ROYAUME DU MAROC

FACULTE DES SCIENCES SEMLALIA-MARRAKECH

DEPARTEMENT DE BIOLOGIE

Option : Science et Technologie d’Assainissement des Déchets liquide et solide

COMPTE RENDU :

Recherche des œufs d’helminthes

dans les eaux usées

Réalisées par :

Demandé par :
Pr Bouhoum

Année universitaire :2022/2023

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Sommaire
Introduction............................................................................................................................................................................. 3
Chapitre I : Recherche des œufs d’helminthes dans les eaux usées...........................................4
I.1 Prélèvement.................................................................................................................................................... 4
I.2 Traitement de l’échantillon................................................................................................4
I.2.1 Analyse directe de l’échantillon.....................................................................................4
I.2.2 Traitement préliminaire de l’échantillon......................................................................4
I.2.3 Les méthodes de concentrations des parasites..........................................................................4
I.3 Dénombrement des œufs d’helminthes............................................................................6
I.3.1 Cellule de comptage................................................................................................................................ 6
I.3.2 Flottaison simple avec saccharose saturée..................................................................................7
Conclusion................................................................................................................................................................................ 8

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Introduction
Le parasite est un être vivant qui vit au dépend d'un autre être vivant appelé hô te. On
distingue deux types de parasites : Les protozoaires comme les flagelles et les ciliés ou les
invertébrés comme les helminthes ou vers.
Les helminthes sont des vis sans fin parasites qui alimentent sur un hô te vivant à
l'alimentation et à la protection de gain, tout en entraînant l'absorption, la faiblesse et la maladie
nutritives faibles dans l'hô te. Ces vis sans fin et larves vivent dans l'intestin grêle et désignées
sous le nom des parasites intestinaux.
Alors c'est pour cela qu'avant de rejeter les eaux usées au milieu naturel ou réutiliser en
irrigation des maraîchages, nous avons réalisé des analyses sur ces eaux pour détecter la
présence et le nombre des helminthes.

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Chapitre I : Recherche des œufs d’helminthes dans les
eaux usées

I.1 Prélèvement :
Avant d’effectuer une analyse on procède par un échantillonnage qui doit être le plus
représentatif possible de l’eau usée en question, il existe plusieurs types d’échantillonnage :
 É chantillonnage ponctuel : on fait un seul prélèvement en un moment donné ;
 É chantillonnage composite : on fait plusieurs prélèvements séparés par des périodes
définit, on mélange les échantillons pour avoir un échantillon moyen, ce type
d’échantillonnage est rapproché au réalité ;
 É chantillonnage de 24 heures : on l’utilise si on veut définir la variation des parasites
par le temps et on fait le traitement de chaque échantillon, c’est-à -dire l’observation
des parasites dans 24h.
Le volume prélevé selon la nature de l’eau usée :
 Eau usées brutes : de 1 à 5 litres ;
 Eau usées traité : de 10 à 20 litres ou plus.
Les échantillons doivent être conserves en ajoutant du formol a 10 % (2ml/litre) et remmenés
dans les plus brefs délais au laboratoire dans des pots en plastiques fermes et numérotes pour
l’analyser.

I.2 Traitement de l’échantillon :

I.2.1 Analyse directe de l’échantillon :
Inefficace car les parasites sont dilués dans un grand volume d’eau ; c’est pour cela qu’on a
recours au méthode de concentration qui font réunir les parasites dans un faible volume.

I.2.2 Traitement préliminaire de l’échantillon :

 Laisser décanter l’échantillon d’eau (au moins 8heures) ;
 Aspirer le surnageant sous vide ;
 Centrifuger le résidu sédimenté à 3500t/min pendant 15min : l’échantillon concentré qui
rester au fond de bouteille ;
 É liminer le surnageant et garder le culot (le culot c’est l’échantillon a étudié).

I.2.3 Les méthodes de concentrations des parasites :

 Méthode de sédimentation (sédimentation physique et physico-chimique) ;
 Méthode de flottation ;
 Méthode combinées.

I.2.3.1 Méthode de sédimentation :

 Principe :
Cette méthode s’appelle aussi méthode diphasique ou physico-chimique qui mettent en
évidence 2 phases non miscibles :

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  L’une aqueuse qui permet la dilution de l’échantillon ;
 L’autre organique lipophile (solvant des lipides : Ether).
Ces derniers permettent la réalisation d’un coefficient de partage qui permet à la particule de
s’orienter au contact de l’une des deux phases.
Les éléments dont la balance hydrophile-lipophile penche en faveur des groupements
hydrophiles se retrouvent dans la phase aqueuse et se déposent au fond du tube à centrifugation
; au contraire, si la balance penche en faveur des groupements lipophiles, l’élément reste au
contact de la couche éthérée et participe à la constitution de l’anneau qui se forme à
l’interphase eau-éther.
Cette méthode ne demande pas des produits chers.

