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Université!Claude!Bernard4Lyon1!
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UE#d’Embryologie#et#biologie#du#développement#5#BIO2010L#
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Epreuve!écrite!4!!Examen!terminal!4!juin!20114!!! durée:!1h30!
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Exercice#15#Sujet#de#synthèse#(10#pts#5#50#min)#
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! A!de!multiples!reprises!au!cours!de!l'embryogénèse,!chaque!cellule!doit!faire!un!
choix!entre!au!moins!deux!voies!l'orientant!vers!des!destins!différents.!!
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Vous!présenterez!3!mécanismes!cellulaires!majeurs!qui!contrôlent!le!destin!des!cellules.!
! Pour!chaque!mécanisme:!
! 4vous!présenterez!une!expérience!mettant!en!évidence!ces!mécanismes.!!
! 4vous! développerez! les! principes! de! ces! mécanismes! en! introduisant! tous! les!
termes!clés!utiles.!
! 4vous!présenterez!un!exemple!bien!détaillé!pris!parmi!ceux!vus!en!cours.!
! En!conclusion,!vous!discuterez!brièvement!de!l'Evolution!de!ces!mécanismes.!
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Consignes!:! Adoptez! un! style! simple,! concis,! illustré! par! des! schémas! bien! annotés.! On!
attend!de!vous!que!vous!évoquiez!un!certain!nombre!de!termes>clés.!Soulignez>les!!
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Exercice#25#Analyse#de#documents#et#questions#de#cours#(10#pts#5#40#min)#
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! On!s'intéresse!au!rôle!de!2!gènes,!Sox2!et!FGF8,!dans!une!étape!bien!connue!de!
l'embryogenèse.!
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Consignes!:!La!réponse!à!chaque!question!sera!argumentée!et!courte!(5!lignes!maximum).!
Parfois!un!schéma!bien!légendé!est!plus!explicite!qu'un!long!texte.!Répondre!en!reprenant!
le!n°!des!questions.!
©!question!de!cours!
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! 14!La!figure!1!montre!la!localisation!des!ARNm!Sox2!chez!la!neurula!de!xénope!et!
chez!le!poulet!à!différents!temps!d'incubation.!
! >1a>!©!Quelle!technique!permet!d'obtenir!de!tels!marquages?!Vous!en!détaillerez!le!
principe!à!l'aide!d'un!schéma!adapté!et!légendé.!
! >1b>!Quelles!structures!sont!marquées!par!Sox2!chez!le!xénope!et!les!poulets!de!30h!
à!48h?!
! >1c>! Selon! toute! vraisemblance,! quelles! cellules! expriment! Sox2! chez! les! embryons!
de!poulet!de!20>24h?!
! >1d>! De! quelle! étape! de! l'embryogenèse! et! de! quel! type! cellulaire! l'expression! du!
gène!Sox2!est>elle!le!témoin?!
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! 1/4!
!

