THESE ASMA (Repaired)

‫وزارة التعليم العالي و البحث العلمي‬
MINISTER DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE BADJI MOKHTAR ‫عنابة‬-‫جامعة باجي مختار‬

-ANNABA-
Année 2015/2016
FACULTÉ DES SCIENCES
DÉPARTEMENT DE CHIMIE
THÈSE
Présentée en vue de l’obtention du diplôme de Doctorat 3ème cycle
THÈME :
Etude ethnobotanique et chimique du figuier de

barbarie (Opuntia ficus-indica)
Option : Chimie Organique appliquée

Présenté par : Melle Asma SEDDIK AMEUR
Directeur de thèse : Mr. Belgacem LEGSEIR Pr. U.B.M. Annaba
Devant le jury :
Présidente : Mme. Louisa ARIBI-ZOUIOUECHE Pr. U.B.M. Annaba
Examinateurs Mr. Zidane BRANES Pr. U.B.M. Annaba
:
Mr. Mounir AZOUZ M.C.A. U.M.C.M. Souk-Ahrass
Mme. Loubna FERCHICHI M.C.A. U.B.M. Annaba
DEDICACE
Au soleil qui éclaire mes journées. À la lune qui illumine mes nuits.
Aux étoiles qui épanouissent ma vie.
À ma famille.
REMERCIEMENTS
Avant toute chose, je remercie Dieu de m’avoir mis sur la bonne voie et de m’avoir aidé
durant mon travail.
Je remercie toute ma famille qui m’a donné l’appui pour avancer dans mes recherches.
Je remercie le professeur Belgacem LEGSEIR d’avoir accepté la direction de ma thèse.
Je remercie les membres de jury d’avoir accepté d’examiner ma thèse.
Je remercie tous les gens qui ont participé à l’achèvement de ce travail, Pr. Abd El-
HafidDJEROUROU directeur du laboratoire LSBO ; Pr. Abdel-Waheb DJILANI ex-
enseignant-chercheur au laboratoire LSBO.
Je remercie le professeur Joseph VERCAUTERENde l’université de Montpellier d’avoir
réalisé les différentes analyses spectrales.
Je remercie le professeur Amadou DICKO de l’université de Lorraine pour ses conseils et
son aide.
Je remercie Imane NEGAB responsable dulaboratoire pharmacotoxicologie, SAIDAL,
MEDEA d’avoir réalisé les différents essais biologiques.
Finalement, je remercie mes meilleurs amis de m’avoir aidé, soutenue et encouragé durant les
durs moments.
RESUME
Ce travail de recherche fait l’objet d’une étude ethnobotanique et chimique d’une plante
abondante sur le territoire algérien mais qui n’est pas valorisé jusqu’à nos jours. Le figuier de
barbarie ou Opuntia ficus-indicaest très étudié pour les vertus thérapeutiquesrévéléespar ses
cladodes, ses fruits, ses graines et aussi ses fleurs, et qui ont étéacquis par de nombreux
principes actifs en particulier les flavonoïdes. Ce travail comprend deux parties. La première
concerne l’étude bibliographique et la deuxième est consacrée à l’étude expérimentale des
fleurs de cette plante. L’étude chimique de l’extrait méthanolique des fleurs a montré une
forte teneur en flavonoïdes et une présence d’un produit majoritaire qui a été par la suite
séparé et identifié en tant que isorhamnetine-3-O-robinobioside. L’étude de l’activité anti-
inflammatoire et l’activité antispasmodique de cet extrait et du produit séparé a montré des
résultats positif et proche, ce qui nous a permis de conclure que c’est la molécule
d’isorhamnetine-3-O-robinobioside qui est responsable des activités biologiques procurées
par les fleurs du figuier de barbarie.
Mots clés : Figuier de barbarie, fleurs, isorhamnetine-3-O-robinobioside, anti-inflammatoire,

antispasmodique.
ABSTRACT
This research is the subject of an ethnobotanical and chemical study of an abundant plant in
the Algerian territory but is not valued until today. Prickly pear or Opuntia ficus-indica is
investigated for therapeutic benefits revealed by its cladodes, fruits, seeds and also its flowers,
which were acquired by many active compounds especially flavonoïds. This work includes
two parts.The first is the literature study and the second is devoted to the experimental study
of the flowers of this plant. The chemical study of the methanol extract of flowers showed
significant content of flavonoïds and presence of a major product which was separated then
identified as isorhamnetin-3-O-robinobioside. The study of anti-inflammatory activity and
antispasmodic activity of the extract and the separated product showed positive and close
results, which allowed us to conclude that the isorhamnetin-3-O-robinobioside molecule is
responsible for the biological activities procured by the flowers of the prickly pear.
Key-words: Prickly pear, flowers, isorhamnetin-3-O-robinobioside, anti-inflammatory,

antispasmodic.
‫ملخص‬
‫هذاالبحث هو موضوع دراسة اثنونباتية و كيميائية لنبتة متواجدة بكثرة في األراض‪JJ‬ي الجزائري‪JJ‬ة لكن لم يتمتقييمهاحتى‪JJ‬اليوم‪.‬‬
‫يتم درسالتينالش‪JJJ‬وكيأو ‪ Opuntia ficus-indica‬من أجلفوائدهالعالجيةالتيكش‪JJJ‬فت عنهااأللواح‪،‬الفواك‪JJJ‬ه‪،‬الب‪JJJ‬ذور‪،‬وك‪JJJ‬ذلك‬
‫الزهور‪،‬والناتجةعلى العديد‪ J‬من المكونات النشطة وخاصة مركبات الفالفونويد‪ .‬يتكون ه‪JJ‬ذ االعم‪JJ‬ل من ج‪JJ‬زأين‪ .‬الج‪JJ‬زءاألول‬
‫هو عب‪J‬ارة عندراس‪J‬ةببليوغرافيةأما الج‪J‬زء الث‪J‬اني فخص‪J‬ص للدراس‪J‬ة التجريبي‪J‬ة على زه‪J‬ور ه‪J‬ذا النب‪J‬ات‪ .‬أظه‪J‬رت الدراس‪J‬ة‬
‫الكيميائية‪ J‬لمستخلص الميثانول للزهور على وجود نسبة عالية من مركبات الفالفونويد باإلضافة إلى مركب رئيسي‪ ،‬الذي تم‬
‫فص‪JJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJ‬له و التع‪JJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJ‬رف علي‪JJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJ‬ه كم‪JJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJJ‬ركب ‪isorhamnetin-3-O-‬‬
‫‪ .robinobioside‬أظهرتدراسةالنشاطالمضادلاللتهابوالمضادللتشنجلمستخلصالميثانولوكذلك المركب علىنتائجإيجابيةوقريبة‬
‫من بعضها‪،‬مما سمح لنا أن نستنتج أنمركب‪ isorhamnetin-3-O-robinobioside‬هوالمسؤولعناألنشطةالبيولوجية ال‪JJ‬تي‬
‫تمتلكها زهور التين الشوكي‪.‬‬
‫المفاتيح‪:‬التينالشوكي‪ ،‬الزهور‪ ، isorhamnetin-3-O-robinobioside ،‬مضاد االلتهاب‪ ،‬مضادالتشنج‬

TABLE DES MATIERES
LISTE DES ABREVIATIONS...................................................................................................................i

LISTE DES TABLEAUX.........................................................................................................................ii
LISTE DES FIGURES...........................................................................................................................iii
INTRODUCTION...................................................................................................................................1
1ère PARTIE : ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE........................................................................................9
CHAPITRE I : ETUDE PHYTOCHIMIQUE DES FLAVONOIDES....................................................10
1. Classification...............................................................................................................................11
2. Biosynthese et diversite structurelle..........................................................................................13
2.1. Biosynthese des precurseurs de flavonoïdes.........................................................................13
2.2. Formation des anthocyanidines............................................................................................14
2.3. Formation des proanthocyanidines.......................................................................................14
2.4. Formation des flavones et flavonols.....................................................................................14
2.5. Formation des isoflavonoides...............................................................................................14
3. Proprietes physico-chimiques des flavonoides..........................................................................16
4. Méthode d’analyses des flavonoïdes..........................................................................................16
4.1. Chromatographie sur couche mince (CCM).........................................................................16
4.2. Chromatographie liquide à haute performance (CLHP)........................................................18
5. Analyse structurale des flavonoïdes..........................................................................................18
5.1. UV-Visible...........................................................................................................................18
5.1.1. Les changements induits par le méthylate de sodium....................................................19
5.1.2. Les changements induits par l’acétate de sodium.........................................................19
5.1.3. Les changements induits par le borate..........................................................................20
5.1.4. Les changements induits par le chlorure d’aluminium.................................................20
5.2. Résonance magnétique nucléaire..........................................................................................24
5.2.1. Choix du solvant...........................................................................................................24
5.2.2. Analyse des spectres RMN............................................................................................24
6. Activités pharmacologiques.......................................................................................................25
6.1. Propriétés anti-oxydantes......................................................................................................25
6.2. Propriétés inhibitrices d’enzymes.........................................................................................26
6.3. Effets protecteurs vasculaires...............................................................................................26
6.4. Propriétés antiallergiques......................................................................................................26
6.5. Activité anti-inflammatoire..................................................................................................26
6.6. Activité anti-ulcérogène........................................................................................................27
6.7. Autres effets biologiques......................................................................................................28
Références............................................................................................................................................29
CHAPITRE II : ETUDE ETHNOBOTANIQUE ET CHIMIQUE DE L’ESPECE................................35
1. Description botanique du figuier de barbarie..........................................................................36
1.1. Taxonomie............................................................................................................................36
1.1.1. Classification................................................................................................................36
1.1.2. Nomenclature...............................................................................................................36
1.2. Morphologie.........................................................................................................................37
2. Origine et distribution................................................................................................................38
3. Ecologie.......................................................................................................................................39
3.1. Sol........................................................................................................................................39
3.2. Climat...................................................................................................................................39
4. Composition chimique................................................................................................................39
5. Utilisations traditionnelles.........................................................................................................42
6. Activités pharmacologiques.......................................................................................................43
6.1. Antiulcéreuse........................................................................................................................43
6.2. Anti-inflammatoire...............................................................................................................43
6.3. Diurétique.............................................................................................................................44
6.4. Anti-hyperlipidémique et hypocholestérolémiant.................................................................44
6.5. Hypoglycemique...................................................................................................................44
6.6. Anti-oxydante.......................................................................................................................45
6.7. Autres...................................................................................................................................45
Références............................................................................................................................................46
2ème PARTIE : ETUDE EXPERIMENTALE..........................................................................................49
1. Echantillonnage..........................................................................................................................50
2. Méthodes.....................................................................................................................................50
2.1. Screening phytochimique.....................................................................................................50
2.2. Extraction des flavonoïdes....................................................................................................51
2.3. Analyse des flavonoïdes par CCM.......................................................................................53
2.4. Séparation des flavonoïdes...................................................................................................53
2.5. Analyse des flavonoïdes par CLHP......................................................................................54
2.6. Dosage des composes phénoliques.......................................................................................55
2.6.1. Préparation des extraits................................................................................................55
2.6.2. Dosage des polyphénols totaux.....................................................................................55
2.6.3. Dosages des flavonoïdes totaux....................................................................................55
2.7. Activités biologiques............................................................................................................56
2.7.1. Animaux........................................................................................................................56
2.7.2. Test de toxicité aigue....................................................................................................56
2.7.3. Activité anti-inflammatoire...........................................................................................56
2.7.4. Activité antispasmodique..............................................................................................58
3. Résultats et discussions..............................................................................................................59
3.1. Screening phytochimique.....................................................................................................59
3.2. Extraction des flavonoïdes....................................................................................................59
3.3. Analyse des flavonoides par CCM.......................................................................................59
3.4. Séparation des flavonoïdes...................................................................................................61
3.5. Analyse des flavonoïdes par CLHP......................................................................................61
3.6. Analyses spectrales...............................................................................................................62
3.7. Dosage des composes phénoliques.......................................................................................66
3.7.1. Dosage des polyphénols totaux.....................................................................................66
3.7.2. Dosage des flavonoïdes totaux......................................................................................67
3.8. Activités biologiques............................................................................................................68
3.8.1. Test de toxicité aigue....................................................................................................68
3.8.2. Activité anti-inflammatoire...........................................................................................68
3.8.3. Activité antispasmodique..............................................................................................69
Références............................................................................................................................................70
CONCLUSION GENERALE................................................................................................................73
ANNEXES.............................................................................................................................................75
LISTE DES ABREVIATIONS
AINS : Anti-Inflammatoires Non Stéroïdiens
CCM : Chromatographie sur Couche Mince
CE : électrophorèse capillaire
CG : Chromatographie Gazeuse
CLHP : Chromatographie Liquide à Haute Performance
CoA : Coenzyme A
COX : Cyclooxygénases
DEPT : Distortionless Enhanced Polarization Transfer
DNID : Diabete-Non-Insulino-Dependant
DRO : Dérivés Réactifs de l’Oxygène

