REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET

POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT
SUPÉRIEUR ET DE LA RECHERCHE
SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE MUSTAPHA BEN
BOULAID
FACULTÉ DES SCIENCES DE LA NATURE
ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DE BIOCHIMIE ET
MICROBIOLOGIE

EXPOSER SUR :

Hotte à flux laminaire

Préparer par les étudiants :

● LOUCHENE Fatima Zohra
● Dahah Ahlem
● Kich Farida
● Ketfi naouel
● chafai safa
Sous la direction de :Dr.Aouachria

Année universitaires : 2020/2021

 Liste des matières
Liste des figures
Liste des abréviations

Introduction……………………………………………………………………… 4

Dévelopement :

1 Définition de Hotte à flux laminaire……………………………………… 5

2 Les types de Hotte à flux laminaire ……………………………………… 6/7

2 1 Les hottes à flux laminaire vertical ………………………………………… 6

2 2 Les hottes à flux laminaire horizontal ………………………………………… 7

3 les critères pour choisir la hotte laminaire …………………………… 8

3 1 Au sujet de flux laminaire Horizontal ……………………………………… 7

3 2 Au sujet de flux laminaire Vertical …………………………………………… 8

4 Les étapes pour nettoyer la Hotte à flux laminaire ……………… 8/9

5 Fonctionnement d’une Hotte à flux laminaire ……………………… 9

6 hygiéne d’une Hotte à flux laminaire………………………………… 9/11

7 les applications d’une Hotte à flux laminaire ……………………… 11

Conclusion …………………………………………………………………… 11

Références bibliographiques

2
 Liste des figures:

Figure 01 : Représentation d’une Hotte à flux laminaire ………………5

Figure 02 : Représentation d’une Hotte à flux laminaire vertical ………6

Figure 03 : Représentation d’une Hotte à flux laminaire Horizontal……7

Liste des abréviations :

ESB: «enceintes de sécurité biologique»

HEPA : signifie High Efficiency Particulate Air ou Haute
Efficacité sur les particules Aériennes.
HFL : Hotte à flux laminaire

3
Introduction

Dans l’atmosphère et plus précisément dans les espaces de travail, de nombreux

microbes circulent. La grande majorité des personnes pensent que la fabrication de
produits ou la manipulation d’échantillons biologiques ou chimiques sont des tâches
assez simples à réaliser. Bien au contraire, car ils ne doivent en aucun cas être
exposés aux bactéries présentes dans l’air.Ainsi, si vous souhaitez travailler dans un
environnement ultra-propre pour la protection de vos préparations, de votre personnel
et de l’environnement, on distingue plusieurs solutions, mais la plus efficace est sans
doute l’utilisation d’un hôte à flux laminaire.

Une hotte à flux laminaire permet la protection des opérateurs lors de manipulations
de produits dangereux, en chimie notamment Mobiles et modulaires, sans
raccordement ni travaux d'installation, elles sont destinées à protéger les personnes
durant les manipulations émettrices de vapeurs ou particules chimiques. Conformes à
la norme NF X 15-211, toutes les hottes à flux laminaire avec recirculation d'air
proposées sont choisies pour leur performance au bénéfice de votre sécurité tout en
proposant une alternative environnementale aux systèmes traditionnels

4
1 Définition d’une Hotte à flux laminaire :

Une hotte à flux laminaire est une hotte soufflante conçue pour éviter la contamination par
des particules de wafers, contamination microbienne d'échantillons biologiques ou tout autre
objet sensible aux particules. De l'air passe à travers un filtre HEPA, puis est diffusé en un
flux laminaire vers l'utilisateur. Le meuble est habituellement fait d'acier inoxydable sans
jointures ou espaces permettant le passage de spores.

Une hotte à flux laminaire est un plan de travail qui empêche la contamination aux
particules et aux vapeurs nocives provenant des produits manipulés. De ce fait, les
manipulations sont effectuées en conditions stériles et les produits sont protégés d’une
contamination microbienne d’échantillons biologiques. La hotte à flux laminaire sert surtout
à préparer des milieux de culture et permet aussi d’inoculer un substrat. Par ailleurs, ce plan
de travail permet de fabriquer une seringue de spores et de faire toutes les manipulations
ayant besoin d’un espace plus stérilisé. On retrouve ces hottes à flux laminaire souvent dans
les laboratoires.

