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Exploration biologique de

l infertilit masculine
J.F. GUERIN
La participation de lhomme au
processus de fcondation se rduit
lapport de ses gamtes.
Lvaluation de la fertilit masculine
implique donc, ncessairement,
lexamen du sperme comme premire
investigation
LES EXAMENS DE BASE
A. LE SPERMOGRAMME :
1er examen pratiquer dans un bilan
d infertilit de couple :
- permet d orienter vers, ou
d exclure (dans un 1er temps), une
cause masculine. Cependant : son
interprtation est difficile.
Il existe des variations : intra-
individuelles et inter-individuelles
J Auger

Le spermogramme reprsente lexamen cl pour apprcier la fertilit dun homme


Variations intra-
individuelles
Influences par :
- les conditions de recueil
- le dlai d abstinence
-toute pathologie tant survenue dans les
3 mois prcdant l examen (ex: grippe )
-Ltat gnral
- l existence de cycles saisonniers (?)
Variation intra-individuelle
Variation intra-individuelle
Variations inter-
individuelles
- Impressionnantes, mme au sein dun
groupe dhommes ayant fourni les preuves
de leur fcondit (ex. : donneurs de
sperme)
- Pour chacun des paramtres du spermo-
gramme : chevauchement important des
histogrammes entre groupes dhommes
fconds et infconds
Message n1

1. Il est souhaitable de disposer de deux


rsultats de spermogramme raliss dans
un (ou des) laboratoire(s) comptents au
moins 3 mois d'intervalle pour avoir une
valuation plus juste de la qualit du
sperme voire de sa variabilit.

8
L interprtation du
spermogramme est dlicate
Des normes ont t dfinies par
l OMS pour chacun des principaux
paramtres du spermogramme.
Elles ne permettent videmment pas
d effectuer une discrimination entre
fertiles et striles .
Ces normes voluent rgulirement
(toujours dans le sens dune moindre
exigence)

Standards du spermogramme en 2011

Pr Jean-Franois GUERIN , Dr Jacqueline LORNAGE,


Dr Martine ALBERT

10
Le SPERME
Liquide sminal: mlange de scrtions provenant des glandes
gnitales masculines (vsicules sminales, pididyme, prostate,
glandes de COWPER)

Spermatozodes

Cellules germinales

Autres cellules rondes

11
Dfinir un sperme normal en 2011
Les normes OMS 5me dition 2009
Les conditions de ralisation des examens

GIERAF 2011 Cotonou 12


EVOLUTION DES NORMES
OMS (WHO)
Norme OMS 1999 Norme OMS 2010
volume >= 2,0 ml > 1,5 ml
pH 7,2 - 8 7,2 - 8
NOMBRE >= 20 millions par ml 15 millions/ml
>=40 millions par ejaculat > 39 millions
Mobilit >= 50% de mobilit >40% de mob totale (a+b+c)
progressive > 32 % de mob progressive
(a+b)
morphologie (14% selon Krger) >4% selon Krger
vitalit >= 60% de formes vivantes > 58%
leucocytes < 1 million par ml < 1 million / ml
Conditions de prlvement strictes
Le recueil de sperme se fait par masturbation, de
prfrence au laboratoire dans un rcipient
strile.
Le sperme est recueilli aprs deux quatre jours
d'abstinence sexuelle, aprs avoir fait une
dsinfection soigneuse du gland, et en dehors
d'une priode de fivre.
Examen macroscopique initial

Liqufaction

Volume
Viscosit
pH

15
Volume de ljaculat
N: 1,5 6 ml

ASPERMIE (0 ml) :
- liminer un chec de recueil
- Anjaculation
- jaculation rtrograde totale : recherche de spermatozodes dans les urines

HYPOSPERMIE (<1,5 ml) :


- Problme lors du prlvement (perte de recueil : dbut, fin ? blocage )
- Dlai dabstinence sexuelle trop court
- Trouble de ljaculation
- jaculation rtrograde partielle spz dans les urines
- Dficit de scrtion des glandes biochimie sminale, imagerie +/- CFTR
- Inflammation-Infection des glandes annexes spermoculture