HBP : Hyperplasie Bénigne de la Prostate
HDL :High Density Lipoprotein
HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation
L.: Carl von Linné
LDL: Low Density Lipoprotein
Mill. : Philip Miller
ODS : Octadecyl-silica
PG : Prostaglandines
Rf : Facteur de Rétention
RMN : Résonance Magnétique Nucléaire
RP-18 : Reversed Phase
SM : Spectrométrie de Masse
UV : Ultra-Violet
VLDL :Very Low Density Lipoprotein
i
LISTE DES TABLEAUX
Tableau 1. Sélection de plantes contenant des flavonoïdes.......................................................6
Tableau 2. Structure moléculaire de chaque groupe de flavonoïdes.......................................12
Tableau 3. Systèmes de solvants pour chromatographie sur couche mince de gel de silice des
flavonoïdes................................................................................................................................17
Tableau 4.Les changements affectés aux spectres UV des Flavones et Flavonols..................22
Tableau 5. Les changements affectés aux spectres UV des Isoflavones, Flavanones et
dihydroflavonols.......................................................................................................................23
Tableau 6. Déplacement chimique en 1H et 13C de certains solvants RMN............................24
Tableau 7. RMN 1H déplacements chimiques des flavonoïdes...............................................25
Tableau 8.RMN 13C déplacements chimiques des flavones....................................................25
Tableau 9. Table des conditions de la chromatographie liquide à haute performance............54
Tableau 10. Spectroscopie RMN (500 MHz, CD3OD) pourle composé (6)...........................63
Tableau 11. Données spectrale (UV) et chromatographique (CLHP) des composés détectés
dans l’extrait méthanolique des fleurs d’O. ficus-indica selon De Leo et al............................65
Tableau 12. Teneur des différents extraits en polyphénols totaux..........................................67
Tableau 13. Teneur des différents extraits en flavonoïdes totaux...........................................68
Tableau 14. Effet de l’extrait méthanoliquedes fleurs de figuier de barbarie et
l'isorhamnétine-3-O-robinobioside sur l'œdème induit par la carragénine chez la souris........68
Tableau 15. Effet de l’extrait methanoliquedes fleurs de figuier de barbarie et
l'isorhamnétine-3-O-robinobioside sur les spasmes induitspar l'acide acétique.......................69
ii
LISTE DES FIGURES
Figure 1. Structure de l’enchaînement benzo-γ-pyrone...........................................................11
Figure 2. Les principales voies de la biosynthèse des flavonoïdes à travers une série de
modifications enzymatiques......................................................................................................15
Figure 3. Spectre UV de la plupart des flavonoïdes................................................................19
Figure 4.Les changements induits par l’acétate de sodium sur les flavonoïdes......................20
Figure 5. Les changements induits par le borate sur les flavonoïdes.......................................20
Figure 6.Les changements induits par le chlorure d’aluminium sur les flavonoïdes...............20
Figure 7. Distribution géographique d’Opuntia ficus-indica dans le monde...........................39
Figure 8.Profil chromatographique de l’extrait méthanolique des fleurs de figuier de barbarie
...................................................................................................................................................62
Figure 9.Profil chromatographique de l’extrait méthanolique des fleurs d’O. ficus-indica
selon De Leo et al.....................................................................................................................65
Figure 10.Courbe d’étalonnage de l’acide gallique.................................................................67
Figure 11. Courbe d’étalonnage de la catéchine......................................................................68
iii
INTRODUCTION
Tout au long du Moyen Âge, la maladie a souvent été attribuée à la présence de mauvais
esprits. Les herbes auraient été dotées de pouvoirs magiques et spirituels qui étaient capables
1
Introduction
de débarrasser les individus de ces mauvais esprits. Aujourd’hui, cette théorie semble quelque
peu archaïque, mais pendant des siècles, les herboristes traditionnels maintenus qu’une herbe
botanique se compose de force spirituelle latente de l’énergie qui la donnait à la personne ou
l’animal qui la consommer.
En outre, les herboristes ont pensé que la force de vie qui existait au sein des herbes a été
largement caractéristique de l’habitat physique de la plante. L’herbe donnait un pouvoir de
guérison qui rappelle de son caractère particulier et son rapport à la nature selon la théorie des
signatures.
Compte tenu des évolutions radicales en médecine au cours des siècles, la plupart des
herboristes modernes ont jeté ces théories éthérées en faveur d’une compréhension plus
scientifique. D’autres ont intégré les théories traditionnelles à la médecine pour l’élaboration
d’une théorie scientifique quasi-spiritualisée du mécanisme d’action derrière la médecine
botanique.
Certainement, l’établissement scientifique propose une théorie beaucoup plus structurée et

fondée sur des preuves pour expliquer le succès d’une plante dans la guérison. Le chercheur
d’aujourd’hui est équipé d’une technologie sophistiquée permettant de découvrir les agents
médicinaux présents dans une plante communément appelés phytonutriments.Dans la
littérature scientifique, les phytonutriments ont été rapportés pour agir comme des enzymes,
des pigments, et des régulateurs de croissance des plantes ainsi que pour fournir l’odeur, la
couleur et le goût. Ils sont également impliqués dans la protection de la plante des bactéries
potentiellement nocives et meurtrières, des virus, des blessures et des insectes. Étant donné
que ces produits chimiques actifs sont responsables de l’entretien de la vie de la plante, il
n’est pas surprenant qu’ils démontrent une activité thérapeutique dans le laboratoire et dans
les études contrôlées avec les humains. Ces composés aident à réguler les processus vitaux du
corps pour maintenir la santé et aider à la lutte contre les maladies.
La découverte des phytonutriments, aussi appelés composés phytochimiques, dans les plantes
a été saluée comme l’un des résultats les plus importants dans la recherche à base des plantes.
Les herbes brutes sont constituées de nombreux composés phytochimiques. Chaque produit
chimique est partiellement ou totalement responsable d’une fonction spécifique. Cependant, la
diversité chimique et la variabilité des composants au sein de l’herbe brute sont quelque peu
déconcertantes à l’établissement médical parce que la structure chimique de l’herbe contraste
directement celui des médicaments généré dans les laboratoires modernes. Contrairement à
2
Introduction
leurs homologues à base de plantes, les produits pharmaceutiques d’origine naturelle, sont des
entités moléculaires généralement simples constitués d’un composé chimique isolé et purifié.
L’existence de plusieurs agents dans une plante donnée peut offrir de nombreux avantages.
D’abord, en raison de la large gamme de composants dans une herbe, ces herbes sont
généralement employées de manière multifonctionnelle dans le traitement d’une ou plusieurs
maladies. Deuxièmement, il est considéré par certains herboristes que l’émergence de
nouvelles maladies et les cibles de patients élargissent le rôle de certains agents dans l’herbe.
Ces agents qui pourraient avoir été préalablement identifiés comme inactifs peuvent plus tard
assumer un rôle de plus grande proportion.
Les plantes médicinales contiennent plusieurs composants qui pourraient être responsables
des effets thérapeutiques [1], citons par exemple l’Arnica montana L. (Astéracées) qui est
connue pour son activité anti-inflammatoire en raison de sa capacité à élaborer des lactones
sesquiterpéniques, comme hélénaline et dihydrohélénalineinhibant l’activation du facteur de
transcription NF-kappa B responsable de la transcription de gènes impliqués dans l’activation
des médiateurs de l’inflammation.
H
H H
O O
H
O O
O OH O H H
Hélénaline Dihydrohélénaline
Glycyrrhiza glabra (Fabacées) contient les glycyrrhizine (mélange des sels de calcium et de
potassium de l’acide glycyrrhizique) et l’acide glycyrrhétiniquequi sont les constituants
responsables de la cicatrisation d’ulcère, notant aussi que ces composés, en particulier l’acide
glycyrrhétinique, ont montré une activité anti-inflammatoire locale importante.
OH HOOC
HOOC
HOOC OH
O O O
OH OH
H H
HO O
H H
HOOC O O HO
H H
3
Introduction
Acide glycyrrhizique Acide glycyrrhétinique
Matricaria recutita (Astéracées) est connue pour ces activitésanti-inflammatoires et

antispasmodiques en raison de son contenu en (-)-alpha-Bisabolol et en oxydes de Bisabolol
A et B.
OH
OH
O
H H O OH
(-)- α-Bisabolol Oxyde de Bisabolol A Oxyde de Bisabolol B
Il est donc nécessaire d’identifier le maximum de constituant possible afin de comprendre et

expliquer la bio-activité.
Parmi les phytonutriments étudiés, on note les flavonoïdes qui constituent le groupe le plus
large des composés phénolique qui se produisent couramment en plante. Ce groupe contient
plus que 8 000 composés connus et il est en croissance en raison de la grande diversité
structurelle résultant de l’hydroxylation, la méthoxylation, la glycosylation, et l’acylation.
Les flavonoïdes sont les pigments responsables des nuances jaunes, orange et rouge dans les
plantes florales qui sont aussi des facteurs importants pour la croissance, le développement et
la défense des plantes. Plusieurs flavonoïdes sont dotés d’activités biologiques par exemple :
anti-inflammatoire, antiallergique, anti-ischémique, antiplaquettaire, immuno-modulateur, et
des activités anti-tumorales [2 – 4]. Ils peuvent également inhiber plusieurs enzymes, y
compris les lipooxygénases et les cyclooxygénases, les monooxygénases, la xanthine oxydase,
succinoxydase des mitochondries, la phospholipase A2, les topoisomérases, et les protéines
kinases [5-6]. Les activités biologiques des flavonoïdes sont considérées comme étant
principalement due à leurs propriétés antioxydantes [7-8], en limitant la production des
dérivés réactifs de l’oxygène (DRO) et/ou en les piégeant.
Les flavonoïdes sont des composants d’alimentation de nombreux herbivores et omnivores,