! 24!Des!chercheurs!ont!effectué!des!expériences!de!perte!de!fonction!de!Sox2.!Pour!
cela,!ils!ont!injecté!dans!les!blastomères!du!pôle!animal!d'embryons!au!stade!8!cellules,!
des!plasmides!exprimant!une!forme!dominante!négative!de!Sox2!(Sox24DN).!
Ils!ont!analysé!l'expression!du!gène!NCAM,!un!marqueur!générique!des!cellules!neurales!
chez!ces!embryons!au!stade!neurula!(Figure2).!
! >2a>!©!Qu'est>ce!qu'une!forme!dominante!négative?!Quelle!est!son!utilité?!
!! >2b>!Analysez!ces!résultats!et!interprétez.!!
!
! 34! A! partir! des! mêmes! types! d'embryons,! les! chercheurs! ont! analysé! les! ARNm!
d'autres! gènes.! Otx! est! un! marqueur! du! prosencéphale,! En2! du! mésencéphale,! Krox20!
de!certains!rhombomères,!et!HoxB9!de!la!moelle!épinière!et!du!mésoderme!postérieur!
(figure!3).!
! >3a>!Analysez!ces!résultats!et!interprétez.!
!! >3b>!Selon!vous,!quel!serait!le!phénotype!des!larves!issus!de!tels!embryons!injectés!
avec!Sox2>DN!si!on!les!laissait!se!développer?!
!
! 44!Nos!chercheurs!ont!ensuite!injecté!des!ARNm!codant!la!protéine!Chordin!dans!
un! seul! blastomère! de! xénope! au! stade! 8! cellules,! coté! gauche.! Puis! ils! ont! analysé!
l'expression!de!Sox2!au!stade!neurula!(Figure!4A,B).!
! >4a>!Décrivez!ces!résultats.!
! >4b>! Si! l'on! injecte! des! ARNm! de! BMP4! précocément! dans! l'embryon,! on! perd!
l'expression!de!Sox2.!En!quoi!les!effets!de!l'injection!de!chordin!et!de!BMP4!sont!en!accord!
avec!ce!que!vous!connaissez!de!ces!protéines?!
! >4c4! Le! gène! FGF8! est! normalement! exprimé! dans! le! mésoderme! lors! de! la!
gastrulation! et! la! neurulation.! Si! l'on! invalide! le! récepteur! de! FGF8,! le! gène! Sox2! ne!
s'exprime!plus.!!
! Nos! chercheurs! ont! injecté! des! ARNm! codant! la! protéine! FGF8! dans! un! seul!
blastomère!de!xénope!au!stade!8!cellules,!coté!gauche.!Puis!ils!ont!analysé!l'expression!
de!Sox2!au!stade!neurula!(Fig4A,B).!
! Que!concluez>vous!sur!le!rôle!de!FGF8?!tirez!un!maximum!de!conclusions!possible.!
!! !
! 454!Les!chercheurs!ont!réalisé!un!marquage!des!ARNm!Sox2!endogènes!dans!des!
embryons! injectés! avec! la! forme! Sox24DN.! La! sonde! utilisée! ne! peut! pas! détecter! les!
ARNm!Sox24DN!(figure5).!
! Analysez!et!interprétez!ces!résultats.!
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! >6>! Proposez! un! modèle! complet! des! mécanismes! analysés! précédemment.! Vous!
ferez! figurer! les! différents! feuillets! engagés,! sur! lesquels! vous! placerez! à! leur! juste!
localisation!les!acteurs!vus!dans!cet!exercice.!Utilisez!des!flèches!avec!des!signes!+!ou!>!pour!
indiquer!les!interactions!entre!ces!partenaires!(cf!exemple!ci!dessous).!

! 2/4!
Figure 1: Localisation des ARNm Sox2 chez la neurula de xénope (A, vue dorsale) A A
et chez l’embryon de poulet entre 20h et 48h d’incubation (B, vue dorsale, la limite
de l’aire pellucide est indiquée en pointillés; la flèche noire indique le niveau du
noeud de Hensen)

B P

!!!20h !!!!!22H !!!!!!!!!!24h! !30h ! !33h ! !!!40h ! ! !48h !!

A

Figure 2: Localisation des ARNm NCAM sur des embryons Figure 3: Localisation des ARNm Otx, En2, Krox20 ou
de xénope au stade neurula, préalablement microinjectés HoxB9 sur des embryons de xénope au stade neurula,
avec un plasmide contrôle ou un plasmide exprimant une préalablement injectés avec un plasmide contrôle ou un
forme dominante négative de Sox2 (vue dorsale). plasmide exprimant une forme dominante négative de
Sox2 (vue dorsale).
contrôle Sox2-DN
schéma d’injection
Ani
ARNm
Otx

V D

Veg
ARNm
En2

injection: contrôle injection : Sox2-DN

ARNm
NCAM ARNm
Krox20

ARNm
HoxB9

3/4
Figure 4: Localisation des ARNm Sox2 sur des embryons
de xénope au stade neurula, préalablement injectés dans
un blastomère gauche avec des ARNm contrôles, Chordin
(Chd), ou FGF8 (vue dorsale). (En pointillés, axe antéro-
postérieur de l’embryon)
Figure 5: Localisation des ARNm Sox2 endogènes sur
des embryons de xénope au stade neurula,
préalablement injectés avec un plasmide contrôle ou un
plasmide exprimant une forme dominante négative de
Sox2 (vue dorsale).

contrôle Sox2-DN
injection: marquage ARNm Sox2

marquage:
ARNm Sox2
endogènes
controle

Chordin

FGF8

4/4