Hygine au laboratoire danalyse

mdicale
Groupe de travail de la SFHH

Marcelle MOUNIER, Cline HERNANDEZ pour le groupe de travail

XVIIIme Congrs de la Socit Franaise dHygine Hospitalire
Strasbourg, 7 et 8 juin 2007

Le contexte

SFHH

Programmation des thmes pour

2005-2008

Recueil des thmes daction (phase 1)

Notation pour priorisation (phase 2)

 Catgorie :
groupe de travail
Thme :
prvention des risques infectieux dans
les laboratoires de biologie

Le groupe
Michle Aggoune,
Pierre Allouch,
Gilles Antoniotti,
Philippe Berthelot,
Frdric Grobost,
Cline Hernandez,
Yamina Kabranne,
Patrice Laudat,
Nicole Marty,
Marcelle Mounier,
Didier Nessa,
Yves Pimont,
Olivier Robert

Les runions
1ere : 23 novembre 2005

9 me : 16 mai 2007

Le document
Le champ :
risques infectieux
dans les laboratoires danalyses de biologie mdicale
anatomopathologie exclue

Le sommaire

Gestion des risques au LABM

Les locaux
Le personnel
Les prcautions incontournables
Matriel et quipements
Transport des chantillons biologiques
Dchets
Exemples de bonnes pratiques
Formation audit

Chapitre 1 : principes gnraux de

la gestion des risques au LABM
I gestion des risques infectieux au LABM
1. aspects rglementaires
2. les tapes
3. les particularits (spcificits) au laboratoire

Gestion des risques

au LABM
Risque infectieux de lchantillon inconnu
viction de lagent infectieux impossible
Risque varie en fonction des tapes de lanalyse
Risque de contamination
du prlvement
de lenvironnement
des personnes

Risque infectieux
au LABM
Gaston Bourret
HCV, HIV bien sr
mais aussi brucellose, tuberculose et autres, en
dehors de leurs mode de transmission classique
et les pathognes mergeants : SRAS

Risque infectieux
au LABM
Prvisible ?
Exposition

Arosols +++
Ingestion
Contact
Piqres, blessures

Nature du prlvement

Chapitre 1 : principes gnraux de

la gestion des risques au LABM
II Fiches exemples valuation du risque
1.
2.
3.
4.
5.

schma des diffrentes tapes de travail

phase pr analytique : le prlvement
phase pr analytique : rception et tri chantillons
la phase analytique
la phase post analytique

valuation des risques

p
r
o
t
e
c
t
i
o
n

RISQUE = DOMMAGE X FREQUENCE

gravit des dommages

trs grave

grave

moyenne

faible

Priorit 1
Priorit 2
Priorit 3
1
faible

2
moyenne

3
frquente

prvention

4
trs frquente

frquence d'exposition

Les diffrentes tapes

Ex: rception prlvement

livreur

rcepteur

rception

transport
vers labo

dballage
E

dchets

identification
tiquettes,
saisie

Gestion des risques :

les points importants
risque inconnu l'arrive de l'chantillon au
laboratoire
appliquer les prcautions "standard" pour la
manipulation de tous les chantillons biologiques
estimation du danger et du risque gnr doit tre
faite pour chaque technique avant sa mise en place

Chapitre 2 : les locaux

1. Rgles gnrales de conception
2. Ventilation et climatisation
3. Zones de confinement (en attente de larrt)
4. Entretien des locaux

Mesures de confinement
suivant la directive CE 2000/54
du Conseil de lEurope
du 18 septembre 2000

Entretien des locaux

zone 1
Risques faibles
Hall
Escaliers
Ascenseurs
Bureaux
Circulations
Vestiaires
Salle dattente

zone 2
Risques moyens
Salles techniques
NSB2
Sanitaires
Salles de
prlvement
Laverie
Local dchets

