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Bull. Soc. Pharm. Bordeaux, 2007, 146, 75-84

COMPOSITION CHIMIQUE ET BIOACTIVITÉ

DE L’HUILE ESSENTIELLE DES RAMEAUX DE
TETRACLINIS ARTICULATA (*)

Brahim BOURKHIS S ( 1 ) , Mohammed OUHS SINE ( 1 ) ,

Mohamed HNACH ( 2 ) , M’Barek BOURKHISS ( 2 ) ,
Bad r SATRANI ( 3 ) , Abdallah FARAH ( 4 )

Les rameaux du Thuya de Berbérie, Tetraclinis articulata, de

la région de Khemisset au Maroc, renferment 0,41 % d’huile
essentielle composée principalement d’α -pinène (30,22 %), de
limonène (22,29 %), de widdrol (5,41 %) et d'acétate de bornyle
(4,76 %). L’activité de l’huile essentielle a été testée in vitro sur
quatre souches bactériennes et deux fongiques. Seuls
Staphylococcus aureus et Micrococcus luteus se sont révélés
sensibles.

(*) Manuscrit reçu le 11 juillet 2006.

(1) Laboratoire de Biotechnologie microbienne, Faculté des Sciences, Université Ibn
Tofaïl, 14000 Kénitra, BP 133, Maroc. bbourkhiss@yahoo.fr,
ouhssine40@yahoo.fr
(2) UFR Ingénierie des substances naturelles et développement, Faculté des Sciences,
BP 4010, Beni M’hamed, 50000 Meknès, Maroc. hnach.walid@caramail.com,
bourkhiss121@yahoo.fr
(3) Division de Recherches et Expérimentations forestières, BP 763, Rabat, 10050
Agdal, Maroc. badrsat@yahoo.fr
(4) Institut National des Plantes médicinales et aromatiques, BP 7048, Fès-Ezohour,
30100 Fès, Maroc. farah117@caramail.com
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INTRODUCTION

Le Thuya de Berbérie, Tetraclinis articulata, est une endémique

d’Afrique du nord occidentale (Maroc, Algérie et Tunisie). En dehors de
cette zone, on rencontre quelques petites localités au sud-est de l’Espagne
(province de Carthagène) et à l’île de Malte [1].
La majorité de l’aire des tétraclinaies marocaines se situe dans
l’étage bioclimatique semi-aride tempéré et chaud. Cette espèce se
développe aussi dans les domaines sub-humide et aride supérieur,
indifféremment de la nature du substrat (calcaire ou siliceux). Cependant,
cette essence forestière fuit les sols argileux mal drainés.
Le bois de ce Thuya est surtout utilisé dans le secteur artisanal en
menuiserie et en ébénisterie ou comme bois de chauffage. En phytothérapie,
différentes parties de la plante sont utilisées contre les fièvres enfantines, les
douleurs gastriques, les fortes diarrhées, le diabète, l’hypertension, etc.
[13-14].
Afin de contribuer à une meilleure valorisation de cette essence, ce
travail aborde la composition chimique et l’efficacité antibactérienne et
antifongique de l’huile essentielle des rameaux.

MATÉRIEL ET MÉTHODES

Matériel végétal

Des rameaux de Tetraclinis articulata (Vahl) Masters de la région de

Khemisset (Nord-Ouest du Maroc) ont été prélevés en septembre 2005 sur
des arbres pris au hasard puis séchés dix jours à l’ombre avant leur
utilisation.

Extraction de l’huile essentielle

L’extraction de l’huile essentielle a été réalisée par hydrodistillation

de dix échantillons dans un appareil de type Clevenger [6]. La distillation de
100 g de chaque échantillon découpés en morceaux de 3 cm environ dure
trois heures après l’apparition de la première goutte de distillat à la sortie du
tube de condensation de la vapeur. L’huile essentielle a été stockée à 4°C à
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l’obscurité et séchée avec du sulfate de sodium anhydre. Les valeurs des

rendements sont exprimées par rapport à la matière sèche (en ml/100 g de
matière sèche). Le pourcentage de matière sèche est estimé par séchage de 5
g de chaque échantillon 4 heures à l’étuve à 102°C.