dont l’homme [9]. On les trouve principalement dans les fruits, légumes et boissons
populaires, tels que le thé, et leur consommation peuvent atteindre 1 g/jour [10]. En outre, les
flavonoïdes sont présents dans diverses herbes [11].Environ 50 espèces, ont été utilisées
4
Introduction
comme remèdes pour leur teneur en flavonoïdes ; certains sont énumérés dans le tableau 1
[12]
Les propriétés bénéfiques des plantes médicinales riches en flavonoïdes ne peuvent pas être
affectées exclusivement à ces composés, puisque d’autres composants présents dans la plante
peuvent contribuer directement ou afficher un rôle ''permissif'' qui améliore l’effet des
flavonoïdes, ce qui fait que l’essentiel à l’étude des flavonoïdes est d’avoir les moyens
disponibles pour leur séparation.
La flore algérienne est très riche en plantes médicinales qui sont utilisées depuis des siècles
dans le traitement de diverses maladies. Parmi ces plantes on trouve le figuier de barbarie, très
répandu aux déserts et autour de la côte algérienne. Le figuier de barbarie connue sous le nom
scientifique Opuntia-ficus-indica est cultivé en Algérie pour ses délicieux fruits mais il est
aussi utilisé en médecine traditionnelle. Ses fleurs sont séchées, moulus puis mélangées avec
du miel pour traiter les bronchites et l’asthme. Elles sont aussi utilisées comme infusion pour
traiter les calculs rénaux.
Ce travail fait l’objet d’une étude ethnobotanique et chimique du figuier de barbarie en plus
d’une étude in vivodes activités pharmacologiques de ses fleurs tel que l’activité anti-
inflammatoire et l’activité antispasmodique pour vérifier leur utilisation traditionnelle et
déterminer les phytonutriments responsables de ces activités.
5
Introduction
Glycosides de lutéoline- (<1%), acide Cholérétique,

Feuilles d’artichaut
cafféoylquinique (<2%), lactones sesquiterpéniques spasmolytique, Dyspepsie
(Cynara scolymus)
(<4%) hépatoprotecteur
Extrait de fruit de Vasoprotectrice,
anthocyanes (principalement : glycosides de Faiblesse capillaire, insuffisance
myrtille astringente,
malvidine, cyanidine et delphinidine) (> 24%) veineuse, diarrhée
(Vaccinium myrtillus) antioxydante
Fleurs de calendula Isoquercitrine, rutine, narcisses, saponines Inflammation de la muqueuse buccale,
Anti-inflammatoire
(Calendula officinalis) triterpéniques cicatrisation des plaies
Antispasmodique, anti-
Fleurs de camomille Glycosides d’apigénine et de lutéoline (> 8%), huile Troubles gastro-intestinaux, irritations de
inflammatoire,
(Matricaria chamomilla) volatile (α-bisabolol, chamazulène) la peau et des muqueuses
antibactérienne
Fleurs de sureau Rutine, astragaline, hypéroside, isoquercitrine (<3%); Anti-inflammatoire,
Etats fébriles, rhume
(Sambucus nigra) acides triterpéniques (environ 1 %) aquarétique
Extrait de feuilles de Glycosides de flavonol (22-27%), lactones terpéniques Antioxydant,
Déficits cognitifs
ginkgo (Ginkgo biloba) (5-7%) Neuroprotectrice
Rutine, quercitrine, isoquercitrine, astragaline, Aquarétique,
Verge d’or Irritation des voies urinaires en cas
hypéroside (1,5 - 2,4%); saponines triterpéniques analgésique, anti-
(Solidago virgaurea) d'inflammation et de calculs rénale
(> 8%) inflammatoire
Racine de réglise Glycyrrhizine-glycosides (4-24%), flavanones, Anti-inflammatoire,
Dyspepsie
(Glycyrhiza glabra) chalcones, et isoflavones (≈1%) émollient, expectorant
Fleurs de tilleul Dimères de procyanidine (environ 2%), glycosides de
Diaphorétique, sédatif soulagement du rhume, tension nerveuse
(Tilia cordata) quercétine et kaempférol (environ 1%)
Feuilles/fleurs/fruits
Procyanidines (> 3%), dérivés de flavones et Cardioactif, hypotenseur,
d’aubépine(Crataegus Cardiotonique
flavonols (> 1%) vasodilatateur coronarien
monogyna, oxyacantha)
Tableau 1. Sélection de plantes contenant des flavonoïdes
Fleurs de Reine-des-près Glycosides de quercétine, la plupart quercétine-4'-

Diaphorétique Soulagement du rhume
(Filipendula ulmaria) glycosides (0,5% -1%), tanins hydrolysables (10-15%)
6
Introduction
Fleurs de Reine-des-près Glycosides de quercétine, la plupart quercétine-4'-

Diaphorétique Soulagement du rhume
(Filipendula ulmaria) glycosides (0,5% -1%), tanins hydrolysables (10-15%)
Dommages au foie toxique, traitement
Fruit de chardon-marie Flavanoliganes, collectivement appelés sylimarin (1,5- Protection
de soutien dans les maladies chroniques
(Sylibum marianum) 3%) hépatocellulaire
du foie, dyspepsie
Zeste d’orange amère
Huile volatile (> 2%), flavones, flavanones Cholérétique Dyspepsie, stimulant de l'appétit
(Citrus aurantium)
Partie supérieurs des
Vitexine, isovitexine, et leurs c-glycosides, les Des troubles nerveux, discorders de
fleurs de la passion Sédatif, anxiolytique
glycosides de lutéoline (> 2,5%) sommeil doux
(Passiflora incarnate)
Hypérosides (0,5-2%), rutine (0,3-1,6%),
Millepertuis
isoquercitrine (0,3%), phoreglucinols (> 4%), Antidépresseur Dépression légère à modérée
(Hypericum perforatum)
naphtodianthrones (> 0,75%)
Anti-inflammatoire,
Ecorce de saule Salicine et ses esters (> 10%), glycosides de
antipyrétique, Douleurs névralgiques, arthrose
(Salix spp.) naringénine (> 1,5%)
analgésique
Astringente, anti-
Feuilles/écorce
Hamamélitanine, gallotanins (> 12%); glycosides de inflammatoire, Blessures de la peau, les varices, les
d’hamamélis
catéchine, quercétine et kaempférol vasoconstricteur, hémorroïdes
(Hamamelis virginiana)
antioxydante
7
Introduction
Références
[1] Bone, K., Mills, S. (2013). Principles and practice of phytotherapy: modern herbal
medicine. Elsevier Health Sciences.
[2] Prior, R. L., Cao, G. (2000). Flavonoids: diet and health relationships.Nutrition in Clinical
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[12] Pietta, P. G., Gardana, C., Pietta, A. (2003). Flavonoïds in medicinal plants. In: Rice-
Evans, C. A., Packer, L. (Eds.) Flavonoïds in Health and Disease. CRC Press, pp. 43-69.
8
1ère PARTIE :
ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE
CHAPITRE I :ETUDE
PHYTOCHIMIQUE DES
FLAVONOIDES
1 ère Partie : Etude Bibliographique
1. Classification
Tous les flavonoïdes dérivent de l’enchaînementbenzo-γ-pyrone (figure 1), et peuvent être

classés selon la nature des différents substituants présents sur les cycles et du degré de
saturation du squelette benzo-γ-pyrone [1]. Les grandes classes de flavonoïdes sont
constituées de trois cycles à six chaînons : cycle A aromatique fusionné à un hétérocycle C
qui est fixé par une simple liaison carbone-carbone à un cycle B aromatique. Les flavonoïdes
se diffèrent dans l’arrangement des groupements hydroxyle, méthoxyle, et les groupes
latéraux glucosidiques (hétérosidique), et dans la conjugaison entre le cycle A et le cycle B.
Selon les différences structurales spécifiques, les flavonoïdes sont classés en six grandes
catégories : les flavonols, les flavones, les flavanones, les flavanols, les anthocyanidines et
isoflavanones [2]. Les flavones et les flavonols représentent environ 80 % des flavonoïdes
connus. La structure moléculaire de chaque groupe de flavonoïdes est donnée dans le tableau
2 [3].
Les groupes hydroxyles présents sur les trois anneaux sont des sites potentiels pour des liens
vers des hydrates de carbone. Les flavonoïdes qui sont liés à une ou plusieurs molécules de
sucre sont connus en tant que flavonoïdes glycosides, alors que ceux qui ne sont pas
conjugués à des molécules de sucre sont appelés aglycones. A l’exception des flavan-3-ols,
les flavonoïdes se produisent dans les plantes et la plupart des aliments entant que glycosides
[4].
3'
2' 4'
8 B
O 2 5'
7 1'
A C 6'
3
6
5 4
O
Figure 1. Structure de l’enchaînement benzo-γ-pyrone
11
Tableau 2. Structure moléculaire de chaque groupe de flavonoïdes
Groupe Structure Exemples et sources

Flavones Apéginine 5, 7, 4’-OH
Apium graveolens, Passiflora incarnata,
O
Petroselinum sativum
Lutéoline 5, 7 -OH,
O
Flavonols Quercétine 5, 7, 3’, 4’ –OH
Ginkgo biloba, Thea sinensis, Vaccinium
O
macrocarpon, Vitis vinifera
OH Kaempférol 5, 7, 4’–OH
O Ginkgo biloba, Raphanussativus, Thea sinensis,
Vitis vinifera
Myricétine 5, 7, 3’, 4’, 5’ –OH

Thea sinensis, Vaccinium macrocarpon,
Vitis vinifera
Isorhamnetine 5, 7, 4’–OH, 3’-OCH3
Flavanones Naringénine 5, 7, 4’-OH