HYPERSPERMIE (> 6ml ) : nest pas pathologique mais peut entrainer une
pseudo oligozoospermie

16
Le Ph
N: 7,2 8

Ph acide :
- Dfaut du fonctionnement des vsicules sminales
(prsence exclusive de scrtions prostatiques acides) : cas des
agnsies vsiculo-dfrentielles

Ph alcalin :
- Insuffisance prostatique
- Infection

17
Lhyperviscosit
Rend lanalyse trs difficile problmes de:
Comptage Erreurs dans la Numration
Centrifugation
Frottis

Etc

Possibilit de casser lhyperviscosit en aspirant/


refoulant plusieurs fois le sperme dans une seringue dote dune
aiguille

18
Examen microscopique initial :
au faible grossissement (objectif : x10)

Concentration: cellule de Thoma, de


Malassez, ou autre (millions/ml)

Mobilit
Prsence dagglutinats spontans et
de cellules autres que spermatozodes

Vitalit

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Numration spermatique
N: 15 M / ml

POLYZOOSPERMIE : > 200M/ml


- pathologique? Situation normale si hypospermie
OLIGOZOOSPERMIE < 15M/ml et/ ou < 39M/jaculat
CRYPTOZOOSPERMIE cach : pas de spz lexamen
direct
AZOOSPERMIE absence de spz, vrifie aprs centrifugation

A contrler (au moins 2 recueils)


Bilan clinique et paraclinique complet
Microdltions chromosome Y et bilan pr-ICSI
20
Numration des cellules rondes
LEUCOSPERMIE > 1M de leukocytes (PN/ ml)
Prsence de cellules germinales immatures :
ALTERATION de la SPERMATOGENESE

Cellule peroxydase + Cellule peroxydase -

21
Analyse de la mobilit
Volume prcis entre lame et lamelle
Microscope contraste de phase
G : 10 X 10 homognit? agglutinats?
G : 40 X 10 > 5 champs et > 200 spz des
a: progressifs rapides (> 25m/sec)
b: progressifs lents
c: mobilit sur place (< 5m/sec)
d: immobiles
En pratique: a+b+c : % total des mobiles
a+b : % mobiles progressifs
22
Mobilit spermatique
N 40% a+b+c et 32 % a+b

ASTHNOSPERMIE : Anomalie quantitative et qualitative


- Infection
- Associe des agglutinats MAR TEST
- Associe une Ncrospermie
- Dyskinsie flagellaire
- Mauvaise maturation pididymaire
- Cause inconnue

ASTHNOSPERMIE secondaire

AKINTOSPERMIE
23
valuation de la mobilit 37C
Vitalit spermatique
N: 58 %

Technique osine nigrosine

n NCROSPERMIE : causes possibles


- Dlai dabstinence trop long
- Rechercher des signes dinfection
- Immunisation (Ac anti spz cytotoxiques)

24
Relations ncrospermie-
abstinence sexuelle
Morphologie spermatique :
Le spermocytogramme
Coloration (SCHORR; PAPANICOLAOU) dun frottis de sperme
entier ou sur culot aprs centrifugation

Utilisation de la classification de DAVID modifie ou Kruger

Evaluer le type danomalies retrouves :


Anomalies de la tte (7)
Anomalies de la pice intermdiaire (3)
Anomalies du flagelle (5)

Evaluer le % de spermatozodes normaux (N > 30%)


Calculer lindex danomalies multiples avec la classification
de DAVID (Index dAnomalies multiples : IAM) : N<1,6

26
Recommandations de lOMS (WHO 1999)
Analyse de la morphologie:
les classifications

Krger : critres stricts et %


de typiques : >14% >4%
David modifi (J Auger et al.
Andrologie 2000) :normes : 30%

Incidence sur la valeur seuil


de normalit

Le % danomalies morphologiques est trs


dpendant de lobservateur : variations
possibles entre laboratoires, et mme entre
techniciens du mme laboratoire
28
La morphologie ou spermocytogramme +++:

15 % de formes typiques si classication de David modie
et Indice sAnomalies multiples < 1,6
4 % de formes typiques si classication de Kruger
Quest-ce quun sperme normal
?
NORMES OMS /WHO 1999 NORMES OMS /WHO 2009

