de l’intensité des vagues observables.

 Une note de 0 (aucun mouvement de vague décelable) à 5 (tourbillons rapides) est

attribuée à l’échantillon observé; il est possible de convertir cette note en un %
Résultats
approximatif de SPZ mobiles (la note 3 correspondant approximativement à 70% de SPZ
mobiles).

Tableau: Critères de notation de la motilité massale de la semence dans l’espèce bovine.

Dépôt d’une goutte de sperme sur lame

pour examen de la mobilité massale
• Motilité individuelle: Elle vise à évaluer le % de SPZ motiles.
 Pour cet examen, le sperme est dilué 10 à 40 fois dans un tampon isotonique tiède et on observe à fort Gr (x
200) une goutte de cette solution placée entre lame et lamelle, en éclairage contrasté (ou mieux encore, au
microscope à contraste de phase).

Examen de la mobilité individuelle du sperme.

  On note le % de SPZ dotés d’une motilité dite « fléchante »: les SPZ présentant une trajectoire quasi
rectiligne et capables de traverser le champ en 2 à 3 sec.
Résultats  Certains SPZ présentent des mouvements rotatoires circulaires ou des mouvements d’amplitude très
réduite, ils ne sont donc pas comptabilisés dans les SPZ mobiles.
 Il existe des analyseurs automatisés de la mobilité des SPZ associés à des logiciels d’analyse d’image.

Manuelle (entre lame et lamelle)

Automatisée
 Concentration en SPZ de l’éjaculat: Elle peut être effectuée par des méthodes manuelles ou automatisées.
• Une numération à l’hématimètre Thoma est une méthode simple et précise. Cependant, des cellules de Malassez,
de Neubauer conviennent aussi bien, il suffit d’adapter les dilutions et le calcul au volume de la cellule employée.
• On mesure l’absorption d’un flux lumineux à travers le sperme dilué à l’aide d’un spectrophotomètre à la longueur
d’onde de 535 nm. En pratique, un échantillon de 20 ou de 40 microlitres de sperme est dilué dans du sérum
physiologique pour obtenir un volume final de 1ml dans la cuvette du spectrophotomètre.

Manuelle
 Le rapport de la DO finale sur la DO émise est corrélé à la concentration
Résultats en SPZ de l’échantillon considéré. Cette méthode demeure donc fiable et
d’une précision satisfaisante dans la pratique courante, elle représente
en outre un gain de temps précieux par rapport au comptage à la cellule
hématimétrique.

Automatisée
• % de SPZ vivants: L’examen s’effectue de manière plus aisée sur frottis coloré à l’éosine-nigrosine.

Etapes de la coloration: une goutte de sperme puis deux gouttes d’une solution d’éosine-nigrosine sont déposées sur
une lame de microscope, puis mélangées délicatement au moyen d’un mélangeur en verre rodé. Ensuite, l’étalement
est effectué, puis le frottis est séché par agitation. Si le taux de SPZ vivants est inférieur à 60%, la semence n’est pas
conservée.

Observation des SPZ au fort

Technique de réalisation du frottis de semence coloré à l’éosine-nigrosine grossissement
  SPZ avec membrane endommagée laissent pénétrer le colorant et apparaissent donc roses (éosine)
Résultats sur fond bleu (nigrosine).
 SPZ vivants avec membrane intacte apparaissent donc incolores.
 Morphologie des SPZ : cet examen consiste en l’observation au microscope optique d’un frottis de semence coloré le
plus souvent à l’éosine-nigrosine, au Giemsa, à la MGG, à l’encre de Chine ou au rose Bengale.
Sous microscope à contraste de phase ou sous immersion (Gr x 400 à 600), les anomalies sont comptées sur au moins
200 SPZ. Un sperme normal comporte 10 à 20 % de SPZ anormaux, présentant des anomalies des différentes parties
principalement de la tête.

On distingue:
Résultats  Anomalie primaire se produisent lors de la spermatogénèse.
 Anomalie secondaire surviennent après la spermatogénèse durant la maturation épididymaire voire lors
de l’éjaculation.

Anomalies morphologiques de la
tête du SPZ
03Etude des illustrations

Aspect normal de spermatozoïde

03Etude des illustrations

Anomalies morphologiques de la tête du spermatozoïde

(coloration à l’éosine nigrosine) (Tibary et al., 2018).
03Etude des illustrations

Courbure de l’extrémité
distale de la pièce
intermédiaire

Anomalies morphologiques de la pièce intermédiaire et de la

queue du SPZ (coloration à l’éosine-nigrosine) (Tibary et al., 2018).
03Etude des illustrations

SPZ d’un bélier infertile avec une incidence élevée de double pièce
intermédiaire et queue et gaine mitochondriale anormale (Tibary et al., 2018).
03Etude des illustrations

Gouttelettes protoplasmiques distale (Tibary et al., 2018). Gouttelettes protoplasmiques proximale (Tibary et al., 2018).
03Etude des illustrations

Acrosomes anormaux acrosome en bouton (Tibary et al., 2018). Acrosomes anormaux : acrosome détaché / enflé (Tibary et al., 2018).