O
fruits du genre Citrus (sp. aurantium, limon, etc.)
O
Flavanols Catéchine5, 7, 3’, 4’ –OH
Thea sinensis, Vitis vinifera
O
OH
O
Anthocyanidin Apigenidine
e +
O
OH
Isoflavanones O Génistéine5, 7, 4’–OH
Soya hispida, Stellaria media, Pueraria lobata,
Sophora japonica
O
12
2. Biosynthese et diversite structurelle
Les flavonoïdes sont synthétisés par la voie métabolique des phénylpropanoïdes, dans laquelle
l’acide aminé phénylalanine est utilisé pour produire le 4-coumaroyl-CoA [5]. Ceci peut être
combiné avec le malonyl-CoA pour obtenir le véritable squelette des flavonoïdes, un groupe
de composés appelés chalcones, qui contiennent deux noyaux phényle. La fermeture du cycle
conjugué des chalcones résulte sous la forme familière des flavonoïdes, une structure en trois
anneaux.
La voie métabolique se poursuit à travers une série de modifications enzymatiques pour
donner les flavanones, les dihydroflavonols, et les anthocyanes. Cependant,Wallace et
Grisebach [6] ont défini que les chalcones sont les précurseurs directs de plusieurs composés
flavonoïques tels que flavanes, flavanones, les flavones, les flavonols, les isoflavones, les
anthocyanines, proanthocyanidines (tanins), et une foule d’autres polyphénols (figure 2).
2.1. Biosynthese des precurseurs de flavonoïdes
La première étape commence par la désamination de la phénylalanine par l’enzyme L-

phénylalanine ammoniac-lyase (PAL) pour obtenir trans-cinnamate.
La deuxième étape est l’hydroxylation de la trans-cinnamate catalysé par cinnamate 4-

hydroxylase (C4H) pour obtenir la trans-4-coumarate. Cette étape consiste l’oxygénation
initiale des phénylpropanoïdes, qui introduit le 4’-hydroxy qui est commun à la plupart des
flavonoïdes.
La troisième étape est la formation des esters de thiol-Coenzyme A (4-coumaroyl-CoA) à

partir des 4-coumarate en utilisant 4-coumarate : CoA ligase (4CL) comme catalyseur.
La quatrième étape est la formation de chalcone qui se produit par une décarboxylation du 4-
coumaroyl-CoA puis condensation avec trois molécules de malonyl coenzyme A, par la
chalcone synthase (CHS) pour produire un intermédiaire polycétide qui est ensuite soumis à
cyclisation et aromatisation. Le malonyl-CoA est formé à partir de l’acétyl-CoA par l’acétyl-
CoA carboxylase (ACC).
Finalement, le noyau hétérocyclique des flavonoïdes est établi par l’isomérisation

stéréospécifique des chalcones en utilisant la chalcone isomérase (CHI). À cette étape, on
obtient la (2S)-flavanones qui sera convertie en plusieurs autres molécules[7].
13
2.2. Formation des anthocyanidines
(2R, 3R)-dihydroflavonols (DHFS) obtenue par réaction stéréospécifique sur (2S)-flavanones

en utilisant comme catalyseur Flavanone 3β-hydroxylase (FHT ou F3H), ensuite le (2R, 3R)-
trans-dihydroflavonols est convertie en (2R,3S,4S)-flavan-2,3-trans-3,4-cis-diols
(leucoanthocyanidines) par le Dihydroflavonol 4-reductase (DFR) et finalement on obtient
l’anthocyanidines correspondant par l’anthocyanidine synthase (ANS)[7].
2.3. Formation des proanthocyanidines

Ilssont obtenus :
- Soit à partir des leucoanthocyanidines qui perdent le 4-hydroxyl et forment les 2,3-
trans-flavan-3-ols par leucoanthocyanidine reductase (LAR) par exemple :
leucocyanidin vers catechine.
- Soit à partir des anthocyanidines qui sont converties en 2,3-cis-flavan-3-ols par
l’enthocyanidine reductase (ANR) par exemple : cyanidine vers epicatechine [7].
2.4. Formation des flavones et flavonols
Une réaction de désaturation formants une double liaison entre C-2 et C-3 du cycle C est
impliqué dans la formation de deux autres types de flavonoïdes : les flavones et les flavonols
qui se diffèrent par l’absence ou la présence d’hydroxyle en C-3
- Les Flavones sont obtenues à partir des (2S)-flavanones par l’action des flavones
synthases I et II (FNS I et FNS II).
- Les Flavonols sont obtenues à partir des (2R,3R)-dihydrovlavonols par l’action
des flavonols synthases (FLS)
Ces substances subissent une série de réactions de modification telle que la glycosylation, la
méthylation, l’acylation et aussi la sulfation pour donner naissance à de nombreuses
molécules[7].
2.5. Formation des isoflavonoides
L’entrée dans la branche isoflavonoïde se produit par l’action de 2-hydroxyisoflavanone

synthase (2HIS, également connu comme l’isoflavone synthase, IFS). 2HIS catalyse la
migration de l’aryle du C-2 au C-3 et l’hydroxylation de la C-2 à partir des (2S) -flavanones
pour donner le (2R, 3S) -2-hydroxyisoflavanones.La déshydratation de la 2-
14
hydroxyisoflavanones, soit spontanément, soit sous l’action de l’isoflavone déshydratase

(IFD), forme alors les isoflavones[7].
OH OH
PAL C4H 4LC
HOOC NH2
HOOC HOOC COSCoA
Phenylalanine Acide cinnamique Acide 4-coumarique 4-coumaroyl-CoA
3×
Malonyl CoA CHS
OH OH OH
HO O HO O HO OH
FNS I CHI
FNS II
OH O OH O OH O
Apigénine Naringénine IFS Naringenine chalcone
Flavone Flavanone Chalcone
F3H
OH OH
HO O HO O HO O OH
FLS
OH OH
OH O OH O OH O
OH
kaempférol Dihydrokaempférol
Flavonol Dihydroflavonol 2-hydroxyisoflavanones
DFR IFD
OH OH
HO O
HO O HO O
LAR
OH OH
OH O
OH OH OH
OH
Afzelechine Leucopelargonidine Genistein
Proanthocyanidine Leuroanthocyanidine Isoflavone
ANS
OH OH
+
HO O HO O
ANR
OH OH
OH OH
Epiafzelechine Pelargonidine
Proanthocyanidine Anthocyanidine
Figure 2.Les principales voies de la biosynthèse des flavonoïdes à travers une série de modifications enzymatiques : L-
phénylalanine ammoniac-lyase (PAL), cinnamate 4-hydroxylase (C4H), 4-coumarate : CoA ligase (4CL), chalcone synthase
(CHS), chalcone isomérase (CHI), flavones synthase I et II (FNS I et FNS II), Flavanone 3β-hydroxylase (F3H),, flavonols
synthase (FLS), Dihydroflavonol 4-reductase (DFR), anthocyanidine synthase (ANS), leucoanthocyanidine reductase (LAR),
anthocyanidine reductase (ANR), isoflavone synthase (IFS), isoflavone deshydratase (IFD).
15
3. Propriétés physico-chimiques des flavonoïdes
Pour l’extraction des flavonoïdes, les solvantssont choisis en fonction du type requis. Les
flavonoïdes moyennement polaires (par exemple, les isoflavones, les flavanones, les flavones
et les flavonols, méthylés) sont extraits avec du chloroforme, dichlorométhane, éther
diéthylique ou acétate d’éthyle, tandis que les glycosides et les flavonoïdes aglycones très
polaires sont extraits avec des alcools ou mélanges d’alcool-eau.
Une procédure pratique et souvent utilisée est l’extraction par solvants séquentiels. Une
première étape, avec du dichlorométhane, par exemple, va extraire flavonoïdes aglycones et
moins de matériaux polaire et une étape ultérieure avec un alcool va extraire les flavonoïdes
glycosides et les constituants polaires[7].
4. Méthode d’analyses des flavonoïdes
Plusieurs méthodes d’analyses existent pour les flavonoïdes. Ceux-ci vont de la

chromatographie sur couche mince (CCM) jusqu’à l’électrophorèse capillaire(CE). Avec
l’introduction de la technique d’HPLC, le potentiel d’analyse s’est considérablement étendu.
La chromatographie en phase gazeuse (CG) est généralement peu utilisée, à cause de la faible
volatilité de plusieurs composés de flavonoïdes et la nécessite de préparer des dérivés.
Toutefois, Schmidt et al, ont rapporté la séparation des flavones, flavonols, flavanones et
chalcone (avec une substitution fréquente par des groupes de méthyle) par CG.
4.1. Chromatographie sur couche mince (CCM)
La chromatographie sur papier et l’électrophorèse sur papier étaient autrefois largement

utilisées pour l’analyse des flavonoïdes [8] mais maintenant la méthode d’analyse la plus
simple et la moins chère est la CCM. Les avantages de cette technique sont très bien connus :
une courte durée de séparation, la susceptibilité aux réactifs de détection, et la possibilité de
révéler plusieurs échantillons au même temps. CCM est également idéal pour le screening
préliminaire des extraits de plante avant l’analyse par CLHP.
De nombreux systèmes de solvants ont été utilisés pour la séparation des différentes classes
de flavonoïdes en utilisant CCM (tableau 3).
En ce qui concerne la détection, une brève exposition de la plaque CCM à la vapeur d’iode
produit des taches jaune-brun, ou bien, ils peuvent être observés à la lumière UV. En 254nm
sur des plaques contenant un indicateur fluorescent UV (tel que le gel de silice F254) ils
16
apparaissent comme des taches sombres. En 365nm, en fonction du type de structure, ils
présentent des fluorescences jaunes, verts, bleus ou noirs, qui sont intensifiées et modifiées
par l’utilisation de réactifs de pulvérisation[9].
Tableau 3.Systèmes de solvants pour chromatographie sur couche mince de gel de silice des
flavonoïdes [7].
Echantillons Eluant
Flavonoïdes aglycones EtOAc – i-PrOH – H2O, 100 : 17:13
EtOAc – CHCl3, 60 : 40
CHCl3 – MeOH, 96 : 4
Toluene – CHCl3 – MeCOMe, 8:5:7
Toluene – HCOOEt – HCOOH, 5:4:1
Toluene – EtOAc – HCOOH, 10:4:1
Toluene – EtOAc – HCOOH, 58 : 33 : 9
Toluene – EtCOMe – HCOOH, 18:5:1
Toluene – Dioxane – HOAc, 90 : 25 : 4
Flavonoïdes glycosides n-BuOH – HOAc – H2O, 65 : 15:25
n-BuOH – HOAc – H2O, 3:1:1
EtOAc – MeOH – H2O, 50 : 3:10
EtOAc – MeOH – HCOOH – H2O, 50 : 2:3:6
EtOAc – EtOH – HCOOH – H2O, 100 : 11:11:26
EtOAc – HCOOH – H2O, 9:1:1
EtOAc – HCOOH – H2O, 6:1:1
EtOAc – HCOOH – H2O, 50 : 4:10
EtOAc – HCOOH – HOAc – H2O, 100 : 11:11:26
EtOAc – HCOOH – HOAc – H2O, 25 : 2:2:4
THF – Toluene – HCOOH – H2O, 16:8:2 : 1
CHCl3 – MeCOMe – HCOOH, 50 : 33 : 17
CHCl3 – EtOAc – MeCOMe, 5:1:4
CHCl3 – MeOH – H2O, 65 : 45 : 12
CHCl3 – MeOH – H2O, 40 : 10:1
MeCOMe – Butanone – HCOOH, 10:7:1
MeOH – Butanone – H2O, 8:1:1
Flavanone aglycones CH2Cl2 – HOAc – H2O, 2:1:1
Flavanone glycosides CHCl3 – HOAc, 100 : 4
CHCl3 – MeOH – HOAc, 90 : 5:5
n-BuOH – HOAc – H2O, 4:1:5 (phase supérieure)
Isoflavones CHCl3 – MeOH, 92 : 8
CHCl3 – MeOH, 3:1
Isoflavone glycosides n-BuOH – HOAc – H2O, 4:1:5 (phase supérieure)
Dihydroflavonols CHCl3 – MeOH – HOAc, 7:1:1
4.2. Chromatographie liquide à haute performance (CLHP)
17
La méthode de choix pour l’analyse qualitative et quantitative des flavonoïdes est CLHP qui
peut séparer les différentes classes des flavonoïdes (flavones, flavonols, isoflavones,
anthocyanines, etc.) mais selon une phase stationnaire, un solvant, et un gradient bien
optimisés.
De nombreuses séparations sont exécutées sur gel de silice octadécylsilylé (ODS, RP-18, ou
C18 ou phase-inverse). Les flavonoïdes Glycosides sont élués avant les aglycones avec cette
phase stationnaire, et les flavonoïdes possédant plusieurs groupes hydroxyles sont élus avant
leurs analogues moins substitués.
Les Phases normales (gel de silice non modifiée) sont rarement employées, sauf pour les
séparations occasionnelles des flavonoïdes aglycones faiblement polaires, les flavones, les
flavanones polyméthoxylés ou isoflavones.
Les solvants les plus fréquents utilisés pour l’élution sont des mélanges d’acétonitrile-eau ou
méthanol-eau, avec ou sans de petites quantités d’acide. Occasionnellement, d’autres solvants
tels que le tétrahydrofuranne, l’isopropanol ou le n-propanol sont utilisés. Les modificateurs
d’acide sont nécessaires pour supprimer l’ionisation des groupes hydroxyles phénoliques, ce
qui donne des pics plus nets avec moins de trainé [10].
5. Analyse structurale des flavonoïdes
L’identification des structures des flavonoïdes faite appel à différentes techniques telles que :
spectrométrie de masse (SM), spectrométrie de résonance magnétique nucléaire (RMN),
spectrométrie UV-visible et bien d’autres techniques qui nous fournissent des indications
utiles quant à la nature des flavonoïdes et leur mode de substitution.
5.1. UV-Visible
La spectroscopie UV est une technique majeure pour l’analyse de la structure des flavonoïdes.
Le principe de cette technique est basé sur l’utilisation de réactifs spécifiques tels que
méthylate de sodium, l’acétate de sodium, l’acétate de sodium / acide borique, du chlorure
d’aluminium et du chlorure acide d’aluminium / acide chlorhydrique ; qui réagissent avec un
ou plusieurs groupements fonctionnels sur le noyau de flavonoïde. L’addition de chacun de
ces réactifs séparément à une solution alcoolique de flavonoïde induit des changements de
structure importants dans le spectre UV permettant de localiser les substituants sur le squelette
des flavonoïdes [11-12].
18
Les spectres UV de la plupart des flavonoïdes se composent de deux absorptions majeures,