Volume: 2 ml Volume: 1,5 ml


Concentration : 20 millions/ml Concentration : 15 millions/ml
Nombre total : 40 millions Nombre total : 39 millions
Vitalit : 60% Vitalit : 58%
Mobilit a+b : 50% Mobilit a+b : 32%
F. typiques : 30% F. typiques : 4%
Critres stricts : 15% typiques (Critres stricts)

Commentaire : les nouvelles normes concernant le %


de formes typiques (> 4%) posent problme : le critre
30
devient peu discriminant
Message n2
. Linterprtation dun spermogramme ncessite la
prise en compte de
renseignements cliniques (antcdents, mode de vie,
traitements, etc)
connaissance des facteurs de variation habituels des
paramtres spermatiques : ne pas tirer de conclusion
dfinitive sur un seul examen (ex: dcouverte dune
azoospermie : dans environ 10 15 % des cas des
spz sont prsents au second examen).
Elle repose sur les valeurs de rfrence dites par
lOMS, sous rserve que le laboratoire se conforme
aux recommandations de ce manuel quant aux
procdures standardises de ralisation des examens
31
Le spermogramme est
d interprtation dlicate, et
il ne faut jamais tirer des
conclusions dfinitives
partir d un seul examen
Il demeure nanmoins l lment cl
du diagnostic car partir de ses
rsultats, on s orientera
schmatiquement dans 3 directions
afin d approfondir le diagnostic
tiologique et de prciser le degr
d hypofertilit.
Le spermogramme va rvler
schmatiquement 3 situations

SPERMOGRAMME

Azoospermie Perturb Normal


(O.A.T.S.)
LES EXAMENS DE BASE
B - LE TEST POST COITAL (Test de HUHNER
- Explore l interaction mucus
cervical - spermatozodes
:
- Affine le diagnostic en cas
d anomalies discrtes du
spermogramme (OATS peu svre)
- Reprsente un test physiologique
d exploration fonctionnelle des
spermatozodes
LE MUCUS CERVICAL
Introduction

Gel hydrat (teneur en eau > 90%) dont


la composition varie au cours du cycle,
sous dpendance hormonale
Constitue un rseau de glycoprotines
fibrillaires, dont les proprits varient en
fonction de limprgnation hormonale :
Larges mailles en phase pr-ovulatoire (taux
levs doestradiol), autorisanr la remonte
des spz
Mailles reserres ds le dbut de la phase
lutale, rendant le mucus impermable
Mucus Cervical

Aspects du mucus en
priode ovulatoire

Aspects du mucus en
phase lutale

Chretien et al, 1973 36


Des consquences videntes sur le
plan clinique
La qualit du mucus cervical sera un bon
reflet du statut hormonal
Le traitement par loestradiol permettra en
principe damliorer la qualit dun mucus
sub-optimal
Certaines molcules qui ont des proprits
anti-oestrognes (ex : citrate de
clomiphne) pourront avoir des effets
dltres sur la qualit du mucus
TEST DE
HUHNER
INDICATIONS

Fait partie des tests de 1re intention prescrire chez tout


couple consultant pour infertilit

Permet de vrifier dans des conditions naturelles,


laptitude des spermatozodes migrer du vagin vers les
voies gnitales suprieures
TEST DE
HUHNER
PROGRAMMATION
Convocation en priode provulatoire : Ncessit
d tablir au moins 2 courbes thermiques au pralable
qui doivent faire partie de tout bilan de fertilit

Courbe thermique du cycle o sera ralis le test pour


en faciliter l interprtation

Sans traitement systmatique d optimalisation du


mucus cervical

Dlai de 8 12 heures entre rapport sexuel et examen


TEST DE
HUHNER
REALISATION DU TEST
Dbute par l tablissement d une fiche de compte
rendu notifiant :

Heure du rapport

Le jour du cycle en le situant par rapport la


courbe thermique

Traitement pralable ventuel


TEST POST COITAL
Le prlvement
Avec un aspiglaire

Abondance clart,

ph
TEST DE
HUHNER
EVALUATION DES CARACTERISTIQUES
Du col :
Inflammation ventuelle

