TP 2 : Microbiologie Alimentaire L3 TAQC

Recherche et dénombrement sur milieu solide des germes aérobies

mésophiles totaux (GAMT)

-But du TP
Rechercher des germes aérobies mésophiles totaux dans un produit : le lait, selon la norme
officielle (NF V 08-051/1999) relative au dénombrement des micro-organismes par la
méthode du comptage des colonies pour les micro-organismes : Bactéries, levures et
moisissures, formant des colonies dénombrables et se développant en aérobiose.

-Principe
Les germes aérobies totaux ne constituent pas une famille bactérienne particulière. Il s’agit de
microorganismes formant des colonies dénombrables après leur multiplication dans des
conditions définies de laboratoire. Le milieu de culture utilisé est la gélose PCA (Plate Count
Agar) 30-37°C pendant 72 h.

-Mode opératoire
-Prélever aseptiquement à l’aide d’une pipette Pasteur stérile 1ml de la solution mère et des
dilutions décimales successives allant de 10-1 à 10-4 et mettre en culture en profondeur dans
des boîtes de Pétri stériles, vides, préparées et pré-numérotées.
- Compléter avec environ 15 à 20 ml de gélose PCA fondue puis refroidie.
-Faire ensuite des mouvements circulaires en forme de « 8 » pour permettre à l'inoculum de se
mélanger à la gélose utilisée.
-Laisser solidifier sur la paillasse, puis rajouter une deuxième couche fine de la même gélose.
Cette double couche à un rôle protecteur contre les contaminations diverses.
-Incuber les boites renversées, à 30°C pendant 72 heures.
-Deux essais doivent être réalisés.

Les étapes sont résumées dans la figure ci-après.

 Recherche et dénombrement des germes aérobies mésophiles totaux (GAMT)
dans le fromage fondu.

-Expression des résultats

Pour le dénombrement après culture sur milieu solide, on applique la formule
suivante :

X= nx1/vx1/d
Avec :
X : nombre de microorganismes par ml d’échantillon
n : nombre de colonies dénombrées (moyenne des deux essais, 15<n<150).
v : volume prélevé
d : dilution

Travail à faire
1.Expliquer les étapes de la recherche et du dénombrement des GAMT.
2. Faire les calculs avec le nombre de colonies comptées pour les 4 dilutions.
3. Supposons que 6 dilutions ont été réalisées et que la moyenne de comptage de deux boites
de Petri, a été effectué en divisant les boites en 4 carrés. Refaire les calculs pour :
la dilution d=10—6 , et pour n dans le carré 1 =-5, carré 2 = 10, carré 3 = 13 et carré 4 = 26.