Les prélèvements en bactériologie

Des eaux

Mme MOUFFOK. F
Économie de l’eau en pleine croissance

Développement des
techniques Approvisionnement de
Industrielles modernes plus en plus difficile

Accroissement de la population
Et de son niveau de vie
Pour cela on a utilisé

- Les eaux des nappes et des

sources.
- Les eaux de surface (eaux de
ruissellement),
Puis méthodes de recyclage,
- eaux de déssalement et
- eaux souterraines.
Problématique
Simultanément la pollution a pris de
l’importance:
- Rejets industriels
- Eaux usées domestiques
- Pesticides
- Engrais ,et des pollutions exceptionnelles
ou accidentelles d’où nécessité
de développer des méthodes analytiques
de plus en plus sensibles pour mettre en
évidence cette pollution
Contamination de l’eau
L’eau coule et se charge au cours de son passage;
elle contient des substances ou des
microorganismes qui par leur nature et leur
concentration peuvent être :
- indispensable,
- acceptable,
- indésirables voir
- toxiques ou dangereux.
C’est la raison pour laquelle:
L’eau ne peut être directement utilisé par le
consommateur.
Vu que le rôle de l’analyste est limité dans
le temps et vu l’importance de l’évaluation
des risques pour la collectivité

- le choix s’est porté sur l’installation

de stations de traitements
automatiques de contrôle en
continu de plus en plus complexes
mais de prix de revient coûteux
Rôle important du laboratoire
Vu qu’aucun système n’est infaillible
(pannes,erreurs), Le laboratoire a son rôle à
jouer
Problème de santé publique
Echantillonnage et prélèvement
Examen bactériologique valablement
interprété:
- nécessité de travailler sur un échantillon
correctement prélevé.
- Dans un récipient stérilisé
- Correctement transporté au laboratoire.
- Analysé sans délai
- Ou après une courte durée de conservation
dans des conditions satisfaisantes.
Le prélèvement d'un échantillon d'eau est une opération délicate à
laquelle plus grand soin doit être apporté;
 il conditionne les résultats analytiques
et l'interprétation qui en sera donnée.
L'échantillon doit être homogène,
représentatif et
obtenu sans modifier les caractéristiques
physicochimiques de l'eau (gaz dissous, matières en suspension, etc.)

Étant donné que dans la plupart des cas le responsable du

prélèvement n'est pas l'analyste, il convient que le préleveur
ait une connaissance précise des conditions du prélèvement
et de son importance pour la qualité des résultats
analytiques.
Globalement, il est donc nécessaire de mettre en place
une organisation structurée,
de disposer d'un personnel qualifié,
de développer une méthodologie adaptée à chaque
cas,

de procéder à un choix judicieux des points de

prélèvement et d'utiliser le matériel convenable.

De toute façon, les résultats de l'analyse ne seront

exploitables que si le prélèvement a un caractère
représentatif.
En outre, s'il est bien évident qu'un prélèvement
correct est indispensable à l'obtention de résultats
analytiques significatifs, il est tout aussi important
de connaître le devenir de l'échantillon entre le
prélèvement et l'arrivée au laboratoire.
Le prélèvement instantané n'est qu'un reflet de la
composition de l'eau qui a un caractère évolutif,
surtout vis-à-vis des phénomènes de pollution.
Une meilleure appréciation de ces variations peut
résulter d'une multiplication des prélèvements, mais
ceci constituera une sujétion matérielle et financière
Choix du mode prélèvement
Le mode de prélèvement variera suivant l'origine
de l'eau.

Dans le cas d'une rivière, d'une nappe ouverte,

d'un réservoir, d'une citerne, la bouteille sera
plongée à une certaine distance du fond (50 cm)
et de la surface, assez loin des rives ou des
bords ainsi que des obstacles naturels ou
artificiels,

en dehors des zones mortes ou des remous, et

en évitant la remise en suspension des dépôts.
 Matériel de prélèvement
Il doit doit faire l'objet d'une attention
particulière.
L'emploi de flacons neufs en verre borosilicaté de préférence
bouchés émeri ou le cas échéant avec des bouchons en
polyéthylène ou en téflon maintenus pendant 1 heure dans de
l'eau permutée puis séchés, est recommandé, surtout s'il s'agit
de doser des éléments volatils comme le
mercure, les sulfures, les cyanures.
Certes leur prix de revient est élevé mais ils sont susceptibles
de réutilisation après un lavage adéquat sil'échantillon n'est
pas excessivement pollué.
Les flacons destinés au prélèvement pour l'analyse des
éléments minéraux seront traités à l'acide nitrique environ N,
puis rincés abondamment, égouttés, fermés mais non séchés.
L'usage de flacons jetables en verre ou en matière
plastique en raison des facilités qu'ils présentent
pour le transport et de la possibilité de leur usage
unique étant donné leur prix compétitif.

Leur nettoyage étant délicat, leur réemploi

poserait des problèmes de contamination
résiduelle.