Degr d ouverture de l endocol :


Ouvert

Ferm

Punctiforme
TEST DE
HUHNER
EVALUATION DES CARACTERISTIQUES
Du mucus endocervical :
Ph
Score de Moghissi Insler : - Abondance
- Viscosit
- Filance
- Degr de
cristallisation
- Clart ou
cellularit

Cotes de 0 3 Score maximum 15


Ralisation du test de Huhner:
Procdure
Aspiglaire en polythylne
3 prlvements : endocol, exocol et cul de sac vaginal postrieur
Evaluation du mucus cervical : Score dInsler
Observation au microscope.
Microscope photonique contraste de phase X 400
Une goutte de mucus entre une lame et une lamelle
Nombre de spz sur au moins 5 champs
Mobilit des spz selon les critres OMS
Mesure de la filance
Cristallisation

On laisse la glaire scher sur une lame

Cristallisation en feuille de fougre


Interac(on mucus- spz
Glaire favorable pour un score 10.
nul : entre 0 et 3
insuffisant : entre 4 et 7 OMS 2010
bon : entre 8 et 10 Albert M. et al. 2005
excellent : entre 11 et 12

1 2 3
Canal cervical punctiforme permable bant
Abondance minime en goutte en cascade
Filance < 4 cm 4 8 cm > 8 cm
Cristallisation linaire partielle arborescente
Cellules nombreuses rares absentes
Interprtation du test de Huhner:

Seuil variable selon les laboratoires


Test positif : mucus favorable et 5 spz mobiles/champ au
niveau endocol
Test ngatif : < 5 spz mobiles/champ
si absence de spz sur les 3 prlvements : test
ininterprtable
si mucus dfavorable : monitorer lovulation et/ou
amliorer la glaire

OMS 2010
TEST DE HUHNER
INTERPRETATION FINALE
NIVEAU ENDOCOL

Test ngatif

Soit aucun spermatozode n est retrouv dans l endocol


Vrifier alors les prlvements du vagin et de l exocol

Soit prsence de spermatozodes immobiles ou oscillants


donc non progressifs
FACTEURS POUVANT ETRE A L ORIGINE D UN TEST
DE HUHNER NEGATIF

Troubles de l ovulation : Hypooestrognie

Anomalies cervicales
Anatomiques
Exposition au DES
Conisation
Infections Inflammations
Prsence danticorps anti-spz

Troubles de la fonction cotale


Hypospadias
jaculation rtrograde
Absence de rapport sexuel

Anomalies spermatiques
INTERPRETATION DU TPC
Si TPC normal : STOP

Si TPC ngatif : Test de pntration


crois in vitro
(ncessite de disposer de spermes et de
glaires tmoins)
TEST DE PENETRATION CROISE
INDICATION

En prsence d un test de Hhner ngatif ou faible

Permet de juger de la responsabilit de


linsuffisance fonctionnelle du mucus cervical ou du
sperme, voire de lassociation des deux
TEST DE PENETRATION CROISE
PRINCIPE

Consiste mettre en contact in vitro :

Le sperme test et le mucus endocervical test

Le sperme test et un mucus tmoin

Un sperme tmoin et le mucus test


TEST DE PENETRATION CROISE
PROGRAMMATION
Identique celle du test de Hhner mais sans rapport
pralable

Priode provulatoire
Etablissement de la courbe thermique
Avec ou sans traitement oestrognique ?
Ncessit pour lhomme deffectuer un recueil de
sperme avec une abstinence sexuelle de 3 5 jours
TEST DE PENETRATION CROISE
REALISATION DU TEST

Recueil du sperme et analyse aprs liqufaction

Mise en contact Sperme - Glaire de faon croise


Tube hmolyse avec 200 l de sperme

* Favoriser au maximum linterface Sperme - Glaire

Placer enfin le test en tuve 37 C


TEST DE PENETRATION CROISE
LECTURE DU TEST
Lecture directement sur les pipettes de verre au G 10
10
1 re lecture - 1h aprs le contact :
Niveau de progression des spermatozodes
Intensit de pntration
Type de mobilit ( Progressif, Sur place, Immobile )
2 me lecture - 4h aprs le contact, analyse de la
survie :
Maintien de la mobilit dans le temps au niveau des 2/3
TEST DE PENETRATION CROISE
INTERPRETATION