Analyse chromatographique

Pour chaque échantillon, trois analyses chromatographiques ont été

réalisées. Les analyses chromatographiques ont été effectuées sur un
chromatographe en phase gazeuse à régulation électronique de pression de
type Hewlett-Packard (série HP 5890), équipé d’une colonne capillaire en
silice fondue de type DB-5 de 25 m de longueur, 0,25 mm de diamètre et
0,25 µm d’épaisseur de film, d’un détecteur à ionisation de flamme réglé à
260°C et alimenté par un mélange de gaz H2 /air et d’un injecteur split-
splitless réglé à 240°C. Le gaz vecteur est l’azote à 1 ml/min. Le mode
d’injection est split (rapport de fuite de 1/50, débit de 66 ml/min). La
température de la colonne est programmée de 50 à 250°C à raison de
4°C/min, puis est maintenue à 250°C pendant 20 min. L’appareil est piloté
par un système informatique de type " HP ChemStation ".
L’identification des constituants a été réalisée en se basant sur leurs
indices de Kováts et sur la chromatographie en phase gazeuse couplée à la
spectrométrie de masse (CPG/SM). Cette dernière est réalisée sur un
chromatographe en phase gazeuse de type Hewlett–Packard série HP 5980
couplé à un spectromètre de masse série HP 5772. La fragmentation est
effectuée par impact électronique sous un champ de 70 eV. La température
de la colonne est comme précédemment programmée de 50 à 250°C à raison
de 4°C/min. Le gaz vecteur est l’hélium à 2 ml/min. Le mode d’injection est
split (rapport de fuite 1/70, débit 112 ml/min). L’appareil est relié à un
système informatique gérant une bibliothèque de spectres de masse
NIST 98.

Tests antimicrobiens

Six souches microbiennes ont été choisies et pour leur pathogénicité

et pour leur implication fréquente dans la contamination des denrées
alimentaires : quatre souches bactériennes (Escherichia coli, Bacillus
subtilis, Staphylococcus aureus et Micrococcus luteus) et deux souches
fongiques (Penicillium parasiticus et Aspergillus niger).
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Les souches bactériennes sont des lots de l’ATCC (Americain Type

Culture Collection) entretenues par repiquage sur gélose nutritive favorable
à leur croissance. Les moisissures sont cultivées sur milieu PDA (Potato
Dextrose Agar).
Les tests antimicrobiens sont réalisés selon la méthode rapportée par
Remmal et al. [10] et Farah et al. [7]. L’huile essentielle est émulsionnée par
une solution d’agar à 0,2 % afin de disperser les composés et d’améliorer
leur contact avec les germes testés, puis diluée au dixième dans la solution
d’agar. Des quantités de cette dilution sont ajoutées dans des tubes à essais
contenant de la gélose nutritive pour les bactéries et du PDA pour les
moisissures préalablement stérilisés 20 min à 120°C, refroidis à 45°C et
versés dans des boîtes de Petri. Les concentrations finales en huile
essentielle sont 1/100, 1/250, 1/500, 1/1000 et 1/5000 (v/v). Des témoins
contenant le milieu de culture et la solution d’agar à 0,2 % seule sont
également préparés.
L’ensemble se fait par stries à l’aide d’une anse de platine calibrée
afin de prélever le même volume d’inoculum. Ce dernier se présente sous
forme de bouillon de culture de 24 heures pour les bactéries et d’une
suspension dans l’eau physiologique de spores provenant d’une culture de
sept jours dans le PDA pour les moisissures. L’incubation a lieu 24 h à 37°C
pour les bactéries et sept jours à 25°C pour les champignons. Chaque essai
est répété trois fois.

RÉSULTATS

Rendement et composition chimique

Le rendement moyen en huile essentielle des rameaux de Tetraclinis

articulata est de 0,41 %.
Trente trois composés ont été identifiés représentant plus de 80 % de
la composition chimique totale de cette huile (Tableau I). L’α-pinène
(30,22 %) et le limonène (22,29 %) sont majoritaires. On note aussi la
présence, à un degré moindre, de widdrol (5,41 %), d’acétate de bornyle
(4,76 %) et d’humulène (3,49) (Figure 1). Les autres composés sont présents
en faibles quantités.
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Tableau I : Pourcentages des principaux constituants de l’huile

