Chimie Moleculaire Et Supramoleculaire Des Sucres

Chimie molculaire
et supramolculaire
des sucres
Serge David
Universit Paris-Sud, Orsay
Chimie molculaire
et supramolculaire
des sucres
Introduction chimique aux glycosciences
S A V O I R S A C T U E L S
Interditions / CNRS ditions
Lillustration dela couverture est la formuledun acidesialosyl sialique, disaccharide atypique,
prsent dans ltoile de mer Asterias rubens (daprs A. Bergwerff, S. Hulleman, J . Kamerling,
J . Vliegenthart, L. Shaw, G. Reuter et R. Schauer, Polysialic Acid, from Microbes to Mun, ouvragecol-
lectif publisous la direction de J. Roth, U. Rutishauser et EA. Troy II, Birkhauser Verlag, Ble, 1993,
page201).
O 1995, Interditions, 7, rue de lEstrapade, 75005 Paris
et
CNRS Editions, 20/22, rue Saint-Amand, 75015 Paris.
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ISBN 2 7296 0528 2
ISBN 2 27105254 8
Table des matires
Introduction 1
1 Configuration des monosaccharides 4
1.1 Le glucose 4
1.2 Autres configurations des sucres 7
1.3 Tautomrie 10
1.3.1 Gnralits 10
1.3.2 Chromatographie en phase vapeur 11
1.3.3 Chromatographie liquide sous haute pression (HPLC) 11
1.3.4 Dichrosme circulaire 12
1.3.5 Rsonance magntique nuclaire 13
1.3.6 Rsultats et discussion 14
1.4 Cintique de la mutarotation
15
1.5 Considrations gnrales sur ces mesures 18
Rfrences 19
20 2 Conformation des monosaccharides et de leurs drivs
2.1 Symboles de conformation : pyranoses 20
2.2 Conformations ltat solide 21
du proton 22
2.3 Conformation en solution : rsonance magntique nuclaire
2.4 Gnralits sur les facteurs de conformation des monosaccharides 26
2.5 Effet de coplanar& 27
2.6 Effet anomrique 30
2.6.1 Donnes exprimentales 30
2.6.2 Origine de leffet anornfique 32
2.7 Conformation des pentopyranoses 37
2.8 Conformation des hexopyranoses et de leurs drivs 39
2.10 Polyols non cycliques 43
Rfrences 44
3.1 Dfinitions relatives aux glycosides (O-glycosides) 45
3.2.2 Rle prparatif et limites dutilit 47
2.9 Furanoses 41
3 Alkyl et aryl glycosides. Glycosylamines
45
46
3.2.1 Aspect exprimental 46
3.2 Synthse des alkyl glycosides par la mthode de Fischer
VI Table des matires
3.3 Autres mthodes de prparation des glycosides
3.3.1 Activation du carbone anomrique
3.3.2 Aryl glycosides
Anhydropyranoses et anhydrofuranoses caractre actalique
3.5.1 Hydrolyse en milieu acide
3.5.2 Hydrolyse et transfert enzymatiques
3.5.3 Stabilit des glycosides dans les conditions neutres
ou alcalines. Rle protecteur
3.4
3.5 Proprits chimiques des glycosides
3.6 Glycosylamines et nuclosides
3.6.1 Gnralits
3.6.2 Glycosylamine
3.6.3 Nuclosides
Rfrences
4 Nomenclature
4.1 Introduction
4.2 Nomenclature des aldoses
4.2.1 Noms courants des sucres et symboles de configuration
4.2.2 Sucres dsoxygns
4.2.3 Sucres substitus par NRR, F, C1, Br, I, N,, alkyl-S
et phnyl-S
4.2.4 Drivs substitus sur loxygne
4.2.5 Formes acycliques
4.2.6 Formes cycliques
4.2.7 Alditols
4.2.8 Acides aldoniques
4.2.9 Acides uroniques
4.2.10 Actals cycliques
4.2.11 Actals et thioactals
4.2.12 Anhydrides intramolculaires
4.3 Ctoses
5 Ractions des hydroxyles
5.1 Drivs fonctionnels
5.1.1 Importance des ractions de protection
5.1.2 thers
5.1.3 Drivs silyls
5.1.4 Esters dacides organiques et carbonates
5.1.5 thrification et acylation slectives.
Drivs organostanniques
5.1.6 Phosphates
5.1.7 Hydrognosulfates
5.2 Actals
5.3 Oxydations en carbonyle
49
49
50
51
54
54
58
61
62
62
63
66
69
71
71
71
71
73
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74
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75
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80
80
80
80
82
82
83
85
86
86
89
Table des matires VI1
5.3.1 Hydroxyles isols 89
5.3.2 Oxydation des diols en hydroxyctones 90
5.3.3 Utilit synthtique des sucres carbonyls 91
5.3.4 Oxydations catalytiques sur platine 92
5.4 Periodates alcalins et ttraactate de plomb 92
5.5 Dsoxygnation 94
Rfrences 95
6.1 Introduction 97
6.2 Oxydation par les halognes
6 Ractions du carbonyle et de lhmiactal
97
97
6.3 Ractifs nuclophiles 98
6.3.1 Borohydrure de sodium 98
6.3.2 Thiols 98
6.3.3 Cyanures alcalins 1 O0
6.3.4 Ractifs du type de Wittig et organomtalliques 101
6.4 Ractions impliquant la dprotonation en a du carbonyle.
Les sucres c o me aldols 103
6.5 Fonctionnalisation radicalaire au centre anornrique 106
Rfrences 107
108
7.1 Dplacement des hydroxyles alcooliques 108
7.3 Les ions acyloxoniums cycliques 114
7.4 Dplacements nuclophiles avec participation
117
7.5 Sucres non saturs 117
7.5.1 Glycals 117
7.5.2 Raction de Ferrier 119
7 Changements de configuration. Sucres non saturs et ramifis
7.2 poxides 112
7.6 Sucres ramifis 120
7.6.1 Gnralits 120
7.6.2 Famille >C (OH)-R 121
7.6.3 Famille >CH-R 122
7.6.4 Condensation aldolique 125
Rfrences 125
127
8.1 Induction asymtrique 127
8.1.1 Allylation et aldolisation nantioslective 127
8.1.2 Cycloaddition 129
8.1.3 Raction de Ugi 132
8.2 Les sucres comme prcurseurs de squences dans les synthses
de produits naturels 133
8.2.1 Considrations gnrales 133
8.2.2 Synthse partir des sucres 135
Rfrences 140
8 Les sucres en synthse chirale
VI11 Table des matires
9 Les oligosaccharides : Configuration et analyse
9.1 Introduction, nomenclature
9.2 Effet exoanomrique
9.3 Dtermination des squences par les mthodes chimiques
9.3.1 Hydrolyse acide
9.3.2 Hydrolyse enzymatique
9.3.3 Analyse par mthylation
9.4 Dtermination des squences par les mthodes spectroscopiques
9.4.1 Spectromtrie de masse f.a.b
9.4.2 Technique dinjection dite << lectrovaporisation D
9.4.3 Rsonance magntique nuclaire du proton
9.5 Efficacit potentielle des oligosaccharides pour le stockage
et le transport de linformation
Rfrences
10.1 Ractions des oligosaccharides
10.2 Couplage osidique non enzymatique : principes gnraux
10.3 Pratique du couplage osidique
10 Transformations chimiques et synthse des oligosaccharides
10.3.1 Ractions avec participation
10.3.2 Ractions SN2
10.3.3 Ractions faisant intervenir des intermdiaires cationiques
10.3.4 La cration de la liaison quatoriale-axiale-l,2
10.3.5 Glycosidation cis- 1,2 sans participation avec les sulfoxides
10.3.6 Effet de la configuration de laccepteur
10.3.7 Thiooligosaccharides
10.4.1 Raction de la galactosyltransfrase
10.4.2 Gnralisation
10.4.3 Glycosidases
10.4 Mthodes enzymatiques
10.5 Fluorohydrolyse
Rfrences
11.1 Association avec des cations mtalliques
11 Associations avec anions, cations et molcules inorganiques
11.1.1 Introduction
11.1.2 Structures ltat solide
11.1.3 Complexes en solution
11.2.1 Introduction
11.2.2 Structure de leau
11.2 Notions sur la structure de leau liquide
11.3 Cyclodextrines
11.4 Amylose
11.5 Complexes iods
141
141
143
147
147
147
148
149
149
151
152
156
1.56
157
157
159
161
161
162
163
165
165
166
169
169
169
173
174
176
176
177
177
177
177
179
182
182
182
184
187
188
11 ..5. 1 Introduction 188
Table des matires IX
11.5.2 Complexes de la-cyclodextrine 188
11 S.3 Le complexe (paranitrophnyl a-maltohexaoside),.
Ba (1J 2.27 H,O 189
11.5.4 Complexe iod de lamylose 190
11.6 Interaction des sucres avec leau liquide 191
11.6.1 Importance du problme 191
11.6.2 Le modle dhydratation strospcifique des hexopyranoses 19 1
11.6.3 Principe des mesures
Rfrences
12.1 tat naturel
12.2 Prparations des acides sialiques
12.3 Couplage chimique
12.4 Couplage enzymatique
12.5 acides polysialiques
12.5.1 Introduction
12.5.2 Acides polysialiques microbiens
12.5.3 La molcule dadhsion des cellules nerveuses, N-CAM
12 Acides sialiques et oligosaccharides sialyls
Rfrences
13 Glycoconjugus
13.1 Glycolipides
13.1.1 Dfinitions, isolement
13.1.2 Glycolipides animaux
13.1.3 Gangliosides
13.1.4 Glycolipides vgtaux
13.2.1 Gnralits
13.2.2 Protines glycosides
13.2.3 Protines glycosaminides
13.2.4 Problmes conformationnels
13.3 Glycosaminoglycanes et protoglycanes
13.3.1 Donnes gnrales
13.3.2 Chanes priodiques ou quasipriodiques
14 Structure de quelques complexes sucre-protine cristalliss
13.2 Glycoprotines
Rfrences
14.1 Gnralits. Le complexe ABP-L-arabinose
14.1.1 Protines et sucres
14.1.2 Le complexe protine ABP-L-arabinose
14.2 Complexe du maltose et de la protine de transport
de la maltodextrine
14.2.1 Description de la protine complexante
14.2.2 Complexation des maltodextrines
14.2.3 Mode de complexation du maltose
193
197
198
198
20 1
203
205
209
209
209
210
212
213
213
213
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214
215
216
216
216
218
220
222
222
223
224
225
225
225
226
228
228
229
230
X Table des matires
14.3 Le complexe dune lectine et dun octasaccharide biantennaire 232
Rfrences 235
236
15.1 Avertissement 236
15.2 Antignes et anticorps 236
15.3 La raction immunochimique in vitro 239
15.3.1 Haptnes 240
15.3.2 Physicochimie de la raction immunochimique 24 1
245
15.4.1 Structure 246
15.4.2 Spcificit 248
15.4.3 Description abrge de quelques lectines 249
15.4.4 Proprits biologiques des lectines 25 1
15.4.5 Comparaison des anticorps anti-sucres et des lectines 25 1
Rfrences 252
16 Les antignes de groupes sanguins : substances A, B, H et connexes 253
16.1 Les antignes A, B et H 253
253
254
257
258
16.3.1 Dterminants ABH 258
16.3.2 Dterminants Ii 260
Rfrences 263
dans le monde vivant 264
17.1 Introduction 264
17.2 Le signal de nodulation des rhizobia 264
17.3 Le pentasaccharide actif de lhparine 265
17.3.1 Isolement de lhparine 265
17.3.2 Biosynthse de lhparine 266
17.3.3 Dgradation de lhparine 267
17.3.4 Le pentasaccharide actif 268
17.4 Marqueurs tumoraux 27 1
17.4.1 Mthode de recherche 27 1
17.4.2 Antignes tumoraux 272
17.5 Antignes de diffrenciation 273
17.6 Les slectines 27 5
17.6.1 Raction inflammatoire et slectines 275
17.6.2 Slectines E 276
17.6.3 Slectine L 27 8
17.6.4 Synthse des ligands oligosaccharidiques des slectines 278
Rfrences 279
15 Antignes et anticorps. Lectines
15.4 Les lectines : dfinitions, extraction
16. I . 1 Gnralits. Polymorphisme
16.1.2 Types de jonction. Le systme Lewis
16.2 Le systme Ii et les effets de ramification
16.3 Synthse des dterminants oligosaccharidiques
17 Ractions de reconnaissance doligosaccharides importantes
Table des matires XI
18 Y a-t-il une interaction de reconnaissance entre les oligosaccharides
et lADN ? 280
18.1 Donnes du problme 280
18.2 Les synthses du pseudo-oligosaccharide de la calichamicine 283
18.2.1 Voie DCBAE 283
18.2.2 Voie EABCD 287
18.2.3 Mthodes alternatives 288
290
18.3.1 Rupture de un ou de deux brins
290
18.3.2 Efficacit compare 290
18.3.3 Spcificit du site dattaque
290
18.3.4 Conclusion 29 1
Rfrences 29 1
Index 293
18.3 Reconnaissance du pseudo-ttrasaccharide par lADN
Introduction
A persoruie ,je rie .souhtrite nuturit ut7e chute ou uiie attetife
fi)rc.ee LIU pont-levis de Kni ppl hro etc.. . cornirie N ces
enrug&.s geri.s dufiiiire pieiris dune ir!ftiit cirrirreprises.
cilors que r i o u s nutres, qunritl le poi i t .yelive, trouiwis l i
ioie horirie o c ws i o r i tie choir cluns tios pri ses.
1.. . I Certes i l est dur tlhuhiter uti puys s ci i i s jartiuis de
soleil sur 1 horimi, rnuis il nest guPre tlrlc> i i orz pl us
tlhtrhiter LUI etirnit o le soleil vous tombe .si verticnle-
itierit sur l e cr&e qu i l tie i i o i i s pirrtiet, tii N r i os eiitoii-
rugc>s, de jeter quelque oinbre.
Sci-en Kierkegaard
Jourricil (E.xfrciit.s), 14 juillet I837 (traduit du danois par
Knud Fei-lov et Jean-Jacques Gatenu), Gallimard, I942
Le dcoupage des connaissances adopt dans cet ouvrage nest pas conforme 2
la tradition des livres de chimie organique. Manuels et traits dcrivent essentiel-
lement les techniques contemporaines de construction de liaison covalente, avec
quelques dveloppements sur les questions de conformation et, parfois, une brve
allusion aux problmes du monde vivant. Certes la chimie organique synthtique
des sucres a fait des progrs considrables au cours des dernires dcennies. La
mise au point de nouvelles techniques et lintroduction de nouveaux concepts ont
permis dtendre a cette famille la plupart des grandes ractions. Des efforts
intenses ont permis damliorer notablement le pronostic de la raction de glyco-
sidation, souvent inefficace avec la mthode ancienne. Aussi lauteur a-t-il consa-
cr la moiti du prsent ouvrage 2 ces aspects synthtiques. Cependant, avec
lvolution actuelle des ides sur la recherche, limiter un ouvrage sur les sucres
la description des meilleures mthodes de construction de liaisons covalentes car-
bone-carbone et carbone-oxygne revient h laisser tomber ia moiti du sujet. I1 se
trouve quun des axes privilgis de la chimie organique contemporaine est Itu-
de dassociations entre molcules qui, tout en tant relativement stables, ne font
pas intervenir de liaisons covalentes. Certaines de ces recherches se dveloppent
de faon totalement autonome par rapport au monde vivant. Or on rencontre pr-
cisment dans la chimie des oligosaccharides (voir le chapitre 9) un nombre
important dassociations de ce type, essentiellement avec des rcepteurs macro-
molculaires prsents dans les cellules vivantes, mais aussi avec des difices
minraux. Certes la complexit des rcepteurs organiques naturels rend lanalyse
des modes de liaison ez conjecturale dans la majorit des cas, mais Iimpor-
tance des phnomnes du monde vivant qui en dpendent justifie aux yeux de
2 Introduction
lauteur dy consacrer la moiti de louvrage, ou presque. Faute de quoi, il aurait
pass sous silence un domaine scientifique en expansion rapide.
Enfin, de tout temps, les chimistes des sucres ont t trs proccups de chimie
physique. Que lon songe la tentative de mise en ordre de pouvoirs rotatoires,
avec les moyens de lpoque, que reprsentent les rgles de Hudson. Si elles sont
presque oublies - nous nen dirons rien - lesprit demeure, et la plupart des chi-
mistes des sucres, bien quessentiellement penchs sur des problmes de synth-
se, jugent ncessaire un examen attentif de la physicochimie de leurs molcules,
avec des moyens modernes, ventuellement les calculs ab initio et MM.. . Le lec-
teur trouvera, ici et l, et plus particulirement aux chapitres 1, 2 et 9, une slec-
tion des rsultats modernes.
Lauteur espre que le panorama gnral dessin dans son livre reflte fidle-
ment lambiance des principaux laboratoires de chimie des sucres et latmosph-
re des congrs et colloques spcialiss dans ce domaine. Nous sommes en pr-
sence dune science qui ne sest pas construite partir dun arsenal technique par-
ticulier, mais dune famille assez homogne. On a propos le terme de glyco-
science. I1sagit dune dmarche scientifique intressante en elle-mme, peut-tre
un modle pour dautres sries, indpendamment de ses prolongements manifes-
tement anthropocentristes. On pourra objecter lauteur quun trait multi-auteur
rpondrait mieux son objectif. Or ce livre nest pas un trait, mais une tentative
pour situer un ensemble de travaux dans une perspective exacte par des exemples
caractristiques. Les rfrences ne constituent pas un palmars de dcouvertes,
mais lindication dune documentation supplmentaire daccs commode, ou
celle dexpriences valeur pdagogique. Nous ajouterons que la rdaction par un
seul auteur permet un traitement homogne. Lossature de louvrage est la chimie
organique, ce qui nous semble justifi puisque, tt ou tard, toutes ces interactions
seront dcrites en termes molculaires. I1peut y avoir des justifications plus pra-
tiques : par exemple, selon une information gnrale 1, une socit amricaine de
biotechnologie particulirement performante a d nanmoins se rapprocher dun
grand groupe industriel en mesure de laider sur le plan de la chimie organique.
Pour ce qui a trait la relation des sucres au monde vivant, nous avons mis
laccent sur des molcules distribution trs large, souvent universelle, avec une
attention particulire aux mcanismes gnraux. Cest la vision de la biochimie,
qui nous a amen exclure des domaines chatoyants, comme celui des antibio-
tiques aminoglycosidiques. Mais nous navons pas dsir faire un manuel de bio-
chimie des sucres et, par exemple, nous ne parlons pas de llaboration, si carac-
tristique, de certaines units oligosaccharidiques des glycoconjugus I*]. Nous
nous sommes intress avant tout aux problmes de lhomme et des animaux
suprieurs. Cette restriction nous a amen h ne pas traiter, sauf exception, la struc-
ture si complexe et les problmes dune grande importance pratique des oligosac-
charides microbiens. Les deux rfrences cites concernent deux articles parmi les
plus rcents de deux coles europennes actives dans ce domaine 13341. Nous ter-
minerons ces considrations gnrales par un avertissement pratique : les dessins
sont le plus souvent schmatiques et ne doivent pas tre utiliss comme une sour-
Introduction 3
ce de donnes quantitatives. Pour celles-ci, le lecteur devra utiliser les nombreux
tableaux de chiffres prsents dans louvrage.
La biosynthse des protines suit le code gntique. Les analogues des pro-
tines dans le domaine des sucres sont les oligosaccharides. La jonction entre les
units monosaccharidiques est catalyse par des enzymes, les glycosyltransf-
rases, videmment codes. Mais, contrairement ce qui se passe avec les acides
amins, on na jusqu prsent aucune indication quil existe un code qui organi-
se les squences des monosaccharides dans les oligosaccharides. Simplement (si
lon peut dire !), les glycosyltransfrases doivent se manifester au bon moment et
au bon endroit. Est-ce que cela entrane un certain flou dans la synthse?
Lopinion diffuse a circul dans les cercles de spcialistes quun certain dsordre
pourrait bien tre avantageux pour un organisme, en temprant lexcs de rigueur
du code gntique. A notre connaissance, cette ide na pas encore t labore.
I1reste que nombre de ces enchanements ont une allure particulirement rbar-
bative, et que le lecteur venant du monde color de la chimie des substances natu-
relles aura limpression dentrer dans une contre aride et dsordonne, mais cest
que le sens de ces structures ne se dvoile que lentement, et cela suffit les rendre
passionnantes.
Lauteur remercie le professeur Andr Lubineau pour sa collaboration la
rdaction du paragraphe 17.6 consacr aux slectines et leurs ligands, et aux
paragraphes 11.2 et 11.6 qui traitent de la relation intime, si vidente tout le
monde, et pourtant encore mystrieuse, entre le sucre et leau. Laide de
MIne Claudine Au&, directeur de recherche au CNRS, pour toutes les questions
de chimie enzymatique prparative a t vivement apprcie. Dune faon gn-
rale, limmersion de lauteur au milieu dun groupe actif lui a grandement facili-
t la collecte et la vrification de linformation. Enfin lauteur remercie Mme Ten
Feizi, du Medical Research Council, Harrow (Angleterre), pour son aide la
rdaction des paragraphes 17.4 17.6 et le docteur Seni-tiroh Hakomori pour son
aide llaboration du chapitre 16.
RFRENCES
[ I 1 P. J . Raugel, La Recherche, 262 (1994) 224-233.
[2] V. N. Shibaev, Adv. Curbohydr: Chem. Biochem., 44 (1986) 277-339.
[3] L. Kenne, B. Lindberg, M. Matibubur Rahman et M. Moyihuzzaman, Curbohydr: Res.,
[4] E I. Auzanneau, M. Mondange, D. Charon et L. Szabo, Curbohydr: Res., 228 (1992)
243 (1993) 131-138.
37-45.
CHAPITRE 1
Configuration des monosaccharides
1.1 LE GLUCOSE
Le glucose est extrmement soluble dans leau : on peut en dissoudre 0,5 kg
dans 250 mL deau chaude. Laddition dacide actique cette solution entrane
une prcipitation lente de cristaux. Cest une des varits tautomres, dsigne en
nomenclature officielle par le nom << a-D-glucopyranose D dont la signification
exacte apparatra dans la suite du chapitre. La configuration de ce solide est
connue avec une grande prcision grce lassociation des mthodes de diffrac-
tion de rayons X et de neutrons, qui donnent les 23 longueurs de liaison, les
42 angles de valence et les 68 angles didres de la molcule solide[]. Dans la
reprsentation schmatique 1.1 de cette configuration, les carbones 2 et 3 de la
chane carbone sont supposs en avant de la molcule, les carbones 1 et 4 sont
dans le plan du papier. Les autres carbones et loxygne cyclique sont en arrire.
On reconnat un cycle oxane (ttrahydropyrane) sur lequel sont greffs trois
fonctions alcool secondaire en orientation quatoriale, une chane latrale portant
une fonction alcool primaire et enfin un hydroxyle hmiactalique port par le
carbone 1. Cet hmiactal est intramolculaire, provenant de laddition de loxy-
gne port par C(5) sur une fonction aldhyde.
A partir dun chantillon quelconque de glucose, on peut prparer un isomre
du compos 1.1 par le protocole suivant : recristallisation dans lacide actique,
dissolution des cristaux dans leau glace (100 mL pour 100 g), filtration et addi-
tion dthanol (0,5 L) la solution filtre, ce qui amne une prcipitation rapide.
Le solide obtenu a la configuration 1.2 ltat solideC2].
La seule diffrence avec la molcule 1.1 est dans lorientation de lhydroxyle
hmiactalique. La molcule 1.2 est tout quatoriale. I1 y a donc une grande sim-
plicit sous-jacente dans la configuration du D-glucose malgr son aspect rbar-
batif pour le dbutant. Cette observation peut tre utile comme point de dpart
pour la mmorisation des structures de sucres. On appelle la molcule 1.2
<< PD-glucopyranose .
Les isomres 1.1 et 1.2 sont en quilibre tautomrique en solution aqueuse,
selon lquation (1.1).
(1.1) a-D-glucopyranose >> << P-D-glucopyranose >>
Le glucose 5
Ainsi le pouvoir rotatoire dune solution aqueuse de lisomre a-D, qui cor-
respond [a]iO +112 immdiatement aprs la dissolution dcrot-il en quelques
heures jusqu la valeur 52,7. Rciproquement le pouvoir rotatoire de lisomre
0-D crot de 18,7, valeur la dissolution jusqu la mme valeur dquilibre. Une
rgle de mlange permet de calculer [a]/[fl =38/62. Le compos tout quatorial
domine, mais nous verrons au paragraphe 2.6 quil faut sabstenir dy voir la
confirmation des rgles de lanalyse de conformation classique. Ce sont ces exp-
riences qui ont permis la premire observation de lquilibre tautomrique (1.1)
qui, pour cette raison, a gard le nom de mutarotation.
Le spectre de RMN du proton dans leau lourde volue de faon parallle. Le
proton H-1 port par C( l), dblind par deux oxygnes gmins, donne un signal
champs faible, spar du groupe des autres protons, facile reprer.
Immdiatement aprs la dissolution, on observe sur le spectre de la-D-glucopy-
ranose un doublet 3J 4Hz, d un couplage quatorial-axial. Immdiatement aprs
la dissolution, on observe sur le spectre du 0-D-glucopyranose dans les mmes
conditions un doublet large 3J 8Hz, d un couplage trans diaxial. On observe
lquilibre la superposition de ces signaux (Fig. 1.1).
En fait, cette solution aqueuse contient dautres tautomres, mais en concen-
tration beaucoup trop faible pour se manifester en RMN de routine. Nous ngli-
gerons provisoirement leur existence. I1 doit tre clair que les tautomres 1.1 et
1.2 sont deux tres chimiques distincts dont la diffrence ne se manifeste pas seu-
lement dans les proprits physiques, mais aussi dans la ractivit chimique et
1
Anomrea
H(l).quatonal
J 4HZ
0,3? H
Anomrep
H(l ) axial
J 8Hz
0,67 H
p.p.m.
I I I I I I I I I
5,2 5, l 5,O 4,9 4,8 4,7 4,6 43 4,4
Figure 1.1 Signal RMN des protons anomriques H-1 des a- et fi-D-glucopyranoses.
6 Configuration des monosaccharides
1.1
CHO
F
)I- -OH
CH,OH
1. 4
Yo
F F CI\IHCOCH,
HO-C-H
I
1. 7
1. 2
YHO
F
F
HO-C-H
HO- C-H
I
W -OH
FF -OH
CH,OH
1. 5
YHO
CH,CONH- C-H
HO-C-H
I
FF -OH
FF -OH
!H20H
1.8
YHO
W C- OH
HO- C-H
1 . 3
Yo
W- C i ? OH
I
HO-C-H
1. 6
F F C-NHCOCH,
HO-C-H
HO- -H
F
F F -OH
CH20FI
1. 9
enzymatique. Cependant on voit que le carbone C(1) se distingue des autres par
sa configuration instable. Cest pourquoi on lui a donn le nom particulier de cur-
hone unomrique. On a traditionnellement reprsent le glucose par le parent
aldhydique 1.3, o il ny a plus que des configurations stables. Muis ce tuutom-
re n est prsent, en toute circonstunce, qu une concentration infime.
Laldhyde 1.3 est dessin avec la convention de Fischer. Les hydroxyles situs
au-dessous du plan moyen de loxane sont droite, lhydroxyle situ au-dessus est
Autres configurations de sucres 7
gauche. I1y a une difficult de passage pour le carbone 5 li la chane latra-
le. Le lecteur devra se souvenir que, dans la convention Fischer, les valences ver-
ticales sloignent et les valences horizontales se rapprochent de lobservateur. I1
vrifiera alors que lon peut appliquer les atomes lourds du D-glycraldhyde 1.4
sur la portion correspondant aux carbones 4, 5 et 6 des oxanes 1.1 et 1.2.
1.2 AUTRES CONFIGURATIONS DE SUCRES
I1 y a quatre carbones asymtriques dans la configuration 1.3, il y a donc
Z4 =16 isomres, qui ont chacun leur nom. Le lecteur trouvera un tableau de ces
sucres au chapitre 4, consacr la nomenclature. On retrouve la majorit de ces
configurations sous forme drive dans les cellules vivantes. Pour nous en tenir
aux constituants gnraux universellement rpandus, nous citerons le D-mannose
1.5, et le D-galactose 1.6, pimres respectivement en 2 et 4 du D-glucose. Nous
rencontrerons aussi frquemment trois sucres o lhydroxyle en C-2 a t rem-
plac par un groupement actamido, dsigns dans la pratique par les noms
N-actylglucosamine 1.7, N-actylmannosamine 1.8, et N-actylgalactosamine
1.9. On observe aussi des molcules partiellement dsoxygnes, comme le fuco-
se 1.10. Tous ces sucres fonction aldhyde latente ont reu le nom gnral dal-
doses. Mais le carbonyle latent peut aussi tre ctonique. On a alors les ctoses,
tel le fructose 1.11. Tous les sucres comportant une chane de six carbones non
ramifie ont reu le nom gnral dhexoses.
11existe aussi des sucres cinq carbones, les pentoses, dont deux reprsentants,
le D-ribose 1.12, et le dsoxyribose (en nomenclature correcte, 2-doxy-D-ry-
thro-pentose) 1.13, dpassent infiniment les autres en importance. Un sucre neuf
carbones, lacide sialique 1.14, rassemble sur la mme chane un carboxyle, un
carbonyle ctonique, cinq hydroxyles alcooliques et une fonction amide. On
numrote les chanes de sucres dans le sens qui attribue le chiffre le plus bas au
carbone du carbonyle. Toutes ces molcules font partie du groupe des monosac-
chu rides.
A lexception du fucose, tous ces sucres prsentent sur le carbone pnultime
la mme configuration que le carbone central du D-glycraldhyde. Ceci sex-
CH,OH
CO
FHO
HO-C-H
W C- OH HO-C-H
*-OH
F
F
W -OH
CH,OH
1.10 1.11
CHO
e C- OH
W -OH
f k -OH
F
F
CH,OH
1 . 1 2
YH
CHO
CO
I
I
W C - H
W-OH H-C-H
1.13 1.14 1.15
plique aisment, car les cellules vivantes les fabriquent tous partir du D-glyc-
raldhyde, et le trajet biosynthtique ne comporte aucune tape une rupture entre
le carbone central du D-glycraldhyde et ses quatre substituants. La figure 1.2
schmatise l'arbre gnalogique de ces monosaccharides. Le D-fructose rsulte de
la condensation aldolique de la dihydroxyactone (partenaire nuclophile) sur le
D-glycraldhyde. I1conduit soit au D-glucose soit au D-mannose par des modi-
fications sur C(1) et C(2). Le D-glucose est pimris sur C(4) pour donner le
D-galactose. Le mme D-glucose perd C( 1) et subit quelques transformations sur
C(2) et C(3) pour donner le D-ribose (il existe une autre voie biosynthtique, le
Acide sialique
N -Actylmannosamine D-Glycraldhyde D-Ribose
N -Actylglucosamine - D-Fructose - D-Glucose
N -Actylgalactosamine D-Mannose D-Galactose
Figure 1.2 Filiation des principaux sucres dela srie D.
Autres configurations de sucres 9
cycle pentose-heptose, plus complique, mais qui nimplique pas le carbone
pnultime). Le dsoxyribose est fabriqu par dsoxygnation du D-ribose sur
C(2). Lamination du D-fructose, suivie dactylation donne la N-actylgluco-
samine, pimrise en N-actylgalactosamine et N-actylmannosamine. La
condensation aldolique de 1 acide pyruvique sur la N-actylmannosamine donne
lacide sialique.
Seul parmi les sucres 1.5 1.14, le fucose prsente la configuration du L-gly-
craldhyde sur son carbone pnultime. Le prcurseur biologique est le D-man-
nose. I1se forme un driv de structure 1.15 intermdiaire. Celui-ci subit des pi-
mrisations en 3 et 5, conformes lintuition du chimiste organicien, puisque ces
carbones sont contigus un carbonyle, et la rduction en alcool du carbonyle. I1
est peut-tre significatif quon observe aussi la configuration du L-glycraldhy-
de sur le carbone pnultime dautres sucres naturels dsoxygns en C(6). Pour
viter toute erreur dinterprtation, on doit souligner que les substrats rels des
enzymes dans ces voies biosynthtiques ne sont pas les sucres libres, mais des
phosphates, ou des phosphates complexes. Toutefois, ceci ninfirme en rien nos
dductions.
Quittons la biochimie pour la gomtrie. On a pris lhabitude de classer le
D-glucose et ses quinze isomres de configuration stable en deux groupes de huit :
la srie D, o C(5) prsente la configuration du D-glycraldhyde et la srie L, o
C(5) prsente la configuration du L-glycraldhyde. On fait prcder le nom des
sucres de la srie D du prfixe D : D-glucose, D-mannose, etc. Les nantiomres
de ces hexoses, qui appartiennent la srie L sont appels L-glucose, L-manno-
se, etc. Enfin, lorsque dans un texte, ou un nom de driv de sucre en nomencla-
ture officielle (voir le chapitre 4) on veut dsigner la configuration, par opposition
la molcule, on emploie les symboles en italiques D-manno, D-gluco, D-galacto,
L-manno, etc. drivs des noms courants des sucres. Ces conventions stendent
sans difficult aux pentoses. I1y a huit pentoses, deux deux nantiomres, rpar-
tis dans deux sries, D et L, selon que le carbone pnultime a la configuration du
D-glycraldhyde ou la configuration oppose. La configuration du pentose
D-ribose se dsigne par D-ribo.
On remarquera que les mots << srie D >> et G srie L >> ne recouvrent pas la
mme ralit biologique suivant quil sagit de sucres ou dacides amins. Les
acides amins des protines, une vingtaine en tout, appartiennent exclusivement
<< la srie L des acides amins . Les squences des oligosaccharides, architec-
tures parallles aux polypeptides dans les tissus (mais non directement codes),
peuvent tre bties aussi bien de sucres D que de sucres L, quoique les premiers
prdominent en gnral. On peut suggrer une explication : le carbone des acides
amins dont la configuration dtermine la srie est directement li aux deux fonc-
tions, amine et carboxyle, directement impliques dans la liaison peptidique. En
revanche, le carbone pnultime des sucres, dont la configuration fixe la srie, est
plutt passif dans la cration de la liaison entre monosaccharides, dite glycosi-
dique.
1.3 TAUTOMRIE
1.3.1 Gnralits
Lexamen de la formule de laldhyde 1.3 laisse prvoir a priori lexistence de
six tautomres. Nous avons dj rencontr les pyranoses 1.1 et 1.2, qui rsultent
de lattaque par loxygne 0-5 de lune ou de lautre des faces de laldhyde pro-
chiral 1.3. Mais nous navons pas de raison dexclure la possibilit dattaque par
loxygne 0-4, avec formation de deux tautomres comportant un cycle cinq
lments, 1.16 et 1.17. La stabilit dun cycle cinq lments nest pas trs diff-
rente de celle dun cycle six lments. A ce stade, nous allons terminer lexpli-
cation des termes introduits dogmatiquement au dbut du chapitre. Les sucres
cycle oxane (ttrahydropyrane) sappellent des pyranoses, ceux cycle oxolane
(ttrahydrofurane) sappellent des furanoses. Le symbole a est dfini par rfren-
ce au carbone pnultime. Une explication simple de cette convention repose sur
la considration de lhydrate du carbonyle, tel celui 1.18 correspondant au
D-glucose. Sur le papier, on le transforme en furanose ou pyranose en remplaant
lun des hydroxyles ports par C( 1) par loxygne dune fonction alcool porte par
C(4) ou C(5). Si lhydroxyle qui reste est formellement cis par rapport loxygne
du carbone pnultime, lanomre est dit a. On voit que 1.16 et 1.17 sont respec-
tivement l a- et le fi-D-furanose. Le cas des sucres plus de six carbones est
trait au paragraphe 4.2.6.
I1y a aussi lieu denvisager la prsence de laldhyde libre dans le milieu et de
son hydrate 1.18. car on sait que les hydrates des aldhydes a-hydroxyls sont
relativement stables.
En fait, tous ces tautomres existent dans les solutions aqueuses, mais le plus
souvent, certains dentre eux sont prsents des concentrations trop faibles pour
tre visibles sans techniques sophistiques. Par exemple, dans le cas du D-gluco-
se, les tautomres autres que les a- et P-D-pyranoses ne sont prsents quen quan-
tit insignifiante. Le problme de la composition tautomrique lquilibre des
solutions de sucres, gnralement aqueuses, a suscit beaucoup dintrtL3].
CH,OH
OH
1.16
H
I
I
CH,OH HO - C- OH
WC-OH
*&-OH
HO-C-H
WC-OH
*&-OH
HO-C-H
I
OH W -OH
kH.OH
1.17 1.18
Tautornrie 11
Contrairement la tradition, qui donne aux mesures physiques la prsance sur
lisolement, nous allons traiter dabord des mthodes sparatives, parce quelles
font appel des techniques trs fondamentales de la chimie des sucres.
Reconnaissons cependant quelles ne sont pas les plus puissantes dans le prsent
contexte. Bien sr, il ne faut pas que lisolement dun tautomre modifie appr-
ciablement lquilibre. On utilisera donc des solvants o la mutarotation est lente,
des ractions basse temprature et des ractions de drivation aussi rapides que
possible.
1.3.2 Chromatographie en phase vapeur
Les sucres cristalliss sont extrmement stabiliss dans les phases solides et
liquides par un rseau de liaisons hydrogne, puisque chaque hydroxyle peut tre
ventuellement donneur ou accepteur. La destruction totale du rseau nest pas
possible des tempratures infrieures celle o samorce la dcomposition de la
molcule. Les sucres sont indistillables. La substitution de tous les hydrognes
acides par le groupement Si(CH,), supprime toute possibilit de liaison hydrog-
ne. Laccumulation de groupements mthyle la priphrie - quinze dans le cas
du glucose - donne la molcule la forme approximative dune boule limite par
45 atomes dhydrogne neutres, de cohsion minimale. Bien que considrable-
ment alourdie, la molcule devient volatile. Ainsi le driv de la-D-glucopyra-
nose o tous les OH sont remplacs par OSi(CH,), bout 107- 1 10C sous O, 1 mm
de Hg. On peut alors sparer rapidement les drivs de sucres persilyls par chro-
matographie gazeuse. Dans un procd habituel de silylation, on dissout le sucre
(10 mg) dans la pyridine (1 mL) et on ajoute de lhexamthyldisilazane,
Me,SiNHSiMe3 (0,2 mL) et du chlorotrimthylsilane (O. 1 mL). Chaque hydroxy-
le est silyl selon lquation (1.2). La raction est normalement complte en
S mn temprature ambiante
(1.2) 3 ROH +ClSiMe, +Me,SiNHSiMe, + 3 ROSiMe, +NH, C1
Pour suivre la mutarotation, le prlvement (5 pL) est rapidement dissous dans
la N, N-dimthylformamide et la solution refroidie dans lazote liquide. On ajou-
te le mlange silylant, on laisse rchauffer et on injecte dans la colonne. Celle-ci,
utilise 1S0-2OO0C, contient un remplissage dun liquide point dbullition
lev, adsorb sur une phase solide pulvrulente. Avec cette mthode, on peut
observer autant de pics sur le chromatogramme quil y a de tautomres en quan-
tit apprciable en solution. I1y a un problme didentification des pics, qui nces-
site lisolement des fractions en quantit apprciable.
1.3.3 Chromatographie liquide sous haute pression (HPLC)
Lexamen chromatographique direct des sucres libres, ou presque libres, en
solution aqueuse, est une technique dont lutilisation est en croissance rapide en
chimie des 0ligosaccharides~~1. Ladsorbant est sous forme de particules mono-
Figure 1.3 Sparation danomres par HPLC
4C, luant : eau-actonitrile (20:80 v/v).
Ordonnes : absorption 280 nm. Pour les autres
D-glucose
P-P
fi D-galactose
I I I I
conditions, voir le texte. Adapt daprs 50 40 30 20 10 0
S. Honda, S. Suzuki et K. Kakehi, Minutes
J. ChrornatogE, 291 (1984) 317-325.
disperses, dont la dimension varie de 3 15 p, dans des colonnes cylindriques
analytiques de 10 15 cm. On utilise aussi des colonnes prparatives de dimen-
sions 2,5 x 30 cm. Lcoulement nest possible que sous des pressions variant de
une 300 atmosphres, et la dure de lopration est de lordre de lheure. On
dose les sucres dans leffluant par mesure des variations de conductance, dindi-
ce de rfraction ou dabsorption ultra-violette. Ceci impose une extrme stabilit
de toutes les conditions opratoires, si bien que la colonne est entoure dlments
de rgulation particulirement dispendieux.
Entre autres phases stationnaires adaptes ces sparations, on a dcrit lem-
ploi de polystyrne-divinylbenzne sulfon en sphres de diamtre strictement
contrl (6 p), qui remplissent une colonne de dimensions 6 x 150 mm. Cette rsi-
ne changeur de cations est employe sous la forme Ca++. Le dbit est 0,s mL/mn.
Dans ces e~priences[~], les auteurs ont dos les sucres dans leffluant par conver-
sion en un driv absorbant 280 nm, mais cela ne serait sans doute pas nces-
saire avec un matriel plus moderne. La figure 1.3 donne les enregistrements
obtenus avec le D-glucose, le D-galactose et le D-mann~se[~].
Les furanoses a et fi squilibrent trop rapidement pour quon puisse les spa-
rer 0-4C, mais on a pu raliser cette sparation entre -25 et -4S0, avec des sol-
vants spciaux, sur le D-galactose et le fucose.
1.3.4 Dichrosme circulaire
On a fait appel aux mesures de dichrosme circulaire pour << voir )) les tauto-
mres carbonyls, particulirement vanescents. Les composs carbonyls pr-
sentent une absorption vers 280 nm due la transition nx* de la double liaison
C =O. Le dpart de cette bande est visible sur les solutions aqueuses de sucres,
mais en raison de sa faible intensit, elle est largement masque par un paule-
ment dune bande beaucoup plus intense. Pour cette raison, on ne peut pas mesu-
rer directement une extinction. Mais ce qui est caractristique, cest lexistence
Tautomrie 13
Sucre I 03 A& 2 (nm) Configuration
du carbone alpha
D-ribose - 0,469 285
D-galactose - 0,170 287
D-glucose - 0,0222 285
D-mannose +0,0535 292
5,6-di--mthyl-
D-glucose (1.19) - 9,57 289
D-fructose +6,72 273
1-deoxy-D-fructose (1.20) +138 274
R
R
R
S
R
S
S
Tableau 1.1 Dichrosme circulaire de sucres en solution aqueuse 20C. Daprs
L.D. Hayward et P.J. Angyal, Carbohydl: Res., 53 (1977) 13-20 (publi avec laimable
autorisation dElsevier Science).
dun dichrosme circulaire dans cette rgion, cest--dire dune diffrence dex-
tinction eG - eP =A& entre les lumires polarises circulairement droite et
gauche. Ceci vient de la prsence dun carbone asymtrique contigu au carbony-
le. Nous donnons une slection de rsultats dans le tableau l . l
Le tableau 1.1 montre dabord que de est positif quand la configuration du
centre adjacent chiral est S, et ngatif quand cette configuration est R. Cest une
rgle gnrale, vrifie sur 33 exemples. On remarquera ensuite la diffrence
considrable dordre de grandeur entre les sucres aldhydiques non substitus et
les sucres ctoniques, ce qui suggre que la concentration du tautomre carbony-
l est beaucoup plus leve avec ces derniers. On observe aussi une valeur leve
avec le 5,6-di-O-mthyl-D-glucose 1.19. Ce driv ne peut pas exister sous forme
pyranose, il est essentiellement en solution sous la forme furanose, mais laug-
mentation trs considrable de de montre que la diffrence denthalpie libre entre
aldhyde et furanose est plus faible quentre aldhyde et pyranose. Le dsoxy
sucre 1.20 donne pour le moment le record absolu de ces mesures. Probablement,
la stabilit naturelle plus grande de la fonction ctone est renforce par la sup-
pression de leffet inducteur de la fonction alcool. On ne peut pas utiliser ces
mesures pour doser exactement les tautomres carbonyles parce quon na pas
accs la valeur de A& pour les composs purs. En prenant lunit comme valeur
approximative plausible, on obtient par le calcul des concentrations du mme
ordre que par les autres mthodes.
1.3.5 Rsonance magntique nuclaire
On peut tendre tous les aldoses ce que nous avons dit sur le glucose. Les
signaux des protons H-1 des diffrents tautomres en solution dans loxyde de
deutrium apparaissent, champs faibles, bien spars des autres. La technique de
14
2 3
Configuration des monosaccharides
6
4 5
Figure 1.4 Spectre de RMN de I3C du [ I - 3C]-D-glucose dans leau 37C. En abscis-
se : dplacements en ppm partir de Me,Si. En ordonne : intensits qualitatives.
Attribution des signaux : 1. aldhyde ; 2. P-D-gluco-furanose ; 3. a-D-glucofuranose ; 4.
P-D-glucopyranose ; 5. a-D-glucopyranose ; 6. gem-diol. Daprs S. R. Maple et
A. Allerhand, J. Am. Chem. Soc., 109 (1987) 3168-3169 (publi avec laimable autorisa-
tion de I American Chemical Society).
RMN du proton, telle quelle est utilise en routine dans les laboratoires de syn-
thse ne rvle que les signaux de la- et du D- pyranose dans les solutions de
D-glucose et D-mannose, tandis que dans les solutions de D-galactose, deux
autres pics, trs peu intenses, rvlent la prsence des deux furanoses. On peut
voir le signal du carbonyle sur le spectre de RMN de I3C dune solution 4M de
Pour aller au-del on utilise la RMN de 13C avec les sucres marqus par un pro-
cd synthtique sur C( l), ce qui multiplie par 100 lintensit du signal. Avec des
procds daccumulation particuliers, et prolongs, on peut voir les six tautomres
du D-glucose 37C. (Fig. 1.4). La disproportion des concentrations ne permet
pas de les reprsenter de faon quantitativement valable, et le lecteur devra se rap-
porter au tableau 1.2.
Lutilisation de sucres marqus sur C( I ) prsente un autre avantage galement
trs important : on peut observer les couplages avec C(1) des 13C prsents en
faible abondance aux autres positions du sucre, ce qui dans le cas gnral nest
visible que pour les couplages J. On a donc ici un outil pour faciliter linterpr-
tation du spe~tre[~*~I . Une simplification supplmentaire est ralise avec la tech-
nique INADEQUATE, qui nenregistre que les signaux dus aux carbones coupls
C( 1). On peut adapter les paramtres de faon ne retenir que les signaux des
carbones spars de C( I ) par soit une, soit deux, soit trois liaisons, etc. Cette tech-
nique efface les signaux des carbones non coupls C( I ).
1.3.6 Rsultats et discussion
Le tableau 1.2 donne la composition tautomrique de pentoses et dhexoses en
solution aqueuse ainsi que du 1-doxy-fructose, 1.20, et fructofuranose 1,6-
Cintique de la mutarotation 15
Sucre t Pyranose Furanose Ald- Ald-
(OC) P a fl hyde hydro1
D-Glucose
D-Mannose
D-Galactose
D-Ribose
2-Doxy -D-rythro-pentose
Fructose
Fructofuranose-
1,6-diphosphate (1.21)
1 -Doxy-fructose (1.20)
27
21
31
31
30
31
6
37
38,8 60,9 0,14 0,15 0,0024* 0,0045
68,O 32,O
30 64 2,s 3,s 0,02
213 58,5 6,s 13,s 0,05
40 35 13 12
2,s 65 6,s 25 0,8
13 86 0,9
4 75 6 9 6**
Tableau 1.2 Composition tautomrique de sucres dans D,O. Daprs S.J . Angyal, Adv.
Curbohydr: Chern. Biochem., 42 (1984) 15-68 ; 49 (1991) 19-35. (publi avec laimable
autorisation dAcademic Press). (* : 37C ; ** : tautomre ctonique.)
diphosphate, 1.21. On observera la prdominance des pyranoses. Les galactofura-
noses 1.22 ont une stabilit relative plus grande que celle des glucofuranoses 1.23.
Ceci est peut-tre d la disposition trans de lhydroxyle en C(3) et de la chane
latrale dans les premiers. On observe aussi quil y a dix fois plus de P que d a-
pyranose dans les solutions de fructose. Nous allons ici anticiper sur le chapitre 2
consacr aux problmes de conformation. On peut dessiner le P-D-fructopyrano-
se sous une conformation 1.24 o lon ne retrouve quune interaction dfavorable,
entre H-3 et OH-5. Lchange des substituants sur C(2) donne une conformation
minemment dfavorable, qui bascule pour aboutir 1.25, le moindre mal, mais
o subsistent encore de fortes interactions 1,3-diaxiales.
1.4 CINTIQUE DE LA MUTAROTATION
Dans le cas du D-glucose, il ny a pratiquement que des pyranoses en solution.
On peut formuler leur interconversion comme une raction rversible du premier
ordre (1.3), Ca et Cp tant les concentrations (activits) de chaque anomre. La
vitesse de disparition est alors donne par la relation (1.4), qui sintgre de la
faon habituelle. I1est commode de convertir les variations de concentration en
variations de pouvoir rotatoire une longueur donde dtermine, ce qui donne la
relation (1 3, o ro et r _ reprsentent les rotations mesures pour t =O et t =m.
(1.3) a-D-glucopyranose -- D-D-glucopyranose
kl
k2
CH,
I
I
CO
FHO
F
I+-C-OH
HO- C-H
I
I
HO- C-H
F -OH
W -OH
H- -OH
W -OCH,
CH20CH, F fH20H
1.19 1.20 1.21
OH
&H,OH
1.22 1.23
PH
bH OH
1. 25
(1.5)
1.24
1.26 R=OH, R' =H
1. 27 R=H, R =OH
Cette relation est vrifie dans un grand nombre de cas@l La vitesse est multi-
plie par un facteur voisin de 2,5 pour une lvation de temprature de 10C, ce
qui correspond une nergie d'activation voisine de 17 kcal mol-'. Parfois,
comme dans le cas du D-galactose, on observe un cart apprciable, et mme,
avec le D-ribose, une variation qui n'est plus du tout monotone. Ces anomalies
Cintique de la mutarotation 17
sexpliquent aisment par la prsence de plus de deux tautomres en interconver-
sion dans la solution. La mutarotation est catalyse par les acides et les bases, et
la plus lente entre les pH 3,O et 7,O. On la reprsente par une fonction de [H+]
et [OH-], du type A +B [H+] +C [OH-], ce qui donne par exemple lquation (1.6)
pour le glucose 20C.
(1.6) k, +k2 =0,0060 +0,18 [H+] +16,000 [OH-]
Lobservation de la mutarotation ne permet de connatre que la somme k, +k,.
Nimporte comment, k, et k2 sont des constantes composites. On a de trs fortes
raisons de penser que lquilibre anomrique passe par lintermdiaire carbonyl
(Fig. 1.5). Entre autres indications, loxygne port par le carbone anomrique ne
schange pas avec leau pendant lopration.
Figure 1.5 Equilibre tautornrique en solution
Chacun des quilibres partiels de la figure 1.5, reprsent par une quation du
type (1.7) fait intervenir deux constantes de vitesse lmentaires, k, et kf corres-
pondant respectivement louverture et la fermeture du cycle. Leur rapport
K =kf/ko est la constante dquilibre, mesurable sur les spectres de RMN si lon
peut observer avec assez de prcision le signal du carbonyle.
(1.7) tautomre cyclique tautomre carbonyl
k,
kf
On a pu mesurer k, et kf dans un certain nombre de cad6]. Lorsque les
constantes de vitesse sont de lordre de 10-200 s-l, la mthode de mesure de
llargissement des raies sur le spectre de RMN, selon Gutowsky et Holm, est
applicable. Pour les valeurs plus faibles, de 0,05 10 s-l, on a fait appel une
autre mthode, applicable aussi bien en RMN du proton quen RMN de I3C, le
transfert de saturation entre deux sites. On irradie saturation la frquence du
tautomre acyclique. Le bouclage de lhmiactal change son environnement, il
devient le carbone hmiactalique, mais ne contribue pas lintensit du signal de
ce carbone. Exprimentalement, on observe quen prolongeant lirradiation la
frquence de rsonance du carbonyle, on provoque une baisse de lintensit de la
rsonance hmiactalique. Celle-ci se stabilise un niveau final qui dpend de la
relaxation au site hmiactalique et de la vitesse douverture du cycle. Une for-
mule permet den extraire la vitesse douverture, et la mthode est utilisable dans
1s Configuration des monosaccharides
la zone 0,05 - 10 s-. A titre dexemple, on a reproduit sur la figure 1.6 les varia-
tions avec le pH de k, pour les deux anomres 1.26 et 1.27 dun mtabolite trs
important, le D-ribose 5-phosphate, obtenu avec la molcule marque D-[ 1-13C]
ribose 5-phosphate. Le lecteur observera lordre de grandeur de k,. On peut
dailleurs observer des valeurs beaucoup plus leves avec dautres sucres, mme
pH 7,5. Quant la constante k,, elle est videmment beaucoup plus leve,
puisque K est en gnral trs suprieur 1.
2
Figure 1.6 Variation en fonction du pH de la constante
douverture des furanoses 1.26 (a) et 1.27 (p), en solution
0.3 M dans 2H,0 15 5% 24C. Extrait de R. Barker et
A. S. Serianni, Acc. Chern. Res., 19 (1986) 307-313
(publi avec laimable autorisation de ]American
Chemical Society ; O 1986 American Chemical Society).
1
1.5 CONSIDRATIONS GNRALES SUR CES MESURES
Le lecteur peut tre tent de penser que les raffinements exprimentaux dcrits
dans les paragraphes prcdents, qui utilisent des techniques difficiles, relvent de
proccupations essentiellement acadmiques. En fait, dans le domaine de la chi-
mie organique, nombre de ractions des sucres sexpliquent le plus facilement en
admettant que le tautomre carbonyl est en quilibre rapide avec les cycles domi-
nants. On observe des ractions typiques de carbonyle. De plus la mesure, mme
approximative, de la concentration en aldhyde ou ctone, permet, par application
de la relation de Gibbs, dapprcier lordre de grandeur de son excs denthalpie
libre par rapport aux formes cycliques, soit environ 6 kcal mol- pour le glucose.
Du point de vue de lconomie des cellules vivantes, la configuration anom-
rique des sucres libres nest probablement pas indiffrente, puisque la Nature a
prvu une enzyme, la mutarotase (Aldose 1-pimrase), trs rpandue dans les
tissus animaux et les bactries, qui catalyse la mutarotation. Lenzyme de
Escherichia coli a un maximum dactivit au voisinage de la neutralit. Lnergie
dactivation AG#= 11,9 kcal mol- est fortement abaisse, comme dhabitude, par
rapport celle de la raction catalyse non enzymatiquement, voisine de
17 kcal mol-. Elle admet comme substrat le D-glucose, le D-galactose et le
D-fucose, mais non le D-manno~e[~].
Rfrences 19
+
Le tableau 1.2 montre que la forme carbonyle, ici ctonique, est beaucoup plus
importante avec le D-fructose et son diphosphate 1.21. Lun comme lautre, en
forme acylique, prsentent une fonction mixte caractristique, la fonction carbo-
nyle 0-hydroxyl (aldol ou ctol). Une des proprits de cette fonction est sa rup-
ture, selon une raction rversible en prsence de catalyseurs purement chi-
miques. La raction du diphosphate 1.21 scrit selon lquation (1.8). Elle est
catalyse par lenzyme aldolase, et cest une voie majeure de cration de liaisons
carbone-carbone dans les cellules.
RFRENCES
[ 11 G. M. Brown et H. A. Levy, Acta Crysrullogr:, B35 (1979) 656-659.
[2] S. S. C. Chu et G. A. Jeffrey, Acta Crysrullogr:, B24 (1968) 830-838.
[3] S. J . Angyal, Adv. Curbohydr: Chern Biochern., 42 (1984) 15-68 ; 49 (1991) 19-35.
[4] K. B. Hicks, Adv. Curbohydr: Chern. Biochem., 46 (1988) 17-72.
[5] S. Honda, S. Suzuki et K. Kakehi, J. Chrornutogr, 291 (1984) 317-325.
161R. Barker et A. S. Serianni, Acc. Chern. Res. , 19 (1986) 307-313.
[7] M. J . King-Morris et A. S. Serianni, J. Am. Chern. Soc., 109 (1987) 3501-3508.
[8] H. S. Isbell et W. Pigman,Adv. Curbohydr. Chern., 23 (1968) 11-57 ; 24 (1969) 13-65.
[9] E Hucho et K. Wallenfels, Eux J. Biochern., 23 (1971) 489-496.
CHAPITRE 2
Conformation des monosaccharides
et de leurs drivs
2.1 SYMBOLES DE CONFORMATION : PYRANOSES
Les conformations remarquables du cycle oxane (ttrahydropyranne) des pyra-
noses sont les mmes que celles du cyclohexane. On numrote les carbones par-
tir du carbone hmiactalique, dit anornrique. Cette convention nest pas confor-
me la rgle de numrotation des htrocycles, qui attribue le numro 1
lhtroatome (ici, loxygne). Reprsentons loxane avec les carbones 1, 3 et 5
dans un plan horizontal, les carbones 1 et 4 dans le plan du papier cens vertical,
et loxygne cyclique en arrire du plan du papier. Lobservateur situ au-dessus
du cycle voit les numros dfiler dans le sens des aiguilles dune montre. Dans un
pyranose, tous les carbones, ou presque tous, sont substitus, mais pour la com-
modit de lexpos, il suffira dintroduire un substituant R un site arbitraire.
Lquation (2.1) reprsente alors lextension la chimie des pyranoses de lqui-
libre classique de conformation du cyclohexane.
Le symbole 4C1 de la conformation 2.1 indique que dans la reprsentation
conventionnelle, les carbones 1 et 4 sont respectivement au-dessous et au-dessus
du plan moyen de la molcule. Le symbole de la conformation 2.2 est alors lC4.
De mme, lnantiomre 2.3 du pyranose 2.1 donne lieu un quilibre conforma-
tionnel ( 2. 2) , symtrique du prcdent, auquel correspondent, selon notre conven-
tion, les symboles IC4 et 4C1.
On voit quon aboutit un rsultat choquant : la convention attribue le mme
symbole 4C1 aux conformations 2.1 et 2.4, ni superposables ni symtriques. Les
symboles ;Cj nont un sens que si on connat la srie D ou L du pyranose, quil
faut introduire pour lever lambigut. Si le sucre schmatique 2.1 appartient la
srie D, les symboles corrects des conformations 2.1,2.2,2.3 et 2.4 sont alors res-
pectivement D4C, , D-C4, L-C4 et L 4C,. Remarquez que lnantiomre dune
molcule en conformation D-4C1 est une molcule en conformation
L-C4, alors que ces deux molcules se comportent identiquement dans tout envi-
ronnement achiral.
Les pyranoses contenant une double liaison cyclique ou un cycle oxirane
fondu, qui sont dimportants intermdiaires de synthse, existent en conformation
demi-chaise. On donnera leur description symbolique au moment de les traiter.
Conformations ltat solide 21
(2.1)
R * , 1 = 4 @
R
3
2. 1 CC,)
2. 2 (IC4)
R
2 . 3 (IC4) 2. 4 (Cl)
Enfin, il existe des conformations intermdiaires entre chaise et conformation
croise. On donnera leur description symbolique propos de lexemple le plus
important, celui de lacide L- iduronique (voir le paragraphe 2.8).
2.2 CONFORMATIONS LTAT SOLIDE
Llucidation de la structure dun sucre cristallin donne videmment la fois
sa configuration absolue et sa conformation. Les progrs techniques considrables
raliss dans la construction des diffractomtres rendent la dtermination de struc-
ture par les rayons X de plus en plus rapide et de plus en plus facilement acces-
sible au non-spcialiste. Plus rarement, on a associ au spectre de rayons X le
spectre de diffraction de neutrons (spectres X, N) qui donnent les grandeurs go-
mtriques avec plus de prcision, permettent de localiser les hydrognes et, en
principe, de connatre la rpartition de la densit lectronique dans les couches de
valence. Les mthodes par diffraction sont les plus prcises des techniques
actuelles : elles donnent les longueurs, les angles didres et les angles de valence.
Toutefois, elles observent des molcules maintenues rigidement dans le rseau
cristallin. On connat un grand nombre de structures de sucres ltat solide, qui
sont dsormais recenses rgulirement dans la collection priodique Advances in
Carbohydrate Chemistry and Biochemistry. Le lecteur y trouvera un examen cri-
tique des rsultats du point de vue dun cristallographe[].
Toutefois, la prparation dun cristal adquat peut savrer une affaire plus dif-
ficile que la spectroscopie elle-mme. Bien sr, les sucres sont typiquement une
famille << hautement cristalline . Mais, pour ses purifications, le chimiste contem-
porain compte plus sur les mthodes chromatographiques, plus systmatiques et
plus puissantes, que sur la recherche alatoire du solvant idal de cristallisation.
11y a aussi un problme plus fondamental. La conformation dans le cristal peut
ntre pas la mme quen solution. Par exemple, considrons lquilibre confor-
mationnel ( 2. 3) dun driv fluor et actyl du b-D-xylopyranose :
22 Conformation de monosaccharides et de leurs drivs
Ce driv fluorure de 2,3,4-ttra--acetyl-~D-xylopyranosyle adopte la
conformation ttraquatoriale 2.5 dans le cristal, mais en solution, il donne lieu
un quilibre conformationnel o la conformation ttraaxiale 2.6 est trs fortement
prdominante (80-90 %) c 2 ] . La conformation ttraquatoriale 2.5 a donc un excs
dnergie sur 2.6, que lon peut calculer, au moyen de la relation de Gibbs, comme
au moins gal 0,8 kcal mol-. Ce lger excs est donc compens lors de lla-
boration du cristal, qui slectionne la conformation ttraquatoriale en solution et
dplace lquilibre totalement vers la gauche. Peut-tre la plus grande planit de
la conformation 2.5 favorise-t-elle un empilement compact.
Ceci dit, lorsque la conformation en solution dune molcule apparat unique
en solution, avec nos mthodes actuelles dobservation, dans la vaste majorit des
cas, cest celle-ci que lon retrouve dans le cristal.
(2.3) A c - F Ac0 e HF
Ac Ac
OAc
2 . 5 2. 6
2.3 CONFORMATION EN SOLUTION : RSONANCE
MAGNETIQUE NUCLEAIRE DU PROTON
On a dj mentionn au chapitre premier lutilisation de la rsonance magn-
tique nuclaire ltude des quilibres anomriques, par analyse de la partie du
spectre relative aux protons anomriques. En gnral, lanalyse du spectre
250 MHz dun monosaccharide ne prsente aucune difficult. Le couplage vicinal
entre protons axiaux est de lordre de 8- I l Hz, le couplage entre protons gauches
de lordre de 1-3 Hz. Le couplage quatorial-axial est plus lev que le couplage
quatorial-quatorial, souvent nul. Lorsque la configuration dun driv pyrano-
sique est connue, on peut en gnral trouver un couple de protons vicinaux trans.
Si on peut mesurer leur couplage sur le spectre, la conformation est dtermine
sans ambigut si ce couplage est proche dune des valeurs extrmes donnes ci-
dessus. I1 est futile de calculer les angles didres avec une grande prcision par les
relations de Karplus, et de tels renseignements ne sont pas ncessaires pour pr-
dire des proprits de ractivit, par exemple.
Quelques exemples montreront les particularits visibles sur des spectres de
monosaccharides reproduits sur les figures 2.1, 2.2 et 2.3. Le mthyl 0-D-galac-
topyranoside 2.7 est reprsentatif du rsidu galactose intrieur des chanes de gly-
colipides. Le mthyl a-L-fucopyranoside 2.8, en conformation L- C4 est repr-
sentatif dune branche de lpitope (voir le chapitre 16) des antignes des groupes
sanguins principaux. Lacide sialique 2.9 en conformation D-C, joue un rle
Conformation en solution : rsonance magntique nuclaire du proton
23
h
d
I I I I I I I
I I I I I I I
I
I
4,8 4,6 434 492 4,o 398 3,6 3,4
Figure 2.1 Spectre de RMN du proton 250 MHz du mthyl fi-D-galactopyranoside dans
D,O.
2 . 1
OCH,
4
H
H 2
2. 8
2. 9
5:O 4:8 4:6 i,4 4:2 4:O ' 318 ' 3:6 ' 3:4 ' 3:2 ' 3:o ' 218 ' 2:6 ' 2:4 ' 2'2 ' 210 ' 118 ' 1)6 ' 1:4 ' 112 ' 1:o ' 0:8
Figure 2.2 Spectre de RMN du proton 250 MHz du mthyl a-L-fucopyranoside dans D,O.
I ~ l ~ , ~ l ~ l ' , . l . l ~ , ~ , ~ , . , . , . , I
0.2 4.0 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2,4 2.2 2.0 1.8 1.6
PPM
Figure 2.3 Spectre de RMN du proton 250 MHz de l'acide N-actylneuraminique.
Conformation en solution : rsonance magntique nuclaire du proton 25
Protons 2.7 * 2.8 ** 2.9 *
H- 1
H-2
H-3ax
H-3eq
H-4
H-5
H-6
H-7
H-8
H-9
H-9
N-actyl
O-mthyl
3,90
( 1)
vers 3,75
(4,9) (7,4)***
3,75
(-12) ***
335
4,60
(1)
3,71
3,71
3.65
3,38
Tableau 2.1 Donnes de RMN pour les sucres 2.7, 2.8, 2.9. Au-dessous de 6 (en p.p.m
partir de Me$), on donne les couplage2J, J,,
(* Solvant D20, pic HOD 4,80 p.p.m; ** solvant CD,OD, pic HOD 4,85 p.p.m ;
*** valeurs calcules daprs D. Welti, J. Chern. Res. (M), (1977) 3566-3587.)
+,, dans cet ordre, entre parenthses.
important dans les phnomnes de reconnaissance. Les valeurs numriques des
dplacements chimiques et des couplages sont regroupes dans le tableau 2.1.
Dans certains cas, on observe des valeurs intermdiaires des couplages, dori-
gines diverses :
a) La conformation sloigne notablement dune chaise classique. Cest ce que
lon observe sur le bis ctal2.10, << diactone-galactose D (1,2;3,4-di-O-isopropy-
lidne-a-D-galactopyranose). On la dessin comme un compos alicyclique
ordinaire pour ne pas prjuger de sa conformation.
2. 10
Dans CDCl,, les couplages sont 5,O ; J2,, 2,4 ; J 3,4, 8,O et J 4,5 1,4 Hz. Le
lecteur pourra sassurer que ces couplages sont incompatibles avec une confor-
mation D-4C,. On a propos une conformation intermdiaire entre croise et
bateau[3]. La fusion de deux cycles pentagonaux sur loxane est la cause de cette
distorsion. Ceci est un cas extrme, on observe aussi des conformations chaises
moins radicalement dformes.
b) I1y a un quilibre entre plusieurs conformations. Ce que lon mesure est
alors une moyenne pondre. Ceci sera dvelopp longuement au paragraphe 2.6.
Nous navons parl ici que de lapplication de la RMN aux monosaccharides ;
le dveloppement de la chimie des oligosaccharides a d faire appel des tech-
niques plus compliques, qui seront esquisses au chapitre 9.
2.4 GNRALITS SUR LES FACTEURS DE CONFORMATION
DES MONOSACCHARIDES
Comme le montre lexemple 2.10 de la section prcdente, les contraintes
mcaniques introduites par la fusion de loxane avec dautres cycles ont une
influence prpondrante sur sa conformation. On traitera les cas analogues au fur
et mesure de leur apparition dans la suite de louvrage. Dans le reste de ce cha-
pitre, il ne sagira que de composs monocycliques.
Dans lquilibre des deux conformations chaises dun cyclohexane substitu,
lexcs denthalpie libre de la conformation la moins stable est calcul comme la
diffrence entre deux sommes de termes, qui reprsentent respectivement les
interactions diaxiales 1,3 et les interactions gauches 1,2 de chaque conformre.
On admet donc une loi dadditivit des compressions striques. Ce traitement
semi-quantitatif perd une partie de son sens avec les pyranoses. Tous les carbones
sont fonctionnels, ce qui doit faciliter la propagation des interactions dun bout
lautre de la molcule, et diminue la plausibilit de lapproche par addition de
contributions indpendantes. De plus, avec les sucres non ramifis, essentielle-
Effet de coplanarit 27
ment ceux auxquels nous aurons affaire, les substituants sont le plus souvent des
groupements hydroxyle, actoxy et benzoyloxy. Lencombrement de lhydroxyle
varie suivant son degr de solvatation. Lacylation diminue son volume de faon
imprvisible en dplaant de la densit lectronique vers le carbonyle. Enfin,
presque chaque position a, dans une certaine mesure, un statut particulier. Les
anomalies sont trs marques pour la position 1 de tous les pyranoses et pour la
position 5 des hexopyranoses. On les discutera longuement dans les paragraphes
2.5 et 2.6. Restent les positions 2,3,4. Dans le 4-actoxyoxane 2.11, le substituant
axial subit la compression strique traditionnelle due aux deux liaisons
C - H axiales en 2 et 6. Par contre, dans le 3-actoxyoxane 2.12 (et dans le 5-ac-
toxy), le substituant est oppos un seul C - H axial, lautre position tant occu-
pe par loxygne cyclique. Le compos 2.12 donne lieu un quilibre confor-
mationnel o il y a presque la mme quantit des conformations 2.12 et 2.13.
Lnergie conformationnelle est pratiquement nulle cette position.
Ac-
OAc H
2. 11 2. 12 2. 13
En fait, la conformation des pyranoses est domine par deux effets qui nexis-
tent pas dans le cyclohexane, et qui se manifestent aux positions 2 et 6 de loxa-
ne. Lun deux est particulier aux hexopyranoses et j e propose de lappeler << effet
de coplanarit >> pour ne pas impliquer de structure particulire restrictive dans le
nom dun effet dj prsent dans le mthoxythane. Lautre effet, prsent dans
tous les pyranoses, est leffet anomrique : le nom de cet effet, tir du vocabulai-
re des sucres parce que cest dans cette famille quon la reconnu la premire fois,
en dissimule en fait le caractre trs gnral puisquil est dj prsent dans le
mthyl chloromthyl-ther. Les consquences de ces effets peuvent tre modules
par des interactions de type cyclohexane, mais pas au point de ncessiter plus
quune discussion qualitative.
2.5 EFFET DE COPLANARIT
I1est bien connu que le butane a deux conformations prfrentielles, reprsen-
tes selon une projection de Newman perpendiculaire la liaison 2-3 par 2.14
(anti) et 2.15 (gauche).
La figure 2.4 I indique en b la variation dnergie de la molcule en fonction
de langle didre Mec - CMe et, en a, la population des conformations corres-
y/: \ #/ y hH Aifie
Me H Me
2. 14 2. 15 2. 16 2. 17
M m
Me
2. 18 2. 19 2. 20
pondantes donne par des calculs ab initid4]. La figure 2.4 II indique les varia-
tions correspondantes pour le mtho~ythane[~, pour lequel, par analogie, on pr-
voit deux conformations privilgies, 2.16 et 2.17. Ce quil y a dimportant
reconnatre dans les courbes de la figure 2.4, cest que lexcs dnergie de la
forme gauche sur la forme anti, qui est de 0,70 kcal mol- dans le butane, slve
1,96 kcal mol- dans le mthoxythane. En consquence, la population de cette
conformation est extrmement faible. On a ici lexemple le plus simple possible
de la stabilisation considrable de la conformation anti due la prsence de loxy-
28
21
14
7
O
9
6
3
0 60 120 180 240 300 360
I II
Figure 2.4 Donnes quantitatives thoriques sur lquilibre conformationnel du butane (I)
et du mthoxythane (II). Abscisses : angles didres Mec-CMe ou Mec-OMe ; ordon-
nes : a) I O3 fractions molaires par degr dangle, b) kcal mol-. Daprs W. L. Jorgensen,
R. C. Binning, Jr. et B. Bigot, J. Am. Chem. Soc., 103 (1981) 4393-4399 et W. L. Jorgensen
et M. Ibrahim, J. Am. Chem. Soc., 103 (1981) 3976-3985 (publi avec laimable autorisa-
tion de 1American Chemical Society).
Effet de coplanarit 29
Substituant - AG /kcai moi-
2 - CH3
2 - CH20H
3 - CH,
4 - CH3
2,86
2,89
1,43 I 0,04
1,95 ? 0,05
Tableau 2.2 Energies libres conformationnelles doxanes substitus*. (* Dans lintervalle
163-183 K, dans des solvants chlors). Daprs E. L. Eliel, K. D. Hargrave,
K. M. Pietrusiewicz et M. Manoharan, J. Am. Chem. Soc., 104 (1982) 3635-3643 (publi
avec laimable autorisation de IAmerican Chemical Society).
gne. Le nom << effet de coplanarit >> donn ce phnomne rappelle Iexagra-
tion de la tendance de la liaison CMe rester dans le plan C-O-C.
Passons maintenant au cas de loxane[6], qui donne trois types de drivs
monomthyls, 2.18, 2.19 et 2.20.
Pour un oxane monosubstitu, lexcs denthalpie libre de la conformation
substituant axial sur la conformation substituant quatorial est, comme on le sait,
par dfinition, lenthalpie libre conformationnelle (ELC) du substituant dans
loxane, cette position. Ces valeurs, mesures ventuellement indirectement en
utilisant des composs relais intermdiaires, sont consignes dans le tableau 2.2.
Les conformations quatoriales correspondent aux conformations anti du butane
et du mthoxythane et les conformations axiales (non reprsentes), aux confor-
mations gauche. On observe que lenvironnement du driv 2.20 est le plus voi-
sin de celui du cyclohexane et que 1ELC est du mme ordre. Par contre, la pr-
sence de loxygne cyclique diminue notablement 1ELC du drive 2.19. Le point
important est laugmentation notable de IELC du compos 2.18, o le mthyle
est proximit de loxygne cyclique, et possde sur un ct un environnement
semblable celui du mthoxythane. Considrons lquilibre (2.4) du driv
dimthyl 2.21.
Me Me
2. 21a 2. 21b
Ce compos adopte presque exclusivement la conformation 2.21b. On trouve :
k = [221b1- ~- 86,O
[ 2. 2 1 a]
correspondant - AG O =1,62 kcal mol-. Si on admet que - AG O est la diff-
rence des nergies conformationnelles des mthyles en position 2 et 4, on trouve
pour IELG du mthyle en 2 1,62 +1,43 =3,05 kcal mol-. La valeur du tableau
2.2, rvise la baisse, rsulte dun calcul indirect, faisant intervenir des qui-
libres plus mesurables, car ici la valeur de k est trs grande, et la prcision sur la
concentration de 2.21a sen ressent. On a calcul de mme IELG dune chane
latrale CH,OH en 2, disposition habituelle chez les hexopyranoses.
Leffet de coplanarit na pas soulev autant dexcitation chez les thoriciens
que leffet anomrique et sa cause nest pas connue avec certitude. Lexplication
la plus simple est que linteraction 1,3-diaxiale dun mthyle en 2 de loxane avec
la liaison CH en 6 est augmente, parce que ces deux substituants sont plus rap-
prochs que sils taient spars par -CH,- au lieu de -O-. Le calcul pour l a -D-
glucopyranose solide avec des liaisons carbone-oxygne de 1,439 et 1,427 , fai-
sant entre elles un angle de 113,7, donne pour la distance C,-C, 2,400 A, alors
que la valeur correspondante pour le cyclohexane est au moins gale 2,5 . I1
est connu que la compression strique crot rapidement avec le rapprochement.
2.6 EFFET ANOMRIQUE
2.6.1 Donnes exprimentales
Leffet anomrique se manifeste ltat pur sur une molcule trs simple, le
mthyl chloromthyl ther, CH,0CH2C1. reprsente en projection le long de la
liaison O-CH2C1 sur la formule 2.22.