Nettoyage ou
nettoyage
Nettoyage quotidien
dsinfection
quotidien
Personnel dentretien

zone 3
Risques svres

zone 4
Trs haut risque

Salles techniques
NSB3

Salles techniques
NSB4

Bionettoyage
chaque session de
travail

Techniques
spcifiques

Personnel habilit

La liste positive des dsinfectants dsinfectants de la SFHH est une aide au choix
des produits (http://www.sfhh.fr/telechargement/recommandations_LPD2007.pdf)

Chapitre 3 : le personnel

1. Aspects lgislatifs et rglementaires :

responsabilit de lemployeur
2. Surveillance mdicale du personnel
3. Vaccination du personnel de LABM

Les points importants

Lemployeur est responsable de lexposition aux risques professionnels de ses
employs et de leurs consquences.
Le Document Unique est la retranscription obligatoire par chaque employeur de
lvaluation exhaustive des risques professionnels dans lentreprise. Il doit tre
ractualis chaque anne.
Les vaccinations obligatoires sont sous la responsabilit de lemployeur, le
mdecin du travail agissant par dlgation. Cest une obligation contractuelle,
pouvant dboucher, en cas de refus, sur une rupture du contrat de travail.
Lemployeur a aujourdhui une obligation de scurit de rsultat (et non seulement
de moyens) vis--vis de la sant et de la scurit de ses employs. Le manquement
cette obligation peut tre constitutif dune faute inexcusable de lemployeur.

Les vaccinations
au LABM
Diphtrie - ttanos - poliomylite : rappel tous les 10 ans avec un vaccin contenant
une dose rduite danatoxine diphtrique

Typhode : une injection, puis revaccination tous les trois ans.

Tuberculose : dcret du 30 juin 2004, arrt du 13 juillet 2004
Une IDR : obligatoire lembauche (test de rfrence)
La vaccination par le BCG, mme ancienne, reste obligatoire lembauche. Sont
considres comme ayant satisfait lobligation vaccinale par le BCG les personnes
apportant la preuve crite de cette vaccination (carnet de sant ou de vaccination)
et/ou celles prsentant une cicatrice vaccinale.

Vaccination contre
lhpatite B
modification par larrt du 6 mars 2007

Personnes considres comme immunises si :

attestation mdicale ou carnet de vaccination prouvant vaccination contre lhpatite B
selon schma recommand (V1,V2 1 mois, V3 entre 5 et 12 mois), avant lge de 13
ans pour mdecins et techniciens en analyses biomdicales.
attestation mdicale prouvant vaccination mene son terme et
rsultat, mme ancien, indiquant taux Ac anti-HBs > 100UI/L
taux Ac compris entre 10 et 100 UI/L et Ag HBs indtectable

Si non et si taux Ac anti-HBs < 10 UI/L, conduite tenir fonction de Ag HBs :

Si Ac anti HBs non dtectable, vaccination doit tre faite ou reprise, jusqu dtection Ac
anti-HBs dans le srum, sans dpasser 6 injections au total (primovaccination incluse).
En labsence de rponse la vaccination, personnels peuvent tre admis ou maintenus
en poste, mais doivent tre soumis contrle annuel des marqueurs sriques de
lhpatite B (Ag HBs et Ac anti-HBs).
Si Ag HBs dtect dans le srum, il ny a pas lieu de vacciner.

Chapitre 4 : les prcautions

incontournables
1.
2.
3.
4.
5.

Prcautions standard
Lhygine des mains : lavage et dsinfection
La tenue de travail
Les gants
Les masques et lunettes de protection

Les gants

Grille de choix des gants

GANTS
ACTES

Non striles
Striles

- Rception d'chantillons
- Saisie informatique des demandes d'analyses
et du dossier patient. Saisie des rsultats
- Tlphone
- Manipulation des chantillons.
- Tri

Mnage
Vinyle

Latex

Nitrile

Pas de
Gants

REMARQUES

Lavage des mains aprs avoir enlev les gants. Changer les gants
toutes les 45 minutes
X