 De toute façon, les flacons neufs doivent

normalement être traités.
Technique de prélèvement
Blouse propre.
Se laver les mains et les sécher.
Choisir un robinet couramment
désinfectable.
Enlever s’il y a lieu,les filtres ou brise-
jet
Faire couler l’eau pendant 3 à 5 minutes pour purger
les canalisations
Couper l’eau
Stériliser l’extrémité du robinet à l’aide d’une lampe à
souder en chauffant doucement quelques secondes

Si l’on ne dispose pas de lampe à souder,verser un

peu d’alcool à 90° sur l’extrémité du robinet,
l’enflammer après avoir pris soin d’éloigner la
bouteille d’alcool,et laisser brûler jusqu’à l’extinction.
utilisé et facilement
Ouvrir le robinet de façon à ce que l’eau
coule normalement,sans éclabousser

Laisser couler quelques secondes pour

refroidir l’extrémité du robinet

Prendre le flacon stérile fourni par le

laboratoire ou tout autre flacon d’une
contenance d’au moins 500 ml
Dévisser le bouchon et le garder dans une main
en prenant soin de ne pas toucher l’intérieur avec
les doigts

Avec l’autre main remplir le flacon jusqu’à

environ 1cm du goulot (veillez à ce que l’eau ne
déborde pas)

Remettre le bouchon sur le flacon en évtant de

toucher le goulot avec les doigts

Si le prélèvement n’est pas apporté aussitôt au

laboratoire,le conserver au frigo(au maximum
pendant 12 heures)
Remarque
Cas de puits ou forage: pour être significatif,
prélèvement sur ouvrage en service.
Dans cas d’un ouvrage récemment creusé
procéder à des pompages journaliers pendant 8
à 15 jours avant le prélèvement/ Idem pour puits
ou forage longtemps inutilisé.
 Cas particuliers
Le prélèvement en continu, grâce à des
dispositifs automatiques: nombreux types
 représentation moyenne / photographie
de l'amplitude des variations.
Les erreurs susceptibles de rendre difficile
l'interprétation des résultats sont plus souvent
liées à un échantillonnage non satisfaisant qu'à
des erreurs analytiques proprement dites.

En pratique, le préleveur évitera de constituer

un échantillon moyen s'étalant sur plus de 24
heures.
Exemple de système simple de prélèvement manuel en
eau profonde
- cas d'un lac ou d'une retenue d'eau :
. choisir plusieurs points de prélèvements prélever
plusieurs échantillons à différentes profondeurs pour tenir
compte de l'hétérogénéité verticale et horizontale.
Si nécessaire ,se servir d'un vase intermédiaire pour le
prélèvement,( vase au préalable lavé et rincé
soigneusement.)
Il existe des dispositifs permettant d'ouvrir les flacons à
un niveau déterminé et ainsi de prélever l'eau en un point
donné.
Le mélange de plusieurs échantillons ainsi recueillis peut
donner un échantillon moyen.
cas d'une eau souterraine
deux cas très différents peuvent se présenter:

- un captage ou d'un puits équipé d'une

pompe: prélèvements après épreuve de
pompage ininterrompue d'une durée totale de
l'ordre de 30 heures ou, à la fin de la dernière
journée d'une série de trois journées
consécutives de pompage de 10 heures.
- une source aménagée, effectuer
le prélèvement au trop plein, sinon procéder
à un aménagement provisoire.
Transport des échantillons

D'une façon générale, le transport à la température

de 4°C et à l'obscurité dans des emballages
isothermes permet d'assurer une conservation
satisfaisante.
Dans les eaux ayant subi un traitement de désinfection, le
chlore et les composés chlorés peuvent entraîner une
perturbation dans les
dosages, en particulier dans les dosages par
spectrophotométrie d'absorption moléculaire et l'analyse
bactériologique.
( oxydant éliminé par de petites quantités de thiosulfate de
sodium introduit dans ce cas avant la stérilisation du
flacon de prélèvement.)
Remarques:
Le prélèvement subira obligatoirement :
- un certain temps de transport
- une attente au laboratoire avant la mise en route
analytique.
Ces temps devront être réduits au minimum.

Pendant cette période, des phénomènes chimiques

et bactériologiques peuvent conduire à des
précipitations secondaires par changement de
valence, des adsorptions sur les parois des
récipients,des photodécompositions, des
volatilisations, des biodégradations,d'où la
nécessité d'employer des adjuvants de
conservation et de réunir des conditions de
température et d'obscurité favorables
Fiche de renseignements

Principaux renseignements à fournir

1) Identité du préleveur.
2) Date et heure du prélèvement.
3) Particulier ou autorité demandant l'analyse.
4) Nature de l’eau analysée
5) Température de l’eau au moment du prélèvement.
6) Identification précise du point de prélèvement.
 Cas particulier des eaux de mer

Nacelle de prélèvement munie du flotteur et de la

corde (non souillés )
Lingettes antiseptiques
Pissette d’antiseptique
Thermomètre
Flacon stérile emballé
Glacière facile à transporter
Gilet de sauvetage
Prélèvements
Moment du prélèvement: périodes de
fréquentation habituelles de la baignade
Important: pas de prélèvessment en cas de
tempetes, d’orages, de drapeau rouge ou cas ou
sécurité du préleveur mise en cause.
QU E ST IO N S