La conformation connue est celle de la molcule ltat gazeux, donc isole,
dtermine par diffraction le~tronique[~1. Au lieu dadopter la position anti favo-
rise dans le butane, la liaison carbone-chlore construit avec la liaison OMe un
didre de 75. Elle est presque coplanaire laxe de lorbitale de la paire libre 2p
de loxygne, lcart (15 en projection) tant probablement d une interaction
non lie entre mthyle et hydrogne. La liaison carbone-chlore (1,s 13 A) est plus
longue que dans les chloroalkanes, la liaison O-CH,Cl (1,368 ) est plus courte
que dans les thers aliphatiques et que la liaison CH,-O (1,414 A). Enfin, on
observe sur le mthyl chloromthyl ther ltat solide une frquence de rso-
nance quadripolaire de ,,Cl exceptionnellement basse (29,s 17 MHz) compare
celle du 1-chloropropane (32,968 MHz), ce qui indique une augmentation de la
population orbitale 3p dans la direction de la liaison ou, en termes moins prcis,
une augmentation de lionicit du chlore.
On retrouve le mme effet conformationnel dans les 2-halognooxanes (2.23,
X =C1, Br, I). Ces composs nexistent que sous la conformation halogne axial
2.23a qui correspond la conformation gauche du mthyl chloromthyl ther,
dont ils sont les analogues cycliques, compte tenu des contraintes exerces par le
cycle, selon lquation (2.5).
Nous avons t habitus jusqu prsent lide quun substituant volumineux
impose un cycle six lments la conformation o il est quatorial. La tendan-
ce est donc oppose en a dun oxygne thr. On observe le phnomne avec les
Effet anornrique 31
2. 22
x
2.23a 2.2313
drivs de sucres prsentant un halogne ou, ce qui est le cas gnral, un atome
doxygne sur C(1). On essaye dvaluer leffet anomrique partir dun qui-
libre tel que (2.5) relatif, cette fois, un pyranose le plus gnral.
Si A, est lnergie libre conformationnelle de X, on pose :
Effet anomrique = AG, +A,
Malheureusement, A, a la position 2 dun oxane nest pas mesurable pour un
substituant effet anomrique, car on ne peut dissocier exprimentalement la
rpulsion strique de leffet anomrique. On prend 1ELC dans le cyclohexane.
Lexemple du mthyle, dpourvu deffet anomrique (voir le paragraphe 2.5) fait
supposer que la rpulsion est plus grande cette position. On obtient des valeurs
par dfaut. I1 y a dautres dfinitions, aucune nchappe la critique.
Leffet anomrique des halognes est trop puissant pour quon puisse observer
une autre conformation que 2.23a sur les 2-halognooxanes. Lestimation ne repo-
se pas sur un quilibre conformationnel, mais sur une raction chimique quili-
bre (2.6) dinversion de configuration sur C( 1) des cis (2.24 c) et trans (2.24 t)
2-halo-4-mthyloxanes, catalyse par HCI[].
On observe toujours un mlange 97:3 o prdomine le driv trans, 2.24 t
(X =Ci), chlore axial (-AG O =2,15 kcal mol-). Lexpression numrique de
leffet anomrique sobtient en ajoutant IELC du chlore (03 kcal mol-), ce qui
donne finalement 2,65 kcal mol- pour le liquide pur. De mme, on a estim la
valeur de leffet anomrique partir dquilibres de glyco~idation[~]. Quelques
x
2 . 2 4 ~ 2. 24t
Substituant kcal mol - I
Hydroxy 0,9 - 1,35
Methoxy 1,3
Fluor ?
Chlore 2,7
Brome 3 2
Iode 3,l
Nitro* 3,4
Acetox y 1,4
Tableau 2.3 Evaluation numrique de leffet anomrique. (Daprs B. Aebischer,
R. Hollenstein et A. Vasella, Helv. Chim. Acta, 66 (1983) 1748-1754.)
sont rassembls dans le tableau 2.3. Lordre donn par ces chiffres
a sans doute une vritable signification.
2.6.2 Origine de leffet anornrique
On observe sur les composs du chlore, du brome et de liode, une ou plusieurs
raies dabsorption dans le domaine hertzien dont la frquence est caractristique
de ltat de liaison de lhalogne. Cela vient du fait que les noyaux des atomes,
35Cl par exemple, possdent un moment quadripolaire qui peut exister sous plu-
sieurs niveaux dnergie dans un gradient de champs lectrique. La relation de
Townes et Dailey relie directement cette frquence de rsonance aux paramtres
de description de la liaison par les orbitales molculaires, la population a de lor-
bitale p , de lhalogne implique dans la liaison carbone-halogne et la moyenne
b des populations des orbitales p x et p , perpendiculaires, approxime ici par 2.
Pour le noyau CI, cette relation scrit :
v/MHz=55 ( 2 - a )
La frquence de rsonance est dautant plus basse que la population 3p, dans
la direction de la liaison est plus grande et sannule pour un compos ionique
( a =2) . Dans un langage plus flou, plus la liaison est ionique, plus basse est la
rsonance.
On a interprt la rsonance exceptionnellement basse du mthyl chloromthyl
ther comme une consquence de la dlocalisation de lorbitale 2p2 de la paire
libre haute nergie de loxygne dans lorbitale antiliante O&, de la liaison car-
bone-chlore 12] (Fig. 2.5).
Ceci implique un quasi-paralllisme entre les axes de ces deux orbitales. On
observe un angle 19 =15 , cos =0,97. Dans la conformation anti, les deux orbi-
tales seraient orthogonales et leur interaction nulle. Lintroduction dlectrons
Effet anomrique 33
Figure 2.5 Dlocalisation orbitalaire dans le mthyl chloromthyl ther.
fournis par loxygne dans cette orbitale augmente la population 3p, et abaisse
donc la frquence de rsonance, mais comme il sagit dlectrons antiliants la liai-
son carbone-chlore est affaiblie et sallonge. Par contre, la liaison carbone-oxy-
gne, laquelle participent deux orbitales p daxes parallles, prend un certain
caractre TC, ce qui la raccourcit. Lhypothse de la dlocalisation explique de
faon satisfaisante toutes les particularits du mthyl chloromthyl ther.
Les tudes ultrieures sont plus directement lies aux sucres pyranosiques. On
connat une famille importante de drivs, les halognures de pyranosyle, o les
hydroxyles alcooliques sont acyls (gnralement actyls) et lhydroxyle hmia-
ctalique remplac par du fluor, du chlore ou du brome, dont les formules 2.25 et
2.26 donnent les prototypes, en srie D-glucn.
A partir de pentoses et dhexoses de configurations varies, on peut prparer
deux collections de chlorures de pyranosyle, chlore axial ou quatorial, respec-
tivement analogues de 2.25 et 2.26. Comme avec le 2-chlorooxane, lorientation
axiale du chlore selon 2.25 correspond la conformation stable du mthyl chlo-
romthyl ther. La comparaison des donnes gomtriques ltat solide, lors-
quelles sont disponibles, montre que la liaison carbone-chlore axiale est invaria-
blement plus longue que la liaison carbone-chlore quatoriale. Enfin la figure 2.6
montre que, du point de vue de la rsonance quadripolaire, ces composs se rpar-
tissent en deux groupes.
Ac &\ Ac0 Ac+ Ac0 CI
CI
2. 25 2. 26
A
35
34
, a-rhamno
Figure 2.6 Frquence de rsonance quadri-
polaire de chlorures dhexopyranosyle
practyls, ayant les configurations indi-
ques.
-@-arabina
- a-manna
r-
La frquence de rsonance du chlore axial est invariablement plus basse que
celle du chlore q~atori al [ ~]. La figure 2.6 est aussi suggestive un autre point de
vue : la dispersion des rsonances quatoriales, voisine de 0,5 Hz, est de lordre
de grandeur de ce que les spcialistes appellent les << effets de cristal , dorigine
intermolculaire. En premire analyse, on ne doit pas la considrer comme signi-
ficative. Par contre, la plage de variation des rsonances axiales, 1,7 MHz, est trs
suprieure aux effets de cristal. Cette dispersion traduit le fait, mentionn ci-des-
sus que leffet anomrique du chlore (comme dun autre substituant) dans un
pyranose nest pas indpendant de la configuration du reste de la molcule. Ainsi
la rsonance du chlorure axial D-manno est de beaucoup la plus basse et il est
bien connu que leffet anomrique est renforc dans les drivs a-D-manno.
La thorie explique aussi laugmentation de leffet dans le sens chlore, brome,
iode ; lorbitale O* est de plus en plus diffuse et se prte un recouvrement de plus
en plus efficace avec lorbitale 2p, de loxygne. Les polarisabilits atomiques
des halognes sont : fluor, 0,557 ; chlore, 2,18 ; brome, 3,05 ; iode, 4,7. Leffet
anomrique du fluor devrait tre le plus petit, en raison du caractre contract de ses
Effet anornrique 35
orbitales. I1na pas t mesur mais il est incontestable. I1impose 85 % de confor-
mation ttraaxiale au driv 2.6 en solution. La comparaison des structures solides
2.5 et 2.27 est suggestive. La longueur de la liaison C-F axiale est 1,386 A, celle
de la liaison C-F quatoriale, 1,367 A. Les longueurs des liaisons C( I)-O sont res-
pectivement de 1,406 et 1,339 dans les drivs 2.5 et 2.27. Un calcul[14]
conduit un effet anomrique de 1,85 kcal mol-, effectivement infrieur celui
du chlore.
Pour les sucres substitus par de loxygne sur C( l), la dlocalisation est plus
difficile prouver, puisquon ne peut pas faire de spectre de rsonance quadripo-
laire. La polarisabilit atomique de loxygne, 0,802, le classe entre le fluor et le
chlore, aussi semble-t-il peu probable que son effet anomrique relve dun mca-
nisme radicalement diffrent. Le dimthoxymthane, MeOCH20Me, a en phase
gazeuse[151 une conformation gauche 2.28 (projection le long de CH,-O) qui cor-
respond celle des mthyl a-hexopyranosides, o le groupement mthoxy est
axial. Toutefois, il faut remarquer que les deux oxygnes jouent le mme rle. La
dlocalisation peut se produire dans les deux directions avec une gomtrie ad-
quate. On y a vu lorigine de leffet exo-anomrique. Comme cet effet est princi-
palement intressant en chimie des oligosaccharides, il sera trait au chapitre 9.
F
I
I
OBz
2. 21
%OMe
I
H
2. 28
Notons seulement quil stabilise les anomres quatoriaux, donc diminue Ief-
fet anomrique des substituants oxygns. Cependant il y a dautres indications
physiques de dlocalisation prfrentielle de loxygne cyclique vers loxygne
exocyclique, fournies par la mesure de la constante de couplage direct JCH entre
le carbone anomre et lhydrogne. La comparaison des valeurs ]JCH, mesures
sur une vingtaine de couples danomres de configuration et de substitution
varies, montre que lon observe pour chaque couple :
Jeq- J,, 10 Hz
Or IJCH, mesur par spectroscopie de RMN de I3C, est reli au pourcentage de
caractre s de la liaison, soit p, par la relation
J CH =500 p
Donc le proton quatorial, prsent dans lanomre oxygne axial, a un carac-
tre s plus lev que le proton axial, ce qui est conforme lide que la liaison
C-O cyclique est plus voisine dune double liaison dans lanomre axial que dans
lanomre quatorial (Fig. 2.5).
La dlocalisation de lorbitale 2p, de loxygne dans lantiliante axiale C-X est
incontestable, mais ceci ne rsoud pas pour autant la question de la << cause D de
leffet anomrique. Un des dogmes des thories lectroniques qualitatives a t
que la dlocalisation est stabilisante, mais des contestations commencent se faire
jour chez les thoriciens, mme concernant le traditionnel benzne. Une autre
objection est que ces stabilisations se calculent partir de configurations non
dlocalises qui sont des monstres conceptuels. Ltude thorique a t faite ici
dans le cadre de la thorie des orbitales molculaires, pour 2.23a et 2.23b
(X =Ci). Sur la figure 2.7, loxygne cyclique est lorigine des coordones, les
orbitales p et sp2 des paires sont diriges respectivement suivant OZ et OY. Les
liaisons C(5)-0-C( 1) sont dans le plan XOY, la liaison C - CI fait un angle de 30
avec OZ.
* _ - -
Figure 2.7 Orbitales molculaires du 2-chlo-
rooxane impliques dans la thorie de leffet
anomrique. CI
-Y
La stabilisation dune orbitale molculaire pleine dnergie E, par interaction
avec une orbitale vide dnergie E, est donne par la formule classique :
AE =2pcoc1
EO -EI
f i dpend des conditions gomtriques de linteraction et Co et C, sont les coeffi-
cients des orbitales atomiques au contact dans lexpression des orbitales molcu-
laires en interaction. Cette expression na de sens que si on peut attribuer des ner-
gies ces deux orbitales molculaires, donc sil sagit dorbitales canoniques.
Lorsquon tudie la liste des orbitales molculaires des 2-chlorooxanes en
conformation avec le chlore axial (Fig. 2.7) et avec le chlore quatorial, obtenues
au niveau STO-3G, on observe videmment linteraction entre 2p, de loxygne
et occi sur le conformre axial, mais aussi dautres interactions qui, pour tre net-
tement plus faibles, ne sont pas ngligeables : 2p, / O&, dans le conformre qua-
torial, et les interactions entre la paire sp2 de loxygne (sur O,,) et les substituants
quatoriaux dans les deux conformations. La figure 2.8 donne ces interactions
pour le conformre chlore axial.
Conformation des pentopyranoses 37
AE*
Figure 2.8 Niveaux dnergie et interactions dans le 2-chlorooxane chlore axial.
Linteraction O&, l p , (O) domine parce que ce sont les deux orbitales les plus
proches en nergie. Le calcul complet donne pour leffet anomrique du chlore :
AE=- 4h* il&
( AE*) 3
h * tant calculable sur un modle. Cette formule, qui conduit un rsultat rai-
sonnable, 3,3 kcal mol-, a aussi le mrite de souligner que leffet anomrique
nest observable que parce quil y a une diffrence dnergie E entre les deux
paires libres de loxygne.
2.7 CONFORMATION DES PENTOPYRANOSES
En raison de labsence de chane latrale en C(5), il y a frquemment mobilit
conformationnelle. Le spectre de RMN du proton peut donner lillusion dun
compos conformation homogne, alors quen fait, ce que lon observe est une
moyenne temporelle, parce que linterconversion est rapide lchelle de temps
de la RMN. Alternativement, le spectre du conformre minoritaire peut tre pr-
sent, mais chapper la dtection.
Ainsi la valeur intermdiaire du couplage JI, * (4,X Hz dans lactone deutre)
du ttra-O-actyl-fi-D-ribopyranose suggre quil y a un quilibre entre les
conformations 2.29 et 2.30, C, et ,C,. Au refroidissement, le signal examin sous
200 MHz slargit brusquement vers -60C, puis se rsout en deux signaux : un
singulet troit champ plus faible, caractristique dun proton H-1 quatorial, et
PAC
H
2. 29 2. 30
un doublet large, champ plus fort, caractristique dun proton H-1 axial. A basse
temprature, lquilibre correspond un excs (2:l) de la forme triaxiale. La
mesure de la temprature de coalescence permet de calculer la constante de vites-
se pour linversion : elle est voisine de 117 s-l 2 -6OC, et correspond une ner-
gie dactivation A@ =10,3 * 0,3 kcal mol- dans le sens 4C, -+IC4. Pour la rac-
tion en sens inverse, les chiffres correspondant sont 57 s- et 10,6 f 0,3 kcal
mol-, respectivement. Ces valeurs sont voisines de celles quon observe sur le
cyclohexane ou loxane. 11est remarquable que la substitution ne cause pas de
gne linversion.
Cette exprience permet de mesurer les valeurs << exactes >> des constantes de
couplages JI , ? pour les deux conformations. Si, une autre temprature, les frac-
tions molaires des conformres sont Ne et Na, une rgle de mlange donne :
Jobs =Ne e No a
La mesure de J permet de calculer k =Na / Ne et la diffrence denthalpie,
AG O =-RTlnk. Ainsi on trouve qu temprature ambiante, il y a 55 % de confor-
mre 2.29.
Ce gel conformationnel est exceptionnel. Le seul autre exemple parmi les pen-
topyranoses ttraactyls est le driv O-D-lyxo. Le calcul des constantes dqui-
libre partir des spectres moyens ncessite certaines extrapolations. On nobser-
ve pas deffet rgulier de la nature et de la polarit du solvant. On va maintenant
examiner les diffrents types de drivs.
Le cas le plus simple est celui des halognures per-acyls. La conformation est
domine par leffet anomrique puissant dun halogne et on nobserve que des
conformations halogne axial, sauf avec la configuration 0-D-xylo, qui donne
lieu un quilibre (Equilibre (2.7) ; Tableau 2.4). Nanmoins, ce tableau montre
que les conformations ttraaxiales sont toujours dominantes et parfois presque
exclusives.
Conformation des hexopyranoses et de leurs drivs 39
R* X* k =4C ,/IC
Ac
Bz
Ac
Bz
Ac
Bz
c1
c1
F
F
OAc
OBz
0,26
0,19
0,17
0,os
2,60
0,98
Tableau 2.4 Equilibre conformationnel des drivs PD-xylo dans CD,COCD,. (* Voir
lquation (2.7)).
Si on remplace maintenant lhalogne anomrique par un actoxy, la position
dquilibre est renverse, leffet anomrique faible ntant pas capable, la tem-
prature ambiante, de compenser deux interactions diaxiales. Cependant, le dri-
v per-O-benzoyl donne lieu un quilibre 1:l. On reconnat ici les limites de
ces analyses qui ne prennent en compte que la partie oxane. Avec les substituants
benzoate, << lessentiel D est sans doute ailleurs. Un autre aspect du problme est
que les diffrences dnergie conformationnelles peuvent apparatre faibles par
comparaison avec les forces dempilement dans les cristaux. Dans le cristal, le
chorure p-D-qlo per-O-actyl adopte la conformation tout quatoriale. De
mme le fluorure peractyl, 85 % ttraaxial en solution, cristallise sous la forme
ttraquatoriale. Dans ces cas, o il y a un quilibre en solution, correspondant
des diffrences denthalpie libre voisines de 0,8 kcal mol-, il nest pas surprenant
que les forces dempilement - la tendance la structure compacte - puisse domi-
ner. Plus tonnant est le cas du Iluorure per-O-benzoyl, qui cristallise sous la
forme ttraaxiale. L, il semble probable que lempilement des noyaux phnyle
soit un facteur essentiel.
En rsum, ces drivs per-acyls conduisent des quilibres conformation-
nels, sauf dans des cas dont lissue est particulirement vidente (configuration a-
D-qlo, 4C,, 0-D-arabino, IC4). Restent les pentoses libres en solution aqueuse.
Les interactions diaxiales sont plus leves quavec les actates et leffet anom-
rique plus faible. Sur les huit configurations des D-pentoses, quatre ( p -D-arabi-
nose, a -D-lyxose, a -D-ribose et -D-ribose) donnent lieu un quilibre confor-
mationnel.
2.8 CONFORMATION DES HEXOPYRANOSES
ET DE LEURS DERIVES
La tendance de la chane latrale adopter la position quatoriale pse dun
poids trs lourd[6] ; il nexiste quun seul cas dmontr o cette chane adopte la
position axiale, cest celui du mthyl 2,4-bis(N-actyl-N-benzoylamino)-3-6-di-
O-benzoyl-2,4-didoxy-a -D-idopyranoside, compos exotique, avec deux sub-
stituants de volume norme. Nous avons soulign dans la section prcdente que
les rgles applicables aux drivs simples des cycles six lments nont aucune
raison dtre gnralisables ces cas extrmes.
Dune faon plus gnrale, on peut prvoir quatre orientations autour de loxy-
gne cyclique dun D-pyranose : I et III pour les drivs trans, II et IV pour les
cis (Fig. 2.9). A lexception de lidose (et peut-tre de laltrose), tous les drivs
trans, ici les a -D-hexopyranoses monocycliques et leurs drivs, existent sous la
seule conformation observable D-4C,, qui correspond la conformation locale I,
doublement stabilise par leffet anomrique et leffet de coplanarit.
I I I I I I IV
Figure 2.9 Orientations possibles des substituants autour de loxygne cyclique dun pyra-
nose.
L a-D-idopyranose, 2.31, est le seul pyranose prsentant deux interactions
1,3-diaxiales en conformation D-,C,. Cest ici le moment dintroduire de nou-
velles conformations et leurs symboles. La conformation croise (skew, s), 2.32,
est dcrite en prenant comme plan de rfrence celui des quatre atomes copla-
naires (non conscutifs). On complte le symbole en indiquant les numros des
atomes situs au-dessus et au-dessous du plan de rfrence et, naturellement, le
symbole de la srie, ce qui donne ici D-S,. La -D-idopyranose en conformation
D-OS,, 2.33, ne prsente plus dinteractions diaxiales prohibitives, et satisfait
nanmoins aux critres de stabilisation locale autour de loxygne cyclique, au
moins partiellement. Le spectre de RMN du proton de la-D-idopyranose en solu-
tion aqueuse est celui dun mlange en quilibre des conformations 2.31 et 2.33.
La configuration ido est prsente, de faon isole au milieu dautres rsidus
monosaccharides dans les chanes polycondenses, dites << glycosaminogly-
canes , de polysaccharides naturels : le dermatane sulfate, lhparane sulfate et
lhparine. Le driv en question, qui appartient la srie L, est lacide 2-O-sulfo-
L-iduronique. On la reprsent en 2.34 (R =R =H) de faon non conforma-
tionnelle, avec la configuration a-L-idopyruno prsente dans ces polysaccharides.
Le rsidu L-ido est isol dans la squence, au milieu des chanes attaches res-
pectivement sur O( 1) et O(4) (paragraphe 17.3). I1se trouve ltat de mlange
des conformations L-C4 2.35 et L-2S, 2.36. La proportion de forme croise varie
de 40 64 % selon les squences oligosaccharidiques attaches R et RLi71.
Lancrage vigoureux de presque tous les hexopyranoses en conformation
D-,C, (L-IC,) par effet de coplanarit entrane une certaine rigidit des chanes
Furanoses 41
2. 31 2. 32
HO & O SO,H
AR' OR' bS0, H
2. 34 2. 35
6H
2. 33
6R'
2. 36
oligosaccharidiques. I1est possible que l'introduction de rsidus ido conforma-
tion flexible en certains sites cre la souplesse indispensable certaines fonctions.
Dans 1' a-D-idopyranose peractyl, la compression strique des oxygnes
axiaux est diminue par l'actylation, et l'effet anomrique est augment. Cet
ester existe exclusivement en conformation D-4C, ttraaxiale 2.37[1].
2. 37
2.9 FURANOSES
L'oxolane est aussi flexible que le cyclopentane, sur lequel on raisonnera
d'abord. I1 est commode de mettre des noms sur certaines conformations, par
exemple conformation croise (twist) 3T2 2.38, enveloppe 3E 2.39, croise 3T4
2.40, dont les symboles sont calqus sur ceux du cyclohexane (Equilibre (2.8)).
2.38 ('T2) 2.39 ( ' E) 2.40 ( ' T4)
Ce ne sont que des repres gomtriques. Les conformations 2.38, 2.39 et 2.40
sont trois tapes d'une dformation continue qui ne sont pas spares par des bar-
rires apprciables. On peut construire une succession de conformations E et T
alternes qui nous ramne de faon continue la case dpart. Par exemple, par-
tant d'une enveloppe 3E, on passera par les enveloppes 5E, =E, 4E, ' E pour reve-
nir 3E : du point de vue de sa forme gomtrique, chaque enveloppe se dduit
de la prcdente par rotation de 144", mais ce n'est pas la molcule qui tourne,
seulement sa forme. On appelle ceci pseudo-rotation.
Dans une conformation gele du cyclopentane, il y a 5 angles didres, O,,.. . O,,
qui sont fixes (Fig. 2.10 a). Au cours de la pseudo-rotation, l'un d'eux, soit O,,,
varie entre deux valeurs extrmes, (Po et - (Po, par exemple, en passant par les
valeurs , , (Po, O, - (Po, O, O,. D'o l'ide d'approximer cette fonction priodique
par une srie de Fourier rduite un seul terme, en crivant , =0, cos P. L'angle
P varie de 360" lorsque la molcule subit le circuit complet de pseudo-rotation.
(Notez qu'alors, une conformation particulire a fait deux fois le tour de la mol-
cule, 2 x 360".)
L'angle didre ,, a sa valeur maximum dans la conformation 3T2. On a alors
0, =O,, donc P =O". Pour les tapes suivantes 3E, 3T4 de la pseudo-rotation, on
a P =18" et 36". De mme l'itinraire =TI --+=E + =T3 correspond P =144",
162", 180". Dans la conformation =T3, le didre est de sens oppos celui de la
conformation 3T2, et l'on a O,, =13, cos (180") =- , . I1existe bien sur une valeur
de P pour chacune des conformations repre, mais la nouveaut apporte par l'in-
troduction du paramtre continu P est la possibilit de caractriser les conforma-
tions intermdiaires entre T et E, qui sont celles que l'on rencontre rellement.
A partir de 0, et P on calcule les autres angles didres par la formule :
ej =,cos(P+j 6) j =O , l ... 4 6=144"
On tend ces considrations aux furanoses en remplaant le sommet 5 par
l'oxygne (Fig. 2.10 b). Les angles didres sont nots z, , , 2, . . . 7, . En dpit de la
flexibilit du systme furanosique, il y a une conformation (ou deux) plus basse
nergie, dtermine par l'emplacement et l'orientation des substituants et, en
phase solide, par les forces d'empilement dans le cristal. En gnral, elle ne con-
cide pas avec une des conformations E ou T. Altona et Sundaralingam['sl propo-
a
7 4 O 70
7 3 ( S l
7 2
h
Figure 2.10 Convention de reprsentation des angles didres du cyclopentane ( a) et de
l'oxolane (b).
Polyols non cycliques 43
I
2.41 (,T2) 2.42 ('T,)
2.43 2.44
sent de la dcrire avec les paramtres O,, et P. Cette description s'est impose dans
la littrature cristallographique''1.
On expliquera cette notation sur un exemple tir de la chimie des nuclosides-
nuclotides. C'est de trs loin la famille la plus importante de furanosides (voir le
paragraphe 3.4). Les nuclosides sont des combinaisons glycosidiques d'une base
htrocyclique et d'un rsidu p-D-ribofuranosyle ou 2-doxy-0 -D-qthro-pento-
fiiranosyle. L'exemple choisi est le nucloside artificiel 5-iodoridine. On obser-
ve deux conformations diffrentes de cette molcule dans le mme cristal, voi-
sines respectivement de 3T2 2.41 et 2T3 2.42. L'angle didre maximum est entre 2'
et 3'. Pour que P soit voisin de O, on choisira donc z2 =O,, (Fig. 2.10) et, par suite,
pour O , . . . O,, les valeurs z3, z, , zo, z,, respectivement. La connaissance de deux
angles didres permet de calculer z, , et P. L'angle P a le caractre d'une phase et
z, , est une mesure de l'applatissement du cycle. La conformation 2.41, P =9", est
mi-chemin entre 3T2 et ' E. On a z , =36" et l'angle didre maximum 35" entre
2' et 3'. La conformation 2.42, P =175", est assez voisine de 2T3. L'angle didre
maximum est encore entre 2' et 3' , - 41". Le fait qu'une mme molcule puisse se
trouver sous deux conformations diffrentes dans le mme cristal est en soi rv-
lateur de leur faible diffrence d'nergie. C'est tout de mme inhabituel et les
nuclosides-nuclotides se rpartissent galement entre 0 <P < 36" et
144 <P <180" avec peu d'exceptions.
2.10 POLYOLS NON CYCLIQUES
Prenons comme exemple le galactitol l'tat solide, 2.43. La molcule a la
forme d'un zigzag plan. C'est la disposition favorite en solution, sauf si elle
conduit des interactions clipses 1,3 des hydroxyles. Dans ce dernier cas, la
molcule se tord en forme de faucille. Cette conformation drive du zigzag plan
par rotation de 120" autour d'une liaison C-C interne. On observe la conforma-
tion faucille sur le dithyl dithioactal du D-ribose peractyl 2.44.
RFRENCES
[l] G. A. Jeffrey et M. Sundaralingam, Adv. Curb. Chem. Biochem., 30 (1974) 445-466 ;
31 (1975) 347-371 ; 32 (1976) 353-384 ; 34 (1977) 345-378 ; 37 (1980) 373-436 ; 38
(1981) 417-529; 43 (1985) 203-421.
[2] H. Paulsen, A.C.S. Symposium Series, 87(1979) 63-79.
[3] C. Cone et L. Hough, Carbohydr Res., 1 (1965) 1-9.
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[5] W. L. Jorgensen et M. Ibrahim, J. Am. Chem. Soc., 103 (1981) 3976-3985.
[6] E. L. Eliel, K. D. Hargrave, K. M. Pietrusiewicz et M. Manoharan, J. Am. Chem. Soc.,
[7] M. C. Planje, L. H. Toneman et G. Dallinga, Rec. Trav. Chim., 84 (1965) 232-240.
[8] C. B. Anderson et D.T. Sepp, J. Org. Chem., 32 (1967) 607-611.
[9] C. T. Bishop et E P. Cooper, Can. J. Chem., 41 (1963) 2743-2758.
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[17] B. Casu et al., Nature, 322 (1986) 215-216.
[18] C. Altona et M. Sundaralingam, J. Amer Chem. Soc., 94 (1972) 8205-8212.
CHAPITRE 3
Alkyl et aryl glycosides
Glycosylamines
3.1 DFINITIONS RELATIVES AUX GLYCOSIDES (O-GLYCOSIDES)
Les furanoses et les pyranoses sont des hmiactals. Les glycosides sont les
actals correspondants. Ils drivent sur le papier des furanoses et des pyranoses
par le remplacement de lhydrogne de lhydroxyle hemiactalique par un radical
carbon. Ce sont donc des actals mixtes, internes et externes, o un des oxygnes
actaliques provient de lune des fonctions alcool du sucre, et lautre dun com-
pos hydroxyl extrieur R-OH. I1sensuit qu chaque pentose ou hexose cor-
respondent quatre types de glycosides. Par exemple, on voit ci-dessous les for-
mules des quatre glycosides drivs du galactose par remplacement de
lhydrogne hmiactalique par un mthyle, appels mthyl a-D-galactopyrano-
side 3.1, mthyl P-D-galactopyranoside 3.2, mthyl a-D-galactofuranoside 3.3, et
mthyl P-D-galactofuranoside 3.4.
La dfinition que nous avons donne inclut le cas o le driv hydroxyl R-OH
correspondant au substituant R externe appartient la famille des sucres et, effec-
3. 1 3. 2
F O H OH 1
~H,OH
3. 3 3. 4
tivement, la liaison correspondante se comporte exactement comme les autres du
point de vue chimique ; dans tous les cas, cette liaison entre les deux groupes par
une fonction actal sappelle liaison glycosidique. Dans la pratique, ces deux cat-
gories de glycosides, suivant que R-OH est ou nest pas un sucre, jouent des rles
trs diffrents qui justifient un traiterncnt spar. Les glycosides o R =mthyl,
thyl, phnyl, benzyl, etc. sont trs importants comme intermdiaires synth-
tiques. Ce sont eux que lon dsigne en gnral sous le nom de glycosides et qui
font lobjet du prsent chapitre. La partie << sucre >> sappelle unit glycosidique et
le radical extrieur, aglycone. De lexamen des noms des drivs 3.1, 3.2, 3.3 et
3.4, le lecteur dduira les rgles de nomenclature. Le nom commence par le radi-
cal dsignant laglycone, suivi du nom qui indique la configuration de lunit gly-
cosidique, o la terminaison << ose >> du sucre libre est remplace par << oside .
Si R-OH est un sucre, on emploiera de prfrence le terme disaccharide.
Dailleurs lassociation de beaucoup plus de deux molcules de sucres simples
peut se poursuivre par le mme type de liaison. Ces associations dont certaines
jouent un rle fondamental dans les phnomnes de reconnaissance cellulaire
seront traites en dtail partir du chapitre 9.
3.2 SYNTHSE DES ALKYL GLYCOSIDES
PAR LA METHODE DE FISCHER[] 12]
L41
3.2.1 Aspect exprimental
En catalyse acide, on observe un quilibre entre un pentose ou un hexose et un
alcool aliphatique OLI benzylique, dune part, et lactal mixte correspondant et
leau, dautre part, conformment la figure 3.1. On sintresse dabord la syn-
thse. La raction est dplace vers la droite par lutilisation dun gros excs dal-
cool ROH, gnralement employ comme solvant. Par exemple, en faisant
bouillir reflux une solution de galactose dans le mthanol contenant 2 % de HC1,
on obtient aprs 12 h un mlange en quilibre du sucre de dpart avec les galac-
tosides 3.1, 3.2, 3.3 et 3.4. Cette raction de glycosidation est gnrale. Comme
toujours, il ne se forme que des cycles cinq ou six lments et les seules fonc-
tions alcool internes impliques sont celles portes par C-4 ou C-5. On lobserve
donc avec les pentoses et les hexoses qui prsentent au moins une fonction alcool
libre en you 6 du carbonyle (aldhydique ou ctonique).
CHOH-
CHOR-
I 7 +ROH
1 =: 7 -k H ~o
Figure 3.1 Raction de glycosidation.
Cependant la composition du mlange en quilibre varie largement dun sucre
un autre (Tableau 3.1). On dose les constituants par les mthodes que nous avons
Synthse des alkyl glycosides par la mthode de Fischer 47
Furanosides Pyranosides
T a P a P
glucose* 35C 0,6 0 9 66 32,5
mannose 35C 0,7 0 94 5,3
galactose* 35C 6 16 58 20
fucose** 65C 6 13 54 27
ribose* 35C 5 17 12 66
fructose*** 28C 25 26 3 46
Tableau 3.1 Mthanolyse acide : composition a lquilibre du mlange de mthyl glyco-
sides. (* Daprs R. J . Ferrier et P. M. Collins, Monosaccharide Chemistry, (chapitre 3)
Penguin Books, Harmondsworth, 1972 ; ** daprs D. E Mowery, Curbokydr. Res., 43
(1975) 233-238 ; *** daprs G. S. Bethel1 et R. J . Ferrier, Curbokydr: Res., 31 (1973) 69-
80 ; publi avec les aimables autorisations de Penguin Books et de Elsevier Science.)
esquisses au chapitre 1 propos du dosage des anomres des sucres libres, cest-
-dire HPLC analytique ou chromatographie de vapeur aprs silylation. Ici les
mesures sont beaucoup plus faciles, car, ds quils ne se trouvent plus dans un
milieu relativement acide, les glycosides sont trs stables et il ny a pas de risque
que la composition de lchantillon varie aprs le prlvement au cours du dosa-
ge. La composition de ces mlanges est videmment relie la diffrence des
enthalpies libres de chaque constituant. On observe quelques comportement rgu-
liers. Les pyranosides sont favoriss par rapport aux furanosides, presque absents
dans le cas du glucose et du mannose. Dans le cas de pyranosides conformation
stable, tels les gluco-, manno- et galactopyranosides, cest le driv mthoxyle
axial qui prdomine, ce qui est une manifestation de leffet anomrique.
Si, au lieu dexaminer la composition lquilibre, on suit le droulement tem-
porel de la glycosidation on observe que les furanosides se forment au dpart,
pour disparatre ensuite plus OLI moins compltement au profit des pyranosides.
3.2.2 Rle prparatif et limites dutilit
On procde toujours comme dans le cas du galactose dcrit ci-dessus, avec lal-
cool comme solvant. On peut commencer par essayer de chauffer quelques heures
vers 80C en prsence dun acide minral, une molarit voisine de 0, 1 - 1 M. I1
faudra ensuite dterminer les meilleures conditions. Celles que nous venons de
donner transformeraient quantitativement le dsoxyribose en acide lvulinique,
CH,COCH,CH,COOH. Mais avec tous les sucres 2-doxy, la glycosidation est
trs rapide dans des conditions beaucoup plus douces. Par exemple, la conversion
du dsoxyribose en mthyl glycosides est complte en 20 mn 27C dans lacide
chlorhydrique mthanolique 0,O 15 M.
Si le glycoside ne cristallise pas directement du milieu ractionnel, il faut li-
miner lacide minral catalyseur, et ceci peut poser problme, car en gnral les
glycosides sont trs solubles dans leau et il est impossible de les extraire avec des
solvants organiques. Il est trs commode dutiliser comme catalyseur une rsine
changeuse de cations sous forme hydrogne, que lon spare par filtration en fin
dopration. Ainsi, pour prparer le mthyl a-D-glucopyranoside, on fait bouillir
reflux une solution de 80 g de glucose anhydre dans 200 mL de mthanol pen-
dant 24 h en prsence de 20 g de lchangeur de cations Dowex 50 (H). On filtre,
concentre, ce qui amne une cristallisation spontane, et on recristallise dans le
mthanol puis lthanol, ce qui donne 25 g (29 %) de mthyl a-D-glucopyranosi-
de pur[5]
A ce stade, il faut se pntrer de lide que dans ces synthses, qui nimpliquent
quun petit nombre dtapes, au dpart de sucres banaux, la course aux rende-
ments levs na plus grande signification. Ce qui compte, cest la simplicit
doprations. En France, le kilogramme de glucose, au degr de puret ncessai-
re la recherche, vaut 53 FE La purification dun driv de ce kilogramme de glu-
cose par chromatographie exigerait au minimum 20 kg de gel de silice (prix
3 560 FF) et 60 L de solvant (environ 600 FF). I1 est beaucoup plus conomique
dutiliser une mthode qui ne ncessite que des cristallisations, quitte augmen-
ter lchelle de travail si son rendement est faible. Cest en gnral le constituant
majoritaire de la solution qui cristallise, cest--dire le pyranoside dont lalkoxy-
le anomrique est axial ; ce nest toutefois pas une rgle absolue. Donc, le plus
souvent, la prparation du pyranoside alkoxyle anomrique quatorial par la
mthode de Fischer implique une cristallisation fractionne assez pnible des
eaux-mres et on fait plutt appel une autre mthode.
Pour obtenir les furanosides, on peut essayer dinterrompre la glycosidation
son dbut, au moment o leur concentration est maximum. Par exemple, en fai-
sant bouillir reflux une solution de galactose dans le chlorure dhydrogne
mthanolique 0,004 M pendant 6 h, on peut obtenir le mthyl P-D-galactofurano-
side avec 53 % de rendementL6]. Dans cette prparation, on a ralenti ltablisse-
ment de lquilibre en utilisant une trs faible concentration de catalyseur. Mais
ces conditions sont rarement aussi idales.
Le remplacement du catalyseur acide protonique par du chlorure ferrique,
acide de Lewis modr, donne exclusivement le mlange de furanosides. On peut
ainsi obtenir le mlange de mthyl D-glucofuranosides (alp =3/7) avec 75 % de
rendement17]. Une autre voie daccs un furanoside repose sur la complexation
intermdiaire par les ions Ca++. Lensemble de ces complexations sera trait au
chapitre 11. En faisant bouillir reflux une solution de mannose et de CaC12 dans
le mthanol en prsence de chlorure dactyle comme source de protons pendant
2 h, on obtient 533 % de mthyl P-D-mannofuranoside, isolable avec 40 % de
rendement[*]. Enfin, lapplication de la glycosidation selon Fischer un sucre
dont la fonction alcool sur C-5 est bloque ne donne videmment que des furano-
sides.
Ici apparaissent donc les limites dutilit de la mthode de Fischer : il faut que
lalcool soit utilis en grand excs, de prfrence comme solvant, pour dplacer
Autres mthodes de prparation des glycosides 49
lquilibre dans le sens voulu. Les anomres alkoxyle anomrique quatorial
sont difficilement isolables. I1ny a pas de raction utilisable avec les phnols et
les aryl glycosides ne sont pas accessibles.
3.3 AUTRES MTHODES DE PRPARATION DES GLYCOSIDES
3.3.1 Activation du carbone anornrique
Dans la raction de Fischer, on imagine que le rle du catalyseur acide est de
protoner lhydroxyle anomrique, le transformant ainsi en groupe partant
(Fig. 3.2), ce qui facilitera la substitution nuclophile. Dans les mthodes que
nous allons dcrire, il y a un groupe partant stable sur C-1, ce qui nempche pas
lutilisation de ractifs dactivation supplmentaire, les << promoteurs >> introduits
dans le milieu. Ces mthodes, plus longues mettre en uvre que la glycosida-
tion selon Fischer et trs varies, servent essentiellement la synthse doligo-
saccharides : elles seront analyses en dtail au chapitre 10. Elles sont toutes uti-
lisables la synthse des glycosides simples.
Figure 3.2 Intermdiaire proton dans la raction de glycosidation.
Ainsi dans le peractate du P-D-glucopyranose 3.5, le groupement actoxy
anomrique a une labilit particulire. I1est remplac par un mthoxy en prsen-
ce de SnC14 pour donner le mthyl ttra-O-actyl-B-D-glucopyranoside 3.6L91. Ce
type dactivation peut se rvler insuffisant. On a propos un promoteur plus effi-
cace que SnCl,, mais beaucoup plus couteux, le tritluoromthanesulfonate de tri-
mthylsilyle, CF3S03SiMe3. Aussi, pour une prparation grande chelle, prf-
re-t-on encore utiliser un bromure, aisment obtenu en traitant par HBr un
peractate de P-D-glycopyranosyle tel que 3.5. On prpare ainsi le bromure de
ttra-O-actyl-galactopyranoside 3.7, qui donne le mthyl P-D-galactoside per-
actyl 3.8 avec le mthanol en prsence dun mlange de HgO (1 eq.) et de
Hg Br, (0,04 eq.). Le rendement global partir du galactose est de 24 %. On
remarquera lorientation quatoriale du mthoxyle entrant dans les deux cas, ind-
pendante de la configuration du produit de dpart. Nous verrons plus en dtail au
chapitre 10 comment la participation du groupement actoxy en 2 impose la confi-
guration trans- 1,2 du produit. Le rendement de la substitution proprement dite est
en gnral excellent.
En rsum, les alkyl glycosides avec une aglycone axiale sont aisment obte-
nus par la raction de Fischer, quils soient cis-1,2 ou truns-1,2. Les alkyl glyco-
Ac * A c *
Ac0 OMe
Ac0 OAc
Ac0
Ac0
3. 5 3. 6
Ac
Ac0
Br
Ac0 OMe
AL0
3. 7 3. 8
sides trans- 1,2 diquatoriaux rsultent de ractions de participation. Restent les
cis-1,2 avec une aglycone quatoriale comme le P-D-mannoside 3.9. On obtient
3.9 avec 30 % de rendement aprs isolement par addition simultane de sulfate de
mthyle et dhydroxyde de sodium une solution aqueuse de mannose[].
3. 9
3.3.2 Aryl glycosides
On ne peut pas les obtenir par la raction de glycosidation de Fischer. Peut-tre
lhydroxyle alcoolique est-il insuffisamment nuclophile, par comparaison avec
lhydroxyle alcoolique. Mais on peut les prparer assez facilement partir des
actates en prsence de catalyseurs acides. La fusion dun mlange du peractate
de la-D-glucopyranose 3.10 et de phnol donne 64 % de phnyl a-D-glucopyra-
noside ttraactyl 3.11 en prsence de chlorure de zinc et 85 % de lanomre P
3.12 en prsence dacide paratolunesulfonique[]. Le cours de la raction dpend
donc fortement des conditions exprimentales. Chaque fois que lon obtient un
alkyl ou aryl glycoside sous forme ttraactyle, il est facile, si cela savre nces-
saire, de librer les fonctions alcool par mthanolyse alcaline, car la liaison ac-
talique est trs stable dans les bases.
Anhydropyranoses et anhydrofuranoses a caractre actalique 51
Ac0
OAc R
3. 10 3. 1 1 R=H, R=OPh
3. i 2 R=OPh, R=H
3.4 ANHYDROPYRAN0,SES ET ANHYDROFURANOSES
A CARACTERE ACETALIQUE
Le lecteur se sera peut-tre demand pourquoi, dans la raction de Fischer, il
n y a pas actalation par deux fonctions alcool de la molcule de sucre, condui-
sant un actal mixte compltement interne et bicyclique. En rgle gnrale, une
raction intramolculaire est plus rapide que lanalogue intermolculaire ; ce type
de compos est observ dans dautres familles que les sucres. La rponse pourrait
tre quon prpare les alkyl glycosides en prsence dun gros excs dalcool. En
fait, ces actals internes drivs de sucres sont une famille de composs bien
connus et parfaitement stables en conditions non acides. On les nomme comme
des drivs de pyranose ou furanose, par exemple un x, y-anhydro-P-D-pyranose
est un P-D-pyranose avec un pont ther entre les carbones de rang x et y. Nous
traiterons pour commencer des 1,6-anhydro-P-D-pyranoses, cest--dire lactal
mixte interne entre la fonction aldhyde et lhydroxyle port par le carbone 6. Le
squelette gnral de ces composs est 3.13. La conformation du cycle pyranose
est la conformation D-C, inexistante avec les pyranoses libres. Elle prsente un
effet anomrique favorable mais une disposition axiale de la chane latrale inac-
ceptable dans le cas dun pyranose libre. I1est difficile de prvoir sa contribution
lnergie libre de la molcule, puisquil y a fermeture dun nouveau cycle. 11est
en tout cas certain quun substituant axial en C-3 introduit une forte compression
strique. Le reprsentant le plus stable de la srie doit tre le triquatorial 3.14,
drivant du D-idose 3.15. Nous avons mentionn au chapitre 2 linstabilit
FHO
HO- Ci?H
H-C-OH
I
W -OH
F
CH,OH
3. 13 3. 14
3. 15
conformationnelle de ce sucre. Par chauffage en solution aqueuse, en prsence
dun acide dilu, il donne le 1,o-anhydride avec un rendement de 86 %. Cest
donc, de loin, la configuration la plus stable en solution. Par contre, les trois
sucres glucose, mannose et galactose ne donnent que des traces de 1,6-anhydride
dans ces conditions. On prvoit en effet une puissante interaction 1,3-diaxiale
entre CH, et lhydroxyle en 3 pour ces trois configurations, comme par exemple
dans le 1,6-anhydro-D-glucose 3.16. A titre dexercice, le lecteur pourra interpr-
ter en termes danalyse conformationnelle les rendements de conversion en 1,6-
anhydrides des sucres suivants en solution acide 10O0C[1 : glucose (0,2 %) ;
mannose (0,8 %) ; galactose (0,8 %) ; talose (2,8 %) ; allose (14 %) ; gulose
(6.5 %) ; altrose (6.5 %) ; idose (86 %). I1 trouvera les configurations de ces
hexoses au chapitre 4.
Alors quen milieu acide, ces anhydrides sont en quilibre avec des quantits
variables dhexoses correspondant, ils sont trs stables en milieu alcalin, comme
tous les glycosides, et les actals dune faon gnrale. On peut prparer ceux qui
sont instables en milieu acide par une raction trs originale et trs efficace, le
chauffage 100 dun aryl P-D-glycopyranoside peractyl. Ainsi, le phnyl
ttra-O-actyl-P-D-glucopyranoside 3.12 donne-t-il le 1,6-anhydro-D-glucose
3.16, facilement isolable avec un rendement de 80 % par peractylation et recris-
tallisation du peractate hautement cristallin[*]. La raction fait apparemment
intervenir un intermdiaire 1,2-anhydro, car elle ne se produit pas si lhydroxyle
en 2 du glucoside est bloqu par mthylation et lanomre a 3.11 nest pas ractif.
Lorsquun pyranose est transform en 1,6-anhydropyranose, les hydroxyles
axiaux deviennent quatoriaux et vice versa. Cest sans doute la proprit la plus
intressante du point de vue synthtique cause du changement de ractivit.
Mais il y a des limites lutilit des 1,o-anhydro ; lespace endo entre loxolane
et loxane est trs peu accessible et les nuclophiles sy introduisent difficilement,
si bien quil peut tre difficile de substituer les hydroxyles activs par la raction
SN2 impliquant lattaque endo. Pour finir, notons que lon sait galement prpa-
rer certains 1,4-anhydropyranoses.
Les anhydrides 1,2 se comportent comme des oxiranes trs ractifs. Dailleurs
on prpare 3.17 comme un oxirane, par attaque dun carbone chlor par un alcoo-
late vicinal, dans ce cas laction de lammoniac sur un driv du glucose chlor
en 1 avec un hydroxyle libre en 2. On a prconis rcemment lpoxydation des
CH,OAc
I
OH H
3. 16
3.17
Anhydropyranoses et anhydrofuranoses caractre actalique 53
glycals tel 3.18 par le dimthyldio~irane[~I . Lorsque la protection R est le fait de
benzyles, ou de ter-butyldimthylsilyles, on observe lintroduction spcifique de
loxygne en trans de loxygne en 3 (Equation (3.1) ; produits 3.18 et 3.19). Ces
oxiranes sont ouverts froid, sans cutalyseur, par les alcools primaires (CH30H,
PhCH,OH), avec inversion de configuration et donnent presque quantitativement
les glycosides 1,2-trans, 3.20 (Equation ( 3. 2) ) . Le compos 3.17 a permis la syn-
thse du saccharose 3.21 par une raction superficiellement analogue, mais vi-
demment plus complexe, puisquil y a rtention de configuration, quil faut op-
rer 100 h 100C, et que le rendement est faible114J . On connat dautres drivs
de sucres qui se transforment en glycosides froid sans catalyseur. Les diazirines,
3.22 par exemple, peuvent donner des glycosides, mme avec des alcools secon-
daires (Equation (3.3)). Lintermdiaire est probablement le carbne 3.23[51.
CH,OR H,OR
3. 18 3. 19
CH,OR
CH,OR I
OH
3. 20
OH
3. 21
3. 22 3. 23
3.5 PROPRITS CHIMIQUES DES GLYCOSIDES
3.5.1 Hydrolyse en milieu acide[6], [I 7], [I 8]
En prsence dun excs deau, la raction rversible de la figure 3.1 se drou-
le videmment de droite gauche. Les glycosides en solution aqueuse sont
dcomposs par les acides. Cette raction a suscit un intrt passionn. I1 y aurait
dj eu << des milliers darticles B en 1979[16]. Le mcanisme le plus gnralement
admis semble tre celui de J . T. Edward (1955)[19]. Lintermdiaire, proton rver-
siblement sur loxygne exocyclique volue vers lion carbnium << cation glyco-
syle , ou subit une substitution bimolculaire par une molcule deau (Fig. 3.3).
Avec une dure de vie dans leau de lordre de seconde, le cation
glycosyle serait G la limite de lexistence relle >>L2OI. Lenvironnement serait
ncessairement impliqu dans les ractions dun intermdiaire aussi instable.
lent +H,O
A Produits
Figure 3.3 Mcanisme propos pour lhydrolyse des glycosides.
Dune faon plus gnrale, S tant le glycoside, on a le chemin raction-
nel (3.4) ;
(3.4) S +H +(eau) (SH +] - produits
La vitesse globale est proportionnelle [SH 1 puisque la concentration en eau
est pratiquement constante. Comme S est une base trs faible, sa protonation est
quilibre selon lgalit (3.5) et la vitesse de raction est alors donne par lex-
pression (3.6).
Proprits chimiques des glycosides 55
( 3. 5)
(3.6)
v =k [SH] =-[H+] [SI
K
En prsence dun excs de glycoside, la constante de vitesse pseudo-monomo-
lculaire k est proportionnelle la concentration en ions hydronium (Equation
(3.7)).
(3.7)
k =1 [H]
En toute rigueur, il faudrait introduire lactivit des ions hydronium, car on
opre parfois dans des solutions acides concentres (HCl2,5 M, H,SO, 2 M, etc.).
On a aussi fait intervenir les fonctions dacidit dans les tudes mcanistiques,
mais le fondement mme de la thorie des fonctions dacidit a donn lieu rcem-
ment de vives critiques[21]. I1 suffira pour une discussion qualitative de
confondre activit et concentration. I1y a tellement de variations possibles dans
les conditions de mesure, selon la nature et la concentration de lacide et selon la
temprature, et lventail des valeurs de k est si tal, quil est difficile de prsen-
ter les rsultats dune faon la fois uniforme et rigoureuse. Un auteur[*] a choi-
si de calculer la valeur k, de la constante de vitesse 100C, dans HCI normal
partir de sa valeur k toc, dans lacide de concentration molaire c, par la relation
(3.8) qui suppose connue lnergie dactivation E# (en cal mol-).
Lexpression (3.9) donne les dures de demi-raction en minutes, plus parlantes
pour le chimiste de synthse.
(3.9)
O, 69
k l m n
t /m =---
112 -1
On trouvera sur le tableau 3.2 des rsultats caractristiques pour quelques glu-
cosides banals ainsi que pour les composs 3.24,3.25,3.26,3.27,3.28,3.29,3.30
et 3.31. Certaines extrapolations, loin des conditions relles de mesure sont sans
doute irralistes, surtout pour les glycosides trs labiles. Nanmoins le tableau 3.2
Exemple Glycoside t 112mn
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
Mthyl a-D-glucopyranoside (3.24)
Mthyl P-D-glucopyranoside
Ethyl P-D-glucopyranoside
Phnyl a-D-glucopyranoside
Ethyl 0-D-glucofuranoside
Mthyl a-D-galactopyranoside (3.1)
Mthyl P-D-ribopyranoside (3.26)
Mthyl 2-doxy-a-D-arabino-hexopyranoside (3.25)
Mthyl 2-doxy-a, P-D-erythro-pentopyranoside (3.27)*
Mthyl 6-doxy-a-L-galactopyranoside (3.28)**
Mthyl 2-actamido-2-doxy-~-D-glucopyranoside (3.29)
Mthyl 2-amino-2-doxy-P-D-gluco-pyranoside, chlorhydrate (3.30)
ter-Butyl P-D-glucopyranoside
Trithylmthyl P-D-glucopyranoside
Mthyl a-D-fructopyranoside (3.31)
32
19
13
1 2
0,06
6
4
0,02
<0,005
1
1 O0
2800
0,075
0,003
0,003
Tableau 3.2 Comparaison des vitesses dhydrolyse de glycosides. (* Estimation ; ** mesu-
re faite sur lnantiomre.)
3. 26
OH
OH
3. 28
H- OC H, c1NH,
3. 27
3. 29
H+ CH,OH
OH OCH,
3. 31
3. 30
donne probablement une base de comparaison satisfaisante. Le lecteur qui vou-
drait exploiter numriquement les donnes publies est renvoy aux ouvrages
cits.
Les exemples 1 et 2 de ce tableau 3.2 montrent que lanomre mthyle qua-
torial est hydrolys environ deux fois plus vite que lanomre mthyle axial.
Cest une proprit de la plupart des couples de glycosides. Notons cependant
quavec ces glucopyranosides, lordre sinverse au-dessus de 132C. Le change-
ment du mthyle en thyle na pas un effet considrable, mais la vitesse dhydro-
lyse des phnyl glycosides est nettement plus leve (exemples 1 et 4). La com-
paraison des exemples 3 et 5 montre lextrme labilit des furanosides. Lorsquil
ny a pas dhydroxyle en position 2, lhydrolyse est galement considrablement
acclre (comparez les exemples 1 et 8 dune part, 7 et 9 dautre part). Cest lex-
tension la chimie des glycosides dune proprit bien connue des actals
simples : lhydrolyse du dithyl actal CH,OH - CH (OEt), est 300 fois plus lente
que celle de CH, - CH (OEt),. Leffet se manifeste aussi, mais trs attnu, lors-
quil y a un hydroxyle manquant une position plus loigne de la fonction ac-
tal : comparer les exemples 6 et 10. Le compos 3.28 est un glycoside du fucose,
qui est un sucre important dans des cellules vivantes ; il faut tenir compte de cette
labilit particulire en chimie des oligosaccharides fucosyls.
Les pyranosides fonction amide, comme 3.29 et son isomre D-gulucto, ont
une importance considrable dans les cellules vivantes. Lors de lhydrolyse acide
de la fonction actal de 3.29 80C dans HC1 N ( k =7,25 min-), on obser-
ve lhydrolyse simultane de lamide ( k =2,13 IOp3 min-), ce qui conduit, pour
une fraction notable du produit de dpart, laccumulation du glycoside amin
3.30 proton dans le milieu. La charge positive sur lazote soppose la protona-
tion de loxygne actalique, qui donne un dication, si bien que lhydrolyse de
3.30 est trs lente. Comparez ce sujet les exemples I , 11 et 12. Les oligosac-
charides des parois cellulaires contiennent des units N-actylglucosamine ou
N-actylgalactosamine rattaches la chane par des liaisons glycosidiques et la
dtermination des conditions exactes de sparation de ces units par hydrolyse
acide est particulirement importante. Enfin lexemple 15 montre la fragilit des
ctosides. Parmi les sucres ctoniques naturels, il en est un qui nous intresse tout
particulirement, cest lacide sialique, dont les glycosides sont hydrolyss dans
des conditions trs modres : les glycosides de lacide sialique combinent les
proprits des glycosides ctoniques et celles des sucres dsoxygns au voisina-
ge immdiat de la fonction actal. Lacide sialique, sous forme sialoside, occupe
une position priphrique dans les oligosaccharides des parois cellulaires, sch-
matise selon la structure 3.32. On le spare quantitativement par un chauffage
dune heure dans HCl 0,l M 80C. Parfois lacide sialique se prsente sous une
forme actyle, telle que 3.33. Le problme analytique est alors dhydrolyser
slectivement sans dsactyler, et on emploie HC1 0,01 M ou lacide formique,
une heure 60C, mais lhydrolyse de la fonction glycosidique nest pas totale
dans ces conditions[22].
58 Alkyl et aryl glycosides. Glycosyiamines
1
CH,OR
3. 32 R'=H 3. 34
3. 33 R'=Ac
On notera, sur les exemples 13 et 14, l'norme labilit des glycosides d'alcools
tertiaires. On pense que leur hydrolyse s'effectue par un mcanisme diffrent de
celui de la figure 3.2, faisant intervenir, comme pour les halognures de ces
alcools, un ion carbnium, tel Me3C+.
Les tudes cintiques permettent de calculer les grandeurs d'activation, relies
par la formule (3.10).
(3.10) AG$ =& - TAS$
Pour 24 pyranosides, 60" C, on observe la relation numrique (3.11) ;
d'autres valeurs publies sont du mme ordre.
(3.11) +4,l 2 AS$/ cal mol-' deg-' 2 23,O
moyenne : 13,7
Sur un nombre restreint de furanosides, on a observ, au contraire, une valeur
ngative[l71.
- 11,l I AS$ 2 - 8,3
On interprte ces chiffres comme l'indication d'un mcanisme d'hydrolyse dif-
frent[ 61.
3.5.2 Hydrolyse et transfert enzymatiques
Les enzymes glycoside-hydrolases, plus simplement <<glycosidases , cataly-
sent l'hydrolyse des liaisons glycosidiques dans des conditions voisines de la neu-
tralit. On a donn dans le tableau 3.3 une liste de glycosidases commerciales,
dont le prix est suffisamment modr pour qu'on puisse en envisager l'utilisation
en chimie prparative. L'efficacit de cette catalyse est prodigieusement augmen-
te par rapport celle de la catalyse acide. La comparaison directe avec les alkyl
glycosides n'est pas possible, car il n'y a pas d'hydrolyse non enzymatique per-
ceptible au voisinage de la neutralit, mais on peut mesurer une vitesse de rac-
tion au pH 5 avec le P-D-glucopyranoside du paranitrophnol 3.34. Dans l'eau
25" C, pH 5,0, la trs faible constante pseudo-monomolculaire est 52 x lo-'* s-l.
En prsence de la P-D-glucosidase des amandes amres, dans les mmes condi-
tions, on mesure une valeur de k gale 78 ss', soit environ lo'* fois plus le-
veI231.
Enzyme Source
a-D-Glucosidase
P-D-Glucosidase
a-D-Galactosidase
P-D-Galactosidase
a-D-Mannosidase
a-D-Fucosidase
a-D-Neuraminidase
(Sialidase)
N-acetyl-P-D-glucosaminidase
P-D-Fructosidase (Invertase)
levure
amandes
grains de caf vert
Escherichia coli
fve Jack
reins du buf
Arthrobacter ureofaciens,
Clostridium Perfringens
reins du buf
levure
Tableau 3.3 Proprits de quelques glycoside - hydrolases commerciales.
On a aussi cherch comparer les vitesses dans les conditions o elles obis-
sent toutes deux une loi du second ordre, par rapport la concentration en sub-
strat et celle du catalyseur. On trouve alors que lenzyme est I Ol 4 fois plus effi-
cace que les ions hydronium. Un tel rapport de vitesse correspond une chute de
lnergie dactivation voisine de 18 kcal mol-.
On distingue les <<exoglycosidases >> et les <<endoglycosidases . Les pre-
mires hydrolysent des liaisons glycosidiques terminales dans les chanes oligo-
saccharidiques (voir le chapitre 9) et les secondes des liaisons internes. Dans le
cadre de ce paragraphe, essentiellement consacr la chimie prparative, nous
traiterons exclusivement des premires, qui sont trs nombreuses, car elles cata-
lysent aussi lhydrolyse dalkyl et daryl glycosides. Chaque glycosidase est sp-
cifique de la configuration du sucre qui intervient dans la liaison glycosidique par
son oxygne anomrique. Elle est relativement indiffrente la nature du groupe-
ment organique li cet oxygne. Cette observation permet une classification en
groupes : a-D-glucosidases qui hydrolysent tous les a-D-glucosides, P-D-galac-
tosidases qui hydrolysent tous les 0-D-galactosides, etc., avec, au sein de chaque
groupe, de petites variations de proprits suivant lorigine. Si maintenant on sat-
tache la configuration, on voit quil y a quatre cas de figure a, b, c, d pour les
pyranosides et deux cas de figure e,fpour les furanosides (Fig. 3.4). Lhmiactal
au second membre est reprsent tel quil est immdiatement aprs sa sparation
du site actif. Les hydrolyses procdent globalement avec rtention de configura-
tion (a, b, e) ou inversion (c, d, A. On adopte donc des symboles de classification,
qui sont, dans lordre a, b, c, d, e, 5 p (e-e), p (a-a), p (e-a), p (a-e), f (r), f (i).
Toutes les glycosidases du tableau 3.3 fonctionnent avec rtention de configura-
tion.
En raison de la rapidit de la mutarotation, il est difficile davoir une certitude
sur la configuration anomrique de lhmiactal au dpart de lenzyme. La rpon-
se est donne par une autre raction des glycosidases rtention : elles catalysent
a
b
C
d
e
f
OR + H2 -
- =+OH + RoH
I
H
I
H
OR I OH
H OH
OR
H
OR
H
qH + RoH
H
+OH + RoH
I
H
Figure 3.4 Chemins possibles dhydrolyse enzymatique dun glycoside.
le transfert de glycosyl dune aglycone une autre, selon lquation (3.12) o G-
OR et G-OR sont deux glycosides du sucre G-OH.
(3.12) G. OR +ROH G. OR +R. OH
Lhydrolyse apparat alors comme le cas particulier du transfert sur leau,
H-OH. I1ny a alors plus dambigut sur la configuration anomrique du glyco-
side produit, incapable de mutarotation. On trouve que cest la mme que celle du
glycoside de dpart. Cette conclusion simpose dailleurs en fonction de la rver-
sibilit de la raction (3.12) par application du principe de microrversibilit. Si
la configuration anornrique ntait pas la mme dans les deux membres, lenzy-
me devrait pouvoir hydrolyser par le mme chemin les deux configurations oppo-
ses.
La raction (3.12) suggre des applications synthtiques des glycosidases
autres que lhydrolyse. Ainsi on observe la raction (3.13) en solution aqueuse en
prsence dune a-D-galactosidase.
(3.13) HO H & + +;oh 4
OAr WH3
H hok
HO
OCH,
3.35
On fabrique ainsi trs rapidement un disaccharide 3.35 caractristique du grou-
pe sanguin humain B. Le rendement est mdiocre, mais les autres mthodes pure-
ment chimiques connues impliquent de nombreuses tapes et ne sont finalement
pas plus performantes. Dans les mthodes glycosidases, le rendement est faible,
mais le cot des matires premires est ngligeable par rapport la valeur des oli-
gosaccharides. Linconvnient nest pas l : il faut sparer les produits dun gros
excs de substances trs voisines et trs polaires, problme qui na pas encore de
solution conomique grande chelle.
Le mcanisme de lhydrolyse enzymatique est encore sujet contro-
verses[2] 1231. I1y a accord sur un point : la rtention rsulte de deux inversions
conscutives, lune lors de lattachement lenzyme, et lautre lors du transfert de
glycosyl sur laccepteur.
3.5.3 Stabilit des glycosides dans les conditions neutres ou alcalines
Rle protecteur
Les glycosides ne sont hydrolyss en milieu alcalin que dans des conditions
extrmes, tout fait trangres la pratique synthtique courante. Pour toutes les
ractions qui seffectuent en milieu neutre ou alcalin, les glycosides ont les pro-
prits des polyols cycliques. Les sucres hmiactal ne supportent pas lalcalini-
t, en raison du caractre daldol du tautomre carbonyl. Pour effectuer des trans-
formations au niveau des hydroxyles impliquant des conditions alcalines, on a
avantage transformer dabord le sucre en glycoside. Par exemple, le fucose ben-
zyl 3.37 est un intermdiaire obligatoire dans lactivation du fucose pour lintro-
c H p B n I
OBn
OBn
3. 28 R=H
3. 3 6 R=CH,Ph(Bn)
3. 37
duction de lunit a-fucopyranosyl dans les oligosaccharides. On le prpare en
trois tapes : glycosidation du fucose en mthyl glycoside 3.28, benzylation des
hydroxyles avec le chlorure de benzyle et lhydrure de sodium dans la N, N-dim-
thylformamide, ce qui donne 3.36 et finalement hydrolyse acide en 3.37.
Le passage par le mthyl glycoside comme forme protge et le retour final
Ihmiactal par hydrolyse acide ne sont possibles que si le produit final est stable
dans les conditions dacidit ncessaires. Ainsi, sil y avait des substituants actyl
au lieu de benzyl sur lintermdiaire 3.36, ils disparatraient partiellement au
dbloquage. La plupart des sucres eux-mmes sont trs stables en milieu acide.
Cependant, le fructose se transforme partiellement en acide lvulique
CH,COCH,CH, COOH en milieu acide 100 C. Quant au dsoxyribose, il suf-
fit de conditions acides trs modres pour quil se transforme quantitativement
en acide lvulique. Le cas le plus frquent est celui o le dbloquage acide de la
fonction protectrice risque dhydrolyser dautres liaisons glycosidiques, que lon
dsire garder dans la molcule. Dans ce cas, on effectuera la protection en prpa-
rant un glycoside de lalcool benzylique, le groupement protecteur tant limin
dans des conditions neutres par hydrognolyse sur palladium sur charbon
(Fig. 3.5).
Figure 3.5 Hydrognolyse catalytique.
3.6 GLY COSYLAMINES ET NUCLOSIDES
3.6.1 Gnralits
Nous traitons ici ces composs en raison de leur analogie de structure avec les
glycosides oxygns mais leur rle est bien diffrent. Ce ne sont pas des interm-
diaires souvent utiliss en synthse. On trouve dans cette famille des structures
Glycosylamines et nuclosides 63
naturelles universellement rpandues. Certaines transformations dcrites ci-des-
sous sont des modles valables de chemins biosynthtiques bien tablis.
3.6.2 Gl yc~syl ami ne[~~]
Prparation
Le traitement des aldohexoses ou aldopentoses par lammoniac liquide ou en
solution alcoolique remplace lhydroxyle anomrique par NH,, et donne un
mlange anomrique de glycosylamines pyranosides. Le driv quatorial est pr-
pondrant. On observe souvent sa cristallisation directe partir du milieu rac-
tionnel. Ainsi le glucose donne-t-il la P-D-glucosylamine 3.38. Les amines pri-
maires et secondaires aliphatiques conduisent aux glycosylamines substitues
3.39 et 3.40. Avec les arylamines moins nuclophiles, il peut tre ncessaire duti-
liser un catalyseur acide modr comme un sel dammonium pour obtenir lary-
lamine 3.41 en gnral bien cristallise. Les ctoses traits comme ci-dessus don-
nent les ctosylamines alkyles sur lazote, trs labiles en milieu acide. On voit
que les fonctions carbonyles des sucres libres ne donnent pas de bases de Schiff.
On ne peut les obtenir avec les sucres aldhydiques que si la formation de lh-
miactal est rendue impossible par le blocage des fonctions alcool (on dit alors
quon a affaire un sucre ald@h?d).
3. 38 R=R=H 3. 40 R,R =alkyl
3. 39 R=H, R= alkyl 3.41 R=H, R= aryl
Comme dans les synthses de glycosides oxygns, il peut tre ncessaire de
partir dun driv activ du sucre, par exemple lhalognose peractyl 3.7. On
observe de la mme faon la formation du driv trans-1,2 lorsquil y a un grou-
pement participant sur la position 2 du sucre. Nous dtaillerons titre dexemple
la prparation du compos 3.42 que lon trouve au point dancrage de la chane
oligosaccharidique sur la chane polypeptidique dans les glycoprotines[2s] [26]
(voir le chapitre 13). Lazote de la fonction amide serait sans doute trop peu
nuclophile pour quon puisse envisager une condensation directe sur le sucre
libre. A partir de lhalognose peractyl 3.43 driv de la N-actylglucosamine,
la substitution par iazoture de ttrabutylammonium donne Iazoture quatorial
3.44, rduit en amine 3.45 par hydrognation catalytique sur du platine. On
condense lamine 3.45 avec le carboxyle libre de laspartate partiellement prot-
g 3.46 au moyen de N, N-dicyclohexylcarbodiimide. La synthse se termine par
hydrolyse alcaline des fonctions esters et la libration de la fonction a-amino de
la partie aspartate par hydrognation catalytique.
64
NHrC- H
Alkyl et aryl glycosides. Glycosylamines
CH,OAc
BnOCONH-
A c o = & R Ac0
C - H
Proprits des glycosylamines
I1y a mutarotation en solution. La figure 3.6 donne un mcanisme possible. La
protonation de loxygne cyclique est suivie de louverture du cycle, qui donne un
intermdiaire o le carbone anomrique a perdu sa chiralit. Le mme interm-
hR,
Figure 3.6 Mcanisme propos pour lhydrolyse dune glycosylamine.
diaire peut voluer vers la formation du produit dhydrolyse, qui est trs rapide
avec les glycosylamines, sauf aux pH extrmes suprieurs 9, ou infrieurs 1,5.
En milieu trs acide, la protonation de lazote introduit une charge positive qui
soppose celle de loxygne. Par exemple, la B-D-glucosylpipridine est stable
17 h O dans HCl 2N. La vitesse dhydrolyse est maximum au voisinage de
pH 5. Les arylglycosylamines sont plus rsistantes.
Les N-glycosylamines se rarrangent au chauffage en prsence de traces
dacides en drivs arylamins de ctose. Par exemple la glucosylamine 3.41
donne le fructose amin 3.47. En fait, la raction se produit avec les glycosyla-
mines les plus varies, drives damines aliphatiques, dacides amins, etc., avec
quelques variations dans les procds. Elle est connue sous le nom de rarrange-
ment d Amadori. La biosynthse de lindole dans les entrobactries fait interve-
nir un tel rarrangement, dont chaque tape est catalyse enzymatiquement. Un
driv activ du phosphate du ribose 3.48 se condense lacide anthranilique
3.49, donnant une N-aryl ribosylamine 3.50. Le rarrangement de 3.50 conduit
3.51 qui a un carbonyle libre. Lattaque lectrophile sur le carbone ipso du car-
boxyle, suivie de dshydratations, donne le cycle indole li un triol phosphate,
3.52. Celui-ci se dtache ensuite par rupture rtroaldolique.
Un autre rarrangement remarquable dans cette srie est le rarrangement de
Heyns. Les ctosylamines se transforment en 2-amino-2-doxyaldoses dune
manire strospcijique. Le fructose dans lammoniac alcoolique donne une
fructosylamine 3.53 qui se transforme spontanment en 2-amino-2-doxy-D-glu-
cose 3.55. On observe la mme raction spontane avec dautres fructosylamines
substitues lazote, par exemple 3.54 donne 3.56. Parfois il faut une catalyse
NHAr
e C H 2 O H OH
3. 47
CH,OPO,H, y70H+a; - JQ C02H
OH OH OH
3. 48 3. 49 3. 50
CH,OPO,H,
3. 51
CH,OH
HO
3. 53 R=H
3. 54 R=CHMe,
3. 52
H &O,
Ho - OH NHR
3. 55 R=H
3. 56 R=CHMe,
acide. Cest au moyen de ce rearrangement que les cellules fabriquent le sucre
amin 2-amino-2-doxy-D-glucose, fondamental dans leur conomie, partir du
fructosyl-phosphate. Le donneur du groupement NH, est lacide amin glutami-
ne. Nous avons dj signal cette biosynthse, qui explique lappartenance de la
N-actyl-glucosamine la srie D des sucres, au chapitre 1, paragraphe 1.2.
3.6.3 Nuclosides[27]
Dans ces aminoglycosides, lazote fait partie dun htrocycle et le sucre est le
D-ribose, ou son driv dsoxygn en 2, le G dsoxyribose , dont le nom correct
est 2-dsoxy-D-rythro-pentose, tous les deux ltat de furanose. Les ribosides,
lis par des fonctions phosphodiester entre les fonctions alcool 3 et 5, forment
lacide ribonuclique (ARN), et les dsoxyribosides forment de la mme faon
lADN. Llucidation progressive du rle de ces deux molcules en gntique est
sans doute la dcouverte la plus importante de la seconde moiti du xxe sicle, et
lauteur pense quaucune personne cultive na le droit dignorer les formules
3.57,3.58, 3.59 et 3.60, dune part, et 3.61, 3.62, 3.63 et 3.64, dautre part, quel-
le que soit sa formation par ailleurs. La chimie de lADN et de 1ARN ne fait pas
partie du cadre de cet ouvrage, seul laspect aminoglycoside sera trait. Donc la
longueur de ce paragraphe est sans commune mesure avec limportance de ces
molcules.
On trouve en plus dans les acides nucliques, en particulier dans lacide ribo-
nuclique de transfert (t-RNA), une cinquantaine de nuclosides modifis, en
OH R
3. 57 R=OH, R=H
3. 5 8 R=H, R=CH,
OH R
3. 59 R=OH
3. 60 R=H
3. 61 R=OH
3. 62 R=H
3. 63 R=OH
3. 64 R=H
gnral assez voisins des types fondamentaux. Enfin, on trouve ltat naturel un
trs grand nombre de nuclosides, comportant des bases htrocycliques varies,
et des sucres varis, souvent dous de proprits thrapeutiques plus ou moins
grandes. Comme les produits de cette dernire catgorie ne sont pas des consti-
tuants universels de la cellule vivante, ils sont galement en dehors du cadre de ce
livre.
Les nuclosides fondamentaux sont facilement prpars par hydrolyse chi-
mique ou enzymatique, partir de sources abondantes comme 1ARN de la levu-
re et lADN de la laitance de poisson et sont commercialement disponibles. Les
synthses que nous allons donner ne se justifient donc que dans leur extension
la prparation de nuclosides modifis, ou marqus isotopiquement. On obtient
ladnosine par condensation du chlorure de ribofuranosyle activ 3.65 avec le
driv chloromercuriel de la 6-benzamidopurine 3.66, suivie de dbenzoylation.
(Raction (3.14)).
H A ,
3.65
CH20Bz
I
(3.15) $- >OAc -I-
l I
OBz OAc
kgCl
3. 66
Ac SiMej
\ /
CAOSiMe3 -- a-.) OH OH
3. 67
On prpare souvent les nuclosides pyrimidiques par la mthode de
Vorbriiggen[28]. Le driv silyl de la base est condens avec le peractate du
sucre froid en prsence de SnC1,. La raction (3.15) donne la prparation dune
homocytidine 3.67 par cette mthode[29]. Vorbrggen a introduit dautres cataly-
seurs plus rcemment. On remarquera que lon obtient uniquement, avec un
excellent rendement, le driv P-truns-1,2. Ceci est une consquence, une fois de
plus, de la prsence dun groupement participant en C(2). Aussi, lorsquon
applique ces mthodes la prparation des dsoxyribonuclosides obtient-on en
gnral un mlange de nuclosides a et p.