Protge clavier dsinfectable

X
x

- Manipulation de produits toxiques, corrosifs, de

solvants, de Bromure d'thidium

Contact direct avec les liquides biologiques possibles

X

- Manipulation des colorants

- Technique de coloration

- Prparation eau de javel

Se reporter la fiche de donnes scurit

x

- Ouverture d'un flacon ou tube contenant un

chantillon ou liquide biologique.
- Technique des prlvements.
- Manipulation d'chantillons sanguins

x
X

- Biologie molculaire

- Culture cellulaire*

Gants striles utiliss pour concasser les tumeurs

*protocole spcifique au laboratoire

- Travail sur les chantillons suspects de

Creutzfeldt Jakob

- Travail sur automate Maintenance - Entretien

Port de double paire de gants en cas de peau lse

X
X

- Lecture au microscope
- chantillons sanguins

- chantillons mycologiques et parasitaires

Pas de gants lorsqu'il n'y a pas de risque de contamination

biologique

Masques et appareils
de protection respiratoire
Caractristiques
des masques chirurgicaux

Masques et appareils
de protection respiratoire
Caractristiques des APR

Dsignation
de lappareil

Pntration
du filtre

Fuite totale
de lappareil

FFP 1

20%

22%

FFP 2

6%

8%

FFP 3

< 0,05%

2%

Chapitre 5 : matriel et quipement

I- Choix et traitement des dispositifs mdicaux
1. Dfinitions et classification
2. Traitement des dispositifs mdicaux rutilisables
3. Dispositifs mdicaux usage unique
II- Exemples de procdures de traitement
III- Les postes de scurit microbiologique de type II
1. Dfinitions
2. Fonctionnement
3. Installation
4. Utilisation

Dfinition

Le matriel

Les normes

L'installation

Le travail

L'entretien

Les contrles

Le changement
des fitres

La dsinfection

La traabilit

PSM : poste de scurit microbiologique, assure la protection de l'oprateur face une

contamination arienneet, suivant la catgorie de PSM, le confinement dynamique du
produit manipul.
3 types de PSM :
- type I : protge manipulateur et environnement
- type II : protge manipulateur, environnememnt et manipulation
- type III : protge manipulateur, environnememnt et le confienement du
produit manipul ("boite gants")
rappel : il n'y a pas de correspondance entre le type de PSM et la catgorie de micro
organismes qui peuvent y tre manipuls.
EN 12469
NF pour les PSM de type II
- Zone ddie, idalementr pice ddie, voire zones de confienement obligatoire
en fonction de la classe des micro-organismes manipuls (MSB2 ou MSB3)
- Zone peu empoussire, sol plan, distances frontales, latrales et sous plafond
respectes (donnes constructeur)
- Rejet l'extrieur (si existe) doit tre prvu et compens par un apport d'air neuf
dans la pice (air de "compensation" = somme des dbits extraits). Dans les
laboratoires NSB 3, il est important de vrifier que les systmes dextraction et de
soufflage de lair sont asservis.
- Les principes
Personnels habilits
Protocoles crits et valids
- Les rgles de base : (PSM II)
Vrifier le bon fonctionnement du PSM avant chaque manipulation
Bien connatre et bien dfinir la zone du plan de travail o l'on peut manipuler
en scurit
Laisser les grilles de reprise parfaitement dgages
A la fin de la session de travail, retirer tout le matriel du PSM
Laisser le PSM en marche rduite ou normale : ne jamais larrter
- Quotidien : le plan de travail la fin de chaque manipulation
- A fond (au minimum une fois par semaine) idem quotidien + bac de rtention
- A reception ou si dplacement du PSM : qualifications installation, oprationnelle
et de performances
- Journalier :
aspect visuel
tableau de contle
- annuel (au minimum)
fonctionnement du flux (comptage de particule, vitesse)
- Rythme en fonction de l'utilisation, de l'empoussirement
- Importance de l'indicateur de pr-colmatage
- Le relev du compteur horaire lors du premier changement permet d'avoir un
indicateur du rythme de changement
- Lors du changement de filtres, avant dplacement du poste ou si contamination
(renversement de produits biologiques) de zones innaccessibles
- Procdure crite et valide
- Norme EN 12469 annexe J
- Existence de "kits" de dsinfection prts l'emploi
- Des qualifications reception ou lors du dplacement
- Des contrles annuels
- Du changement des filtres