dont l’une se produit dans la gamme de 240 à 285 nm(bande II) et l’autre dans la gamme 300-
400 nm (bande I) (figure 3). En termes généraux, l’absorption de la bande II peut être
considérée comme ayant son origine de cycle-A du benzoyle et la bande I du cycle-B du
cinnamoyl [13].
3'
2' 4'
Bande II
8 B Bande I
O 5'
7
A C 6'
6
5
O
(1, Benzoyl Cinnamoyl)
200 300 400 500
λ(nm)
Figure 3.Spectre UV de la plupart des flavonoïdes
5.1.1. Les changements induits par le méthylate de sodium
Tous les groupes hydroxyles sur les noyaux des flavonoïdes sont ionisés dans une certaine
mesure par la base forte le méthylate de sodium. Ainsi, pour les flavonoïdes les plus
hydroxylés, décale à longueur d’onde sont observées dans les deux groupes.
5.1.2. Les changements induits par l’acétate de sodium
L’acétate de sodium est une base plus faible que le méthylate de sodium et a tendance à
ioniser de manière significative que les groupes hydroxyles phénoliques plus acides (figure
4).
OH OH OH+
B
OH+ O HO O HO O
A
OH O OH O OH O
Figure 4.Les changements induits par l’acétate de sodium sur les flavonoïdes
5.1.3. Les changements induits par le borate
19
Un mélange d’acétate de sodium et d’acide borique est utilisé pour la détection de groupes
ortho-di-hydroxylés dans tous les flavonoïdessauf les anthocyanidines et les anthocyanes
(figure 5).
OH
Borate
HO O
OH
OH O
Figure 5.Les changements induits par le borate sur les flavonoïdes
5.1.4. Les changements induits par le chlorure d’aluminium
Le chlorure d’aluminium forme des complexes avec les groupements fonctionnels tels que le
5-hydroxy-4-céto, 3-hydroxy-4-céto et ortho-di-hydroxyle. Le complexe céto-aluminium est
plus stable en milieu acide que le complexe ortho-di-hydroxyle qui est plus labile (figure6).
+
OH O Al OH
OH O OH
HO O HO O HO O
AlCl3 aq. HCl
OH O O O O O
2+ 2+
Al Al
Figure 6. Les changements induits par le chlorure d’aluminium sur les flavonoïdes
Chaque classe de flavonoïdes subit des changements différents qui sont résumés dans les
tableaux 4 et 5.
20
Tableau 4.Les changements affectés aux spectres UV des Flavones et Flavonols [9]
Déplacement (nm)
Réactifs Interprétation
Bande I Bande II
304-350 240-285 Flavones
MeOH
353-385 240-285 Flavonols
(+) 40-65 sans diminution dans l’intensité - 4’-OH
(+) 50-60 avec diminution dans l’intensité - 3-OH en absence de 4’-OH dans les flavonols
NaOH Diminution de l’intensité des bandes avec le temps 3,4’-OH et/ou 3,3', 4’-OH dans les flavonols
présence de pic entre 320-330 - 7-OH
Absence de pic entre 320-330 - 7-OR
(+) 5-20. Peut diminuer en présence
- d’oxygénation en 6 ou 8 dans les 7-OH
NaOAc
flavones
Dégradation du spectre avec le temps 5, 6, 7 ou 5, 7, 8 ou 3,3', 4' tri-OH
NaOAc/H3BO3 (+) 12-30 Augmente avec un petit changement Ortho di OH (6,7 et 7,8)
(+) 35-55 - 5-OH en absence de 3-OH
AlCl3/HCl (+) 17-20 - 5-OH avec une oxygénation en 6
(+) 50-60 - 3-OH ou 3,5 di-OH dans les Flavones
(+) 30-40 au-delà de celle observée avec AlCl 3/HCl - Ortho di-OH sur B
AlCl3 (+) 20-25 - Ortho di-OH sur A
(+) 10 au-delà de celle observée avec AlCl 3/HCl - Ortho OH, OMe en 3', 4'
Tableau 5.Les changements affectés aux spectres UV des Isoflavones, Flavanones et dihydroflavonols [9]
Déplacement (nm)
Réactifs Interprétation
Bande I Bande II
300-340 240-270 Isoflavones
MeOH
300-340 270-295 Flavanones et dihydroflavonols
NaOMe - Absence de déplacement Absence de OH sur cycle A
1
ère
Partie : Etude Bibliographique
- (+) 35-40 avec augmentation dans l’intensité 5, 7 di – OH Flavanones et dihydroflavonols

7 –OH en absence de 5 – OH Flavanones et
- (+) 60
dihydroflavonols
Degradation du spectre avec le temps 5,6,7- et 5, 7,8 tri-OH
- (+) 6-20 7 –OH Isoflavones
NaOAc - (+) 35 5, 7 di – OH Flavanones et dihydroflavonols
- (+) 60 5-deoxyflavanones et dihydroflavonols
NaOAc/H3BO3 - (+) 10-15 Absence de 5,6 di-OH
AlCl3/HCl - (+) 10-14 5 –OH Isoflavones
- (+) 11-30 au-delà de celle observée avec AlCl3/HCl Ortho di – OH sur cycle A (6,7 ou 7,8)
AlCl3
- (+) 30-38. Disparait en ajoutant NaOAc 3-OH dihydroflavonols en absence de 5-OH libre
22
5.2. Résonance magnétique nucléaire
Spectrométrie RMN est une technique analytique extrêmement puissante pour la

détermination des structures flavonoïdes [14-17]. Elle permet de faire des affectations
complètes de tous les signaux de protons et de carbone de la plupart des flavonoïdes isolés.
Ces affectations sont basées sur les déplacements chimiques (d) et les constantes de couplage
(J) observées dans RMN 1D des 1H et 13
C combinés avec les corrélations observées sous
forme de pics croisés dans des expériences de RMN 2D homo et hétéro-nucléaire.
5.2.1. Choix du solvant
Les solvants RMN les plus fréquemment utilisés pour l’analyse des flavonoïdes sont hexa-
deutéro-diméthyl-sulfoxyde (DMSO-d6) et tetra-deutero-methanol (CD 3OD). Pour l’analyse
des flavonoïdes relativement non-polaires, des solvants tels que hexa-deutero-acetone
(acétone-d6), le deutéro-chloroforme (CDCI3), le tétra-chlorure de carbone (CCl4), et penta-
deutero-pyridine ont trouvé une certaine application. Le choix du solvant RMN peut dépendre
de la solubilité de la substance à analyser, la température des expériences de RMN, la
viscosité du solvant, et la facilité avec laquelle le flavonoïde peut être récupéré à partir du
solvant après analyse [7].
Tableau 6.Déplacement chimique en 1H et 13C de certains solvants RMN [13]
Solvant δ (p.p.m) 1H (multiplicité) δ (p.p.m) 13C (multiplicité)

Acetone-d6 2.05 (5) 29.92 (7)
Chloroforme-d 7.24 (1) 77.23 (3)
Diméthyl sulfoxyde-d6 2.50 (5) 39.51 (7)
3.31 (5)
Methanol-d4 49.15 (7)
4.78 (1)
5.2.2. Analyse des spectres RMN
Le but d’une analyse RMN 1H c’est d’enregistrer les déplacements chimiques et les
intégrations, fournissant des informations sur le nombre relatif d’atomes d’hydrogène.
Appliquée sur les flavonoïdes, cette méthode peut aider à identifier les
aglycones,lesgroupementsacyle, le nombre de monosaccharides, et la configuration
anomérique des monosaccharides. Cependant, pour la plupart des flavonoïdes les
informations fournies par une expérience RMN 1H (tableau 7) sont insuffisantes pour
13
l’élucidation de la structure complète. Ainsi, des expériences de RMN C (tableau
8)combinées à diverses expériences de RMN 2D sont recommandées.
23
Tableau 7.RMN 1H déplacements chimiques des flavonoïdes [18]
Valeur de δ Valeur de δ
Position Position
(p.p.m) (p.p.m)
H-5 7.7-8.2 H-2 (flavones) 5.0-5.5
H-6 5.7-6.4 H-3 (flavones) proche de 6.3
H-8 5.9-6.5 H-3 (dihydroflavonols) 4.1-4.3
H-2 (isoflavones) 7.6-7. 9 H-3 (flavonones) proche de 2.8
H-2 (dihydroflavonols) 4.8-5.0 H- Methoxyl 3.5-4.1
Tableau 8.RMN 13C déplacements chimiques des flavones [18]
Position Valeur de δ (p.p.m) Position Valeur de δ (p.p.m)