Test positif ou favorable

Pntration spermatique sur les 2/3 de la colonne de


glaire avec plus de 50 spermatozodes / champs mobiles
progressifs

Survie correcte 4 h avec maintien d une mobilit


progressive
TEST DE PENETRATION CROISE
INTERPRETATION

Test ngatif

Si absence totale de pntration

Ou pntration spermatique initiale avec rapide


immobilisation dans le temps
PARAMETRE DU MOUVEMENT ET PENETRATION
DANS LE MUCUS CERVICAL

Aitken et al. (J Androl, 1986) : 46 cas de strilit

inexplique

- Le mouvement des spermatozodes dans le liquide

sminal explique 85% de la variabilit (R2) dans la

pntration du mucus

Feneux et al. (Fertil Steril, 1985) : Spermatozodes

glissants et infertilit

- Strilits occasionnes par limpossibilit de pntration


Mouvement dans le mucus cervical

Contrainte du mouvement par la


structure fibrillaire du mucus

Courbure flagellaire de faible


Mouvement orient et uniforme
amplitude

Amplitude de la
Anomalies priaxonmales: spermatozoides glissants

Tmo Patient
in

TABLEAU II
Dyskinsies d'origine priaxonmales (1 er type)

Caractristiques ultrastructurales*
Anomalies de la longueur des fibres denses et de la position et/ou du nombre
de colonnes longitudinales.
Caractristiques dynamiques ** = Spermatozode glissant
VSL (m/s) ALH (m/s) Fr(Hz) Fb( Hz)
Patients 22,7 2,7 1,6 0,2 4,8 1,7 13,5 2,9
Tmoins 29,0 4,2 5,2 0,4 7,1 1,8 8,5 2,4
P < NS 0,05 0,01 0,01
Caractristiques fonctionnelles***
FIV classique 0/48 ovocytes fconds (9 patients)
Hamster test:
(David et al 93) 27,7 25,3% ovocytes pntrs ( patient )
85,6 , 9,5% ovocytes pntrs ( tmoins)
( W olf et al 95) 25,3 9,3 % ovocytes penetrs(4 patients)
77,7 20,2 % ovocytes pntrs (7 tmoins)
SUZI 37,9 % fcondation ( 58 ovocytes microinjects) 1 grossesse,
5 couples, 8 tentatives
_____________________________________________________________
* D'aprs Serres et al, 1986.
** d' aprs Feneux et al, 1985
*** d'aprs David et al 93 W olf et al 1995 et l'activit du laboratoire de FIV du
Kremlin-Bictre (annes 1991 1994).
Message n3
Dans un bilan d'infertilit, la ralisation dun
spermogramme et dun test post coital permet
de :
apprcier la part de responsabilit masculine,
le plus souvent, amener pratiquer des examens
complmentaires pertinents chez l'homme ou chez la
femme,
et dans certains cas, orienter vers la bonne prise en
charge en AMP, celle qui sera le plus mme
d'apporter une solution la plus adapte et la moins
invasive pour le couple

GIERAF 2011 Cotonou 63


BILAN DE 2me INTENTION
2 situations bien distinctes :

-oligo-asthno-tratozoospermies (O.A.T.S.) peu


svres (Numration > 10 Millions/ml), ou >20
Millions/jaculat

- azoospermies, ou oligozoospermies svres (<


1OM/ml); cryptozoospermies
O.A.T.S. peu svres
Peu d examens titre systmatique ;
plutt sur signes d appel
Un certain nombre
d examens visent
explorer les interactions
contractes par les
spermatozodes avec le
tractus gnital mle
Recherche d anticorps anti-
spermatozodes (MAR-test, test
aux immunobilles)
Signe d appel : agglutinats
spontans
-en 1re intention: MAR test
-si test +: test aux immunobilles
(prcise la nature des Ac : IgA, IgG)
R e c h e r c h e d e g e r m e s d a n s
l jaculat : - spermoculture
Signes d appel :
- Antcdents infectieux gnito-
urinaires, leucospermie
Difficult :
- distinguer les germes endognes de
ceux introduits au cours du
prlvement.
Recherche d jaculation
rtrograde