Figure 01 : Représentation d’une Hotte à flux laminaire

5
2 les types de hotte à flux laminaires :
2/ 1 Hotte à flux laminaire vertical ou enceinte de sécurité biologique
(ESB) de classe II
● Les hottes à flux laminaire vertical , aussi appelées «enceintes de sécurité biologique»
(ESB), sont surtout utilisées en culture cellulaire animale. Ce type de hotte prévient la
contamination du matériel manipulé et protège l'utilisateur. L'ESB représentée ici est de
classe II. L'air ambiant et celui de l'enceinte sont filtrés par un filtre HEPA avant d'être
redirigés dans l'enceinte et vers l'extérieur de celle-ci. Une fenêtre amovible minimise les
risques d'inhalation d'aérosols. Elle protège également l'intérieur de la hotte des
contaminants externes. Ce type d'enceinte est utilisé dans les laboratoires de niveaux de
confinement 1, 2 et 3.
● les flux laminaires verticaux : l'air est soufflé du « plafond » de la hotte par un filtre à haute
efficacité (HEPA). Il ressort soit par la façade (protection idem au flux horizontal), soit il est
repris par des perforations sur les parois latérales ou arrière, l'empêchant de ressortir vers le
manipulateur et l'environnement. Dans ce cas, l'air rejeté (30 % du flux total) est évacué
après passage sur un second filtre absolu.

Figure 1 Hotte à flux laminaire vertical (du manuel Culture cellulaire animale et végétale,
d'Antoine Campeau-Péloquin et Sophie Roy ,2019)
6
2/ 2 Hotte à flux laminaire horizontal :
● Les hottes à flux laminaire horizontal (figure ci-contre) conviennent particulièrement à la
culture cellulaire végétale. Avec ce type de hotte, l'air filtré et stérile est poussé du fond de la
hotte vers l'utilisateur et l'extérieur. Ces hottes maintiennent un environnement stérile autour
du matériel végétal et réduisent les risques de contamination. Par contre, elles ne protègent
pas l'utilisateur.
● Avec le flux laminaire horizontal, les particules sont totalement évacuées sans qu’il n’y ait
pas de turbulences sur le plan de travail. Ainsi, les échantillons mis sur la zone de travail ne
peuvent plus être contaminés. Aussi, le fond de la hotte est bien stérilisé par le flux d’air
unidirectionnel qui évacue les particules à l’extérieur
● les flux laminaires horizontaux : l'air traité sur le filtre est soufflé vers le manipulateur.
Cette technique protège le produit mais pas le manipulateur ni l'environnement des
contaminants

Figure 2 : Hotte à flux laminaire horizontal (du manuel Culture cellulaire animale et végétale,
d'Antoine Campeau-Péloquin et Sophie Roy, 2019)
7
 3 les critères pour choisir la hotte laminaire :
Le choix d’une hotte à flux laminaire n’est pas toujours quelque chose d’évident à
faire et pourtant il est crucial car les différences de caractéristiques peuvent avoir de
lourdes conséquences sur vos échantillons.

Les hottes à flux laminaire vertical ou horizontal sont développées avec un but
commun : protéger vos échantillons en créant un environnement de travail sans
particules et contamination. Attention, ces hottes de laboratoire n’ont pas pour
objectif de protéger l’opérateur.

3-1/Au sujet du flux laminaire horizontal :

● Le flux horizontal permet de véritablement évacuer les particules sans effets

de turbulences au niveau du plan de travail.
● Cela favorise la non contamination de vos échantillons présents sur votre zone
de travail.
● Le fond de la hotte est particulièrement bien traitée par le sens du flux d’air
unidirectionnel, cela permet d'évacuer les particules vers l'extérieur.

3-2/Au sujet du flux laminaire vertical :

● Le flux vertical permet d’obtenir la qualité d’air souhaitée sur l’ensemble de

la surface de votre enceinte.
● Il permet d’évacuer les particules, cependant des turbulences peuvent
apparaître au niveau du plan de travail.
● L ‘efficacité souhaitée avec le flux vertical est pour l’ensemble du volume
dans sa largeur, profondeur et hauteur.

4 Les étapes pour nettoyer la Hotte à flux laminaire :

Une hotte à flux laminaire apporte le contrôle et l’efficacité nécessaire à votre
environnement de laboratoire Cependant, si les procédures de nettoyage appropriées ne sont
pas suivies, votre précision peut être défectueuse ou non fiable.Assurez-vous que les
résultats de votre laboratoire continuent d’assurer la sécurité et la précision Suivez ces
conseils pour nettoyer votre hotte à flux laminaire:
1. Faites fonctionner la hotte pendant au moins 15 à 20 minutes avant de commencer
le nettoyage
2. Porter des vêtements stériles et des gants de laboratoire
3. Toujours utiliser des chiffons propres et non pelucheux
4. Utilisez un chiffon différent (ou d’autres surfaces d’un chiffon plié) pour chaque
paroi de la hotte
5. Utilisez de l’alcool isopropylique à 70%
6. Toujours nettoyer de haut en bas et d’arrière en avant

8
 7. En commençant par un coin arrière supérieur, essuyez toute la surface de la paroi
avec un long mouvement latéral
8. Ne pas hésiter à reproduire plusieurs fois les mouvement
9. Si vous nettoyez une hotte à flux laminaire horizontal, ne nettoyez pas le filtre
HEPA qui est sur la paroi arrière de la hotte (le filtre HEPA ne doit pas être touché)
10. Si vous nettoyez une hotte à flux laminaire vertical, la paroi arrière de la hotte
doit être nettoyée. Le filtre HEPA est situé au dessus de l’enceinte