C-2 163.6-164.6 C-1’ 120.9-123.5
C-3 102.8-104.0 C-2’ 106.0-128.8
C-4 181.6-182.3 C-3’ 114.8-150.8
C-5 161.5-162.2 C-4’ 137.9-163.8
C-6 98.2-99.0 C-5’ 112.1-146.5
C-7 163.7-165.6 C-6’ 118.7-128.8
C-8 92.9-94.2
C-9 157.3-157.9
C-10 103.3-105.0
6. Activités pharmacologiques
6.1. Propriétés anti-oxydantes
La propriété des flavonoïdes la mieux décrite est leur activité antioxydante et leur capacité à
piéger les radicaux libres [19-25]: radicaux hydroxyles (OH·), anions superoxydes (O2. -)et
radicaux peroxylipidiques, selon la réaction suivante :
Flavonoïde (OH) + R.→ flavonoïde (O.) + RH acides
Les radicaux libres apparaissent dans plusieurs situations, telles que :
 L’anoxie : qui engendre la production de l’anion superoxyde (O2. -).
 L’inflammation : qui correspond à la production d’anions superoxydes (O2. -)
 L’auto-oxydation des lipides.
Les flavonoïdes inactivent stabilisent les radicaux libres grâce à leur groupement hydroxyle
(C3-OH) fortement réactif. Ils sont également capables de chélater les ions métalliques qui
peuvent renforcer ces effets délétères par la production des radicaux hydroxyles (OH·) [26-
27].
24
6.2. Propriétés inhibitrices d’enzymes
Les flavonoïdes sont des inhibiteurs enzymatiques à l’égard de l’aldose réductase [28-32], de
la phospholipase A2 [33-34] et des enzymes de l’inflammation : la cyclooxygénase [35-36] et
la lipooxygénase [37-39].
6.3. Effets protecteurs vasculaires
Les flavonoïdes agissent sur les vaisseaux sanguins sous forme d’activité vitaminique « P »
[40]. Cette activité intervient dans le maintien d’une perméabilité vasculaire normale [41-42].
Ils sont, de ce fait, utilisés dans certains états pathologiques caractérisés par un défaut
affectant la perméabilité vasculaire [43-44].
6.4. Propriétés antiallergiques
Les flavonoïdes sont également connus pour leurs effets antiallergiques[45]. Ils agissent par
inhibition des enzymes qui favorisent la libération d’histamine à partir des mastocytes et des
basophiles[46-49]. En outre, la quercétine exerce un puissant effet inhibiteur de la libération
d’histamine à partir des mastocytes [50].
6.5. Activité anti-inflammatoire
In vitro, plusieurs flavonoïdes sont capables de modifier le métabolisme de l’acide

arachidonique plaquettaire [51-53]. C’est ainsi que la myricétine et la quercétine bloquent
l’action des cyclo-oxygénase et lipoxygénase à des concentrations relativement élevées. À
faibles concentrations, c’est la lipoxygénase qui est inhibée préférentiellement. Certains
travaux suggèrent qu’ils posséderaient une bonne activité anti-inflammatoire sans les effets
indésirables de type ulcérogène [54-58]. L’hespéridine, administrée par voie sous-cutanée (car
inactive per os), présente une activité anti-inflammatoire significative chez le rat dont
l’œdème a été induit aussi bien par la carragénine que par le dextran [59].
OH
HO OMe
O
O O O
HO O
OH
HO OH
OH OH O
25
Hespéridine
6.6. Activité anti-ulcérogène
Les flavonoïdes sont capables de protéger la muqueuse gastrique contre divers agents
ulcérogènes. L’hypolaetine-8-glucoside, flavonoïde présent dans diverses espèces du genre
Sideritis, présente une activité anti-ulcérogène significative [60].
HO
HO
O
HO O
OH
OH
HO O
OH
OH O
Hypolaetine-8-glucoside
La naringine et la quercétine exercent également une activité anti-ulcérogène mise en
évidence chez le rat dont l’ulcère gastrique a été induit par l’éthanol. Il a été suggéré que la
quercétine exerce ses effets cytoprotecteurs grâce à un complexe impliquant la stimulation de
la prostaglandine et l’inhibition de la production de leucotriènes via la production de mucus et
ses propriétés antioxydantes [45].
HO
O
OH
HO O
OH O O
HO
O
HO
OH O
OH
Naringine
6.7. Autres effets biologiques
Les flavonoïdes préviennent la cataracte diabétique par inhibition de l’aldose réductase du

cristallin [29,32]. En effet, la myricétine présente des effets hypoglycémiants et
hypotriglycéridémiants chez les animaux diabétiques [61-62]. Des propriétés antibactériennes
et antivirales des flavonoïdes vis-à-vis de différentes souches bactériennes ont également été
mises en évidence [76-68].
26
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33
CHAPITRE II :ETUDE
ETHNOBOTANIQUE ET CHIMIQUE
DE L’ESPECE
1. Description botanique du figuier de barbarie

1.1. Taxonomie
La famille des cactacées comprend 120-130 genres et 1400-1500 d’espèces, subdivisées en

nombre de tribus et sous-familles [1].
1.1.1. Classification
Règne Plantae - plantes, Végétal

Sous-règne Viridaeplantae - plantes vertes
Infra-règne Streptophyta plantes terrestres
Division Tracheophyta - plantes vasculaires, trachéophytes
Subdivision Spermatophytina - spermatophytes, phanérogames
Infra-division Angiospermes - plantes à fleurs, angiospermes, plantes à fruits
Classe Magnoliopsida
Super Caryophyllanae
Ordre Caryophyllales
Famille Cactaceae Juss. - Cactus,
Genre Opuntia Mill. - Figues de Barbarie, prickly pear, cholla
Espèce Opuntia ficus-indica (L.) Mill.
1.1.2. Nomenclature [2]
Cactus ficus-indica L.
Opuntia ficus-barbarica A.Brger
Synonyme (s) :
Opuntia megacantha Salm-Dyck
Espagnol : Nopal, cardón de México, chumbera, nopal de

Nom commun (s) :
castilla, tuna de Espaňa
Anglais : Prickly pear, indian fig, Barbary fig, cactus pear
1.2. Morphologie [3-6]
Arbuste potentiellement élevé 3-5m ou plus avec un grand tronc, 60-120cm de long et tiges
verte (cladodes ou raquettes), généralement obovales à oblongues, les plus grands sont de 28-
60cm de long, 15-40 cm de diamètre, et 2-2,5 cm d'épaisseur, parsemées d’aréoles espacées
35
de 2-6 cm centimètres, elliptiques-oblongues, 2-7 mm de long, 3-4 mm de large qui porte des
épines, généralement blanc ou beige à brun pâle, penché et diffusé, droit, subulés aplaties, à
1,2- 4 cm de long, 0,6-0,9mm de large à la base ; et des sétules barbelées jaune, courtes,
aileron, facilement délogés, épines à feuilles caduques.
Chaque Aréole, produit généralement une seule fleur de 5-7 cm de long et large, jaune à
orange-jaune avec des centres rougeâtres ou verdâtres. Elle a un ovaire infère qui se produit
sous les pièces du périanthe et les étamines. Le nombre d’ovules et de semence possible est de
150-400. Le stigmate se produit au-dessus des étamines et est adapté pour l’atterrissage
d’insectes. Comme pour beaucoup de fleurs, le nectar s’accumule à la base d’un style
épaissie. Les nombreuses étamines sont disposées en spirale, et leurs mouvements
thigmotropisme facilité l’autopollinisation, soit une moyenne d’environ 250 000 grains de
pollen sont produits par fleur.
36
Fleur vue de côté Coupe de la fleur
Les fruits sont de plusieurs couleurs (rouge à pourpre et jaune à orange), charnues, juteuses,
comestibles, généralement ovales, 5-10 cm de long, 4-9 cm de diamètre, avec un faible
ombilic sans épines, ou parfois avec des épines ; graines irrégulièrement discoïdes, gris ou
beige 3-5 mm de diamètre.
Fruit (aspect générale et coupe) Graine (coupe)
Cette plante est cultivée à partir du niveau de la mer de 1,800 jusqu’à 4,500 pieds, sa floraison
est au printemps et ces fruits persistent pour plusieurs mois.
2. Origine et distribution
Opuntia ficus-indica a été longtemps cultivé dans les régions semi-arides de l’Amérique
centrale et l’Amérique du Sud mais aujourd’hui il est répandu dans toutes les régions arides et
semi-arides du monde. Sa distribution dans le monde entier a commencé au 15ème siècle en
Europe et en Afrique du Nord pour l’élevage en masse des cochenilles. Il a été ensuite
propagé vers le bassin méditerranéen, en particulier les îles, Micronésie, Australie, Afrique
tropicale et Afrique du sud, les États-Unis, les Caraïbes, l’Asie tempérée, les Seychelles et à
Hawaï(figure 7) [2]. Cette distribution généralisée est due à la relative facilité de
multiplication végétative [7] et parce que les cladodes détachés peuvent rester en vie pendant
plus de 12 mois et former facilement de nouvelles racines lorsqu’ils sont placés dans un sol
humide.
37
Figure 7.Distribution géographique d’Opuntia ficus-indica dans le monde
3. Ecologie [2]
3.1. Sol
Opuntia ficus-indica tolère une grande variété de conditions de croissance et différents types
de sol si la croissance est limitée dans son environnement naturel par des sols pauvres et la
sécheresse. Il préfère généralement les sols sableux profonds, souvent sur des pentes avec un
pH de 6 à 7,5. Les sols argileux qui sont mal drainés ou deviennent gorgés d’eau sont à éviter.
Comme avec la plupart des cactus, un drainage adéquat est essentiel pour une bonne
croissance et il ne peut pas résister à tout engorgement prolongé. Les racines sont tolérantes à
modérer la salinité du sol.
3.2. Climat
Cette plante subtropicale se trouve dans les zones de 0 à 2600 m avec une température
annuelle moyenne de -10 à 26 ° C. Elle est sensible à la température de congélation au-
dessous de -6 ° C et tolère les hautes températures jusqu’à 65 ° C. Elle ne se développe pas
bien quand c’est ombragé mais elle pousse mieux en plein soleil.
4. Composition chimique
Les Cladodes d’Opuntia ficus-indica sont riches en mucilage (polysaccharides complexes,

principalement composé de L-arabinose, D-galactose, D-xylose, L-rhamnose et D-acide
galacturonique) [8] et minéraux tels que le calcium, magnésium, potassium, cuivre et faible
teneur de phosphore [9].
38
CH2OH
O OH O O
OH OH OH OH OH OH
OH OH
OH OH OH
L-arabinose D-galactose D-xylose
COOH
OH O OH O
CH3 OH OH OH
OH OH OH
L-rhamnose D-acide galacturonique
Les fruits sont une source importante de vitamine C (de 180 jusqu’à 300mg/Kg)[10] et de
potassium (199mg/ 100g de matière sèche)[11].En outre, la couleur rouge-violet de la pulpe
des fruits est due à la présence des pigments bétacyanines et la couleur jaune et due
auxpigments bétaxanthines[12].
O O
H
N
HO OH O O
H
N
HO OH
+
N O
HO
O
O O
+
HO N O
HO OH
OH O
Bétacyanines ou Bétanines Bétaxanthines ou Indicaxanthine
Les fleurs sont de couleurs jaunes dues à leur teneur en flavonoïdes glycosides tels que
l’isorhamnetine, kaempférol et quercétine[13].
39
OH
OH OH
HO O HO O
O O
OH O OH OH O OH
O O
O O O O
OH OH
OH OH
HO OH HO OH
OH OH
Quercetine 3-O-rutinoside Kaempférol 3-O-rutinoside
OMe
OH OH
OH HO O
HO O
O
OH O OH
O O
OH O OH O O
O OH
OH
OH HO OH
OH OH OH
Quercetine 3-O-glucoside Isorhamnetine 3-O-robinobioside
OMe
OMe
OH
OH
HO O HO O
O O
OH O OH OH O OH
O O
OH OH
OH OH OH OH
Isorhamnetine 3-O-galactoside Isorhamnetine 3-O-glucoside
OH
HO O
O
OH O OH
O
OH
OH
Kaempférol 3-O-arabinoside
40
Les graines sont connues pour leur huile (13,6%) riche en acide gras insaturé (73,4% acide
linoléique, 12% acide palmitique, 8,8% acide oléique et 5,8% acides stéariques) en plus de sa
teneur enβ-sitosterolet en vitamine E [14-16]. En outre l’endosperme des graines est riche en
arabinanes [17], tandis que le péricarpe est constitué du D-xylanes [18].
COOH
Acide linoléique C18 : 2 (ω 6)
COOH
Acide palmitique C16 : 0