Recherche de spermatozodes dans les


urines aprs jaculation
Signes d appel :
- hypospermie souvent importante,
parfois aspermie (sensation
djaculation)
- antcdents : -neuropathie diabtique
BIOCHIMIE SEMINALE
BILAN ENDOCRINIEN
peu informatifs dans ce
contexte d OATS peu svre
AZOOSPERMIES , OATS
SEVERES
CRYPTOZOOSPERMIES

OBJECTIFS DU BILAN :
Prciser l origine du trouble :
- altration de la spermatogense
- obstruction des voies gnitales
congnitale
acquise (infection)
Evaluer les possibilits thrapeutiques :

- chirurgie
-AMP (ICSI sur spz jaculs, ou TESE)

72
BILAN ENDOCRINIEN

FSH
Inhibine B
Testostrone(totale, biodisponible )
(LH,prolactine,estradiol,rarement informatifs )
BIOCHIMIE SEMINALE

Il s agit dun diagnostic dexclusion des


diffrentes scrtions (pididyme,
glandes annexes)
Marqueurs pididymaires glucosidase,
L carnitine) : diagnostic tiologique de
l azoospermie ou oligospermie svre
abaisss : pathologie obstructive
normaux : pathologie non obstructive
MARQUEURS
DES GLANDES ANNEXES
Prostate (phosphatases acides, citrate,
zinc)
vsicules sminales (fructose)
Signes d appel : hypovolmie
Ex. : fructose indosable :
-agnsies vsiculo-dfrenteille
- oblitration des canaux jaculateurs
CARYOTYPE
Donnes pidmiologiques, concernant la
frquence des caryotypes anormaux en
fonction de la numration spermatique :
>10 millions/ml : <1%
non azoo mais < 5 millions/ml : 5 6% (1
Azoospermie scrtoire : 20% (2)
(1) translocations, Klinefelter mosaques
(2) Klinefelter non mosaques
Recherche des micro-dltions du chromosome Y
10% 15% des hommes prsentant
1
une azoospermie ou oligozoospermie
2
extrme de nature non obstructive
3
sont porteurs dune dltion molculaire
4 dans les intervalles 5 ou 6
Perte de gnes constituant le facteur AZF
5 Caractre non chevauchant
de ces microdltions

3 loci AZF

AZFa AZFb AZFc


intervalle 5 intervalles 5-6 intervalle 6
SCO Arrt en mose phnotype variable
BIOPSIE TESTICULAIRE
INTERET DOUBLE
Diagnostique (si marqueurs prcdents :
FSH, glucosidase) non suffisamment
informatifs

Pronostique : lICSI avec spermatozodes


prlevs dans le testicule est-elle
ralisable ?
Therapeutique : conglation des spz
extraits
AZOOSPERMIE