essentielle des rameaux du Thuya de Berbérie.
Constituants Formule Indice de Kováts %
α-thujène C10H16 931 0,17
α-pinène C10H16 939 30,22
camphène C10H16 953 0,20
verbénène C10H14 967 0,22
β-pinène C10H16 980 0,38
β-myrcène C10H16 991 0,9
α-phellandrène C10H16 1005 0,07
δ-3-carène C10H16 1011 0,13
α-terpinène C10H16 1018 0,79
p-cymène C10H14 1026 < 0,05
limonène C10H16 1031 22,29
(E)-p-mentha-2,4(8)-diène C10H16 1086 0,11
α-campholénal C10H16O1 1125 0,52
(E)-pinocarvéol C10H16O1 1139 0,36
camphre C10H16O1 1143 1,05
bornéol C10H18O1 1165 1,23
4-terpinéol C10H18O1 1177 0,37
α-terpinéol C10H18O1 1189 0,45
myrténol C10H16O1 1194 0,28
verbénone C10H14O1 1204 0,37
(E)-carvéol C10H16O1 1217 0,32
(Z)-carvéol C10H16O1 1229 0,06
acétate de bornyle C10H20O2 1285 4,76
carvacrol C10H14O1 1298 0,39
α-longipinène C15H24 1351 0,39
α-copaène C15H24 1376 1,97
γ-élémène C15H24 1433 1,58
déhydroaromadendrène C15H22 1459 0,61
γ-cadinène C15H24 1513 0,73
oxyde de caryophyllène C15H24O1 1581 0,31
cédrol C15H26O1 1596 0,59
widdrol C15H26O1 1597 5,41
α-humulène C15H24 1709 3,49
Total 80,72
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α-pinène limonène acétate de bornyle

widdrol humulène
Fig. 1 : Composés remarquables de l’huile essentielle des rameaux du
Thuya de Berbérie.

Les hydrocarbures monoterpéniques représentent 55,48 % et sont

essentiellement bicycliques (31,32 %). L’huile essentielle contient 18,08 %
de sesquiterpènes.

Dix-huit hydrocarbures terpéniques représentant plus de 60 % de

l’essence ont été caractérisés (Tableau II). Les oxydes terpéniques suivent
avec 9,80 %.

Tableau II :
Différentes classes de composés identifiées dans l’huile essentielle des
rameaux du Thuya de Berbérie.

Classe de composés Nombre de composés identifiés %

Hydrocarbures monoterpéniques 12 55,48
Hydrocarbures sesquiterpéniques 5 5,28
Oxydes 4 9,80
Esters 1 4,76
Alcools 8 3,46
Cétones 2 1,42
Divers 1 0,52
Total 33 80,72
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Bioactivité

Les résultats diffèrent suivant les germes utilisés (Tableau III).

Staphylococcus aureus et Micrococcus luteus sont inhibés respectivement à
1/250 et 1/100 v/v alors que les autres souches ont résisté à l’action de
l’huile essentielle des rameaux de Tetraclinis articulata.

Tableau III :
Activités antibactérienne et antifongique de l’huile essentielle des
rameaux du Thuya de Berbérie.
Concentration v/v 1/100 1/250 1/500 1/1000 Témoin
Bactéries
Escherichia coli + + + + +
Bacillus subtilis + + + + +
Staphylococcus aureus - - + + +
Micrococcus luteus - + + + +

Champignons
Penicillium parasiticus + + + + +
Aspergillus niger + + + + +
- : inhibition

+ : croissance

DISCUSSION ET CONCLUSION

Avec 30,22 % d’α-pinène, 22,29 % de limonène, 5,41 % de widdrol,

4,76 % d’acétate de bornyle comme constituants principaux et seulement
1,05 % de camphre, le profil chimique de l’huile étudiée est relativement
différent de ce qui a été rapporté dans la littérature. En effet, Ait Igri et al.
[2] ont trouvé pour des rameaux adultes prélevés dans la région d’Essaouira
(sud-ouest du Maroc à 524 km de Khemisset) majoritairement l’acétate de
bornyle (31,10 %), le camphre (20,20 %) et le limonène (7,10 %). De
même, Buhagiar et al. [5] ont rapporté pour des branches terminales de l’île
de Malte principalement l'α-pinène (31 %), l’acétate de bornyle (19 %), le
 82

camphre (18,10 %), le limonène (3,80 %), le β-myrcène (2,90 %) et le

bornéol (2,80 %).

La composition chimique de l’huile essentielle des rameaux du

Thuya de Berbérie pourrait dépendre de facteurs écologiques et
environnementaux et de facteurs génétiques, en accord avec d’autres travaux
sur les Cupressacées [3]. Le taux de feuilles, d’écorce et de bois peuvent
différer. Barrero et al. [4] ont montré que les feuilles et le bois de Tetraclinis
articulata ont un profil différent, avec des concentrations très différentes,
par exemple pour le camphre.

L’huile de Thuya de Berbérie pourrait constituer une nouvelle source

de widdrol, alcool sesquiterpénique rencontré chez les Cupressacées [11].

Seuls Staphylococcus aureus et Micrococcus luteus ont été inhibés à

des concentrations élevées 1/250 et 1/100 (v/v). La faible activité
antimicrobienne de l’huile essentielle peut s’expliquer par son profil
chimique pauvre en composés connus pour leur pouvoir antimicrobien
comme certains alcools monoterpéniques [8-9] et les phénols [8] et riche en
hydrocarbures terpéniques (61 % environ), notamment l’α-pinène et le
limonène. Ce dernier, en particulier, ne présente aucun effet bactériostatique
ou fongistique [12].