COOH
Acide oléique C18 : 1

COOH
Acides stéariques C18 : 0
5. Utilisations traditionnelles [19]
Opuntia ficus-indica se classe parmi les plantes les plus utilisées en médecine traditionnelles
partout dans le monde.
À Curaçao, les cladodes sont pelées et réchauffés, puis placés sur le corps pour "tirer la
douleur", ils sont censés avoir des propriétés analgésiques. En raison de leur effet légèrement
astringent, une infusion des cladodes hachées est prisepour arrêter la diarrhée et la dysenterie.
Cette infusion est également bue comme un remède contre la rage. Des cataplasmes du cactus
sont appliqués sur la zone du foie dans les cas de troubles du foie.
Une décoction des cladodes pelées et coupées en cubes est bue pour soulager les maux
d’estomacs légers. Elle est utilisée, aussi, comme un lavement pour les problèmesintestinaux.
Sucrée, elle est souvent bue pour surmonter les affections respiratoires et les fortes fièvres. En
outre, les cladodes étaient autrefois un traitement pour la gonorrhée. Cette même infusion peut
être appliquée à l’extérieur sur les boutons et diverses maladies de la peau et aussi pour
l’inflammation de l’œil. Dans la région aride, la pulpe fraîche des fruits est consommée pour
apaiser la soif.
41
Les fleurs de figuiers de Barbarie bénéficient également d’une réputation comme un remède
pour les problèmes urinaires. En Sicile, une décoction de fleurs est largement utilisée comme
un puissant diurétique. En Afrique du Nord, les fleurs sont combinées avec des graines d’orge
et de la soie de maïs pour traiter l’obstruction urinaire. Elles sont incluses dans la
Pharmacopée britannique de plantes en tant que médicament ayant des effets astringent et
anti-hémorragiques et peuvent être utilisées pour la colite, la diarrhée et l’hypertrophie
prostatique.
6. Activités pharmacologiques
6.1. Antiulcéreuse
L’administration des cladodes d’Opuntia ficus-indica donne lieu à des phénomènes de

cytoprotection en brisant les cellules épithéliales et la stimulation d’une augmentation de la
production de mucus, pour garder la muqueuse gastrique dans des conditions normales en
empêchant la dissolution du mucus causée par l’éthanol. Mais le traitement préventif avec les
cladodes d’Opuntia ficus-indica peut arrêter l’agent ulcérogène pour prévenir les dommages
[20].
6.2. Anti-inflammatoire
De nombreuses études ont évoqué l’action anti-inflammatoire de l’Opuntia ficus-indica en

utilisant soit l’extrait des fruits, extrait des tiges ou lyophilisat des cladodes [21-22]. La
réduction de l’inflammation aiguë par l’extrait éthanolique des tiges est due à une inhibition
puissante de la migration des leucocytes. En 2001 Parck et al, ont identifié le β-Sitostérol en
tant que principe actif anti-inflammatoire de l’extrait méthanolique des tiges bien que son
activité semble être relativement faible par rapport à celle de l’hydrocortisone [23].
H H
HO
β-Sitostérol
42
6.3. Diurétique
Galati et al.,ont étudié l’effet diurétique d’un extrait de 15 % à partir des fleurs, fruits et
cladodes d’Opuntia ficus-indica. L’extrait des cladodes a montré l’effet diurétique le plus
élevé tandis que les niveaux d’urée dans le sang et l’urine sont demeurés inchangés. Cet effet
a été principalement attribué à la forte teneur des cladodes en potassium (548 mg / kg) [24].
6.4. Anti-hyperlipidémique et hypocholestérolémiant
Galati et al., ont constaté que les taux de cholestérol, LDL et de triglycérides plasmatiques
aux niveaux des rats ont été fortement réduites après 30 jours d’une administration
quotidienne (1 g / kg) de cladodes lyophilisées d’Opuntia ficus-indica L. Mill. Cet effet est
généralement attribué à la forte teneur des cladodes en fibres, bien que d’autres principes
actifs (tels que bêta-carotène, vitamine E et le β-Sitostérol) peuvent être impliqués [25]. Huile
de graines de cactus à des rats (25 g / kg) diminue le cholestérol plasmatique total et LDL
(VLDL) sans effet sur les concentrations de HDL cholestérol [26].
Bêta-carotène
HO
Vitamine E
6.5. Hypoglycemique
Différente préparation des tiges d’Opuntia ficus-indica (grillé ou cru) ont été étudiés pour
leurs effets hypoglycémiants sur 8 patients atteints d’un diabète de type 2 (non insulino-
dépendant, DNID). Le taux de glucose sérique a diminué dans tous les patients après
l'ingestion d’Opuntia ficus-indica, pour atteindre des niveaux statistiquement significatifs
[27].
43
6.6. Anti-oxydante
Les fruits du cactus ont une forte activité anti-oxydante conférée par la présence de vitamine
C, bêta-carotène, flavonoïdes et bétalaïnes [28-29]. L'extrait de fruits a une activité anti-
oxydante deux fois plus élevée que les poires, pommes, tomates, bananes, raisins blancs, et
semblable aux raisins rouges [30]. D’autres études ont montré que les bétaxanthine et les
bétanines possèdent des propriétés anti-oxydantes étant plus élevé que pour l'acide ascorbique
[10].
6.7. Autres
Les fleurs de cactus sont réputées pour être utile dans le traitement d’hyperplasie bénigne de
la prostate (HBP). Une étude a évalué la capacité des extraits des fleurs de cactus (extraits
d'éthanol et extrait de dichlorométhane) d’exercer un effet sur l'HBP grâce à l'inhibition du
processus de la peroxydation des lipides, l'aromatisation des androgènes et la réduction de la
testostérone. L’extrait des fleurs de cactus inhibé l'activité de l'aromatase 5alpha-réductase
dans les cultures de fibroblastes de prépuce, et également dans des homogénats de placenta
humain et de la prostate [31].
44
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47
2ème PARTIE :
ETUDE EXPERIMENTALE
2 ème Partie : Etude expérimentale
1. Echantillonnage
Les fleurs du figuier de barbarie ont été récoltées à la région de Séraïdi à Annaba au mois de
Mai puis laissées à l’ombre pour sécher.
Les fruits ont été récoltés au mois de Juillet, mixés puis filtrés pour récupérer les graines qui
ont été bien lavées à l’eau puis séchées à l’ombre.
2. Méthodes
2.1. Screening phytochimique
 Alcaloïdes : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un tube
contenant 5ml H2SO4 à 1 % et chauffés au bain-marie pendant 2min. Après filtration,
quelques gouttes du Réactif de Mayer sont ajoutées au filtrat [1].
 Formation d’un précipité blanc à beige
 Composés phénoliques : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un
tube contenant 5ml d’éthanol à 70 % chauffés au bain-marie pendant 2min. Après
filtration, quelques gouttes de FeCl3 à 5 % sont ajoutées au filtrat [1].
 Apparition d’une couleur bleu-vert ou vert.
 Flavonoïdes : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un tube
contenant 2,5ml HCl à 1 % et chauffés au bain marie pendant 3min. Après filtration, le
filtrat et rendu basique par l’ajout de 2,5mL de NaOH à 5 % [2].
 Apparition d’une couleur jaune
 Coumarine : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un tube
contenant 5ml eau distillé, couvert d’un papier filtre imbibé avec NaOH à 1N et porté
à ébullition pendant quelques minutes. Le papier filtre est examiné sous UV- 366
 Apparition d’une fluorescence jaune-vert [3].
 Quinones : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un tube et
humectés avec HCl à 20 % puis laissés macérer dans 3ml ether-chloroforme (v : v)
pendant 24H. Après filtration, le filtrat et rendu basique par l’ajout de NaOH à 10 %
[4]
 Apparition d’une couleur rouge au violet.
49
 Terpènes et stérols : 0,5g de plante sèche coupée en morceaux sont placés dans un
tube contenant 5ml d’éther et laissés macérer pendant 24H. Après filtration, le filtrat
est évaporé à sec puis le résidu est dissout dans 1ml acide acétique anhydre, ensuite
quelques gouttes de H2SO4 concentré sont ajoutées aux parois du tube [4].
 Apparition d’une couleur mauve virant au vert
2.2. Extraction des flavonoïdes

 1ère méthode d’extraction
100g de plante sèche coupée en morceaux ont été placés dans un erlenmeyer avec 1L
méthanol-eau (80 : 20), et laissés macérer à l’ombre. Après 24H le mélange a été filtré et le
filtrat a été condensé au rotavapeur, ensuite la phase aqueuse a été extraite dans une ampoule
à décanter avec deux fois 500ml de dichlorométhane-propanol (3 : 2, v/v). La phase organique
a été séchée sur Na2SO4 puis évaporée à sec au rotavapeur.
Plante pulvérisée
-1L MeOH-eau (80 : 20) (24H)

-Filtration
Extrait Hydro-méthanolique Marc
Condensation
Extrait aqueux
2× 500ml CH2Cl2/C3H7OH
Phase organique Phase aqueuse
-Séchage sur Na2SO4

- Evaporation sous vide
50
 2ème méthode d’extraction
100g de plante sèche coupée en morceaux ont été placés dans un erlenmeyer avec 1L
méthanol-eau (80 : 20), et laissés macérer à l’ombre. Après 24H le mélange a été filtré et le
filtrat a été condensé au rotavapeur, ensuite la phase aqueuse a été extraite dans une ampoule
à décanter avec deux fois 500mL acétate d’éthyle puis deux fois 500ml butanol. Les deux
phases organiques ont été séchées séparément sur Na2SO4 puis évaporées à sec au rotavapeur.
Plante pulvérisée
-1L MeOH-eau (80 : 20) (24H)

-Filtration
Extrait Hydro-méthanolique Marc
Condensation
Extrait aqueux
2× 500ml EtOAc
2× 500ml ButOH
-Séchage sur Na2SO4

- Evaporation sous vide
51
2.3. Analyse des flavonoïdes par CCM
Les Plaques CCM utilisées sont des feuilles d'aluminium (20 × 20 cm), préalablement
recouvertes de gel de silice 60 F254 qui ont été découpées en petit rectangle (10 × 5cm) puis
marquées avec un crayon à 1,5 cm de l’extrémité de la plaque.Une petite quantité de l’extrait
a été déposée avec un capillaire sur le trait de base. Les plaques sont placées verticalement
dans des chambres d’élutions contenant différents solvants (tableau 3) à différentes
proportions puis laissées développer jusqu’au trait de front à 1cm de l’extrémité de la plaque.
Les plaques ont été séchées à température ambiante puis développées sous la lampe UVà 254
nm ensuite à 366 nm. Finalement la plaque qui a montré une bonne séparation a été pulvérisée
avec le réactif de détection (chlorure d’aluminium à 1% dans l’éthanol) puis laissée séchéeà
température ambiante, ensuite elle est révéléeà nouveau sous la lampe UV à 360 nm. La
couleur et le rapport frontal (facteur de rétention Rf) de chaque tache (composé) ont été notés.
La valeur du Rf pour chaque substance est la distance qu'il a parcourue divisée par la distance
du front de solvant. Habituellement, le centre de chaque tâche est le point pris pour la mesure.
La valeur du Rfa été calculée selon la formule suivante[5]:
Di stance parcourus par≤soluté