Pour dautres composs, on a trouv avantageux de construire lhtrocycle sur
lazote de la ribosylamine. Le traitement du ribose par lammoniac donne la ribo-
pyranosylamine 3.68 qui subit une rgression de cycle lors de la ctalisation avec
lactone ; on obtient 3.69. La condensation de 3.69 avec le driv 3.70 du cya-
noactate de mthyle donne le P-ribosylimidazole 3.71. Dsactalation et dcar-
CH20H *2
I I
H w w 2 OH
O x 0
3. 68 Me Me
3. 69
Rfrences 69
C0,Me
EtO-CH=N-CH
C-N
3. 70
OR OR
3. 7 1 R,R=CMe, R=CO,Me
3. 72 R=R=H
boxylation de 3.71 conduisent au nucloside 3.72 dont le phosphate est le prkcur-
seur naturel des nuclosides drivs de ladnine[301 et de la pyrimidine de la thia-
RFRENCES
R. J . Ferrier et P. M. Collins, Monosaccharide Chemistry, (chapitre 3) Penguin Books,
Harmondsworth, 1972.
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nismes donns dans ces ouvrages [ 11, [2], [3] et [4], le lecteur se rappellera que, si les
faits demeurent, leur interprtation volue vite.
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I. Augestad et E. Berner, Acta Chem. Scand., 8 (1954) 251-256.
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Perkin I (1 973) 1720- 173 1.
CHAPITRE 4
Nomenclature
4.1 INTRODUCTION
Nous avons diffr jusquici lexpos de la nomenclature des sucres en raison
de la scheresse du sujet. Nous esprons avoir suffisamment intress le lecteur
dans les trois premiers chapitres pour quil se sente le courage daborder celui-ci.
De cette nomenclature, nous ne donnerons que les rgles utiles dans cet ouvrage.
Leur connaissance permet daborder la littrature originale et leur extrapolation
des situations non envisages ici est possible avec un minimum de sens de la
gnralisation. Ces rgles sont extrmement commodes. Les noms correspondants
sont utiliss ( de minimes dtails prs) dans les tables par composs chimiques
(Chemical Substances Index) de Chemical Abstracts. Ce sont galement les noms
que lon doit employer dans les parties exprimentales des mmoires, en tte des
paragraphes qui dcrivent des prparations.
4.2 NOMENCLATURE DES ALDOSES
4.2.1 Noms courants des sucres et symboles de configuration
Les noms fondamentaux des aldoses, avec une chane 3-10 carbones et au-
del, sont : triose, ttrose, pentose, hexose, heptose, octose, nonose, dcose, etc.
On numrote la chane partir du carbone porteur de la fonction aldhyde, relle
ou potentielle. A ces noms, il faut ajouter un symbole qui dcrit la configuration
des hydroxyles. Ces symboles drivent des noms communs des sucres. Le tableau
4.1 donne la configuration et le nom commun des sucres de la srie droite, de C,
C,. Les sucres sont dessins selon la projection de Fischer. Cest toujours ce
mode de reprsentation quil faut revenir pour trouver le nom systmatique dun
driv de sucre.
Ce tableau doit tre complt par le tableau de la srie gauche, dont les 616-
ments sont deux deux symtriques de ceux du tableau 4.1. Les dfinitions des
sries droite et gauche ont t donnes ds le chapitre 1. Rappelons que la srie
droite est dfinie par lorientation droite de lhydroxyle alcoolique secondaire de
rang le plus lev. On omet parfois le descripteur de srie pour glucose, galacto-
H - 3 - O H
I 1
I I
H - 3 - H H O - 3 -
O H 3
x o y q i - a
O H 3 O H 3
H O - H o z H 3 4
H O - 4 4
H O - 3 4
O H 3
a a o q i i J a - a
I
H O - 4 4
O H 4
Z L
Nomenclature des aldoses 73
CHO
F C- OH
CHO
- O H
H- -OH
F
CH,OH CH,OH
4. 1 4 . 2 4 . 3
CHO
OH
D-glco
OH
OH
OH Dglycro
.......................
I ..........~~~~.........
CH,OH
CHO
L-ribo
4 . 4
CH,OH
4. 5
daire. On dcrit ces configurations par une association de symboles. On part du
centre chiral le plus prs de la fonction aldhyde, on regroupe les centres chiraux
par groupes de 4, jusqu ce quil nen reste plus que 3, 2, ou 1, qui forment un
dernier groupe du ct de lextrmit non rductrice. A chacun de ces groupes, on
peut attribuer un symbole de configuration. Dans le nom systmatique, on les nu-
mre dans lordre partir de lextrmit non rductrice : D-glq.cro-D-gluco-hep-
tose, 4.4., L-ribo-D-manno-nonose, 4.5.
4.2.2 Sucres dsoxygns
Le remplacement dun hydroxyle alcoolique par de lhydrogne sindique par
le prfixe doxy-, prcd dun chiffre qui donne la position dsoxygne. Nous
pouvons maintenant donner les noms systmatiques complets des trois sucres 4.1,
4.2 et 4.3, cest--dire : 2-doxy-D-rythro-pentose, 3-doxy-D-rythro-pentose
et 4-doxy-D-rythro-pentose. Un souci prsent dans cette nomenclature est de ne
pas introduire de terme qui suggre la prsence de plus de centres chiraux quil
ny en a rellement. Ainsi le nom courant << dsoxyribose >> a une connotation
74
HO
F
Ho- F-
H D - C-H
WC-OH
F E -OH
CH,
4. 6
Nomenclature
Yo
W C- OH
FHO Yo
w-M, *C-OH
FtC- N,
4. 7 4. 8 4 . 9
incorrecte, parce que ce sucre na que deux carbones asymtriques alors que la
racine << rib0 D suggre la prsence de la configuration du ribose, avec trois car-
bones asymtriques. En bref, ne pas introduire de centre chiral une extrmit du
nom systmatique pour leffacer lautre extrmit.
La dsoxygnation de la fonction alcool primaire ne supprime pas de centre
chiral. Par exemple, la varit naturelle la plus abondante du fucose, le L-fucose,
4.6, a comme nom systmatique 6-doxy-L-galacto-hexose.
4.2.3 Sucres substitus par NRR, F, C1, Br, I, N,, alkyl-S et phnyl-S
On remplace dabord le groupement non oxygn par un hydroxyle, ce qui
donne la configuration de base. Ainsi celle du driv amin 4.7 est celle du D-
galacto-hexose, 4.8. La filiation entre 4.8 et 4.7 sindique avec deux prfixes : lun
deux est dsoxy-, introduit au paragraphe prcdent, et lautre prcise la nature
du substituant. Les descripteurs les plus courants sont amino, actamido, fluoro,
chloro, bromo, iodo, azido, alkylthio, phnylthio. Lemplacement est donn par un
chiffre qui prcde chaque prfixe. Exemple pour 4.7 : 2-amino-2-doxy-D-
galacto-hexose. On admet les noms de galactosamine, glucosamine et mannosa-
mine pour les 2-amino-2-doxy-D-galacto-, D-gluco- et D-manno-hexoses.
Le mme principe permet de dsigner 4.9 comme le 3-azido-3-doxy-D-allo-
hexose, 4.10 comme le 4-doxy-4-iodo-D-talo-hexose, 4.11 comme le 5-doxy-S-
mthyithio-D-ribo-pentose. Les prfixes doivent se succder dans lordre alpha-
btique, avant les descripteurs de configuration.
4.2.4 Drivs substitus sur loxygne
On indique cette substitution par un 0 majuscule en italique, suivi dun tiret
puis du nom du substituant, et prcd dun chiffre qui indique la position de
loxygne substitu sur la chane. On ne rpte pas les substituants identiques.
Exemples : 3-O-benzyl-D-galacto-hexose 4.12, 3-O-benzyl-6-O-mthyi-D-
galacto-hexose 4.13, 3,6-di-O-benzyl-D-galacto-hexose 4.14. Dans ces drivs
directs dun sucre du tableau 4.1 (ou dun sucre symtrique), on simplifie les
noms en 3-O-benzyl-D-galactose, 3,6-di-O-benzyl-D-galactose, etc.
Yo
HO- C-H
HO-C-H
4. 10
Yo
F
*C--OH
FC-OH RO- C-H EEC-OH
H W -CH,
Ho-F-H W -OH
W -OH
F -OH F -OH
CH,OR' CH,SCH,
Yo
CHO W C- OH
F
F
F &OH
4. 11 4. 12 R=Bn,R'=H 4. 15
4. 1 3 R=Bn, R'=CH,
4. 14 R=R'=Bn
La substitution sur le carbone s'indique de mme avec un C majuscule en ita-
lique. Exemple : 4-C-mthyl-D-gulo-hexose, 4.15.
4.2.5 Formes acycliques
En raison du caractre exceptionnel des formes acycliques, certains auteurs
prfrent insister sur cette particularit. Le compos 4.16 s'appellera 2, 3,4, 5 , 6-
penta-O-actyl-aldhydo-D-gluco-hexose, plus brivement aldhydo-D-glucose
pentaactate.
On notera que le prfixe aldhydo n'ajoute rien au premier nom, mais qu'il est
indispensable au second.
4.2.6 Formes cycliques
On indique la dimension du cycle en remplaant la terminaison << se >> du nom
du sucre par e furanose >> pour un cycle 5 lments, << pyranose >> pour un cycle
6 lments et << septanose >> pour un cycle sept lments. Comme nous l'avons
dj vu, l'hydroxyle hmiactalique s'appelle anomrique. L'anomre a est celui
qui en projection Fischer se trouve du mme ct que l'oxygne li au carbone asy-
mtrique dont la configuration dfinit la srie. Le symbole de configuration ano-
76 Nomenclature
I - - - - - - - - - -
7
F
7
E F -OH
W C-OH
HO-C-H
F --OH
I+
"-TH CH,OH
4.19
mrique, a ou p, est plac avant le symbole de srie. Exemples : p-D-galactopy-
ranose, 4.17, a-D-glucopyranose, 4.18, L-glycro-B-D-gluco-heptopyranose, 4.19.
On forge le nom des glycosides (voir le chapitre 3) en remplaant la terminai-
son << se >> de la forme cyclique par << ide . Le nom du groupe qui substitue
l'hydrogne hmiactalique est mis en avant, comme un mot spar. Exemple :
mthyl a-D-gulofuranoside, 4.20.
Le radical form par dtachement de l'hydroxyle anornrique est dsign en
remplaant la lettre terminale e >>par << yle . Exemples : bromure, 4.21 ou phos-
phate dipotassique, 4.22 de ttra-O-actyl-a-D-glucopyranosyle. Dans le cas du
remplacement par un groupe amino, on ajoute la terminaison amine : 2-actami-
do-2-doxy-~-D-glucopyranosylamine, 4.23.
Ac0 2
p m H 3 OH AcNH
CH,OH
4. 20
X
4. 21 R=Br 4. 23
4. 2 2 R=OPO,K,
4.2.7 Alditols
Ils drivent du nom du sucre parent par le remplacement de << ose >> par << itol .
Le mme alditoi peut driver de plusieurs sucres parents. Ainsi le D-arabinitol
4.24, nomm comme un driv du D-arabinose, est aussi accessible par rduction
du D-lyxose et pourrait tre appel D-lyxitol. Diverses rgles, que nous ne don-
nerons pas ici, permettent de slectionner un nom unique.
WC-OH pC H 3
Ek e O A c
I
I
HO- C-H
AcO- C-H
I
H-C-H
ACo-F-H
CH,OAc
4. 24 4. 25 4. 26
FH,OH N HO
HO
F &- OH
Ho-bvco HO-7-H I
vL,/ F- OH OH
1
4. 29 R=H
4. 30 RSH,
OH
4. 27
4. 28
4.2.8 Acides aldoniques
Ce sont les acides carboxyliques qui rsultent de loxydation de la fonction
aldhyde. On les nomme en remplaant << ose D par (( onique . Les sels, esters,
halognures, amides et nitriles sont dsigns suivant les rgles habituelles de la
nomenclature organique. Exemples : D-gluconate de sodium, 4.25, ttra--actyl-
L-arabinonate de mthyle, 4.26, D-glucono- 1,4-lactone, 4.27, D-glucononitrile,
4.28.
4.2.9 Acides uroniques
On appelle ainsi les acides monocarboxyliques rsultant de loxydation de la
fonction alcool primaire des aldoses. On les dsigne en remplaant la terminaison
<< ose >> du nom courant ou systmatique par << uronique >> et la terminaison
<< oside D dun glycoside par << osiduronique . Exemples : acide a-D-galacturo-
nique, 4.29, a-D-galactopyranuronate de mthyle, 4.30.
4.2.10 Actals cycliques
On les crit par extension des rgles applicables aux drivs dalcools, avec
comme prfixe, des noms de radicaux divalents tels quil existent dans la nomen-
78 Nomenclature
I R
F C- OH
HO- C-H
4. 31
4. 32 4. 33 R=OCH,
4. 34 R=SCH,
CH,OH
CO
O CH,OH
4. 35
4. 36 4. 37
4. 39
4. 38
clature gnrale. Exemples : mthyl 4,6-O-benzylidne-a-D-glucopyranoside,
4.31, 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne-a-D-glucofuranoside, 4.32.
4.2.11 Actals et thioactals
On emploie les mots actal et thioactal la suite du nom du sucre gnrateur.
Exemples : D-glucose dimthyl actal, 4.33, D-glucose dimthyl dithioactal,
4.34.
4.2.12 Anhydrides intramolculaires
On fait prcder le nom du sucre du prfixe N anhydro >> suivi dun tiret. Ce
prfixe est prcd de deux chiffres qui indiquent le rang des carbones ponts.
Exemple : 1,6-anhydro-P-D-glucopyranose, 4.35.
Ctoses 79
Les oxiranes drivs de sucres rentrent dans cette catgorie. Remarquez que
4.36, mthyl 2,3-anhydro-4,6-0-benzylidne-a-D-allopyranoside, est nomm
comme un driv d o . Dans le D-allose de base, chacun des hydroxyles ports par
les carbones 2 et 3 a la mme position que le pont oxygne de 4.36 par rapport au
cycle pyranose.
4.3 CTOSES
On les classe comme 2-ctoses, 3-ctoses, etc., selon la position du carbonyle
dans la chane. On peut supprimer 2 pour les 2-ctoses, varit naturelle commu-
ne. On remplace la terminaison << ose >> du nom de base par << ulose . Ainsi le
fructose est un 2-hexulose, ou, plus simplement, un hexulose. Pour le nom com-
plet, on le fait prcder du prfixe de configuration. Le nom systmatique du fruc-
tose 4.37 sera D-arabino-2-hexulose. Dans le cas des 2-ctoses, il ny a pas dam-
bigut possible sur la configuration des pyranoses et furanoses. La nomenclature
est calque sur celle des aldoses. Exemple : B-D-fructopyranose 4.38. Le mthyl
glycoside 4.39 de lacide sialique se dnomme : acide mthyl 5-actamido-3,5-
didoxy-D-glycro-a-D-galacto-2-nonulopyranosidonique.
CHAPITRE 5
Ractions des hydroxyles
5.1 DRIVS FONCTIONNELS
5.1.1 Importance des ractions de protection
Dans la majorit des sucres, tous les carbones sont fonctionnels. Si lon veut
faire ragir une fonction particulire avec les procds habituels de la chimie
organique, il faut << protger B les autres fonctions. Ceci veut dire les transformer
en drivs inertes dans les conditions de la raction envisage, mais nanmoins
reconvertibles en fonction de dpart une tape ultrieure. Nous appellerons cette
dernire phase << dprotection . I1est souvent utile de protger les diverses fonc-
tions dune mme molcule par des drivations de nature diffrente, de faon
pouvoir effectuer des dprotections slectives. Nous avons dj rencontr la pro-
tection la plus universelle de lhydroxyle hmiactalique, qui est la glycosidation
(voir le chapitre 3). I1ny aura pas que des ractions de protection dans ce para-
graphe. Certains drivs fonctionnels ont un rle analytique et les phosphates et
sulfates sont des produits naturels universellement rpandus quil est utile de
savoir prparer par synthse. On traitera les sulfonates au paragraphe 6.1, en intro-
duction aux ractions dinversion de configuration.
5.1.2 thers
On les prpare communment par action des halognures et des sulfates sur les
alcoolates. Ces conditions basiques dtruiraient les sucres libres, quil faut
dabord transformer en glycosides. Les thers mthyliques ne servent que pour les
applications analytiques et les dterminations de structure. On met ainsi profit
leur grande stabilit. On trouvera leur prparation pour ces applications au para-
graphe 9.4.3.
Les thers benzyliques sont trs employs. Nous avons dj rencontr un
exemple dutilisation au paragraphe 3.5.3, o est dcrite la synthse du mthyl tn-
O-benzyl-a-L-fucopyranoside, 3.36. On pratique le plus souvent la benzylation
en milieu alcalin. On peut employer comme solvant loxolane, mais la raction est
beaucoup plus rapide dans la N, N-dimthylformamide (DMF), qui par ailleurs est
un meilleur solvant des sucres peu protgs. Comme base, on a utilis KOH, mais
Drivs fonctionnels 81
on prfre maintenant prformer lalcoolate avec NaH en trs lger excs. Le
ractif alkylant est le bromure de benzyle. Les thers benzyliques sont stables
dans les conditions acides modres et en milieu alcalin. Dune faon gnrale,
les thers benzyliques sont coups par hydrognation catalytique suivant lqua-
tion (5.1).
PdIC
(5.1) R-O-CH,Ph +H, - R-OH+PhCH,
La dprotection a lieu par hydrognation catalytique en prsence de palladium
sous une pression dhydrogne de quelques atmosphres. Ceci restitue les fonc-
tions hydroxyles et le tolune est facilement sparable. Lhydrognolyse par
transfert ne demande aucun quipement spcialis. On fait bouillir reflux une
solution alcoolique du sucre protg en prsence de palladium sur charbon, avec,
comme donneur dhydrogne, le cyclohexne ou le cyclohexadine qui saroma-
tisent dans la raction.
On prpare les thers paramthoxybenzyliques comme les thers benzyliques.
Ils sont coups par oxydation par la 2,3-dichloro-5,6-dicyanobenzoquinone
(DDQ) ou le nitrate crique ammoniacal, (NH&Ce (N02)6 (Raction (5.2)). Le
moteur de la raction est loxydation de la position benzylique du groupement
protecteur, grandement facilite par le mthoxy en pura.
O
OMe OMe
Le chlorotriphnylmthane, Ph,CCl, ragit dans des conditions plus modres
sur le sucre dissous dans la pyridine. A froid, si on ne prolonge pas induement la
dure du traitement, seule la fonction alcool primaire est thrifie. Par exemple,
on obtient lther 5.1 avec le mthyl a-D-glucopyranoside. Ces thers sont hydro-
lyss dans des conditions acides trs modres, par exemple dans lacide actique
aqueux 80C. I1y a un risque dhydrolyse, galement, lorsquon les chromato-
CH,OCPh,
* -
OMe
5 . 1
graphie sur gel de silice ; enfin, ils sont coups par hydrognolyse dans les mmes
conditions que les thers benzyliques.
On prpare les thers allyliquesI1 comme les thers benzyliques, avec du bro-
mure dallyle. La dprotection seffectue en deux temps : a) isomrisation en ther
propnylique par chauffage en prsence dune base forte (Me,COK) ou dun cata-
lyseur complexe de mtal de transition ; b) rupture par traitement de lther pro-
pnylique par un sel mercurique (Ractions (5.3)). On voit quon peut dprotger
un hydroxyle transform en ther allylique sans toucher des protections benzy-
liques sur la mme molcule. Linverse nest pas vrai : en prsence de palladium,
un ther allylique est partiellement hydrognolys, partiellement rduit en ther
propylique, qui est un cul-de-sac synthtique.
U b
( 5. 3) R-O-CH,-CH=CH,-R-O-CH=CH-CH, -R.OH
On obtient les thers phnyliques en traitant les diols par le diactoxytriph-
La raction (5.4) donne un nylbismuth dans le dichloromthane
exemple de cette transformation dont le mcanisme nest pas connu.
(5.4) Bn k O B n Ph,Bi(OAc), * BnO p h h o B .
5.1.3 Drivs silyls
Les << thers P trimthylsilyls sont trop labiles pour assurer une protection des
hydroxyles. On a dcrit leur synthse et leurs applications analytiques au chapitre 1.
En synthse, on leur prfre les thers ter-butyldimthylsilyls, obtenus avec le
ter-butylchlorodimthylsilane Me,CSiMe,Cl, par raction dans la pyridine en
prsence dimidazole. Leur stabilit nest cependant pas parfaite. On gagne enco-
re en stabilit en convertissant les alcools en drivs ter-butyldiphnylsilyls,
obtenus avec le ter-butylchlorodiphnylsilane[3]. Lthrification a lieu temp-
rature modre dans la DMF, en prsence dimidazole. Cette dernire protection
rsiste lhydrognolyse catalytique et aux conditions dhydrolyse des actals.
Tous les thers silyls sont hydrolyss en prsence de fluorures. Ces sels ont des
ractions lgrement alcalines, ce qui peut amener des migrations de groupement
actyle.
5.1.4 Esters dacides organiques et carbonates
Sur les glycosides, on pratique actylation et benzoylation selon les techniques
traditionnelles, avec les ractifs (CH,CO),O, CH,COCl, PhCOC1, et une base,
pyridine ou trithylamine. Les nouveauts apparaissent dans lacylation des
sucres libres. I1se forme toujours essentiellement des peractates pyranosiques et
on a trouv des conditions permettant dorienter vers la production de lun ou de
lautre anomre. Ainsi, en prsence de ZnC12, ou dautres catalyseurs acides, dans
des conditions anomrisantes, on obtient lanomre le plus stable, groupement
acyl axial, tel le penta-O-actyl-a-D-glycopyranose. Ce nest malheureusement
pas lanomre le plus intressant en synthse en raison de sa faible ractivit. On
vite largement sa formation en oprant dans lanhydride actique loo, avec
lactate de sodium comme base, conditions qui permettent de prparer lanomre
quatorial 5.2.
rn
H,OAc
A c - Ac0
OR NvN-Co-Ph
Ac0
5 . 4
5. 2 R=Ac
5 . 3 R=H
On dprotge les glycosides actyls par mthanolyse alcaline, en les traitant
froid par du mthanol qui contient environ 1 % de CH30Na. Les groupements
actyle, transfrs sur le solvant, donnent lactate de mthyle volatil. On ne peut
dsactyler loxygne anomrique de cette faon, car la fonction hmiactal
produite serait rapidement dcompose dans le milieu alcalin. Les groupements
actyle sont stables dans les conditions neutres ou acides modres, et ont effec-
tivement t employs comme protections dans certaines synthses doligosac-
charides. Cependant, la scurit nest pas totale, car, dans les produits partielle-
ment actyls, il peut y avoir des migrations, probablement par des intermdiaires
cycliques, selon le schma ractionnel (5.5).
COCH,
( 5. 5)
Pour la prparation des trichloractimidates, utiliss en couplage osidique (voir
le paragraphe 10.3.2), il faut pouvoir dsactyler slectivement la position ano-
mrique. On y arrive, partir de lanomre p, en le traitant par lactate dhydra-
zine14]. Ainsi on peut prparer 5.3 partir de 5.2 par cette mthode.
5.1.5 thrification et acylation slectives. Drivs organostanniques
Nous avons dj rencontr des drivations slectives, par exemple avec le chlo-
rotriphnylmthane et le ter-butylchlorodiphnylsilane, qui thrifient slective-
ment les fonctions alcool primaire. Le chlorure de pivalyle Me3CCOC1 manifeste
aussi une prfrence pour cette position. On peut observer des ractions slectives
avec le ractif benzoylant attnu N-benzoylimidazole 5.4. Lorsquil sagit de dis-
tinguer entre des positions secondaires, on peut avoir avantage passer par des
intermdiaires qui se prsentent formellement comme des alcoolates du cation
dibutyltain, Bu2,%++.
Le ractif est loxyde polymre (Bu,SnO),, une poudre insoluble. Lorsquon
chauffe un glycol en solution benznique bouillante avec cette poudre, en limi-
nant leau avec un sparateur Dean-Stark, la poudre se dissout et il se forme un
complexe pentacoordonn de ltain, gnralement dimre, 5.5 (n =0,l) selon la
raction (5.6). On peut transfrer le produit dans un solvant polaire, o il est alors
monomre, avec coordination au solvant, 5.6. On voit sur cette structure plus
simple que, mme si le glycol tait symtrique, les deux oxygnes se sont diff-
rencis dans le driv stannique, lun tant apical et lautre quatorial. Cest ga-
lement vrai dans chacun des monomres associs selon 5.5, mais il y a l une dif-
frenciation supplmentaire puisque lun des oxygnes est tricoordonn, donc
sans pouvoir nu~lophile[~l. Le nom de << stannylne >> pour ces produits, gnra-
lement utilis, y compris par lauteur, nest pas correct dans le cadre de la nomen-
clature organomtallique, o il dsigne un driv neutre R-Sn-R.
(CH,), + 2 Bu,SnO -
\ CH20H
Solvant
5 . 6
RO H & +
HO
5 . 7 R=H
5 . 8 R=OBn
On prpare de la mme faon les stannylnes de drivs de sucres o subsis-
tent deux hydroxyles non protgs et convenablement situs. Les chlorures
dacides ragissent en moins dune minute froid sur les stannylnes, en solution
benznique ou dans la DMF, donnant le monoester dune faon strictement rgio-
slective. Les halognures de benzyle et d allyle conduisent aux thers corres-
pondants chaud dans la DMF. L encore, la raction est rgioslective.
On nobserve pas de raction entre les halognures de benzyle ou dallyle et les
stannylnes, mme chaud dans le benzne, o ces drivs sont apparemment
polymres. Cependant, on peut prparer ces thers avec de bons rendements dans
le benzne au reflux en oprant en prsence de quantits catalytiques dhalog-
nues de ttralkylammonium ; et cest ainsi quon peut observer la plus stricte
rgioslectivit dans les cas difficiles. Le benzyl B-D-galactopyranoside 5.7 trans-
form en stannylne, puis trait par le bromure de benzyle en prsence de bromu-
re de ttramthylammonium dans le benzne bouillant est benzyl exclusivement
en 3, pour donner lther 5.8 avec 67 % de rendement. On notera la prfrence
pour loxygne en 3 sur les trois autres, dont lun participe une fonction alcool
primaire. On trouvera au paragraphe 10.1 un exemple de slectivit encore plus
grande.
Quelle peut tre lorigine de cette slectivit ? Sur le glycoside 5.7, il y a au
moins trois couples dhydroxyles capables de former un stannylne. On peut sup-
poser quils se forment tous les trois, mais sont en quilibre et que les enthalpies
libres de tous les dimres, ou polymres suprieurs possibles, sont assez diff-
rentes pour quun seul subsiste pratiquement la fin. Ceci slectionne un couple
dhydroxyles et diverses contraintes dues la nature de la molcule de sucre font
que lun de ces deux hydroxyles prfre la position apicale.
5.1.6 Phosphates
Dans la majorit des cas, la conversion mtabolique dun sucre dans une cel-
lule dbute par sa conversion en ester phosphorique. On a dabord labor des
synthses de phosphates de sucres pour les avoir plus commodment disposition
pour les recherches en biochimie. Plus rcemment, lintroduction des mthodes
enzymatiques en chimie prparative a cr la demande pour des quantits impor-
tantes. Ce sont encore prcisment des mthodes enzymatiques qui permettent
leur prparation une chelle trs leve. Ainsi le D-glucose 6-phosphate est
obtenu par phosphorylation du glucose par un triphosphate, ladnosine triphos-
phate (ATP) que nous symboliserons de faon plus explicite par A-O-PO (OH)-
O-PO (OH)-O-PO,H,, qui transfre son phosphate terminal en prsence de len-
zyme hexokinase. Lagent phosphorylant est transform en adnosine diphosphate
ADP, ou A-O-PO(OH)-O-P0,H2 (Raction (5.7)). En raison du prix trs lev
OH OH
I
(5.7) + A-O-PO-O-PO-O-PO,H, -
OH
p
CH,-OPO,H,
H - H + A-O-PO-O-PO,H,
OH
dATP, il faut coupler la raction (5.7) avec un systme de rgnration, le trans-
fert de phosphate sur ADP partir du phosphate de lnol de lacide pyruvique
(phosphate facilement accessible et peu couteux), catalys par lenzyme pyruvate
kinase (Raction (5.8)). On mlange dans le mme rcipient glucose, phosphate
de lnolpyruvate, hexokinase et pyruvate kinase et une quantit catalytique
dATP (de lordre de 1 mole %) et le systme fabrique le D-glucose 6-phosphate
jusqu puisement du phosphate dnol pyruvate. Les kinases sont facilement
accessibles et, si elles sont immobilises sur un support insoluble (voir le para-
graphe 10.4.1), elles sont rutilisables un certain nombre de fois. On fabrique ais-
ment ainsi le glucose 6-phosphate lchelle de 250 gr6].
OPO,H,
p
(5. 8) A-O-PO-O-PO,H, + CH,=C-COOH A
OH OH
I I
A-O-PO-O-PO-O-PO,H, + CH,COCOOH
La phosphorylation de lhydroxyle anornrique donne un phosphate de glyco-
syle. On prpare ces composs par des mthodes non enzymatiques. Un bref
chauffage 50 du pentaactate p 5.2 avec H,PO, anhydre donne environ 50 %
de phosphate de B-D-glycopyranosyle ttra-actyl, qui se transforme en anom-
re a par chauffage prolong. Ces phosphates de glycosyle sont plus labiles en
milieu acide que les monoesters phosphoriques ordinaires.
Dune faon gnrale les phosphates de sucres sont plus acides que lacide
phosphorique.
5.1.7 Hydrognosulfates
Un certain nombre de phnomnes de reconnaissance font intervenir des sucres
sulfats. On trouvera des exemples de synthse au chapitre 17. On prpare un
hydrognosulfate par action du trioxyde de soufre sur lalcool dissous dans la
DMF en prsence de trithylamine (Raction (5.9)).
(5.9)
R - OH +SO, + R - O - S03H
5.2 ACTALSl7l
Les actals sont btis sur un couple doxygnes dhydroxyles. Dans lactala-
tion dun sucre ou dun driv de sucre qui prsente plus de deux hydroxyles
libres, plusieurs actals sont priori possibles. La plupart du temps, on utilise un
catalyseur acide qui acclre ltablissement de lquilibre entre les actals pos-
sibles et on isole finalement le plus stable comme produit majoritaire.
Les aldhydes forment de prfrence des 1,3-dioxanes. Le traitement du glu-
cose par le benzaldhyde et le mthanol en prsence de chlorure de zinc donne
Actals 87
facilement le mthyl 4,6--benzylidne-a-D-glycopyranoside 5.9. Cependant, il
ny a pas dobjection ce que les aldhydes bouclent un cycle 1,3-dioxolane sur
deux hydroxyles cis vicinaux sil ny a pas dautre possibilit.
Par contre les ctones ne forment les 1,3-dioxanes que dans des conditions
exceptionnelles et gnralement bouclent un cycle 1,3-dioxolane sur des
hydroxyles cis. Sil y a une possibilit tautomrique, le tautomre le plus favo-
rable ce mode dactalation est slectionn. Le glucose donne avec lactone et
le chlorure de zinc le bis actal furanosique 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne-a-D-
glucofuranose, 5.10, et le galactose le bis actal pyranosique, 1,2 ; 3,4-di-O-iso-
propylidne-a-D-galactopyranose, 5.11. Mais le mthyl a-D-galactopyranoside,
qui ne possde quune paire dhydroxyles vicinaux cis, donne le monoactal 5.12.
Ces prfrences sobservent aussi dans lactalation du D-glucitol, reprsent
selon le zig-zag plan, 5.13 : le benzaldhyde conduit au tri-actal 5.14 et lacto-
ne au tri-actal 5.15. Cependant des techniques particulires permettent de prpa-
5 . 9
Me
Me %EA
OkO
Me Me
5. 11
OH OH
1
CH3
5. 10
Me
HO OMe
5. 12
OH OH
5. 13
O, / O
CHPh
5. 14
5. 16
5. 15
rer les actals haute nergie, tel 5.16 obtenu partir du mthyl a-D-glucopyra-
noside par traitement par le dimthyl actal de la cyclohexanone en prsence
d'acide paratolune-sulfonique dans la DMF.
Les benzylidne-actals, trs fragiles en milieu acide, sont hydrolyss par l'aci-
de actique aqueux, ou coups par hydrognolyse. On peut observer une slecti-
vit dans l'hydrolyse des isopropylidne-actals. Sur le compos 5.10 seul le
cycle en 5,6 est hydrolys par l'acide actique aqueux. L'hydrolyse de la fonction
actal qui fait intervenir l'oxygne anomrique ncessite un chauffage de
quelques heures dans l'acide minral 0,l M, conditions comparables celles de
l'hydrolyse d'un glycoside.
Les actals sont extrmement employs comme drivs protgs. Mais ce sont
galement les produits de dpart de certaines ractions d'un grand intrt synth-
tique. Le traitement des actals benzylidne par la N-bromosuccinimide dans
CC1, bouillant, en prsence de BaC03 les convertit en bromobenzoates[*]. La
raction est particulirement intressante dans le cas des actals 4,6--benzylid-
ne, car elle donne le bromure primaire exclusivement. Ainsi le mthyl 6-bromo-
6-doxy-a-D-galactopyranoside est obtenu avec 90 % de rendement (Raction
(5.10)). Les conditions ractionnelles sont compatibles avec une grande varit de
fonctions. Le mcanisme de la raction semble tre le remplacement de l'hydro-
Ph
I
\ O
P I
"0 C&Br
Oxydations en carbonyle 89
gne benzylique par du brome, suivi dune ionisation et de lattaque par le bro-
mure du cation benzoxonium (Raction (5.11)).
La raction (5.12) donne un exemple douverture avec rduction dun benzyli-
dne. Le mlange dactal et de cyanoborohydrure de sodium (NaBH3CN) dans
loxolane est acidifi avec HC1 dans lther jusqu cessation du dgagement
gazeux. La raction est termine en 5 mn temprature ambiante avec un rende-
ment de 87 % et parat gnrale[9]. On linterprte comme la consquence de la
protonation rgioslective de O(4) du sucre, suivie du dplacement de loxonium
par un hydrure.
Le traitement du dibenzylidne-mannoside 5.17 (Raction (5.13)) par le butyl-
lithium donne un sucre carbonyl dsoxygn[lOl. On suppose que la base forte
arrache le proton H(3), ce qui entrane llimination de O(2) vicinal, puis le dpart
de PhCHO qui donne Inolate.
n/7
B r- CH2-O
I \i+
CH2-O
-
c
CH-0 -CH-O
OMe
BnO
OMe
O
Bn
BnO
(5.12)
5. 17 O
5.3 OXYDATIONS EN CARBONYLE
5.3.1 Hydroxyles isols
Les mthodes les plus utilises sont la raction de Pfitzner et Moffat et ses
variantes ultrieures[]. Loxydant est le dimthyIsulfoxyde (DMSO). Linterm-
diaire accept en gnral la structure 5.18, qui conduit au compos 5.19 par une
5. 18 5. 19
raction dlimination (Raction (5.14)). Les variantes se distinguent par les rac-
tifs employs pour prparer le driv sulfoxonium de lalcool 5.18. Pour Ioxyda-
tion de la fonction alcool primaire des sucres en aldhyde, on prconise le syst-
me dicyclohexylcarbodiimide (C,H,, - N =C =N - C,H,,, 3 quivalents
molaires), associe un acide modr, comme lacide dichloractique (03 qui-
valent). Ainsi on obtient laldhyde 5.20 (2 heures 30 froid, 80 % isol) partir
du ribofuranoside. On peut activer simplement avec de lanhydride phosphorique
pour loxydation des fonctions alcool secondaires en ctone, comme dans la pr-
paration de 5.21, obtenu avec un rendement de 92 %I 1*] . On a ainsi prpar la
ctone 5.22 partir de lactal 5.10. On a aussi observ dexcellents rendements
en prsence danhydride actique. On peut effectuer ces oxydations des chelles
trs leves. La mthode de Swern (activation par le chlorure doxalyle) donne en
gnral un rendement lev, mais ncessite un travail - 70C et semble peu
adapte aux premires tapes dune synthse.
On a galement appliqu aux sucres une autre mthode gnrale de prparation
des ctones, loxydation des alcools secondaires par le ttroxyde de ruthnium,
RuO,. On nutilise que des quantits catalytiques de ce compos trs coteux, qui
est rgnr par un oxydant, par exemple KIO, en solution aqueuse, tamponn
avec K,CO,, ou un hypochlorite alcalin.
5.3.2 Oxydation des diols en hydroxyctones
Le traitement des stannylnes (voir le paragraphe 5.15) dissous dans le benz-
ne par une solution de brome dans le mme solvant, en prsence de tamis mol-
culaire ou de la base Bu3SnOMe, donne froid, la vitesse dun titrage la cto-
ne-ai co~l [ ~]. La raction est presque uniformment strictement rgiospcifique,
cest--dire quelle ne donne quune seule des deux hydroxy ctones possibles
(Raction (5.15)). On retrouve lactivation slective par stannylation dj obser-
ve dans la benzylation, lallylation et Iacylation. On prpare ainsi 5.24 partir
du glycol 5.23 avec 75 % de rendement. On a rcemment prconis le remplace-
ment du brome par la N-bromosuccinimide sans autre addition[l41.
R-CH-O,
(5.15)
- () + SnBu2Br,
I
R-CH-O R-CHOH
Oxydations en carbonyle 91
PT; *
TsO
OMe
O
X M e
5. 20 5. 21
5. 22
BnO
5. 23
H,OBn
HO O : h O B n BnO
5. 24
5.3.3 Utilit synthtique des sucres carbonyls
La rduction par NaBH, ou LiAlH, donne le mlange dalcools pimres.
Dans les cas les plus favorables, on peut sparer avec un rendement acceptable le
composant configuration inverse par rapport au produit de dpart. Ainsi on pr-
pare le 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne-a-D-allose par une oxydation du bis actal
5.10 en ctone 5.22 suivie dune rduction par NaBH,. Celle-ci est strospci-
fique et donne la configuration a- D- do, pimre en 3 de la configuration a-D-
g l u m de dpart. Sauf cas exceptionnels, cette mthode dinversion de configura-
tion a perdu de limportance au profit de la substitution SN2 des sulfonates depuis
la dcouverte des solvants polaires aprotiques et des groupements partants excep-
tionnels. Naturellement, les hydrures marqus permettent dintroduire spcifique-
ment du deutrium ou du tritium sur le carbone hydroxyl. Ces drivs carbony-
ls de sucres sont facilement hydratables. Par incubation prolonge dans
[*O] - H,O, lquilibre hydratation-dshydratation peut introduire sur le carbo-
nyle lisotope l 80, quon retrouvera aprs rduction, dsormais stable, sur lhy-
droxyle alcoolique. Enfin, les voies majeures de prparation des sucres ramifis
passent par les drivs carbonyls (voir le paragraphe 7.6).
5.3.4 Oxydations catalytiques sur platine
La raction est particulirement efficace et slective avec les glycopyranosides
non protgs : la fonction alcool primaire est convertie en acide avec un bon ren-
dement. On obtient donc des acides uroniques. Ainsi le driv 5.25 de la glucosa-
mine est obtenu avec un rendement de 75 %. Pratiquement, on ajoute le sucre
une suspension aqueuse de platine dAdams vigoureusement agite dans laquelle
on fait barbotter de loxygne. I1peut y avoir oxydation des hydroxyles secon-
daires avec une certaine slectivit lorsquil ny a pas dhydroxyle primaire.
5.4 PERIODATES ALCALINS ET TTRAACTATE DE PLOMB
On rappelle les ractions bien connues de ces deux oxydants sur les glycols
vicinaux, (5.16) et (5.17). Ces deux ractifs sont complmentaires, le periodate est
utilis en solution aqueuse et le ttraactate dans les solvants organiques. On
admet que ces ractions passent par des intermdiaires cycliques, par exemple,
pour IO:, 5.26, par addition des hydroxyles sur les liaisons IO, et 5.27 par dshy-
dratation de 5.26, le premier octahdrique, le second en bipyramide trigonale.
Nous ferons remarquer que vu la longueur de la liaison IO, langle 0-1-0 dans le
cycle 5 lments une valeur trs petite voisine de 75 et que cela a sans doute
une consquence sur la raction. Quoi quil en soit, la dshydratation en 5.27
semble fondamentale. Dans un milieu trs basique, 5.26 perd un proton, la dshy-
dratation nest plus possible et la raction devient trs lente. De mme les com-
plexes tridents comme 5.28, qui ne peuvent pas se dshydrater sont stables et
visibles en RMNLtS~. Le lecteur reconnatra que 5.28 est un complexe du 1,2-O-
isopropylidne-a-D-glucofuranose, produit dhydrolyse partielle de 5.10. De fait,
le priodate ne scinde pas les glycols vicinaux en disposition trans diaxiale rigi-
de. Cependant signalons que lon peut observer avec le ttraactate des oxyda-
tions de glycols vicinaux incapables de participer un cycle 5 lments.
R-CHOH R-CHO
-
(5.16) + IO, - + + 10,-
RI-CHOH R-CHO
R-CHOH R-CHO
I +Pb(OAc), ---) + + Pb(OAc), +2 AcOH
(5.17)
R-CHOH RI-CHO
Priodates alcalins et ttraactate de plomb 93
5. 25 5. 26 5. 21
J
Me
WC-OH
HO-C-H
5. 28 5. 29
5. 30
5. 31
A ct des glycols, priodate et ttraactate effectuent la scission dautres com-
poss polyoxygns vicinaux que lon rencontre en chimie des sucres - 2-
hydroxyaldhydes, dictones vicinales, acides a-ctoniques et a-hydroxyls - et
aminoalcools. Sur le papier, la scission des a-hydroxyaldhydes par les periodates
rpond au mcanisme gnral (5.17) en admettant que laldhyde est hydrat
(R =OH), ce qui donne au second membre HO. CHO, cest--dire de lacide for-
mique. Le lecteur vrifiera que, par ce mcanisme, le glucitol 5.29 consomme
5 molcules de priodate, fournit 2 molcules de formaldhyde, qui proviennent
des carbones terminaux, et 4 molcules dacide formique venant des carbones
centraux. La raction est stchiomtrique. Loxydation de la-D-glucopyranose
commence par la rupture de la liaison C( I ) - C(2) et la formation du pentose for-
myl en 4, 5.30. Elle se poursuit et, si le formiate shydrolyse dans le milieu, la
consommation est de 5 molcules de priodate et il se forme 5 molcules dacide
formique et 1 molcule de formaldhyde, qui provient de C(6). Le mthyl a-D-
glycopyranoside est scind entre C(2) et C(3), et C(3) et C(4), pour donner 1
molcule dacide formique et le << dialdhyde >> 5.31 (en fait hydrat et cyclis).
Les ractifs de scission de glycols ont jou un grand rle dans la construction
de la chimie des carbohydrates. Nous ne citerons que des exemples dapplications
rcentes. Le caractre stchiomtrique de ces ractions permet de les utiliser dans
les dosages. La possibilit de sparer les carbones, par exemple C(6), le seul don-
nant CH,O partir du glucose, ou bien C(3), retrouv ltat dacide formique
dans loxydation du mthyl a-D-glucopyranoside, etc., permet de localiser un car-
bone isotopique dans les tudes de mtabolisme intermdiaire. Lutilisation
contemporaine la plus importante est dans les synthses par dgradation. On pr-
pare commodment le D-rythrose partir du D-glucose par actalation avec
lactaldhyde, catalyse par H,SO,, oxydation priodique et hydrolyse acide
(Raction (5. IS)). Loxydation du << diactone mannitol , 5.32, par le ttraacta-
te de plomb donne deux molcules disopropylidne-glycraldhyde, 5.33, mati-
re premire importante en synthse chirale.
,,Ko-F Me O-C-H
HO-C-H
W -OH CHO
C
*F-xMe CH20 Me -eoXMe CH20 Me
5. 32 5. 33
5.5 DSOXYGNATION
Nous avons dj rencontr deux exemples de sucres dsoxygns universelle-
ment prsents dans les cellules, le dsoxyribose et le fucose. I1 y en a un grand
nombre dautres, dans les produits bactriens en particulier, et souvent leur raret
suggre de les prparer par synthse. Enfin les sucres abondants, qui sont trs
utiles en synthse chirale, sont beaucoup trop fonctionnaliss pour tre utiliss tels
quels.
Les tosylates primaires sont rduits par LiAlH,. On prpare ainsi le diactal du
D-fucose 5.35, nantiomre du L-fucose, par rduction du tosylate 5.34 du diac-
tal du D-galactose 5.11. On peut aussi remplacer un hydroxyle alcoolique par un
halogne (Ci, Br, I) nimporte quelle position dans un sucre protg.
Rfrences 95
Me Me
5.3 4 R=CH,OTs
5. 35 R=CH3
5. 36
Lhalognure est facilement rduit par voie radicalaire avec le tributylstannane,
Bu,SnH (Raction (5.19)).
(5.19) R - C1+ Bu3Sn H + R - H +BU, SnCl
On pourra sans doute remplacer dans cette raction le tributylstannane par
lacide hypophosphoreux H,PO,, ou un sel de trithylammonium comme dans le
cas de la raction de dsoxygnation dcrite la fin du prsent paragraphe. La
mthode la plus directe pour dsoxygner un hydroxyle isol passe par la forma-
tion dun dithiocarbonate (Ractions (5.20)).
NaH cs2 ICH,
(5.20) R-OH -b R-O- -b R-O-CS-S- -b R-O-CS-SCH,
La rduction par le tributylstannane est une raction en chane, qui doit tre
amorce par lazoisobutyronitrile. Le bilan global est donn par la raction (5.21).
Le produit contenant ltain se dcompose rapidement et le rendement en produit
rduit est excellent.
(5.21) R-O-CS-SCH, +Bu,SnH + RH +(Bu,Sn-S-CO-S-CH,)
Lemploi de Bu3SnH prsente quelques inconvnients : il est toxique et co-
teux ; il faut 291 g de ractif pour apporter 1 g dhydrogne et lexcs de ractif
et les sous-produits de la raction sont difficiles liminer. On a propos rcem-
ment comme donneur dhydrogne alternatif lacide hypophosphoreux H,PO,
- ou ses sels de trithylammonium dans les cas o lacidit est viter - qui don-
nent des rsultats au moins aussi bons que les stannanes dans la raction radica-
laire. On obtient ainsi le diactal du glucofuranose dsoxygn en 3, 5.36 avec
91 % de rendement par rduction du mthyl dithiocarbonate du << diactone-glu-
cose D 5.10[6].
RFRENCES
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CHAPITRE 6
Ractions du carbonyle et de lhmiactal
6.1 INTRODUCTION
Lorsque la protection des hydroxyles empche la transformation du carbonyle
en hmiactal par cyclisation, la ractivit dun sucre ne se distingue pas de celle
dun aldhyde ou dune ctone ordinaire, lis des groupements trs lectronga-
tifs, avec ventuellement un oxygne thr en p. On observe donc la formation
dhydrates stables dans leau et une p limination, si la strochimie le permet, en
milieu alcalin. Quant au sucre habituel hmiactal, la rapidit de ltablissement
de lquilibre tautomrique fait quil donne toutes les ractions des composs car-
bonyls. En fait, cest plutt linstabilit ventuelle dun ractif dans le solvant qui
limite son application. Comme raction typique de lhmiactal, nous avons dj
rencontr la glycosidation. Loxydation par les halognes, par laquelle nous allons
commencer, en est un autre exemple.
6.2 OXYDATION PAR LES HALOGNES]
Les oxydants Cl,, Br2, I, semploient de manire diffrente. Si on traite un
sucre en solution aqueuse non tamponne par le chlore ou le brome, loxydation
amne lacidification du milieu par suite de la formation de HCl ou HBr. I1semble
que ceci ralentisse la raction et on a les meilleurs rendements, presque quantita-
tifs, en ajoutant un sel insoluble, comme BaC03, qui joue le rle de tampon. Dans
loxydation par le brome, dans ce systme, le pH est voisin de 5,4. Cest la forme
cyclique qui est oxyde. Le D-glucopyranose (a ou p) donne la D-glucono-15
lactone (Raction (6.1)). Industriellement, on pratique la raction dans une cellu-
le dlectrolyse ; le brome est rgnr par oxydation anodique du bromure, dont
on ajoute seulement une quantit catalytique. Lanomre p ragit beaucoup plus
vite que Ianomre a. Loxydation est essentiellement due au brome molculaire.
On admet quil y a formation dun hypobromite, qui subit ensuite une limination
E, schmatise par la formule partielle 6.1. Loxydation par le brome est une voie
prparative daccs aux acides gluconique, galactonique, etc.
(6.1)
4- Br, - e\ CO -i 2 HBr
98 Ractions du carbonyle et de Ihmiactal
Liode nest pas ractif en milieu acide. En milieu basique, il est converti en
hypoiodite, un oxydant puissant, et oxyde quantitativement les aldoses en acides
aldoniques, selon la raction (6. 2) qui a aussi bien une valeur analytique que pr-
parative.
(6.2)
RCHO +I, +3 NaOH -+RC0,Na +2 Na1 +2 H,O
6.3 RACTIFS NUCLOPHILES
6.3.1 Borohydrure de sodium
Ce ractif, stable dans leau dans des conditions trs lgrement alcalines est
idal pour la rduction des sucres. La fonction aldhyde est rduite en alcool pri-
maire et la fonction ctone en un mlange dalcools secondaires pimres. Le trai-
tement le plus simple aprs rduction consiste liminer le sodium sur une colon-
ne dchangeur de cations, puis lacide borique SOUS forme de borate de mthyle
volatil par covaporation avec du mthanol. On rcupre lalditol par vaporation
sec ou lyophilisation.
6.3.2 Thiold2]
Les dithioactals, obtenus par action des thiols sur les sucres, constituent la
classe la plus nombreuse de drivs acycliques des sucres. On prpare le dithyl
dithioactal 6.2 en traitant le glucose dissous dans HC1 I l M par lthanethiol
EtSH, quatre heures O. On se dbarrasse de lexcs dacide avec BaC0, ou
PbCO,, ou un changeur danions, et on obtient le produit par vaporation sec.
La raction est trs gnrale. On utilise communment lthanethiol, le benzyl-
thiol, lthanedithiol et le 1,3-propanedithiol. Le thiophnol ragit trs lentement.
On lobserve avec tous les aldoses, selon le mcanisme probable, rversible, (6. 3).
On voit qu la seconde tape, cest une deuxime molcule de thiol plutt
quun hydroxyle du sucre qui dplace H20. Ceci doit tre mis en rapport avec la
nuclophilie leve du soufre vis--vis du carbone. Les ctoses sont dcomposs
dans ces conditions. Pour prparer les dithioactals du fructose, on passe par le
peractate kto 6.3 qui est le produit normal de peractylation. Cependant le car-
bonyle de lacide sialique est transform en dithyl-dithioactal6.4 avec un excel-
lent rendement temprature ordinaire. Le carboxyle a et la lactonisation dans le
milieu aident sans doute la conversion.
Le dithioactal du glucose et certains autres se dcomposent temprature
ambiante dans le milieu de synthse, en donnant des alkyl l-thioglycopyrano-
Ractifs nuclophiles 99
H,OAc
CO
I
HO-C-H Ac-C-H
W -0Ac
W -0Ac
f
F
H CH20Ac
6. 2 6 . 3
6 . 1
Et
s, /s
CH
CH,CONH C-H
HO-C-H
I
SR
6. 4 6 . 5 6 . 6
sides. Cette classe de composs a pris une certaine importance dans la synthse
doligosaccharides (Raction (10.4)). On les prpare plus commodment, sous
forme peractyle, par exemple 6.5, en traitant le p peractate du pyranose par un
thiol en prsence de BF,.Et,O.
On peut effectuer sur les dithioactals toutes les transformations habituelles des
hydroxyles des sucres, thrification, acylation, actalation. Par exemple, le pro-
pylne dithioactal du 2-dsoxyglucose D donne le bis actal isopropylidnique
6.6. Les rgles de prfrence pour les positions dactalation sapparentent
celles des alditols. Les dithioactals acyls peuvent tre dsacyls par mthanoly-
se alcaline, ce qui indique quils supportent ce niveau de basicit. Cependant le
butyllithium dtache le proton situ entre les deux soufres. Ceci cre une charge
ngative sur C( 1) et, sil y a un oxygne thr en a, sur C(2), il y a tout de suite
limination, pour former un groupement -CH =C(SPh),. Par contre, le carbanion
sur C( 1) est stable dans les dithioactals de sucres 2-dsoxy et on peut le conden-
ser avec des drivs iods. On a ainsi une mthode facile dintroduction de cer-
taines chanes chirales, utilisable en synthse totale.
La dsulfuration au nickel de Raney remplace le groupement dithioactal par
un mthyle.
Cependant on prpare essentiellement les dithioactals comme intermdiaires
dans la synthse de drivs acycliques. On peut en effet rgnrer le carbonyle
dans des conditions qui respectent la plupart des fonctions usuelles. Bien que la
rgnration avec liode soit quantitative et que le brome soit utilisable dune
faon prparative, la faveur semble aller aux systmes base de sels mercuriques.
Si les hydroxyles cyclisables sont bloqus, on prpare ainsi un driv acyclique
de sucre. Par exemple la peractylation de 6.2 donne un pentaactate, transfor-
mable en pentaactate aldhydo 6.7 par HgC1, en excs dans lactone aqueuse.
On prpare de mme le bis isopropylidne-actal aldhydo 6.8 partir du dithyl
dithioactal du D-arabinose. La solvolyse dans le mthanol avec un mlange
HgCl, - HgO conduit au dimthyl actal, par exemple 6.9, en srie D-galacto,
dsactylable en 6.10 par Ba(OMe)2.
/OM
P
e C-OR
FHO
F
F
I
I
RO-C-H
RO- -H
F
F
e - O R
C- OAc
AC- C-H
e *Ac
e +Ac
CH,OAc
To y CH,OR
CH,-o Me
6. 7 6 . 8
6. 9 R=Ac
6. 10 R=H
6.3.3 Cyanures alcalins
On prendra comme exemple la raction de KCN en solution aqueuse sur le
D-arabinose. Laddition a lieu temprature ambiante et donne le mlange de
nitriles a hydroxyls 6.11. Le chauffage en milieu alcalin hydrolyse ces nitriles en
acides carboxyliques, obtenus ltat de sel. On rcupre le mlange dacides
libres, gluconique 6.12 et mannonique 6.13, avec un changeur de cations, et on
spare lpimre D-gluco 6.12 par cristallisation fractionne du D-gluconate de
baryum. Lacide rgnr est lactonis par chauffage prolong 100 et la rduc-
tion de la lactone 6.14 par lamalgame de sodium donne le D-glucose. Cette suite
de ractions, connue sous le nom de mthode de Fischer et Kiliani, est absolument
gnrale. Cest une mthode dascension dans la srie des sucres du tableau 4.1
partir de glycraldhyde. On lutilise actuellement pour prparer des sucres sup-
rieurs (heptoses partir dhexoses) ou des sucres rares. Ainsi la mme suite de
ractions permet dobtenir le L-glucose et le L-mannose, deux rarets, partir
dun sucre naturel trs abondant, le L-arabinose. Elle sert aussi prparer les
Ractifs nuclophiles 101
CN
CEP OH R- C- R
HO-C-H HO- C-H
&OH
W -OH
F
F
CH,OH
6. 11 6. 12 R=H, R=OH
6. 13 R=OH, R=H
6. 14
sucres marqus spcifiquement avec un isotope du carbone, car les cyanures
[ 14C]-KCN et [ 13C]-KCN sont des produits commerciaux.
Dans une m~dification[~], on pratique laddition un pH contrl voisin de 7.5,
que lon abaisse 4,2 en fin de raction. Les nitriles sont stables dans ces condi-
tions. On les rduit en imines par hydrognation avec le catalyseur palladium sur
sulfate de baryum. Ces imines sont hydrolyses rapidement en aldoses. Cest la
mthode prconise pour la prparation de sucres marqus sur C( 1).
Nous dcrirons ici la synthse des sucres amins de Kuhn, bien quelle
implique le passage par une glycosylamine (voir le paragraphe 3.6.1) parce quel-
le est conceptuellement analogue (Raction (6.4)). Laddition de HCN sur la N-
benzyl-glycosylamine 6.15 donne les nitriles pimres, 6.16 et 6.17. Chacun des
deux donne par hydrognation catalytique sur palladium en prsence dacide
chlorhydrique le sucre 2-amino-2-doxy de mme configuration (par exemple
6.18), le groupement benzyle tant simultanment limin ltat de tolune. La
russite majeure de cette mthode est la synthse de la lactosamine dcrite au
paragraphe 10.1.
W C- NH,CI
WC-OH
I
CN
I
R- -RI
6. 16 -
P
F
WC-OH
+/
\/ I
6. 15 6. 16 R=H, R=NHBn 6. 18
6. 17 R=NHBn. R=H
6.3.4 Ractifs du type de Wittig et organomtalliques
Comme nous lavons dit dans lintroduction, les ractions dun sucre bloqu
dans sa forme tautomrique aldhydo ne diffrent pas essentiellement de celles
dun aldhyde quelconque. Par exemple, on peut observer des additions dorga-
nomagnsiens, dorganolithiens, etc. Ces ractions peuvent tre trs utiles, notam-
ment en synthse totale chirale, mais cest, en principe, une chimie qui doit tre
102 Ractions du carbonyle et de Ihniiactal
familire au lecteur. Nous nenvisageons ici que les sucres totalement libres ou
capables de tautomrie aldhyde-hmiactal.
Dans certaines conditions, on peut utiliser avec ces substrats le triphnylm-
thylne phosphorane, CH, =PPh,, par exemple la mthylnation dcrite par la
raction (6.5) seffectue avec un rendement de 67 70 -30 dans loxolane, avec
addition de un quivalent de NaH : le succs tient la stabilit en milieu alcalin
de laldhyde, qui na pas doxygne en p, tandis que la dprotonation de lhy-
droxyle en a cre une charge ngative qui soppose une seconde dprotonation
sur CHr4].
OH
I1 y a plus de ractions dcriteslj] avec les phosphoranes stabiliss comme
Ph,P =CHC0,Et. Le ribofuranose 6.19 donne 54 % dthylnique cis, 6.20,
accompagn de 36 % de lisomre trans. En prsence de NaOMe, la cyclisation
de 6.20 par une raction de type Michael donne loxolane 6.21, pur trans- 1,2. En
raison de lanalogie superficielle de composs comme 6.21 avec les glycosides,
on leur a donn le nom de C-glycoside. Avec le mme phosphorane, le bis actal
du mannofuranose 6.22 donne directement le C-mannofuranoside 6.23, trans 1,2.
Celui-ci sisomrise en driv cis- 1,2, le plus stable, en prsence de NaOMe, le
mcanisme probable tant la dprotonation en a de la fonction ester suivie de
llimination de loxygne cyclique sous forme alcoolate.
H,OBn H,-C0,Me
H,OBn
/H
%?OH?>=? C0,Me y2
6. 19 6. 2 6. 21
6. 22 6. 23
Ractions impliquant la dprotonation en a du carbonyle. Les sucres comme aldols 103
Les drivs organiques du magnsium et du lithium ne sont pas utilisables dans
les solvants aqueux, et, en milieu anhydre, les substrats polyhydroxyls entranent
le gaspillage du ractif. La dcouverte dune technique pour fabriquer et faire
ragir les drivs allyliques de ltain dans leauL61 a permis deffectuer ces rac-
tions organomtalliques en solution On a opr en solvant mixte
alcool-eau, en prsence de 2 quivalents de poudre dtain et de bromure dally-
le, dans un bac ultrasons. Le mannose, par exemple, donne avec un rendement
de 90 % le mlange du carbinol 6.24 avec son pimre dans la proportion 6: 1.
Lozonisation de la double liaison donne le sucre 2-dsoxy deux carbones de
plus. On peut remplacer ltain par lindium.
HO-C-H
HO- C-H
e -OH
i k -OH
OH
!H,OH 6.25
6. 24
6.4 RACTIONS IMPLIQUANT LA DPROTONATION EN a
DU CARBONYLE. LES SUCRES COMME ALDOLS
En milieu basique, on prvoit un quilibre entre le sucre et le carbanion produit
par le dtachement du proton a. La premire consquence prvisible est lpim-
risation partielle ce niveau. La raction peut avoir une valeur prparative si le
sucre de dpart est abondant.
Ainsi, on peut prparer la N-actylmannosamine 6.25 par pimrisation de la
N-actylglucosamine (1.7) en solution aqueuse, au pH 11. Le rendement est 22 %
aprs 3 jours temprature ambiante, mais le produit de dpart est trs accessible.
Ces pimrisations sont gnrales, mais plus ou moins utiles en dehors de
lexemple cit. Nous ferons ici une parenthse pour les mettre en regard de lpi-
mrisation produite par lacide molybdique ( 90 en solution aqueuse, pH 4,5)
qui nimplique pas de carbanion et qui est galement gnrale@]. Glucose et man-
nose squilibrent et le rapport des concentrations (2,5: 1) est celui quon calcule
partir de leur diffrence denthalpie libre. Cest typiquement une raction dune
simplicit trompeuse, car il y a simultanment migration de carbone de la position
1 la position 2 (Raction (6.6))
(6.6) [1 - 3C]-D-glucose A .- [2 - CI-D-mannose
On a ainsi une mthode trs lgante pour marquer C(2) dans un sucre, lin-
troduction de lisotope sur C( 1) tant facile avec les ractions du paragraphe 6.3.3.
104 Ractions du carbonyle et de I'hmiactal
On l'explique par la formation d'un complexe entre le dimolybdate Mo,O,- et le
sucre, par exemple le D-glucose, sous forme uldhydo et une migration rversible
de C(3) C( 1) au sein du complexe, suivant le schma trs simplifi 6.26.
I
CH,OH
6. 26 6. 27
Revenons maintenant aux proprits consquences de la dprotonation de C(2)
des aldoses. L'anion peut ragir comme donneur sur un aldhyde pour donner un
produit de condensation aldolique. Par exemple le << diactone-mannose >> donne
le sucre ramifi 6.27. Ce qui restreint la gnralit de ces ractions, c'est qu'il y a
le plus souvent un oxygne thr sur C(3) qui a tendance s'liminer s'il n'y a
pas des contraintes striques particulires. C'est ce qui se passe, par exemple, lors
du traitement alcalin de certaines glycoprotines (voir le paragraphe 13.2.2). Mais
on peut vouloir au contraire favoriser l'limination, en introduisant un bon grou-
pement partant sur 0( 3) , tel le groupement mthanesulfonyle. L'limination en
solution aqueuse tide du 3-O-mthanesulfonyl-D-glucose par addition de potas-
se aqueuse se produit la vitesse d'un titrage acidimtrique, comme on l'observe
en prsence de phtaline. En arrtant la coloration permanente, on obtient du
2-dsoxy-D-ribose, dont c'est la meilleure avec un rendement de
50 %, selon la raction (6.7).
HO HO
H-CO,H
+
Tous les aldoses communs possdent un hydroxyle alcoolique en p du carbo-
nyle. Cette structure les apparente aux aldols qui se forment rversiblement par-
tir des aldhydes en milieu alcalin. On pourrait s'attendre observer dans ces
conditions la rupture rtro-aldolique entre C(2) et C(3), donnant une molcule
d'aldhyde glycolique et une molcule d'aldose deux carbones de moins et,
rciproquement, la condensation de ces deux fragments pour engendrer un aldose
Ractions impliquant la dprotonation en a du carbonyle. Les sucres comme aldols 105
suprieur. Sous leur forme non enzymatique, ces ractions sont inconnues ou de
peu dimportance pratique et, dans les cellules vivantes, ces schmas du type
C, +C, C,, ou bien C, +C, L___ C, ne sont pas utiliss dans les
grandes voies mtaboliques. I1existe cependant des enzymes aldolases, isoles de
cellules vgtales ou microbiennes qui catalysent la rupture rtroaldolique dun
phosphate du dsoxyribose en actaldhyde et phosphate de D-glycraldhyde.
Leur rle est purement catabolique dans le monde vivant, car les cellules fabn-
quent la structure 2-doxy-D-ribo par dsoxygnation de la structure D-ribo. Elles
pourraient tre utiles en chimie prparative car on peut dans une certaine mesure
modifier donneur et accepteur[]. Mais dans les aldolases habituelles, le donneur
est ctonique.
CH,OPO,H,
CO
CH,OH
CH20P03H2
&
(6.8) + L
CHO
H-C-OH
CH,OPO,H,
On a beaucoup tudi la fructose-1-6-diphosphate aldolase du muscle du lapin,
que lon trouve dans le commerce. Celle des feuilles dpinard, videmment trs
accessible, a t examine rcemment[]. Dans la raction fondamentale de la
glycolyse ( 64, le donneur est le phosphate de dihydroxyactone. I1ne peut gure
varier, mais il y a plus de souplesse du ct de laccepteur[l2l [I 3], et lon peut par-
fois sloigner largement de ia chimie des sucres. Dans tous les cas, le diol vici-
nal cr aux positions 3-4 (numrotation des uloses) a la configuration D-thro.
Ainsi la condensation de laldhyde ctonique 6.28 donne un ctose 6.29 qui,
aprs isolement, est dphosphat enzymatiquement en prsence de phosphatase
acide. Lactalation en catalyse acide referme un systme de type anhydro sucre
sur le carbonyle en 8, plus lectrophile. Le produit 6.30, obtenu[14] avec un ren-
dement global de 48 %, est transform en une phromone, la (+)-em-Brvicomine
par rduction du groupement COCH,OH en CH,CH,. On voit que, dans la plu-
part des synthses, la condensation enzymatique doit tre suivie de dphosphata-
tion, ce qui nest pas un inconvnient trs grave. I1 y a des difficults plus
srieuses : la prparation de grosses quantits de phosphate de dihydroxy-actone
ne semble pas trs commode, en raison des grands volumes de solvants nces-
saires ; le produit de laldolisation est un ctose, qui nest pas facilement isomri-
sable en aldhyde. Dautres aldolases fonctionnent avec lacide pyruvique comme
donneur, par exemple la c< sialylaldolase , dont lutilisation synthtique est dcri-
/ CO-CH,OH
0 7
6. 30
6. 29
HO CO,H
OH
6. 31
te au paragraphe 12.4, et la << KDO aldolase >> utilisable pour la synthse dun
sucre du monde microbien et vgtal, le << KDO N 6.31.
6.5 FONCTIONNALISATION RADICALAIRE
AU CENTRE ANOMERIQUE[]
Lirradiation de drivs pyranosiques produit un radical au centre anornerique.
En prsence de brome, ou de N-bromo succinimide, le chlorure de b-D-glucopy-
ranoside practyl donne le sucre dihalogn gmin 6.32, matire premire
pour la synthse danalogues gmins sur C( 1). Le mannoside 6.33 subit une rac-
tion de type NORRISH II, qui donne loxolane 6.34. En prsence diode et de
HgO, le glucoside de glycol, 6.35, donne le spiro orthoester, 6.36, sans doute par
formation intermdiaire dun hypoiodite.
Br
6. 32
Rfrences 107
Ac0
MeC
6. 33
Ac0
6. 35
\
HO
6. 34
Ac0 R
A c - $ O R'
6. 36
RFRENCES
[ 11 J . W. Green, (( Oxidatives Reactions and Degradations N dans The carbohydrates,
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T. Saito, H. Waldmann et G. Whitesides, J. Am. Chem. Soc., 1 I 1 (1989) 627-635.
1024.
Chemistry, dit par H. Ogura et coll., VCH (1992) 89.
CHAPITRE 7
Changements de configuration
Sucres non saturs et ramifis
7.1 DPLACEMENT DES HYDROXYLES ALCOOLIQUES
La mthode la plus frquente de dplacement dun hydroxyle alcoolique com-
mence par sa conversion en sulfonate. Les sulfonates des hydroxyles cycliques
des sucres sont trs peu ractifs vis--vis des nuclophiles externes. Cest sans
doute une consquence de la fonctionnalisation leve de la molcule, qui
conjugue empchement strique et effet inducteur dfavorable. La substitution,
pratiquement impossible avec les anciennes techniques, nest devenue une opra-
tion courante qu la suite de deux innovations. La premire est lintroduction de
solvants polaires aprotiques. Parmi ceux-ci, le solvant favori est la N, N-dim-
thylformamide, car cest le plus facile liminer en fin dopration, par exemple
par extraction leau dune solution thre. Cependant, mme dans la DMF
bouillante, certains tolunesulfonates et mthanesulfonates sont inertes. Aussi la
seconde innovation a-t-elle t lintroduction de deux groupements partants dune
efficacit suprieure, le trifluoromthanesulfonate (triflate) et limidazolylsulfo-
nate (imidazylate). Lefficacit des triflates, CF,-SO,-OR, est sans doute lie la
stabilit de lanion CF, Soi, elle-mme une consquence de lacidit leve de
lacide CF,SO,H. On les prpare commodment par action sur lalcool de lan-
hydride (CF,SO,),O en prsence dune base, comme la pyridine, qui peut aussi
jouer le rle de solvant. Les inconvnients lis lemploi des triflates sont le prix
lev du ractif, leur instabilit vis--vis de lhumidit et leur incompatibilit avec
le groupement actamido, sauf prcautions spciales[].
Le ractif pour la prparation des imidazylates est le sulfuryl-bis-imidazole 7.1,
produit indfiniment stable, prpar par action du chlorure de sulfuryle sur limi-
dazole. I1ragit sur les alcoolates pour donner limidazylate 7.2. La raction (7.1)
de substitution nuclophile121 donne comme sous-produits les produits de frag-
mentation, SO, et imidazolate. On peut expliquer lefficacit comme une cons-
quence de cette fragmentation, qui rend irrversible la rupture de la liaison R-O
conscutive une grande longation vibrationnelle dans le complexe activ SN2.
Linconvnient des imidazylates est que leur prparation la plus commode passe
par lalcoolate, donc implique des conditions basiques. Leurs avantages sont leur
stabilit temprature ambiante - plusieurs jours dans leau - et le cot ngli-
Dplacement des hydroxyles alcooliques 109
7. 1
7. 2
CH20Bz OBz
Me Al10 OMe
Al l 0
OTf
7 . 3
7. 4
geable du ractif. Ce sont donc les drivs les plus recommandables au dbut
d'une squence synthtique.
Suivant leur emplacement sur un sucre, les sulfonates ont des ractivits trs
diffrentes. Ceci se manifeste, par exemple, dans le comportement des tosylates.
Le tosylate de la fonction alcool primaire est substituable sans difficults, mme
dans les solvants n'appartenant pas au groupe polaire-aprotique. La substitution
en 3 ou 4 n'est possible qu'en solution dans la DMF. La substitution en 2 est
rigoureusement impossible. En revanche, on l'observera souvent sans problme
la position 2 partir d'un triflate ou d'un imidazylate. Ces diffrences de racti-
vit apparaissent clairement dans la raction de triple substitution du tris triflate
P-D-galacto 7.3 par le benzoateF31. On prpare celui-ci quantitativement partir
du triol en 5 heures O". Il ragit quantitativement avec le benzoate de ttrabuty-
lammonium en solution tolunique temprature ambiante en 45 minutes pour
donner le produit de substitution sur C(4) et C(6), D-gluco. Le chauffage, une
heure loo", conduit ensuite au tribenzoate D-manno 7.4.
Ces prdictions gnrales de ractivit doivent tre quelquefois rvises la
baisse en raison de contraintes striques, mme sur une position primaire. Par
exemple, le tosylate a-D-galacto 7.5 est extrmement peu ractif, sans doute
cause de l'encombrement du groupement isopropylidne voisin. La comparaison
des tosylates a- D- do 7.6 et a-D-gluco 7.7 est significative. On substitue le tosy-
late 7.6 par NaN3 par un chauffage de 4 heures dans la DMF 140". Dans les
mmes conditions, il faut 15 jours pour obtenir le produit de substitution du tosy-
late a-D-gluco 7.7, parce que I'azoture N j doit s'introduire en endo entre deux
pentagones[4]. C'est dans ce contexte qu'une exprience[2] dmontre magistrale-
ment l'efficacit des nouveaux groupements partants : la substitution de l'imida-
Me
Me
Me Me Me
7. 5 7 . 6
Me
Me
7. 7 R=Ts
7 . 8 R=Ims
-OR
OIms
Me
7 . 9 7. 10
zylate a-D-glum 7.8 donne lazoture a- D- do 7.9 avec 62 % de rendement en
5 heures dans le tolune 80. Comme nous lavons dit, la substitution sur C(3)
du <<diactone-glucose N est contrecarre parce que le nuclophile doit sappro-
cher dans le volume endo. On observe une opposition analogue lorsque le nuclo-
phile doit sintroduire avec une orientation axiale gene par une interaction
diaxiale-1,3 avec le reste de la molcule. Ainsi, lorsquon tente la substitution par
le benzoate de limidazylate P-D-galacto 7.10, on observe lattaque intramolcu-
laire par loxygne cyclique, avec formation du driv 7.11, 2,5-anhydro.
Dplacement des hydroxyles alcooliques 111
Les nuclophiles les plus couramment utiliss sont les sels des acides actiques
et benzoques, qui conduisent aux actates et benzoates de sucres de configuration
oppose, les halognures, les thiolates, qui permettent dintroduire un atome dha-
logne ou un radical alkylthio, et enfin les nuclophiles azots, dont nous allons
parler un peu plus longuement. Parmi ces derniers, on a utilis NH, et NH,-NH,
et il peut y avoir des cas o leur emploi est prfrable, mais lanion azoture
(N =h=N) -jouit prsentement dune grande faveur. Sa structure cylindrique lui
donne un trs faible encombrement. De fait, son enthalpie libre conformationnel-
le (voir le paragraphe 2.5) est presque ngligeable. Enfin il nest que faiblement
basique. Or le risque dlimination E, existe aussi avec les sucres, sil y a un pro-
ton antiparallle au sulfonate sur le carbone voisin. Lazoture organique est faci-
lement transform en amine par rduction avec LiAlH,, ou un thiol, ou par hydro-
gnation catalytique. Son introduction est incompatible avec une protection allyl
ther.
Les deux exemples suivants montrent lutilit des ractions de substitution
pour prparer des sucres peu accessibles, mais importants dans le cadre de ce
livre. La N-actylgalactosamine est trs coteuse alors que son pimre en 4, la
N-actylglucosamine est disponible en grosses quantits. Pour faire un p-glycosi-
de de la N-actylgalactosamine, on aura avantage prparer lanalogue D-gluco,
par exemple 7.12, prpar pour la substitution des positions 4 et 6, qui conduit,
aprs dprotection, au glycoside 7.13[sl. La N-actylmannosamine est galement
un sucre trs coteux, dont la chimie a t peine explore. Pour prparer ses
drivs, on a trouv utileF6] de passer par lazoture 7.15, lui-mme obtenu par sub-
stitution de limidazylate 7.14.
On donnera au paragraphe 10.3.4 un exemple dapplication de ces mthodes
la synthse des glycosides du type cis- 1,2, quatorial-axial.
CH(0R)OBz
7. 11
MAC
7. 12
OBn
OBn
BnO
0-
R
NHAC
7. 13
7. 14 R=O-Ims, R=H 7. 16
7. 15 R=H, R=N,
7.2 POXYDES[4] 171
Pour quun cycle dpoxyde puisse se boucler, il faut quil y ait deux fonctions
vicinales, sulfonate (ou halognure) et alcoolate en position antiparallle. Cette
condition est peu contraignante en dehors des cycles et on btit facilement un
poxyde sur les carbones C(5) - C(6) dun furanose. Dans un cycle 6 lments,
elle implique une conformation trans diaxiale 7.16 des fonctions ragissantes. La
fermeture de lpoxyde est alors extrmement rapide. La raction (7.2) donne un
exemple qui peut paratre extrme, car on peut imaginer que lpoxyde obtenu est
une molcule trs tendue en raison de ses trois cycles. De plus, cest une raction
de substitution (interne) sur la position 2 peu ractive. Nanmoins, elle est com-
plte en 10 mn temprature ambiante en prsence de NaOMe molaire.