RÉFÉRENCES

1- Achhal (A.) - Étude phytosociologique et dendrométrique des

écosystèmes forestiers du bassin versant du N’Fis (Haut Atlas
central). Thèse Doct. Univ. Aix-Marseille III, 1986, 204 p.
2- Ait Igri (M.), Holeman (M.), Ilidrissi (A.), Berrada (M.) -
Contribution à l’étude chimique des huiles essentielles des rameaux et
du bois de Tetraclinis articulata (Vahl) Masters. - Plant. Med.
Phytother., 1990, 24(1), 36-43.
3- Angioni (A.), Barra (A.), Russo (M.T.), Coroneo (V.), Dessi (S.),
Cabras (P.) - Chemical composition of the essential oils of Juniperus
from ripe and unripe berries and leaves and their antimicrobial
activity. - J. Agric. Food Chem., 2003, 51(10), 3073-3078.
 83

4- Barrero (A.F.), Herrador (M.M.), Arteaga (P.), Quílez (J.) et al. -

Chemical composition of the essential oils of leaves and wood of
Tetraclinis articulata (Vahl) Masters. - J. Ess. Oil Res., 2005, 17(1),
166-168.
5- Buhagiar (J.), Podestà (M.T.), Cioni (P.L.), Flamini (G.), Morelli (I.) -
Essential oil composition of different parts of Tetraclinis articulata. -
J. Ess. Oil. Res., 2000, 12(1), 29-32.
6- Clevenger (J.F.) - Apparatus for the determination of volatile oil. - J.
Am. Pharm. Assoc., 1928, 17(4), 346-351.
7- Farah (A.), Satrani (B.), Fechtal (M.), Chaouch (A.), Talbi (M.) -
Composition chimique et activités antibactérienne et antifongique des
huiles essentielles d’Eucalyptus camaldulensis et son hybride naturel
(clone 583). - Acta Bot. Gall., 2001, 148(3), 183-190.
8- Franchomme (P.) - L’aromatologie à visée anti-infectieuse. 1981, 1-2,
25-47.
9- Koba (K.), Sanda (K.), Raynaud (C.), Nenonene (Y.A.), Millet (J.),
Chaumont (J.P.) - Activités antimicrobiennes d’huiles essentielles de
trois Cymbopogon sp. africains vis-à-vis de germes pathogènes
d’animaux de compagnie. - Ann. Méd. Vét., 2004, 148, 202-206.
http://www.facmv.ulg.ac.be/amv/articles/2004_148_4_05.pdf
10 - Remmal (A.), Tantaoui-Elaraki (A.), Bouchikhi (T.), Rhayour (K.),
Ettayebi (M.) - Improved method for determination of antimicrobial
activity of essential oils in agar medium. - J. Ess. Oil. Res., 1993, 5,
1179-1184.
11 - Runeberg (J.) - The chemistry of the order Cupressales. 27.
Heartwood constituents of Juniperus utahensis Lemm. - Acta Chem.
Scand., 1960, 14, 797-804.
12 - Scora (K.M.), Scora (R.W.) - Effect of volatiles on mycelium growth
of Penicillium digitatum, P. italicum, and P. ulaiense. - J. Basic
Microbiol., 1998, 38(5-6), 405-413.
13 - Touayli (J.) - Valorisation des sous-produits du thuya de Berbérie
(Tetraclinis articulata Vahl) du Maroc. - Mémoire 3e Cycle Inst.
Agron. Véter. Hassan II, Rabat, Maroc, 2002, 90 p.
14 - Ziyyat (A.), Legssyer (A.), Mekhfi (H.), Dassouli (A.), Serhrouchni
(M.), Benjelloun (W.) - Phytotherapy of hypertension and diabetes in
oriental Morocco. - J. Ethnopharmacol., 1997, 58(1), 45-54.
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ABSTRACT

Chemical composition and bioactivity of essential oil of Tetraclinis

articulata branches

Arartree (Tetraclinis articulata) branches from the Khemisset area,

Morocco, provided 0.41% essential oil mainly composed of α-pinene
(30.22%), limonene (22.29%), widdrol (5.41%), and bornyl acetate (4.76%).
The activity of the essential oil was tested in vitro on four bacteria and two
fungi strains. Only Staphylococcus aureus and Micrococcus luteus were
found to be sensitive.

Key-words: antibacterial activity, antifongic activity, Cupressaceae,

essential oil, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus,
Tetraclinis articulata, yield.

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