5 Fonctionnement d’une Hotte à flux laminaire:

● Les hottes à flux laminaires sont fabriquées afin de créer une surface de travail
exempt de particules. Elles amènent l’air via un système de filtration bien efficace et
évacuent l’air par la surface de travail dans le flux d’air unidirectionnel.
Concrètement, l’air ambiant est aspiré par une turbine avant de passer à travers un
filtre HEPA pour venir finalement à l’espace de travail. Une fois le filtre traversé,
l’air ne contient plus de particules qui peuvent être des poussières, levures, bactéries
ou spores. Dès lors, l’air est vu comme stérile. Le flux d’air laminaire purifie donc
l’air empêchant ses particules de s’attaquer à vos cultures.

● Les hottes à flux laminaires sont majoritairement équipées d’une lampe UV-C à effet
germicide pour stériliser le plan de travail et son contenu. Vous devez
obligatoirement éteindre ladite lampe quand vous travaillez sous la hotte pour ne pas
être victime de cataractes ou de cancers de la peau. Toutefois, avant de passer à
l’utilisation de la hotte, vous devez stériliser vos mains et tous vos instruments pour
ne pas contaminer votre culture. Évitez aussi tant que vous pouvez de stocker des
objets sur le plan de travail de la hotte pour favoriser sa stérilisation.

6 hygiéne d’une Hotte à flux laminaire:

1 Préparation des HFL :

Mettre la ventilation en marche 15 minutes minimum avant la manipulation.

Se laver les mains soigneusement.

Nettoyer le plan de travail à l’aide d’un détergent sans oxydant (pas d’eau de Javel)

en portant des gants de ménage.

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 Introduire le matériel nécessaire après un nettoyage rapide à l’aide d’un papier

imbibé d’alcool.

L’installer en laissant libre les bandeaux d’aspiration avant et arrière.

Laisser un stylo-marqueur en permanence dans l’enceinte.

2 Manipulation :

Régler la hauteur du siège et ne pas se tenir trop près de la veine de garde

Utiliser des gants pour le travail des prélèvements pathologiques et pour le travail sur

cultures cellulaires infectées par des virus.

Ne jamais utiliser de becs chauffants dans l’enceinte (perturbation du flux et risque

d’altération du filtre HEPA).

Manipuler au centre en évitant tout mouvement brusque et veiller à ne pas perturber

le bon écoulement du flux d’air (veine de garde libre).

Décontaminer immédiatement le plan de travail en cas de contamination.

3 Après la manipulation :

Laisser la hotte à flux laminaire en fonctionnement pendant 5 à 10 minutes pour

purger l’air intérieur.

Ranger le matériel sur le plan de travail.

Nettoyer et désinfecter le plan de travail avec gants de ménage et de l’alcool ou un

produit détergent et désinfectant (pas d’eau de Javel).

Se laver les mains.

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 Laisser en fonctionnement 15 minutes pour éliminer les aérosols générés par le

nettoyage.

4 MAINTENANCE : Par le personnel de laboratoire

vérification visuelle l’état physique (propreté, fissure, oxydation…).

vérification de l’état fonctionnel (vibration et fonctionnement des dispositifs

d’alarme et de protection…).

vérification des indicateurs (témoin de colmatage des filtres, manomètre, état des

dispositifs de signalisation, compteur horaire…).

7 les applications d’une Hotte à flux laminaire:

• Culture cellulaire.
• Préparation de solutions stériles.
• Microélectronique.
• Optique.
• Fécondation in vitro.

Conclusion :
Le choix de votre hotte à flux laminaire dépend également du positionnement et
des caractéristiques de vos échantillons. Par exemple, une plaque de verre ou
tout autre échantillon d’une faible épaisseur directement posé sur le plan de
travail nécessitera un flux d’air horizontal afin de traiter les particules au plus
proche du plan de travail. Au contraire, un échantillon observé sur un
microscope ou tout autre échantillon surélevé du plan de travail nécessitera un
flux d’air vertical afin d’optimiser l’évacuation des particules du point
d’utilisation.
Néanmoins, nous ne conseillons pas cette technologie de flux laminaire si les
particules sont nocives car l’opérateur n’est pas protégé.

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 Références bibliographiques

● American Industrial Hygiene Association 31 41 Fairview Park Drive ,

Suite 777, Falls Church , VA22042 Approved April 26, 2012( Article)

www.aiha.org

● Antoine Campeau-Péloquin, Sophie Roy, Gilles Chabot(illustration ) du

manuel Culture cellulaire animale et végétale (2019 ) pédagogie Numéro
:119542 ( Article)

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