Cependant, on observe aussi la fermeture dpoxydes partir de substituants trans
diquatoriaux dans des conditions modres, tout au plus un chauffage peu pro-
long 100C. On peut penser que le supplment lnergie dactivation est d
la ncessit de passer par une conformation moins stable ou les fonctions ragis-
santes se rapprochent de la disposition 7.16. La raction (7.3) est une excellente
voie daccs lpoxyde 7.17.
(7.2)
I
A OTs
(7.3)
OMe
i?
OH p+) O
7.17
On peut remplacer lhydroxyle alcoolique vicinal par toute fonction transfor-
mable en alcoolate dans les conditions trs basiques de la synthse, par exemple
actate. Plus surprenante est la prparation, videmment trs commode, partir
des ditosylates trans (Ractions (7.4)). Cette raction se produit 0C et, cepen-
dant, elle implique une rupture htrolytique entre oxygne et soufre quil nest
pas du tout commode de raliser par voie intermolculaire. Nous observons que
cest le tosylate sur C(3) qui est dplac, ce qui conduit un poxyde a-D-allo
7.18. On retrouve encore ici linertie de la position 2 vis--vis de la substitution.
Epoxydes
(7.4) -
TsO
113
OMe
O
7.18
7. 19
La fermeture de loxirane entrane la coplanarit de quatre atomes du cycle
pyranose, et une conformation demi-chaise 7.19 (les sommets de lhexagone sont
oxygne ou carbone). Ces poxydes de sucres manifestent la mme grande rac-
tivit que les autres, en particulier vis--vis des nuclophiles. On sait que lou-
verture des poxydes cyclohexaniques est << trans-diaxiale , selon la rgle de
Frst-Plattner. Cette rgle a t tablie avec des strodes rigides. Si les sommets
3, 4, 5, 6 de lhexagone de la stucture 7.19 sont maintenus de faon presque rigi-
de, il ny a quune conformation chaise possible par ouverture de loxirane et la
dfinition des positions axiales dans le produit final ne soulve aucune ambigu-
t. Dans le cas o on arrive une chaise mobile, on peut objecter la rgle que la
conformation de cette chaise et, partant, la dfinition des positions axiales, ne sont
pas indpendantes des nouveaux substituants du cycle. Dans le cas des pyranoses,
disons que louverture se fait de faon donner le produit diaxial dans la chaise
btie sur les atomes 3, 4, 5, 6 supposs maintenus presque rigidement. Si cette
conformation est instable, la molcule prend la conformation chaise alternative et
les deux substituants introduits se retrouvent en position trans-diquatoriale. On
connat des exemples de cette situation, mais, bien souvent les substituants se
retrouvent finalement en position trans diaxiale.
Un grand nombre de nuclophiles ouvrent les poxydes de sucres, si bien que
ces drivs ont une grande utilit synthtique. On a dcrit des ractions avec les
nuclophiles oxygns hydroxyle, alcoolate, benzoate, phosphate, eau en milieu
acide, les nuclophiles soufrs thiolate, thiobenzoate et thiocyanate, et les nuclo-
philes azots ammoniac, amines et azoture en prsence de chlorure dammonium.
On a ainsi les ouvertures diaxiales typiques de la raction (7.5) partir de lpoxy-
de a-D-manno (X =OH, OCH,, NH,, N,, SCH,, SCN) et de la raction (7.6)
partir de lpoxyde a-D-allo (X =OH, OCH,, NH,). Laluminohydrure de lithium
se comporte comme le nuclophile H- (X =H) dans les deux ractions prc-
dentes, ce qui permet une bonne prparation des sucres dsoxygns, par exemple
(7.7). Les nuclophiles carbons ouvrent les poxydes bis secondaires en donnant
des sucres ramifis ; ils seront traits au paragraphe 7.6.3. Naturellement, si la
structure sy prte, les poxydes peuvent aussi souvrir par voie intramolculaire.
Louverture par un alcoolate vicinal trans. saccompagne alors du bouclage dun
autre cycle. Avec un alcoolate vicinal, ceci conduit une migration dpoxyde,
plus ou moins rversible, telle lisomrisation (7.8), observe en milieu basique.
OMe
I
OH OMe
LiAIH,
QOMe
OMe
CH,OH
I
7.3 LES IONS ACYLOXONIUMS CYCLIQUES[81
I1 y a plusieurs manires de prparer les ions acyloxoniums cycliques. Nous ne
traiterons que de laction du pentachlorure dantimoine sur les diactates vicinaux
et les actates chlors ou broms sur le carbone vicinal, car cest la technique qui
a permis les ractions les plus intressantes en chimie de sucres (Ractions (7.9)).
Le cation acyloxonium est ambident : la raction dite cintique a lieu sur le site le
plus charg, par exemple H,O et OH- donnent lorthoester instable 7.20 qui
souvre en hydroxy ester cis 7.21 ; la raction dite thermodynamique, avec actate
Les ions acyloxoniums cycliques 115
en milieu acide, chlorure et bromure conduit la formation du produit trans 7.22
(X =AcO, C1, Br).
FCH2 \
0 SbCi,X-
\+/
CH,
(7.9) TCH2 +SbC1, O
i
C
\ //O
O
C
V H OH OCOCH, 5= OCOCH,
CH, OH
7. 20 7. 21 7. 22
O X
Le tripivalate de glycrol, 7.23 (Raction (7. lo)), peut ragir par cyclisation
avec la participation de l'un ou l'autre des groupements pivaloyl terminaux, en
donnant deux acyloxoniums identiques 7.24 et 7.25. Ces deux cations sont en
quilibre, par suite de l'attaque trans du carbonyle ester sur le cycle acyloxonium.
Cinterconversion est assez lente la temprature ambiante. On observe deux
signaux de mthyle en RMN du proton, celui des mthyles du groupement piva-
late, Me3CCOO-, et celui des mthyles du groupement pivaloyloxonium, dcal
vers les champs faibles par la proximit d'une charge positive. La vitesse d'inter-
conversion augmente rapidement avec la temprature et on observe la coalescen-
ce 87C. On peut calculer partir de ces observations une enthalpie libre d'ac-
tivation AG; =18,55 & 0,06 kcal mol cette temprature, en solution dans le
ni tromthane.
P P
7. 23
R
7. 24
R
7. 25
O x N H
COCH,
7. 26 R=OAc
7. 27 R=Cl
7. 28
On ne peut observer une raction propre avec les pyranoses que si lon sar-
range pour orienter la premire cationisation sur c( 1). Avec le glucose, le pentaa-
ctate b, 7.26 et le chlorure de ttra-0-actyl-P-D-glucopyranosyle 7.27 ont la
disposition favorable lattaque par le carbonyle de lactate en C(2). Le chloru-
re a, anomre de 7.27 ragit aussi en raison de la facilit avec laquelle il sionise
en ion oxocarbnium. Lun quelconque de ces trois prcurseurs, en solution dans
le dichloromthane trait 20C donne un mlange en quilibre de cations ac-
toxonium drivs des quatre configurations, D-gluco, D-manno, D-altro et D-ido
(7.11). On dtermine la composition du mlange par hydrolyse. On a alors le
mode cis de dcomposition, qui donne un mlange de sucres partiellement acty-
ls. On peractyle le mlange et on dtermine sa composition par chromatogra-
phie de vapeur. A temprature ordinaire, lquilibre entre les cations actoxonium
drivs des quatre configurations correspond aux proportions suivantes : D-
gl um : 54 % ; D-rnanno 13 % ; D-altro 6-9 % ; D-ido 21 %. Mais comme lhexa-
chloroantimonate du driv D-ido est trs peu soluble dans le dichloromthane, il
se spare par cristallisation, ce qui dplace lquilibre, si bien quon peut lisoler
avec 73 % de rendement. On a ainsi un accs trs facile cette configuration rare.
O
Sucres non saturs 117
7.4 DPLACEMENTS NUCLOPHILES AVEC PARTICIPATION
Les ions acyloxonium du paragraphe 7.3 sont stabiliss par un anion lourd. On
admet aussi la formation dacyloxonium, cette fois comme intermdiaires rac-
tionnels non isols, dans la solvolyse de certains tosylates. Dans la raction (7.12)
avec lactate de sodium, lintroduction de lactate en 6 et la migration du ben-
zoate en 5 tmoignent du passage par un intermdiaire benzoxonium. De mme,
la solvolyse des sulfonates prsentant un groupement actamido trans vicinal
passe par un cation oxazolinium 7.28, analogue dun acyloxonium.
.
CH,- O,+ H,OAc
(7.12) NaOAc k>
Me
Me Me
Louverture dite << cis >> du ct de loxygne donne le mme rsultat que la
substitution SN2 du sulfonate. Mais on observe une substitution dans des condi-
tions o une raction SN2 sans participation serait inapprciable. Ainsi la raction
(7.13) donne 66 % de rendement en 40 heures au reflux du mthylcellosolve
(124), ce qui est tout de mme un traitement relativement nergique, mais nim-
plique pas de solvants polaires aprotique~[~]. A partir de lanomre p du mme
substrat dans la DMF, le nucloside PhCH,SK donne un mlange de benzyl thio-
thers avec rtention et inversion de configuration (correspondant respectivement
aux ouvertures << trans >> et << cis >> du cation oxazolidinium) et doxazolidine, pro-
duit de dprotonation de ce cation.
7.5 SUCRES NON SATURS
7.5.1 Glycals
On obtient le prototype 7.29 par rduction par le zinc et lacide actique du bro-
mure de ttra-O-actyl-P-D-glucopyranosyle. On peut imaginer que le dpart de
bromure laisse un cation oxocarbnium, rduit au stade anion par le zinc, et que
la raction se termine par limination C( 1) - C(2) dactate. Du triactate 7.29, on
passe au glycal libre 7.30 par mthanolyse alcaline. Cette voie daccs est gn-
rale et peut servir aussi, par exemple, la prparation de lisomre D-galactal. Les
glycals, facilement accessibles et capables de ractions varies, ont un grand
potentiel synthtique[lO].
Les glycals sont des thers dnols et donnent lieu des additions lectrophiles.
Avec un ractif dissymtrique, la partie lectrophile sadditionne sur C(2), de
faon faire apparatre un ion oxocarbnium relativement stable en C( 1). Ainsi
leau, les alcools et les acides carboxyliques, en catalyse acide, donnent respecti-
vement le sucre 2-dsoxy (7.31, Z =OH), le glycoside 2-dsoxy (7.31, Z =OR)
et lester (7.31, Z =OCOR). Les conditions, qui catalysent aussi lanomrisation,
conduisent lanomre le plus stable. Les acides HC1 et HBr donnent les chlo-
rures et bromures de 2-doxyglycosyle (7.31, Z =C1, Br). Chlore et brome don-
nent chacun les deux drivs halogns possibles, par exemple, partir du tri-0-
actyl-D-glucal, a-D-gluco (7.32, 60 %) et a-D-manno (7.33, 30 %). L encore,
ltape initiale, due la molcule de brome ou au cation Br+lectrophiles
engendre un cation oxocarbnium centr sur C( l), qui, en prsence de sels dar-
gent, capte une molcule dun solvant alcoolique, pour donner un a-glycoside, 2-
bromo-2-dsoxy, par exemple 7.34. En revanche, le couplage des bromures 7.32
ou 7.33 en prsence de carbonate dargent donne le glycoside p de la faon atten-
due. On limine facilement lhalogne dans tous ces composs par voie radicalai-
re et on arrive ainsi aux sucres 2-dsoxy. La mthoxymercuration de 7.29 ou 7.30
avec lactate mercurique dans le mthanol fabrique une liaison carbone-mercu-
re. Le triactylglucal7.29 donne, aprs remplacement de lactate ionique par du
chlore, le glycoside p 7.35, mlang son isomre a-D-manno (les deux produits
sont trans- 1,2). Le D-glucal libre donne le mthyl 2-actoxymercuri-2-doxy-a-
D-mannopyranoside avec un rendement lev. La rduction au borohydrure rem-
place le mercure par de lhydrogne. Enfin les peracides, qui se comportent en
premire approximation comme des sources de cations OH+, reconstituent des
pyranoses partir des glycals. Ce peut-tre un procd commode pour inverser la
configuration en C(2) dun sucre. Ainsi, du galactose on passe au D-galactal7.36,
puis, par traitement avec de lacide perbenzoque en solution aqueuse, un mlan-
ge de galactose et de talose[]. Ce sucre rare 7.37 est facilement sparable du
galactose par cristallisation. Rappelons que linversion directe sur C(2) est impos-
sible dans la srie du galactose. Pour terminer, rappelons la synthse des anhy-
drides de Brig1 par poxydation des glycals avec le dimthyldioxirane expose au
paragraphe 3.4. On traitera dun autre type daddition, lazidonitration, au para-
graphe 10.3.3
Les composs hydroxyls - eau, alcools, phnols - ne sadditionnent pas sur
la double liaison des glycals et de leurs esters en labsence de catalyseurs acides.
En revanche, une temprature relativement leve, ils produisent un dplace-
ment de la fonction actate en 3 des triactylglycals, avec migration de la double
Sucres non saturs 119
I L
H
R I
Br
7. 29 R=Ac
7. 30 R=H
Ac -
Me
7. 34
7. 31
7. 32 R=Br, R'=H
7. 33 R=H, R'=Br
CH,OH
7. 35 7. 36
7. 37 7. 38 7. 39
liaison la position 2-3 selon 7.38. Ainsi le mthanol conduit au mthyl4,6.di-O-
actyl-2,3-didoxy-a-D-rythro-hex-2-enopyranoside.
7.5.2 Raction de Ferrier
Nous avons rencontr ci-dessus des pyranoses avec une double liaison en C( 1)
- C(2) ou C(2) - C(3). On connat des exemples de sucres avec des doubles liai-
sons sur toutes les autres positions. Nous nous bornerons dcrire une raction
importante des pyranoses non saturs en 5-6. On les prpare par limination par-
tir des pyranoses 6-doxy-6-iodo. Un article de 1988[12] propose un traitement de
4 heures 80" dans la DMF en prsence d'une base non nuclophile, le DBU
7.39, mais d'autres ractifs ont pu tre utiliss antrieurement. En quelques heures
de reflux dans l'actone aqueuse en prsence de chlorure mercurique, le ttraben-
zoate 7.40 donne la cyclohexanone substitue 7.41[131. Le produit de dpart 7.40
est, comme le glucal, un ther vinylique. En oprant dans des conditions trs
modres, on a pu mettre en vidence l'intermdiaire ouvert 7.42, qui se cyclise
ensuite comme un aldhyde &ctonique['4]. On a pu galement raliser la conver-
H,HgCl
HO
BzO
OBz OBz
7. 40 7. 41 7. 42
7. 45 7. 46
sion en cyclohexanone en remplaant HgC1, par une quantit catalytique (relati-
vement leve, 10-20 mol %) dactate ou de chlorure de palladium[*].
7.6 SUCRES RAMIFIS
7.6.1 Gnralits
Deux sucres ramifis, lapiose 7.43 et lhamamlose 7.44, sont trs rpandus
dans le monde vgtal. On en a isol au moins une quarantaine dautres comme
constituants de molcules antibiotiques, ce qui a stimul un effort synthtique
important. La matrise des conditions de ramification semble indispensable si lon
veut utiliser les sucres comme matire premire chirale. I1est commode de clas-
ser les sucres ramifis en deux groupes. Dans le groupe le plus abondant, car cest
le plus facile prparer, il y a un htrolment, le plus souvent loxygne dun
Sucres ramifis 121
hydroxyle, au pied de la ramification, selon lenchanement %(OH) - R. Dans
lautre groupe, il y a de lhydrogne, selon lenchanement >CH - R[l5].
7.6.2 Famille >C(OH) - R
Les organomtalliques sadditionnent de la faon habituelle sur les carbonyles
des cycles furanose ou pyranose. Pour viter le gaspillage de ractif, ou des pr-
cipitations indsirables en cours de raction, il est souhaitable dutiliser des pro-
tections ther ou actal. La raction est souvent strospcifique. Le diactal 7.45
donne avec CH3MgBr ou CH,Li uniquement le produit a-D-allo 7.46 de lattaque
exo. Les ractions (7.14) illustrent quelques tapes de la synthse de lhamamlo-
se qui comporte laddition exo sur la ctone approprie du dithiane lithi (78 %).
La libration de la fonction aldhyde par loxyde mercurique et le trifluorure de
bore (75 %) est suivie dune rduction par laluminohydrure de lithium (70 %).
On observe des additions analogues avec dautres nuclophiles carbons, comme
le cyanure, lanion driv du nitromthane, etc.
Une autre procd de ramification utilise la raction de Wittig. La condensa-
tion du sucre carbonyl avec le mthylnetriphnylphosphorane donne les sucres
double liaison exocyclique, comme le furanose 7.47. La conversion en diol vici-
nal 7.48 par OsO,, suivie de la tosylation slective de la fonction alcool primaire
et de la rduction du sulfonate 7.49 par LiAlH, donne le produit final 7.50. Cest
un chemin contourn, mais qui aboutit lisomre endo. Lpoxydation de la
double liaison exocyclique par les peracides donne le << spiropoxyde , qui peut
7. 47
7. 48 R=OH, R=Bz
7. 49 R=OTs, R=Bz
7. 50 R=H. R=H
tre hydrolys en glycol, ou rduit son extrmit primaire (Ractions (7.15)). On
obtient galement un spiropoxyde directement partir du sucre carbonyl en le
traitant par le dimthylsulfoxonium mthylure CH, =S(0)Me2. On a donc un
vaste choix de voies daccs cette premire famille, ce qui laisse esprer que
lune ou lautre conduira lisomre dsir.
-- /
O
(7.15)
CH20H
7.6.3 Famille >CH-R
La synthse de ces produits prend de plus en plus dimportance, avec lemploi
croissant de squences de sucres en synthse totale. I1est rare que les squences
prparer ne soient pas ramifies. Une premire solution consiste hydrogner
catalytiquement les doubles liaisons exocycliques. Ainsi, la ctone 7.51
(R =Me,CPh,Si) aisment accessible partir de 2-dsoxyglucose, condense
avec le phosphonate (MeO),P(O)CH,CO,Me (Raction de Wittig-Homer) donne
le produit double liaison exocyclique 7.52, qui est ensuite hydrogn sur palla-
dium sur charbon. On obtient le sucre ramifi 7.53 avec au moins 95 % de rende-
OBz
7. 51
CONe
H
OBz
7. 52
CH-OR
cH2w
,
OMe
I
OBz
7. 53
Sucres ramifis 123
ment. La strospcificit vient des contraintes imposes par la structure poly-
fonctionnelle du pyranose et le volume du groupement R. Le produit 7.53 est un
intermdiaire dans la synthse du thromboxane B2[16].
Une autre voie dapproche est la dsoxygnation de lhydroxyle tertiaire au
pied de la ramification. Parfois la configuration facilite une orientation slective
de la dshydratation endocyclique, donnant une double liaison rductible par la
suite (7.16). On a aussi dcrit la dsoxygnation radicalaire dun benzoate vicinal
dun carbonyle au moyen du tributylstannane (7.17). Dans ce cas, il y a inversion
de configuration mais cest peut-tre un exemple isol. Le rsultat est sans doute
li la configuration du radical intermdiaire port par le carbone li au benzoa-
te. En tout cas, cest une rduction radicalaire atypique. Dautres ractions intro-
duisent directement la ramification >CH-R, par exemple louverture des oxiranes
par les nuclophiles carbons. Le cuprate Me2CuLi donne avec loxirane 7.18 le
produit douverture diaxale 7.54. On observe des ractions analogues avec les
dialkylmagnsium (la prsence dun anion halognure doit parfois tre vite), le
cyanure Et,AlCN et le malonate dthyle sod.
H3
OH OMe
7. 54
Nous navons rencontr jusqu prsent que des ractions ioniques dans la pr-
paration des deux types de sucres ramifis. On peut aussi introduire une ramifica-
Br
1 . 5 5 1. 56
tion du type >CH-R par voie radicalaire. Par exemple, on traite le driv 2-bromo-
2-dsoxy 7.55 par I'allyltriphnyl-stannane CH, =CH - CH, - SnPh3 dans le ben-
zne 80" et on entretient la raction radicalaire en chane par addition lente (7
heures) d'azoisobutyronitrile, un amorceur classique de ractions en chane. On
obtient ainsi le sucre ramifi 7.56, mlang 10 % de son pimre en 2, mais iso-
lable par cristallisation avec 39 % de rendement[I7]. Le mcanisme de la raction
en chane est donn sur la figure 7.1, ou le sucre brom 7.55 est reprsent par
RBr. L'amorceur le transforme en radical R', qui s'additionne sur l'allylstannane.
Le nouveau radical se fragmente en donnant le sucre ramifi R - CH, - CH =CH,
et le radical Ph3Sn', qui dtache Br de RBr, et la raction se poursuit[lsI. On a
effectu des ramifications par cette mthode d'autres positions que C(2) et avec
d'autres accepteurs, comme l'acrylate de mthyle.
Enfin, on a prpar des sucres ramifis par une raction sigmatropique, le rar-
rangement de Claisen. Le chauffage 180" de l'ther vinylique 7.57 donne le
dihydropyrane 7.58. La ramification est du mme ct du cycle que la fonction
ther vinylique du produit de dpart et le rarrangement est strictement stro-
spcifique. Ce type de raction est utile en synthse chirale, car le << sucre >> final
est dsoxygn sur trois positions, cependant la prsence d'une double liaison
Figure 7.1 Mcanisme de la substitution radicalaire du ttra-O-actyl-2-bromo-2-doxy-P-
D-glucopyranose.
Rfrences 125
H,OH
7. 57 7. 58
7. 59
CH,OH
7. 60
dans 7.58 laisse entrevoir des possibilits dintroduction dhydroxyles, cis ou
trans sur les carbones C(3) et C(4).
7.6.4 Condensation aldolique
Cest encore une raction ionique, mais elle mrite une place a part. Elle peut
conduire des sucres des deux familles. La condensation dun aldhyde en a dun
carbonyle libre, dans des conditions alcalines modres, semble toujours possible.
Cette raction trs simple peut tre trs efficace. Ainsi le diactal 7.59, prpar
quantitativement en traitant le mannose par lactone en milieu acide, est en qui-
libre avec le tautomre carbonyl. La condensation avec le formaldhyde, utilis
en solution aqueuse, en prsence de carbonate de potassium, donne le sucre
hydroxymthyl 7.60 avec 86 % de
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Pergamon Press, Oxford, New York, 1986.
CHAPITRE 8
Les sucres en synthse chirale
8.1 INDUCTION ASYMTRIQUE[~~
8.1.1 Allylation et aldolisation nantioslective
Les expriences que nous allons dcrire mettent en jeu des ractifs chiraux
construits partir dun titanocneL2] L31 L41 c51. Le produit de dpart est le trichloru-
re de cylopentadinyltitane, C,H,TiCl,, que lon prpare partir du dichlorure
(C,H,),TiCl, par chauffage avec TiC1,. Ce trichlorure se combine deux mol-
cules de 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne-~~-D-glucofuranose (diactone-glucose) en
prsence de trithylamine et donne le bis titanate 8.1. Celui-ci est un compos
cristallis ; on a donc pu dterminer sa structure ltat solide. I1a la forme dun
tabouret de piano trois pieds, dont le cyclopentadinyl serait le sige. Les deux
ligands ont des orientations compltement diffrentes par rapport au cycle cyclo-
pentadinyle. De ce fait, ils mnagent une cavit chirale autour de latome de tita-
ne. Ltude de 8.1 en solution par RMN nindique ni inversion du centre mtal-
lique, ni change rapide de ligands. Ceci suggre que la conformation en solution
est voisine de la conformation dans le cristal. Le traitement de ce complexe par le
chlorure dallylmagnsium donne lorganomtallique allyllitane 8.2. I1 semble
que la cavit chirale du prcurseur 8.1 soit encore prsente dans 8.2. On a prpa-
r deux autres drivs partir du monochlorure 8.1 : lnolate au titane 8.3, en lui
opposant le lithien LiCH,COOCMe3 driv de lactate de butyle tertiaire, et
Ci
8. 2
8. 1
I
l
/Ti\
8 . 3 8. 4 8. 5
lnolate au titane 8.4, en lui opposant le lithien du glycinate dthyle protg sur
la fonction amine 8.5.
Lallyltitane 8.2 donne avec les aldhydes Ialcool homoallylique (Raction
(8.1)). A -76, laddition a lieu prfrentiellement sur la face re du carbonyle. La
raction a t conduite avec seize aldhydes aliphatiques et aromatiques. La
moyenne des excs nantiomriques mesurs sur les produits daddition est de
90,5 %. Lnolate au titane 8.3 donne avec les aldhydes un produit de condensa-
tion aldolique, un ester hydroxyl en p (Raction (8.2)). Lexcs nantiomrique
moyen, mesur partir de treize exemples, est de 94 %. Finalement lnolate du
glycinate dthyle protg 8.4 donne comme produit de condensation avec les
aldhydes des acides amins hydroxyls en p 8.6 (Raction (8.3)). Cette raction
conduit des produits D-thru avec deux centres de chiralit. Les excs diast-
roisomriques et nantiomriques moyens sont de 97 % et 96 %. Comme lally-
lation, ces additions dnolates (8.2) et (8.3) ont lieu prfrentiellement sur la face
re des aldhydes. I1est raisonnable dattribuer ces slectivits nantiomriques
la coordination de laldhyde dans la cavit chirale du complexe.
OH
+ ....
A/\\
(8.1) 8 . 2 + R-CHO -
R
OH
C0,Me + ....
(8.2) 8 . 3 + R-CHO RA/
OH
CO,Et + ....
R
(8.3) 8. 4 + R-CHO -
NHR
8. 6
Induction asymtrique 129
Dans toutes ces expriences, on rcupre comme sous-produit un polymre du
cyclopentadinyltitane [(C, Hs) Ti(OH)O], qui peut tre reconverti en trichlorure
et recycl. Lautre sous-produit est le diactone-glucose, galement rcuprable,
mais en gnral de valeur ngligeable par rapport au reste.
8.1.2 Cycloaddition
2,3-dihydro-6H-pyraned61
La cycloaddition du glyoxylate de butyle, HCO-CO,C,H,, sur des thers di-
nyliques donne des 2,3-dihydro-6H-pyranes, substitus en 6 par un groupement
alcoxy et en 2 par une fonction ester, que lon peut considrer comme des ana-
logues trs rduits de pyranose[6]. On peut prparer des thers dinyliques de
sucres. La plus simple de ces prparations consiste en laddition de loxygne de
lhydroxyle dun sucre partiellement protg, tel 8.7, sur une des triples liaisons
du butadiyne vendu sous une forme stabilise, Me2C(OH) - C =C - C C -
C(OH)Me2. Cette addition donne lther 8.8 (mlange cis-trans), ensuite semi-
hydrogn en 8.9 (mlange cis-trans). Les deux constituants de ce mlange sont
sparables. La cycloaddition du glyoxylate de butyle cre deux nouveaux centres
de chiralit, et, compte tenu de la chiralit du sucre, quatre dihydropyranes dia-
stroisomres. I1est commode de les dsigner avec les conventions de la nomen-
clature des sucres, par a-D, 0-D, a-L, B-L. Les proportions dans le mlange de
dihydropyranes 8.11 obtenus dans la cycloaddition sur lther dinylique trans
Bn
3n
8. 7 R=H
8. 8 R= CHICH-CGCH
8. 9 R= CH=C-CH=CH,
0,Bu CO,Bu
8. 10
I
OR*
a -D P-D CI-L P-L
8.11
Me M%o] O
O X 0
Me Me
bR
8. 12 8. 13
8.10 sont a- D (44 %), p-D (4 %), a-L (O %) et p-L (52 %). Ces proportions cor-
respondent 56 % daddition endo. Plus intressant est le degr lev de slecti-
vit faciale, la proportion daddition sur la face si de lther dinylique, qui cor-
respond la some ( a- D) +@-L), atteignant 96 %. I1 y a donc un degr lev de
protection de la face re contre lapproche du dinophile par la molcule de gluco-
se perbenzyl. Les configurations a- D et p-L seraient identiques si on avait utili-
s un dinophile appropri. Effectivement, la cycloaddition du msoxalate dthy-
le CO(CO,Et), sur le dine cis 8.12 prpar partir du diactone-glucose donne,
avec un rendement global de 85 % un mlange qui contient 92 % dadduit S, 8.13.
Les dihydropyranes 8.11 et 8.13 et de nombreux analogues sont transformables en
sucres pyranosiques authentiques par des fonctionnalisations convenable^^^] L8].
Ces premires cycloadditions ntaient compltes quaprs 72 heures 60C.
Lorsque les partenaires sont plus ractifs et quon peut catalyser la cycloaddition
avec des acides de Lewis, on peut oprer -78C. Dans ces conditions, on obser-
ve ventuellement une induction asymtrique leve : la raction (8.4) du cyclo-
pentadine sur un acrylate driv du 5--trimthylsilyl-a-D-xylofuranose,
conduite -78C dans le dichloromthane en prsence de TiCl, donne exclusive-
ment ladduit endo ( l R, 2R). On explique ceci par la formation dun complexe
intermdiaire qui contient la fois le dinophile et lacide de Lewis attachs au
sucre inducteur chiral[9].
Induction asymtrique 131
3,6-Dihydr0-2H-1,2-oxazines[~~~
La cycloaddition [4 +2] de dines sur les drivs nitross chlors en a ouvre
un accs facile aux 3,6 dihydro-2-H-1,2-oxazines non substitues l'azote. On a
dvelopp cette raction partir de composs nitross chlors nantiomrique-
ment purs drivs de sucres. La prparation de l'un deux est schmatise selon
(8.5). L'oxime du << diactone-mannose B 8.14 est en quilibre tautomrique avec
I'hydroxylamine cyclique. L'oxydation de cette hydroxylamine par le periodate
de sodium 80" dans des conditions lgrement basiques (actate de sodium)
donne l'hydroximinolactone 8.15. On peut considrer 8.15 comme l'oxime d'un
carbonyle d'ester. Le driv nitros chlor 8.16, de couleur bleue, est finalement
obtenu par chloration de 8.15 avec l'hypochlorite de butyle tertiaire. Le driv
chlor nitros 8.16 est la fois plus stable et beaucoup plus ractif que ses ana-
logues aliphatiques simples. Avec les dines les plus ractifs, comme le 1,3-cyclo-
hexadine, la raction est termine en moins de 15 mn -70". Avec le 2,4-hexa-
dine truns, truns, la raction dure moins de 4 heures -20". On reconnat la fin
la disparition de la couleur bleue de 8.16. Le produit primaire de la cycloaddi-
tion du cyclohexadine subit une quaternisation interne, donnant un produit qui
est coup par HC1 (Raction (8.6)) Dans cette exprience, qui conduit 8.17,
comme avec les autres dines symtriques, la dihydrooxazine est obtenue avec un
excs nantiomrique au moins gal 96 %.
Me Me
Me O-CH, >(
x l o
8. 14
8. 15
8. 16
l
a
8.18
8. 19
Dans le furanose 8.16 ltat solide, le chlore adopte une orientation pseudo-
axiale et lazote une orientation pseudo-quatoriale. Lorientation de la liaison
N-O est prcise par la reprsentation de Newman le long de la liaison C(1)-N,
8.18. Un modle compact indique quune face de N =O est trs encombre. I1est
probable quil y a la mme conformation en solution et que cest ceci qui impose
lapproche endo schmatise en 8.19, o le cyclohexadine cherche viter le
support sucre du driv nitros chlor.
8.1.3 Raction de Ugi
La raction de Ugi est la synthse de lamide dun acide a-amin par action sur
un aldhyde dune amine et dun isonitrile, en prsence de chlorure de zinc et
dacide formique. On a propos comme partenaire amin chiral une P-D-galacto-
sylamine, dont les fonctions alcool sont protges par estrification en pivalate
(Raction (8.7))[]. On conduit la raction dans loxolane entre -75C et -25C.
Le mlange diastromnque obtenu correspond un rapport D/L voisin de 95 5.
R-CHO, Me,C-NC
H, HCO,H,ZnCl,
OPiv
OPiv
Les sucres comme prcurseurs de squences dans les synthses de produits naturels 133
On obtient lisomre D pur par une recristallisation dans lheptane. On sait que la
liaison entre sucre et azote est facile couper dans les glycosylamines (voir le
paragraphe 3.6.2).
8.2 LES SUCRES COMME PRCURSEURS DE SQUENCES
DANS LES SYNTHESES DE PRODUITS NATURELS
8.2.1 Considrations gnrales
On peut faire la synthse dune substance naturelle partir de prcurseurs rac-
miques en utilisant des ractions stroslectives ou strospcifiques. Le produit
final est un racmique et il faut achever la synthse par un ddoublement optique.
Cette voie dapproche semble passe de mode, au moins dans les laboratoires aca-
dmiques. Une deuxime mthode repose sur la synthse asymtrique. Les pro-
duits de dpart sont racmiques, mais lemploi de ractifs et de catalyseurs incor-
porant des structures chirales permet dorienter une ou plusieurs tapes
privilgies la route synthtique dans une voie chirale. Nous avons vu des
exemples de tels ractifs au paragraphe 8.1 ci-dessus. La philosophie synthtique
que nous allons dvelopper mantenant repose sur lemploi de matires premires
chirales, gnralement abondantes. Elle repose sur un corps de principes dont
lutilisation est facilite par des programmes informatiques particuliers, groups
sous le nom de << mthode du chiron D (the chimn approach)[121 ri 31 [141. Le mot
chiron a t forg partir de << synthon chiral . On sait quen synthse totale, le
mot synthon dsigne une petite molcule btie sur mesure pour sencastrer exac-
tement sa place dans une synthse totale multitape. Le dcoupage en synthons
de la cible (sur le papier !) est pratiqu aux sites o on peut esprer coudre les
morceaux dans lavance synthtique. Ce sont en gnral les types de fonction pr-
sents dans la cible (et lexprience passe du chimiste) qui orientent le dcoupa-
ge. Dans la << mthode chiron , le principe directeur est la conservation de la st-
rochimie, on tche de dcouper la cible synthtique avec une pertubation
minimale des centres strogniques. Naturellement, une deuxime condition
intervient : les chirons coudre ensemble doivent tre des produits naturels abon-
dants ou facilement accessibles partir de produits naturels abondants. Dans une
certaine mesure, cest cette facilit daccs qui dicte la stratgie. Le coup dil du
chimiste expriment nest pas toujours suffisant pour reconnatre les prcurseurs
appropris sur la molcule cible. Un programme informatique se propose daider
la reconnaissance de rapports cryptiques[I21 [I 3] [I4. Dabord, la molcule est
prsente sous des aspects inhabituels, retourne, renverse, etc. Dune famille de
composs lautre, les chimistes, suivis en cela par la presse spcialise, adoptent
des convention picturales diffrentes. Cette diversit de reprsentation ralentit le
transfert mental entre les configurations de membres de familles chimiques diff-
rentes. Le programme permet de passer automatiquement dune reprsentation
conventionnelle une autre. Ceci est illustr sur la figure 8.1. La donne fournie
lordinateur est la structure dun compos naturel forte activit, le FK506, des-
sine dune certaine faon, qui est la plus habituelle dans les priodiques, en haut
gauche. A partir de ce dessin, le programme donne la configuration absolue, R
ou S, autour de chaque carbone. I1 sectionne le grand cycle et aligne la chane sur
un axe vertical, ce qui permet de passer la reprsentation suivant la convention
de Fischer (en haut droite), familire aux spcialistes des sucres, ou la repr-
sentation en zig-zag (en bas). La reprsentation Fischer est particulirement com-
Me
O
/O
Me
Me XC
12
ox OH OX
Figure 8.1 Attribution des symboles R, S et dessin de deux projections du compos FK SO6
par le programme Chiron. Daprs S. Hanessian, J . Franco et B. Larouche, Pure Appl.
Chem., 62 (1990) 1887-1910, S. Hanessian, Ibid., 65 (1993) 1189-1204 et S. Hanessian,
Total Synthesis of Natural Product : The Chiron Approach, Pergamon Press, 1983 (publi
avec les aimables autorisations de lInternational Union of Pure and Applied Chemistry).
mode pour tablir une corrlation avec les sucres. Le programme va plus loin et
suggre des voies synthtiques au dpart de << chirons D accessibles. Parfois la cor-
respondance entre Chiron et squence de la cible nest pas du tout vidente. Ainsi
les sucres ont des fonctions alcool en trop et il faut les dsoxygner. Plus subtile-
ment, il peut tre profitable de conserver une fonction non prsente dans la cible
jusqu une tape tardive de la synthse, parce quelle favorise la strospcifici-
t des ractions.
Depuis 1975, le rapport annuel de la Socit Chimique dAngleterre,
Carbohydrate Chemistry, comporte un chapitre intitul Synthesis [ partir de
sucres] of Enantiomerically Pure Non-Carbohydrate Compounds.
8.2.2 Synthse partir de sucres
(+)-Mroquinne[lSI
Cette pipridine 8.20 a une relation vidente avec la quinine 8.21, dont elle est
un prcurseur synthtique. Le prcurseur est le compos 8.22, peractate dun
2-hydroxyglucal. On a entour le dessin 8.22 des indications sur les modifications
ncessaires pour arriver au (+)-mroquinne. Le ttraactate 8.22 est trs facile-
ment accessible, car cest le produit dlimination du bromure de ttra--actyl-
a-D-glucopyranosyle 8.23 par la base non nuclophile, 1,5-diazabicyclo [5.4.0]
H
8. 20
actate
Ac0
dsoxy
couper
NHX
8. 22
8. 21
8. 23 8. 24
undc-5-ne (DBU ; 8.24). I1se comporte strictement comme le glycal en prsen-
ce dun alcool et dthrate de trifluorure de bore : le rarrangement donne le gly-
coside non satur 8.25, qui est comme 8.22, un actate dnol. Lhydrolyse alca-
line libre lnolate dont le tautomre ctonique subit aisment une limination
dactate sur les positions 3-4. En ractylant, on obtient 8.26. A ce stade, le lec-
teur remarquera que 8.26 ne contient aucun des deux centres strogniques de la
cible. I1ny a plus que deux carbones asymtriques et, comme on va le voir, tous
les deux destins disparatre dans la synthse. Mais cest grce leur prsence
ce stade que les deux centres chiraux dfinitifs vont stablir. Laddition de
Michal du vinylcuprate modifi, (CH, =CH) CuCN (MgBr)*, donne un nolate
sur lequel on fait instantanment ragir le bromoactate de mthyle. Ceci donne
presque exclusivement lisomre trans 8.27, isomris en cis 8.28 par la trithy-
lamine. La suite des oprations comporte la dsoxygnation en C(2), 8.29, lhy-
drolyse des protections, 8.30 et le clivage du diol 5,6 par le periodate. La conden-
sation du dialdhyde 8.31 avec la benzylamine, suivie de rduction par le
cyanoborohydrure au pH 4.3 donne la pipridine 8.32.
8. 25 8. 26
CO,Me
Me,C O
8. 27 8. 28
\ /
Y
l I
1K n /\/OR CHO CHO
RO
8. 29 R=CMe,, R=Ac
8. 30 R=R = H
8. 31
Bn
8. 32
(-) Ajmalicine (8.33) et (+)-IPpiajmalicine (8.34)[161
Ces deux alcalodes indoliques ont des proprits pharmacologiques impor-
tantes. Le point de dpart est lintermdiaire 8.29 dj employ la synthse du
(+)-mroquinne. On hydrolyse la fonction actate par mthanolyse alcaline, ce
qui donne lalcool primaire 8.35. Nous revenons ici passagrement au mode de
reprsentation traditionnel des pyranoses pour mettre en vidence lorientation
axiale du groupement vinyle. On dsoxygne le carbone 6 en remplaant dabord
lhydroxyle par du chlore, au moyen du systme PPh,-CCl,, et on rduit ensuite
le chlorure par voie radicalaire avec le tributylstannane. Ltape suivante est
lozonisation du groupement vinyle en aldhyde 8.36, axial. Trait par la base
8.24, le substituant -CHO adopte la position stable quatoriale 8.37. Le couplage
avec la tryptamine 8.38 en prsence de rducteur (NaBH4) donne 8.39 o lon
reconnat les cycles ABDE des deux alcalodes cibles. Dans cette raction, la base
de Schiff entre lamine et laldhyde est rduite en amine secondaire ; cette der-
nire est cyclise en amide cyclique par la fonction ester. Sans donner plus de
dtails, notons que ce carbonyle amidique est en bonne place pour permettre une
cyclisation sur le carbone a de lazote indolique, fermant ainsi le cycle C.
Lintroduction du substituant COzMe sur le cycle E ncessite la conversion du
glycoside en lactone 8.40, que lon peut dprotoner en a avec la base Et,NLi. La
&/O 0,Me
8. 33 R=H, R=Me
8. 34 R=Me, R=H
OCMe,
8. 36
H
CH,OH
eo OCMe,
8. 35
Me
CO,Me OCMe,
8. 37
8. 38
O
8. 40
~
C0,Me
O
IrV'.
8. 39
8. 41
Me
OCMe,
C02Me
8. 42
R;1"
T-
I
, CH, CH, , CH2
,,' \ ,,' \ ," \ ,'
CO CO CO
OH OH OH
OH OH OH
I I I
8. 43 8. 44
condensation de l'anion avec CNC02Me donne 8.41, qui est rduit en 8.42 par
l'hydrure de diisobutylaluminium. L'orientation du mthyle de 8.42 correspond
celle de l'alcalode epi. Pour la (-)-ajmalicine, il faut pimriser au niveau de C(5)
du sucre, une tape convenable. La mthode repose sur l'ouverture de la lacto-
ne, qui libre la fonction alcool sur C(5). Celle-ci est alors inverse.
Substances naturelles d'origine polypropionique
Sur la molcule d'un certain nombre de substances naturelles, souvent antibio-
tiques, on observe des squences constitues par une chane carbone linaire sur
laquelle alternent les ramifications mthyle et hydroxyle comme sur le fragment
8.43. La plupart drivent sans doute de la condensation de formes biologiquement
actives de lacide propionique selon 8.44. On rencontre aussi les squences
dsoxygnes. Pour construire ces squences partir denchanement de sucres,
un des problmes est lintroduction strospcifique de ramifications mthyle. Un
Chiron possible est la D-ribonolactone 8.45. La protection slective de la fonction
alcool primaire et la drivation du systme diol avec le thiocarbonyl bis imidazo-
le 8.46 donnent le thionocarbonate 8.47. Le traitement de 8.47 au nickel de Raney
produit une limination et conduit la lactone non sature 8.48. Laddition de
Michal du ractif volumineux (MeS)3CLi a lieu en trans de C(5). On oxyde
directement lnolate avec un peroxyde du molybdne et, l encore, un facteur
dencombrement introduit lhydroxyle strospcifiquement en trans, donnant en
une seule opration 8.49. Le substituant soufr est rduit en mthyle par le nickel
de Raney. On a ainsi introduit spcifiquement la ramification carbone. De l on
passe 8.50 par des transformations classiques. Nous avons port la numrotation
de la ribonolactone pour permettre au lecteur de suivre les avatars du sucre. On
OH OH
8. 45
CH,OSiPh,CMe,
Do
cs
8. 47
8. 46
CH,OSiPh,CMe, CH,OSiPh,CMe,
yo?..
8. 48 8. 49
I />O
Me-
5 i.Ph O Me I
8. 50 8. 51
-OxMe
-0 Me
8. 52
Me Me
I
5
OH
. - . , O O Me Me
M y \ - Me
FoxMe
8. 54
8. 53
ouvre lpoxyde avec lorganolithien bifonctionnel LiCH (SPh) C0,Li. Ceci
introduit une fonction acide carboxylique, qui est lactonise sur la fonction alcool
secondaire provenant de louverture de lpoxyde. On obtient la lactone 8.51. La
fonction phnylthio est en place pour permettre lintroduction de la double liaison
par limination de sulfoxyde. Le produit, 8.52, est un analogue de 8.48, sauf que
la chane latrale a lorientation oppose. Aussi, cest toujours en trans de cette
chane latrale qua lieu laddition de Michal. Le mthyllithiurn donne le produit
ramifi 8.53. Comme prcdemment, on peut oxyder in situ. Aprs ouverture
rductrice du cycle lactonique par LiAlH,, on arrive 8.54, prcurseur dune
squence de lion~mycine[~].
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CHAPITRE 9
Les oligosaccharides :
Configuration et analyse
9.1 INTRODUCTION, NOMENCLATURE
Les molcules rencontres jusquici drivaient en gnral dun seul sucre
simple, pentose, hexose, etc. Nous les avons appeles sucres, ce qui est correct,
mais il va falloir dsormais les diffrencier dautres sucres, btis partir de deux,
trois, quatre ... ou un trs grand nombre de sucres simples. Cest le moment
dintroduire les termes, la signification vidente, de monosaccharide, di-, tri-,
ttrasaccharide,. . . polysaccharide. Les units monosaccharidiques sont relies par
des ponts oxygne, qui se prsentent comme le rsultat de la substitution de lhy-
droxyle hmiactalique de lune delles par loxygne dun hydroxyle li 2i lautre.
Si ce dernier est galement hmiactalique, ces deux fonctions se bloquent rci-
proquement, il ny a plus daldhyde potentiel. La disparition du pouvoir rduc-
teur tait dj facile reconnatre avec les moyens de lancienne chimie ; elle a
servi trs tt de base la classification. Comme disaccharide non rducteur, nous
avons dj rencontr le sucre ordinaire 3.21. Les trhaloses sont les trois disac-
charides non rducteurs btis uniquement partir dunits D-glucopyranosyle,
donc avec les configurations anomriques fixes a, a ; a, p et b, p. Le plus com-
mun est lisomre a, a, 9.1, substance de rserve chez les invertbrs et les vg-
taux infrieurs.
Dans lautre type de liaison, loxygne du pont provient dun hydroxyle alcoo-
lique. On la rencontre dans une multitude de produits naturels. Elle permet la
formation denchanements de petite ou grande dimension, que le chimiste poly-
mriste appellerait des oligomres et polymres de polycondensation. I1 reste tou-
jours un bout de ces chanes une fonction aldhyde potentielle, do le nom
dextrmit rductrice quon lui donne par abus de langage, mme si elle ne lest
pas du tout, parce quelle est engage dans une liaison glycoside avec une mol-
cule nappartenant pas la famille des sucres. Les trs longues chanes sont prio-
diques. Pour lamylose, 11.14, et la cellulose, 9.2, la priode est dune unit
monosaccharidique D-glucopyranosyle, lie en 1 et 4. Les configurations anom-
riques sont toutes a pour lamylose et toutes p pour la cellulose. Mais on ren-
contre aussi des portions de chanes priodiques, plus ou moins longues, o luni-
t rptitrice est un disaccharide, comme dans ccrtains glycolipides ou lhparine
HO
O ~ o ~ 0 4 ~ ~ H OH HO Hi o& HO H n OH
OH
9 . 1
OH
9. 2
et les polysaccharides apparents, ou mme un tri-, un ttrasaccharide comme
dans les antignes bactriens. Depuis une vingtaine dannes, on a t amen
attacher une importance particulire une classe de molcules intermdiaires
appeles de faon imprcise les oligosaccharides : ce nom recouvre tous les
degrs de condensation, depuis deux jusqu un maximum mal dfini, une ving-
taine peut-tre dunits mono-saccharidiques. Ce classement nest pas dict par la
chimie, mais par lactivit frquemment observe de certains reprsentants dans
les phnomnes de reconnaissance. I1 ny a aucune rgularit vidente dans ces
difices, auxquels la suite de cet ouvrage sera dsormais presque uniquement
consacre.
Dans la nomenclature prconise, un oligosaccharide est un compos dont
lhydrolyse complte donne un nombre restreint de monosaccharides. Un disac-
charide non rducteur est dcrit comme un glycosylglycoside. Exemples : Sucre
ordinaire ou saccharose, 3.21 : p-D-Fructofuranosyl-a-D-glucopyranoside ;
Ttrahalose a, a, 9.1 : a-D-Glucopyranosyl-a-D-glucopyranoside.
Un disaccharide rducteur est dcrit comme un glycosylglycose, lunit non
rductrice considre comme un substituant de lautre : N-Actyllactosamine
(voir la formule 9.9, R =H, R =OH, n =1) : 2-Actamido-2-doxy-4-O-~-D-
galactopyranosyl-glucose.
On dessine en gnral les chanes non ramifies de lextrmit non rductrice,
gauche, lextrmit rductrice, droite. Une nomenclature, plus parlante que
la prcdente, crit les units monosaccharidiques dans le mme sens, la liaison
glycosidique tant dcrite par le symbole (n + m), avec n =1 ou 2. La N-actyl-
lactosamine scrit alors : O-P-D-Galactopyranosyl-( 1 + 4)-2-actamido-2-
doxy-D-glucose.
Le ttrasaccharide glycoside tudi au paragraphe 11 S.3 scrit : 4-nitrophnyl
O-a-D-glucopyranosyl-( 1 +4)-O-a-D-glucopyranosyl-( 1 +4)-O-a-D-glucopyra-
nosyl-( 1 +4)-a-D-glucopyranoside.
On note les ramifications dunits monosaccharidiques sur la chane principa-
le par un systme de crochets.
Ces deux nomenclatures sont les seules qui permettent dindiquer avec clart
la position des substituants sur les monosaccharides constitutifs et ce sont celles
quon rencontre dans les articles de chimie synthtique en particulier. Elles sont
Effet exoanomrique 143
Biochimie Nomenclature prcise
a (P)-D-Glc p
a @)-D-GaI p
a (P)-L-Fuc p
a @)-D-CICNAC~
a (p)-D-GalNAcp
a (p)-D-Neu 5Acp
Tableau 9.1 Traduction en nomenclature prcise des noms de rsidus monosaccharidiques
employs en biochimie.
encombrantes et on peut simplifier pour les oligosaccharide libres. Chaque mono-
saccharide est reprsent par un symbole : glucose : Glc ; galactose : Gal ; man-
nose : Man ; fucose : Fuc ; N-actyl-glucosamine : GlcNAc ; N-actyl galactosa-
mine : GalNAc ; acide sialique (le plus commun) : NeuAc. La dimension du cycle
est prcise par ladjonction de p ouf. La N-actyllactosamine et le ttrasacchari-
de libre scrivent alors :
P-D-Galp-( 1 +4)-D-GlcNAc et a-D-Glcp-( 1+4)-a-D-Glcp (1 -+4)-a-D-Glcp-
Parmi les biochimistes, ceux qui rencontrent dans leurs tudes un nombre limi-
t de sucres, tous sous la forme pyranosique, emploient dans leurs articles une
nomenclature encore plus simple. Ils suppriment D, L, p etfet rejettent le des-
cripteur danomrie aprs le symbole du sucre, ce qui donne, pour la N-actyllac-
tosamine :
Gal P (1+4)-GlcNAc
Si devant une formule de ce style, le lecteur ressent un besoin de prcision, il
pourra se reporter au tableau 9.1 pour la traduire en nomenclature sans ambigut.
(1+4)-D-Gl~
9.2 EFFET EXOANOMRIQUE
Les oligosaccharides sont btis partir de rsidus monosaccharidiques relis
par des ponts oxygne. Est-ce que cette articulation est bloque ou semi-bloque;
y a-t-il libre rotation autour des deux liaisons simples carbone-oxygne ? A vrai
dire, ce problme se pose dj avec les glucosides simples (voir le chapitre 3),
mais nous lexaminerons ici parce que cest dans le cadre de la chimie des oligo-
saccharides quil a soulev le plus dintrt. On comprendra quil est trs impor-
tant de savoir si ces molcules forment un ensemble souple ou semi-rigide pour
comprendre le mcanisme de la reconnaissance cellulaire. Dans le cas gnral, la
conformation autour dune liaison simple est gauche (ou synclinale, sc) ou anti-
priplanaire (up). Dans la rgion anomrique on prend cumme rfrence la liaison
9 H
OR
9. 3a 9. 3e
C(1) - O(5) et les conformations sont prcises par la connaissance des angles
didres O =O(1) - C(1) - O(5) - C(5) et <p =R - 0(1) - C(1) - 0(5), avec les
conventions de notation des cristallographes. Dans le pyranoside en conformation
idale, l'anomre quatorial, 9.3e correspondant O =180" (up) et l'anomre
axial, 9.3a O =+60" (+sc). On voit sur la figure 9.1 les trois conformations de
chaque anomre considrer a priori[ll.
Anomre quatorial
R
H H
Anornre axial
e
@
+60" (+SC)
+60" (+SC)
R
+60" (+SC)
- 60' ( - SC)
R
Figure 9.1 Conformations considrer pour deux glycosides anomriques.
Effet exoanomrique 145
H
Figure 9.2 Les atomes C et H dont on mesure le couplage vicinal, droite, projection de
Newman suivant C( 1) - O( 1).
3 . 7
1
1
4
9100 IL00 2:oo
Figure 9.3 Dpendance du couplage 3J,, de langle didre @ dfini sur la figure 9.2
(publi avec laimable autorisation dElsevier Science).
On mesure videmment sans difficult 8 et <p par les rayons X sur les chan-
tillons cristalliss, mais cest exceptionnel den obtenir avec les oligosaccharides.
Nimporte comment, cela ne donne pas de certitude sur la conformation en solu-
tion, cest--dire dans les conditions o ils manifestent rellement leur activit.
Les mesures en solution utilisent la RMN de 13C, qui permet de dterminer le cou-
plage 3J entre le proton anomrique et latome de carbone de jonction de la mol-
cule glycoside (Fig. 9.2). On a tabli exprimentalement la relation entre 3J CH et
<D partir de drivs de sucres prsums trs rigides, tel que 9.4. I1est alors vrai-
semblable que les angles didres considrs sont peu modifis par le passage en
solution. Les mesures sont bien reprsentes par la formule (9.l), qui donne gra-
phiquement une courbe du type Lemieux-Karplus[2] (Fig. 9.3) :
(9.1)
J cH/Hz =5,7 cos2@ - 0,6 COS @ +0.5
On peut aussi valuer la proximit de ces atomes carbone et hydrogne par
mesure du temps de relaxation spin-rseau de ce proton[3].
On trouve que les glycosides axiaux existent uniformment sous la conforma-
tion (+sc, +s~). Par exemple dans le trhalose, a, 9.1, les quatre angles didres
I
OAc
9. 4
anomriques correspondent +sc et le disaccharide possde un axe C,, aussi bien
en solution qu ltat solide. Par contre, les glycosides quatoriaux connus se
rpartissent en deux groupes, lun majoritaire up, -sc (trois contre un) et lautre
minoritaire, up, up. On peut se demander si ces prfrences conformationnelles
sont dues autre chose que des interactions non lies. Les conformations inter-
dites up, sc et +sc, -sc amnent la molcule substituante sur O( 1) dans une posi-
tion dtroite proximit avec les surfaces infrieure ou suprieure du pyranose. La
prfrence pour up, -sc et +sc, +sc tiendrait simplement au fait que loxygne
cyclique est moins encombrant que le carbone ttrahdrique C(2). Lorsquon
prend, sur un trs grand nombre dexemples, la moyenne des valeurs de cp - qui
sont dailleurs fort disperses - on observe les conformations donnes la
figure 9.4.
Ceci peut traduire une tendance de lorbitale 2 p de loxygne saligner sur la
liaison C( 1) - O(5) de faon interagir avec lantiliante correspondante. Mais plus
simplement, on peut juger que le groupe R se rapproche naturellement de lhy-
drogne, le groupe de loin le moins volumineux. Comme dhabitude, on peut
reprocher aux mesures de RMN de ne traduire quune moyenne entre plusieurs
conformations. Ce qui compte videmment, cest dvaluer les barrires. I1 y a eu
beaucoup de calculs sur des modles simples. Peut-tre la leon en tirer est-elle
quon ne peut pas considrer quangles et longueurs de liaison varient indpen-
damment les uns des autres, donc chaque modle doit tre optimis.
Z,
Anomre quatorial
-
(p =-79,4
Anomre axial
@ =84,5
Figure 9.4 Moyenne des conformations exoanomriques observes.
Dtermination des squences par les mthodes chimiques 147
9.3 DTERMINATION DES SQUENCES
PAR LES METHODES CHIMIQUES
9.3.1 Hydrolyse acide
La premire question concerne la nature et les proportions relatives des mono-
saccharides constitutifs. On y arrive en principe par hydrolyse acide14] mais, dans
la pratique, il faut lappliquer avec discernement car il y a un certain nombre de
cas despce importants. On emploie les acides chlorhydrique, sulfurique et tri-
fluoractique, dont les solutions N ont respectivement les pH 0,l - 0,3 - 0,7.
Lorsque lhydrolyse libre des monosaccharides fragiles en milieu acide, il y a un
quilibre dlicat maintenir entre les risques dhydrolyse incomplte et de des-
truction partielle du produit dhydrolyse. Les sucres fragiles sont les pentoses, les
dsoxysucres, les acides uroniques et aldoniques. Lorsque lacide sialique est
maintenu 30 mn 90 dans HCl0,Ol M, il y a 20 % de dcomposition. Avec les
polysaccharides neutres, on peut limiter la dcomposition moins de 9 %. Les
groupements actyls des actamides sont hydrolyss et on obtient les amino
sucres protons, qui sont relativement stables.
Chydrolyse par lacide chlorhydrique mthanolique, qui conduit aux mthyl
glycosides serait moins destructrice, mais, dans le pire des cas, un monosaccha-
ride peut se retrouver dans le << mthanolysat >>sous quatre formes chimiques dif-
frentes, les quatre mthyl glycosides. Lactolyse, cest--dire la dgradation par
un mlange danhydride actique et dacide sulfurique transforme la cellulose en
octoactate du disaccharide P-D-Glcp-( 1+4)-Glc, mais cest une raction prpa-
rative plutt quune mthode danalyse. Lactolyse est parfois prconise comme
tape additionnelle dans les oprations analytiques.
9.3.2 Hydrolyse enzymatique
Nous avons dj parl, au paragraphe 3.5.2 des enzymes glycosidases. Les exo-
glycosidases dtachent un lment monosaccharidique situ une extrmit non
rductrice (il y en a souvent plusieurs car les chanes sont ramifies). Elles sont
nommes en fonction de lunit quelles dtachent, neuraminidase (dun autre
nom de lacide sialique, acide N-actylneuraminique), fucosidase, galactosidase,
mannosidases et aminohexosidases, et sont normalement spcifiques pour les
configurations a ou p. En principe, elles permettent donc une dgradation rsidu
par rsidu partir de lextrmit non rductrice et peuvent tre employes en
conjonction avec les mthodes par mthylation dcrites ci-dessous.
Nous navons pas dcrit au chapitre 3 les endoglycosidases. Elles catalysent
lhydrolyse dune liaison glycosidique au milieu dune chane et sont spcifiques
de la configuration des deux sucres quelles ~parent~]. La endo-2-actamido-2-
doxy-fi-D-glucosidase coupe en son milieu la squence dite << chitobiose >>
)-P-D-GlcNAcp-( 1 +4)-P-D-GlcNAcp-( prsente lextrmit rductrice de cer-
taines glycoprotines. Un autre enzyme, une endo-P-D-galactosidase coupe sp-
cifiquement la liaison entre galactose et N-actylglucosamine dans la squence
fort commune -+3)-P-D-Galp-( 1-+4)-P-D-Glc NAc p (I +.
9.3.3 Analyse par mthylation
Lide est dthrifier tous les hydroxyles libres. Comme les fonctions thers
rsistent aux conditions de lhydrolyse acide, on ne retrouve dans les morceaux,
comme fonction hydroxyle libre, que celles qui taient primitivement engages
dans la liaison glycosidique et celle de lextrmit rductrice de loligosacchari-
de. Sur un exemple simple, le lactose 9.5, permthyl en 9.6, on voit que Ihy-
drolyse acide de 9.6 donnera un galactose ttramthyl 9.7 et un glucose trim-
thyl 9.8, ce qui fixe lagencement des deux rsidus dans le disaccharide. Cette
ide banale se heurte quelques difficults dans la mise en uvre : il faut un sol-
vant proprits contradictoires, puisque le systme est trs hydrophile au dpart
et trs hydrophobe larrive. Dans un oligosaccharide assez important, il faut
crer une grande quantit de fonctions alcoolate charge ngative et proches les
unes des autres. Le solvant actuellement prfr est le dimthylsulfoxyde,
CH,SOCH,, et, comme base, on utilise lanion correspondant, obtenu en ajoutant
au dimthylsulfoxyde de lhydrure de sodium ou du ter-butylate de potassium.
Pour pouvoir tablir un diagnostic sr, il est essentiel que la conversion des
hydroxyles en alcoolates soit complte. On vrifie quon a bien un excs de
CH,SOCH, en utilisant la couleur rouge que donne cet anion avec le triphnyl-
mthane. Cette mthode mthyle aussi les azotes amidiques des hexosamines N-
actyles.
Les mthodes que nous avons esquisses dans ces trois derniers paragraphes
donnent finalement un mlange de monosaccharides ou de drivs de monosac-
charides analyser. On pratique cette analyse par les mthodes chromatogra-
phiques dcrites aux chapitre 1 et 3, avec ventuellement une transformation
approprie pour rendre les molcules volatiles. Le couplage chromatographie de
vapeur-spectromtrie de masse est particulirement utile. On a miniaturis les
oprations chimiques pour pouvoir traiter de trs petites quantits dchantillon.
R
RO ho- CH,OR
OR
RO
RO
9. 5 R=H
9. 6 R=Me
Me&oH *
OH
Me
Me0 Me0
9. 7 9. 8
Dtermination des squences par les mthodes spectroscopiques 149
Ceci tait ncessaire, car on a rarement les oligosaccharides vraiment importants
en quantit notable. Ils proviennent souvent de sources humaines. Les mthodes
spectroscopiques, que nous abordons maintenant, permettent de reculer un peu
plus loin les limites dinvestigation.
9.4 DTERMINATION DES SQUENCES PAR LES MTHODES
SPECTROSCOPIQUES
9.4.1 Spectromtrie de masse f.a.b
Dans cette spectroscopie[6], dont le nom est labrg de <(fast atom bombard-
ment , un jet datomes ou dions acclrs est projet sur une cible constitue par
une solution de lchantillon dans un liquide visqueux. En frappant la surface de
la cible, les atomes transmettent leur nergie cintique aux molcules de lchan-
tillon. Beaucoup sont projetes hors de la cible dans le vide de la source dions et
ionises en proportion notable. De cette faon, les ions en phase gazeuse sont pro-
duits sans volatilisation pralable de lchantillon. TI se forme des ions positifs
[M +HI+, [M +cation] et ngatifs [M - HI-, surtout, et aussi, [M +anion]-, selon
la nature de lchantillon et de la matrice visqueuse. On emploie de prfrence le
glycrol avec les molcules polaires, tels que les oligosaccharides et les glyco-
peptides natifs, mais pour les composs hydrophobes comme les glycosphingoli-
pides, qui ont tendance sagglomrer dans les solvants polaires, on prfre le
1-thioglycrol CH,SH - CHOH - CH,OH. I1est utile dacidifier le mlange avec
des traces dHCI dilu. Laddition dactate de sodium entrane la formation
dions [M +Na]+. Laddition de thiocyanate dammonium certains oligosac-
charides permthyls entrane la formation dions [M +NHJ et [M +SCNI-.
Seules les molcules prsentes la surface de la matrice sont ionises par le jet
atomique et il faut viter la prsence dimpurets plus tensio-actives qui les en
chasseraient.
On observe des pics intenses dions pseudo-monomolculaires et des pics de
fragments. On emploie les sucres non drivs pour dterminer M, mais il est sou-
vent utile de prparer dabord un driv par permthylation (voir le paragraphe
9.3.3) ou peractylation (traitement par un mlange dacide actique et danhy-
dride trifluoractique, 2 :1, v/v, 9 mn temprature ambiante). Les quantits
dchantillon ncessaires linvestigation sont 1-9 pg de sucre libre, ou O, 1-5pg
de driv. Trois types de sucre donnent des pics au-dessus de M 4000 : les poly-
saccharides permthyls, les glycosphingolipides permthyls et les formes natu-
relles acyles des polysaccharides mycobactriens.
Nous donnerons deux modes de clivage, dsigns comme dans la rfrenceL6]
(Fig. 9.5). Dans le mode A, le principal, la charge est retenue sur le fragment du
ct de lextrmit non rductrice. Dans le mode B, la charge est retenue du ct
de lextrmit rductrice. Avec les oligosaccharides drivs, MNPQR, o M est le
rsidu monosaccharidique du ct non rducteur, on observe principalement la
voie A selon lquation (9.2).
Figure 9.5 Deux modes de clivage des chanes doiigosaccharides en spectroscopie f.a.b.
MNPQR 4 M+, MN+, MNP+, MNPQ+, . .
1 1
NP+ NPQ+
Les flches verticales aboutissent des fragments dus deux ruptures. La
masse des fragments renseigne sur leur composition, car laddition la structure
fondamentale mthyle Hex-HexNAc de rsidus fucose, N-actylneuraminique
ou N-glycollylneuraminique mthyls se traduit par des incrments de masse
caractristiques diffrents. On ne distingue pas les isomres et on donne une com-
position en hexoses, pentoses, dsoxyhexoses, hexosamine, etc. Le clivage a lieu
de faon dominante et, parfois mme exclusive, sur les gros oligosaccharides per-
mthyls, chaque rsidu hexosamine, selon lquation (9.3).
(9.3) MN - HexNAc - QR + MN - HexNAc]+
La spectroscopie f.a.b. nest pas restreinte aux glycolipides (voir le paragraphe
13.1) mais leur est trs bien adapte. On a observ avec un glycosphingolipide
naturel 25 rsidus mono-saccharidiques permthyls un signal [M +Na]+
6184. La figure 9.6 donne les fragmentations principales dun ganglioside perm-
thyl isol de granuI ~cytes[~]. En plus des fragmentations du type dj dcrit, on
observera le clivage, qui est de rgle, entre loligosaccharide et la chane lipidique
cramide. Lion [M +H]+perd le groupe acyle en donnant un ion de masse carac-
tristique du type de ganglioside - dans le cas de la figure 9.6, [M +H]+- 238.
Hex HexNAc
R R Hex HexNAc
Hex HexNAc
n
HO
9. 9
9. 10
[M+H] + =2241
O=C-(CH2),&H3
Figure 9.6 Reprsentation schmatique de la fragmentation dun ganglioside permthyl
de granulocytes. Extrait de M. N. Fukuda, A. Dell, J . E. Oates, P. Wu, J . C. Klock et
M. Fukuda; J. B i d Chern., 260 (1985) 967-982 (publi avec laimable autorisation
d Academic Press).
La tendance au clivage au niveau des rsidus HexNAc est particulirement
intressante dans lexamen des glycolipides. I1y a dans ces composs une chane
principale forme de rsidus P-D-Gal-( 1 + 4)-P-D-GlcNAc, correspondant au
disacharide N-actyllactosamine. Ces rsidus disaccharidiques sont relis par des
liaisons (1+ 3) de faon schmatise en 9.9. Lhexasaccharide (n =3), qui est non
ramifi, donne des fragments 3,2 et 1 units HexHexNAc. En revanche, lhexa-
saccharide ramifi 9.10 permthyl ne donne pas de fragment ttrasaccharidique
(il faut se rappeler que la charge reste du ct non rducteur).
La spectroscopie f.a.b. ne permet en gnral pas de dterminer la position des
liaisons. Cependant on peut parfois reconnatre la prsence dun fucose en 3 du
rsidu P-D-GlcNAc. Lorsque lion de rupture principale a une masse infrieure
900, on peut observer une fragmentation ultrieure, selon lquation (9.4). Si
OH(3) ntait pas substitu dans loligosaccharide, la perte de masse correspon-
drait CH,OH, 32. Sil y avait un fucose, la perte de masse serait 206.
(9.4)
RO - RO
_____
NMeAc
OR NMeAc
9.4.2 Technique dinjection dite <<lectrovaporisation D
Certains modles rcents de spectromtres de masse permettent demployer
une technique dinjection considrablement plus simple. Une solution de lchan-
tillon est injecte directement dans lappareil au moyen dune seringue. On obser-
ve des pics molculaires parfaitement dtachs. Nous donnerons ici lexemple du
spectre du pentasaccharide sulfat, sel de sodium, 9.11. Nous aurons loccasion de
OH
NHCWH, OH
I CH,OH
HO
9.11
revenir au chapitre 17 sur ce compos synthtiqueL8I, qui est le meilleur ligand
connu ce jour de la lectine E-slectine humaine. On observe avec la technique
dlectrovaporisation des pics 932,2 (M - Na+), 978,3 (M +Na+) et 500,7 (M +
2 Na+).
9.4.3 Rsonance magntique nuclaire du proton
Le chimiste qui dsire connatre la structure dun oligosaccharide naturel
conjugu doit en gnral travailler sur un mlange despces trs voisines. I1y a
en effet le problme de lhtrognit naturelle de ces structures, mme sur un
support protique homogne, et de lhtrognit artificielle provoque par les
ractifs de clivage - car il nest pas concevable dtudier le glycoconjugu dans
son ensemble. I1est donc ncessaire de procder dabord un fractionnement,
particulirement difficile entre structures trs voisines. Lanalyse du spectre de
RMN du proton, telle quelle sera dcrite dans ce paragraphe[9], donne une indi-
cation sur lhomognit de lchantillon, puisquun mlange donne une super-
position des signaux, dont on peut connatre lappartenance par la considration
des intensits.
En raison de la grande complexit du problme de structure, il est ncessaire
de connatre les valeurs de 6 avec trois dcimales. Ceci impose un champ magn-
tique trs lev Uusqu 14 Tesla) pour une frquence de travail de 500 ou
600 MHz. Le traitement informatique des donnes permet daugmenter la rsolu-
tion et de descendre jusqu des concentrations O,05 mM de lchantillon. Mme
cette frquence les signaux des protons squelettaux non anomriques des divers
sucres se superposent en une large bande non rsolue entre 3,4 et 4,0 p.p.m.
Lanalyse repose sur un groupe de signaux, les indicateurs, situs en dehors de
cette rgion. Ils correspondent aux protons numrs ci-dessous.
a) Les protons anomriques
On rappelle que leur couplage 3J est significatif (voir le chapitre 2). Si H-2
est axial (Gal, GlcNAc, Fuc), on observe 3J 2-4 Hz et 7-9 Hz pour les a-
pyranoses et P-pyranoses respectivement. Si H-2 est quatorial (Man), la
diffrence est plus faible, 3J 1,6 et 0,s Hz pour les anomres a et P respec-
tivement. Cependant cest la valeur de F qui est la plus intressante.
b) Les protons H-2 et H-3 du mannose
c) Les protons H-3 des acides sialiques
d) Le proton H-5 et le mthyle du fucose
e) Les protons H-3 et H-4 du galactose
f) Le mthyle des groupements N-actyle des sucres amins et de lacide sia-
Dans les cas les plus favorables, la valeur de 6 dpend du type de rsidu, de sa
configuration anomrique, du site de glycosidation, de la squence des sucres
composants et de la position du rsidu dans la squence. On a rcemment[l0I ajou-
t cette liste les protons NH des groupements -NHCOCH,. Naturellement, ils ne
sont pas visibles dans le solvant D,O ni dans leau ordinaire aux pH >7. On les
observe facilement dans H,O, 27C, pH 5,2. Lorsquun signal NH a t identi-
fi, on peut reprer les signaux de certains protons voisins du mme rsidu mono-
saccharidique par effet Overhauser : le mthyle de CH,CONH et le proton ano-
mrique sur un rsidu 2-actamido-2-doxy pyranose, les protons H-3 sur un
sialoside.
Pour utiliser ces donnes spectroscopiques, on se sert dun certain nombre de
rgles empiriques, tablies sur des oligosaccharides simples de structure parfaite-
ment bien connue par ailleurs. Ainsi la glycosidation dun rsidu dans un oligo-
saccharide entrane de petits dplacements des signaux indicateurs de ce rsidu,
parfois galement perceptibles dans les rsidus voisins, de lordre de
0,02 - 0,25 p.p.m. Lemploi de ces rgles des dterminations de structures incon-
nues suppose quil y a additivit et quil ny a pas de changement important de
conformation, qui perturberait fortement le diamagntisme local. Elles sont donc
les plus sres dans les sries formes de blocs analogues. Pour que le lecteur puis-
se apprcier ceci, nous allons donner un extrait dune analyse de ce type des
chanes oligosaccharides de la thyro-globuline Cest la glycoprotine
la plus importante de la glande thyrode. La chane glucidique, lie lacide aspar-
tique, est spare par hydrolyse catalyse par lenzyme peptide-N4 - (N-acetyl-0-
glucosaminyl) asparagine amidase F, dorigine bactrienne (Flavobacterium
meningosepticum), et le mlange doligosaccharides est fractionn sur colonne.
Parmi les produits isols, nous retiendrons la collection schmatise sur la figure
9.7. Le terme le plus simple est le nonasaccharide 9.12, o manquent les rsidus
encadrs et le sulfate. On repre les signaux indicateurs de ce nonasaccharide, et
lon observe que le signal de H(2) du rsidu Man-4est noy dans la masse. I1y a
aussi dans la collection un dcasaccharide avec un rsidu GlcNAc supplmentai-
re. Dans ce compos, le signal de H-2 de Man-4sort de la masse et apparat 6
4,109, ce qui indique que le nouveau rsidu GlcNAc est en 2 du mannose Man-
4. Les signaux indicateurs confirment sa position terminale, celle du cadre 5.
Laddition du rsidu D-Gal donne un undcasaccharide. On en connaissait dj un
proche analogue[9]. La position de ce rsidu est confirme comme celle du cadre
6par un dplacement de +28 mpm du signal de H-1 de GlcNAc - 5. Le terme
suivant de la collection est un dodcasaccharide. I1contient en plus un rsidu Gal,
lique
Fuca (1-6)
1
2
3 Manp (1-4)-GlcNAcB (1-4)-GlcNAc
t
7 6 5 4 1
NeuSAca (2-6)-Galp (1-4)-GlcNAcB (1-2)-Mana(l-3)
t
Figure 9.7 Reprsentation schmatique des oligosaccharides obtenus partir de la thyro-
globuline du porc. Lapartie sans units encadres correspond 9.12. Les autres oligosac-
charides spars sont 9.12 +S , 9.12 +5 et 6, 9.12 +5 +6 +7, et le dodcasaccharide
sulfat 9.13 (9.12 +5+6 +7 +8).
dont lanomrie a est prouve par le signal de son proton anomre et la position,
celle du cadre 7, par leffet de sa prsence sur le signal dc H-4 de Gal-6, qui sori
de la masse pour apparatre 6 =4,185 ppm. Nous avons donn les signaux carac-
tristiques de 9.13 dans le tableau 9.2, pour permettre au lecteur dapprcier
Protons Units 6 Protons Units 6
H- 1 l a
1P
2 (a)
2 (0)
3
4
4
5
5
6
6
a-Gal
Fuc (a)
Fuc <Pl
H-2 3
4
5,180
4,692
4,664
4,669
4,772
5,135
4,929
4,605
4,583
4,445
4,544
5,146
4,890
4,897
4,257
4,195
H-2 4
H-3a Neu SAC
H-3e Neu SAC
H-4 6
H-5 Fuc (aj
Fuc (P)
Me Fuc (a)
FUC (P)
NAc 1
2
5
5
Neu SAC
4,111
1,722
2,666
4,185
4,098
4,134
1,209
1,220
2,038
2,097
2,069
2,048
2,029
Tableau 9.2 Signaux indicateurs du dodcasaccharide 9.13.
GlcNAcP (1-6)
I
i
Gal P (1 -4)-Glc P OMe
t
GlcNAcP (113)
9.14
F E
Gal P ( 1 -4)GlcNAcP (1 -6)
J B A
t
Gal (1 -4)-Glc P OMe
GlcNAcP (1 -3)
C
9. 15
concrtement les rsultats de ce genre de travail. On trouve aussi dans le mlan-
ge une collection doligosaccharides sulfats. La sulfation dplace vers les
champs faibles les protons gmins. Ici, ce sont les signaux de H-6 et H-6 de
GlcNAc-5 qui sortent de la masse (6 =4,306 et 4,44O), ce qui indique la position
du cadre 8 pour le groupement sulfate.