Aide-mmoire
PSM type II

Chapitre 6 : le transport des

chantillons biologiques
1. Substances biologiques : matires dangereuses
2. Rglementation des transports
3. Consignes demballage et denvoi

Larrt ADR 2007

Les matires infectieuses de la division 6.2 sont subdivises selon la
numrotation ONU (UN) en :
matires infectieuses pour lhomme

ONU 2814

matires infectieuses pour animaux uniquement

ONU 2900

chantillons de diagnostic ou substances biologiques (B)

ONU 3373

Larrt ADR 2007

Il nexiste plus que deux catgorie de risque : catgories A et B.

Catgorie A : matire infectieuse qui, de la manire dont elle est

transporte, peut, lorsquune exposition se produit, provoquer une

invalidit permanente ou une maladie mortelle ou potentiellement
mortelle chez lhomme ou lanimal. Ces matires infectieuses doivent
tre assignes au numro 2814. Celles qui ne provoquent des maladies
infectieuses que chez lanimal au numro 2900.

Catgorie B : matires infectieuses qui ne rpondent pas aux

critres de classification de la catgorie A et doivent tre assignes au

numro 3373. Lassignation officielle de transport ONU 3373 est
Substance biologique, catgorie B .

Choix des emballages

de transport
Catgorie A : P620

Catgorie B : P650

Prcautions concernant lusage

de la Carboglace *

Caractristiques des emballages

Emballage primaire
Emballage secondaire
Matriau absorbant

P 620

P 650

tanche

tanche

tanche avec fermeture par bouchon vissant quip dun joint

existe

plac entre le rcipient primaire et lemballage secondaire.

Emballage extrieur

suffisamment rsistant en fonction de sa capacit, de sa masse et de lusage

auquel il est destin, dont la plus petite dimension extrieure ne doit pas tre
infrieure 10 cm.

Emballage extrieur < 4 kg

tiquetage

Logo produit infectieux

N ONU 2814, avec la rfrence de la classe 6.2
N du fabricant et de lagrment
Adresse prcise du destinataire
Adresse prcise de lexpditeur
Coordonnes de la personne prvenir en cas daccident lors du transport

Mention matire biologique catgorie B

Pas de marquage classe 6.2
Marquage ONU 3373

Rsistance

Rsistance la chute : 9 m
Rsistance une pression de 95 kPa
Rsistance une T : - 40 + 55

Rsistance une chute de 1 m 20

Document de
transport : dclaration
de marchandises
dangereuses,

Les coordonnes de lexpditeur

Le N ONU et la matire infectieuse transporte
La dsignation de la marchandise suivie de lindication de la classe , du chiffre
de lnumration, ex: UN 2814, MATIERE INFECTIEUSE POUR LHOMME,
SOLIDE (CATEGORIE A ) (Mycobacterium tuberculosis ), 6.2, II, ADR
Les coordonnes du destinataire
Un double du document de transport doit tre conserv par lexpditeur, en
traabilit.

Pas dobligation de documents ADR

Chapitre 7 : les dchets

1. Dfinitions
2. Le destin des dchets
3. Critres de choix des collecteurs et conteneurs

Les dchets

DAOM
DASRI
DIS

Les dchets
OBJETS PIQUANTS, COUPANTS,
tranchants (OPCT)
collecteurs
daiguilles
Ex :
- aiguilles
- bistouris
- lames