FSH

Eleve normale basse

bilan gntique biochimie sminale diagnostic


tiologique
de
normale anormale
l hypogonadisme

origine scrtoire origine excrtoire

don ou adoption biopsie testiculaire


+ ou - ICSI
BILAN de 3me intention

Rserv : - des situations


particulires
- des quipes spcialises
Intrt : -infertilits inexpliques
- doutes sur la capacit
fcondante des spermatozodes en cas de
spermogramme presque normal
- aide au choix thrapeutique
entre les diffrentes formes d AMP (IAC,
Autres tests d valuation de la
capacit fcondante des
spermatozodes
- Analyse du mouvement par microvido-graphie
assiste par ordinateur (CASA)
Objectif : permet dvaluer objectivement les
caractristiques et anomalies du mouvement des
spermatozodes(vitesses, amplitude du
dplacement de la tte, hyperactivation, etc)
Elle est associe un test de migration-survie.
Elle aidera la prise de dcision thrapeutique
entre Insmination et Fcondation in vitro.
Attention :le calibrage de l appareil doit tre bien dfini.
Autres tests d valuation de la
capacit fcondante des
spermatozodes
-Test de fixation la zone pellucide.
-Etude de la fonction acrosome
- Test de la fonction fusiogne.
Ces tests servent la prise de
dcision entre la FIV conventionnelle et la
FIV-ICSI dans le cas de spermes altrs
ou de sperme presque normaux.
Remarque: les 2 derniers tests tendent tomber
en dsutude
Analyse de la qualit de lADN
spermatique
Tests de fragmentation de lADN
(TUNEL ,SCSA,etc)
DFI corrl avec le taux dimplantation
embryonnaire
Test intressant pratiquer:
si existence de facteurs de risque
(varicocle, exposition la chaleur,
des toxiques, etc)
si checs rpts dimplantation
Dfinition
Fragmentation de lADN spermatique =
cassure des doubles brins de l ADN due
une agression .

ADN

Cassures
Physiopathologie

Apoptose : Mort cellulaire programme

Origine:
-Activation programme de mort cellulaire
(spermatognse)
-Radicaux libres : (environnement)
Origines de la fragmentation
Troubles de la spermatogense
Cryptorchidie(?)
Varicocle
Inflammation/ infection du tractus gnital
Agents toxiques environnementaux
Radio et chimiothrapie
Idiopathique
Technique TUNEL
(Terminal deoxyUridine Nick End Labeling)
PRINCIPE :
Mesure aprs incorporation de dUTP
marqu.
REACTIF :
Terminal Deoxy Transferase & dUTP
MESURE :
Comptage : DFI (Indice de Fragmentation
de l ADN).
dUTP marqu
Principe de la technique TUNEL
Caractristiques minimum du sperme :

- Volume : 2 ml
- Numration : 1,0 million/mL
- Mobilit : 15%
Ralisation :

- Slection des spZ (gradient).


- Etalement des spermatozodes sur une
lame.
- Coloration laide dun Kit TUNEL.
- Comptage des spermatozodes
marqus.
AMP : relations entre DFI et taux de
grossesse
Le DFI est toujours plus lev dans le groupe avec
grossesse que dans le groupe sans grossesse,
diffrence plus importante quand une ICSI tait
pratique. (Benchaib et al., 2003)
Relations entre DFI et taux de fausses-
couches

Des tudes rcentes montrent une lvation


des taux de FCS lorsque le DFI est lev

Hypothses : Laltration de lADN nest pas


suffisante pour bloquer le dbut du
dveloppement embryonnaire, mais ne permet
pas un dveloppement harmonieux terme
Subgroup analyses among studies of sperm
DNA integrity and pregnancy (18 studies)
Number of Number of Diagnostic
p value
studies cycles Odds ratio

Treatment

IVF 6 1107 1.53


ICSI 7 549 1.12 0.41
IVF, ICSI 5 505 1.91

Assay type
SCSA 11 1441 1.31 0.48
TUNEL 7 720 1.67
Conclusions de la meta-analyse de
Collins et al,(2008) reprise dans les
recommandations de lASRM)
Lassociation entre les tests dintgrit de
lADN et les taux de grossesses en FIV ou
ICSI, est significative mais trop faible pour
constituer une indication en routine.
La sensibilit et la spcificit ne sont pas
suffisamment discriminantes pour prdire
une grossesse
Les tests de qualit nuclaire ne doivent pas
se substituer lanalyse classique des
caractristiques du sperme, ni aux tests
classiques de fcondance
Ils ne doivent pas tre proposs titre
systmatique, mais rservs certains
situations :
Situations cliniques ou environnementales
propices gnrer des altrations de lADN
par stress oxydatif (varicocle, exposition la
chaleur, aux toxiques, etc)
Strilits inexpliques, absence dvolutivit
des ufs fconds en blastocystes, checs
rpts dimplantation, etc
IMPORTANCE DE LA HIRARCHISATION
DES EXAMENS, QUI DOIT TRE ADAPTE
AU CONTEXTE

- OATS peu svre : investigations de 1re


intention

- OATS svre, azoospermie : ncessit de


prciser l origine du trouble ainsi que les
chances d obtenir une grossesse par
technique d ICSI