Dans certains cas on a pu mesurer 6 pour tous les protons dun oligosacchari-
de. Ainsi on a pu montrer que la galactosylation enzymatique (voir le paragraphe
10.4.1) du ttrasaccharide 9.14 procde slectivement sur la branche lie en 6 du
rsidu GlcNAc, car cest seulement le signal de H-1 de ce rsidu qui est perturb
(+23 mp.p.m.). Par RMN deux dimensions, il a t possible de donner les
signaux de tous les protons du pentasaccharide 9.15 ainsi obtenu aprs peracty-
lation (Tableau 9.3) *I.
Proton A B C E F
H- 1
H-2
H-3
H-4
H-5
H-6
H-6
H-N
4,40
4,87
5,11
3,78
3,60
4,17
4,48
4,35 4,96
5,05 3,39
3,80 5,43
5,41 5,O8
3,81 3,67
334 4,14
3,80 435
5,62
4,67
3,7 1
$32
3,15
3,67
4,14
4,37
6,42
4,s I
5,14
5,Ol
5,32
3,89
4,05
4,90
Tableau 9.3 Valeurs de 6 en p.p.m. pour les signaux des protons des units A, B, C, E, F
du produit de peractylation du pentasaccharide 9.15.
9.5 EFFICACIT POTENTIELLE DES OLIGOSACCHARIDES POUR
LE STOCKAGE ET LE TRANSPORT DE LINFORMATION
Deux dsoxyribonuclotides, disons dA et dC, ne peuvent donner que deux
combinaisons distinctes, dAdC et dCdA. Cest la mme mme chose avec deux
amino-acides, il y a deux dipeptides possibles, par exemple CysAl et AlCys. Dans
les deux cas, deux molcules identiques ne peuvent donner quun seul produit de
condensation. En revanche, le lecteur vrifiera que lassociation de deux mol-
cules de glucose peut donner 11 disaccharides distincts si on se restreint aux tau-
tomres pyranose. Le nombre saccrot dans des proportions fantastiques, si lon
considre les oligosaccharides drivs de monosaccharides diffrents. Quatre
nuclotides diffrents ne peuvent donner que 24 ttranuclotides distincts, alors
que 4 monosaccharides diffrents peuvent donner 35 560 ttrasaccharides dis-
ti nct~[ ~ . La nature dispose dun alphabet o 4 lettres permettent dcrire
35 560 mots diffrents ! Dans la mesure o ces molcules peuvent tre reconnues
par des protines spcialises, on voit quun trs petit nombre dlments de base
peut suffire pour stocker et transmettre les informations les plus varies, sous la
forme la plus compacte qui soit concevable dans les cellules vivantes. Ceci sera
longuement dvelopp dans la suite de cet ouvrage.
RFRENCES
[I] I. TvarovSka et T. Bleha, Adv. in Curbohydr: Chem. Biochem., 47 (1989) 45-123.
[2] I. TvarovSka, M. Hricovini et E. Petrakovh, Curbohydl: Res. , 189 (1989) 359-362.
[3] P. Dais et A. S. Perlin, Adv. in Curbohydr: Chem. Biochem., 45 (1987) 125-168.
[4] C. J . Biermann, Adv. in Curbohydr: Chem. Biochem., 46 (1988) 25 1-27 1 .
[5] H. Rauvala, J. Finne, T. Krusius, J . Karkkainen et J . Jarnefelt, Adv. Curbohydr: Chem.
[6] A. Dell, Adv. Curbohydr: Chem. Biochem., 45 (1987) 19-72.
[7] M. N. Fukuda, A. Dell, J . E. Oates, P. Wu, J.C. Klock et M. Fukuda, J. Bi d. Chem.,
[8] A. Lubineau, J . Le Gallic et R. Lemoine, paratre.
[9] J . E G. Vliegenthart, L. Dorland et H. van Albeek, Adv. Curbohydr: Chem. Biochern.,
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Biochem., 37 (1980) 389-416.
260 (1985) 967-982.
41 (1983) 209-374.
287 (1991) 98-112.
266 (1991) 4237-4243.
CHAPITRE 10
Transformations chimiques
et synthse des oligosaccharides
10.1 RACTIONS DES OLIGOSACCHARIDES
Dans un oligosaccharide rducteur, il y a deux fonctions hydroxyles diff-
rentes, alcool et hmiactal. Les fonctions alcools se rpartissent en deux catgo-
ries, primaires et secondaires, moyennement bien diffrencie. I1y a des diff-
rences plus subtiles entre les fonctions alcool secondaire, selon quelles sont
axiales ou quatoriales, associes en diol vicinal, etc. I1ny a rien de fondamen-
talement nouveau par rapport aux monosaccharides et la chimie connue des oli-
gosaccharides repose sur des ractions slectives correspondantes.
Comme exemple, on peut donner la prparation dun disaccharide trs impor-
tant, la N-actyllactosamine, 10.1 partir du lactose, produit de faible valeur.
Coxime de la fonction aldhyde potentielle, soit R - CHOH - CH =N - OH, est
actyle et dshydrate simultanment en nitrile peractyl R - CHOAc - CN.
La mthanolyse alcaline dsactyle et provoque llimination de HCN, donnant R
- CHO, le disaccharide O-B-D-galactopyranosyl - (1 +3) - D-arabinose. Celui-ci
est commodment isol sous la forme drive N-benzyl glycosylamine 10.2.
Laddition de HCN donne le nitrile 10.3, qui est converti en N-actyllactosamine
par hydrognation catalytique sur palladium et N-actylation par lanhydride ac-
tique dans le mthanol[]. Une adaptation plus rcentel2I vite lemploi de HCN,
en procdant par addition progressive dacide actique du cyanure dissous dans
le milieu ractionnel. On recueille par filtration le nitrile 10.3, obtenu cristallin par
chance, ce qui ouvre la voie la fabrication grande chelle.
On peut oxyder slectivement la fonction aldhyde du lactose en carboxyle, ce
qui donne lacide lactobionique. On peut aussi la rduire en alcool. Nous verrons
plus loin quon est amen utiliser des conditions alcalines pour dtacher certains
10. 1
10. 2 10. 3
RO
10. 4
HO
10. 5 R=R=H
1 O. 6 R, R=CMe,
10. 7 R, R=SnBuz
10. 8 R=Allyl, R= H
oligosaccharides de leur support protique. Ces conditions dgradent loligosac-
charide, particulirement sil y a une substitution en 3, car il se produit llimina-
tion bien connue des P-alkoxyaldhydes sur la fraction de tautomre carbonyl
prsente, schmatise par la formule 10.4. La technique consiste alors pratiquer
le clivage avec un mlange dhydroxyde et de borohydrure de sodium.
Lhmiactal est rduit en alcool ; il ny a plus dlimination.
On protge les alcools primaires avec les ractifs traditionnels : triphnylchlo-
romthane, chlorure de ter-butyldimthylsilyle, chlorure de pivaloyle. Un systme
cis-diol, axial-quatorial est bloqu, slectivement sil est unique, par actalation
avec lactone. On bloque ainsi slectivement les hydroxyles en 3 et 4 de lunit
galactose du mthyl lactoside 10.5 en prparant le driv isopropylidne 10.6. On
notera ce propos une raction o chaque unit de lactose se comporte comme si
elle tait isole : le traitement du glucose par lactone et le 2,2-dimthoxypropa-
ne, en catalyse acide, donne, entre autres, 10.9[31. Dans les mmes conditions, le
Couplage osidique non enzymatique : principes gnraux 159
10. 9 10. 10
lactose donne le produit 10.10 o 6 hydroxyles sur 8 sont bloqus[41. Avec
(Bu2SnO),, le lactoside 10.5 donne un stannylne, vraisemblablement 10.7, dont
le traitement par le bromure dallyle conduit lther monoallylique 10.8. Cest
le seul produit de substitution isol, avec un rendement de 70 %, alors quil ny
avait pas moins de sept hydroxyles libres dans le lactoside de dpartI5]. Les grou-
pements diols vicinaux des oligosaccharides sont coups par le periodate, ce qui
permet de dtruire slectivement les units monosaccharidiques qui en possdent.
On note ensuite leur disparition de lhydrolysat total.
On verra ci-dessous (voir le paragraphe 10.3.4) lutilisation de linversion de
configuration sur C(2) dune unit monosaccharidique pour accder la configu-
ration B-D-manno. Une des transformations les plus importantes des oligosaccha-
rides est lactivation de lextrmit rductrice pour raliser des synthses conver-
gentes doligosaccharides suprieurs, dont nous donnerons aussi des exemples
dans les paragraphes suivants.
Comme nous lavons dit, ces ractions sont des extensions prvisibles des rac-
tions des monosaccharides. I1pourrait y avoir un domaine spcifique de la chimie
des oligosaccharides : comment la ractivit de chaque hydroxyle est-elle modi-
fie par le reste dun enchanement complexe, par sa configuration et sa confor-
mation ? Y a-t-il des fonctions qui ont perdu toute ractivit ou bien, au contrai-
re, des sites prfrentiels inattendus, comme les sites actifs des protines. Ce
domaine na pas t explor avec les oligosaccharides vraiment compliqus
10.2 COUPLAGE OSIDIQUE NON ENZYMATIQUE :
PRINCIPES GENERAUX
Le couplage osidique est lopration fondamentale dans la synthse des oligo-
saccharides. I1sagit de btir un pont oxygne avec le carbone hmiactalique
dun sucre et la fonction alcool dun autre sucrer6] c71 [*I. Considrant la trs gran-
de stabilit de la liaison C - O dans les alcools, compare la labilit de la liai-
son C - O dans un hmiactal, dans limmense majorit des cas, la raction est
globalement une substitution nuclophile de loxygne alcoolique sur le carbone
hmiactalique.
Lhydroxyle ntant.pas un bon groupement partant, il faut le remplacer par
dautres groupements pour activer le partenaire lectrophile. I1faut aussi protger
les fonctions alcools pour viter que dans les conditions du couplage, les mol-
cules ne ragissent les unes sur les autres en donnant des produits de polycon-
densation. Ces molcules protges actives que nous appellerons << ractifs gly-
cosylants D ne sont pas capables de ragir directement sur les hydroxyles
alcooliques, il faut ajouter dans le milieu des acides de Lewis, ou des sels ayant
un caractre dacides de Lewis plus ou moins marqu, en proportions variables
selon les techniques, depuis catalytique jusqu fort excs molaire. Ce sont les
<< promoteurs .
Dans ces conditions, on peut prvoir que le ractif glycosylant existera sous six
formes chimiques distinctes, 10.11 10.16. Dailleurs, mme si on introduit au
dpart un ractif homogne 10.11 ou 10.12, il se formera souvent le mlange ano-
mrique dans le milieu ractionnel. Lindividu chimique 10.13 est une paire
ionique provenant de lionisation partielle de lanomre a. La formation de cette
paire ionique est facilite par la coordination de X- un acide prsent dans le
milieu. En prsence de promoteurs de type salin, lanion du sel peut ventuelle-
ment remplacer, dans cette paire ionique, le groupement partant X- du ractif gly-
cosylant de dpart. La paire ionique 11.13 peut sanomriser en 10.14. Lindividu
chimique 10.15 est lion oxocarbnium libre. La formation dun ion carbnium
sur C( I ) est favorise par la participation de loxygne cyclique. Cependant, sil
y a un groupement participant acyloxy sur C(2), lintermdiaire a la structure
10.16. Les deux problmes de la glycosidation, qui dailleurs ne sont pas compl-
tement indpendants, cest que le rendement du couplage soit acceptable et que ce
couplage donne la liaison glycosidique avec lanomrie dsire. I1faut demble
mettre part les ractions avec participation, qui passent par lintermdiaire
10.16. Elles sont souvent rapides et donnent exclusivement lanomre 1,2-trans,
comme il est prvisible, avec un excellent rendement. Lorsquil ny a pas partici-
pation, on peut sattendre ce que chacun des intermdiaires 10.11 10.14 ragis-
F& 10.11 X
10. 12 10. 13
my . - - y
RO
RO
0 1
150
/c
R
10. 16
10. 14 10. 15
Pratique du couplage osidique 161
sent par le mcanisme SN2 avec inversion de configuration. On aura donc la liai-
son quatoriale avec 10.11 et 10.13, la liaison axiale avec les deux autres.
Malheureusement ces intermdiaires sont en gnral tous prsents simultanment,
quel que soit le ractif glycosylant ajout au dpart. On attend peu de slectivit
dune raction de lion oxocarbnium 10.15. Donc le partenaire nuclophile dans
le milieu a le choix entre un certain nombre de trajets ractionnels dont les ner-
gies dactivation peuvent ntre pas tellement diffrentes. Aussi comprendra-t-on
que le couplage osidique, malgr les progrs considrables de la dernire dcen-
nie reste une opration dont lissue ne peut tre prdite avec une certitude totale.
10.3 PRATIQUE DU COUPLAGE OSIDIQUE
10.3.1 Ractions avec participation
Ce sont les moins incertaines. Elles conduisent selon la raction (10.1) Iano-
mre trans 1,2. Les configurations gluco et galacto donnent les glycosides di-
quatoriaux -1,2 et la configuration manno donne les glycosides di-axiaux- 1,2.
Les plus simples des ractifs glycosylants sont les anomres quatoriaux des per-
actates de pyranoses tel le driv P-D-gluco 10.17. Celui-ci, en prsence de tri-
fluoromthanesulfonate (triflate) de trimthylsilyle, CF,SO,SiMe, comme pro-
moteur, conduit aux P-D-glucopyranosides. Lintrt de la raction est limit par
la ncessit de prparer cet anomre instable et le prix lev du promoteur. Le trai-
tement des pyranoses peractyls par HCI ou HBr donne Ianomre stable, avec
lhalogne axial, de lhalognose, 10.18 ou 10.19. Le << promoteur universel >>
pour les couplages de ces halognoses semble tre le triflate dargentL9]. Son
domaine defficacit est trs tendu et parfois le couplage est termin en quelques
minutes, mme -70C. On opre dans le dichloromthane, avec la ttramthylu-
~~a~~~ Ac0 A C -
Ac0
10. 18 x=c1
10. 19 X=Br
X
Ac0
10. 17
1 0. 2 1 R=H, R=OAC
10. 20
10. 22 R=OAc, R= H
10. 23 R=C1, R= H
re comme accepteur de protons. Pour prparer de grosses quantits au dbut
dune squence ractionnelle, on utilise aussi les promoteurs classiques (HgBr, ou
HgC1, dans les mlanges tolune-actonitrile ou nitromthane) ou le triflate stan-
neux dans le dichloromthane[l0I.
Pour faire les glycosides des sucres amins, la prfrence va au chlorure dri-
v de la phtalimido-glucosamine 10.20. Cet anomre p est beaucoup plus ractif
que lanomre a en glycosidation et on lobtient commodment~ll] par traitement
du mlange dactates anomres (analogues phtalimido de 10.21 et 10.22) par le
dichloromthyl mthyl ther en prsence dthrate de BF,. Le chlorure 10.20
sutilise avec le triflate dargent comme promoteur ou, dans les cas o il est moins
indispensable davoir le rendement maximum, avec les sels de mercure. On
hydrolyse le groupement phtalimido avec de lhydrazine et on actyle lamine
libre pour obtenir la vritable structure naturelle. I1est parfois possible dviter
ces tapes supplmentaires en partant directement dun driv actif de lamine
naturelle qui est, comme on sait, N-actyle. Le p-actate 10.21, driv de la
N-actylglycosamine, donne un bon rendement en prsence de chlorure
ferrique[I21. Le chlorure 10.23, daccs plus facile, est utilisable en prsence de
triflate stanneux[l31. La raction est particulirement efficace avec les alcools pri-
maires, par exemple pour prparer la squence p-D-GlcNAcp-( 1 + 6)-D-Gal, fr-
quente dans les oligosaccharides naturels.
10.3.2 Ractions SN2
En prsence de sels dargent, les halognures de glycosyles attaquent les
amides sur loxygne pour donner les imidates tels que 10.24. Les imidates sans
groupements participants ragissent sur les alcools avec inversion de configura-
tion, conduisant aux composs cis- 1 Les trichl~ractimidates[~] sont facile-
ment accessibles par addition des alcools sur le trichloractonitrile, selon lqua-
tion (10.2) en prsence de bases fortes. Avec les pyranoses hmiactal limidate
quatorial se forme le premier, sous contrle cintique, et sanomrise ensuite en
imidate axial. Les deux types dimidates ragissent en prsence de trifluorure de
bore avec les alcools, par exemple selon lquation (10.3). I1 y a inversion de
configuration avec ou sans participation.
10. 24
yc13
(10.2) CC1,-CN +R-OH - R-O-C=NH
+ G?OH
BF,.Et,O
-G
-t CCl,CONH,
hm
10.3.3 Ractions faisant intervenir des intermdiaires cationiques
La raction << assiste par un halognure >> sapplique un halognure sans
groupement participant en 2. Lintermdiaire 10.16 est donc exclu. On travaille
dans un solvant non polaire pour minimiser lapparition de lintermdiaire ionique
10.15. Restent les formes chimiques 10.11 10.14, qui sont en quilibre, et on
acclre ltablissement de cet quilibre par addition dun sel minral qui fournit
un ion commun X-. Lintermdiaire le plus ractif en glycosidation est la paire
ionique quatoriale 10.14 qui conduit dans le cas de figure au glycoside cis-1,2,
anomre axial. Si la vitesse dapparition de 10.14 est nettement suprieure sa
vitesse de couplage, toute la glycosidation sera dvie par ce canal, quel que soit
lanomre ajout au dpart. Parfois, le partenaire hydroxyl est trop peu ractif
pour que la condensation procde de faon acceptable (il ny a pas de promoteur
dans le milieu !). Dans ces cas-l, cest le triflate dargent qui est le promoteur le
plus efficace, la slectivit tant dautant plus grande que lhydroxyle est moins
ractif.
On a essentiellement dvelopp ces mthodes pour introduire un rsidu a-D-
galactopyranosyle, ce qui correspond une glycosidation cis-l,2. Pour raliser cet
objectif, on a publi rcemment une mthode particulirement brillante, mais
nous la classerons part (voir le paragraphe 10.3.5) pour ne pas prjuger de son
mcanisme.
A ct des chlorures et bromures de pyranosyle, lusage des fluorures tend se
rpandre pour les glycosidations sans participation. Le substituant en 2 est prot-
g par un benzyle. Le fluorure cis 1,2, axial-quatorial, donne le glycoside cis 1,2,
axial, quatorial, en solution dans lther en prsence de perchlorate dargent et de
triflate stanneux. Les fluorures, comme dailleurs les bromures, peuvent tre pr-
pars partir des thioglycosides. Le passage par le thioglycoside est un moyen de
protger temporairement la fonction hmiactalique, car la liaison C( I)-S peut
persister intacte travers un certain nombre de transformations du reste de la
molcule. Ceci est galement vrai des mthyl glycosides, seulement les thiogly-
cosides sont transforms en ractifs glycosylants dune faon bien plus commode
que les mthyl glycosides, avec moins de risques pour le reste de la molcule.
Lquation (10.4) montre comment on peut convertir un mme phnyl thioglyco-
side en partenaire glycosylant ou glycosylable, en le traitant soit par Et,N-SF,,
soit par Bu4NF.
H20SiCMe,Ph2 CH OH
Ac&
s l P h 2
(10.4) An- - - Bn -
F SPh SPh
Dans les ractifs glycosylants non anims, la protection non participante de
O(2) est assure par un benzyle. Dans les ractifs glycosylants amins, le groupe-
ment actamido est remplac par un groupement azido, qui est rduit en amine et
N-actyl aprs la glycosidation. La prparation habituelle des azides en 2 part des
glycals. Par exemple, la raction (10.5) donne la prparation dun halognose
10.27 utilisable pour introduire une unit 2-actamido-2-doxy-a-D-galactopyra-
nosyl. Le galactal 10.25 est trait par un mlange de nitrate de crium et dam-
monium (NH& Ce (NO3& et dazoture de sodium. I1 y a addition sur la double
liaison donnant 10.26 et le nitrate intermdiaire est trait successivement par Iio-
dure de lithium et le chlorure damm0nium[~1.
(10.5)
10. 25 10. 26
10. 27
10.3.4 La cration de la liaison quatoriale-axiale-1,2
C'est la configuration des P-mannosides. On pourrait imaginer les obtenir par
une substitution SN2 des halognures a-manno, axiaux et facilement accessibles
avec une protection non participante sur O(2). Mais ces drivs sont peu ractifs,
peut-tre cause de la rpulsion strique du groupement axial en 2. On a pu
cependant les prparer directement[161 avec un promoteur insoluble, le driv
argent de l'changeur de cations naturel zolite, par exemple, selon l'quation
(10.6). Une autre te~hni quer'~], qui offre un degr lev de scurit, consiste pr-
parer le glycoside P-D-glum gnralement accessible en rendement lev par un
couplage avec participation et inverser la configuration en C(2). Dans cette
mthode, aprs la raction de glycosidation, avec le p-actate 10.28 en prsence
de triflate de trimthylsilyle, gnralement ralise avec un rendement lev, le di
(tri) saccharide 10.29 est soumis une mthanolyse alcaline, suivie de benzylid-
nation. On obtient ainsi successivement 10.30 et 10.31. I1faut un groupement par-
tant particulirement efficace pour arriver substituer en C(2). La conversion de
10.31 en imidazolyl sulfonate[l8] dplace par un benzoate donne 10.32 avec un
rendement trs lev.
BnO G
CH,OR'
Rv f o - OR BnO OR'
10. 28 R=R'=R"=AC 10. 32
10. 29 R=G R= R"=AC
10. 30 R=G R'=R"= H
10. 31 R=G R'=H R", R"=PhCH
10.3.5 Glycosidation cis-1,2 sans participation avec les sulfoxydes
Cette mthode rcente, d'abord dcrite par a t exprimente par
Matta[20]. Par exemple, on peut utiliser comme ractif glycosylant le sulfoxyde
10.33, aisment obtenu par oxydation du phnylthio galactoside perbenzyl au
moyen d'un peracide. Le couplage a lieu -76C dans le dichloromthane, en pr-
sence d'anhydride trifluoromthanesulfonique et d'une base encombre. I1ne se
BnO CH,OBn
BnO W Y SO-Ph
10. 33
BnO CH,OBn
B n O ~ o ~ o M e Bn
10. 34
forme que le glycoside a, en rendement pratiquement quantitatif. Ainsi le cou-
plage sur le mthyl p-D-galactopyranoside protg par benzylation, sauf en 3,
donne-t-il le disaccharide 10.34 caractristique du groupe sanguin B (voir le cha-
pitre 16), isol avec 90 % du rendement. I1ny a encore que peu dexemples de
cette mthode, qui pourrait se substituer la mthode lion commun du para-
graphe 10.3.3.
10.3.6 Effet de la configuration de laccepteur
Laccepteur est confront un mlange dentits potentiellement glycosylantes
en quilibre, six - de 10.11 10.16 - dans le pire des cas. Le choix de lune
delle, qui conditionne le chemin ractionnel ultrieur et lissue finale dpend de
deux facteurs : sa vitesse de disparition par le couplage et sa vitesse de << refor-
mation >> par le jeu de lquilibre. La ractivit de lhydroxyle vis--vis de lune
des entits glycosylantes dpend de sa position dans la molcule daccepteur et
deffets striques et lectroniques des groupements protecteurs. Leffet strique
(expliqu par la rpulsion des orbitales pleines dans la thorie des orbitales mol-
culaires) semble parfois vident : la condensation du bromure per-actyl 10.35
avec la N-actylglucosamine protge 10.36 donne le disaccharide p (trans- 1,2)
avec plus de 78 % de rendement[21]. Cette raction, effectue en prsence de
Hg (CN),[*lI est un exemple typique de glycosylation avec participation. Le
mme donneur, avec la phtalimidoglucosamine 10.37 donne un mlange a, p avec
un faible rendement, ce que lon pourrait interprter comme leffet de lencom-
brement du groupe phtalimido. Cependant, la raction, en principe SN2, avec le
trichloractimidate donne 70 % de disaccharide p pur.
I1 est ncessaire dinvoquer des facteurs lectroniques (modifications de la
forme et du niveau dnergie de la HOMO de la paire libre de loxygne) pour
expliquer leffet parfois considrable de modifications loignes du site de cou-
Ac0 HO OBn
Br
10. 35
10. 36 R=H, R= AC
10. 37 R,R= Phtalyl
BnO
Brio Br
Me
10. 38
10. 39 R=Bn
10. 40 R= CH,CCl,
plage, aussi bien dans le donneur que dans laccepteur. Par exemple[6], le coupla-
ge du bromure 10.38 avec le benzyl rhamnoside 10.39 donne un mlange a, p,
dans le rapport d p =19/8 1, typique dune raction sans participation modrment
slective. Mais le rapport est invers (81: 19) avec le trichlorthyl rhamnoside
10.40. I1 est clair que lorbitale HOMO du rhamnoside 10.40, essentiellement la
paire libre 2p de 0(4), a subit une modification dnergie et peut-tre mme une
certaine dlocalisation. Plus gnralement, les protections actates sont plus
dsactivantes que les protections ther benzylique, au point de rendre parfois le
couplage impossible.
Une tentative pour sparer les effets lectroniques et striques repose sur la
notion de strodifSrenciation[221. Pour en simplifier lexpos, nous parlerons de
leffet strique comme dune interaction entre solides. Supposons que deux enti-
ts chirales RXYZ et RXYZ se rapprochent pour crer un tat de transition,
comme sur la figure 10.1, nous imaginons un cas idal ou ladaptation (la recon-
Figure 10.1 Interaction strique de deux solides chiraux.
naissance) mutuelle est parfaite : chaque bosse de RXYZ correspond un creux
de RXYZ et vice versa, si bien que les deux entits peuvent sapprocher suffi-
samment pour que la liaison stablisse. Permutons )<et Y : ces branches sont dif-
frentes, ladaptation ne peut plus tre aussi bonne. Cette permutation donne
lnantiomre ; elle ne change pas lnergie de lorbitale frontire. La baisse de
ractivit est dorigine strique. Une observation de ce genre permet de sparer les
contributions striques et lectroniques dans la ractivit. Ce raisonnement nest
pas strictement rigoureux. I1nest valable que si lorbitale frontire nest pas chi-
rale. Quoi quil en soit, les rsultats pratiques sont suggestifs. La raction du bro-
mure de D-fucopyranosyle perbenzoyl avec laccepteur 10.42 (Fig. 10.2) en pr-
sence de triflate dargent et de 2,6-di-tert-butylpyridine donne un mlange de
disaccharides (87 %). On attendrait une raction avec participation, donnant p
pur ; en fait, on a alp =2 :I . La figure 10.2 montre que ltat de transition avec
I
Figure 10.2 Schma illustrant
lorigine de la diastroslectivi-
t dans un couplage. 10.43
Mthodes enzymatiques 169
lintermdiaire de participation 10.41 est trs dfavoris. Mais le bromure nan-
tiomre de L-fucopyranosyle donne un intermdiaire 10.43 o lapproche P est
moins dfavorise, on observe un rendement de 78 % et un rapport a/p renvers,
gal 1/8,4.
10.3.7 Thiooligosaccharides
Ce sont les analogues des oligosaccharides o loxygne interglycosidique est
remplac par du soufre. Lintert sest port sur ces produits artificiels en raison
de leur comportement particulier en chimie enzymatique : rsistance lhydroly-
se enzymatique, inhibition ou induction de glycosidases. On les prpare par sub-
stitution nuclophile dun ester activ (triflate) de laccepteur par le soufre dun
<< thioglycose >> activ. La russite est due au caractre nuclophile lev du soufre
(la synthse des vritables oligosaccharides de faon analogue a t envisageI7l
mais ne sest pas encore gnralise). Naturellement, il y a inversion de configu-
ration sur laccepteur, quil faut choisir en consquence. Ainsi, le sel de sodium
du 2,3,4-tri--actyl-l -thio-P-D-xylopyranose 10.44 conduit au <<4-thioxylobio-
se D 10.45. Cette raction (10.7) est complte en quelques heures temprature
ordinaire en prsence dun agent de complexation du sodium, avec 92 % de ren-
dement aprs isolement~23~. On passe au thiodisaccharide libre par mthanolyse
alcaline.
QTf
10. 44
Ac0 Q s B y m OBz OBz
Ac0
10.45
10.4 MTHODES lZ5l
10.4.1 Raction de la galactosyltransfrase
Le chimiste organicien non prvenu risque dimaginer les enzymes comme des
produits dont lisolement demande un immense entranement, trs fragiles ltat
pur et trs coteuses sur les catalogues et servant dailleurs essentiellement
dmontrer des voies mtaboliques, lchelle de la micro-, ou de la nanomole.
Les perspectives sont dsormais diffrentes. Les techniques dimmobilisation per-
mettent de les utiliser plusieurs fois - et dans les meilleures conditions - et le
clonage ouvre le chemin de la production massive. Le chimiste organicien qui ne
suit pas attentivement le dveloppement de cette nouvelle classe de ractifs risque
de voir le rsultat de ses efforts rduit zro par de brillants raccourcis synth-
tiques. Enfin, il est trs important de noter que, contrairement ce que lon pour-
rait imaginer, lorsque les ractions enzymatiques sont utilisables, elles permettent
de prparer les oligosaccharides une chelle considrablement plus leve que
les mthodes de couplage purement chimiques.
Nous tudierons dabord un exemple particulier, la synthse de la N-actyllac-
tosamine par couplage du galactose sur la N-actylglucosamine. La forme active
du galactose est un << nuclotide-sucre , un pyrophosphate duridine et de galac-
tose, UDPGal (10.46). Le couplage (10.8) est catalys par lenzyme galactosyl
transfrase, prsente dans le colostrum de vache.
(10.8) UDPGal +GlcNAc + Gal-P-( 1-4)-GlcNAc +UDP
Sous cette forme, cette raction na pas de valeur prparative, car elle consom-
me un quivalent de UDPGal, un produit trs coteux. I1faut donc lassocier la
rgnration de UDPGal, qui se fait en trois tapes.
OPO,H,
I
(10.9) UDP +CH, =C - CO,H I -+UTP +CH, COCOOH
(10. I O)
(IO. I l ) UDPGlc -+ UDPGal
UTP +a-D-glucopyranosyl phosphate
UDPGlc +HZPO, - O - PO,H,
(10.12) H,O,P - O - PO,H, +H, O -+2 PO,H,
La raction (10.9) est une phosphorylation de phosphate, catalyse par lenzy-
me pyruvate kinase (PK). La raction (I O. 10) est la synthse du << nuclotide-glu-
cose >> UDPGlc, uridine diphosphate glucose (10.47) partir du triphosphate,
catalyse par lenzyme UDP-pyrophosphorylase (UP). La raction (I O. I l ) est
lpimrisation du nuclotide-glucose en nuclotide-galactose. On remarquera
CH,OH
R *
0-
I
~ P-
I I
O
10. 46 R=H, R=OH
10. 47 R=OH, R=H
que la nature prfre fabriquer UDP Glc et lpimriser plutt que fabriquer direc-
tement UDP Gal. Lenzyme est une pimrase (E). Comme la raction (10.10) est
rversible, on dplace lquilibre vers la droite avec une cinquime enzyme, la
pyrophosphatase inorganique, qui limine le pyrophosphate du milieu en cataly-
sant son hydrolyse en phosphate. La somme des ractions (10.8) (10.12) donne
le bilan de lopration (10.13).
(10.13) a-D-glucopyranosyl phosphate +N-actylglucosamine +
phosphate dnolpyruvate -+N-actyllactosamine +pyruvate +2 PO,H,
On voit que la source dnergie primordiale est le phosphate dnol pyruvate,
compos facilement accessible en grande quantit par synthse chimique. De
mme, lorigine du rsidu galactopyranosyle, qui est la-D-glucopyranosyl phos-
phate, 10.48, est galement accessible sans problmes. On voit aussi que les
divers nuclotides ne jouent quun rle catalytique. Or toutes les enzymes concer-
nes sont actives au pH8 ; on peut donc mlanger substrat et enzymes dans le
mme rcipient et raliser un cycle o le seul nuclotide ajout est UDP Glc en
quantit catalytique (2 %, mol/mol). Ce cycle fabriquera de la N-actyllactosami-
ne selon lquation (10.13) jusqu puisement des substrats (Fig. 10.3)[26].
Aucune des enzymes de ce systme nest trs difficile obtenir. Cependant il
est avantageux de les immobiliser sur un support insoluble. Comme support,
lagarose, polysaccharide naturel, base de D-galactose et de 3,6-anhydro-L-
galactose, est particulirement bien adapt au travail lchelle du laboratoire. Le
2Pi
NHAC
UDP-Glucose UDP-Galactosc
Glucosea -
1 -phosphate
NHAc
HO CH,OH
/
Phosphoenolpyruvate
Figure 10.3 Cycle de galactosylation enzymatique.
+ E-NH,
Spharose
I + E-NH2
Figure 10.4 Mcanisme propos pour limmobilisation dune enzyme E-NH, sur agarose
avec laide du bromure de cyanogne.
support est dabord activ avec du bromure de cyanogne. La figure 10.4 donne
le mcanisme de lactivation dun systme cis-diol et de son couplage sur lenzy-
me symbolise par E-NH, par lintermdiaire de ses fonctions amines. Les cou-
plages impliquent probablement la formation disores ou dimidocarbonates.
Lactivit enzymatique est ds lors solidaire dun gel insoluble. On mlange dans
le racteur les cinq gels, quil faut maintenir en suspension par agitation, et, une
fois la raction termine, on rcupre par filtration le mlange de gels enzyma-
tiques, utilisable une nouvelle galactosylation. On prparera finalement 10 g de
disaccharide et lextension 100 g ou plus poserait peu de problmes.
Ce systme a permis la galactosylation dun grand nombre de drivs de la
N-actylglucosamine. Quand le substrat est le ttrasaccharide ramifi 10.49 qui
comporte deux rsidus N-actylglycosaminyl galactosylables, le couplage a lieu
exclusivement sur lune des branches, pour donner 10.50.
GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
10. 48 10. 49
Gal$ -( 1 -4)-GlcNAcQ -( 1-6)
1
t
Gal-p -( 1 -4)-Glc
GlcNAcp -( 1-3)
10. 50
10.4.2 Gnralisation
Le paragraphe prcdent nous a permis de voir les donnes essentielles des
couplages avec les transfrases.
a) Lactivation de la position anomrique du monosaccharide rsulte de son
estrification par un groupement phosphate dun nuclotide. Sept nuclotides
sucres sont frquents chez les mammifres : UDP Glc, UDP Gal, UDP GlcNAc,
UDP GlcUA (uridine - diphosphate - acide glucuronique), GDPMan (guanosine-
diphosphate-mannose), GDPFuc (guanosine-diphosphate-fucose), CMP NeuAc
(cytidine monophosphate acide N-actylneuraminique). Les nuclotides-sucres
sont trs coteux et il faut tcher de mettre au point un cycle de rgnration.
b) La raction est catalyse par une glycosyl transfrase. Celle-ci a une double
spcificit : elle fonctionne avec un nuclotide sucre particulier et elle le transf-
re sur une position dtermine dun sucre particulier.
c) Pour cette raison, le couplage enzymatique est un couplage sans protections.
La simplicit des oprations permet de travailler une chelle beaucoup plus le-
ve que dans les mthodes sans enzymes.
d) Dans le cas o le couplage est essay sur lunit terminale non rductrice
dune chane doligosaccharide, la nature de cette chane, mme distance, peut
modifier lefficacit de lenzyme. Nous avons vu que la vitesse de glycosidation
est nulle sur une des branches du tetrasaccharide 10.49. Inversement, elle est
5 fois plus grande sur le chitobiose, GlcNAc -p- (I-4)-GlcNAc que sur GlcNAc.
En plus de la galactosyl transfrase du colostrum, sept autres transfrases ont
t clones et peuvent donc tre obtenues partir de cellules en culture. Le cot
de ces enzymes restera sans doute pour un certain temps assez lev, refltant la
longueur de la mise au point du clonage. En fait, on peut raliser des synthses
efficaces avec des prparations enzymatiques partiellement purifies extraites
dorganes de mammifre (foie, rein, cerveau) achets dans une boucherie.
Fucosyl transfrases
Elles utilisent GDPFuc, 10.51, qui a la rputation de ntre pas trs commod-
ment accessible par aucune mthode. On a une fucosylation avec rg-
nration calque sur une des voies de biosynthse du fucose, selon la suite de
ractions (10.14), dont lanalogie avec la suite de ractions (10.8) (10.1 1)
OH OH
10. 51
nchappera pas au lecteur. La-D-mannopyranosyl phosphate est rapidement pr-
parable par voie non enzymatique.
(10.14) GDP Fuc +R - OH -+fucoside +GDP
GDP +phosphate denolpyruvate -+GTP +pyruvate
GDP Man +NADPH -+GDP Fuc +NADP
Comme dans la galactosylation, il faut prvoir lhydrolyse du pyrophosphate.
Une nouveaut, cest que la conversion mannose -+fucose implique une rduc-
tion, qui a lieu avec le rducteur cellulaire universel, NADPH, nicotinamide ad-
nine diphosphate sous forme rduite. I1faut donc prvoir un cycle adventice pour
sa regnration, ce qui amne six le nombre total denzymes mlanges.
I1 existe deux fucosyl transfrases impliques dans la biosynthse des sub-
stances de groupes sanguins (voir le chapitre 16). Une a- 1,2-fucosyltransfrase
introduit une unit a-L-fucopyranosyl en position 2 dune unit 0-D-galactopyra-
nosy1 terminale non rductrice. Une autre, la a- 1,3/4-fucosyltransfrase a t clo-
ne. Elle introduit une unit a-L-fucopyranosyl soit en 4, soit en 3 du galactose,
respectivement, dans les units terminales non rductrices Gal-B- (1-3)-GlcNAc
et Gal-P- (1-4)-GlcNAc
Glucuronyl transfrase
Les B-D-glycosides de lacide glucuronique 10.52, sont fabriqus par les orga-
nismes suprieurs au cours du processus dit << dtoxification , pour faciliter lli-
mination dune aglycone trangre. Le nuclotide-sucre est alors UDP GlcUA. La
glycosylation enzymatique libre UDP comme sous produit. Celui-ci est transfor-
m en UDPGlc comme dans le cycle de galactosylation, mais ce stade, au lieu
de lpimrisation en UDPGal, on produit une oxydation enzymatique de la fonc-
tion alcool primaire en carboxyle avec NADP comme oxydant. Celui-ci est rduit
et doit tre rgnr.
Mannosyl phosphate +GTP GDP Man +P,O,H,
H &O \
10. 52
On a utilis aussi en synthse une glucosyl transfrase et des N-actylglucosa-
minyl transfrases. On traitera des sialyltransfrases dans le chapitre 12 consacr
aux acides sialiques.
10.4.3 Glycosidases
Nous avons dcrit au paragraphe 3.5.2 lemploi des glycosidases la prpara-
tion des alkyl glycosides. Lenzyme capable dhydrolyser un glycoside peut aussi
Figure 10.5 Racteur membrane. a. entre, b. chambre de raction, c. membrane semi-
permable, d. sortie, e. agitateur.
transfrer lunit glycosyle sur un hydroxyle dun autre sucre, donnant un disac-
charide avec la mme anomrie. Cette certitude est dj un avantage considrable,
tant donn le prix gnralement peu lev des glycosidases et labsence de pro-
tection. Ainsi, en prsence da-galactosidase, on a la raction (10.15).
(10.15) Paranitrophnyl a-D-galactopyranoside +
mthyl a-D-galactopyranoside -+
Gal a-( 1-3)-Gal-a-OMe +NO, C, H, OH
Le rendement est de 28 % par rapport au glycoside donneur, ce qui est remar-
quable, car ce disaccharide important est difficilement accessible par dautres
voies[24]. Toutefois, il faut utiliser un gros excs daccepteur et la sparation du
produit est extrmement laborieuse. Les rendements sont en gnral plus faibles
dans les autres conversions de ce type.
Une P-galactosidase de Bacillus circulans peut transfrer un rsidu P-D-galac-
topyranosyle du lactose sur la N-actylglucosamine, selon (10.16) :
(10.16) Gal-P-( 1-4)-Glc +GlcNAc + Gal-P-( 1-4)-GlcNAc +Glc
On a utilis rcemment cette enzyme trs stable et trs peu couteuse une syn-
thse en continu de la N-actyllactosamine dans un << racteur membranaire .
Dans ces racteurs, une des parois de la chambre de raction est semi-permable
et retient lenzyme, en laissant passer les produits (Fig. 10.5). Le mlange de rac-
tifs en solution aqueuse arrive par a, reste un temps T au contact de lenzyme, puis
est chass vers lextrieur en d par larrive dune nouvelle charge. Un problme
important de cette technologie est la dtermination de la valeur optimum de T -
dans le cas prsent pour limiter les hydrolyses parasites. Dans lexprience dcri-
te, une chambre de 10 mL, contenant 30 mg denzyme est traverse en 100 h par
2,6 L dune solution de lactose (120 mM) et de N-actylglucosamine (300 mM),
avec T gal 0,25 h ou 0,5 h. On obtient 11,3 g de N-actylla~tosamine[~~1. On
peut augmenter lchelle sans diminuer le rendement.
10.5 FLUOROHYDROLYSE~~~]
Le traitement de la chitine 10.53, [O-D-GlcNAcp-( 1-4)-1, P-D-GlcAc, ( n trs
grand) de la carapace des crustacs par le fluorure dhydrogne liquide pur 0C
donne quantitativement une collection doligomres 10.54, [P-D-GlcNAcp-( 1-
4)],-a-D-GlcNAcp-( 1-F), ( n =1-1 1). La raction est prparative. Ces oligomres
jouent un rle dans les interactions de reconnaissance entre les plantes suprieures
et leurs htes, symbiotiques ou parasitiques.
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395.
95-100.
237.
1342- 1343.
CHAPITRE 11
Associations avec anions, cations
et molcules inorganiques
11.1 ASSOCIATION AVEC DES CATIONS MTALLIQUES
11 . l . 1 Introduction
I1est bien vident que dans un mlange de sucres et de sels en solution, il y
aura toujours au moins une association lche entre les hydroxyles et les cations
mtalliques. De mme, lorsquon cristallise un sucre partir dune solution
concentre en sels, lexamen aux rayons X rvle des associations entre le sucre,
les cations et des molcules deau. Ceci nest pas rellement significatif de notre
point de vue. Par exemple il existe un compos daddition cristallis rpondant
la formule saccharose NaBr.2H20, alors quil nexiste pas dassociation visible en
solution entre le saccharose et les ions sodium. Nous ne prendrons ici en consid-
ration que les associations qui impliquent au moins trois hydroxyles de la mme
molcule de sucre[l. Nous ne traiterons pas des associations en milieu alcalin qui
sont en fait des alcoolates. Lexamen des structures solides (en nombre limit)
donne une base de discussion. Des techniques simples, comme llectrophorse
sur papier ou la chromatographie sur couche mince dchangeur cationique ainsi
que la spectroscopie RMN, donnent des renseignements sur la complexation en
solution.
11.1.2 Structures ltat solide
Malheureusement les complexes dont on a pu dterminer la structure solide ne
drivent pas en gnral des molcules de sucres banales dont la complexation est
vidente en solution. Le complexe calcique du mthyl D-glycro-a-D-gulo-hep-
topyranoside, C8H,,0,.Ca2+.C1~.H,0, 11.1, nous indique la disposition caract-
ristique dun complexe trident sur un cycle pyranosique. Le cation est coordin
aux oxygnes 0(1), O(2) et O(3) dune molcule et 0(4), O(6) et O(7) dune
autre molcule. I1y a en plus une molcule deau et un chlorure, ce qui amne la
coordinence du calcium 8. On remarquera sur la structure 11.1 la disposition
axiale-quatoriale-axiale, ma , des ligands 0(1), O(2) et O(3). Cest la plus favo-
rable la complexation sur un cycle pyranosique. La chane latrale adopte une
conformation qui permet aux hydroxyles 0(4), O(6) et O(7) davoir la mme rela-
tion gomtrique mutuelle que O( 1), O(2) et O(3). Tous les hydroxyles du sucre
sont engags dans la complexation.
Le complexe P-D-mannofuranose. Ca++.(C1-),.4 H,O (11.2) cristallise partir
dune solution aqueuse trs concentre de mannose en prsence dun excs de
CaCl,. I1 est remarquable que la proportion de B-D-mannofuranose dans leau
OH I
, PH. , h e
,
\ I ,
Ca++
HO-
H
11. 1
HO
I , ,
\ , , ,
\ , ,,
\ , ,,
, , ,,
\ I ,,
Ca+-+.__._. - - - - - - O
11. 3
11. 2
11. 4
Association avec des cations mtalliques 179
pure nest que 0,3 %. La complexation dplace donc notablement lquilibre tau-
tomrique en solution aqueuse. Le cation est coordinn O( I), O(2) et O(3) dune
molcule et O(5) et O(6) dune autre molcule. Trois molcules deau amnent
8 la coordinence de Ca++. I1 est impossible de dcrire la coordination en fonction
dun polydre classique. Ce type de complexation (triol vicinal, cis-cis) est carac-
tristique des complexes des furanoses.
Un monosaccharide ne peut pas fournir plus de trois oxygnes pour se coor-
donner un cation, mais avec un disaccharide, on peut observer la coordination
avec 4 ou 5 sites. Ainsi le disaccharide non rducteur a-D-allopyranosy1-a-D-
allopyranoside prsente-t-il la disposition aea sur chacune de ses units mono-
saccharidiques. Dans le complexe 11.3 avec CaCI, et 5 H20, Ca++est coordonn
O(l), 0(2), 0(3), O(2) et O(3). Quatre molcules deau amnent la coordinen-
ce 9, chiffre assez rare. Le P-D-fructopyranose 1,2 ; 1,2-dianhydride 11.4 se
complexe trs facilement avec CaCl,, SrC12, BaCI, et LaC13. Les hydroxyles
engags sont O( l), 0(3), O( 1) et O(3).
11.1.3 Complexes en solution
Dans llectrophorse sur papier, en prsence dun lectrolyte support, tous les
sucres migrent vers la cathode, ce qui indique quune fraction au moins des mol-
cules est complexe aux cations. Ce sont les cations Ca2+, Sr2+et Ba2+qui assu-
rent la plus grande mobilit. La vitesse de migration est une mesure du taux de
complexation. La molcule la plus rapide est le cis-inositol 11.5. La coordination
fait intervenir les trois hydroxyles axiaux. Cest la disposition qui entrane la
meilleure complexation possible, mais cette molcule nappartient pas la famil-
le des sucres et, bien sr, il nexiste pas de drivs pyranosiques avec trois
hydroxyles axiaux cis. Le glucose ne migre presque pas.
On sait prparer des plaques pour couches minces base dchangeur de
cations. I1est facile de les faire passer sous la forme mtallique dsire (Cu2+,
Ca2+, La3+, etc.) en les immergeant dans la solution saline correspondante. Avec
leau comme irrigant, la migration des sucres sur ces plaques est plus ou moins
retarde suivant leur degr de complexation.
La rsonance magntique nuclaire donne des renseignements prcis sur la
complexation en solution. Ltablissement de lquilibre est rapide lchelle de
temps de la RMN, on nobserve donc quun spectre moyen et il est malais de
dterminer le spectre du complexe pur. Lors de la complexation dun sucre ou
dun polyol avec un ion diamagntique, tous les signaux migrent vers les champs
faibles. La formule (11.1) permet de calculer la variation do de la constante
dcran du proton lorsque la liaison est soumise un champ lectrique E (expri-
m en u.e.s.), dont la projection sur la liaison C-H est E,,
(11.1) AG= -2 x 10 -* E, - 10-*E
En se reportant un complexe du type aea, par exemple 11.1, on remarquera
que la projection E, a sa valeur maximale le long de la liaison C-H axiale centra-
I ,
, , ,
\ , ,
\ I ,
\ .
Ca++
11.5 11.6
11.7
OH
11.8
le et une valeur plus faible sur les C-H quatoriaux. Ceci permet didentifier le site
de complexation. Par exemple, laddition dions calcium modifie le spectre du
mthyl a-D-allopyranoside en solution aqueuse et on observe que cest le signal
de H(2) qui est le plus dplac, suivi par ceux de H( 1) et H(3). On en dduit que
le complexe a la structure 11.6. Dans ces expriences, les dplacements des
signaux de protons sur les spectres sont de lordre de 0,2 p.p.m.
I1y a possibilit de piges dans ces dductions. La complexation peut entraner
une inversion de conformation du cycle et celle-ci amne une variation de posi-
tion des signaux beaucoup plus importante que la complexation. Ainsi, par suite
de lquilibre conformationnel 11.7 -L, 11.8, un polyol cyclohexanique
peut prsenter deux sites de complexation efficaces, un site aea et unsite triaxial,
qui nexistent pas dans sa configuration la plus stable.
Les dplacements de signaux en prsence de cations paramagntiques sont
observs avec les sucres comme avec presque toutes les familles organiques. Ils
sont beaucoup plus importants et leur interprtation est beaucoup plus compli-
que. Nous considrons que ces phnomnes sont en dehors du cadre de ce cha-
pitre.
Avant mme toute dtermination de structure solide, lexamen de la mobilit en
lectrophorse avait dj montr que les sucres qui peuvent prsenter la squence
aea dans lune de leurs conformations se complexent bien. Cest la disposition la
plus favorable ; la disposition triaxiale 1, 3, 5 sur un cyclohexane est encore
meilleure mais nest pas ralisable sur un pyranose. A cette disposition aea cor-
respond pour un furanose, la disposition cis de trois hydroxyles comme dans le p-
D-mannofuranose discut ci-dessus. Le furanose flexible peut alors prendre une
Association avec des cations mtalliques 181
conformation qui place les hydroxyles dans une situation relative trs voisine de
la disposition aea.
Dune faon gnrale, la stabilit des complexes augmente suivant la valence
des cations, dans lordre monovalent <divalent <trivalent, mais il y a un autre
facteur, le rayon ionique du cation, dont la valeur optimale se situe entre 100 et
110 pm, comme dans le cas de Na +, Ca2 +et La3 +. Les complexes de Li +dont
le rayon est 68 pm sont trs peu stables. On prdit que Cu2+, de rayon 72 pm, doit
tre un complexant mdiocre et cest en gnral vrifi. Cependant il y a de fortes
indications quil existe une complexation nergique dans les solutions dactate
cuivrique. Le complexant rel serait alors [Cu, (0H),l2 +.
A lquilibre de complexation (1 1.2) correspond une constante dquilibre K,
donne par lexpression (1 1.3) ; cest une mesure de la force de complexation,
quon appelle constante de stabilit.
(11.2) Sucre +X+ (Sucre. X+)
(11.3)
[(sucre . x+)]
[sucre ] [ x+]
K =
Avec les sucres, la mesure est imprcise : K est relativement peu leve.
Comme il sagit de solutions parfois trs concentres, il faudrait introduire les
activits qui, pour ces cations complexes, ne sont pas aisment accessibles. I1peut
y avoir plusieurs ractions de complexation avec des stchiomtries diffrentes.
On nglige ces sources derreur. La mthode de calcul de K la plus directe repo-
se sur un dosage potentiomtrique du cation non complex en solution, en pr-
sence de quantits variables de sucre. Lorsque la complexation implique nces-
sairement un changement de conformation du sucre, qui modifie profondment
son spectre de RMN, on peut dduire la fraction de sucre complexe des dkplace-
ments de signaux observs sur ce spectre. Avec Ca++, on mesure pour les << bons
complexants D des constantes de stabilit voisines de 5 M- (a-D-allopyranose,
5,l - 6,5 ; a-D-ribopyranose, 4,6 - 5 3 , qui descendent jusqu 0,l pour les
<< mauvais D complexants comme le mthyl a-D-xylofuranoside. Les constantes
de stabilit sont beaucoup plus leves dans le mthanol ou lthanol. Ceci
explique le pouvoir dissolvant lev des solutions alcooliques de certains sels vis-
-vis des sucres, par exemple des solutions alcooliques concentres de chlorure de
calcium.
Parmi les applications, nous avons mentionn la sparation des sucres sur
colonne dchangeur de cations sous forme calcium au chapitre 1, propos de la
HPLC analytique. Signalons quon peut sparer le glucose du fructose lchelle
du kilogramme par cette mthode. Sous sa forme prparative, lemploi de ces
colonnes est trs recommandable : elles ont une grande capacit ; elles sont rg-
nrables et lluant est leau. I1 existe aussi des applications en synthse.
Laddition de CaCl, une solution aqueuse de sucre augmente la proportion de
tautomres pyranoses prsentant une disposition aea dans une de leurs conforma-
tion et de tautomres furanoses prsentant une disposition triol contigu cis, cis. On
peut ainsi changer radicalement le cours de la glycosidation de Fischer (voir le
paragraphe 3.3) et lorienter vers la production majoritaire de furanosides, en
gnral mal accessibles par dautres mthodes. Ainsi le rendement en mthyl
a-D-ribofuranoside passe-t-il de 4 69 %.
11.2 NOTIONS SUR LA STRUCTURE DE LEAU LIQUIDE
11.2.1 Introduction
La connaissance de la structure de leau est surtout importante pour com-
prendre son interaction avec les sucres dont ltude est reporte en fin de chapitre,
pour des raisons qui seront exposes en leur temps. Cependant, comme le concept
dinteraction hydrophobe apparat plusieurs fois dans les paragraphes 1 1.3 et 1 1.4,
il vaut mieux que le lecteur soit demble familier avec lui.
11.2.2 Structure de Ieau12]
Dans la glace, chaque molcule deau est laccepteur de deux liaisons hydro-
gnes assures par les protons de deux molcules deau voisines. La configuration
autour de chaque atome doxygne est celle dun ttrahdre rgulier, 11.9. Ces
ttrahdres sont assembls pour donner un cristal de type tridymite. Celui-ci
contient des cavits notables en raison de la longueur des liaisons oxygne-oxy-
gne par lhydrogne, qui constituent larte des polydres.
Dans leau liquide, en raison de lagitation molculaire, on ne peut plus assi-
gner une position fixe aux atomes, ni la dterminer avec prcision par diffraction
de rayons X ou de neutrons. Mais lorsquon emploie ces mmes mthodes avec
de minces lames de liquide, on peut calculer partir des images de diffraction une
fonction de distribution radiale g( r) qui est une mesure de la probabilit de trou-
ver un atome doxygne j la distance r dun atome doxygne i . Cette fonction,
reprsente la figure 1, montre quil y a une forte probabilit de trouver dans
O
11. 9 11. 10
Notions sur la structure de leau liquide 183
4
3
2
Figure 11.1 Fonction de distribution radiale
dans leau liquide. Ordonnes : g( R) ; abs-
cisses : distances un oxygne particulier,
comptes en diamtre de Vander Waals de la
molcule deau.
I
R
I I I
1 2 3
leau liquide un deuxime atome doxygne la distance R voisine du diamtre
de Van der Waals de la molcule deau, 282 pm, et une probabilit plus faible den
trouver un troisime la distance I,6 R. Puis la fonction samortit rapidement, ce
qui indique que latome doxygne i considr ne conditionne plus lordre gran-
de distance. Les deux pics observs tmoigneraient de la persistance dans leau
liquide dassociations selon le modle 11.10 avec la configuration ttrahdrale. En
intgrant la fonction de distribution de O r, on calcule le nombre n(r) de voisins
immdiats, selon la relation (11.4), o p dsigne la densit. On trouve quun
atome doxygne est entour par 4,4 atomes doxygne voisins immdiats. I1y a
donc un certain degr dorganisation.
(11.4)
I1y a certainement les modes dassociation les plus varis dans leau liquide,
mais on pense quil y a, en particulier, des cavits plus grandes que dans la glace.
Lorsque lon refroidit les solutions aqueuses de gaz inertes ou dhydrocarbures
(videmment trs dilues !), il se dpose ce que lon appelle un clathrate : dans
cet difice, le solut, si ses dimensions le permettent, est emprisonn dans un
dodcahkdre rgulier constitu par des molcules deau. On pense que ce type de
cage et dautres plus grandes prexistent dans leau pure. Naturellement, elles se
disloquent et se reforment constamment, puisque la dure de vie dune liaison
hydrogne dans leau est de lordre de seconde. Le volume total, eau plus
futur solut, diminue lors de la dissolution, ce quon interprte en supposant que
le solut occupe simplement des volumes primitivement vides. Les grandeurs
thermodynamiques associes au transfert dune molcule de mthane, par
exemple, dun solvant organique leau saccordent avec cette interprtation.
Lenthalpie libre est positive (leau est un trs mauvais solvant pour le mthane !),
mais en fait lenthalpie lie est ngative (raction exothermique) et cest une forte
diminution dentropie qui renverse la tendance. Ceci rvle une augmentation de
lordre dans le systme. On se reprsente le solut, quand il est loin de la satura-
tion, comme entour par une sphre de molcules deau, qui dirigent leurs liaisons
O-H tangentiellement dans la mesure du possible, de faon sloigner de la
molcule de solut, 11.11. On a formul lopinion que ceci impliquait une certai-
ne rigidification de la structure de leau. Si lon augmente la concentration, deux
molcules A et B se rapprochent et finissent par se runir dans une mme cavit
de plus grande dimension, 11.12. Ceci est un processus favorable car linterface
eau-hydrocarbure sen trouve diminu. Ces phnomnes caractrisent lhydrutu-
tion hydrophobe.
11.3 CYCLODEXTRINES[3]
Nous commenons maintenant ltude dune famille de molcules com-
plexantes qui sont sur le papier des produits de polycondensation de la-D-glyco-
pyranose, rpondant la formule gnrale 11.13.
On y trouve des polysaccharides linaires (R =H, R =OH) mais nous com-
mencerons par des oligosaccharides cycliques, les cyclodextrines. En effet, leurs
proprits sont souvent connues avec prcision et elles peuvent servir de modle
pour comprendre le comportement de lamylose (voir le paragraphe 11.4) en dpit
dune indiscutable diffrence de forme. Ce sont des oligomres cycliques btis
partir dunits a-D-glucopyranosyl relies en 1 + 4. Les trois plus importantes,
les a, p et y-cyclodextrines sont constitues partir de 6, 7 et 8 units a-D-glu-
copyranosyl en conformation habituelle D-4C,. Les anneaux ont la forme dun
tronc de cne, avec les fonctions alcool primaire sur la petite base et les fonctions
alcool secondaire sur la grande base. La structure 11.14 est celle de la P-cyclo-
dextrine, prsentement la plus utilise. La cavit intrieure est tapisse par les
hydrognes lis aux carbones 3 et 5 et les oxygnes glycosidiques. Elle apparat
essentiellement hydrophobe. La conformation est stabilise par des liaisons
hydrogne entre deux hydroxyles voisins de deux units a-D-glucopyranose adja-
centes. Les dimensions de la cavit sont de lordre de 470-520 pm pour la-cyclo-
dextrine, 600-640 pm pour la P-cyclodextrine et 750-830 pm pour la y-cyclodex-
trine. I1est remarquable que la (3-cyclodextrine soit relativement peu soluble dans
leau (183 g/L), tandis que la- et la y-cyclodextrine sont respectivement huit et
douze fois plus solubles.
Les cyclodextrines sont les produits de la dgradation de lamidon par la bac-
trie Bacillus rnacerans. On les spare ltat de complexes prcipitants avec cer-
tains solvants et on les purifie par recristallisation. I1 serait probablement possible
den fabriquer industriellement un fort tonnage. La formation des cyclodextrines
est interprte comme un trans glycosidation sous contrle enzymatique de
lamylose. Celle-ci, en solution aqueuse, adopte au moins partiellement la forme
C yclodextrines 185
11. 11 11. 12 11. 13
*O'
OH $1
OH O
11. 14
d'une hlice, avec une priode de six units glucopyranose. L'enzyme bactrien-
ne catalyse la jonction de deux rsidus glucopyranose, spars par quatre, cinq ou
six rsidus sur la chane, mais en proximit spatiale cause de la structure en hli-
ce 11.15.
La proprit la plus caractristique des cyclodextrines est leur aptitude for-
mer des complexes d'inclusion en solution aqueuse avec des molcules de dimen-
sion infrieure celle de leur cavit. Ceci est visible, entre autres, dans les exp-
riences de RMN. Ainsi l'addition de l'a-cyclodextrine l'anion paranitrophnate
en solution aqueuse (pD =11) dplace de 14-35 Hz les signaux de protons aro-
matiques examins 100 MHz. L'tude du dplacement en fonction de la concen-
tration permet de calculer une constante de dissociation du complexe, K, =3,7 x
10" M. On trouve des valeurs du mme ordre en analysant l'volution d'autres
proprits physiques14]. On peut dterminer le site de complexation sur la cyclo-
dextrine en utilisant l'effet Overhauser nuclaire du proton[']. Rappelons que la
11. 15 11. 16
relaxation mutuelle de deux protons dpend de leur distance r selon une loi en y- , .
La proximit spatiale de deux protons se traduit donc par une augmentation de
lintensit du signal. Lexprience dcrite repose sur ce principe, mais fait appel
une technique plus sophistique de RMN deux dimensions. La solution exami-
ne est 40 mM en a-cyclodextrine et 80 mM en paranitrophnate, dans D,O
(pD I O), et au moins 95 % de la cyclodextrine est complexe. On montre quil y
a proximit des H(3) de la cyclodextrine avec les protons ortho (0) et mta (m) du
paranitrophnate et des H(5) avec les protons mta seulement. Ceci indique que
le phnate est lintrieur de la cavit, avec la disposition schmatise par la for-
mule 11.16.
I1y a de nombreuses autres mthodes pour mettre en vidence la complexation.
Par exemple, il est bien connu que les protons situs au voisinage de laxe C, dun
noyau aromatique donnent des signaux en RMN dplacs vers les champs forts,
parfois jusqu des valeurs ngatives de 6. Linclusion dune molcule aromatique
dans une cyclodextrine produit cet effet sur les signaux de H(3) et H(5). Mais il
est relativement faible (-0,2 p.p.m.)[6]. Plusieurs autres mthodes dinvestigations
sont possibles : les modifications du spectre lectronique, laugmentation de la
fluorescence de lhte, qui dans la cavit est protg contre le choc des molcules
extrieures, les changements dans le dichrosme circulaire. On observe aussi une
augmentation de la solubilit des substances peu solubles dans leau. Dans la liste
des molcules complexes on trouve des alcools et des acides carboxyliques ali-
phatiques bas poids molculaire, les acides cyclohexane- et adamantane-car-
boxyliques, des benznes substitus par des groupements fonctionnels varis, des
htrocycles (pyridines, pyrimidines, indoles) et enfin des sels inorganiques.
I1 ne semble pas quon soit encore arriv une explication dfinitive du mca-
nisme dinclusion. Dans lexpression de lenthalpie libre de la complexation, le
terme denthalpie lie est ngatif, assez variable, de lordre de 20 kJ mol-, mais
sa contribution est diminue par un terme entropique presque toujours positif. Ce
comportement uniforme de molcules htes de structures extrmement varies par
ailleurs suggre un mcanisme commun de complexation. On a vu ci-dessus que
deux molcules de solut hydrophobe, A et B, 11.11 et 11.12, ont tendance se
Amylose 187
rejoindre en chassant les molcules deau qui les sparent. Ici lintrieur hydro-
phobe de la cavit de la cyclodextrine joue le rle de la molcule A et lhte B
vient son contact en chassant tout ou partie des molcules deau qui occupent
normalement cette cavit. I1semble probable que la complexation est aussi due
la participation de forces de Van der Waals, en proportion variable suivant la
configuration de lhte.
Actuellement on poursuit activement lexploration des proprits des cyclo-
dextrines. En raison de leur absence de toxicit et de leur aptitude complexer
leurs htes dans leau, on peut imaginer des applications dans lindustrie pharma-
ceutique pour ladministration de mdicaments insolubles. Elles peuvent jouer un
rle catalytique. Ainsi la B-cyclodextrine acclre-t-elle la cycloaddition du cylo-
pentadine avec lacrylonitrile par inclusion simultane des deux molcules. On
cherche modifier les proprits complexantes en utilisant les hydroxyles pour
accrocher des groupes supplmentaires. En introduisant un groupement fonction-
nel basique faible prs de la cavit rceptrice, on a bti une enzyme hydrolase arti-
ficielle. Enfin, les cyclodextrines tant des molcules chirales, on sattend obser-
ver une rsolution plus ou moins efficace des htes racmiques. Cest ce quon a
observ parfois et on a mme bti des colonnes chirales base de cyclodextrine
immobilise. I1ne semble cependant pas que les cyclodextrines se soient impo-
ses comme ractifs de ddoublement.
11.4 AMYLOSE
Lamidon, substance de rserve des graines de vgtaux est un mlange de
deux polysaccharides, lamylose et lamyl~pectine[~]. Lamylose est linaire, avec
comme motif priodique la-D-glucopyranose, li comme sur la formule 11.13
(R =H, R =OH), II tant frquemment de lordre de 6 000. En revanche, Iamy-
lopectine est un polysaccharide ramifi, o des chanes analogues, mais beaucoup
plus courtes - de 17 26 units - sont relies entre elles par des liaisons 1-6.
On spare ces deux constituants par traitement dune dispersion aqueuse dami-
don (lempois) par des composs organiques hydroxyls comme le thymol et le
butanol primaire qui forment des complexes insolubles avec lamylose.
Camylopectine reste en solution et nous nen parlerons plus. En ce qui concerne
lamylose, on peut prparer plusieurs varits cristallises, selon les conditions du
dpt partir dune solution aqueuse. La structure de base des amyloses A et B
est une double hlice*], constitue par lenroulement lune avec lautre de deux
chanes parallles, chacune ayant la forme dune hlice droite 11.17. Un tour
complet correspond six units glucopyranosiques pour chaque brin. Les amy-
loses A et B diffrent par lorganisation dans la maille cristalline. Le pas de lh-
lice dans lamylose B est 2 080 pm. Les amyloses V qui prcipitent en prsence
de complexant comme le dimthylsulfoxyde ou le butanol primaire sont des
hlices simples, galement avec une rptition de six units a-D-glucopyranosyl,
peut-tre un peu moins rgulire. La varit V, est une hlice En solu-
188
1-
11.17
Associations avec anions. , cations et molcules inorganiques
11.18 11.19 11.20
tion, lamylose aurait la conformation dune hlice, simple ou double, probable-
ment assez relche, ou de pelotes dsordonnes. La conformation hlicodale
reproduit dans une certaine mesure le vis--vis des surfaces hydrophobes caract-
ristique des cyclodextrines. On peut imaginer quelle vite ou restreint la forma-
tion de la couche aqueuse hydrophobe qui entoure normalement dans leau les
molcules non polaires. On pourrait hasarder lexpression << autocomplexation .
En revanche, lhlice prsente des groupements polaires vers la masse du solvant.
11.5 COMPLEXES IODS
11.5.1 Introduction
La coloration bleue de lamidon avec liode, bien connue des lycens, a t
observe pour la premire fois il y a bientt 200 ans. Cest la fraction amylose qui
est responsable. On observe la complexation avec les homologues infrieurs et,
comme il est plus facile darriver des certitudes avec ces petites molcules, nous
allons les traiter en priorit.
11.5.2 Complexes de la-cyclodextrine
En mettant au contact une solution aqueuse da-cyclodextrine et une solution
thre diode, des cristaux brun rougetre se dveloppent linterface. Ils rpon-
dent la composition (C,H,,0,),.12.4H20. Lanalyse par diffraction de rayons X
indique que la molcule diode est colinaire laxe C, de la cyclodextrine. Les
plus proches contacts dans la direction perpendiculaire cet axe ont lieu entre lun
Complexes iods 189
des atomes diode et les carbones C(5) et C(6), et lautre atome diode et loxy-
gne O(4). Lenvironnement est donc hydrophobe pour le premier, hydrophile
pour le second. Lempilement des molcules dans le cristal est tel que les deux ori-
fices de la cavit de chaque molcule de cyclodextrine sont bouchs par les mol-
cules voisines. On a affaire ici un complexe du type cage[0].
Lorsquon prpare les complexes en prsence diodure, on peut obtenir, suivant
les conditions quatre types de complexes diffrents. On ne parlera ici que du com-
plexe brun-noir, (a-~yclodextrine)~.Cd~,~.I,.27H,O. Sur laxe C, de la molcule,
on trouve quatre des cinq atomes diode de I i , le cinquime, central, tant dsor-
donn. Les deux molcules da-cyclodextrine se font face par leurs grandes bases,
entre lesquelles se trouve latome diode dsordonn, 11.18. Les difices 11.18
sont empils les uns sur les autres de faon crer un canal continu rempli
datomes diode. On a ici un complexe de type canal[]. On observe soit lun soit
lautre des deux types de structure cristalline rencontres ici, cage ou canal, avec
des molcules htes autres que liode.
11.5.3 Le complexe (paranitrophnyl a-maltohexaoside)2
Ba (13)2.27 H,O
Le prfixe multo sert dsigner plus prcisment une famille doligosacchari-
de linaires de formule gnrale 11.13 (R =H, R =OH), avec n pair. Pour cette
raison, on peut les voir comme des drivs de Ianomre a du maltose, 11.13
(R =H, R =OH, n =2). On peut considrer le maltohexaose ( n =6) comme un
petit fragment damylose. Dans cette tude,], on a utilis la-glycoside du para-
nitrophnol, que nous dsignerons par M, pour viter les complications dune pos-
sible mutarotation. Lvaporation de solutions aqueuses dcimolaires en M et
triiodure de baryum amne la cristallisation daiguilles bruntres M,.Ba(13),.27
H,O. Ce complexe nest donc pas bleu intense, il a la couleur de liode en solu-
tion aqueuse. Nous simplifierons lextrme la description de cette molcule,
assez complique dans les dtails, pour concentrer lattention sur les points qui
nous semblent les plus intressants.
La maille lmentaire contient quatre anions I; qui forment une ligne brise
allonge 11.19. Les distances entres les triiodures sont un peu infrieures aux dis-
tances de Van der Waals. Chaque groupe de deux triiodures conscutifs est en
contact avec deux hydroxyles du sucre et deux molcules deau. Lenvironnement
nest donc pas hydrophobe essentiellement et cest peut-tre la raison pour laquel-
le la couleur du complexe se rapproche de celle de liode dans leau ou lalcool,
plutt que du bleu du complexe iode-amidon. Autour de chaque triiodure sen-
roulent deux molcules M, chacune en hlice gauche, mais en disposition rela-
tive antiparallle. Elles sont reprsentes sur la formule 11.20 par une ligne en V
termine par un hexagone qui matrialise laglycone, tandis que la colonne dio-
de est dessine rectiligne. On observe une interaction dempilement entre les
noyaux aromatiques des aglycones de deux molcules M antiparallles, qui ren-
force peut-tre la cohsion du systme. Les deux chanes solidaires dun anion
11.21
H
11. 22
triiodure sont dessines dplies en 11.21. Les traits pointills reprsentent les
liaisons hydrognes directes entre ces chanes. La cohsion du systme est large-
ment assure par le cation Ba++, qui prsente la coordinence 10. I1est li quatre
rsidus a-D-glucopyranosyl, de quatre chanes M diyrentes, deux fois sur les
oxygnes 4 et 6 et deux fois sur les oxygnes 2 et 3, et deux molcules deau.
La double hlice antiparallle est trs hydrate. Tous les groupes donneurs ou
accepteurs de liaison hydrogne sont impliqus, y compris la plupart des oxy-
gnes cycliques. On observe la prdominance remarquable de chelations impli-
quant O(5) et 0(6), ainsi que O(2) et 0( 3) , conduisant des cycles 5 lments,
11.22. La superposition des mailles lmentaires schmatises selon 11.20 donne
dans le cristal une cavit cylindrique infinie, dlimite par les hlices M et rem-
plie danions triiodure en zigzag.
11.5.4 Complexe iod de lamylose
La complexation en solution de liode par lamylose se poursuit jusqu ce que
le polysaccharide ait squestr environ 20 % de son poids diode. Le taux exact,
ainsi que la longueur donde au maximum dabsorption du colorant bleu, variant
de 606 642 nm, dpendent des conditions exprimentales et de lorigine de
lamylose. On peut aussi obtenir le colorant en traitant lamylose V par la vapeur
diode. I1est gnralement admis que liode sinstalle au centre de lhlice[13].
Cela pourrait expliquer labsence de raction des amyloses A et B, en double hli-
ce compacte, sans place suffisante disponible sur leur axe. On a fait une structure
ltat solide du complexe iod de lamylose V,41. Le complexe avec le dim-
Interaction des sucres avec leau liquide 191
thylsulfoxyde est dcompos par le mthanol bouillant, puis expos la vapeur
diode en atmosphre sature dhumidit. II prend ce moment-l la coloration
bleu intense caractristique. On peut dcrire la structure ainsi : une droite ou une
ligne presque rectiligne sur laquelle salignent des atomes diode, spars par
295 f 4 pm, pratiquement quidistants. Tout autour senroule lamylose en une
hlice gauche dont chaque tour correspond six units a-D-glucopyranose. I1y
a trois atomes diode par tour dhlice. Les atomes diode sont aligns ; il ny a
pas de contact avec des atomes doxygne et la couleur est bleue, tandis que dans
le complexe du paranitrophnyl a-D-maltohexaoside avec I;, la chane diode est
zigzagante, il y a des contacts avec les atomes doxygne et la couleur est brune.
Selon un article rcent, la complexation de lamylose rigoureusement anhydre
(ce qui vite la formation danion iodure) donnerait un complexe de liode mol-
culaire 1~1.
11.6 INTERACTION DES SUCRES AVEC LEAU LIQUIDE
11.6.1 Importance du problme
La place de cette question dans le chapitre ne doit pas faire juger quelle est
secondaire. On la reporte la fin cause de lincertitude qui plane sur les inter-
prtations. Nous exposerons essentiellement des hypothses et des tentatives de
rponse exprimentale. Rappelons une banalit : le glucose et la majorit des
sucres libres sont trs solubles dans leau. I1reste une part de vrit dans le vieux
nom dhydrate de carbone, car cest la famille organique la plus voisine de leau.
Aussi, les molcules de sucres, attaches la priphrie des cellules vivant en
milieu aqueux assurent-elles une espce de continuit entre une membrane hydro-
phobe dans ses parties profondes et le milieu aqueux extrieur. Luniversalit du
glucose dans le monde vivant suggre une origine trs ancienne. Doit-il son mer-
gence une adaptation particulire leau de << locan primordial >> ? Ceci est
pure spculation, mais il y a aussi des problmes de notre monde contemporain.
Bon nombre dinteractions entre une cellule et son milieu reposent sur lattache-
ment dun oligosaccharide membranaire qui baigne dans un milieu aqueux un
rcepteur lipidique ou protique. On peut en gnral mesurer les paramtres ther-
modynamiques de cette raction mais leur interprtation concrte exige que lon
connaisse bien le type de liaison impliqu dans ltat initial. En forant un peu les
mots, on pourrait dire que leau liquide est le rcepteur primordial et universel de
tous les sucres et voir les interactions sucre-rcepteur protiques en milieu aqueux
comme le passage dun rcepteur 2 un autre.
11.6.2 Le modle dhydradation strospcifique des hexopyranoses
Elucider les dtails de linteraction entre le sucre et leau revient sparer le
comportement dune mince pellicule au contact du solut de celui de la masse des
molcules deau qui lentourent. On observe les variations avec la concentration
de certaines proprits du solvant, concernant ses atomes doxygne, dhydrog-
ne, ou la molcule entire, et on les interprte comme un effet des perturbations
qui affectent la fraction deau lie sur la moyenne gnrale. On observe des dif-
frences entre les divers hexoses, ce qui oblige demble carter lide que
chaque hydroxyle peut tre la fois donneur et accepteur de faon indiffrencie.
En comparant leffet sur leau dune collection de sucres, on essaye de construire
un modle dhydratation spcijique, cest--dire dnoncer les rgles qui dfinis-
sent la constitution des hydrates en fonction de la configuration et la conforma-
tion du sucre dissous. On voit tout de suite que lexploitation des expriences sera
difficile, puisque chaque sucre en solution aqueuse est un mlange, dans le pire
des cas, des deux pyranoses et des deux furanoses. Une autre source de difficul-
ts, apparemment nglige par les auteurs, est linstabilit conformationnelle, qui
entrane un mlange de formes, mme pour un tautomre dtermin (voir le cha-
pitre 2). Bien sr, les hexopyranoses sont rigides, lexception de lidose, mais
avec les pentopyranoses, il y a lieu dexaminer sil ny a pas de changement de
conformation dans les conditions de lexprience. Enfin, il y a le problme de la
flexibilit des furanoses.