(Phase lipophile)

(Phase hydrophile)

(Parasites)

 Protocole expérimentale (Méthode de Telman-Rivas modifiée par Bailenger) :

 Diluer (1/5 à 1/10) le culot de centrifugation dans le tampon acéto-acétique a ph = 5.
Tampons :
 Acétate de Sodium : 15 g ;
 Acide acétique : 3,6 ml ;
 Eau distillée : 1000 ml.
 Tamiser ;
 Agiter ;
 Ajouter un égal volume d’Ether ;
 Emulsionner par agitation ;
 Centrifuger à 1500 t/min pendant 3 à 4 min.

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  Protocole :
C'est une méthode qui est utilisée en cas de difficultés dans le diagnostic des kystes.
L’observation avec l'objectif à immersion s'effectue après lutage de la lame.
Cette méthode consiste à centrifuger dans un tube conique, un échantillon d’eau usées dans
du tampon acto-acetique à PH 5.5 (10 fois le volume des selles) Puis laisser sédimenter pendant
40 à 50 secondes et verser Je liquide surnageant dans un tube à centrifuger.
Ajouter de l'éther sulfurique au tiers du volume total du liquide en prenant la précaution de
laisser au moins un centimètre de hauteur vide dans le tube. Agiter rigoureusement jusqu'à
émulsion compte après avoir bouché le tube avec le pouce.
Centrifuger immédiatement après l'émulsion pendant 1500 à 2000 tr/mm. Enfin, jeter le
surnageant.
Prélever le culot par capillarité avec une pipette Pasteur et examiner entre lame et lamelle
après lutage avec l'objectif à immersion.

I.2.3.2 Méthode de flottation :

 Principe :
Dilution de l’échantillon dans un réactif plus dense que les éléments parasitaires recherches.
Ceux-ci vont alors se rassembler dans la pellicule superficielle (ménisque).

Parasites (ménisque)

Parasite

Débris

Figure 1 Méthode de flottation

I.3 Dénombrement des œufs d’helminthes :

I.3.1 Cellule de comptage Mac Master:
La cellule de MAC MASTER est utilisée pour la quantification des Œufs. C’est une lame
constituée de deux chambres ; chacune d’elles porte un réseau carré de 10 mm de largeur et une

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profondeur de 1,5 mm ; chaque réseau est divisé en 6 rectangles égaux pour faciliter la lecture.
Le volume de lecture est de 0,15 ml et le comptage se fait au grossissement x 100.
Avant la lecture de résultat, il doit agiter pour n’a pas avoir des résultats fausses.

I.3.1.1 Les résultats :

 1 œufs : Ascaris ;
 3 œufs : Trichuris ;
 2 œufs : Taenia.

I.3.2 Flottaison simple avec saccharose saturée :

 Saccharose
 Eau distillée
 Phénol

I.3.2.1 Les étapes de l’expérience :

 Remplir la lame ;
 Laisse quelques minutes ;
 Observer sous le microscope.

I.3.2.2 Formule de quantification des œufs :

N = (Xn * V) / (K * V’ * V’’)

Avec :
N : nombre d’œufs par litre d’eau ;
X : nombre d’œufs sur mes lames ;
K : nombre de lames lues ;
V : volume final du culot et le saccharose ;
V’ : volume de la cellule de MAC MASTER ;
V’’ : volume de l’échantillon d’eau usée.

I.3.2.3 Résultats trouvés :

 N d’Ascaris =14 oeufs

 N de Taenia =27oeufs

 N de Trichuris=40oeufs

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Conclusion
L’eau peut devenir une source de maladie lorsque sa qualité se dégrade. La caractérisation
parasitologiques effectuée sur les eaux usées montre qu’elles sont chargées en œufs
d’helminthes. Donc l’objectif général de cette l’étude réalisé est d’évaluer le niveau de la
contamination parasitologiques des eaux usées (les œufs d’helminthes).
Actuellement, la réutilisation des eaux usées et des boues en provenance des stations
d'épuration devient de plus en plus importante ; par conséquent, les œufs
d'helminthes constituent un risque d'ordre sanitaire pour la population humaine lorsqu'elles
sont réutilisées en agriculture.