PAPIERS
NOMINATIFS
CONFIDENTIELS

SOLIDES ET MOUS
INFECTIEUX

Poubelles de
paillasse de
bactriologie
Ex :
- lames
- pipettes, poire
- cnes

Poubelles de
paillasse avec sac
Ex :
- pipettes ,
poires,
cnes

Sacs
jaunes

PAPIERS,
EMBALLAGES

Bacs de
rcupration

Corbeilles
Ex :
- compresses, cotons
- seringues souilles
- spculums UU
- tubulures de sang
Ex :
- tubes, pipettes ou
ampoules en verre
- lames et lamelles
- flacons
d'hmocultures

BROYAGE

Cartons pour DASRI

Fts
plastiques

Enlvement par filire spcifique

Ex :
- gants, seringues (sans aiguille),
couvillons
- cotons, papiers souills
- tubes et pipettes en plastique

Circuit DAOM
Enlvement par la ville

Chapitre 8 : exemples de
bonnes pratiques
1. Hygine des actes de prlvements
2. Bonnes pratiques dantisepsie
3. Conduite tenir en cas de dispersion accidentelle de
micro-organismes au laboratoire
4. Risques particuliers lis aux mycobactries de la
tuberculose

Conduite tenir en cas

de dispersion de micro-organismes
chantillon arrivant bris
Contamination de lenvironnement par un produit biologique
Contamination par une culture
Contamination par voie arienne
Autres modes de contamination

Bris de tubes dans une centrifugeuse

Exemples de logigrammes

Exemple de
logigramme

Risques particuliers lis aux

mycobactries de la tuberculose
Manipulation des
chantillons suspects de
tuberculose

Centrifugation pour
concentrer les
mycobactries
Manipulation des cultures
suspectes dtre positives
(provenant de milieux
liquide ou solide)
Lecture des lames
Ralisation de techniques
de dtection ou
didentification par biologie
molculaire

Risque spcifique
Systmatiquement sous PSM de type II avec gants.
Tenue vestimentaire particulire dans la zone : soit tenue recouvrant
tous les effets personnels, soit, mieux, blouse et pantalon fournis par le
laboratoire.
Tenues usage unique changer au moins une fois par jour.
Accs et sortie rglements.
Manipulation en laboratoire P3 optionnelle.
Centrifugeuse dans un local en dpression. Accs rglement.
(idalement en laboratoire P3)
Systmatiquement sous PSM de type II. Gants.
Sur blouse UU
masque (FFP1)
Malgr labsence de rglementation : tape raliser de prfrence en
laboratoire NSB 3 (protection de lenvironnement)
Les lames une fois fixes dans le PSM de type II peuvent tre sorties
pour tre colores et examines au microscope
Si ces techniques ne sont pas ralises dans la zone du laboratoire
grant les analyses de mycobactries, ces chantillons ou cultures
doivent auparavant avoir t inactives par chauffage 80C pendant
20 minutes aprs avoir limin la prsence ventuelle de sang.

Chapitre 9 : formation & audit

I - La formation
1. Le cadre rglementaire
2. Les points importants
II Laudit
1. Gnralits
2. Exemple de grille daudit

Programme
de formation
Au minimum le personnel aura une formation sur :

L'hygine des mains et le port de gants

La ventilation et l'hygine des locaux
Le nettoyage du matriel
La manipulation dans un PSM II
L'asepsie du prlvement (pour le personnel concern)
Les techniques comportant un risque dinhalation (ex : centrifugation,
ouverture des cultures), un risque dingestion (ex : manipulation des
chantillons), un risque dinoculation percutane (ex : aiguilles, scalpels)
La prvention des AES
Llimination des dchets .

valuations rgulires

Audit
Audit interne / Audit externe
Exemple de grille daudit
C

Phase pr analytique
Rception des prlvements
Locaux
Propret visuelle
Protocole de nettoyage
Traabilit du nettoyage
Equipements
Poubelle
Conteneurs pour OCPT
Protocole AES
Protocole "accident" prlvement (bris, ouverture)
Personnel
Tenue
Formation

NC

commentaires

La suite
Relecteurs : juillet dbut septembre 2007
Revue des corrections par le Groupe de Travail :
septembre 2007
Impression : fin 2007 / dbut 2008