Autre source de difficult, les coles de pense concernes par ces problmes
semblent avoir une conception diffrente de 1 adaptation . Selon lune de ces
coles, une perturbation leve des proprits de leau de la solution par rapport
celles de leau pure rvle quil y a un grand nombre de molcules deau asso-
cies au sucre, donc que cette couche dhydratation est relativement stable. Les
auteurs considrent alors que cest une indication de sa bonne intgration au
rseau de leau. Ainsi, on calcule que P-D-glucopyranose entranerait avec lui
quatre molcules deau, formant un difice dont la dure de vie, de lordre de la
ps, serait mille fois plus grande que celle des liaisons hydrogne dans le solvant.
Cette hydratation optimale serait une consquence de la configuration favorable
de ses hydroxyles. La distance entre les couples quatoriaux O(1) - O(3) et O(2)
- O(4) est trs proche de la distance entre un atome doxygne et son second voi-
sin dans leau pure. Ceci permettrait la formation de 11.23 qui se raccorde bien au
rseau de leau. Quand on sloigne de cette configuration optimale, lhydratation
diminue. La-D-glucopyranose nentranerait plus que trois molcules deau. La
prpondrance en solution aqueuse de lanomre P du D-glucopyranose, contrai-
re leffet anomrique, est interprte comme une consquence de sa meilleure
stabilisation par le rseau de leau[l6I. Comme lhydroxyle primaire est aussi
impliqu dans le rseau de liaisons hydrogne, certains auteurs ont formul
lnonc paradoxal : tous les groupements polaires du P-D-glucose participent
des liaisons hydrogne ; en consquence il se comporte comme un solut hydro-
phobe, en ce sens quune molcule trangre qui lapproche ne voit que des liai-
sons C-H. Pour conclure, on voit que selon ces principes, lhydratation calcule
tant fonction croissante de la perturbation, la meilleure adaptation au rseau de
leau correspond la perturbation maximale des proprits de leau pure.
=O\
,H- -
5.. .O/H
O
H
I
O
H I
CH,OH OH
HO
OH
H
11. 23
OH
11. 24 11. 25
Une autre cole dfend le point de vue oppos[171. Si un sucre sadaptait par-
faitement au rseau de leau, les molcules deau son contact ne se distingue-
raient en rien des autres : la perturbation des proprits physiques de leau pure
serait nulle. Dans la pratique, le sucre le mieux adapt est celui qui perturbe le
moins ; cest la-D-talose, 11.24, et le plus mal adapt, celui qui perturbe le plus,
est la-D-galactose 11.25.
Sur le sucre 11.24, les oxygnes 0(2), O(4) et 0(6) forment un triangle presque
quilatral, dont le ct est approximativement gal la distance entre un oxyg-
ne et son premier voisin dans le rseau de leau. I1y aurait trois distances adap-
tables au rseau de leau, contre une seule pour la-D-galactopyranose.
11.6.3 Principe des mesures
Relaxation
On prendra lexemple de la relaxation observe en RMN[18]. Sous leffet de
lagitation molculaire, une magntisation samortit suivant une loi (suppose)
exponentielle M =Mo (1 - e- ; T,, temps de relaxation longitudinale, est une
mesure de mobilit. Dans la molcule deau pure, TI mesur avec lisotope 170
prsent en abondance naturelle est de 7,3 ms 25C. I1 est multipli par environ
1,6 dans les solutions dhexoses de molalit 2,O. On explique ceci en considrant
que leau lie au moins temporairement au sucre comme couche de solvatation est
moins mobile que celle de la masse du solvant. La perturbation crot dans le sens
mannose, galactose, glucose.
Mesure de compressibilit
Un procd acoustique permet de mesurer les compressibilits isentropiques
molaires partielles. Selon les auteurs, si un solut sadapte exactement leau, on
doit observer la mme valeur que dans leau pure, 8,17 x lo4 mL mol- bar-.
Dans ce cas idal, les molcules deau au contact sont indiscernables. Sil y a
mauvaise adaptation, il y a une couche intermdiaire suppose moins compres-
sible que leau pure. On trouve effectivement des compressibilits molaires par-
tielles ngatives : talose -11,9 ; mannose -16,O ; glucose -17,6 ; galactose -20,s x
lo4 mL mol- bar- 25C.
Effet cintique du milieu
I1 sagit de linfluence dun solut tranger sur la vitesse dune raction en
solution. La raction (11.5) tudie ici est la partie indpendante du pH de lhy-
drolyse dune benzamide dans leau. Elle procde par un tat de transition polai-
re qui contient deux molcules deau. La raction est retarde par tous les hexoses.
On interprte en supposant quil y a des molcules deau communes dans les
couches dhydratation de la benzamide, de ltat de transition et du sucre, ce qui
a pour effet de modifier dune faon non parallle les enthalpies libres du produit
de dpart et de ltat de transition. Si le sucre se comporte rellement de manire
hydrophobe, on peut imaginer quil aura une interaction stabilisante avec la ben-
zamide peu polaire. Le ralentissement augmente dans le sens galactose, glucose,
mannose et talose. Les auteurs considrent que cela traduit une augmentation de
caractre hydrophobe et confirme les rsultats de la mesure de compressibilit.
Nous devons cependant souligner ici que le talose est le seul hexose de la srie
tudie qui contienne 3 1 % de furanose en solution aqueuse.
(11.5) PhCO-N
\+N
PhCO - N
~ \HN
\
H-O
H\
OH
I
H
- PhCOOH +HN
\ I ,N
Cycloaddition en phase aqueuse
La cycloaddition dun dine sur un dinophile a la rputation dtre peu sen-
sible la polarit du solvant. Cependant, elle est considrablement acclre dans
I ea~[ ~l . Ainsi la raction (11.6) est 1000 fois plus rapide dans leau que dans
lisooctane. On a suggr que ceci tait une consquence de leffet hydrophobe.
Lacclration est encore plus grande dans les solutions de LiC1, sel qui diminue
la solubilit des molcules lipophiles dans leau par augmentation de leffet
hydrophobe. On a dj signal au paragraphe I l .3 un effet analogue de la fi-cyclo-
dextrine. Dine et dinophile peuvent tre complexs simultanment dans la cavi-
t hydrophobe de taille adquate. La-cyclodextrine, plus petite, ne peut com-
plexer que lun des ractifs et ralentit la raction. Quand la vitesse dune raction
dpend ce point de la nature du solvant, il est tentant de lutiliser comme outil
chimique dtude de ce solvant : ses paramtres dactivation doivent tre priori
trs sensibles laddition de composs qui en modifient la structure. On les a
compars dans le mthanol et Le tableau 11.1 (lignes 1 et 2) montre que
lacclration, lorsque lon passe de la solution mthanolique la solution aqueu-
se, vient dune augmentation de lentropie dactivation. Ceci pourrait tre la
consquence dune diminution dentropie au transfert du mthanol leau plus
importante pour ltat initial que pour ltat final.
lo4 k , AH$ AS$ A(AHt)* TA(AS)*
(M-I sI) (kJ mol-) (J mol-I TI) (kJ mol-I) (kJ mol-)
Raction Solvant
(11.6) eau 543 38,O ? 1,7 - 14O,9? 5,0 O 9,83
(1 1.6) mthanol 1O,4 38,O _+ 1,0 - 173,9 f 3,4
(11.7) eau 2,85 40,0 f 0,6 - 178,X ? 2,l 6,4 9,63
(1 1.7) mthanol-eau 0,85 33,6 f O, X - 21 1,l f 2,6
(1: 1 ,vol/vol)
Tableau 11.1 Grandeurs thermodynamiques dactivation dans la cycloaddition 25C
(* : Augmentation du solvant mthanolique leau). Daprs A. Lubineau, H. Bienaym,
Y. Queneau et M. C. Scherrmann, New .I. Clzen., 18 (1994) 279-285 (publi avec laimable
autorisation de Gauthier-Villars ; O 1994 Gauthier-Villars).
La sonde chimique idale de la structure du solvant devrait mettre en jeu des
ractifs moins volatils et plus solubles dans leau, ce qui est apparemment incom-
patible avec un caractre lipophile. On sen rapproche avec un dine li un sucre
libre, selon la raction (1 1.7). La comparaison des lignes 3 et 4 du tableau 11.1
montre que cette raction est galement acclre dans leau pure et que cest I
aussi une consquence de laugmentation de lentropie dactivation. Donc, leffet
hydrophobe peut sexercer entre dine et dinophile proximit de la partie sucre.
(11.7)
La raction (1 1.7) est trs sensible laddition de sucres au milieu ractionnel.
Le tableau 11.2 donne des prcisions numriques. Ces sucres, sans action faible
concentration, acclrent la raction dune faon linaire partir de 0,2 M. A la
concentration 2M, le glucose acclre plus la raction quune solution sature de
B-cyclodextrine. Les additions de glucose, mannose, galactose, sorbitol, ribose.. .
ont des effets acclrateurs comparables, mais ceci occulte peut-tre des mca-
nismes bien diffrents. Ainsi titre dexemples, si le glucose et le ribose la
mme molalit (2,6 M) acclrent tous deux la raction, le ribose acclre la rac-
tion grce une baisse de lenthalpie dactivation alors que le glucose se comporte
comme le chlorure de lithium et acclre la raction en agissant favorablement
la fois sur les termes entropique et enthalpique contrairement la rgle habituel-
le de compensation. I1a naturellement t montr que cette acclration nest pas
une consquence de laugmentation de viscosit du milieu, qui se rvle au
contraire tre un facteur dfavorable.
Cette tude montre donc le caractre structurant du glucose (il augmente lef-
fet hydrophobe) par rapport au ribose et apporte un support nouveau au modle
dhydratation spcifique des sucres. Se liant de manire privilgie au rseau
ttracoordonn de leau liquide, le glucose maintient cette structure par liaison
Additif Aucun Mthanol Glucose Saccharose P-Cyclodextrine
~~
Molarit - (SO %) 1 M 2 M 3 M 1 M 2 M (sature)
lo5 k, 28,5 8,s 34,0 45,O 61,3 44,9 74,9 4O,2
(M-I s-I)
Tableau 11.2 Influence dadditifs sur la constante de vitesse du second ordre de la raction
(11.7) 25C dans leau. Daprs A. Lubineau, H. Bienaym, Y. Queneau et
M.C. Scherrmann, New J. Chern., 18 (1994) (publi avec laimable autorisation de
Gauthier-Villars ; O 1994 Gauthier-Villars).
Rfrences 197
hydrogne cooprative et favorise les interactions entre les molcules lipophiles
limitant ainsi les contacts dfavorables avec leau structure. Cela pourrait expli-
quer le comportement favorable du glucose (par rapport au ribose) dans la stabi-
lisation de protines comme lovalbumine contre la dnaturation thermique.
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CHAPITRE 12
Acides sialiques et
oligosaccharides sialyls
12.1 TAT NATUREL
Les acides sialiques naturelsrl sont des drivs de lacide 5-amino-3,5-
didoxy-D-glycru-D-galactu-nonulosonique 12.1. On remplace ce nom encom-
brant par << acide neuraminique . Le plus commun est lacide N-actylneurami-
nique 12.2, dont la configuration est facile mmoriser, car, en reprsentation
Fischer, 12.3, il se prsente comme un produit de condensation aldolique de la
N-actylmannosamine (2-actamido-2-doxy-D-mannose) et de lacide pyru-
vique. Cest du driv 12.2 quil sagit lorsquon emploie les mots << acide sia-
lique >> sans autre prcision. I1existe ltat libre ou glycosid dans la conforma-
tion L - 2C,, qui permet une disposition quatoriale de la chane latrale trois
carbones. Le dessin 12.2 est celui de lanomre stable p du sucre libre, qui asso-
cie un hydroxyle anomrique axial des substituants non anomriques tous qua-
toriaux. Le spectre de rayons X de cet anomre p cristallis confirme cette
conformation et nous apprend en plus que la chane latCrale a la conformation zig-
zag plan, avec les deux hydroxyles en 7 et 8 en disposition trans. Cette confor-
mation L - 2C, est galement indique en solution aqueuse par le spectre de RMN
du proton, qui dpend un peu du pH puisquil y a une fonction dissociable. En
solution aqueuse, au pH 7.0, les signaux de certains protons des anomres a et p
sont bien spars (Tableau 12.1) et le rapport des concentrations p : a est de 93 :7.
Les glycosides naturels de lacide sialique ont tous la configuration anomrique
a, tandis que la forme dactivation naturelle (voir le paragraphe 12.4) a la confi-
guration p.
Anomre H - 3ax H- 3eq NAc
P
a
1,827 2,208 2,050
1,621 2,730 2,030
Tableau 12.1 Signaux RMN de certains protons de Neu5Ac en solution aqueuse (pH 7,O).
Daprs J . Haverkamp, H. Van Halbeek, L. Dorland, J .F.G. Vliegenthart, R. Pfeil et
R. Schauer, EUK J. Biochern., 122 (1982) 305-31 1.
Etat naturel 199
Neu 5 Ac (12.2)
Neu 4,5 Ac2
Neu 5,8 AC,
Neu 5,9 Ac,
Neu 4, 5, 9 AC,
Neu 5, 7, 9 Ac,
Neu 5, 8, 9 Ac,
Neu 5, 7, 8, 9 Ac,
Neu 5 Ac 9 Lac
Neu 4, 5 Ac, 9 Lac
Neu 5 Ac 8 Me
Neu 5,9 Ac, 8 Me
Neu 5 Ac 9 P
Neu 5 Gc
Neu 4 Ac 5 Gc
Neu 7 Ac 5 Gc
Neu 9 Ac 5 Gc
Neu 7,9 Ac, 5 Gc
Neu 8,9 Ac2 5 Gc
Neu 7,8,9 Ac, 5 Gc
Neu 5 Gc 8 Me
Neu 9 Ac 5 Gc 8 Me
Neu 5 Gc 8s
Neu 5 (COCH,OAc)
Neu 2 en 5 Ac (12.4)
Tableau 12.2 Drivs naturels de lacide neuraminique.
On rencontre deux types de drivs sialiques dans le monde vivant : des rsi-
dus a-sialopyranosides, situs dans limmense majorit des cas en position termi-
nale non rductrice de chanes oligosaccharidiques, et des produits polycondenss
G polysialosides . On traitera ceux-ci plus spcialement en fin de chapitre. Dans
les oligosaccharides sialyls solidaires des surfaces cellulaires, la position pri-
phrique de lacide sialique entrane sa participation de nombreux phnomnes
de reconnaissance : attachement denzymes, hormones, toxines, lectines, bactries
et virus, participation au dveloppement du systme nerveux. Cest le principal
responsable de la charge ngative des cellules.
Une particularit de la configuration neuraminique, cest quon en a rencontr
ce jour au moins vingt-cinq drivs de substitution diffrents dans les glyco-
conjugus (Tableau 12.2). Sur la structure de base, on trouve les substituants ac-
tyl (Ac), glycollyl (Gc), lactyl (Lac), actoxyactyl, mthyl (Me), sulfate (S) et
phosphate (P). Leur symbole abrg utilise les trois lettres Neu, qui reprsentent
lacide neuraminique, 12.1, suivie, dun chiffre qui indique la place du substi-
tuant, sur loxygne ou lazote, et du symbole du substituant. Par exemple, laci-
de 9-O-actyl-N-glycollylneuraminique scrit Neu9AcSGc. Le dernier acide en
bas gauche du tableau 12.2, Neu2enSAc, est un produit dlimination de lhy-
droxyle anomrique, 12.4. On en rencontre des traces dans les fluides humains, et,
sous forme drive, cest un sous-produit non dsir dans certaines ractions chi-
miques. Cette diversit dexpression est particulire la configuration neurami-
nique : les autres configurations reconnues dans les glycoconjugus se manifes-
tant dune faon uniforme.
Les acides sialiques se distinguent galement des autres monosaccharides des
glycoconjugus par leur absence totale du rgne vgtai. Ce sont des productions
typiques du rgne animal, quoiquon en trouve dans quelques bactries dailleurs
pathognes pour lhomme et un protozoaire. Ils apparaissent 2 partir des chino-
dermes, toiles de mer et oursins, o lon trouve les thers mthyliques
200 Acides siaiiques et oligosaccharides siaiyls
CH,OH W c O O H OH NH2
OH
12. 1 12. 2
CO
H- C-H
I+ -OH
7
F
CH,CON-C-H
HO-C-H
It -OH
12. 3
OH OOH
cw-&
OHdCH3
12. 4
CH,OH W C W H
12. 5
NeuSAc8Me et le sulfate NeuSGcSS de la fonction alcool en C(8). Parmi les ver-
tbrs, cest chez les mammifres que lon observe la plus grande varit et il y a
des diffrences nettes entre les drivs que lon trouve chez lhomme et, par
exemple, le btail. La concentration dans la salive humaine normale est 25 pM.
On a dcrit le cas dun enfant retard mentalement qui en scrtait 10 g par jour
dans lurine, soit 1 O4 fois la normale. Les glycoprotines des scrtions normales
sont souvent riches en acide sialiques : la mucine des glandes sous-maxillaires, les
nids dhirondelles de lExtrme-Orient en contiennent 9 - 36 %, la gele qui enve-
loppe les oursins jusqu 70 %.
Lacide sialique est instable en milieu acide (voir le paragraphe l0.4.1), donc
le protocole de sparation par hydrolyse acide doit tre un compromis entre une
sparation insuffisante et une dgradation excessive. Nous avons dj donn, au
paragraphe 3.5.1, les conditions dhydrolyse pour NeuAc et les conditions, enco-
re plus modres, qui permettent de sparer sans dsactylation totale ses esters
actiques. I1existe une grande varit denzymes, les neuraminidases, qui hydro-
lysent la liaison glycosidique des sialosides. On trouve sur les catalogues des pr-
parations dorigine bactrienne, quil est commode dutiliser aprs immobilisa-
tion sur agarose. Leur action ncessite un milieu lgrement acide,
ventuellement des ions minraux (par exemple Ca++, 4 mM) et la vitesse dhy-
Prparations des acides sialiques 201
drolyse dpend des substituants sur lacide neuraminique et de la position de la
liaison sur le rsidu pnultime. A la limite, lactivit peut tre pratiquement
nulle. Le produit primaire de laction de la neuraminidase de Clostridium perfrin-
gens sur un a-sialoside est lanomre a, qui sisomrise ensuite lentement en p.
Pour terminer, il faut mentionner un sucre troitement li lacide sialique,
dans sa structure et sa filiation biologique, lacide 3-dsoxy-D-glycero-D-guluc-
to-nonulosonique 12.5, ou KDN. Cet acide a t isol lchelle du pg dune
polysialoglycoprotine des ufs de la truite arc-en-ciel. I1est localis exclusive-
ment lextrmit non rductrice des chanes polysialiques et jouerait un rle
dans lactivation des ufs des salmonids en les protgeant contre la sialidase. I1
se prsente comme un acide sialique hydrolytiquement dsamin.
12.2 PRPARATIONS DES ACIDES SIALIQUES
On trouve en France dans les piceries chinoises des prparations condition-
nes pour la confection des potages de nids dhirondelle. Elles contiennent 10 %
de leur poids dacide sialique combin, que lon peut rcuprer par hydrolyse avec
de lacide sulfurique dilu et chaud, suivie dune sparation sur une colonne
dchangeur danions. Le procd est simple, niais la matire premire est relati-
vement coteuse. Comme il y a en ce moment dans le monde une forte demande
en acides sialiques pour les recherches en biologie humaine, on a propos des pro-
cds de caractre enzymatique qui ne reposent plus sur un approvisionnement
Les mammifres fabriquent leur acide sialique par condensation aldolique du
phospho-enolpyruvate et du phosphate en 6 de la IV-actylmannosamine (Raction
( 12.1)). Une enzyme kinase catalyse la phosphorylation de la N-actylmannosa-
mine et une phosphatase catalyse la dphosphatation de lacide sialique. Ces
tapes de phosphorylation et dphosphorylation sont irrversibles, si bien que la
synthse peut tre totale mme avec de faibles concentrations de substrat. Une
variante de la raction (1 2. l ), observe chez la bactrie Neisseria meningitidis uti-
lise la N-actylmannosamine non phosphate. Cependant ce ne sont pas ces
enzymes que lon a utilises en synthse prparative, mais une aldolase micro-
bienne qui catalyse lquilibre (12.2). Cette enzyme a probablement un rle cata-
bolique dans ces organismes, mais elle fonctionne dans le sens synthtique en pr-
sence dun excs de pyruvate. Elle est commercialement accessible un prix
acceptable et son clonage a t brevet. Lenzyme immobilise sur agarose
conserve encore 80 % de son activit aprs quatre utilisations conscutives et
permet la synthse de lacide N-actylneuraminique lchelle de la vingtaine de
grammes. En raison du prix lev de la N-actylmannosamine pure, on utilise
comme produit de dpart le mlange de N-actylmannosamine et N-actylgluco-
samine obtenu par pimrisation alcaline de ce dernier sucre (dont le prix est
ngligeable). Lpimre D-glum ntant rigoureusement pas substrat, lenzyme
nutilise que la N-actylmannosamine131. Laldolase immoblise a galement per-
mis de prparer en quantit apprciable un certain nombre des acides sialiques du
tableau 12.2. Le produit de dpart est un driv 2-azido-2-doxy-P-D-munno qui
permet, en jouant sur les groupements protecteurs dobtenir des mannosamines
diversement substitues en 2, 4 et 6. Ainsi ont t prpars les acides N-actyls
NeuS,9Ac2 et NeuSAc9Lac, les acides N-glycollyls Neu5Gc et Neu9Ac5Gc et
un actate de NeuSGc, N~u~(COCH,OAC)[~]. Ces acides sont trs rpandus chez
les animaux, mais non sparables partir des sources naturelles en quantit suffi-
sante pour une tude complte. Laldolase accepte donc dautres substrats que
Man Ac, un point sur lequel nous reviendrons ci-dessous. Une autre adaptation de
la synthse enzymatique de lacide sialique utilise la N-actylglucosamine comme
substrat et un systme de deux enzymes, qui associe la sialyl aldolase une pi-
mruse. Celle-ci met en quilibre la N-actylglucosamine et son pimre manno
dans le racteur, un pH (7,O - 8,O) compatible avec le fonctionnement de laldo-
lase. Ces deux enzymes ne sont pas immobilises, mais en solution aqueuse et
sont retenues dans le racteur par une membrane semi-permable, qui laisse pas-
ser substrats et Une installation de ce type a permis la prparation de
3 3 kg dacide sialique.
Nous allons maintenant revoir le problme de la spcificit de lenzyme. I1est
instructif de revenir sur le KDN, 12.5. La sialyl aldolase le met en quilibre avec
ses deux produits de rupture aldolique, le D-mannose et le pyruvate. La conver-
sion peut tre oriente dans le sens synthtique et on peut prparer trs efficace-
ment le KDN avec cette enzyme, partir de ces deux produits trs communs,
nimporte quelle chelle161. En fait le D-mannose est au moins aussi bon substrat
que ManAc. Ceci suggre que la nature du substituant en 2 est peu importante,
pourvu quil soit axial[7] *I. Effectivement, ce principe a permis de prparer des
acides nonulosonique avec des substituants varis en 5, tels les acides 5-doxy,
12.6, 5-azido, 12.7, et 5-phnyl, 12.8. Les << mannoses dsoxygns >> en 2, 4, 5
ou 6 donnent avec un bon rendement les acides nonulosoniques 5- , 7-, 8-, ou 9-
doxy. Le sucre obtenu en supprimant la chane latrale du D-mannopyranose,
cest--dire le D-lyxopyranose, donne lacide octulosonique 12.11. Son produit de
dsoxygnation sur C(2), le 2-doxy-D-rhro-pentose est le substrat le plus simple
connu ce jour : il donne lacide 12.12 dune faon prparative.
Parmi les non-substrats nous avons not GlcNAc, mais, fait remarquable, Iaci-
de sialique des toiles de mer NeuSGcSMe, 12.9, rsiste laldolase. Le produit
Couplage chimique 203
R'
CH,OH )-* - R OOH
OH
12. 6 R=H, R= OH
12. 7 R=N,, R'=OH
12. 8 R=Ph, R'=OH
12. 9 R=NHCOCH,OH, R'=OMe
12. 10 R=NHAc, R'=H
12. 11 R=OH
12. 12 R=H
CH,OH
HO && COOH CH,OAc AcNH
OAc
12. 13 12. 14
COOMe
OAc
OH
de rupture serait un furanose et, d'ailleurs, le furanose 2-actamido-2-doxy-5-0-
mthyl-D-mannose n'est pas substrat. Cependant ni la prsence d'un hydroxyle
libre en 8 dans l'acide sialique, ni une configuration pyranose de l'hexose de rup-
ture ne sont ncessaires, car l'acide 8-doxy 12.10 est
Par contre, on observe des ractions univoques et 2 bon rendement avec des
sucres de la srie L, comme le L-mannose, qui donne l'acide nonulosonique
12.13['"1 et le L-gulose["l. L'acide 12.13 est nantiomre du KDN. Cette multi-
plicit d'observations montre qu'il est prmatur de dfinir la spcificit de l'en-
zyme, mais que d'ores et dj, elle apparat comme un remarquable outil de syn-
thse organique.
12.3 COUPLAGE CHIMIQUE
Le couplage chimique de l'acide sialique, la << sialylation N d'un sucre prsen-
te des difficults particulires[121. Comme c'est un ctose, le couplage est la
construction d'un carbone quaternaire. I1n'y a pas de substituant sur C(3), donc
pas de participation attendre de ce ct-l. Enfin les conditions des ractions de
couplage favorisent la dshydratation qui donne une version protge de l'acide
12.4, particulirement lorsque l'hydroxyle coupler est peu nuclophile. Pour
cette raison, les halognoses peractyls de style classique 12.14 (X =F, C1, Br)
donnent des rsultats rarement satisfaisants avec les sucres protgs et, le plus
204 Acides sialiques et oligosaccharides sialgls
SPh
OAc
OAc
12. 15
\,OR
CH,OAc 2 . A C I Y H ?
OAc
OAc
+OR
UK
12.16 R=SPh, R= COCMe,, R= CH,CH,SiMe,
12.17 R=H, R= COCMe,, R = CH,CH,SiMe,
12.18 R=H, R=Bz, R= CH,CH,Br
Me
I
C
I I I
N +
I
12. 19
souvent, des mlanges anomriques, en rendement global moins que moyen. On
a propos comme solution lintroduction dun substituant quatorial temporaire
sur C(3). I1 peut fonctionner soit par participation, soit par blocage strique de la
face p. Cest dans cet esprit quon a prpar dabord comme ractif sialylant un
bromure analogue 12.15, mais avec protection des fonctions alcool par des ben-
zyles. Ce ractif a permis[I2] la sialylation dalcools secondaires avec de bons ren-
dements. La voie daccs la plus simple un ractif de ce genre semble tre Iad-
dition du chlorure de phnylsulfnyle, PhSC1, sur le peractate de lester
mthylique de lacide olfinique 12.4, qui donne le ractif 12.15. Celui-ci se
condense sur la position 3 dun lactoside partiellement protg pour donner 12.16
avec 70 % de rendement. On obtient 12.17 par dsulfuration avec le tributylstan-
En fait, on a montr rcemment que lactivation directe de thioglycosides de
lacide sialique donnait des rendements satisfaisants avec les hydroxyles secon-
daires. Ainsi le mlange anomrique des mthyl thioglycosides protgs de laci-
nanel31 1141 1151.
Couplage enzymatique 205
de sialique, en prsence du promoteur N-iodosuccinimide - CF,SO,H se conden-
se sur O(3) du galactose (a : 59 % ; : 10 %)[I6]. On a enfin propos le mthyl
xanthate[I7], prpar suivant la raction ( 12.3). Ce ractif sialylant est activ par
additions successives de triflate dargent et de MeSBr, prcurseurs du promoteur
CF,SO, - SMe. Avec 2 quivalents de xanthate et un lactoside libre sur les posi-
tions 2, 3 et 4, on obtient 12.18 avec un rendement lev (p : 1 %) L i s] . Dans ces
couplages[161, L i le solvant contient toujours une proportion leve dactonitrile
(pur si possible) et on pense que la formation intermdiaire dun nitrilium axial
12.19 favorise lintroduction a de loxygne.
(12.3)
+ KSCSOEt -
12.4 COUPLAGE ENZYMATIQUE
La forme active naturelle de lacide sialique est le cc nuclotide-sucre D CMP-
NeuSAc 12.20 que les cellules fabriquent partir de cytidine-triphosphate CTP en
prsence dune synthtase (cytidine 5-monophosphosialic acid synthtase) selon
la raction (12.4). Parmi les ractions dactivation de sucres, celle-ci est remar-
quable plusieurs points de vue : lenzyme a comme substrat le sucre non phos-
12.20
phoryl ; le nuclotide sucre est un phosphodiester au lieu dun pyrophosphate
(voir le paragraphe 10.4), la raction est irrversible et la liaison est P. Lenzyme
synthtase est isolable partir de cervelle de veau achete dans une boucherie[*l
Lenzyme de E. coli a t clone et surexprime dans une souche de E. coli, dont
elle reprsente 10 % des protines solubles[19] [20]. Elle admet comme substrat les
acides neuraminiques modifis, Neu5Gc et Neu5,9Ac2 et, avec une efficacit
moindre, KDN. La raction (12.4) consomme une quantit stoechiomtrique de
CTP, produit rare et couteux. On part donc du nuclotide phosphate commun cyti-
dine monophosphate, qui est phosphoryl deux fois, selon les ractions (12.5) et
(1 2.6). La premire phosphorylation, avec ATP, est catalyse par lenzyme
nucloside monosphosphate kinase. En raison du prix de ATP, il faut la coupler
avec une raction de rgnration de ATP qui est la raction traditionnelle de la
biochimie, (1 2.7), catalyse par lenzyme pyruvate kinase. La phosphorylation de
CDP en CTP est possible directement par le phosphoenolpyruvate et la pyruvate
kinase. En plus des deux kinases et de la synthtase, on utilise une pyrophospha-
tase inorganique pour hydrolyser le pyrophosphate form dans la raction (12.4)
et la rendre irrversible. On immobilise sparment les quatre enzymes sur aga-
rose et on mlange les gels, en suspension dans une solution aqueuse au pH 7,5
dans le racteur. Ce systme, aliment en cytidine monophosphate, acide sialique
et phosphoenolpyruvate et en prsence de quantits catalytiques d ATP, fabrique
le nuclotide sucre que lon peut extraire du milieu, aprs sparation des gels par
filtration. La figure 12.1 schmatise les ractions enzymatiques couples dans le
racteur. On observe les rendements suivants12] : CMP-Neu5Ac : 60 % ; CMP-
Neu5Gc : 80 % ; CMP - Neu5,9Ac2 : 52 % : CMP-KDN : 26 %.
(12.5) CMP + ATP - ADP + CDP
(12.6) CDP + phosphonolpyruvate - CTP + pyruvate
(12.7) ADP + phosphonolpyruvate - ATP + pyruvate
Ltape suivante est le couplage sur le sucre accepteur, qui a lieu avec libra-
tion de CMP, catalyse par une siczlyltransfevase, prsente selon le mode de la
biochimie sur la figure 12.2. Les sialyltransfrases introduisent une unit sialyl
sous la forme a-D-pyranosyl sur un sucre en situation terminale non rductrice
dans un oligosaccharide. Les exemples que nous donnerons ci-dessous mettront
en vidence la nature de leur spcificit.
La plus commune introduit le rsidu a-D-sialopyranosyl sur la position pri-
maire du galactose dans le mthyl P-D-galactopyranoside, le mthyl P-lactoside
et la N-actyl-lactosamine libre ou en position terminale non rductrice dans un
oligosaccharide. Elle est abondante dans le foie de porc, disponible en boucherie.
Sous forme immobilise, elle a permis de prparer le ttrasaccharide glycoside
12.21a, dont lenchanement est frquent dans les glycoprotines[211. Les trois
couplages osidiques de 12.21a ont t raliss de trois faons diffrentes, le pre-
Couplage enzymatique 207
Neu5Ac PP7"4
% CMPNeuS Ac
Pyruvate
Phosphoenolpyruvate
CDP
CMP
Phosphoenolpyruvate Phosphoenolpyruvate
Pyruvate A=-;.
Figure 12.1 Synthse enzymatique de CMPNeuSAc avec rgnration des cofacteurs :
NK : nuclotide monophosphate kinase ; PK : pyruvate kinase ; S : synthtase.
CMP Neu5Ac
CMP NeuSAc-a -(2-x)-G
Figure 12.2 Sialylation enzymatique avec la sialyltransfrase ST.
mier, sur le mannose, par un procd de chimie organique (avec AgCF,SO,), le
second avec la galactosyltransfrase, le troisime avec la sialyltransfrase (46 76).
Cette enzyme admet galement comme substrat le nuclotide CMP-Neu5,9Ac7.
Le transfert sur la lactosamine donne le trisaccharide 12.21b (I 15 mg ; 57 %), qi i
fait partie du rcepteur du virus de la grippe B sur les globules I1 aurait
t trs compliqu de prparer par les voies chimiques traditionnelles un trisac-
charide actyl spcifiquement sur un seul de ses onze hydroxyles.
COOH
AcHN
HO
I
HO HO
OH
HO
OMe
12. 21a
COOH
ACO*
AcHN HO HO h 0 & O H
OH NHAC
12. 21b
COOH
OH
N H A C
AcHN OH
HO
12. 22
Toutefois, il semble que la majorit des oligosaccharides sialyls impliqus
dans les phnomnes de reconnaissance prsentent la liaison glycosidique
Neu5Ac-a- (2-3)-Gal. On peut isoler du foie de porc sans difficults excessives
une transfrase utilisable pour ce couplage, dont le substrat naturel est Iencha-
nement p-D-Gal-( 1 4 3)-D-GalNXc. Cctte transfrase catalyse aussi le couplage
sur le motif P-D-Gal-(l + 3)-D-GlcNAc et a permis de prparer 140 mg du tri-
saccharide 12.22, lpitope << CA 50 >> dun antigne exprim abondamment en
association avec certaines
On observera que lassociation des schmas ractionnels des figures 12.1 et
12.2 forme un cycle de sialylation complet, qui en principe doit fonctionner avec
seulement des quantits catalytiques de CMP. Toutefois une activit enzymatique
parasite de la synthtase isole de la cervelle de veau, impossible liminer
conomiquement, empche le fonctionnement de ce cycle, qui a t ralis avec
la synthtase obtenue par clonage. Les deux transfrases, a - (2 + 6) et
a - (2 + 3) ont galement t obtenues par clonage[23] [241.
Acides polysialiques 209
12.5 ACIDES POLYSIALIQUES[251
12.5.1 Introduction
Ce paragraphe suppose connues quelques notions sur les glycoprotines et
limmunochimie qui ne seront dveloppes que dans la suite de louvrage, aux
chapitres 13 et 15. Le lecteur pourra sy reporter. Nous prfrons cette prsenta-
tion un ordre plus logique et condenser en un seul chapitre le plus grand nombre
de manifestations de la personnalit remarquable des acides sialiques.
Les configurations de la liaison glycosidique dans les polymres polyconden-
ss naturels de lacide sialique sont a - (2 + S), a - (2 + 9). Exceptionnellement,
dans lacide polysialique dune toile de mer, la liaison interglycosidique fait
intervenir la fonction alcool primaire du rsidu glycollyl dans Ne~5GcSMe~~~l .
Des oligomres 12.23 (n =2,. . .5) ont t isols et caractriss partir dun gan-
glioside prsent dans une toile de mer.
12.5.2 Acides polysialiques microbiens
Les mningocoques, Neisseria meningitidis, se rpartissent en dix srogroupes
distincts. Les groupes B et C sont responsables de SO % des mningites observes,
qui sont une cause majeure de mortalit chez les enfants et chez les adultes. Les
capsules de ces bactries contiennent des acides polysialiques linaires. Dans le
groupe C, la liaison entre les rsidus sialiques qui peuvent tre actyls partielle-
ment ou non actyls est a - (2 + 9). Cette structure 12.24 est un immunogne
puissant ; le polysaccharide du groupe C est un vaccin autoris. Cependant, il ny
a pas de rponse chez les enfants de moins de deux ans, peut tre parce qu cet
ge, ils expriment une structure polysialique analogue dans leurs tissus.
O-CH,-CO
12. 23
L Jn
12. 24
L Jn
12. 25
Les bactries du groupe B prsentent sur leur surface lacide polysialique a -
(2 + 8) 12.25. I1est trs peu immunogne et il ny a pas de vaccin connu contre
cette forme de la maladie. On attribue ceci la prsence dun acide polysialique
trs voisin dans le cerveau humain, si bien que cette structure nest pas reconnue
comme trangre par le systme immunitaire (voir le paragraphe 12.5.3). De fait
on connat un anticorps monoclonal commun ces deux acides polysialiques
(raction croise). La bactrie Escherichia coli KI, galement cause de mningi-
te, produit aussi un acide polysialique a - (2 -+8), ventuellement actyl. Enfin,
on observe ce mme polymre la surface de certaines cellules tumorales.
On a examin de prs lacide polysialique a - (2 + 8) avec lespoir dobtenir
un bon immunogne par modification. I1se combine un anticorps du srum de
cheval, et, de la manire traditionnelle, on a cherch reconnatre lpitope en
essayant dinhiber la combinaison par des oligosaccharides. Normalement un pi-
tope oligosaccharidique correspond au plus 5-6 rsidus monosaccharidiques, or
loligomre 12.25 (n =5 ) nest pas actif, il faut au tnoins n =10 pour observer une
inhibition. On pense tre en presence dun pitope conformationnel, cest--dire
que ce nest pas seulement la squence oligosaccharidique qui compte, mais la
forme gnrale. Celle de Ipitope de lacide polysialique a - (2 -+8) serait une
hlice trs allonge, avec 8- 12 rsidus par tour.
On trouve, dans un bactriophage, une enzyme endosialidase a - (2 -+8), qui
hydrolyse avec un degr de spcificit lev les liaisons internes de cet acide poly-
sialique. Le site de clivage doit tre flanqu par au moins cinq rsidus sialosides
du ct terminal non rducteur et trois de lautre. On retrouve le site de recon-
naissance exceptionnellement tendu dj observ dans la raction immunochi-
mique.
12.5.3 La molcule dadhsion des cellules nerveuses, N - CAM
Ladhsion entre cellules joue un rle majeur dans le dveloppement embryon-
naire du systme nerveux. Plutt que dimpliquer un grand nombre de molcules
dadhsion, on pense plutt maintenant quil y en a seulement un petit groupe de
spcificits diffrentes et que la varit de phnomnes observs repose sur une
coordination de leur expression avec des vnements cytoplasmiques. Les mol-
cules N - CAM sont les mieux connues[.
Acides polysialiques 211
Figure 12.3 Reprsentation schmatique de la molcule N-CAM,8,. Les points noirs cor-
respondent des sites de glycosidation. Extrait de C. M. Regan, Znt. J. Bioch., 23 (1991)
5 13-523 (publie avec laimable autorisation dElsevier Science Ltd, Kidlington, UK).
La figure 12.3 donne une reprsentation schmatique[27] de lune dentre elles,
N - CAM,,,, lindice 180 rappelant la masse molculaire, voisine de 180 000, de
la charpente polypeptidique. Cest une protine transmembrannaire compose
dune seule chane polypeptidique de 1072 acides amins. Partant de lextrmit
NH,, qui baigne dans le milieu extrieur, il y a dabord une rgion denviron 400
rsidus acides amins. I1y a dans cette rgion une chane latrale oligosacchari-
dique, probablement lie lasparagine 203, qui porte Ipitope ttrasaccharidique
sulfat dit L2/HNK -1, 12.26, qui nest pas sialyl. Cest dans cette rgion aussi
que se trouvent les domaines impliqus dans ladhsion entre cellules, selon un
mcanisme dit <<homophile . Ceci signifie quune molcule N - CAM sur une
cellule sattache une molcule N - CAM sur une autre cellule. Cette adhsion
ne fait donc pas intervenir dacide sialique. Poursuivant la chane vers lextrmi-
t carboxylique, on rencontre de nouvelles chanes glycosyles au niveau des
asparagines 404, 430 et 459. Celles-ci se terminent par des chanes polysialiques,
avec la liaison a - (2 4 8). A peu prs au rsidu 692, la charpente polypeptidique
aborde la traverse de la membranne cellulaire, dont elle sort vers le rsidu 710,
et prolonge une longue racine de 300 rsidus environ dans le cytoplasme.
HS03-3-GlcUAQ -( 1 -3)-Gal-P -( 1 -4)-GlcNAc-P -( 1 -3)-Gal
12. 26
La quantit totale dacide sialique varie au cours du dveloppement embryon-
naire, entre les limites <10 % et 30 %. Des observations ont montr que ces
chanes dacide polysialique sopposent ladhsion. Donc leur biosynthse appa-
rat comme un mcanisme de rgulation des proprits adhsives de la rgion du
polypeptide termine par NH,. II est concevable, en termes trs gnraux, quun
dveloppement correct du systme nerveux implique parfois adhsion, parfois
rpulsion. Le mcanisme exact nest pas connu avec certitude. I1peut y avoir un
simple effet mcanique. La croissance de la chane polysialique augmente beau-
coup le volume de la molcule N-CAM et ceci pourrait maintenir la surface dune
cellule voisine trop loin pour quil y ait interaction. Ce volume est en partie la
consquence dune forte hydratation. I1pourrait y avoir rpulsion par les charges
ngatives des carboxylates ou encapsulation des sites dadhsion par des chanes
polysialiques, ou modifications corifor~iiationnelles.
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CHAPITRE 13
Glycoconjugus
13.1 GLY COLIPIDES
13.1.1 Dfinitions, isolement
Cest lassociation dun oligosaccharide et dune molcule lipidique] [*I. On
se bornera deux familles dont la dfinition ne pose aucun problme. Dans le fype
sphingosine, Ioligosaccharide est li de faon glycosidique la fonction alcool
primaire dun aminoalcool longue chane. Le plus communment observ est la
sphingosine 13.1. Dans les glycolipides, la fonction amine est engage dans une
liaison amide avec un rsidu acyle driv dun acide gras longue chane. I1 y a
une grande varit de drivs de ce type, auxquels on donne le nom collectif de
cramide (Cer). Lautre famille importante de glycolipides appartient au type gly-
crol. Loligosaccharide est li par liaison glycosidique la fonction alcool pri-
maire dune molcule de glycrol estrifie par deux molcules dacides gras,
13.2.
Suivant les poids respectifs de la partie lipophile et de la partie hydrophile dans
le glycolipide, le protocole dextraction sera variable. On procde gnralement
une premire extraction des tissus avec un mlange chloroforme-mthanol ( 2: 1)
et on extrait nouveau le rsidu en introduisant de leau (5 %) dans le mlange de
solvants. Le relargage avec du chlorure de sodium spare une phase chlorofor-
mique qui contient les glycolipides neutres, dune phase aqueuse-mthanolique
qui contient les glycolipides acides ou trs hydrophiles. On poursuit avec les tech-
niques habituelles de sparation, chromatographie sur gel, dialyse, chromatogra-
phie sur colonne de dithylaminothylcellulose, c.c.m. Une mthanolyse acide
spare la sphingosine et les acides gras de loligosaccharide. La caractrisation de
loligosaccharide utilise les principes gnraux dcrits au chapitre 9. Le lecteur se
rappellera quon a avantage analyser directement le glycolipide par f.a.b.
OH
CH,OH
CHOCOR
CH,OCOR
I
13. 1 13. 2
214 Glycoconjugus
globo
isoglobo
lacto
nolucto
ganglio
muco
gala
GalNAc-P-( 1+3)-Gal-a-( 1-+4)-Gal-P-( 1 +4)-Glc-P-( 1 -Cer)
GalNAc-P-( l-+3)-Gal-a-( 1+3)-Gal-P-( 1 +4)-Glc-P-( 1-Cer)
Gal-P-( 1 +3)-GlcNAc-P-( I -+3)-Gal-P-( 1 +4)-Glc-P-( 1 -Cer)
Gal-P-( 1 +4)-GlcNAc-P-( 1 -+3)-Gal-P-( 1+4)-Glc-P-( 1 +Cer)
Ga@-( 1 -+3)-GalNAc-P-( 1 +4)-Gal-P-( 1 +4)-Glc-B-( 1 +Cer)
Gal-P-( 1 +3)-Gal-P-( 1+4)-Gal-P-( 1 +4)-Glc-f-( 1 +Cer)
Gal-a-( 1 +4)-Gal-a-( 1 -+4)-Gal-P-( 1 +4)-Gal-B-( 1 +Cer)
Tableau 13.1 Familles de glycosphingolipides neutres*. (* Tous les rsidus sont des pyra-
noses de la srie D.)
13.1.2 Glycolipides animaux
Les glycolipides neutres des tissus animaux (sans acide sialique) sont presque
exclusivement des glycosphingolipides. Le classement en familles repose sur
lenchanement des rsidus monosaccharidiques attachs la cramide. Lunit
directement lie la cramide est dans la grande majorit des cas P-D-Glcp et
exceptionnellement P-D-Galp. Le rsidu suivant est toujours P-D-Galp si bien que
les familles les plus nombreuses de glycosphingolipides commencent par une
unit P-lactosyl. Le tableau 13.1 nest gure mmorisable, mais il peut donner au
lecteur une ide de la varit des structures que lon rencontre.
On rencontre ces glycolipides ttrasaccharidiques, tels quels, ou avec des
chanes de sucres raccourcies ou prolonges dans divers tissus de lhomme et des
animaux suprieurs : le trihexoside globo 13.3 est le glycolipide le plus important
des globules rouges humains ; le ttrahexoside lacto se prolonge en support des
pitopes des substances de groupes sanguins, ABH, Lewis, Ii et Pi ; la famille
muco porte les pitopes des groupes A et H. I1 est remarquable dobserver des gly-
colipides dont la charpente peut compter jusqu 20 units rptitives de N-ac-
tyllactosamine lies lune lautre par une liaison p ( I + 3), selon la formule
schmatise 13.4.
13.1.3 Gangliosides
Cest le nom donn aux glycolipides sialyls. Le support de lacide sialique est
gnralement un glycosphingolipide de la famille ganglio. La sparation de ces
glycolipides et leur fractionnement en drivs mono-, di-, trisialiques, etc., repo-
se sur leur caractre acide et utilise des colonnes dchangeurs danions (DEAE-
cellulose). Les acides sialiques prsents sont NeuSAc, Neu5Gc et leurs actates.
Lhmatoside 13.5 est prsent dans le cerveau et les rythrocytes du chien. On le
rencontre aussi sur les rythrocytes du cheval et du buf, o NeuSAc est rempla-
c respectivement par NeuSGc et Neu4AcSGc. Le ganglioside le plus important
du cerveau, appel GM1, est un produit de sialylation 13.6 du glycolipide ganglio
du tableau 13.1 avec une liaison glycosidique a-(2+3). On observe aussi des
Glycolipides 215
Gal a-( 1-4)-Gal-P -( 1 -4)-Glcf -( 1-Cer)
13. 3
-( 1 -4)-GlcNAc-P( 1 3)-Gai$ -( 1 -4)-Glc-P -( 1 -Cer)
I
13. 4
NeuSAca-(2-3)-Gal$ -( 1 -4)-Glc-P-( 1-Cer)
13. 5
Gal$-( 1-3)-GalNAc-p-( 1-4)-Gal$ -( 1-4)-Glc-P-( 1-Cer)
t
Neu5Aca-(2-3)
13. 6
NeuSAc-a-(2-8)-NeuSAca-(2-3)-
13. 7
Neu5Ac-a-(2-8)-NeuSAc-a-(2-8)-NeuSAc-a-(2-3)-
13. 8
squences polysialyles avec liaison inter-sialosidique a-(2+8) 13.7 et 13.8,
accroches en 3 du mme galactose non terminal du glycolipide ganglio, et des
prolongements sialiques et disialiques analogues partir de la position 3 du galac-
tose terminal non rducteur. Pour conclure, aussi bien dans la famille des glycos-
phingolipides que dans celles des gangliosides, il y a une trs grande varit de
structures des oligosaccharides construit sur les chanes de base. Signalons la pr-
sence de L-fucose sur certains et desters sulfuriques.
Dans la synthse des gangliosides, le couplage de lunit rductrice est prati-
qu sur un prcurseur azido de la cramide, par la mthode au trichloractimida-
te (voir le paragraphe 10.3.2).
13.1.4 Glycolipides vgtaux
Nous nous bornerons mentionner les galactosylglycrols 13.9 et 13.10.
216 Glycoconjugus
Gala-( 1 -6)-Gal- p-( 1-0- H,
i
(TOC0
Gal-$-( 1 -O-CH,
I
CHOCOR
CH,OCOR CH,OCOR
13. 9 13. 10
13.2 GLYCOPROTINES[3]
13.2.1 Gnralits
On appelle glycoprotines des protines lies de faon convalente des oligo-
saccharides. I1y a un grand nombre de preuves que ces branchements oligosac-
charidiques sont lorigine de proprits biologiques importantes ; le lecteur en
trouvera de nombreux exemples dans les chapitres suivants. Les glycoprotines
sont omniprsentes dans le monde vivant, soit comme composs solubles, soit
lies aux parois cellulaires, soit intrieures aux cellules, soit dans les fluides extra-
cellulaires. Pour leur extraction et leur purification, on utilise les mthodes de la
chimie des protines, mais la prsence des sucres permet dutiliser un outil sup-
plmentaire dune grande puissance, la chromatographie daffinit sur une lectine
immobilise. Les lectines (voir le chapitre 15) sont des protines, animales ou
vgtales, mais facilement accessibles lorsquelles viennent du rgne vgtal, qui
se combinent rversiblement des monosaccharides ou des squences doligo-
saccharides. A chacune correspond un ligand sucre spcifique. Une colonne de
lectine immobilise retient spcifiquement la glycoprotine laquelle est attach
ce ligand. Clution a lieu avec une solution du ligand spcifique (une petite mol-
cule) qui dplace la glycoprotine des sites de reconnaissance de la lectine.
Six sucres participent larchitecture des oligosaccharides des protines ani-
males totalement labores : galactose, mannose, N-actylglucosamine N-actyl-
galactosamine et acide sialique, de la srie D, et fucose, de la srie L, tous sous
forme pyranosique. I1y a deux types principaux de jonction au polypeptide, qui
peuvent dailleurs parfois coexister dans la mme glycoprotine. Dans tous les
cas, on cherche sparer loligosaccharide aussi peu dgrad que possible et on
analyse sa squence par les mthodes exposes au chapitre 9. La squence conti-
gu la jonction sappelle le << cur B de loligosaccharide. Le concept de cur13]
trouve sa justification dans lobservation quil ny a quun trs petit nombre de
curs. Chacun se prsente comme un << invariant >> au sein dune grande multipli-
cit de formes.
13.2.2 Protines glycosides
Loligosaccharide est engag son extrmit << rductrice >> dans une liaison
glycosidique avec un des rsidus chane latrale hydroxyle du polypeptide. Ce
Glycoprotines 217
.CO,
+
+ +
CH,OH
CH3
13. 11 13. 12 13. 13 13. 14
I
13. 15
sont ceux qui drivent de la L-srine, 13.11, de la L-thronine, 13.12, de la
L-hydroxylysine, 13.13, et de la L-hydroxyproline, 3.14. La formule 13.15 repr-
sente un type de jonction extraordinairement rpandu, sur la L-srine (R =H) ou
la L-thronine (R =CH,). Dans certaines glycoprotines, lunit P-D-Gal est rem-
place par P-D-GalNAc. A partir de ce disaccharide, des prolongements et des
ramifications conduisent une trs grande varit de structures. Pour les dtermi-
ner, il faut dtacher loligosaccharide du polypeptide. Lhydrolyse catalyse par
une enzyme protolytique large spcificit, la pronase, peut ventuellement lib-
rer un glycopeptide, cest--dire loligosaccharide encore li lacide amin de
jonction, mais parfois loligosaccharide exerce une fonction de protection contre
la protolyse enzymatique. Le mode de clivage le plus caractristique des glyco-
sides des rsidus L-srine et L-thronine est llimination p en milieu alcalin.
Cest une consquence attendue de la labilit du proton a du carbonyle amidique,
qui est dcroch par la base B (Fig. 13.1 .a). Malheureusement, on ne sarrte pas
l. Le sucre dont la fonction rductrice a t libre est en quilibre avec le tauto-
mre aldhydique, qui prsente lui aussi un proton a acide, et il se produit une
nouvelle limination p (Fig. 13.1.b), et ainsi de suite. Cest le (( pelage , que lon
tche dviter en oprant en prsence de NaBH,, avec lespoir que la rduction du
carbonyle aldhydique sera plus rapide que llimination P.
La synthse du disaccharide peptide correspondant 13.15 pose le problme de
la glycosidation cis 1,2. On utilise le disaccharide activ groupement azido non
participant 13.16, qui est condens sur une srine ou une thronine protge sur
lazote et le carboxyle, avec le mlange promoteur AgC10,/Ag,C03. Pour rdui-
218 Glycoconjugus
CHO
I
CHO
C-OH
+ Il
9
(CHOH),
I
H
Figure 13.1 Elimination p ( a) et << pelage D ( b) des glycosides de la srine et de la
thronine.
13. 16
Arg-Ser- Ala-Gly- Ala-GI y
GalNAccl-
13. 17
re le groupement azido en amino avant la N-actylation, on utilise H,S. On peut
aussi prolonger du cot du polypeptide avec les mthodes habituelles de la syn-
thse pepti di q~e'~] et obtenir, par exemple, 13.17.
13.2.3 Protines glycosaminides
Le sucre la jonction est la N-actylglucosamine et la structure partielle est
13.18, le sucre tant substitu comme on le verra un peu plus loin. On peut dcri-
re 13.18 soit comme une amide de glycosylamine drive de l'acide aspartique
Glycoprotines 219
CH,OCOCF,
H - NH-CO NHCOCF,
AcNH NHCOCF,
13. 18 13. 19
Man-p-( 1-4)-GlcNAc$ -( 1-4)-GlcNAc-p-( 1-Asn)
I
Mana-( 1-3)
13. 20
soit, de faon prfre, comme un produit de glycosylation de lasparagine. Une
mthode pour dtacher loligosaccharide pas trop dgrad est la trifluoractoly-
qui consiste maintenir 2 j 100 dans un mlange danhydride et dacide
trifluoractique, 50: 1. Coligosaccharide est perfiuoractyl et leffet inducteur
des radicaux fluoractyles stabilise les liaisons interglycosidiques en dstabilisant
lintermdiaire proton de lhydrolyse, formule partielle 13.19. Cependant, on
coupe ainsi la liaison avec lasparagine. Un traitement rectificatif ultrieur du pro-
duit de coupure est ncessaire pour hydrolyser les groupements esters et amides
de lacide trifluoractique et r-actyler lazote. Le cur des branchements sur
lasparagine est un pentasaccharide 13.20. On trouve du ct rducteur deux rsi-
dus N-actylglucosamine enchans comme dans le chitobiose, puis un rsidu
p-mannose. Sur ce p-mannose sont attachs en 3 et 6 deux rsidus a-mannose.
Selon la structure des prolongations et branchements sur ce cur 13.20, on dis-
tingue deux sous-familles principales. Dans la premire, on ne rencontre que des
rsidus a-mannose. Dans la seconde, le pentasaccharide est substitu par un
nombre variable de rsidus de N-actyllactosamine, Gal-O-( I -+4)-GlcNAc, avec
en plus, des rsidus fucose, acide sialique, etc.
Nous avons dj abord les problmes synthtiques relatifs ces oligosaccha-
rides. Nous avons donn, propos des glycosylamines, la prparation des gluco-
sides de lasparagine au paragraphe 3.6.2 et, comme exemple de synthse, par les
mthodes enzymatiques, la synthse dune squence priphrique, 12.20.
220 Glycoconjugus
13.2.4 Problmes conformationnels
Dans les protines glycosaminides, loligosaccharide sattache une asparagi-
ne solidaire dun rsidu tripeptidique particulier, Asn-X-Ser (Thr). Mais tous les
enchanements de ce type ne sont pas ncessairement glycosids. I1 y a dautres
conditions apparemment lies la structure secondaire de la chane polypepti-
dique. En gnral, dans les protines, celle-ci adopte une conformation prfre
o apparaissent des formes gomtriques varies : hlices, plis, tournants,
pingles cheveux et boucles. Les squences de rsidus damino-acides au voisi-
nage des sites glycosyls sont le plus souvent celles que lon observe dans certains
tournants des chanes de protine (Fig. 13.2) et les autres sont au voisinage des
boucles. Ce sont, en fait, des rgions plus accessibles du polypeptide, ce qui pou-
rait expliquer la fois la glycosylation prfrentielle et le rle important de loli-
gosaccharide, trs expos, en diverses circonstances. Ce que nous venons de dire
sapplique aussi aux protines glycosides.
En ce qui concerne la conformation de loligo~accharide[~], qui a certainement
une importance capitale dans les problmes de reconnaissance, un certain nombre
de phnomnes significatifs se manifestent. Les rsultats proviennent de mesures
de RMN avec des techniques modernes perfectionnes, en particulier par la mesu-
re de leffet Overhauser, de calculs de modlisation et de la comparaison avec la
structure ltat solide du trisaccharide 13.21. Les valeurs des angles didres <p et
y, qui caractrisent la liaison interglycosidique (voir le paragraphe 9.2) sont
conformes aux prdictions de la thorie de leffet exoanomrique. La glycosida-
O
Y21
\
0-0-0-0-0
f .sr
do--
Jfo~:-o-o-o \
P
0-0-0-0-0-0-0
145
Figure 13.2 Reprsentation partielle de la sous-unit 0 de ihormonocorticogonadotropine,
glycoside aux rsidus acides amins 121, 127, 132 et 138. Daprs J . Montreuil, Adv.
Curbohydr Chem. Biochem., 37 (1980) 157-223 (publi avec laimable autorisation de
Academic Press).
Glycoprotines 221
Mancl-( 1-3)-Man-P-( 1-4)-GlcNAc
13. 21
13. 22 13. 23
Figure 13.3 Conformations au point de ramification du cur des glycosaminides des pro-
tines A : GlcNAc ; B : Ma@( 1 4) ; C : Manx-( 1 -6) ; D : Mana-( 1 -3) ; E : GlcNAc-
P-(1 4).
Gal$ -( 1-4)-GlcNAc-p-( 1 -2)-Mana-( 1-6)
Min@-( 1 -4)-GlcNAc$ -( 1 -4)-GlcNAc
I
Gal-P-( 1-4)-GlcNAcQ -( 1-2)-Mana-( 1-3)
13. 24
tion sur les fonctions alcool primaire introduit de la flexibilit, cause des possi-
bilits de rotation autour de la liaison C(5)-C(6). Ainsi le ttrasaccharide 13.22
(Fig. 13.3) qui reprsente le point de branchement du cur des oligosaccharides
lis lasparagine, adopte-t-il la conformation esquisse, o lon voit lunit Man-
a-( 1-6) (C) se replier sur GlcNAc. Dans certains oligosaccharides, dits << bissec-
ts , il y a une substitution supplmentaire sur O(4) du mannose central. Dans le
modle 13.23, on observe que le rsidu C se retourne alors vers le nouveau sub-
stituant GlcNAc (E).
On a pu prciser aux rayons X la structure solide complte dune immuno-
globuline IgG, (voir le paragraphe 15.2) cristallise. Nous nous bornerons
esquisser la topologie de lensemble constitu par les deux chanes lourdes et les
deux molcules de dcasaccharide 13.24 lies un rsidu asparagine que porte
chacune delles. La figure 13.4 montre que les dcasaccharides se trouvent sur la
face interne du croissant form par les deux chanes lourdes et se font vis--vis,
mais sans contact. Le disque B reprsente le point de branchement, Man-0-
222 Glycoconjugus
Figure 13.4 Disposition du dcasaccharide 13.24
lintrieur des deux chanes F, de Iimmuno-
globuline IgG,. A* : chitobiose de jonction ; B,
C, D identiques la figure 13.3 : Man-B-(1-4) ;
Man-a-(I-6) ; Man-a-( 1-3).
(1+4). Le disque A* correspond au chitobiose accroch lasparagine. Lintrt
considrable de la conformation vient du rle dissymtrique jou par les deux tri-
saccharides identiques lis en 3 et 6 du mannose. La chane flexible lie en 6 par
lintermdiaire du mannose C repose sur une partie hydrophobe du polypeptide
(riche en rsidus phnylalanine, valine, tyrosine). Lautre trisaccharide li par lin-
termdiaire du mannose D, au contraire, baigne dans leau de la cavit centrale et,
apparemment, se comporte comme hydrophile. Le lecteur a dj vu au chapitre 11
les ambiguits des notions hydrophile-hydrophobe lorsquil sagit dun sucre.
13.3 GLYCOSAMINOGLYCANES ET PROTOGLYCANES
13.3.1 Donnes gnrales
Les macromolcules traites dans ce paragraphe sont essentiellement extracel-
Maires. En association avec les fibres de collagne (une glycoprotine), elles
contribuent la nature, la structure et la rigidit des tissus. Ce sont des asso-
ciations sucres-protine comme les glycoprotines, mais elles sen distinguent de
faon assez caractristique pour quon les range dans une classe particulire. La
proportion de protine est gnralement faible et peut descendre jusqu 2 %,
alors quil y a 50-95 % de sucre. Cependant, ce point de vue l, les limites entre
les deux catgories de glycoconjugus sont floues. Ce qui est plus caractristique,
ce sont les longues chanes linaires des protoglycanes, construites par la rpti-
tion dun motif disaccharidique priodique. Parfois des altrations en apparence
alatoires restreignent la priodicit au sens strict, mais elle reste clairement dis-
cernable sous les modification^[^]. On appelle << glycosaminoglycane )) le poly-
saccharide et << protoglycane )) le conjugu entier. Comme les glycoprotines, les
protoglycanes comportent soit des liaisons glycosaminides impliquant la L-apa-
ragine, soit des liaisons glycosides sur loxygne alcoolique de la L-srine ou de
la L-thronine. La chane priodique, ou pseudopriodique, ne saccroche pas
directement sur la protine, mais il y a un oligosaccharide de cur, comme dans
les glycoprotines.
Glycosaminoglycanes et protoglycanes 223
La liaison sur la L-asparagine a lieu par l'intermdiaire d'un oligosaccharide
riche en mannose, qui est probablement le mme, 13.20, que dans les glycopro-
tines. Par contre, la structure de cur la plus frquente sur L-srine et L-thro-
nine est tout fait diffrente, 13.25. Le lecteur remarquera les units P-D-xylo-
pyranosyle et P-D-glucuronopyranosyle. La longue chane est lie l'oxygne
O(4) de l'unit P-D-glucuronopyranosyle. On reviendra sur ces structures au cha-
pitre 17, propos de l'hparine, qui appartient cette famille.
13.3.2 Chanes priodiques ou quasipriodiques
L'acide hyaluronique a la structure fondamentale 13.26. I1peut y avoir plu-
sieurs milliers d'units disaccharidiques. Dans la chondrotine 13.27, la N-actyl-
glucosamine est remplace par la N-actylgalactosamine. I1y a deux drivs natu-
rels sulfats de la chondrotine. Dans l'un, l'unit disaccharidique est sulfate sur
O(4) et, dans l'autre, sur O(6) du rsidu N-actylgalactosamine, 13.28 et 13.29.
Les chanes sont considrablement plus courtes que dans l'acide hyaluronique
(10-60 priodes). Dans le dermatane-sulfate, on retrouve le motif de base 13.28
OH
n
13. 26
13. 27 R=R'=H
13. 28 R= SO,H, R= H
13. 29 R=H, R'=SO,H
224 Glycoconjugus
OS0,H
CH,OH
lK#b NHA(
OH
13.30
$H; moHq
NHAc
n
OH
13. 31
mais un certain nombre de molcules de rsidus D-glucuroniques ont subi une
inversion de configuration sur C(5), ce qui donne un rsidu L-iduronique et un
motif de base 13.30. La fraction transforme varie de quelques units 100 %. La
structure de glycosaminoglucane de l'hparine est expose au chapitre 17. Le
kratane-sulfate est exceptionnel. Le motif 13.31 ne comporte pas de fonction
acide carboxylique, la liaison interne est p( 1-4) et la liaison avec le reste de la
chane p( 1+3). La condensation est faible (10 ou bien 30-50 motifs). Ce poly-
saccharide est structuralement une chane poly-(N-actyllactosamine) comme
nous en avons dj rencontres aux paragraphes 13.1 et 13.2, sulfate sur O(6) de
GlcNAc.
'
RFRENCES
[ 11I. M. Morisson, c< The Glycolipids and Gangliosides D dans Carbohydrate Chemistry,
[2] Y.T. Li et S. C. Li, Adv. Carbohydr. Chem. Biochem., 40 (1982) 235-244.
[3] J . Montreuil, Adit Carbohydr. Chem. Biochem ;, 37 (1980) 157-223.
[4] H. Paulsen,Angew. Chem. Znt. Ed. Eng., 29 (1990) 823-839.
[SI A. M. Jansson, M. Meldal et K. Bock, Tetrahedron Lett., 48 (1 990) 6987-6990.
[6] B. Nilsson et S. Svensson, Carbohydr: Res., 72 (1979) 183-190.
[7] J.F. Kennedy et C.A. White, << The Glycosaminoglycans and Proteoglycans >> dans
Carbohydrate Chemistry, sous la direction de J . E Kennedy, Clarendon Press, Oxford,
1988, chapitre 8.
sous la direction de J . E Kennedy, Clarendon Press, Oxford, 1988, chapitre 5.
CHAPITRE 14
Structure de quelques complexes
sucre-protine cristalliss
14.1 GNRALITS. LE COMPLEXE ABP-L-ARABINOSE
14.1.1 Protines et sucres
Nous rencontrons dans ce livre quatre types de protines qui sassocient aux
sucres : les enzymes de mtabolisme des sucres, les lectines, les anticorps spci-
fiques et les protines de transport. On a pu cristalliser un nombre important de
ces protines et les examiner aux rayons X pour dterminer leur structure tertiai-
re. Compte tenu de leur masse molculaire leve, lanalyse des spectres de dif-
fraction est un travail difficile. Cependant, on est guid par la connaissance de la
structure primaire, cest--dire lenchanement peptidique, obtenue par les proc-
ds chimiques. Le pouvoir de rsolution des mthodes est en moyenne de 2,5 A.
I1 est meilleur dans les exemples que nous donnerons. La connaissance de la struc-
ture de la protine ne donne que des prsomptions sur celle du complexe, dautant
plus quil peut y avoir des modifications de conformation la complexation. On
a pu obtenir ltat cristallis certains complexes protine-sucre et dcrire leur
structure avec des degrs de rsolution comparables. En gnral le site rcepteur
sur la protine est une cavit allonge, plus ou moins profonde, mais le reste de la
protine semble minemment variable suivant sa fonction biologique[]. On
connat et on a tudi des combinaisons cristallines appartenant aux quatre types
de protines mentionns ci-dessus. Dans le domaine des enzymes, mentionnons le
complexe entre le poly-N-actylchitobiose et le lysozyme, enzyme capable dhy-
drolyser les parois bactriennes, qui a six sites rcepteurs, et entre une maltodex-
trine et la takaamylase, enzyme qui hydrolyse lamylose et peut sassocier une
unit hexasaccharidique. Ces tudes ont une importance capitale pour llucida-
tion du mcanisme de lhydrolyse enzymatique. Cependant, comme il sagit dar-
ticles dj anciens que le lecteur non cristallographe aura quelques difficults
jauger, nous prfrons renvoyer aux commentaires qui en ont t faits]. Cesprit
de ce chapitre est de dcrire avec prcision lenvironnement immdiat du sucre et
cest en fonction de ceci que nous avons choisi les exemples. Nous recomman-
dons au lecteur dexaminer les vues stroscopiques et en couleur des mmoires
originaux.
14.1.2 Le complexe protine ABP-L-arabinose
Un groupe amricain[l] r2] a considr avec normment dattention un com-
plexe du L-arabinose avec une protine dite ABP (arabinose-binding protein), qui
a pu tre dcrit avec une rsolution de 1,7 A. Les auteurs pensent que les modes
de liaison quils ont observs ont une valeur gnrale. Cest pourquoi nous com-
menceront ce chapitre par un expos simplifi de leurs conclusions, bien que le L-
arabinose ne participe pas des phnomnes de reconnaissance chez les animaux
suprieurs.
Une famille assez tendue de protines, localises dans lespace priplasmique
des bactries gram-ngatives, complexent certaines petites molcules et permet-
tent leurs transport actif travers la paroi cellulaire ou le dclenchement de
mouvements chimio-tactiques. Chacune de ces fonctions implique une interaction
ultrieure avec des protines membranaires spcifiques. Les molcules
transportes sont des acides amins, le sulfate, des mono- et oligosaccharides.
Ainsi la protine ABP (arabinose-binding-protein) complexe le L-arabinose
(Kd 0,98 x et les
maltodextrines. Cest dans cette srie quon trouve les liaisons les plus fortes
observables entre sucre et protine. La vitesse de dissociation (k.i 1,5 s-) indique
la limite suprieure de la vitesse du transport ionique.
M), la protine MBP complexe le maltose (Kd 35 x
Les liaisons hydrogne
Elles jouent un rle trs important dans le complexe ABP-L-arabinose : tous
les groupements polaires sont utiliss. Dune faon gnrale, les hydroxyles sont
les groupements fonctionnels caractristiques des sucres, ils ont des orientations
fixes, sont bien exposs et peuvent collaborer chacun 3 liaisons hydrogne, une
comme donneur, deux comme accepteur. Les variations de langle didre H-C-O-H
permettent ltablissement de la structure la plus favorable. La participation la
complexation des liaisons hydrogne fortement directives expliquent la spcifici-
t de linteraction. On rencontre trois types de systme de liaison hydrogne.
Dans les liaisons hydrogne coopratives, lhydroxyle du sucre est simultan-
ment donneur et accepteur selon le schma :
NH + OH -+ O
Les atomes NH et O font partie du site de complexation.
Dans les liaisons bidentes, deux hydroxyles contigus, en disposition quato-
riale-quatoriale ou axiale-quatoriale, ferment un cycle sur deux atomes dun
groupement polaire plan, selon la disposition 14.1.
La formation des liaisons coopratives et bidentes cre un rseau dense de
liaisons hydrogne entre le sucre et les rcepteurs essentiels. Ces liaisons sont
fortes. La distance moyenne entre les atomes lourds, donneur-accepteur, est
2,82 (0,15) A, et langle moyen 164 (9). Les rsidus groupes plans polaires,
Asn, Asp, Glu, Gln, Arg et His sont particulirement reprsents dans les sites
rcepteurs (la lysine nest utilise quune fois). Ces groupes sont lis rigidement
Gnralits. Le complexe ABP-L-arabinose 227
I
H,N---.
/--
NH
Glu 14
Figure 14.1 Schma du rseau de liaisons hydrogne dans le complexe L-arabinose ABP.
Daprs F. A. Quiocho, Pure Appl. Chem., 61 (1985) 1293-1306 (publi avec laimable
autorisation de International Union of Pure and Applied Chemistry).
et leur adaptation finale au sucre ne peut tre ralise que par un changement
conformationnel de la protine.
Une proprit commune de toutes ces protines priplasmiques est leur capa-
cit complexer les anomres a et p sans diffrence visible. Ceci sexplique faci-
lement par le schma des liaisons hydrogne. Lalignement trs prcis de lun des
oxygnes de laspartate lui permet daccepter une liaison hydrogne aussi bien de
lanomre a que de lanomre p, sans aucune perturbation du reste du rseau,
14.2. La figure 14.1 donne un schma topologique du rseau de liaisons hydrog-
ne. La conformation du sucre est reste normale, 4C,, dans le complexe.
Forces de Van der Waals
Tous les atomes lourds du L-arabinose sont en contact de Van der Waals
(d <4 A) avec ceux de la protine-hte. I1y a peu prs 54 contacts en tout,
nombre inhabituellement lev, d au rseau dense de liaisons hydrognes. Celui-
ci entrane une grande compacit. La face <<hydrophobe >> a du pyranose, o
dominent les liaisons C-H, repose en partie sur le noyau indolique du tryptopha-
Asn 232
\p- H\
O
/ I
' ' \ - OH
NH,
HO
/ O
H
14. 1
O Asp 90
H
O
14. 2
O
I l
H
' H I l
H O
H
Try 16
14. 3 14. 4
ne 16. Sur la formule 14.3, cet indole est reprsent par la trace de son plan de
symtrie horizontal.
14.2 COMPLEXE DU MALTOSE ET DE LA PROTINE
DE TRANSPORT DE LA MALTODEXTRINE
14.2.1 Description de la protine complexante
Elle comporte un enchanement de 370 acides amins, correspondant une
masse molculaire de 40 622. Sa forme est celle d'un ellipsode, de dimensions
65 x 40 x 30 A, et elle est compose de deux domaines globulaires spars par un
sillon profond. La figure 14.2 donne un mode de reprsentation de cette protine.
Complexe du maltose et de la protine de transport de la maltodextrine 229
Figure 14.2 Reprsentation conventionnelle de la protine de transport des malto-
dextrines. On reprsente les plis p par des flches. Lordre de succession des plis p dans la
chane polypeptidique est donne par des lettres et celui des hlices par des chiffres
romains. On a indiqu le site du maltose, au centre, par -. Extrait de J . C. Spurlino,
G. Y. Lu et F. A. Quiocho, J. Bi d. Chem., 266 (1991) 5202-5219 (publi avec les aimables
autorisations de 1American Society for Biochemistry and Molecular Biology et des
auteurs).
On la dcrit comme << une protine a l p >> o 40 % des acides amins sont engags
dans des hlices a, 20 % dans des plis p et le reste forme des boucles ou des
pelotes. On remarquera sur la figure 14.2 les deux domaines ingaux, appels N
( gauche) et C ( droite), selon quils contiennent lextrmit amine ou lextr-
mit carboxylique de la chane peptidique, spars par le sillon, ici peu prs ver-
tical. La chane, partir de lextrmit amine, serpente dabord dans le domaine
N, puis traverse le sillon pour sengager dans le domaine C au niveau des rsidus
110-113, retraverse le sillon en sens inverse au niveau des rsidus 268-271 et,
aprs stre dveloppe dans le domaine N, retourne dfinitivement au niveau des
rsidus 3 11-3 15 dans le domaine C o elle se termine. I1y a donc trois tripeptides
qui assurent la connexion entre les domaines et constituent en mme temps le fond
de la crevasse. Ils apparaissent sur la figure 14.2 comme trois brins peu prs
horizontaux au centre. Ces peptides de jonction sont aussi la charnire qui permet
aux deux domaines de se rabattre lun sur lautre comme les coquilles dune
hutre. En effet, alors que le systme CO-NH est rigide, il y a des possibilits de
rotation autour du carbone situ entre NH et CO, 14.4.
14.2.2 Complexation des maltodextrines
La protine de transport que nous venons de dcrire complexe toute une famil-
le de maltodextrines. Les paramtres thermodynamiques et cintiques sont ras-
230 Stnicture de quelques complexes sucre-protine cristalliss
sembls dans le tableau 14.1. I1est remarquable qu'il y ait si peu de variations du
maltose aux cyclodextrines. Les trois premiers complexes du tableau ont t obte-
nus l'tat cristallis.
Maltose
Maltotriose
Maltottraose
Maltopentaose
Maltohexaose
Maltoheptaose
a-Cyclodextrine*
P-C yclodextrine
35
16
23
50
34
16
40
18
90
8,4
110
46
Tableau 14.1 Complexes des maltodextrines avec la protine de transport du maltose.
D'aprs E A. Quiocho, Pure Appl. Chern., 61 (1989) 1293-1306 (publi avec l'aimable
autorisation de l'International Union of Pure and Applied Chemistry). Kd constante de dis-
sociation, k , et k.+ vitesses de complexation et dcomplexation. (* : voir le paragraphe
11.3.)
14.2.3 Mode de complexation du maltose
Au niveau actuel d'laboration, la conformation du maltose complex parat
trs voisine de celle du maltose libre solide (Fig. 14.3)L3]. La conformation de
chaque cycle est D-4C,. Les angles didres sont O(5') - C(1') - O(1') - C(4) =
+116" et C(1') - O(1') - C(4) - C(3) =+122". L'angle glycosidique C(1') - O(1')
- C(4') vaut 120". I1y a une liaison hydrogne intermolculaire O(3) - H - O(2').
Le rcepteur des maltodextrines ressemble une crevasse dont les parois (hau-
teur 18 A) sont les domaines N et C et dont le fond (surface 9 x 18 A2) est consti-
tu par les trois segments peptidiques de jonction et l'hlice XIII. Les dimensions
de cette cavit sont suffisantes pour lui permettre d'hberger des cyclodextrines
(voir le paragraphe 11.3), comme la P-cyclodextrine (diamtre 15,4 A, hauteur
7,9 Lors de la complexation du maltose au fond de la crevasse, les deux
parois se rapprochent l'une de l'autre en pivotant autour de la charnire constitue
par les peptides de jonction L51. Ce mouvement correspond une rotation de 35".
Le maltose est enseveli, au point que, de sa surface (545,5 A2), il n'y a plus que
3,6 % qui reste accessible au solvant. La complexation utilise des rsidus de cha-
cune des parois et du fond de la crevasse.
Liaisons hydrogne
Comme avec le L-arabinose, 1' attachement est essentiellement d des liaisons
hydrogne. Celles-ci sont presque exclusivement accroches aux groupes polaires
Complexe du maltose et de la protine de transport de la maltodextrine 23 1
Figure 14.3 Structure du maltose ltat solide. Daprs G. A. Jeffrey et M. Sundaralin-
gam, Adv. Curbohydr: Chem. Biochem., 38 (1981) 417-529 (publi avec laimable autori-
sation de 1Academic Press). Dans le texte, les numros 3 et 4 correspondent au rsidu
rducteur et les numros 1 et 5 au rsidu non rducteur.
de chanes latrales. On observe ici une diffrence avec le mode de complexation
du sulfate, ltat anionique, qui lui sassocie essentiellement aux NH des liaisons
peptidiques. Lassociation du maltose a lieu au moyen de 16 liaisons hydrogne,
11 correspondant une liaison directe avec les rsidus acides-amins et 5 proba-
blement par lintermdiaire de molcules deau (Fig. 14.4). Les seuls oxygnes
non lis sont les oxygnes cycliques et interglycosidiques. Neuf des liaisons
hydrogne directes stablissent entre lhydroxyle neutre du sucre et des rsidus
chargs : carboxylate, ammonium, guanidinium. On retrouve enfin la disposition
prcise dun rsidu aspartate, qui permet la complexation aussi bien du maltose a
que du maltose p avec une gale efficacit.
Contacts Van der Waals
I1 y a environ 65 contacts de Van der Waals (<4A). La plupart doivent tre
considrs comme des consquences indirectes des liaisons hydrogne, qui ten-
dent crer ldifice le plus compact possible. Presque toute la face a de lunit
Figure 14.4 Rseau de liaisons hydrogne du maltose complex. Onna pas reprsent les
liaisons par lintermdiaire dune molcule deau. Daprs J . C. Spuriino, G. Y. Lu et
F. A. Quiocho, J. Biol. Chem., 266 (1991) 5002-5219 (publi avec les aimables autorisa-
tions de 1American Society for Biochemistry and Molecular Biology et des auteurs).
terminale non rductrice repose sur le noyau indole du tryptophane 340. La liai-
son glycosidique et une partie de la face a de lunit rductrice reposent sur le
noyau phnyle de la tyrosine 155. Ces faces a des glucopyranoses constituant le
maltose appeles parfois << faces hydrophobes >> prsentent une srie de liaison
C-H sur leur surface.
14.3 LE COMPLEXE DUNE LECTINE
ET DUN OCTASACCHARIDE BIANTENNAIREr6]
Cette lectine est 1 Isolectine I , isole des graines de Lathyrus Ochrus. Elle
prsente deux sous-units identiques, composes chacune dune chane lgre de
52 acides amins et dune chane lourde de 181 acides amins. Chaque sous-unit
contient un ion Ca++et un ion Mn++, ncessaires lactivit. Les ligands exami-
ns sont des fragments du dodcasaccharide-asparagine 14.5 prsent dans la lac-
totransfrine humaine : le mannose, le trisaccharide 234 et loctasaccharide
23456456. On a pu obtenir les complexes ltat cristallis. On soccupera ici
du complexe avec loctasaccharide, dont on a pu prparer un cristal de 0,3 mm et
donner la structure avec une rsolution de 2,3 A. Nous nous bornerons des repr-
sentations schmatiques, topologiquement correctes de la molcule, laccent por-
tant ici essentiellement sur la nature des liaisons. Le lecteur qui dsire plus de pr-
cision est invit examiner les vues stroscopiques colores des articles
I71.
Le complexe dune lectine et dun octasaccharide biantennaire 233
6 5 4
NeuSAc-a-(2-6)-Gal-P-( 1-4)- GlcNAc-B-( 1-2)- Man-a-( 1-3)
I 2 1
1
3 Man-P-( I -4)-GlcNAc-[3-( 1 -4)-GlcNAc-P-( 1-Am)
t
Fucc-(l-h)
t
NeuSAc-a-(2-6)-Gal-P-( 1-4)- GlcNAc-P-(l-2)- Mana-( 1-6)
6 5 4 1
14. 5
(4 (b)
Figure 14.5 Disposition (a) des molcules doctasacchariclc CI CIL\ cations Ca++Mn++sur
la lectine de Lathyrus Ochru., et dtail (b) montrant les units libres et complexes (Adapt
de Y. Bourne, P. Roug et C. Cambillau, J. Bi d. Chem., 1992, 267, p. 197).
La figure 14.5.a donne la disposition relative de chaque sous-unit de la lecti-
ne, des deux molcules doctasaccharide et des deux paires Ca++, Mn++. Les
sucres sont voisins des extrmits du grand axe de ldifice. En 14.5.b, on a repr-
sent plus en dtail la disposition du sucre au voisinage de la lectine. La com-
plexation change peu la configuration de celle-ci, sauf quune boucle peptidique,
208-21 1 se rapproche de 0,s A de Man-4. Ce mannose occupe une poche locali-
se prs de Ca++, dite << le site de liaison du monosaccharide .
Loctosaccharide complex la forme dun S tir (Fig. 14.6). Cinq des angles
didres 0 et cp (voir le paragraphe 10.2) correspondent des minimum dnergie
selon les ides reues sur leffet exoanomrique. La liaison a (1-3) entre Man-3
et Man-4 correspond un Dans le complexe du fragment plus
simple 234, la conformation est trs diffrente, ce qui montre quun petit fragment
nest pas ncessairement un bon modle[*].
La complexation est assure par une multiplicit de liaisons polaires (<3 A).
I1y a 14 liaisons hydrogne directes entre les oxygnes ou azotes du sucre et les
groupements polaires des rsidus acides amins et 7 ralises par lintermdiaire
dune molcule deau. De plus, 14 molcules deau sont impliques dans des
Figure 14.6 Reprsentation schmatique de loctosaccharide complex. Adapt de
A. Imberty, M. M. Delage, Y. Bourne, C. Cambillau et S. Perez, Glycoconj. J., 8 (1991)
456-483. La flche indique lemplacement du phnyle enserr comme par une pince par
entre Man-4 et GlcNAc-5.
contacts indirects, entre le sucre et la lectine, ou entre les units conscutives du
sucre (Tableau 14.2). Dans ce dernier cas le rsultat est une stabilisation de la
conformation. A ceci contribuent en plus 18 liaisons hydrogne, dont une directe
et 17 indirectes. En raison de la spcificit leve des lectines, on doit sattendre
ce que la complexation fasse intervenir les liaisons hydrogne, qui ont un carac-
Liaisons directes Liaisons directes
Man 4 o(3) Gly-99 GlcNAc 5 0(5) Asn-39
O(4) ASP-8 1 0(5) Ala-209
O(4) Gly-99 GlcNAc 5 O(6) Tyr- 124
O(5) Asn- 125 0(3) Tyr-77
O(6) Gly-208 Gal-6 0(2) Tyr 77
O(6) Ala-209
Glu-2 1 O
O(6) Asp-8 1 N(2) Glu-21 0
Liaisons par lintermdiaire dune molcule deau
GlcNAc 5 N(2) Asn 39
Glc NAc 5 O(4) Tyr-77
Val-79
Thre-122
Arg- 135
Gal-6 O( 5) Tyr- 124
Gly-98
Tableau 14.2 Description sommaire des liaisons hydrogne entre loctasaccharide et la lec-
tine de Luthyrus Ochrus.
Rfrences 235
tre directif. La nouveaut importante dans cette dtermination de structure est
lobservation de la participation massive de molcules deau la complexation.
Le complexe est galement stabilis par 68 contacts de Van der Waals (<4 A),
dont 27 avec des rsidus aromatiques. On observe principalement ces contacts
entre les cycles aromatiques et les atomes C(5) - C(6) des sucres. Les units Man-4
et GlcNAc-5 interagissent de part et dautre des deux faces du cycle phnyle de
Phe-123, quelles enserrent comme une pince (Fig. 14.6). Les deux units qui les
sparent, Man-3 et Man-4, sont exposes au solvant. De mme, GlcNAc-2 et
Gal-6 sont compltement exposs au solvant. Ceci apparat plus clairement la
figure 14.5.b.
RFRENCES
[il E A. Quiocho, Annu. Rev. Biochem., 55 (1985) 287-315.
[2] E A. Quiocho, PureAppZ. Chem., 61 (1989) 1293-1306.
[3] G. A. Jeffrey et M. Sundaralingam, Adv. Curbohydl: Chem. Biochem., 38 (1981) 417-
[4] J . C. Spurlino, G. Y. Lu et E A. Quiocho, J. Bi d. Chem., 266 (1991) 5202-5219.
[5] A. J . Sharff, L. R. Rodseth, J . C. Spurlino et E A. Quiocho, Biochemistry, 31 (1992)
[6] Y. Bourne, P. Roug et C. Cambillau, J. Biol. Chem., 267 (1992) 197-203.
[7] Y. Bourne, P. Roug et C. Cambillau, J. Biol. Chem., 265 (1990) 18161-18165.
[8] A. Imberty, M. M. Delage, Y. Bourne, C. Cambillau et S. Perez, GZycoconj. J., 8 (1991)
529.
10657-10663.
456-483.
CHAPITRE 15
Antignes et anticorps. Lectines
15.1 AVERTISSEMENT
Les lecteurs qui ont reu une formation biochimique ou mdicale reconnatront
de suite que les paragraphes 15.2 et 15.3 ne se situent pas au mme niveau que les
autres exposs de ce livre. Cet expos sommaire de limmunochimie est destin
avant tout aux lecteurs qui ont suivi le cursus traditionnel en chimie organique.
Actuellement une forte proportion des chimistes travaillant sur les sucres ont des
relations plus ou moins troites avec des groupes dimmunologistes. Dans cet
ouvrage mme, des termes tels que antigne, anticorps, anticorps monoclonal,
dterminant, pitope, etc., se rencontrent en diffrents paragraphes ; il est fait ga-
lement rfrence certaines mthodes analytiques de limmunologie quantitative.
La lecture des paragraphes 15.2 et 15.3 doit donner au chimiste organicien une
vision plus concrte de ces notions et de ces expriences. On espre ainsi faciliter
le dialogue avec les immunologistes.
15.2 ANTIGNES ET ANTICORPS
Lintroduction dune macromolcule trangre dans la circulation sanguine
dun vertbr suprieur (souris, lapin, cobaye, mouton, chvre.. .) peut ventuel-
lement susciter lapparition dans le srum dune collection de protines particu-
lires. Cest le plus souvent un mlange htrogne de molcules doues dune
proprit commune : elles se combinent de faon non covalente la macromol-
cule qui a entran leur apparition. On dit alors que cette macromolcule sest
comporte comme un antigne dans les circonstances exactes de lexprience et
les protines ractives apparues dans le srum sappellent anticorps. I1faut prci-
ser le protocole de linjection - molcule homogne, ou lie un support macro-
molculaire, ou solidaire dune paroi cellulaire - et lanimal inject - lapin,
souris, etc. - car une mme molcule peut tre antignique ou non suivant les
conditions de son administration.
Ltude de la structure des anticorps a t possible grce une technique, dcri-
te plus loin dans ce chapitre, qui a permis dobtenir des protines homognes. Ces
protines appartiennent la famille gnrale des globulines, les immunoglobulines I,.
Elles se rpartissent en classe et sous-classes sur lesquelles nous reviendrons.
Antignes et anticorps 237
U
446 - Y OOH COOH
Figure 15.1 Reprsentation schmatique dune immunoglobuline.
Elles sont toutes bties selon le mme plan gnral, donn la figure 15.1 dans le
cas particulier dune << ig A . I1y a deux sous-units identiques relies par des
ponts disulfure. Chaque sous-unit comprend deux chanes polypeptidiques
relies par un pont disulfure, une chane dite lourde H (M =50 000) et une cha-
ne dite lgre L (M =23 000). I1y a deux domaines dans la chane lgre. Un
domaine variable VL, dont la squence varie en fonction de la spcificit antig-
nique de limmunoglobuline, stend sur environ la moiti de la chane, du ct
N amino . Lautre domaine, du ct e carboxylique >> CL, est constant. Au sein du
domaine variable VL, on rencontre des rgions c hypervariables D reprsentes
par des traits noirs. Ces rgions hypervariables sont dans les boucles qui relient
les plis p. La conformation particulire du polypeptide dans le domaine variable
a pour effet de ramener ces rgions hypervariables au voisinage les unes des
autres et une extrmit de ldifice. De mme, la chane lourde comporte un
domaine variable VH avec des rgions hypervariables rejetes vers lextrmit,
qui stend sur le quart de sa longueur, puis un premier domaine constant CH1
jusqu une rgion charnire qui contient deux ponts disulfure qui la relient
lautre chane lourde. I1y a ensuite deux autres domaines constants CH2 et CH3.
A ce niveau se trouve un oligosaccharide. Une protolyse limite au voisinage de
la charnire spare deux fragments identiques appels Fab, composs chacun
dune chane L et des domaines VH et CH1 de la chane H. Ce fragment Fab
conserve les proprits dassociation avec les antignes. Lautre moiti de la cha-
ne H, appele Fc, est la partie responsable de certaines proprits immunolo-
giques de limmunoglobuline, autres que la combinaison directe avec lantigne.
Ce sont les rgions hypervariables des chanes L et H, voisines les unes des
autres dans les immunoglobulines qui constituent le site dinteraction - le site de
reconnaissance - de lantigne par lanticorps. On voit quil y a deux sites de
reconnaissance dans limmunoglobuline de la figure 15.1. I1y a cinq classes de
chanes H, p, 6, y, E et a, auxquelles correspondent cinq classes dimmunoglobu-
lines, IgM, IgD, IgG, IgE et IgA. I1y a deux types de chanes lgres, K et h.
Certaines immunoglobulines sont circulantes ; certaines jouent le rle de rcep-
teur la surface de certaines cellules sanguines ; ou prsentent ces deux compor-
tements.
Ladaptation de lanticorps lantigne est parfois dune trs grande finesse, ce
qui peut laisser perplexe, car lanimal immunis sest trouv confront des
molcules qui lui taient totalement trangres et, mme parfois, des substances
organiques sans aucun rapport avec le monde vivant. Tout se passe comme sil
stait agi pour lui dun costume coup par un excellent tailleur mais ce nest
quune illusion, car le costume est un costume de confection, achet dans un
magasin o il y a en stock lo8 patrons diffrents et o il est procd ultrieure-
ment des retouches. Nous allons dcrire sommairement le mcanisme. Les cel-
lules responsables de la fabrication des anticorps anti-sucres, auxquels nous nous
intressons principalement sont les lymphocytes B. I1y a au moins I Os clones de
lymphocytes B, cest--dire de populations, chacune trs restreinte, issues dune
seule cellule mre. Les cellules dun clone dtermin, qui sont toutes identiques,
fabriquent et expriment leur surface une immunoglobuline caractristique. Les
cellules dun autre clone fabriquent une immunoglobuline diffrente. I1y a donc
autant dimmunoglobulines que de clones distincts, soit environ 1 Os. Lantigne
se fixe sur les sites rcepteurs des Ig pour lesquels il a la plus grande affinit. Cette
fixation dclenche la prolifration des lymphocytes porteurs de ces immunoglo-
bulines reconnues, et lexpansion du clone bien au-del de ses dimensions primi-
tives. Les lymphocytes B ainsi activs se diffrencient en plasmocytes, qui scr-
tent dans le srum limmunoglobuline complmentaire de lantigne, et en
cellules mmoire. Enfin, un taux de mutation lev de ces cellules a pour cons-
quence une amlioration constante de la finesse de ladaptation antigne-anti-
corps. Ce sont les << retouches D dont nous laisserons de ct le mcanisme.
Dans ces conditions, on comprendra aisment lhtrognit des anticorps.
Sur les IO8 molcules dimmunoglobulines entre lesquelles lantigne doit faire
un choix, il y en aura en gnral plus dune dont la complmentarit lantigne
sera suffisante pour dclencher la prolifration du lymphocyte porteur. Aussi le
srum de lanimal immunis contient-il un mlange danticorps issus de clones
diffrents, que lon appelle un anticorps polyclonal. Ses proprits varient avec le
temps et le calendrier des injections. I1 peut y avoir encore une autre source dh-
trognit, cest la prsence de plusieurs sites antigniques chimiquement diff-
La raction immunochimique in vitro 239
rents sur la molcule dantigne. Plusieurs techniques trs fines dmontrent lh-
trognit de lanticorps polyclonal, mais la sparation des constituants mono-
clonaux en quantit suffisante pour tudier leurs proprits nest pas praticable.
La prparation des anticorps monoclonaux repose sur un autre principe. Le lecteur
reconnatra au passage que, comme dans toutes les autres branches, plus tradi-
tionnelles, de la chimie, lobtention de composs purs est source de progrs consi-
drables. Nous avons vu que limmunisation avec un antigne Ag amne la proli-
fration de clones de lymphocytes B, chacun spcialis dans la production de lun
des anticorps anti-Ag, soient X, X, X, etc. Si lon pouvait cultiver ces cellules in
vitro, des mthodes prouves permettraient de sparer ces clones.
Malheureusement il nest pas possible de cultiver les lymphocytes B in vitro. On
a tourn la difficult en utilisant les proprits dune ligne de cellules myloma-
teuses. Le mylome multiple est une maladie qui rsulte de la transformation
maligne dun clone unique de plasmocytes, dont la prolifration seffectue essen-
tiellement dans la moelle osseuse. Ces cellules synthtisent et excrtent une
immunoglobuline monoclonale. On peut les propager indfiniment par culture. En
les fusionnant avec les cellules de la population de lymphocytes activs par lan-
tigne, on obtient les hybridomes, des cellules hybrides, cultivables in vitro, et
exprimant lune des immunoglobulines X, X , X,. . . Les tapes successives de la
prparation de lanticorps monoclonal X ltat pur sont les suivantes. On immu-
nise des souris avec lantigne. On recueille les lymphocytes B en prlevant la
rate de lanimal et on les mlange avec les cellules mylomateuses dans une solu-
tion aqueuse 50 % de polythylneglycol, pH 8,O. Aprs quelques heures, on a
un mlange dhybridomes avec les deux types de cellules dorigine. Les cellules
de la rate non hybrides meurent en un ou deux jours. Quant aux cellules mylo-
mateuses, elles ont t gntiquement programmes pour quon puisse les tuer
slectivement. Ne restent que les hybridomes exprimant les immunoglobulines X,
X, X,. . . I1faut vrifier cette tape que ces cellules sont effectivement produc-
trices danticorps. La dernire tape est le clonage, technique qui permet de pr-
parer des cultures homognes, issues chacune dune seule cellule et exprimant
chacune un anticorps monoclonal dtermin.
15.3 LA RACTION IMMUNOCHIMIQUE IN VITRO
Le lecteur aura compris en lisant le paragraphe prcdent que limmunisation
dun animal pour obtenir un anticorps polyclonal et la sparation de ses consti-
tuants en units monoclonales homognes font appel des techniques apparentes
la biologie. En revanche, ltude de lassociation entre antigne et anticorps chi-
miquement dfinis in vitro est typiquement une branche de la chimie, science dont
le domaine doit recouvrir toute espce de combinaisons, mme si elles nimpli-
quent pas de liaisons covalentes. Sauf indication contraire, il ne sera plus question
dans la suite que danticorps monoclonaux.
15.3.1 Haptnes
Nous avons dcrit en termes gnraux, au paragraphe 15.1, le site rcepteur des
immunoglobulines, constitu par le rapprochement des boucles hypervariables
lextrmit des chanes L et H. Nous allons maintenant nous proccuper du site
complmentaire sur les antignes. I1peut y avoir plusieurs sites antigniques chi-
miquement diffrents (ou de conformations stables diffrentes) sur une mme
molcule dantigne et on retrouvera alors les anticorps correspondants mlangs
dans Iantisrum. On arrive ventuellement reconnatre la nature chimique des
sites dans certains cas. Cette squence particulire de lantigne sappelle un
dterminant antignique, nom quelques fois remplac dans les textes modernes
par pitope. I1peut arriver que cet pitope soit un rsidu oligosaccharidique et que
loligosaccharide libre correspondant soit disponible par ailleurs, partir dune
source naturelle ou par synthse. Cette petite molcule, ajoute une solution de
lanticorps monoclonal suscit contre la grosse molcule de lantigne, se combi-
ne rversiblement cet anticorps. I1y a plusieurs dmonstrations de cette asso-
ciation, dont lune repose sur les expriences dinhibition dcrites plus loin.
Cependant elle nest pas antignique et ne suscite pas la formation dun anticorps
quand elle est introduite dans la circulation sanguine. Pour tre antignique, une
molcule doit avoir une masse molculaire dau moins 3000 D et de prfrence
suprieure 10 000 D. I1arrive quon puisse tourner la difficult en attachant
loligosaccharide de faon covalente une macromolcule transporteuse, le plus
souvent une protine, par exemple la srumalbumine bovine. Lattachement a lieu
en utilisant les fonctions des chanes latrales des rsidus acides amins de la cha-
ne peptidique, presque toujours les fonctions amines. I1est vident que le pro-
blme a un grand nombre de solutions. Cune dentre elles consiste prparer un
glycoside 15.1 de lester mthylique de lacide 9-hydroxynonanoque qui est
transform en azoture dacyle 15.2 par des traitements successifs classiques par
lhydrazine et lacide nitreux. Ces drivs ragissent sur les amines primaires pour
donner une amide et, de cette faon Ioligosaccharide est fix selon le schma par-
15.1 R=OMe
15. 2 R=N,
15. 3
tiel 15.3. Naturellement, il y a beaucoup de chanes latrales amines dans la sru-
malbumine bovine, donc beaucoup de molcules doligosaccharide fix. I1y aura
ainsi plusieurs pitopes dun mme anticorps. Lantigne est dit multivalent.
Cette petite molcule couple un support macromolculaire pour susciter la
formation dun anticorps sappelle un haptne. La technique de fixation du hap-
tne sur un transporteur macromolculaire a permis la prparation danticorps
dirigs contre un grand nombre de structures chimiques, certaines totalement
trangres lconomie du monde vivant. Un inconvnient de cette technique,
cest quelle suscite galement la formation danticorps dirigs contre la molcu-
le transporteuse et parfois lancre daccrochage.
15.3.2 Physicochimie de la raction immunochimique
Les forces de la liaison impliques sont des attractions lectrostatiques entre
sites chargs, comme un site -NHi port par la lysine et un carboxylate, des forces
de Van der Waals et des liaisons hydrogne. On prvoit que les deux premiers
types de force, qui augmentent rapidement quand la distance diminue, seront
dautant plus efficaces que meilleure sera la complmentarit. On parle aussi din-
teractions hydrophobes, du fait quune exacte complmentarit chasse les mol-
cules deau entre les sites correspondants. Ces interactions pourraient se manifes-
ter entre les rsidus << hydrophobes , valine, leucine, phnylalanine, etc. Cette
notion, dveloppe au chapitre 11, sous-entend que la diminution de laire de
contact de ces rsidus avec leau est en elle-mme un facteur favorable. Toutes ces
interactions sont rversibles : si on introduit un complexe haptne-anticorps en
solution dans un sac dialyse, le haptne peut seul diffuser travers la paroi et
son limination de la solution intrieure au sac entrane la dissociation complte
par dplacement de lquilibre.
La raction dun site de lanticorps Ab avec une molcule de haptne H (ou de
lantigne monovalent de mme spcificit) est quilibre, avec une constante k
fonction de la temprature (15.1) et il lui correspond une variation denthalpie
libre donne par (1 5.2)
(15.1)
k12 [Ab - H]
[Ab] [HI =
A b+H A b- H
k12
( 1 5.2) AG =- RT log k
La vitesse de lassociation est toujours trs grande, k , , =lo6 - 108 mol- s-.
Comme il y un large ventail de constantes dquilibre k, gales k, , l k, , , il y a
un talement comparable des valeurs de k,,.
En fait la situation est loin dtre aussi simple : il y a deux sites de combinai-
son lantigne sur les immunoglobulines IgG, IgD et IgE, mais pour les deux
autres, il peut y avoir association de plusieurs units fondamentales Ig analogues
celle qui est esquisse la figure 15.1, si bien quil y a dix sites de combinaison
lantigne sur les IgM et deux ou quatre sur les IgA. On dit que ces anticorps
sont dca-, di- ou ttravalents. Les antignes et les conjugus haptniques peuvent
aussi tre multivalents. Par exemple, sur un antigne artificiel prpar par cou-
plage dun haptne avec une protine, il peut y avoir un site de combinaison li
chaque rsidu lysine de la molcule porteuse. Les polysaccharides bactriens,
dont ltude est une branche importante de limmunochimie, sont constitus
dunits oligosaccharidiques rptitives. I1peut y avoir jusqu 40 sites de com-
binaison. La raction entre antigne et anticorps multivalents est donc trs com-
plique et donne des produits de composition continment variable en fonction
des proportions de ractif. Elle est non stchiomtrique. Les formules (15.3) et
(15.4) nont pas un sens physicochimique rigoureux, mais dcrivent approximati-
vement une moyenne de sous-ractions.
(15.3)
(15.4) AG =- RT log k
On peut toujours calculer un chiffre k, partir des concentrations mesurables
[Ag-Ab] de lantigne libre et combin. Ces valeurs de k, comprises entre IO3 et
10 mol-, sont une mesure pratique de laffinit de lanticorps pour lantigne.
Dans ces situations de liaisons multiples on emploie la place daffinit le mot
<< avidit , pour mieux souligner le caractre empirique des mesures. La multi-
valence de lanticorps et de lantigne entrane une augmentation notable de k. On
peut le comprendre qualitativement : la rupture dune liaison sur un seul site ne
rompt pas lassociation, puisquil y a encore des liaisons en dautres sites dac-
crochage. On calcule que AG varie de -6 -11 kcal mol- et AH, de -4
- 13 kcal mol-. Lentropie dassociation est presque toujours positive.
Mme un pitope parfaitement dfini sur une molcule dantigne entrane la
formation de plusieurs anticorps monoclonaux, qui diffrent les uns des autres par
la structure du site de combinaison et laffinit. Cest trs comprhensible daprs
le mcanisme de multiplication expos au paragraphe 15.2. Ce quil faut noter
maintenant, cest que la spcificit de chacun de ces anticorps monoclonaux nest
pas rigoureuse. Elle est souvent leve, mais on peut observer aussi lassociation
avec des molcules voisines. Dans ce cas-l, la constante dassociation est plus
faible. Par exemple, un pitope oligosaccharidique peut correspondre un encha-
nement de six rsidus monosaccharidiques (hexasaccharide). Avec lantigne
monoclonal spcifique de cet enchanement, on observera encore des associa-
tions, avec constantes daffinits rapidement dcroissantes, des pentasaccharides,
ttrasaccharides, etc. obtenus en laguant un, deux rsidus monosaccharidiques,
etc. partir dune extrmit de lhexasaccharide. Par ailleurs, si la suppression,
par exemple, dun hydroxyle, en un point dtermin dun oligosaccharide par une
mthode chimique, change peu - ou ne change pas du tout - lassociation avec
lanticorps correspondant, on en conclut quil ne participe pas la liaison. Comme
lanticorps ne << voit D que le nuage lectronique frontire du haptne. on peut
imaginer des rpartitions datomes et donc une molcule radicalement diffrents
auxquels cet anticorps sassociera tout aussi bien quavec le haptne, parce quils
offrent une frontire approximativement identique la combinaison. I1y a des
exemples, mais cet aspect na pas t tudi systmatiquement. On a mis profit
lexistence de ces ractions croises dans la technique des anticorps catalytiques.
Lide fondamentale est de stabiliser ltat de transition dune raction, donc
dabaisser son nergie dactivation, en lassociant un anticorps spcifique.
Naturellement il est impossible de manipuler comme un haptne un difice hau-
tement instable comme un tat de transition. On le remplace donc par une mol-
cule stable, dont lextrieur est aussi voisin que possible de la priphrie (suppo-
se !) de ltat de transition. Les anticorps ainsi prpars acclrent les ractions
et fonctionnent comme des enzymes. On a forg pour ces immunoglobulines le
nom dabzyme. On en a prpar une cinquantaine ce jour.
La raction de prcipitation
Les chimistes organiciens connaissent bien les ractions de polycondensation
entre molcules bifonctionnelles et molcules au moins trifonctionnelles, par
exemple entre lanhydride phtalique et la glycrine. I1 se forme alors un rseau tri-
dimensionnel. Cest la mme situation lorsquon oppose un antigne multivalent
une immunoglobuline, il se produit un enchevtrement de macromolcules qui
devient rapidement insoluble dans leau. Cependant, il y a une diffrence notable
avec la polycondensation industrielle, cest que lassociation est rversible dans
les conditions de la raction. Supposons quon ajoute progressivement lantigne
lanticorps en solution aqueuse. Au dbut, il y a un excs danticorps et les asso-
ciations peuvent tre symbolises par Ab-Ag, AbAg,, puis laddition du ractif
polyfonctionnel Ag entrane une rticulation et il se produit un prcipit. Celui-ci
augmente graduellement, tout en changeant de composition, sil est en quilibre
avec la solution, jusqu la composition stchiomtrique n o tous les sites de
combinaison de lantigne et de lanticorps sont utiliss. Si lon poursuit laddi-
tion dantigne au-del de ce stade, on observe la dissolution progressive du pr-
cipit. Cest une consquence de la rversibilit de lassociation : la raction
(15.5) indique comment un excs dantigne produit la rupture de lassociation de
deux molcules danticorps lies par lintermdiaire dune molcule dantigne au
moins divalent.
(15.5)
On progresse jusqu la dpolymrisation complte et la redissolution. En
accord avec ce mcanisme, on nobserve pas de prcipitation avec les antignes
monovalents, ni avec certaines immunoglobulines, qui sont devenues monova-
lentes la suite du blocage interne de lun des deux sites actifs par une squence
oligosaccharidique attache de faon covalente leur chane polypeptidique.
La raction dagglutination
R - Ab -Ag -Ab - R +Ag R - Ab - Ag +Ag - Ab - R
Nous nous retrouvons ici la limite de la biologie, mais cette raction doit tre
cite cause de son extrme sensibilit. Les molcules antigniques peuvent par-
fois sexprimer naturellement, avec une densit particulirement leve sur les
rythrocytes. Ainsi il y a lo6 dterminants A de groupe sanguin sur la surface des
hmaties A,. Ces cellules donnent des suspensions modrment stables, et ne se
sdimentent que lentement. En prsence danticorps anti-A, il y a rticulation en
de nombreux points entre des molcules dantigne solidaires de cellules diff-
rentes, ce qui provoque la formation dagglomrats qui sdimentent rapidement.
Les IgM dcavalentes sont particulirement efficaces.
Dosages danticorps et dantignes
Nous ne donnerons ici que les principes et le lecteur trouvera des exemples
dapplication dans les chapitres 16 et 17. La pese directe du prcipit centrifug
ou lestimation de son poids par dosage de sa teneur en azote ne semblent pas
adaptes au recherches modernes, qui ncessitent de doser des pg dantigne et
danticorps. Cependant on a pu laborer une mesure fonde sur la prcipitation.
Le dosage dun anticorps en milieu liquide utilise lantigne spcifique marqu
par un traceur, maintenant gnralement 251, Ag*, ajout en excs. La combinai-
son Ag*Ab, soluble dans ces conditions, est spare par prcipitation, par le sul-
fate dammonium 50 % ou par un anticorps anti-lg gnral. On mesure la radio-
activit du prcipit.
Pour doser lantigne, on commence de la mme faon par faire la combinai-
son Ag*Ab en solution avec un excs dAg*. On ajoute la solution de Ag doser,
do lquilibre (15.6).
(15.6) Ag*Ab+Ag AgAb+Ag*
On mesure le rapport de la radioactivit lie la radioactivit libre et on fait
une courbe dtalonnage pour une srie de concentrations de lantigne Ag. Cette
technique se prte aussi la comparaison de laffinit dune srie de petites mol-
cules H pour le rcepteur antignique sur lanticorps. Celles-ci dplacent partiel-
lement lantigne de la combinaison (15.7).
(15.7) Ag*Ab +H __T Ag* +HAb
Laffinit de H pour le site de combinaison de lantigne sur lanticorps Ab sera
caractrise, par exemple, par la molarit ncessaire pour observer SO % dinhi-
bition de la combinaison e authentique >> AgAb. On peut aussi prsenter le rsul-
tat plus compltement comme la courbe donnant le % dinhibition en fonction de
la molarit de H. I1 faut souligner que, pour ces essais, le chimiste doit donner
limmunochimiste des chantillons ayant le maximum de puret possible, car laf-
finit peut varier de un mille dans une srie, cest--dire que un millime dun
analogue trs actif dans un compos moins actif fausse compltement les conclu-
sions. On fait maintenant beaucoup danalyses en phase solide. Par exemple, lan-
tigne est adsorb la surface de cupules de plastique et, aprs laddition de la
solution danticorps, un lavage spare lanticorps li de lanticorps libre.
Les lectines : dfinitions, extraction 245
15.4 LES LECTINES : DFINITIONS, EXTRACTION
Initialement, on a donn le nom de lectines[l L2] des protines, ou glycopro-
tines, presque exclusivement extraites des graines vgtales pouvant sassocier
rversiblement des molcules de sucre. On a aussi ds le dbut class avec les
lectines certaines prparations faites partir de fluides animaux, provenant par
exemple de languille, de lescargot comestible ou de la limace. Puis le terme sest
tendu toute une srie de protines ayant de laffinit pour les sucres, ayant les
origines les plus diverses. Par exemple, il y a dans le srum de lapin une glyco-
protine, la cruloplasmine, dont les chanes oligosaccharidiques se terminent par
un rsidu sialique, en position terminale non rductrice, port par un rsidu galac-
tose pnultime. La dsialylation de cette glycoprotine entrane sa rapide absorp-
tion par les cellules hpatiques. Ceci est d la prsence dans ces cellules dune
lectine qui retient les molcules possdant un rsidu galactose en position termi-
nale non rductrice. Ces << lectines >> animales sont assez nombreuses et ont pro-
bablement des fonctions biologiques importantes. On trouve aussi des protines
capables de lier rversiblement les sucres chez les bactries et les moisissures.
Donc, le terme de lectine recouvre une catgorie plus tendue quau dbut, cepen-
dant on exclue de cette catgorie les enzymes de mtabolisme des sucres, les anti-
corps anti-sucres et les protines de transport des sucres. Nous ne dcrirons dans
ce chapitre que les lectines traditionnelles. On trouvera des exemples de lectines
animales, les slectines, au paragraphe 17.6.
Presque toutes les mthodes actuelles disolement et de purification des lec-
tines reposent sur la chromatographie daffinit. Bien sr, il faut dterminer
lavance le ligand caractristique. On peut utiliser la proprit des lectines de pr-
cipiter certaines macromolcules et dagglutiner certains types de cellules, ani-
males ou vgtales. Le moteur de la raction est lassociation avec certains rsi-
dus, gnralement monosaccharidiques, solidaires de la macromolcule ou de la
priphrie cellulaire. Lorsquune activit de ce type a t reconnue, on recherche
quel est le sucre qui peut linhiber la concentration molaire la plus basse pos-
sible. Comme dans le cas des prcipitation5 immunochimiques, cette inhibition
est due loccupation du site de reconnaissance par la petite molcule soluble.
Une fois le ligand le plus efficace dcouvert, on lattache par une liaison cova-
lente stable une macromolcule insoluble et inerte et on monte une colonne
chromatographique avec ce matriau. Dans certains cas, on peut remplir directe-
ment les colonnes avec des absorbants commerciaux qui contiennent la structure
du ligand. Le << Sephadex , base de dextrane, polysaccharide rsidus a-glu-
copyranosyle retient les lectines spcifiques de cette configuration. On peut aussi
employer directement la chitine, polysaccharide insoluble rsidus B-N-actyl-
glucosamine, ou Iagarose. Parmi les supports utiliss pour fabriquer des conju-
gus, notons lagarose (spharose), la polyacrylamide (BioGel P) et lamidon.
Pour isoler une lectine vgtale, on moud les graines en farine trs fine, que
lon traite dabord par des solvants organiques (mthanol, ther) pour enlever les
matires grasses. On extrait ensuite les protines par des solutions salines ou des
tampons et on concentre la lectine par les oprations habituelles de prcipitation
au sulfate dammonium, redissolution, etc. Pour la purification finale, on fait per-
coler la solution de lectine travers la colonne daffinit. La lectine est retenue
sur le remplissage par son association avec le ligand combin solidaire de ce rem-
plissage. Aprs lavage de la colonne, on dcroche la lectine par lution avec une
solution du mme ligand soluble, qui dplace lquilibre dassociation. Un certain
nombre de lectines, extraites de graines peu coteuses par des oprations simples,
sont dun accs trs facile. Par exemple, on a pu isoler 3 g de la lectine
<< Concanavaline A >> partir de 100 g de farine de fve J ack. Cette facilit dac-
cs aux lectines, jointe la multiplicit de leurs proprits a eu comme cons-
quence une norme littrature.
I1 ne semble pas possible de fonder une nomenclature des lectines sur la struc-
ture. La nomenclature propose par Goldstein[] associe lorigine botanique aux
configurations reconnues classes par affinits dcroissantes. Par exemple :
Lectine de Canavalia ensiformis (a-D-Manp >a-D-Glcp >a-D-GlcNAcp),
Lectine de Triticum vulgaris (P-D-GlcNAcp-( 1+4)-P-D-GlcNAcp - (1 +4)-
I1sagit respectivement de la lectine de la fve J ack et de celle du germe de bl.
Malheureusement cette nomenclature dpend du raffinement exprimental.
Comparez le nom de la lectine de la fve J ack donn ici (1978) et celui du para-
graphe 15.5.3 (1986).
D-GlcNAc >B-D-GlcNAcp-( 1 -4)-D-GlcNAc >>P-D-GlcNAcp).
15.4.1 Structure
On prendra comme exemple la Concanavaline A, abondante dans la farine de
la fve J ack. La purification finale utilise labsorption sur une colonne de
Sephadex, dont la lectine est dsorbe par une solution de glucose. La
Concanavaline A est forme de quatre sous-units, M 26 500 daltons, associes
en dimres au-dessous du pH 5.6 et en ttramres au-dessus. Chaque sous-unit
contient un ion Mn2 +, un ion Ca2 +et un site de liaison au sucre. La figure 15.2
indique leur mode dassociation, avec lemplacement des ions et du site de com-
binaison. Une partie trs importante des chanes polypeptidiques existe sous la
forme de plis P. Cest par ces rgions que seffectue lassociation entre mono-
mres.
On peut enlever les ions minraux par traitement avec HC1 O. 1 N, suivi de dia-
lyse contre de leau distille. Cette limination abolit lactivit. On a identifi le
site de combinaison par examen aux rayons X du complexe cristallis avec le
mthyle a-D-mannopyranoside. I1 se situe 7 A et 11 A, respectivement, des ions
Ca2+et Mn2+. Les rsidus dacides amins les plus voisins semblent tre deux
tyrosines, deux acides aspartiques, une asparagine, une leucine, une srine et une
arginine. Cette numration semble indiquer une cavit nettement hydrophile. En
fait, on observe que la fixation du ligand dissimule deux carboxyles par sous-unit
vis--vis dun certain nombre de ractifs, par exemple dans le titrage acidim-
Figure 15.2 Reprsentation schmatique du ttramre de laConcanavaline A. Les sites des
ions Mn++et Ca++et le site dassociation du sucre sont dsigns par Mn,
Ca et S. Extrait de J . W. Becler, G. N. Reeke J r., B. A. Cunningham et G. M. Edelman,
Nature, 259 (1976) 406-409 (publi avec les aimables autorisations de Nature et des
auteurs ; O 1976 Macmillan Magazines Limited ; nous remercions leDr Edelman pour sa
coopration).
trique. Les carboxyles en question pourraient tre ceux des rsidus aspartiques
voisins du site de combinaison.
Examinons maintenant les autres lectines. On observe frquemment la prsen-
ce disolectines. Ce sont des molcules lgrement diffrentes, mais avec les
mmes proprits dassociation, que lon isole simultanment partir dune sour-
ce naturelle dtermine. Ainsi la sparation chromatographique des protines
activit agglutinante du germe de bl (250-500 mgkg) montre que cette activit
est rpartie sur quatre fractions dont les compositions en acides amins sont
presque identiques. Par ailleurs, ni les lectines du germe de bl ni la
Concanavaline A ne sont lies de faon covalente des sucres, alors que beau-
coup dautres lectines sont des glycoprotines. I1leur arrive de prsenter une pro-
portion trs leve de sucres. Par exemple, on extrait de la pomme de terre
(Solanum ruberosum) une lectine (38 mg pour 4,5 kg de tubercules) qui est spci-
fique des oligosaccharides lis la chitine :
P-D-GlcNAcp-( 1 +4)-[P-D-GlcNAcp-( 144)], - P-D-GlcNAc
(n =1 ou 2)
Cette lectine est une glycoprotine, qui contient environ 50 % de son poids de
sucre.
Comme la Concanavaline A, la grande majorit des lectines sont des associa-
tions de sous-units. Elles sont parfois identiques, parfois diffrentes, souvent au
nombre de quatre, mais parfois plus ou moins (deux). Ainsi chacune des deux iso-
lectines de la lentille (Lens culinaris syn. esculentu) est dcompose en quatre
sous-units en milieu acide ou dans lure 8M. 11y a des chanes << lourdes >>
H (M 17570D) et << lgres >> (M 57 10 D). Chacune des deux isolectines se pr-
sente comme une association par liaison non covalente de deux chanes H et deux
chanes L, conduisant une masse molaire voisine de 46 O00D. Les lectines du
germe de bl sont des dimres dunits (M 21 600) dissociables par les dnatu-
rants ou en conditions de pH extrmes. Par contre, les sous-units de la lectine des
graines de ricin (Ricinus communis) sont associes de faon covalente par des
ponts disulfure et on doit utiliser un rducteur, comme le mercaptothanol, pour
les sparer.
Enfin la prsence dions Mn2+et Ca2+, indispensables lactivit de la conca-
valine A, a t reconnue dans un certain nombre dautres lectines.
15.4.2 Spcificit
La spcificit des lectines sexprime par des associations solubles avec des
petites molcules de sucres, ou des oligosaccharides, par des ractions de prcipi-
tation avec des oligosaccharides et enfin par des ractions dagglutination de cel-
lules vgtales ou animales. Les divers niveaux de spcificit sont apparents, par
exemple avec les cellules sanguines. Certaines lectines les agglutinent toutes ;
dautres lectines sont spcifiques de lespce de lanimal et dautres encore sp-
cifiques de son groupe sanguin. On peut analyser de faon quantitative les asso-
ciations qui ne conduisent pas une prcipitation avec les sucres simples et leurs
drivs, et les oligosaccharides, par la mthode de dialyse lquilibre. La solu-
tion de ligand est verse dans les deux compartiments spars par la membrane et
la lectine est ajoute dun ct seulement. A lquilibre, la concentration en ligand
libre est la mme dans les deux compartiments et on la mesure commodment
dans celui o il ny a pas la lectine. Les constantes dassociation varient de lo2
lo5 M-l. I1 est intressant de comparer la constante dassociation dun ligand
monosaccharidique, ou de son alkyl glycoside avec lanomrie convenable, avec
celle dun oligosaccharide o ce ligand occupe une position terminale non rduc-
trice. La comparaison semble indiquer que le site de reconnaissance de la plupart
des lectines correspond un seul rsidu glycosyl. Toutefois, avec plusieurs lec-
tines, di- et tri-saccharides sont de meilleurs ligands que les monosaccharides, ce
qui indique une interaction qui stend au-del dun seul rsidu. Ainsi la
Concanavaline A reconnat essentiellement la-D-mannose, cependant les asso-
ciations sont respectivement 4 et 20 fois plus fortes avec les di- et tri-saccharides
a-D-May-( 1-+2)-D-Man et a-D-Manp-( 1 +2)-a-D-Manp-( 1 +2)-D-Man
quavec le mthyle a-D-manno-pyranoside. Ce type denchanement se rencontre
dans les glycoprotines. Dans presque tous les cas, dans les associations entre lec-
tine et oligosaccharide ou glycoprotine, lassociation la plus importante du point
de vue de lnergie de liaison a lieu avec le sucre terminal non rducteur. Plus
rarement, elle a lieu avec rsidus monosaccharides en ramification sur une chane
principale. Par exemple, la Concanavaline A reconnat les units a-D-mannopy-
ranosyl et a-D-glucopyranosyl terminales dans une chane oligosaccharidique,
mais galement les ramifications a-D-mannopyranosyl branches en position 2
dun sucre de la chane principale. Certaines lectines ne sassocient efficacement
qu un anomre donn ; dautres sont plus ou moins indiffrentes la configura-
tion anomrique du rsidu reconnu. La lectine de soja (Glycine max) reconnat
aussi bien les configurations a et p de la forme pyranosique de la N-actylgalac-
tosamine. Sa dfinition par ses ligands scrit : a-D-GalNAcp 2 P-D-GalNAcp B
a-D-Galp. I1 y a cependant une lgre prfrence pour lanomre a. De mme, un
certain nombre de lectines tolrent des variations en position 2. On a remarqu ci-
dessus que la Concanavaline A sassocie la fois au D-mannose et au D-glucose.
Un certain nombre de lectines reconnaissent la fois le D-galactose et la
N-actylgalactosamine, quoiquavec une prfrence marque pour lun ou lautre
de ces deux sucres. On laura remarqu, ci-dessus, propos de la lectine du soja.
En revanche, les lectines tolrent trs peu de variations sur les positions 3 et 4. I1
ny a pas de << ractions croises D entre les configurations D-gluco et D-gulucto,
par exemple.
Le mlange en solution aqueuse dune lectine avec un polysaccharide compor-
tant des rsidus reconnus par cette lectine entrane en gnral une prcipitation,
tout comme le mlange dune immunoglobuline avec lantigne correspondant.
La Concanavaline A prcipite le dextrane, polysaccharide bti partir dunits a-
D-glucopyranose. I1est possible doprer quantitativement ; on ajoute des quanti-
ts croissantes de polysaccharide des portions aliquotes de lectine, on centrifu-
ge, on lave le prcipit et on procde au dosage dazote. On observe une courbe
de prcipitation tout fait semblable celle que lon observerait dans une rac-
tion antigne-anticorps (voir le paragraphe 15.3) : il y a trois zones : au dpart, i l
y a excs de lectine et tout le dextrane est prcipit. A lquivalence, tout le dex-
trane et toute la lectine ont prcipit. Cest ce stade que lon observe le maxi-
mum de prcipitation. Un excs de dextrane solubilise le prcipit qui disparat.
15.4.3 Description abrge de quelques lectines[3]
Pour chaque lectine, on donne dabord sa description selon la nomenclature
prconise. A la ligne suivante, on trouvera sa masse molaire et celle des sous-
units (a, p.. .) ainsi que le mode dassociation des sous-units, le nombre n de
sites actifs et les mtaux ventuellement prsents. On termine par la constante
dassociation avec un bon substrat.
Lectine de la f i v e Jack (Canavalia ensiformis)
a-D-Manp-( 1+2)-a-D-Manp-( 1 +2)-D-Man >a-D-Manp (1 +2)-D-Man >
a-D-Man >a-D-Glc >a-D-Glc NAc
M 106000 ; a :26500 ; pH7 : a, ; pH5 : a2 ; n =4 ;
Ca2+, Mn2+;
ka 2,06 x lo4 M-' (2C) (mthyl a-D-mannopyranoside ; 3,6-di--a-D-
mannosyl-D-mannose).
Lectines de Griffonia simplicifolia
Isolectine B, : a-D-Gal >> a-GalNAc ; lsolectine A, : a-D-GalNAc >> a-D-Gal
M 114000 ; a :32000, p :33000 ; cinq isolectines, A, (a,), A,B (a, p), A, B,
Ca++;
Isolectine B, : Ka 2,06 x IO4 M-' (mthyle a-D-galactopyranoside) ;
Isolectine A, : ka 1,87 x lo5 M-' (rsidu a-D-GalNAc en position terminale
non rductrice ; ragit strictement avec les rythrocytes du groupe sanguin A).
(a, PZ>> AB, (a B3) et B, (P4) ; =4 ;
Lectines du germe de bl (Triticum vulgare)
fi-D-GlcNAcp - (1 -+4)-p-D-GlcNAcp-( 1+4)-D-GlcNAc >fi-D-GlcNAcp -
(1 -4) -D-GlcNAc >> D-GlcNAc
M 43200 ; a : 21600 ; au moins trois isolectines ; pH >4 : a2 ; solution acide :
a ; n = 2
Ca++;
K, 5,3 x lo4 M-' (20C) {(H+4)-[B-D-GlcNAcp -(1+4)l4 - (l+OH)) ;
K , 1,3 x IO3 (4C) (D-GlcNAc).
Lectines du soja (Glycine max)
a-D-GalNAcp =0-D-GalNAcp >a-D-Galp
M 122000; a 30000 ; a,; n =4 ;
Ca++, Mn++;
K , 3,0 x 104 M-1 ( 4 ~) .
Lectine de l'escargot (Helix pomatia)
a-D-GalNAc - (1+3)-D-GalNAc >a-D-GlcNAc p >> a-D-Gal
M 79000 ; a 13000 ; au moins douze isolectines ; a6 ; n =6 ; ka 5 x lo3 M-'
(pentasaccharide du groupe sanguin A : a-D-GalNAcp - (1+3)-[a-L-
Fucp (I + 2)]-P-D-Galp-( 1+4)-fi-D-GlcNAcp -( 1+6)-R).
Lectines Z du gent (Ulex europaeus)
WL-FUC
M 60000 - 68000 ; a 29000, p 3 1 O00;
;
Ca++, Mn++, Zn++;
Ka 3,l x lop3 M- (L-fucose).
Lectines de la limace (Limax fl avu~)[~I
NeuSAc
M 44000 ( 2 x 22000) ; II =2 ;
ka 3,8 x lo4 M- (Neu5Ac).
15.4.4 Proprits biologiques des lectines151
Nous ne reviendrons pas ici sur les proprits dagglutination de cellules dont
nous avons dj parl au paragraphe 15.4.2. Une de leurs caractristiques les plus
impressionnantes est leur pouvoir mitogne, cest--dire quelles dclenchent
dans une colonie de lymphocytes, en tat de repos et de non division, un tat de
croissance et de prolifration. Cet effet mitogne est presque toujours inhib par
des sucres simples, de faon rversible, par exemple dans le cas de la concanava-
line A. Signalons au passage quun certain nombre dagents autres que les lec-
tines, mais galement capables de ragir sur les sucres priphriques des lympho-
cytes sont galement mitognes. Les lectines les plus utilises comme mitognes
sont la Concanavaline A et la lectine de Phaseolus vulgaris. Contrairement aux
antignes qui activent des clones spcifiques, les lectines agissent de faon indis-
crimine sur une population approprie et la proportion de cellules stimules peut
atteindre 80 %. On observe simultanment une stimulation gnrale de toutes les
activits mtaboliques, mais aussi la scrtion dune famille de polypeptides actifs
biologiquement, les lymphokines. 11est probable que la phase initiale de la sti-
mulation est lassociation de la lectine aux sucres de la surface cellulaire, mais
lassociation napparat pas suffisante dans tous les cas.
Il y a un certain nombre dautres proprits trs caractristiques, mais leur
expos suppose des connaissances en hmatologie qui dpassent le cadre de cet
ouvrage.
15.4.5 Comparaison des anticorps anti-sucres et des lectines
videmment cette comparaison simpose. La similitude tient en peu de mots :
lectines et anticorps sont des protines (ou glycoprotines) possdant plusieurs
sites dassociation rversible sur leur molcule, qui en font des ractifs de rticu-
lation rversible. Donc avec les deux familles de molcule, on observe lassocia-
tion avec des mono- et oligosaccharides, la prcipitation des macromolcules
polysaccharidiques et glycoprotines avec dissolution des prcipits en prsence
dun excs de polysaccharides, et enfin lagglutination de cellules. Prcipitation
et agglutination sont une consquence de la mutivalence des deux ractifs oppo-
ss et sont inhibes en prsence du ligand mono- ou oligosaccharidique spci-
fique. Une autre consquence de la multivalence, observe avec lectines et anti-
corps, est laugmentation de laffinit apparente lorsque le substrat permet la rti-
culation. Ceci dit, les immunoglobulines sont construites sur un modle uniforme
ou par association de molcules bties selon ce mme modle, tandis quil semble
quil y ait une grande varit de structure dans les lectines. Dans le modle de base
des immunoglobulines, les deux sites de reconnaissance sont solidaires de deux
demi-molcules identiques lies entre elles par des ponts disulfure. En revanche,
la lectine est une association de sous-units qui peuvent comporter ou ne pas com-
porter de site de reconnaissance et sont lies de faon non covalente, probable-
ment grce des contacts entre des surfaces tendues de plis p.
RFRENCES
[il I. G. Goldstein et C.E. Hayes, Adv. Carbohydr: Chern. Biochern, 35 (1978) 127-340.
[2] The Lectins, Properties, Functions and Applications in Biology and Medicine, ouvra-
ge collectif publi sous la direction de I. E. Liener, N. Sharon et I. J . Goldstein,
Academic Press, New York 1986.
[3] I. J . Goldstein, The Lectins, Properties, Functions and Applications in Biology und
Medicine, op. cit., page 35.
[4] R. N. Knibbs, S. E. Osborne, G. D. Glick et I. J . Goldstein, J. Biol. Ckern., 268 (1993)
[5] H. Lis et N. Sharon, The Lectins, Properties, Functions and Applications in Biology
18524-1853 1.
and Medicine, op. cit., page 266.
CHAPITRE 16
Les antignes de groupes sanguins :
substances A, B, H et connexes
16.1 LES ANTIGNES A, B ET HLi][2][3]
16.1.1 Gnralits. Polymorphisme
Les dterminants antigniques sont le trisaccharide A, 16.1, le trisaccharide B,
16.2, et le disaccharide H, 16.3. Le lecteur reconnatra que les trisaccharides A et
B sont les produits de la glycosidation du disaccharide H sur la position 3 du
galactose, par, respectivement, une unit N-actylgalactosamine et une unit
galactose et dans les deux cas avec lanomrie a. Donc les dterminants A et B
ne different que par leur substitution en 2 sur leur unit terminale non rductrice
D-galacto, N-actyle dans la substance A, hydroxyle dans la substance B. On
notera aussi la participation du sucre dsoxygn fucose et enfin les liaisons a cis-
1,2, moins frquentes que les liaisons p trans-1,2 dans les glycoconjugus. Ces di-
et trisaccharides sont situs aux extrmits terminales non rductrices des chanes
oligosaccharidiques des glycoprotines et des glycolipides et, ventuellement, de
leurs ramifications. Les individus du groupe A prsentent le dterminant A et une
certaine quantit de H, mais non B, tandis que ceux du groupe B prsentent B et
H mais non A, de faon symtrique. Les individus du groupe O ne prsentent que
le dterminant H. Ceci suggre tout de suite une biosynthse incomplte, due
labsence ou la non-expression des gnes qui codent les glycosyltransfrases A
ou B. Les molcules porteuses se trouvent sur la paroi des rythrocytes et les
dterminants sont exposs vers lextrieur. Chez les individus du groupe A, la
molcule B est reconnue comme trangre et suscite lapparition dun anticorps
anti-B. Pour la mme raison, dans le sang B, on trouve lanticorps anti A et dans
le sang O les anticorps anti-A et anti-B. Les accidents observs lintroduction de
la pratique des transfusions sanguines taient dus la prsence de ces anticorps.
Ainsi le sang dun donneur du groupe A qui contient lanticorps anti-B produit
lagglutination des rythrocytes dun receveur du groupe B, etc. Mais les anti-
gnes ABH sont galement prsents la surface des cellules de la majorit des
organes et dans les scrtions. Ils sont une cause majeure de rejets de greffon don-
neur et receveur appartenant des groupes diffrents. Pour cette raison, on juge
quon devrait galement leur donner le nom dantignes tissulaires.
254 Les antignes de groupes sanguins : substances A, B, H et connexes
O
Y
c H P O H H
HO
16. 1
O HO
16. 2 16. 3
Les antignes ABH prsentent un degr lev le phnomne de polymorphis-
me. Ceci signifie que les dterminants ABH peuvent tre ports par une multiplici-
t de molcules chimiques diffrentes. Les diffrences de structure lointaines nont
pas de consquences sur la raction immunochimique A-anti-A, par exemple, mais
les diffrences trs proches peuvent se manifester avec les techniques fines des
anticorps monoclonaux. Les causes de polymorphisme sont : a) la nature de lanti-
gne complet, glycolipide, ou glycoprotine glycoside, ou glycoprotine glycosa-
minide ; b) la squence de sucres sur la chane qui joint le cur du glycoconjugu
aux dterminants antigniques et, tout particulirement, la prsence ou non de
ramifications ; c) la nature de la jonction du dterminant Ioligosaccharide.
Le lecteur qui prouverait ici et ci-dessous un sentiment de confusion devant
ces formules peut se reporter au rsum pictural donn par la figure 16.6 en fin de
chapitre.
16.1.2 Types de jonction. Le systme Lewis
On observe quatre modes de jonction du galactose G des formules 16.1 16.3
la chane porteuse du glycoconjugu, les << types H 1 4, rassembls dans le
Les antignes A, B et H 255
tableau 16.1. Nous soulignons que le galactose de gauche dans les formules du
tableau 16.1 est le galactose G des antignes ABH. La rpartition de ces types de
jonction disaccharidique est diffrente suivant la famille du glyconjugu porteur.
Type 1 : Gal-P-( 1-3)-GlcNAc-P-( 1 -R)
Type 2 : Gal-P-( 1-4)-GlcNAc-P-( I -R)
Type 3 : Gal-P-( 1-3)-GalNAc-a-( 1 -R)
Type 4 : Gal-P-( 1-3)-GalNAc-P-( 1 -R)
Tableau 16.1 Les quatre types de jonction des dterminants ABH.
On rencontre les chanes de type 1 et 2 la fois sur les glycoprotines, glyco-
sides ou glycosaminides et les glycolipides, la chane de type 3 surtout sur les pro-
tines glycosides et la chane de type 4 seuleiiicnt sur les glycolipides.
La fucosylation enzymatique de la chane de type 1 donne les antignes du
groupe Lewis. Par exemple, dans lantigne Lewis Lea, il y a un rsidu fucosyle
sur la position 4 de GlcNAc, 16.4. Une seconde fucosylation donne lantigne
Leb, qui est donc un produit difucosyl, 16.5. Les antignes du type 1 sont les
principaux porteurs des dterminants ABH dans les fluides corporels et les scr-
tions. Ils ne sont pas synthtiss par les rythrocytes et les lymphocytes, qui nan-
moins les absorbent partir du plasma et, de ce fait, les expriment.
On observe les antignes du type 2 sur la peau et les rythrocytes. La fucosy-
lation transforme le disaccharide du type 2 en dterminant H, mais on observe
aussi dautres produits de fucosylation, 16.6 et 16.7, qui sont respectivement iso-
mres des antignes Lea et Leb et ont reu le nom dantignes LeX et Ley. Le lec-
teur aura reconnu la N-actyllactosamine dans la chane de type 2.
On observe la chane de type 3 comme disaccharide de cur des glycopro-
tines glycosides, 16.8. Le disaccharide-srine (thronine) est lantigne T et son
prcurseur monosaccharidique lantigne T,,. Les dterminants ABH sont
construits directement sur le cur disaccharidique. On a observ leur prsence sur
la muqueuse gastrique et dans la glycoprotine des kystes de lovaire.
Cest dans cette catgorie quil faut ranger lantigne << A priodique >> corres-
pondant la squence 16.9. On voit que le dterminant A est construit sur un
Gal$-( 1-3)-GlcNAc-P -( 1-R) Fuca-( 1-2)-Gal-P-( 1-3)-GlcNAc-P -( 1-R)
t
Fuca-( 1-4)
t
Fuca-( 1-4)
16.4 16.5
Gal$-( 1-4)-GlcNAc-P -( 1-R)
t
Fuc-a-( 1-2)-Gal-P-(l-4)-GlcNAc-fi -( 1-R)
t
Fuca-( 1-3) Fuca-( 1-3)
16.6 16. 7
Gal$ -( 1-3)-GalNAca-( 1 -O)-Ser/Thr
16. 8
GalNAc-a-( 1-3)-Gal-B-( l-3)-GalNAcax-( 1-3)-G 1-p -( 1-4)-GlcNAc-p-( 1-R)
t
Fuc-cc-(~-~)
t
Fuca-( 1-2)
16. 9
disaccharide de type 3. En fait, ce disaccharide est le produit de la galactosylation
de lunit GalNAc a dun premier dterminant A. On a isol un certain nombre
dantignes glycolipidiques A-priodiques et il est possible quils constituent plus
de la moiti des substances dactivit A des rythrocytes. Naturellement, on ne
trouve cet antigne que chez les individus A.
En ce qui concerne la chane de type 4, elle apparat par galactosylation lex-
trmit terminale non rductrice de certains glycolipides, comme le globoside
16.10, ce qui donne le prcurseur 16.11. Les structures sous les accolades dans la
formule 16.10, P, pk et p sont trois des quatre dterminants antigniques du syst-
me de groupe sanguin P. Les dterminants ABH peuvent se construire sur le galac-
tose terminal non rducteur du globoside prolong 16.11. La majorit des anti-
gnes ABH des reins appartiennent cette famille.
Daprs ce qui prcde, le lecteur pourrait imaginer que les dterminants anti-
gniques ABH se rduisent des di- et trisaccharides. Ceci serait possible, mais
on a des raisons de penser que les dterminants antigniques, en gnral, peuvent
stendre sur des squences plus tendues. On devrait alors distinguer les
variantes dues au polymorphisme du systme. Ceci a t possible par immunisa-
tion avec des antignes soigneusement purifies, en prparant ensuite les anticorps
monoclonaux. Par exemple, parmi les anticorps anti-A monoclonaux, lun recon-
P
I \
P
, >
GalNAc-p -(1-3)-Gaicl-(l-4>-Gal$ -(1-4)-Glc$ -(l-Cer)
16. 10
Gal$ -(1-3)GalNAc-p-(l-3)-Gal-a-(l-4)-Gal$ -(1-4)-Glc$ -(I-Cer)
16. 11
Le systme Ii et les effets de ramification 257
GalNAc-a-( 1 -3)-Gal-p-( 1-3)-GlcNAc-P -( 1-3)-Gal
t
Fuca-( 1-2)
16. 12
GalNAc-a-( 1 -3)-Gal-B-( 1 -4)-GlcNAcQ -( 1 -3)-Gal
t
Fuca-( 1-2)
16. 13
GalNAc-a-( 1 -3)-Gal$-( 1 -4)-GlcNAc-P -(I -3)-Gal
t t
Fuca-( 1-2) Fuc-~-( 1-3)
16. 14
nat spcifiquement 16.12 (chane de type l), un autre reconnat 16.13 (chane de
type 2), mais donne une raction croise avec 16.14 (type 2, difucosyl, appel
AneY)
Les tudes srologiques et gntiques ont montr que le groupe A se subdivi-
sait en deux sous-groupes principaux, A, et A,. I1ny a pas encore dexplication
dfinitive en terme de structure, mais de fortes indications concernant le sous-
groupe A, . Nous avons signal ci-dessus la dcouverte dun antigne A prio-
dique, apparent au type 3, exprim seulement sur des glycolipides - sur le glo-
boside pour le type 4. Or on ne les trouve que sur les rythrocytes A, .
16.2 LE SYSTME Ii ET LES EFFETS DE RAMIFICATION
Le dterminant de lantigne i est lhexasaccharide linaire 16.15, trimre
dicondens de la N-actyllact~samine~~]. Le dterminant I, 16.16, est une unit
Gal$-( 1-4)-GlcNAc-P-( 1-3)Gal-p -( 1-4)-GlcNAcQ -( 1-3)-Gal-P-( 1-4)-GlcNAc-P-( 1-R)
16. 15
H
CH,OH
CH,OH
HO 1
b o H - o - AcNH CH* - I
16. 16
N-actyllactosamine branche sur la position alcool primaire dun hexopyrano-
se[4]. I1recouvre donc un site de ramification. Le dterminant i se prsente comme
un fragment des longues chanes de poly-N-actyllactosamine polycondenses
lies aux mannoses du cur des glycoprotines glycosaminides et aux units
GalNAc (ou Gal) du cur des glycoprotines glycosides. De trs longues chanes
de ce type, jusqu 40 monosaccharides, seraient prsentes dans les glycolipides
des rythrocytes de lapin, avec sept ramifications. On a isol un glycolipide 20
units et trois ramifications du placenta humain. Ce sont, dune manire gnra-
le, ces ramifications qui seraient le site de combinaison du dterminant I.
Ces antignes, prsents dans tous les individus humains, ne devraient pas tre
reconnus comme non-soi et susciter la synthse danticorps. Cependant, il existe
certaines conditions pathologiques, appeles maladies auto-immunes, o antigne
et anticorps coexistent chez le mme individu. Les anticorps dont nous allons par-
ler ont reu le nom dagglutinines froides. Lagglutination des rythrocytes se
manifeste par un trouble lorsquon refroidit le sang 4C, qui disparat au retour
37C. Les srums de ces malades sont une source danticorps anti-i et anti-I. Ces
anticorps sont naturellement monoclonaux et servent de ractifs pour tudier la
distribution des antignes i et I dans les sujets normaux. Ainsi le sang du fetus
humain exprime lantigne i, observable sur les rythrocytes du cordon ombilical.
Au cours des dix-huit premiers mois dexistence du nourrisson, lantigne i dis-
parat au profit de lantigne I. En termes de structure, ceci sinterprte simple-
ment par la ramification de la chane linaire i, par couplage avec Ianomrie p du
disaccharide N-actyllactosamine sur les fonctions alcool primaire des rsidus
galactose. Nous reviendrons au chapitre 17 sur le rle probable des antignes i et
I dans lembryognse des mammifres. Ces questions de ramification seront
loccasion dun bref retour sur les anticorps ABH. Les anticorps anti-sucres ont
en gnral une affinit faible ou modre. Celle-ci est trs augmente sil y a plu-
sieurs dterminants sur une seule molcule porteuse, ce qui est rendu possible si
elle est ramifie. La combinaison avec un anticorps deux sites rcepteur multi-
plie laffinit par un facteur de lordre de lo3 - io4.
16.3 SYNTHSE DES DTERMINANTS OLIGOSACCHARIDIQUES
16.3.1 Dterminants ABH
Ces synthses posent le problme difficile de la glycosidation 1,2-cis condui-
sant des a-glycosides. Cest spcifiquement pour prparer certains de ces oli-
gosaccharides que la mthode lion commun a t labore (voir le paragraphe
10.3.3). La figure 16.1 donne la prparation du trisaccharide Lea par fucosylation
dun driv protg de la N-actylla~tosamine[~]. La figure 16.2 illustre lutilisa-
tion de la mme mthode pour prparer un a-D-galactopyranoside, en Ioccur-
rence le trisaccharide BC6].
Synthse des dterminants oligosaccharidiques 259
Ac & - + C H 3 W I i n Et,NBr-MeCHNEt
Ac0 OCH,CCI, OBn CH,CI,-Me,NCOH
OBn
Ac0 NHAc
Ac0 OCH,CCI,
Ac0 NHAc
80%
Figure 16.1 Synthse du trisaccharide Lea.
OCH2CC1,
Et,NBr .
BnO CH,Cl,-Me,NCOH
HO
+
Br
OBn
BnO
O OCH,CCI,
OBn
Figure 16.2 Synthse du trisaccharide B.
Pour introduire une unit N-actylgaiactosamine a, 1,2-cis, il faut partir dun
ractif sans groupement participant. On emploie les halognures de 2-azido-2-
doxy-a-D-galactopyranosyle 16.17 et 16.18 dont la prparation la plus habituel-
le utilise 1 azidonitration >> du galactal peractyl 16.19 (Fig. 16.3) (voir le para-
graphe 10.3.3). La condensation du bromure 16.18 avec le trisaccharide 16.20 est
ltape cl dans la synthse du dterminant A port par une chane de type 2. On
termine en dbloquant, en rduisant Iazide et en N-actylant[] (Fig. 16.4).
CH,OAc
- - AcO
Ac0
16. 19
Figure 16.3 Raction dazidonitration.
Ph
16. 17 X =C1
16. 18 X =Br
CalNAc-a-( I-?)-Gal-P-( 1-4)-GlcNAc
t
+d
Fuca-( 1-2)
Figure 16.4 Synthse dun ttrasaccharide A.
16.3.2 Dterminants Ii
On a dabord effectu la synthse du dterminant I et des composs apparents
en couplant loxazoline 16.21 drive de la lactosamine peractyle avec un
galactose ayant la fonction alcool primaire libre (Fig. 16.5). Depuis les oxazolines
ont t largement remplaces par les phtalimidochlorures pour le couplage p-1,2
trans des sucres amins. Sur la figure 16.5, on voit que la fonction alcool en 3 du
galactose accepteur est bloqu temporairement par allylation. Le dblocage slec-
Synthse des dterminants oligosaccharidiques
261
CH,OAc
+
- Ac O
Ac Ac Al l 0 OBn
Brio
16.21 Me
CH,OAc
Ac 0 - z c - Bno O \ CH,
All0
Bn0
Figure 16.5 Synthse du trisaccharide I.
tif de cette position libre un hydroxyle qui peut servir lextension de la chane
dans une autre direction[*].
La synthse des oligosaccharides de la famille du dterminant i illustre une
stratgie particulire de doublement19]. On part de la phtalimidolactosamine
convenablement drive, 16.22. Sur une portion, on hydrognolyse le benzyle
anornrique et on convertit I hydroxyle anomrique en trichloractimidate. On a
O
O
OBn
NPht
16. 22
NPht
16. 23
Gal 0 GalNAc GlcNAc @ Fuc O
Hn
O
a(l-2)
t
B o=u
O
a(l-2)
t
A KI-u
O
a(1-2)
1
Types de jonction
1
2
3
4
Lea
Figure 16.6 Rsum pictural de certaines squences considres au chapitre 16.
ainsi fabriqu le donneur glycosylant. Sur une autre portion de 16.22, on pratique
une hydrolyse acide modre qui expose les hydroxyles en 3 et 4 de l'unit galac-
tose. Mais seul l'hydroxyle en 3 est ractif au couplage dans ces conditions. Le
Rfrences 263
16.24
couplage donne le ttrasaccharide 16.23. Une portion de 16.23 est active sur le
carbone de l'unit rductrice exactement comme ci-dessus et, dans une autre, on
expose par hydrolyse acide la fonction alcool en 3 du galactose terminal non
rducteur. Le couplage donne l'octosaccharide protg 16.24. Les essais immu-
nochimiques faits avec cette collection de produits aprs dprotection semblent
indiquer que le dterminant i est une chane hexasaccharidique. La figure 16.6
donne une reprsentation picturale des principaux dterminants antigniques
mentionns dans ce chapitre.
RFRENCES
[I ] H. Clausen et Sen-itiroh Hakomori, Vox Sanguinis, 56 (1989) 1-20.
[2] Sen-itiroh Hakomori, Baillre's Clinical Haematology, 4 (199 1) 957-914.
[3] Sen-itiroh Hakomoni, La Recherche (1993) 548-554.
[4] H.C. Gooi, A. Veyrires, J . Alais, P. Scudder, E. E Hounsell et T. Feizi, Molecular
[SI R. U. Lemieux et H. Driguez, J. Am. Chem. Soc., 97 (1975) 4063-4069.
[6] R. U. Lemieux et H. Driguez, J. Am. Chem. Soc., 97 (1975) 4069-4075.
[7] H. Paulsen, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 21 (1982) 155-224.
[8] C. Aug, S. David et A. Veyrires, Nouv. J. Chim., 1979 (3) 491-497.
[9] J . Alais et A. Veyrires, Curbohyd~ Res., 207 (1990) 11-31.
Immunology, 21 (1984) 548.554, 1099-1 104.
CHAPITRE 17
Ractions de reconnaissance
doligosaccharides importantes
dans le monde vivant
17.1 INTRODUCTION
Nous avons choisi ces exemples non seulement en raison de leur importance,
mais aussi avec lespoir de rendre concrte aux yeux des chimistes organiciens la
mthodologie applique. Un volume rcent de symposium rend compte dun cer-
tain nombre dobservations analogues dans les domaines les plus varis]. Le lec-
teur intress pourra sy documenter sur des questions que nous naborderons pas,
comme lintervention des oligosaccharides dans la fertilisation des mammifres et
le dveloppement embryonnaire du systme nerveux. Dans le cadre plus limit de
ce chapitre, tous les exemples, sauf le premier, viennent du monde animal. La
matire de ce chapitre paratra peut-tre disparate au lecteur, mais prcisment,
lauteur cherche le convaincre du caractre gnral et de la varit des associa-
tions supramolculaires protine-sucre dans le monde vivant.
17.2 LE SIGNAL DE NODULATION DES RHIZOBIA
Les ttrasaccharides 17.1 et 17.2 jouent un rle fondamental dans la symbiose
entre les Rhizobia et les lgumineuses. Ils induisent la formation des nodosits des
racines qui permettent la fixation de lazote et la dformation des radicelles sur la
luzerne[*]. Ils sont inactifs sur la vesce, qui, par contre, rpond des analogues
non sulfats. On reconnat l un fragment ttrasaccharidique du polymre chitine,
17.3, produit de soutien de la carapace des crustacs. Lactolyse de la chitine
(Ac,O - H,SO,) la dcompose en N-actylglucosamine et oligosaccharides
( n =2, 3, 4.. .), peractyls. Les composs 17.1 et 17.2 se distinguent du << chito-
ttraose D 17.3 ( n =4) par les substitutions suivantes : sulfation de la fonction
alcool primaire de lunit rductrice et, dans lunit terminale non rductrice, rem-
placement de lactyle par un groupement driv dun acide gras non satur et
actylation ventuelle de lhydroxyle primaire. On a fait la synthsec31 des ttra-
saccharides 17.1 et 17.2 par addition successive dunits glucosamine convena-
Le pentasaccharide actif de lhparine 265
o & o ~ o ~ < ~ CH,OH
OH
NHAc NHAc NHAc
NH
I
17.1 R =H
17.2 R= Ac
PMBO OMP
NPht
17. 3
17. 4
MP 4mthoxyphnyl
PMB 4-mthoxybenzyl
TBDPS tert-BuPh,Si
Pht phtalimido
blement protges. Le prcurseur 17.4 de lunit rductrice contient quatre types
de groupements protecteurs (voir le paragraphe 5.1.1). Un cinquime type, ter-
BuMe2Si, protge la fonction alcool primaire du prcurseur de lunit terminale
non rductrice. Le couplage utilise lactivation par transformation en fluorures.
On arrive finalement un ttrasaccharide glycoside, o toutes les fonctions alcool
sont protges par des groupements MP ou PMB, sauf deux, protgs par silyla-
tion. On hydrolyse slectivement lther ter-butyldimthylsilyle sur la fonction
alcool primaire de lunit terminale non rductrice en milieu acide modr (tosy-
late de pyridinium) et on actyle. On hydrolyse lther ter-butyldiphnylsilyle
avec le fluorure de ttrabutylammonium et on convertit lalcool en sulfate acide
avec le complexe SO, - Me3N dans la pyridine. Finalement, on obtient 17.2 en li-
minant les thers restants par oxydation par le nitrate de crium et dammonium.
17.3 LE PENTASACCHARIDE ACTIF DE CHPARINE
17.3.1 Isolement de lhpariner41 c51
La source commerciale la plus habituelle est la muqueuse intestinale du porc,
dont on peut retirer plus de 100 mgkg. Cest un polyacide quon extrait des tis-
sus autolyss par une solution alcaline. On coagule les protines au chauffage. Le
266 Ractions de reconnaissance doligosaccharides importantes dans le monde vivant
refroidissement prcipite une association hparine-protine, quon dbarrasse de
lipides contaminants par extraction lalcool ou lactone. Aprs redissolution,
on limine les protines par digestion trypsique. On spare des contaminants de la
mme famille par lintermdiaire dun sel de baryum cristallis ou de sels dam-
moniums quaternaires insolubles. On peut purifier lhparine sur des colonnes
dchangeurs danions. Cest la molcule la plus charge de la srie et celle qui
ncessite les concentrations en sels les plus leves (2 M) pour son lution.
17.3.2 Biosynthse de lhparine
Elle est particulirement intressante, car elle montre bien comment sintroduit
lhtrognit dans cette molcule primitivement rgulire. Au dpart se forme
une colonne vertbrale polypeptidique, comportant une quinzaine de rsidus gly-
cine et L-srine alternants, dont le dessin 17.5 reprsente un lment possible. A
la plupart des rsidus srine, des transfrases appropries ajoutent successivement
des units P-D-xylopyranosyl, 0-D-galactopyranosyl deux fois et P-D-glucurono-
I
CH,OH
-NH-CH-CO-NH-CH,-CO- GlcUA-P-( 1 -3)-Gal-P-( 1 -3)-Gal-P-( 1 -4)-Xyl- p( 1 -CH,-CH
17. 5
CO
17. 6 I
OH
i
17.7
CH,OSO,H
I 1.
OSO,H
17.8
syl, ce qui donne le glycopeptide 17.6. Cest sur lunit 0-D-GlcUA que va main-
tenant se construire la chane du glycosaminoglycane par addition alterne duni-
ts a-D-GlcNAc et P-D-GlcUA. Le motif priodique est alors 17.7. Cette chane
rgulire subit dans lordre, les modifications qui suivent : a) d N-actylation et
sulfation de lazote, qui remplacent -NHAc par NHS0,H ; b) pimrisation en
C(5) qui transforme le rsidu D-glucuronique en L-iduronique ; c) sulfation de
loxygne O(2) du rsidu iduronique ; d) sulfation de la fonction alcool primaire.
La nouvelle chane est principalement constitue dlments disaccharidiques
17.8, mais il y a parfois des arrts en cours de route, si bien que les chanes
deviennent htrognes. Le poids molculaire est 60 O00 - 100 000, mais il y a
ensuite une hydrolyse de certaines liaisons peptidiques et glycosidiques qui don-
nent finalement un mlange de poids molculaire 5 000-25 000.
17.3.3 Dgradation de lhparine
Le motif 17.8 reste dominant. La liaison sulfamique est hydrolyse en milieu
acide et lhydrolyse acide donne le chlorhydrate de la glucosamine comme unique
sucre amin. Le traitement par lacide nitreux en milieu acide donne principale-
ment le disaccharide 17.9. La rupture de la liaison glycosidique et la rgression de
cycle sobservent dj sur le mthyl a-D-glucosaminide, dont le rarrangement
est reprsent schmatiquement la figure 17.1. En raison de linstabilit dun ion
carbnium sur C(2), le dpart dazote est probablement concert avec lattaque
par la liaison C( 1)-O@). La rgression de cycle donne alors un ion oxocarbnium,
qui donne avec leau un hmi-actal instable dans ces conditions. Celui-ci est vite
hydrolys en aldhyde et mthanol.
On sait induire des enzymes capables de dgrader lhparine, lhparinase et
lhparanase, chez la bactrie Flavobacterium heparinum, en cultivant cet orga-
nisme sur des polysaccharides de la mme famille. Le produit de clivage est alors
6HOMe H
OMe
Figure 17.1 Rarrangement dun glycoside damino-sucre par dsamination nitreuse.
OH OSO,H
17.9
17. 10
17.11
le disaccharide 17.10, qui, dans les cas les plus favorables, est obtenu avec un ren-
dement de 80 %. Le lecteur reconnatra une p-limination, premire vue trs
comprhensible, dun oxygne en p dun carboxyle. Elle devrait tre encore plus
facilite par la disposition trans diaxiale des deux substituants qui sliminent,
17.11. Cependant, en lisant les protocoles dextractions, on doit conclure que lh-
parine est stable dans les solutions alcalines concentres chaudes. I1est possible
que la surabondance de changes ngatives au voisinage de H(5) dans ces condi-
tions empche lapproche dune base et la dprotonation.
17.3.4 Le pentasaccharide actif
Lhparine empche la coagulation du sang en sassociant une protine du
plasma, lantithrombine III (AT III). Ceci entrane linactivation dun certain
nombre denzymes impliques dans le processus de coagulation. On dmontre
cette raction in vitro par chromatographie daffinit : on attache de faon cova-
SO,H
OH
O
OH
OH
HS03NH
HS0,-OCH,
17.12
lente la protine AT III de lagarose activ au bromure de cyanogne (voir le
paragraphe 10.4)[6]. On pratique ce couplage en prsence dun excs dhparine
pour protger les sites de AT III impliqus dans la reconnaissance de lhparine.
Si on fait passer au travers dune colonne de cet absorbant agarose-AT III une
solution dhparine dans NaCl 0,2 M, au pH 7.5 (donc sous forme sel de sodium),
on constate que lhparine est retenue. On peut dissocier cette combinaison en for-
ant la concentration saline de lluant (0,2 M -+3 M). Des expriences similaires
avec des fragments dhparine produits par dsamination ou limination enzyma-
tique ont montr que le site de reconnaissance sur lhparine se rduit une
squence de 5 rsidus monosaccharidiques, disposs comme dans le pentasaccha-
ride (synthtique) 17.12. La squence de 17.12 se distingue de la squence prva-
lente par un rsidu glucuronique, sans doute tmoin dune biosynthse incompl-
te, et dune glucosamine trisulfate. Ce troisime sulfate est indispensable pour
lactivit biologique. On peut mettre en vidence la combinaison pentasaccharide
17.12-AT III par chromatographie sur une colonne de Sphade~[~]. Ce type dab-
sorbant prsente des cavits de dimension normalise et retient dautant plus une
molcule quelle est plus petite et peut y rentrer. Les protines sont exclues et sui-
vent pratiquement le front de la solution. La figure 17.2 donne les profils dlu-
tion, avec NaCl O, 15 M (pH 75) comme luant. La protine AT III est rapidement
lue, en A. Le pentasaccharide 17.12, seul, est retard, et sort de la colonne en
B. En chromatographiant un mlange quimolculaire de AT III et 17.12, on nob-
serve quun pic dlution, en A, qui est celui de lassociation 17.12-AT III, qui est
exclue comme AT III.
Figure 17.2 Profils dlution sur Sphadex G-60, de
lantithrombine III etlou de son ligand 17.12, avec
NaCl 0,15 M comme luant (pH 7,5). 25 50 mL
Nous allons esquisser les grandes lignes de la synthse de 17.12. La configu-
ration L-id0 est ralise par inversion de la configuration de C( 5) sur le furanose
17.13. La dsactalation en milieu acide de 17.14 donne le pyranose qui, en un
certain nombre dtapes, est activ par conversion en orthoester 17.15. On obtient
un prcurseur du fragment AB de 17.12 par condensation de cet orthoester avec
la glucosamine protge 17.16. On obtient un prcurseur du fragment CD en
condensant le bromure 17.17 sur lanhydro 17.18. La condensation des deux
disaccharides protgs AB et CD donne le ttrasaccharide prcurseur du fragment
ABCD, auquel lunit monosaccharidique E est ajoute en fin de synthse. La
sufation a lieu en deux temps : la synthse a conduit un pentasaccharide o tous
les hydroxyles sulfater sont actyls, tandis que les prcurseurs des fonctions
amines, azide (introduite avec 17.18) et benzyloxycarbonyle (introduite avec
17.16) sont encore intacts. Aprs dsactylation, on sulfate les cinq hydroxyles
17. 13
OBn
M e O C w J Me
OcMe,
OCOCH,CI
17. 15
C0,Me
BnO =
CH2C1C00
BnO Br
17. 14
BnO
17. 16
HO R0 N3
17. 17
17. 18
Marqueurs tumoraux 27 1
librs par le systme SO, - Me,N dans la dimthylformamide. On introduit
ensuite les fonctions amines par hydrognation catalytique, et on procde la
N-sulfation dans leau (pH 93, avec le mme complexe SO, - Me,NL8] L91.
17.4 MARQUEURS TUMORAUX
17.4.1 Mthode de recherche
Les recherches dcrites dans ce paragraphe et le sont, en fin de
compte, des analyses de la composition des surfaces cellulaires en molcules
diverses. Si elles apparaissent comme la frontire de la chimie organique, cest
parce que la complexit du problme et les difficults exprimentales imposent le
recours aux mthodes trs fines de limmunochimie. Cest aussi parce que les
objectifs sont la rsolution de problmes biologiques ou mdicaux. La voie dap-
proche la plus employe est de susciter chez un animal la formation danticorps
par immunisation avec des cellules entires ou leur membrane. On obtient avec
une cellule dtermine un mlange danticorps, qui sont spars et reproduits
plus grande chelle par la technique des hybridomes (voir le paragraphe 15.2). Un
grand nombre de ces anticorps monoclonaux ont t prpars de cette faon. I1
faut alors dterminer leur spcificit, ce qui nest pas un problme simple. I1faut
disposer dune collection dantignes dont la structure est connue et les essayer
tour tour pour trouver ceux qui se combinent un anticorps monoclonal donn.
Des considrations danalogie chimique ou une intuition biologique ou mdicale
peuvent guider la recherche. Lorsquon a trouv quune molcule est antignique,
il faut reconnatre sa partie active dans la combinaison immunochimique, le dter-
minant. En effet, sur la surface des cellules, ce dterminant pourra sexprimer sur
des molcules diffrentes de celles de lantigne qui a servi caractriser lanti-
corps. Finalement, dans lhypothse optimiste, limmunochimiste a sa disposi-
tion une batterie danticorps monoclonaux, chacun dou dune spcificit parti-
culire, qui permet de prouver lexistence de certains lments de structure sur la
surface dune cellule. Toutes les spcificits dcouvertes de cette faon corres-
pondent des antignes oligosaccharidiques, voisins des antignes des groupes
sanguins ABH. Les dterminants sont ports soit par des glycolipides, soit par des
protines.
Le lecteur pourra mettre en doute la rigueur de cette mthode : on ne pourrait
pas dcouvrir un dterminant radicalement nouveau en testant des anticorps
monoclonaux avec des antignes dj parfaitement connus. On peut, en tout cas,
aprs avoir dcouvert une squence active, la modifier chimiquement ou enzyma-
tiquement de faon crer une structure originale. Si cette modification augmen-
te la ractivit immunitaire, on se rapproche de la spcificit authentique de lan-
ticorps monoclonal sous tude. On peut ainsi dcouvrir un dterminant encore
inconnu. Quoi quil en soit les anticorps monoclonaux ont servi mettre en vi-
dence des diffrences entre cellules embryonnaires et adultes, entre cellules nor-
males et cancreuses. Nous donnerons dans ce chapitre quelques exemples carac-
tristiques et un aperu de certaines techniques exprimentales.
17.4.2 Antignes tumoraux1
Si lon trouve une diffrence de composition caractristique entre la surface
dune cellule tumorale et celle dune cellule normale du mme organe, on peut
esprer fonder sur cette diffrence une raction de diagnostic, ventuellement un
procd dlimination. En utilisant des immunisations avec des types divers de
cellules de tumeurs, on a prpar un trs grand nombre danticorps monoclonaux
dirigs contre leurs molcules de surface. Les dterminants dcouverts jusqu
prsent sont tous des oligosaccharides apparentes aux substances de groupes san-
guins et drivent soit de la charpente soit de la priphrie de ces substances. Ainsi
on observe sur les mtastases des tumeurs du clon (mais non sur les tumeurs pri-
maires) une accumulation des antignes I et i, 17.19 et 17.20. Ils sont lis des
glycoprotines de type mucine, extraites des tissus correspondants.
Galp (1+4) GlcNAc (145) Gal ...
17.19
H - [-3) Galp (1-+4) GlcNAcB (1 -I3 - OH
17.20
On a reconnu lantigne 19.9 grce un anticorps monoclonal obtenu aprs
immunisation de souris avec des cellules dadnocarcinone du clon humain.
Lattachement de cet anticorps ces cellules est inhib par un traitement pralable
avec la neuraminidase, ce qui indique la prsence dun rsidu sialoside terminal
dans le dterminant antignique et suggre de rechercher lantigne parmi les gan-
gliosides. On extrait les glycolipides des cellules et on les spare par chromato-
graphie sur couche mince. Le rvlateur est lanticorps monoclonal, qui nest rete-
nu que sur la tache de lantigne. On reconnat lemplacement de cet anticorps par
combinaison spcifique avec une molcule marque par 1251. Lantigne prsent
sur la cellule tumorale qui a servi limmunisation est un ganglioside 17.21 o
lon reconnat le dterminant antignique des groupes sanguins Lewisa, sialyl
lextrmit non rductrice. Toutefois, dans le srum des malades, le dterminant
antignique est li une glycoprotine. Lantigne 19.9 est absent du clon nor-
mal et utilis en diagnostic.
NeuAc a (2-3)Galp (1-3)GlcNAcP( 1-3)GalP( 14)Gl c Cer
4
Fuc a
17.21
I I
Antignes de diffrenciation 273
Par immunisation avec une ligne de cellules du rat, on a obtenu un anticorps
qui ragit spcifiquement sur le cerveau embryonnaire du rat. Lantigne corres-
pondant appartient donc au groupe des antignes de diffrenciation traits au para-
graphe 17.5. En raison de labondance des structures polysialyles dans ces tissus,
il nest pas tonnant que le dterminant antignique soit un oligosaccharide sialy-
l. Cet antigne est galement prsent dans les gangliosides des cellules de mla-
nomes, o il est trs abondant - ou trs expos. I1est remarquable par la prsen-
ce dune unit terminale non rductrice qui drive de lactate en 9 de lacide
sialique 17.22.
17. 22
On a dcrit un grand nombre dautres antignes de cellules tumorales. Le lec-
teur pourra se reporter aux tableaux donns dans les rfrences[10] Toutefois,
les anticorps correspondants ne doivent tre utiliss en diagnostic quavec discer-
nement. Comme le montre trs bien le dernier exemple, la prsence dun antig-
ne dtermin peut tre caractristique de la prsence dune tumeur dans un type
dorgane et normale dans un autre. La mise au point dun protocole de diagnostic
doit liminer cette cause derreurs.
17.5 ANTIGNES DE DIFFRENCIATION[~~~ 1131 141
Cest le nom donn aux antignes dont lexpression sur la surface des cellules
varie aux cours des tapes successives du dveloppement embryonnaire.
Limmunisation dun animal contre des cellules embryonnaires entires a permis
dobtenir finalement un grand nombre danticorps monoclonaux dirigs contre les
antignes de surface. Ainsi, on a mis en vidence lantigne de Forssman dans
lembryon de la souris ses tout premiers stades. Cet antigne correspond la
squence oligosaccharidique du glycolipide 17.23, mais la structure support pour-
rait tre aussi bien une glycoprotine. Cet antigne nest plus exprim que par
quelques types de cellules chez la souris adulte.
GalNAc a (I -+3) GalNAc p (1 -+ 3) Gal a (1 -+4) Gal p (I + 4) Glc Cer
17.23
Dautres tapes ont t prcises avec laide des anticorps monoclonaux natu-
rels anti-I et anti-i. Le caractre dantignes de diffrenciation des antignes Ii est
fortement suggr par leur ordre dapparition chez lhomme. Lantigne i, dont
lpitope est 17.20, est exprim sur les rythrocytes du nouveau-n, par exemple
dans le sang du cordon ombilical. I1disparat au cours de la premire anne de
lexistence au profit de lantigne I, pitope 17.19. Ces structures sont sans doute
portes la fois par des glycolipides et des glycoprotines. Lordre dapparition
parat rationnel, si on suppose que la ramification rsulte de laction de transf-
rases. Cependant, cest lordre inverse que lon observe au cours du dveloppe-
ment embryonnaire de la souris, comme nous allons le dtailler ci-dessous.
On met en vidence lexpression des antignes de diffrenciation au site mme
o ils se manifestent sur lembryon par observation microscopique des coupes.
Celles-ci sont traites par lanticorps qui se fixe aux sites o se trouve lantigne.
On limine lexcs danticorps par lavage et on visualise sa prsence aux sites o
il a t retenu par combinaison spcifique avec une molcule fluorescente. Cest
lantigne I qui apparat aux stades prcoces, ds le zygote, et lantigne i nap-
parat quaprs cinq jours, au dbut de la diffrentiation visible des cellules[ls~.
Evidemment, lapparition prcoce de loligosaccharide ramifi est surprenante et,
parmi les explications possibles, on a suggr la persistance dans lovocyte dune
glycosyl transfrase maternelle. Un nouvel antigne, SSEA- 1 (Stage Spcijk
Embryonic Antigen), dont lpitope est 17.24, sexprime au stade huit cel-
lules[161. Son expression est transitoire, car il nest plus exprim quen un nombre
restreint de sites chez la souris adulte. Sa structure 17.24 suggre que son expres-
sion est le rsultat de la fucosylation dune unit terminale non rductrice N-ac-
tyllactosamine des antignes i ou I. Une seconde fucosylation, donnant 17.25,
abolit la ractivit vis--vis de lanticorps anti SSEA-I. Ces observations sugg-
rent un mcanisme pour expliquer lapparition et la disparition des antignes
durant les diverses phases de lembryognse : laddition (par des transfrases) ou
llimination (par des hydrolases) dunits monosaccharidiques. De mme, chez
lhomme, les antignes de groupes sanguins, ABH apparaissent sur des organes
varis diverses tapes du dveloppement et, parfois, ne sont plus finalement
dcelables.
Gal p (1 +4) GlcNAc
1:
Gal p ( 1 -4) GlcNAc
3
1: I l
Fuc a Fuca Fuc a
17.24 17.25
On a exprim lopinion que ces antignes de diffrenciation jouent le rle dun
code postal. Ces molcules, par un systme dadhsions, commanderaient la route
que doivent suivre les cellules dun embryon pour arriver leur place et, notam-
ment, se rassembler dans les gros organes. Mais ce trafic doit tre organis par des
e facteurs >> ou des << agents de la circulation . I1faut donc dautres molcules
pour reconnatre ces antignes, rle que pourraient tenir des lectines proximit.
Les slectines 275
17.6 LES SLECTINES
17.6.1 Raction inflammatoire et slectines
I1se produit dans les tissus endommags une mobilisation des leucocytes. Les
leucocytes du flux sanguin sont ralentis, puis arrts le long de la paroi intrieure
(endothliale) des veinules, puis la traversent en sinsrant entre les cellules au
voisinage de la lsion : cest la raction inflammatoire. Cette mobilisation fait
intervenir une multiplicit de molcules dadhsion, rparties en trois groupes, les
intgrines, les superimmunoglobulines et les slectines[l71. Nous nous attacherons
plus particulirement ce dernier groupe. II y a trois slectines E, P et L. La slec-
tine E apparat sur les cellules endothliales ; la slectine P apparat sur la majo-
rit des classes de leucocytes.
Les slectines sont des protines dont la structure primaire a t lucide par
clonage. Elles sont bties de faon analogue (Fig. 17.3). Ce sont des protines
transmembrannaires, dont lextrmit acide baigne dans le cytoplasme tandis que
lextrmit amine est dirige vers lextrieur. Partant de celle-ci, on rencontre
dabord une chane denviron 120 rsidus, le << domaine lectine , qui se rap-
proche des lectines animales (dont leffet dpend de Ca++). Ceci a fait demble
souponner lexistence de ligands oligosaccharidiques. Ensuite vient une squen-
ce de 30 rsidus aminoacides, dite EGF, puis une structure priodique constitue
par un alignement de squences de 62 rsidus (6 pour E, 9 pour P, 2 pour L). Tout
ceci constitue la portion des slectines extrieure la cellule. La squence sui-
vante correspond la traverse de la membrane et la partie cytoplasmique est
beaucoup plus courte. Le nom de slectine rappelle lanalogie de ces protines
avec les lectines animales. Nous choisirons dans limportante documentation sur
les slectines ce qui est relatif la mise en vidence du ligand oligosaccharidique
des slectines E et L.
E P L
Figure 17.3 Architecture des slectines E, P et L. Publi daprs J .M. Harlan et D.Y. Liu,
Adhesion, Its Role in Inflummatory Diseuse, copyright O 1977 by W.H. Freeman and
Company (reproduit avec laimable autorisation de lditeur).
17.6.2 Slectines E
La slectine E nest pas exprime sur les cellules vasculaires endothliales c au
repos . Elle apparat de faon transitoire lorsque lagression des tissus en leur
voisinage entrane la scrtion dune cytokine, polypeptide actif, qui stimule sa
biosynthse. Les endotoxines bactriennes produisent le mme effet. Par contre,
la slectine E serait exprime de faon permanente dans larthrite rhumastismale.
La cellule active accroche (ou freine) un leucocyte par association de ses mol-
cules de slectine E avec un oligosaccharide complmentaire prsent la surface
du leucocyte. On peut aussi activer les cellules endothliales en culture avec la
cytokine. Ceci a permi le clonage de la slectine E et, finalement, son expression
de faon stable dans un autre type de cellules en culture, les cellules CHO
(Chinese Hamster Ovary). Cette ligne, CHO-E sera loutil de recherche pour
dcouvrir le ligand oligosaccharidique complmentaire.
La mthode logique consisterait sparer et isoler tous les oligosaccharides de
la paroi leucocytaire et les tester sparment. Cest rigoureusement imprati-
quable. I1 sagira donc de deviner intelligemment les meilleurs candidats parmi les
sources naturelles accessibles. Une mthode consiste faire adsorber une quanti-
t connue du produit tester par les parois dune cuvette en plastique, recouvrir
avec une suspension de cellules CHO-E, ventuellement marques au tritium, et
doser la radioactivit persistante aprs lavage. Cette mthode se prte des
dterminations semi-quantitatives. Quoi quil en soit, il faut multiplier les essais,
donc les tests doivent tre faciles et rapides. La mthode des << noglycolipides N
se prte bien cette exploration. Cette mthode part de lobservation des propri-
ts analytiques remarquables des glycolipides : ils se sparent trs bien les uns des
autres par chromatographie sur couche mince de gel de silice. 1 se prtent bien
lanalyse de structure par spectromtrie de masse (voir le paragraphe 10.5.1).
Cest pourquoi, si les ligands tester ne sont pas dj des glycolipides, mais des
oligosaccharides obtenus par synthse ou par dgradation de glycoprotines, on
les convertit dabord en analogues de glycolipides, les noglycolipides. Pour cela
on les combine au dipalmitoyle de phosphatidylthanolamine 17.26 par amination
rductrice.
CH,OCOC ,5H31
I
CHOCOC15H3
I
CH,OPO (OH) CH,CH,NH,
17.26
Ceci suppose que Ioligosaccharide a sa fonction aldhhyde potentielle intacte
lextrmit terminale rductrice. Si ce nest pas le cas, lorsque loligosacchari-
de a t obtenu par p-limination alcaline rductrice, il faut faire apparatre une
fonction aldhyde par oxydation priodique (au dtriment de lintgrit de loli-
Les slectines 217
gosaccharide). Ces noglycolipides se sparent par une technique familire aux
chimistes organiciens, la chromatographie sur couche mince de gel de silice, avec
un irrigant assez polaire, CHCI, - MeOH - H,O, 60:35 :8, v/v/v. Aprs la migra-
tion, on << rvle >> la plaque en la recouvrant avec une suspension de cellules
CHO-E qui expriment la slectine E. Sil y a dans le mlange un oligosaccharide
ligand de la slectine E, les cellules viennent adhrer la tache correspondante.
On limine lexcs de cellule par lavage et on repre le site dadhsion en mettant
en vidence les cellules fixes. Diverses mthodes de visualisation sont possibles.
Lune dentre elles utilise des cellules marques au dpart par du tritium et rep-
re donc finalement la position du ligand par autoradiographie. On peut analyser
directement les taches par spectromtrie de masse. On voit lconomie de temps
ralis avec cette mthode, puisquon nanalyse que les structures dj repres
comme actives.
Lobservation de dpart est que les cellules CHO-E sont fortement retenues sur
une glycoprotine riche en carbohydrates dorigine ovarienne. I1y a donc sur cette
glycoprotine des squences oligosaccharidiques qui se combinent la slectine
E. On isole les oligosaccharides par hydrolyse acide et on les convertit en ngo-
lycolipides. La technique de recouvrement dcrite ci-dessus permet alors de
mettre en vidence une fraction particulirement active dans le mlange.
Lanalyse par spectromtrie de masse et methylation indique quil sagit dun
mlange quimolculaire des noglycolipides prsentant les ttrasaccharides sul-
fats 17.27 et 17.28 lextrmit terminale non rductrice. Une tude antrieure
avait montr que les squences des oligosaccharides sialyls 17.29 << 3-sialyl-
Lea B et 17.30 << 3-sialyl-LeX D taient galement reconnues par la slectine E,
mais laffinit de 17.27 et de 17.28 est suprieure.
En tout cas, cela souligne limportance de lanion dans cette reconnaissance
particulire, car le dtachement du rsidu sialique dans 17.29 et dans 17.30 par
lenzyme neuraminidase abolit la raction. La modlisation de la structure des
ttrasaccharides 17.27 et 17.29 indique que leurs groupements anioniques (-SO;
HSO, - 3 Gal (1 - 3) GlcNAc 1 - 3 Gal
I:
Fuc
17.27
HSO, - 3 Gal (I - 4) GlcNAc 1 - 3 Gal
I :
FUC
17.28
NeuAc ( 2 - 3) Gai (1 - 3) GlcNAc (1 - 3) Gal
II
Fuc
17.29
NeuAc ( 2 - 3) Gal (1 - 4) GlcNAc (1 - 3) Gal
II
Fuc
17.30
et CO,) se trouvent sensiblement au mme endroit de la molcule[18]. Enfin, des
modifications du rsidu sialique qui laissent intact le carboxyle, comme le rem-
placement du groupement actylamido par un groupement glycollylamido ou la
destruction de la chane latrale par oxydation priodique, laissent intacte la rac-
tivit.
17.6.3 Slectine L
Cette molcule dadhsion est implique dans la migration des lymphocytes
dans les ganglions lymphatiques priphriques. Par des mthodes analogues
celles du paragraphe prcdent, on observe les plus grandes affinits avec un
mlange dont les composants prsentent les structures de sulfates 17.27 et 17.28.
I1y a cependant des diffrences avec la slectine Eli9].
17.6.4 Synthse des ligands oligosaccharidiques des slectines
La synthse dune collection doligosaccharides sulfats ou sialyls a confirm
que les sulfates taient les meilleurs inhibiteurs. Le plus actif est le pentasaccha-
ride sulfat 17.31, qui est jusqu prsent le meilleur ligand connu de la slectine
E, donnant 50 % dinhibition la concentration trs basse 5.
M[*O].
17. 31
Rfrences 279
RFRENCES
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CHAPITRE 18
Y a-t-il une interaction
de reconnaissance
entre les oligosaccharides et lADN ?
18.1 DONNES DU PROBLME
A la forme interrogative de ce titre, le lecteur aura compris quil sagit dacquis
rcents, dont linterprtation dfinitive nest peut-tre pas assure. Le problme a
t pos par les proprits dune famille dantibiotiques, les calichamicines[] et
espramicines[2], qui ont une cytotoxicit puissante et sont antitumorales. Nous
consacrerons essentiellement ce chapitre la calichamicine y:, la plus tudie,
que nous dsignerons simplement par le mot calichamicine. Sur la structure 18.1
de ce compos, le lecteur reconnatra plusieurs lments exceptionnels. Cest
avant tout un glycoside, dont laglycone bicyclique, la calichamicinone, contient
un systme ne-diyne dans un cycle 10 carbones. On notera aussi le rare encha-
nement trisulfure. La partie oligosaccharidique est galement trs particulire. Le
rsidu B est glycosid par une hydroxylamine, si bien que la liaison entre A et B
est un pont -NH-O. Les rsidus B et D sont lis par lintermdiaire dun benzne
compltement substitu, C.
La cytotoxicit de la calichamicine et de ses congnres est due une ruptu-
re, apparemment irrparable, de la double hlice de lADN, consquence dune
transformation remarquable de laglycone. On peut lobserver en labsence
dADN. Le traitement de la calichamicine en solution dans CD,C12 par la tri-
phnylphosphine donne le produit 18.2 (o R reprsente le rsidu oligosacchari-
18.1
Donnes du problme
dique), avec un atome de deutrium chacune des positions x et y.
Linterprtation est la suivante : le ractif coupe le trisulfure, en sparant latome
de soufre du ct de laglycone, qui se trouve alors sous la forme thiolate.
Laddition de Michael du thiolate sur la cyclohexnone engendre le dihydrothio-
phne, 18.3. Dans cet intermdiaire, le systme ne-diyne est dstabilis et il se
cyclise en biradical benznique, 18.2, o x et y reprsentent, cette fois, des lec-
trons clibataires, principalement localiss en ces deux sites. Ce biradical arrache
deux atomes de deutrium au solvant.
Avant dexaminer laction sur lADN, nous rappellerons quelques conventions
dcriture dans ce domaine. Les majuscules A, G, C et T reprsentent respective-
ment les monosphosphates de la 2-dsoxyadnosine, la 2-dsoxyguanosine, la
2-dsoxycytidine et la thymidine (voir le paragraphe 3.6.3). Le symbole TCCT
reprsente un fragment dADN de quatre nuclotides, o chaque nucloside est
reli son voisin par un pont phosphodiester entre la fonction alcool en 5 de lun
des sucres et en 3 de lautre. Les primes sont rserves aux numros des carbones
du dsoxyribose. La notation STCCT signifie que le pont phosphodiester relie la
fonction alcool en 3 dun nucloside la fonction alcool en 5 du suivant, dans
lordre de la lecture. Cette convention sapplique bien sr nimporte quelle lon-
gueur ou composition du polynuclotide. Dans la double hlice de lADN, deux
chanes de polynuclotides sont associes, avec la correspondance bien connue
des bases en vis--vis : adnine-thymine, guanine-cytosine. Au ttranuclotide
TCCT correspond AGGA. Les deux chanes sont disposes en sens inverse, si
bien que, sur cette dernire squence, lue dans cet ordre, le pont phosphodiester
relie la fonction alcool en 5 dun nucloside la fonction alcool en 3 de celui qui
suit. En consquence, le symbole complet est 3AGGA. La figure 18.1 reprsente
un fragment dADN en double hlice, o lon a reprsent plus prcisment les
ttranuclotides complmentaires, STCCT et 3AGGA, qui jouent un rle dans les
phnomnes dcrits ci-dessous. Lidentit des autres nuclotides, N, na provisoi-
rement pas besoin dtre prcise. Laglycone de la calichamicine se loge dans le
petit sillon entre les deux chanes polynuclotidiques, de la faon indique par le
282 Y a-t-il une interaction de reconnaissance entre les oligosaccharides et lADN ?
Figure 18.1 Localisation de la calichamicine dans le
petit sillon de la double hlice. Extrait de M. D. Lee, G.A.
Ellestad et D.B. Borders,Acc. Chem. Res., 24 (1991) 235-
243 (publi avec laimable autorisation de Accounrs of
chemical Researtch ; O 1991 American Chemical
Society).
SGGGTCCTAAATT3
3CCCAGGATTTAAS
18.4
O-PO(0H)-O-
18. 5
trait ondul. Laddition dun thiol rducteur amne alors la rupture des deux
chanes polynuclotides, sur lune au niveau de la cytidine marque par une
flche, et sur lautre, au niveau dun nucloside non spcifi, situ deux units
nuclotides au-del de ladnosine, vers le ct 3. Ces ruptures sont amorces par
larrachement dun atome dhydrogne du dsoxyribose par le biradical 18.2 (x et
y , lectrons clibataires). On a pu le montrer directement avec un systme plus
simple pour la rupture au niveau de la cytidine. On a prpar par synthse le
<< duplex >> de dodcanuclotides 18.4. Lunit cytidylique C est marque en 5 sur
le dsoxyribose par du deutrium de la faon reprsente par la formule partielle
18.5. Aprs avoir fait ragir la calichamicine sur le fragment dADN 18.4, on
recueille le produit de transformation 18.2 marqu par du deutrium sur la posi-
tion x (x =D, y =H). Le carbone correspondant x sur le systme ne-diyne est
donc celui qui se trouvait proximit de la cytidine dans lassociation de la double
hlice avec la calichamicine. Dautres expriences confirment que des protons
non changeables de lADN sont bien la source des hydrognes introduits en x et
y , mais elles ne permettent pas de dfinir leur emplacement sur les polynuclo-
tides. Dans un tampon deutr, la transformation de la calichamycine, amorce
par le thiol deutr DSCH,COOCH, donne le compos 18.2 (20 %), avec plus de
98 % dincorporation de deutrium aux positions x et y . La mme exprience, en
Les synthses du pseudo-oligosaccharide de la calichamicine 283
prsence dADN, donne 18.2 (65 %), avec uniquement de lhydrogne ces
mmes positions. Donc ces atomes dhydrogne proviennent de sites non chan-
geables de lADN. La rupture aprs enlvement dun atome dhydrogne en 5
conduit probablement laldhyde 18.6, car le fragment restant perd un driv de
la cytosine en milieu basique, sans doute par p-limination.
Ce mcanisme gnral de la rupture ne fait pas intervenir explicitement le
pseudo-oligosaccharide et ]aglycone seule devrait avoir les mmes proprits. On
ne peut pas sparer celle-ci, la calichamicinone 18.7, de Ioligosaccharide sans la
dgrader, mais on la obtenue sous forme racmique par une synthse totale assez
laborieu~e[~]. Cette synthse est en dehors du cadre de notre livre. La calichami-
cinone est effectivement capable de couper lADN en double hlice, mais de
faon anarchique. Dautres diffrences de comportement entre le produit naturel
et Iaglycone montrent que la partie pseudo-oligosaccharide a une grande impor-
tance. Nous les examinerons plus en dtail au paragraphe 18.3, tandis que le para-
graphe 18.2 commentera la synthse du pseudo-oligosaccharide exceptionnel.
I
O-PO(0H)-O-
18. 6 18. 7
18.2 LES SYNTHSES DU PSEUDO-OLIGOSACCHARIDE
DE LA CALICHEAMICINE
18.2.1 Voie DCBAEL4]
Lordre dassemblage est le suivant :
D+ C+ DC
DC +B -+ DC B
A+ E+ AE
Les prcurseurs des units monosaccharidiques ABDE sont des drivs de gly-
cals, mais chacun est utilis dune faon diffrente. Lhydroxylamine substitue
entre les rsidus A et B est protge sous forme de driv urthane pour empcher
un rarrangement du rsidu A que nous dtaillerons plus loin. Le prcurseur de
lunit D est le di-O-actyl-L-rhamnal 18.8, qui donne le benryl glycoside 18.9 en
prsence dalcool benzylique et de BF, - Et,O par rarrangement de Ferrier (voir
le paragraphe 7.5.1). La fonctionnalisation dfinitive de 18.9, pour donner 18.10,
demande quatre tapes, parmi lesquelles il y a une bis hydroxylation de la double
liaison avec le ractif OsO, - N-mthylmorpholine-N-oxyde-eau. Aprs actyla-
tion et dbenzylation catalytique on active le sucre par conversion en trichloroa-
ctimidate 18.11. Le prcurseur du cycle C est le diiodophnol 18.12, selon un
schma ractionnel suggr auparavant[5] c 6 ] . Le couplage avec le trichloroacti-
midate 18.11 donne la-L-phnyl glycoside 18.13, en raison de la participation de
la fonction actate en 2. On remplace celle-ci par un groupement ter-butyldim-
thylsilyle, puis on introduit le groupement mthoxycarbonyle en traitant le diio-
dophnol par un mlange de mthanol et de monoxyde de carbone, dans une rac-
tion catalyse par lactate palladeux, en prsence de la diphosphine Ph,P
(CH,),PPh, et de trithylamine. Le driv mthoxycarbonyle 18.14 est ensuite
transform en chlorure dacide, 18.15. On a ainsi le fragment CD sous une forme
prte au couplage ultrieur.
Le prcurseur du rsidu B est le glycal 18.16. Celui-ci possde une fonction
thiol protge par un groupement dinitrophnyl (DNP) et un hydroxyle protg
par un groupement ter-butyldimthylsilyl. Laddition de lhydroxylamine substi-
tue Me,SiCH,CH,OCONHOH sur la double liaison, en prsence de quantits
catalytiques de Ph,P. HBr donne lurthane 18.17. On libre alors la fonction
thiol, ce qui donne 18.18, qui se condense sans difficult sur le chlorure dacide
18.15. On arrive ainsi une version protge du fragment DCB, jusque et y com-
pris latome dazote, 18.19.
18.8
18.9
18.10
FH3
18.11
WH,
18.12
Les synthses du pseudo-oligosaccharide de la calichamicine
OTBS
OR
18.13 R =AC, R =I
18.14 R =TBS, R =CO,Me
18.15
R =TBS, R =COCl
18.16
RS -ONHCOOCH2CH2SiA4e3
OTBS
18.17 R=DNP
18.18 R =H
Le prcurseur de lunit A est le glycal 18.20, prpar partir du D-fucose,
dont un hydroxyle est protg par le groupement paramthoxybenzyle (PMB). Le
traitement par le 2,2-dimthyldioxirane donne Ioxirane 18.21 (un anhydride de
Brigl), qui est trs facilement converti en glycoside trans, 18.22, par simple
mlange avec lalcool paramthoxybenzylique la temprature ambiante. Des
deux hydroxyles libres de ce glycoside, seul lquatorial est ractif dans le cou-
plage conscutif.
286 Y a-t-il une interaction de reconnaissance entre les oligosaccharides et l'ADN ?
H3
18. 20
HgJ
O
18. 21
HO
OPMB
PMBO
OH
18. 22 18. 23
R'O
PMBO omm
P
PhtN e
18. 24 R =I, R' =H
18. 25 R =R ' =H
18. 26 R =H. R =Tf
Le glycal 18.23 est le prcurseur du rsidu E. I1possde une fonction amine
protge par transformation en driv phtalimido (abrg en Pht). I1se condense
avec le glycoside 18.22 en prsence du complexe I T104 (syrn-collidine)2 pour
donner le disaccharide 18.24. Liode est remplac par de lhydrogne par rduc-
tion avec le triphnylstannane. Sur ce compos, 18.25, lhydroxyle libre est acti-
v par conversion en trifluoromthanesulfonate 18.26. On a ainsi prpar le frag-
ment AE.
Le pont exceptionnel -N-O- entre les fragments AE et DCB est construit par
raction de ce trifluoromthanesulfonate 18.26 sur le sel de sodium de lurthane
18.19, en solution dans la N, N-dimthylformamide. I1 termine lassemblage du
pseudo-ttrasaccharide. Lenlvement des groupements paramthoxybenzyle par
oxydation donne un produit encore partiellement protg, 18.27 avec la fonction
hmi-actal libre pour le couplage ventuel laglycone.
La protection de lazote par drivation en urthane appelle quelques commen-
taires. Lunit A nest stable que glycosyle. Si lhydroxyle anomrique est lib-
r, cette unit se transforme en pyrrolidinose, selon la raction (1 8.1). La driva-
tion en urthane, inspire dun travail antrieur[7], a une double utilit : la
proximit du carbonyle facilite la dprotonation de lazote et le 4-amino-4-doxy-
hexose rsultant de la libration de la fonction hmi-actal est protg sur lazo-
te, ce qui vite sa transformation en pyrrolidinose. Aprs engagement de lhmi-
actal en liaison glycosidique, on effectue la dprotection de lazote de
lhydroxylamine de faon pratiquement quantitative avec le fluorure de ttrabuty-
lammonium.
(18.1) . - O - * , , - T T O H
OR
18.2.2 Voie EABCD[51. L6]
On prpare le prcurseur 18.28 du rsidu E partir de la L-srine. La fonction
amine secondaire est protge par drivation en 9-fluornylmthylcarbamate
(R =C,,H,CH,OCO), que lon peut liminer dans des conditions alcalines mod-
res. Le couplage du fluorure de pyranosyle 18.28 avec 18.29 utilise AgC10,
(2 quivalents) et SnC1, ( 2 quivalents) comme promoteurs ( al p =4,5 :l). On
obtient ainsi le fragment AE. On libre le systme cis-diol, qui est oxyd slecti-
vement en hydroxy-ctone 18.30. La liaison BA est alors ralise par loximation
de cette ctone par une glycopyranosylhydroxylamine, ce qui donne 18.31. En rai-
son de linstabilit du rsidu A non glycosid dj mentionne, il faut conserver
OMe OH
18. 29
18. 28
18. 30
18. 31 R =Aroyl
P N
18. 32 R=CS- N
18. 33 18. 34
la fonction oxime jusquaprs le couplage. Elle est alors rduite par le cyanobo-
rohydrure au pH 3. Pour en revenir 18.31, le produit a t prpar pour lintro-
duction du soufre en position 4 du trisaccharide EAB. On remplace le groupement
aroyl par un thiocarbonylimidazole et le thionocarbonate 18.32 est isomrise par
thermolyse en thioester en 4 (98 %), par rarrangement sigmatropique 3,3.
Lassemblage final a lieu comme dans la synthse prcdente, par couplage dun
chlorure dacide li au fragment CD au thiol libre li EAB.
18.2.3 Mthodes alternatives[8] [O]
La glycosidation de loxime 18.33 par un phnyl pyranosyl sulfoxyde G-SO-
Ph, en prsence de triflate de trimthylsilyle a lieu sur O(2) avec isomrisation du
ctal, donnant 18.34. La rduction de 18.34 par le cyanoborohydrure donne uni-
quement la configuration a-D-gluco, 18.35, hydrolysable en hydroxylamine libre.
La nitrone 18.36 obtenue en traitant cette hydroxylamine par le para-anisaldhy-
de est glycoside par un halognure de pyranosyle exclusivement sur loxygne
(80 %O).
Une voie daccs simple lunit B part du glycal du D-fucose, qui donne le
glycoside 18.37 par traitement au mthanol en prsence dacide. Celui-ci est sily-
l slectivement en 3 par lintermdiaire du stannylne, donnant 18.38, puis
converti en trifluoromthanesulfonate, 18.39. On introduit le soufre en 4 avec
inversion de configuration par substitution nuclophile avec PhCOSK, dans la
N-N-dimthylformamide 0C (80 %), 18.40. Aprs hydrolyse de lther sily-
lique, on convertit 18.40 en trifluoromthanesulfonate 18.41. La solvolyse par
leau a lieu avec participation du groupement benzoyl, ce qui entrane une inver-
sion de configuration et une migration de benzoyl, pour donner la configuration
souhaite, 18.42. Ces mthodes alternatives ont permis de prparer lanalogue du
trisaccharide ABE prsent dans Iespramycine
18. 35
RO
OMe
18. 37 R =R =H
18. 38 R =ter-BuSiMe2, R =H
18. 39 R =ter-BuSiMe2, R =Tf
18. 36
Bz s -
OMe
18. 40 R =H
18. 41 R=T f
OBz OMe
18. 42
18.3 RECONNAISSANCE DU PSEUDO-TTRASACCHARIDE
PAR LADN
La raction de la calichamicine avec la double hlice de lADN se distingue
de faon significative de celle de son aglycone isole[].
18.3.1 Rupture de un ou deux brins
Le substrat est un ADN circulaire << super-enroul , << forme I , o la double
hlice est referme sur elle-mme par liaisons covalentes. Lun des ADN grand
cycle utilis tait long de 9 O00nuclotides. La rupture dun seul brin produit la
<< forme II , ou entaille, et la rupture sur chaque brin, en des sites proches, la
<< forme III , linaire (Fig. 18.2). On sait sparer et doser ces trois formes par
lectrophorse sur gel. Avec la calichamicine, en dbut de raction, le rapport
rupture de deux brins sur rupture dun seul brin est 1:2. Avec la calichamicino-
ne, ce rapport tombe 1:30 ; la rupture dun seul brin prdomine.
I I I I I I
Figure 18.2 Reprsentation schmatique des formes I, II et III de lADN.
18.3.2 Efficacit compare
Le mme substrat et la mme technique permettent de comparer lefficacit de
la calichamicine et de son aglycone spare. En prsence dun thiol rducteur, la
calichamicine produit dj une dgradation importante la concentration
0,7 nM. A la concentration 1,5 pM, il ne subsiste plus que des petits nuclotides.
La calichamicinone produit une rupture observable la concentration 13 pM.
18.3.3 Spcificit du site dattaque
On a reconnu demble que la rupture de chane par la calichamicine avait lieu
au niveau de certains enchanements de ttranuclotides comme TCCG, TCCT,
GCCT. Pour tudier ceci on a prpar par synthse le polynuclotide 18.43, 53
paires de bases, dont on na reprsent que lun des brins. Ce polynuclotide
S-TTTAACCGATCAGAATTCCGGTGCATGCATGCTCCTAAGTGTACGCCTAAGCTTCTT
18.43
Rfrences 291
incorpore les sites prsums dattaque, souligns par des caractres gras. I1a t
marqu radioactivement sur les deux brins de son extrmit 3, par un procd que
nous ne dtaillerons pas ici. Aprs la rupture, les morceaux sont spars par lec-
trophorse sur gel et reprs par radioautographie. On observe effectivement les
morceaux correspondant la rupture au niveau TCCT, mais les autres points de
fragmentation ne sinterprtent pas aussi facilement. Dans dautres exp-
riences[*], avec un autre type denchanement polynuclotidique, on a observ
des fragmentations prfrentielles dautres niveaux, ainsi aux squences
STTCA ; STTTT ; STTGT. Dans les deux cas, les coupures prfrentielles limi-
tent le nombre de polynuclotides de rupture et llectrophorse sur gel ne rvle
quun petit nombre de composs. Par contre, la rupture est anarchique avec lagly-
cone et ceci se traduit par la prsence dun grand nombre de taches dintensit uni-
forme.
18.3.4 Conclusion
Ces rsultats suggrent une relation de reconnaissance entre certains enchane-
ments nuclotidiques de la double hlice et le pseudo-oligosaccharide. Celui-ci
interviendrait pour acheminer laglycone ractive vers un site particulier et, peut-
tre aussi, en ce site, lui donner lorientation prcise la plus favorable la ruptu-
re double brin. Une estimation grossire suggre que laffinit de la calichamici-
ne pour la double hlice est de lordre de trois ordres de grandeur plus leve que
celle de la calichamicinone. Le mthyl glycoside du pseudo-oligosaccharide, en
occupant un site particulier sur la double hlice, le protge contre des agressions
extrieures, par exemple la coupure par la calichami~inone[~I et la dsoxyribo-
nuclase, enzyme de dgradation hydrolytique gnrale de On peut se
demander quels sont les lments fondamentaux dans la structure du pseudo-oli-
gosaccharide. I1 y a quelques rsultats suggestifs : la spcificit de la coupure reste
inchange si on supprime les rsidus D ou E. Par contre, la calichamicine T, pro-
duit artificiel o ne restent plus que les sucres A et E, nagit qu une concentra-
tion beaucoup plus leve que le produit naturel, et de faon non slective. Un
problme en suspens est celui de la capacit de reconnaissance du noyau aroma-
tique. I1est maintenant certain que latome diode joue un grand rle dans linter-
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[14] K.C. Nicolaou et coll., J. Am. Chem. Soc., 114 (1992) 7555-7557.
[15] Tianhu Li et coll., J. Am. Chem. Soc., 116 (1994) 3709-3715.
1494- 1496.
4513-4516.
88 (1991) 7464-7468.
7554.
Index
Cet index ne fait pas double emploi avec la table des matires et nous conseillons de
consulter celle-ci en priorit. La majorit des composs cits dans le livre ont t indexs.
Nous avons utilis le nomdusage courant au laboratoire, par exemple, N-actylglucosa-
mine, chaque fois que possible. Les autres produits sont classs par configuration. Les
noms donns sont ceux de la nomenclature officielle, ce dtail prs que le descripteur de
configuration devrait suivre et non prcder les termes de substitution.
A
Actimidates, 162- 163
Actoxyoxanes, nergies libres conforma-
N-Actylgalactosamine, 6
N-Actylglucosamine, 6
N- Acty llactosamine
tionnelles, 27
synthse chimique, 157
synthse enzymatiques, 17 1, 175
N-Actylmannosamine, 6
Acide N-actylneuraminique (voir aussi
chapitre 12), RMN du proton, 24, 25,
198
9-O-actyl
dans les oligosaccharides des mla-
nomes et du cerveau embryonnaire
du rat, 273
synthse enzymatique, 202
Acides amins de la jonction sucre-protine,
Adnosine, 67
217
diphosphate, 85-86
triphosphate, 85-86
Adhsion (molcules d), 275
Agarose, 171
Agglutinines froides, 258
a- D- Aiiofuranose
3-azido- 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne,
1,2 ; 5,6-di-O-cyclohexylidne-3-C-
1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne-3-O-tosyl,
110
mthyl, 120
110
a+- Allopyranoside
mthyl, complexation de Ca++, 180
mthyl 2-actamido-4,6-0-benzylid-
ne-2-doxy, 117
mthyl 2,3-anhydro-4,6-0-benzylidne,
a-D- Allopyranosyl-a-D-allopyranoside,
Altona-Sundaralingam(convention), 42
a-D-Altropyranoside, mthyl 3,4-anhydro,
Amylopectine, 187
Anticorps
catalytiques, 243
monoclonaux, 239
polyclonaux, 238
19.9, et diagnostic du cancer, 272
A priodique, 255-256
dans le dveloppement embryonnaire,
Forssman, 273
P, 256
sur les cellules cancreuses, 272
113
complexe calcique, 179
isomrisation, 114
Antignes
273-274
SSEA-1,274
T, 255-256
Antithrombine III, association au site actif
Apiose, 120
P-D-Arabinopyranosyle, chlorure, tri-O-
actyl, RQN de 35Cl, 34
Autoimmunes (maladies), 258
Azidonitration. 164
de lhparine, 268
B
Benzoquinone, 2,3-dichloro-5,6-dicyano,
Bismuth, diactyltriphnyl, 82
Butane, conformation, 28
81
294 Index
C
Calichamycine y;, 280
Calichamycinone, 280
Cramide, 2 13
Chiron (mthode), 133
Chitine, 264-265
Chondrotine, 223
Chromatographie
daffinit
dhparine et de son site actif, 269
des lectines, 245-246
dexclusion, sur gel, pour Iantithrombi-
ne III, 269
sur couche mince pour les noglycoli-
pides, 276
sur changeur danions, pour isoler lh-
parine, 266
sur changeur de cations
en plaques, 179
sur colonne prparative, forme Ca++,
12, 181
Claisen, rarrangement, 124-125
Couplage I3C - H, et effet anomrique,
Cycloaddition, paramtres thermodyna-
Cyclohexanone, 2,3,4-tribenzoyloxy-5-
Cyclopentadinyltitane, trichlorure, 127
Cytidine, 67
35
miques en phase aqueuse, 195
hydroxy, 120
diphosphate, 206-207
5-monophosphate, 206-207
5-monophosphosialic acid, 205-206
5-monophosphosialic acid synthtase,
triphosphate, 206-207
205-206
D
Dermatane sulfate, 223
Dsoxyadnosine, 67, 28 1
Dsoxycytidine, 67, 281
Dsoxyguanosine, 67, 281
Dsoxyribose, 8
composition tautornrique dans leau, 15
Dterminant antignique (voir aussi pito-
pe), 240
Dimthoxymthane, conformation, 35
Dimthyldioxirane, dans lpoxydation
Dimthylsulfoxoniummthylure, 1 22
Dithiane, 12 1
des glucals, 53
E
mobilit des cations complexs, 180
sur papier, 179
Endoglycosidases, 147- 148
Epimrase, 170- 17 1
Epitope, 240
D-Erythrose, 94
Electrophorse
F
Fischer, convention, 6-8
FK 506, diverses reprsentations, 134
Fonction de distribution radiale de leau.
a-D-Fructofuranose 1 ,o.diphosphate
182
biosynthse, 19
composition tautornrique dans leau.
P-D-Fructopyranose 1,2 : 1,2-dianhydri-
P-D-Fructopyranoside, mthyl, vitesse
P-D-Fructopyranosylarnine, N-aryl, 65
D-Fructose, 7
15
de, complexes mtalliques, 179
dhydrolyse 100C, 56
composition du mlange de mthanoly-
composition tautornrique dans leau,
dichrosme circulaire, 13
composition tautornrique dans leau, 15
a-~-Fucp- ( 1 -2)-P-~-Gaip -( 1-4)-a-D-
GlcNAc-( 1-OBn), driv partiellement
protg, 260
se acide, 47
15
D-Fructose, 1 -doxy
a-L-Fucopyranose, tri-O-benzyl, 62
a-L-Fucopyranoside, mthyl, RMN du
proton, 24, 25
tri-O-benzyl, 62
vitesse dhydrolyse 100C, 56
a-L-Fucopyranosyle
bromure, tri-O-benzyl, dans la synthse
chlorure, tri-O-actyl, RQN de 35Cl, 34
composition du mlange de mthanoly-
des trisaccharides Lea et B, 259
L-Fucose, 7
se acide, 47
Fucosyltransfrase, 173
0.-1,2, 174
a-1, 314, 174
Frst-Plattner, rgle, 1 13
Index 295
G
D-Galactal
conversion en talose, 1 18-1 19
tri-O-actyl, azidonitration, 164
a-D-Galactofuranoside, mthyl, 45
P-D-Galactofuranoside, mthyl, prpara-
a-D-Galactopyranose, I ,2 : 3,4-di--iso-
tion, 48
propylidne
prparation, 87
RMN et conformation, 26
o-doxy, 95
6-O-tosy1, 95, I10
a-D-Galactopyranoside
aryl, comme galactosylant enzymatique,
comme accepteur enzymatique, 61
mthyl, 45
mthyl 4-O-benzoyl-6-bromo-6-doxy,
mthyl4,6-O-benzylidne, 88
mthyl 3,4-O-isopropylidne, 87
paranitrophnyl, comme galactosylant
vitesse d'hydrolyse acide 100"C, 56
benzyl, 84
benzyl, 2-actamido-2-doxy, prpara-
tion, 11 1
benzyl, 3-O-allyl-2,4-di-O-benzyl, 26 I
benzyl, 3-O-benzy1, 84
benzyl, 2,6-di-O-benzyl, 91
mthyl, 45
RMN du proton, 23, 25
mthyl 3-0-allyl-2,4,6-tri-O-triflyl, sub-
stitution, I09
paramthoxybenzyl, 6-doxy-3-O-para-
mthoxybenzyl, 286
61
88
enzymatique, 175
P-D-Galactopyranoside
a-D-Galactopyranosyle
zyl, couplage, 167
couplage, 49-50, 167
doxy, couplage, 260
34
doxy, 164
bromure, 6-O-actyl-2,3-4-tri--ben-
bromure, ttra-O-actyl, prparation et
bromure, 3,4,6-tri-O-actyl-2-azido-2-
chlorure, ttra-O-actyl, RQN de %2c1,
nitrate, 3,4,6-tri-O-actyl-2-azido-2-
P-D-Gaiactopyranosyle
chlorure, ttra-O-acetyl, RQN de "Cl,
34
chlorure, 3,4,6-tri--actyl-2-azido-2-
phnylsulfoxyde, ttra-O-benzyl, cou-
doxy, 164
plage, 166
D-Galactose, 6
adaptation l'eau, 193
composition du mlange obtenu par
composition tautomrique dans l'eau,
2,3,4,6-ttra-O-mthyl, 148
175
plage osidique, 175
mthanolyse acide, 47
15
a-Galactosidase, en couplage osidique.
P-Galactosidase, de B.circuZuns, en cou-
Galactosyltransfrase, 169- 17 1
a-D-Galp-( i -3)-a-D-Gaip-( i -OMe), syn-
thses enzymatiques, 61, 175
hepta-O-benzyl ther, synthse, 166
P-D-Gaip-( i -4)-P-~-GlcNAcp-( 1 -~)-[P-D-
GICNACp-( I -3)]-P-~-Gaip-( I -4)-P-D-
Glc-( 1 -0Me)
prparation, 172
RMN du proton, 155
mtrie f.a.b., 151
Gangliosides, des granulocytes, spectro-
Globoside, 256
D-Glucal, 119
2-actoxy-3,4,6-tri-O-actyl, 135
tri-O-actyl, 1 19
tri-O-benzyl, poxydation, 53
1,3 ; 2,4 ; 5,6-tri-O-benzylidne, 87
1,2 ; 3,4 ; 5,6-tri-O-isopropylidne, 88
a-D-Glucofuranose, 1,2 ; 5,6-di-O-isopro-
pylidne, 87
alcoolate avec le chlorocyclopentadi-
3-azido-3-doxy, 109
3-O-(truns-butadinyl), cycloaddition,
3-O-imidazyl, substitution, I I0
3-O-tosyl, inertie, 1 1 0
complexe avec le periodate, 92-93
D-Glucitoi
nyltitane, 127
130
a-o-Glucofuranose, 1 ;2-O isopropylidne,
P-D-Glucofuranoside, thyl, hydrolyse, 56
a-D-Glucopyranose
2-actamido- I ,3,4,6-ttra--acty1-2-
doxy, 162
1,2-anhydro, prparation, conversion en
glycoside, 53
296 Index
B-D-Glucopyranose
2-actamido- 1,3,4,6-ttra-O-actyI-2-
doxy, 162
3-O-actyl- 1,6-anhydro-2-azido-2-
doxy, dans la synthse du site actif
de l'hparino, 270
I,o-anhydro, 52
1,6-anhydro-2-O-tosyl, conversion en
poxyde, 112
penta-O-actyl, 116
conversion en bromure, 49
en glycosidation, 49, 161
hydrolyse slective, 83
isomrisation avec SbCI,, 116
1,3,4,6-ttra-O-actyl-2-bromo-2-
doxy, substitution radicalaire, 124
D-GlUcOpyranOSe, 2,3,4,6-ttra-O-actyl,
a-D-Glucopyranoside
83
benzyl 6-O-actyl-3-O-benzyl-2-benzy-
loxycarbonylamido-2-doxy, dans la
synthse du site actif de l'hparine,
270
benzyl 2,3,6-tri-O-benzyl, trans buta-
dienyl ether, cycloaddition, 129
mthyl, 48
cintique de l'hydrolyse 100C, 56
rnthyl 2-actarnido-4,6-O-benzylid-
ne-2-doxy-3-O-msy1, conversion
en driv d o , 1 17
mthyl 4,6-O-benzylidne, 87
mthyl 4,6-0-benzylidne-2-O-tosyl,
conversion en oxirane, 112
mthyl 2,3 ; 4,6-di-O-cyclohexylidne,
88
mthyl ttra-O-actyl, 5 1
mthyl 3,4,6-tri-O-actyl-2-bromo-2-
mthyl 6-O-trityl, 81
phnyl, cintique de l'hydrolyse
phnyl ttra-O-actyl, 5 1
benzyl 2-actamido-3-O-actyl-2-doxy-
4,6-di-O-msyl, inversion de configu-
ration, 111
benzyl 2-actamido-4,6-0-benzylidne-
2-doxy, glycosidation, 167
benzyl 3-0-benzyl-4,6-0-benzylidne-
2-O-imidazyl, raction SN2, 1 I l
benzyl 4,6-0-benzylidne-2-doxy-2-
phtalimido, glycosidation, 167
doxy, 11 9
100C, 56
fi-D-Ghcopyranoside
ter- butyl, vitesse d'hydrolyse I OOT ,
thyl, vitesse d'hydrolyse 100C, 56
mthyl, vitesse d'hydrolyse lOO"C, 56
mthyl 2-actamido-2-doxy, vitesse
mthyl 3,4,6-tri-O-actyl-2-chloromer-
mthyl 2-amino-2-doxy, vitesse d'hy-
mthyl 2,3-di-O-benzyI-4,6-O-benzyli-
mthyl 2,3,6-tri-O-benzyl, 89
paranitrophnyl, hydrolyse chimique et
phnyl ttra-O-actyl, prparation, 5 1
phnyl ttra-O-benzyl, 89
trimthylmthyl, vitesse d'hydrolyse
IOO'C, 56
P-D-Glycopyranosylamine et drivs N-
substitus, 63
2-actamido-tri-O-actyl-2-doxy,
56
d'hydrolyse 100C, 56
curi-2-doxy, 119
drolyse 100C, 56
dne, 89
enzymatique, 58
conversion en l,o-anhydro, 52
amide avec l'acide aspartique, 64
a-D-Ghcopyranosyle
bromure, ttra-O-actyl, conversion en
actoxyglycal, 135
en glycosylation, 161
doxy, 119
bromure, 3,4,6-tri-O-acty1-2-bromo-2-
chlorure, 2-actamido-3,4,6-tri-O-ac-
chlorure, ttra-O-actyl, 11 6
tyl-2-doxy, 64, 162
en glycosylation, 161
RQN de 35Cl et conformation, 33-34
fluorure, 4-O-actyl-2,3-di-O-benzyl-6-
O-(ter butyldiphnylsilyl), en glyco-
sidation, 164
phosphate, 170
phosphate, ttra-O-actyl, 86
P-D-GhCOpyranOSyk
azoture, 2-actamido-3,4,6-tri-O-actyl-
chlorure, ttra-O-actyl, isomrisation
chlorure, tri-O-actyl-2-doxy-2-phtali-
phosphate, ttra-O-actyl, 86
RQN de 35Cl, 33-34
adaptation l'eau, 192-193
aldhydo, hydrat, 10
2-doxy, 64
en driv ido, 116
mido, 162
D-Glucose, 6
Index 297
composition du mlange de glycosida-
2,3 ; 5,6-di-O-isopropylidne, dimthyl
5,6-di-O-mthyl, dichrosme circulaire,
mutarotation, 4
2,3,6-tri-O-mthyl, 148
6-phosphate, 85-86
RMN du proton, 5
tomres, 14
benzyl P-D-pyranoside, 2-benzyloxycar-
a-D-fUranOSe, mthyl ester, 3-O-benzyl-
Glucuronosides, synthse enzymatique,
D-Glycraldhyde, 6
Glycerol, tripivalate et pivaloyloxonium,
Glycosidases, 59
Glyoxylique (acide), ester butylique,
GMI, 214,215
Groupes sanguins
tion, 47
15
actal, 158-159
13
[ I - 13C]-~-Giucose, RMN de I3C des tau-
D-Glucuronique (acide)
bonylamido-2-doxy, 93
1,2-O-isopropylidne, 270
174
115
cycloaddition, 129-1 30
A, pitope trisaccharidique, 254
A,, A,, sous-groupes, 257
B, pitope trisaccharidique, 254
O, et dterminant H, 253,254
diphosphate, 174
diphosphate-fucose, 173
triphosphate, 174
Guanosine, 67
H
Hamamlose, 120, 121
Hmatoside, 2 14, 2 15
a-D-glycro-a-D-gulo-Heptopyranoside,
mthyl, complexe calcique, 177-178
a-~-rythro-Hex-2-nopyranoside, ter-
butyl 2,4,6-tri-O-acty1-3-doxy, 136
~-rythro-Hex-2-nopyranoside, 4,6-di-0-
actyl-2,3-didoxy, 119
P-D-xylo-Hex-5-nopyranose, 1,2,3,4-
ttra-U-benzoyl-6-doxy, 120
a-D-ribo-Hexofuranose, 3-doxy- 1,2 ;
Hexokinase, 86
P-D-gluco-Hexopyranose,
5,6-di-O-isopropylidne, 95
1,3,4,6-ttra-O-actyI-2-C-allyl, synth-
se radicalaire, 124
1,3,4,6-ttra-O-acty1-2-bromo-2-
doxy, substitution radicalaire, 124
a-D-ultro-Hexopyranoside, mthyl 4,6-O-
benzylidne-2-doxy-2-C-mthyl, 123
a-D-rythro-Hexopyranoside, mthyl3-0-
benzoyl-6-U-ter-butyIdiphnylsilyl-4-
C-mthoxycarbonylmthylne-2,4-
didoxy, 122
a-D-urubino-Hexopyranoside, mthyl 2-
doxy, vitesse d'hydrolyse I00"C, 56
a-o-riho-Hexopyranoside
mthyl 2-C-actyl-2-O-benzoyl-4,6-U-
mthyl-2-C-actyl-4,6--benzylidne-
a-D-lyxo-Hexopyranoside, mthyl 3,6-
a-D-r~ho-Hexos-3-ulofuranose, 1,2 ; 5,6-
benzylidne-3-doxy, 123
2,3-didoxy, 123
didoxy, 114
di-O-cyclohexylidne, 120
1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne, 91
a- D- ryth ro - Hex0 s - 3 -ul O p y ranosi de,
mthyl4.6-0-benzylidne-2-doxy, 89
a- D-ry t h ro -He xo s -4- ul op y ran0 s i de,
mthyl 3-O-benzyoyl-6-O-ter-butyldi-
phnylsilyl-2-doxy, 122
~-~-rythro-Hexos-2-ulopyranoside, 3,4-
O-isoproppylidne, conversion en
hamamlose, 121
a-~-ribo-Hexos-3-ulopyranoside, mthyl
4,6-0-benzylidne-2-O-tosyl, 9 1
~-~-nylo-Hexos-4-ulopyranoside, benzyl
2,6-di-O-benzyl, 91
Hyaluronique (acide), 223
Hybridomes, 239, 271
Hydradation hydrophobe, 184
Hypophosphoreux (acide), 95
I
a-L-Idofuranuronate, mthyl, 3-O-benzyl-
a-L-Idopyranose, conformation, 40
pentaactate, conformation, 41
P-D-idopyranose, 1,6-anhydro, prpara-
tion et configuration, 5 1-52
298 Index
a-L-Idopyranosiduronique (acide), confor-
mation des rsidus dans les glycosami-
noglycanes, 40
a-D-Idopyranosyie, chlorure ttra-O-ac-
tyl, RQN de "CI, 34
D-Idose, ttraactate, synthse, 11 6
Imidazole
N-benzoyl, 83
thiocarbonyl (bis), dans la prparation
des thionocarbonates, 139
Imidazolylsufonates, 108
Immunoglobulines, 236-238
Immunoglobulines IgG,, dcasaccharide
et conformation, 221-222
Indole-glycrol, 3'-phosphate, 66
Inositol (ci$), lectrophorse, 179
K
KDN, 200-201
Kratane sulfate, 224
L
Lactobionique (acide), 157
Lactosaminide, 2,2,2-trichlorthyl, driv
partiellement protg dans la synthse
du trisaccharide Lea, 259
allylation rgioslective, 158- 159
dgradation, 157
oxydation, 157
tri-O-isopropylidne, dimthyl actal,
Lactotransfrine humaine, dodcaaccha-
Luthyrus Ochrus, lectine, structure aux
Lemieux-Karplus (courbe de), relative au
Lvulinique (acide), par traitement acide
Lactose
159
ride-asparagine, 232-233
rayons X, 232
couplage 3J,- 145
du dsoxyribose, 47
Longueurs de liaisons
dans le glucose, 30
en relation avec l'effet anomrique, 30
D-Lyxal, 6-doxy-3-O-mthoxybenzyl,
286
H'
L2/HNK-1, 2 11
M
Maltose, structure l'tat solide, 23 1
Mannitol, 1,2 ; 5,6-di-O-isopropylidne,
94
b-D-Mannofuranose, complexe calcique,
178
2,3 ; 5,6-di-O-isopropylidne, ramifica-
tion, 125
oxime, 131
propylidne, 125
2-C-hydroxymthyl-2,3 ; 5-6-di-O-iso-
P-D-Mannofuranoside, mthyl, 48
a-D-Mannopyranose, 2,3-anhydro-4,6-0-
0-D-Mannopyranose, 1,6 ; 2,3-bis-anhy-
a-o-Mannopyranoside
benzylidne, 112
dro, 112
mthyl 2,3-anhydro, isomrisation, 114
mthyl, 2,3-anhydro-4,6-0-benzylid-
mthyl, 2,3 ; 4,6-di-O-benzylidne, 89
ne, 112
a-L-Mannopyranoside
aryl, 285
benzyl, 284
4-O-ter-butyldimthyIsilyl-6-doxy-3-
6-doxy-2,3-0-isopropylidne, glyco-
O-mthyl, 284
sylation, 167
P-D-Mannopyranoside, prparation, 50
benzyl, 2-azido-3-0-benzyl-4,6-O-ben-
zylidne-2-doxy, dans la prparation
des drivs de la N-actylmannosami-
ne, 111
2-O-benzoyl-3-O-benzyl-4,6-O-benzy-
lidne, par inversion sur C(2), 165
mthyl, 3-0-allyl-2,4,6-tri-O-benzoyl,
109
a-D-Mannopyranos yie
bromure, 6-0-actyl-2,3,4-tri-O-benzyl,
bromure, 3,4,6-tri-O-acty1-2-bromo-2-
chlorure, ttra-O-actyl, RQN de 35CI,
phosphate, 174
trichloractimidate, 4-O-ter- butyl-
dimthylsilyl-6-doxy-3-O-mthyl,
284
16.5
doxy, 119
34
a-L-Mannopyranos y le
P-D-Mannopyranosyie
chlorure, tetraactyl, RQN de 35Cl, 34
Mannosamine, N-actyl, reprsentation
Fischer, 6
D-Mannose, 6
Index 299
15
Msoxalate d'thyle, cycloaddition, 130
Mthoxythane, conformation, 28
Mthoxymercuration (des glycals), 11 8
Mthyl chloromthyl ther
conformation l'tat gazeux, 30
constantes physiques, 30
orbitales molculaires, 32
Mutarotase, 19
N
Noglycolipides, prparation par chroma-
tographie, 276
a-D-NeuSAcp-(2-3)-P-~-Galp-( 1 -3)-Glc
NAc, synthse enzymatique, 208
a-~-NeuSAcp--(2-6)-P-~-Galp-( 1 -~)-P-D-
GlcNAcp-( 1 -2)-a-~-Manp-( 1 -OMe),
synthse enzymatique, 208
a-D-Neu SAcp-(2-3)-P-~-Galp ( 1 -4)-Glc,
synthse d'un driv protg par cou-
plage, 204-205
a-D-Neu 5,9 Ac, p -( l-o)-P-~-Galp- (l-4)-
GlcNAc, synthse enzymatique, 208
Neuraminidases, 200
Nicotinamide adnine diphosphate, 174
Nitrate crique ammoniacal, 8 1
Nuclotides-sucres, gnralits, 1 73
O
Overhauser (effet), 185
Oxane
2-chlor0, conformation, effet anom-
rique, 31
orbitales molculaires, 36
31
2-chloro-4-mthy1, quilibre cis-trans,
cis-2,5-dimthyl, conformation, 29
2-hydroxymthyl, nergie libre confor-
mthyl, nergies libres conformation-
inationnelle, 29
nelles, 29
Oxyde de dibutyltain, 84
P
a-D-ribo-Pentodialdo- 1,4-furanoside,
mthyl 2,3-O-isopropylidne, 91
a-D-erythro-Pentofuranose, 5-O-benzoyl-
3-doxy- 1,2-O-isopropylidne-3-C-
mthylne, 121
a-D-qthro-Pentopyranoside, mthyl 2-
doxy, vitesse d'hydrolyse 100"C, 56
Peptide-N4-(N-actyl-P-glucosaminyl)
asparagine amidase F, dans l'tude de la
thyroglobuline porcine, 153
Pfitzner et Moffat (raction d'oxydation),
89
Phosphnolpyruvique (acide), 86, 170
Polymorphisme (des antignes de groupe
Polysialiques (acides)
sanguin) 254
dans Escherichia Coli KI, 210
dans les toiles de mer, 209
dans Neisseria meningitidis, 209
immunochimie, 209-210
162
Promoteurs de glycosidation, 160, 161,
Pseudorotation, 42
Pyruvate kinase, 86, 170
R
Racteur membrannaire, 175
Ractions croises, 243
L-Rhamnal, di-O-actyl, 284
a-L-Rhamnopyranosyl, chlorure, tri-O-
actyl, RQN de %, 34
D-Ribofuranosyle, chlorure, tri-O-actyl,
68
D-Ribonic (acide), 1 -4-lactone, 139
P-D-Ribopyranose, ttra-O-actyl, RMN
du proton et conformation, 37
0-o-Ribopyranoside, mthyl, vitesse d'hy-
drolyse 100"C, 56
P-D-Ribopyranosylamine, prparation, 68
P-D-Ribopyranosyle, chlorure, tri-O-ac-
tyl, RQN de "Cl, 34
D-Ribose, 6
composition tautomrique en solution
aqueuse, 15
5-phosphate, 65
Ribosylimidazole, 69
S
Saccharose, 53
Slectines (ligands des)
sialyl, 3'-sialyl-Lewisa, 278
sialyl, 3'-sialyl-LewisX, 278
300 Index
sulfat, pentasaccharide, 152, 278
sulfat, ttrasaccharide, 277
dfinition, 7
nomenclature, 9
origine naturelle, 8
Srie D,
Sialosides, hydrolyse acide, 57
Sialylaldolase
202
prparation de NeuS Ac et analogues,
spcificit, 202-203
Sialyltransfrases, 206, 207
Silane
ter-butylchlorodimthyl, 82
ter-butylchlorodiphnyl, 82
Sphingosine, 213
Stabilit (constantes de)
complexes de la cyclodextrine, 185
complexes des sucres, 18 1
Strodiffrenciation. 167- 169
T
a-D-Talopyranoside, mthyl 2,3-anhydro-
6-doxy, rduction, 114
D-Taiose, adaptation l'eau, 193
prparation, 11 8
Thymidine, 67, 281
Thyroglobuline porcine, tude par RMN,
Trhalose, 141
Trichloroactimidates, 162- 163
Trifluoractolyse, 2 19
Trifluoromthanesulfonates, 108
Triphnylchloromthane, 8 i
Triphnylstannane, 124
153- I55
U
Ugi (raction), 132
Uridine, 67
Uridine diphosphate, 170
Uridine-diphosphate-galactose, 170
Uridine-diphosphate-glucose, 170
Uridine triphosphate, 170
V
Vorbrggen (mthode), synthse des
nuclosides pyrimidiques, 68
W
Wittig (raction), 12 1
Wittig-Horner (raction), 122
X
Xylobiose, 4-thio, 169
a-D-Xylofuranose,
3-O-acryloyl- 1,2-O- isopropylidne-5-
O-trimthylsilyl, cycloaddition, 1 30
5-O-benzoyl-3-C- hydroxymthyl- 1,2-
O-isopropylidne, 121
5-O-benzoyl- 1,2-O-isopropylidne-3-
C-tosyloxymthyl, 12 1
1,2-O-isopropylidne-3-C-mthyl, 12 1
ttra-O-actyl, conformation, 39
ttra-O-benzoyl, conformation, 39
2,3,4-tri-O-actyl-l-thio, 169
a-D-Xylopyranosyle, chlorure, tri-O-ac-
tyl, RQN de 35Cl, 34
p-D-Xylopyranosyle, chlorure, tri-O-ac-
tyl, RQN de "CI, 34
chlorure, tri-O-benzoyl, conformation,
conformation, 39
fluorure, tri-O-actyl, conformation, 22,
fluorure, tri-O-benzoyl, conformation,
P-D-Xylopyranose
39
39
35,39
Imprimerie Louis-J ean - Gap
Dpt lgal, no 987, janvier 1995

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