Rf =
distance parcourus par≤solvant
2.4. Séparation des flavonoïdes
L’extrait dichlorométhane/propanol des fleurs a été dissout dans une petite quantité de
méthanol puis séparé sur colonne chromatographique classique, en utilisant une colonne en
verre remplit avec gel de silice (Si-60) traversée par un flux d’éluant (500mL) composé
d’acétate d’éthyle-méthanol-eau (85 : 10 : 5, v/v) puis un autre flux d’éluant (400mL)
méthanol-eau (50 : 50, v/v). Des fractions de 5ml ont été récupérées dans des tubes puis
analysées en parallèle par CCM. Finalement, les fractions semblables ont été regroupées et
évaporées à sec au rotavapeur et les produits purs ont été conservés au frais jusqu’à
l’utilisation pour les analyses spectroscopiques ou la détermination de l’activité biologique.
52
2.5. Analyse des flavonoïdes par CLHP
50g de fleurs sèches coupées en morceaux ont été macérées dans 800mL méthanol et 200mL
d’eau distillée pendant 24h à température ambiante. L’extrait a été filtré puis condensé au
rotavapeur à 37°C sous pression réduits, ensuite séché au lyophilisateur. Une quantité du
lyophilisat a été conservée pour les tests biologiques.
Pour l’analyse chromatographique, 20mg du lyophilisat ont été dissout dans 1ml méthanol-
eau (v : v) puis 20μl de la solution ont été injectés dans CLHP (waters 486 Tunable
Absorbance Dedector) et la séparation a été réalisée selon les conditions décrites dans le
tableau 9.
Tableau 9.Table des conditions de la chromatographie liquide à haute performance
Temps (s) Debit (mL/min) Solution A %* Solution B %**

initiale 1ml 100 % 0 %
5min 1 94 6
9 1 92 8
13 1 88 12
20 1 86 14
25 1 84 16
30 1 80 20
35 1 75 25
40 1 70 30
45 1 65 35
50 1 40 60
55 1 20 80
60 1 100 0
*solution tampon eau(NH4)-H2PO4 (pH= 2.6)
**Acétonitrile-solution A (80 : 20)
2.6. Dosage des composes phénoliques

2.6.1. Préparation des extraits
53
1g de plante sèchea été macéré dans 8mL de méthanol et 2mL d’eau distillée pendant 24h
puis filtré.
2.6.2. Dosage des polyphénols totaux

 Principe
Ce dosage est réalisé à l’aide du réactif de « Folin-Ciocalteu » en présence de Na 2CO3. Il

s’agit d’une solution d’acide phosphotungstique (H 3PW12O40) et d’acide phosphomolybdique
(H3PMo12O40) dont la réduction par l’action des polyphénols donne un mélange de complexes
de sels de tungstène (W8O23) et de molybdène (Mo8O23) de couleur bleue. Cette solution
absorbe à une longueur d’onde de 725 nm. Ainsi, le dosage des polyphénols se fait par
comparaison de l’absorbance de la solution étudiée par rapport à la courbe d’étalonnage d’un
standard.
 Méthode
Dans une fiole jaugée de 20mL, placer 1mL de l’extrait ou du standard (dilué au 1 :10) avec
10mL du réactif de Folin-Ciocalteux (diluer au 1 :10) et 8mL de carbonate de sodium Na2CO3
à 7,5%. Le mélange est incubé à 23°C pendant 2h puis l’absorbance est mesuréà l’aide d’un
spectrophotomètre à 760nm[6].
Le standard utilisé est l’acide gallique préparé dans l’eau distillée à différentes
concentrations : 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 25 et 0mg/L. Les résultats
obtenus sont exprimés en mg équivalent d’acide gallique par gramme de matière sèche
(EAG/g MS)
2.6.3. Dosages des flavonoïdes totaux
1mL de l’extrait ou du standard est versé dans une fiole jaugée de 10mL avec 4mL d’eau
distillée et 0,3mL de nitrite de sodium NaNO 3 à 5%. Après 5min 0,3mL de chlorure
d’aluminium AlCl3 à 10% sont ajoutés au mélange puis le tout est ajusté avec l’eau distillée
jusqu’au trait de jauge. La solution est bien mélangée puis l’absorbance est mesurée à 510nm
à l’aide d’un spectrophotomètre[7].
Le standard utilisé est la catéchine préparéedans l’eau distilléeà différentes concentrations :

500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 50, 25 et 0mg/L pour réaliser une courbe
d'étalonnage et les résultats obtenus sont exprimés en mg équivalent de la catéchine par
gramme de matière sèche (EC/g MS)
54
2.7. Activités biologiques

2.7.1. Animaux
Des souris Albinos mâles saines pesant 17-24g, obtenus à partir de l'Institut Pasteur (Alger,
Algérie) ont été gardées dans des cages en plastique approuvés, avec des couvercles de treillis
métallique, à une température de 24 ° C, humidité de 50% et ont été exposés à un cycle de
lumière de 10h. L'alimentation et l'eau ont été fournies ad libitum pendant toute la durée de
l'étude. Toutes les procédures ont été effectuées en conformité avec les orientations de l'Union
européenne pour l'expérimentation animale (2007/526 / CE)
2.7.2. Test de toxicité aigue
Dix souris saines ont été réparties au hasard en 2 groupes (n = 5). Le premier groupe a reçu
per os l'extrait méthanolique d’Opuntia ficus-indica et le second groupe a reçu
l’isorhamnétine-3-O-robinobioside à une dose de 5000 mg / kg dissous respectivement dans
l'eau. Les animaux ont un accès libre à la nourriture et l'eau, et ils ont été observés pour les
symptômes et la mortalité pendant 48 h.
2.7.3. Activité anti-inflammatoire
L'inflammation est un processus dynamique qui est déclenchée en réponse à des lésions
mécaniques, des brûlures, des infections microbiennes, et d'autres stimuli nocifs qui peuvent
menacer le bien-être de l'homme. Ce processus implique des changements dans la circulation
sanguine, une augmentation de la perméabilité vasculaire, la destruction des tissus par
l'activation et la migration des leucocytes avec synthèse de dérivés réactifs de l'oxygène, et la
synthèse des médiateurs inflammatoires locaux, tels que les prostaglandines (PG), les
leucotriènes et d'activation des plaquettes facteurs induits par la phospholipase A2,
cyclooxygénases (COX), et lipoxygenases.
Différents traitements sont décrits pour l'inflammation, ceux qui sont synthétisés tels que les
anti-inflammatoires stéroïdiens (corticoïdes) et les anti-inflammatoires non stéroïdiens
(AINS), ou bien ceux qui sont naturel extrait des plantes comme la quercétine qui inhibe les
prostaglandines, leucotriènes et les médiateurs de l'histamine [8].
55
Pour déterminer cette activité des modèles expérimentaux d'inflammation aiguëin vivo sont
connus tels que l’œdème de la patte et l’œdème de l’oreille. Le test appliqué dans notre
travail est celui de l’œdème de la patte provoqué par la carraghénanequi évoque une réponse
aiguë locale puissante avec un profil biphasique[9]principalement provoquée par l'histamine,
sérotonine, et les prostaglandines.
 Méthode de l’œdème de la patte
Les souris ont été pesées et répartis aléatoirement en six lots de 5. L’œdème de la patte a été
provoqué chez les souris par injection sous-cutanée de 0,025 ml de la carraghénine à 1%
préparé dans une solution saline à 0,9% dans la région plantaire de la patte postérieure
gauche, 1 heure avant l'administration per os des traitements.
Lot 1 : extrait méthanolique à 2500mg / kg

Lot 2 : extrait méthanolique à 5000 mg / kg
Lot 3 : isorhamnétine-3-O-robinobioside à 2500mg / kg
Lot 4 : isorhamnétine-3-O-robinobioside à 5000 mg / kg
Lot 5 : Diclofenac à 12,5mg / kg
Lot du contrôle : Seule l'eau distilléea été administréeper os
Après 4 heures, les souris ont été tuées et les pattes ont été coupées au niveau du tibio-tarsien,
pesées puis comparées avec les pattes saines [10].
Le pourcentage d'œdème a été calculé en utilisant la formule suivante:
MPPG – MPPD
% œ d è me= ×100
MPPD
D’où :
MPPG = moyenne du poids des pattes gauche
MPPD = moyenne du poids des pattes droite
Le pourcentage d’inhibition de l’œdème est calculé selon la formule suivante :

% ∈hibition=% œ d è me LC−% œ d è me< ¿ ×100 ¿
% œ d è me LC
D’où :
56
Œdème LC = œdème du lot du contrôle

Œdème LT = œdème du lot traité
2.7.4. Activité antispasmodique
Le test de contorsion est un procédé chimique utilisé in vivo pour induire une douleur
d'origine périphérique par injection d’un agent irritant les membranes séreuses
péritonéale ;tels que la phénylbenzoquinone [11],l'acide acétique [12], la bradykinine [13]
l'acétylcholine [14], adrenaline [15],l'adénosine-triphosphate, le chlorure de potassium, la
tryptamine [16] ou l’oxytocyne [17] ; et qui se caractérise par des contractions abdominales,
torsion des muscles dorsoabdominal, et une réduction de l'activité motrice et l'incoordination
motrice. Ces comportements sont considérés comme des réflexes [18] et comme une preuve
de la douleur viscérale (ou douleur peritoneovisceral) [19].
Les médicaments les plus fréquemment utilisés dans le traitement desspasmes musculaires
viscérales sont les substances qui détendent les muscles lisses et les substances analgésiques
(tels que l’opioïdes ou AINS). Dans le traitement des coliques néphrétiques et biliaires, les
AINS à utilisation parentérale sont plus efficace que les antispasmodiques ou les analgésiques
opioïdes[20].
 Méthode de contorsion à l’acide acétique
Les souris ont été pesées et réparties aléatoirement en six lots de 5. L’injection intra-
péritonéale de 0,1 ml l’acide acétique à 1%, chez la souris provoque une réaction douloureuse
qui se manifeste par des mouvements de torsion de l’abdomen, avec étirement des pattes
postérieures (spasmes). Cette dernière est apaisée après 30 minutes, lors de l'administration
par voie orale des traitements
Lot 1 : extrait méthanolique à 2500mg / kg

Lot 2 : extrait méthanolique à 5000 mg / kg
Lot 3 : isorhamnétine-3-O-robinobioside à 2500mg / kg
Lot 4 : isorhamnétine-3-O-robinobioside à 5000 mg / kg
Lot du contrôle positif : phloroglucinol à 80mg / kg
Lot du contrôle négatif : Seule l'eau a été administréeper os
Les souris ont été observées et le nombre de torsionsa été compté pendant 10 min, après 5
minutes de l'injection d'acide acétique.
57
Le pourcentage d'inhibition dans chaque groupe a été calculé selon la formule suivante [12]:
MCLC – MCLT
% ∈hibition= ×100
MCLC
D’où :
MCLC = moyenne de spasmes du lot du contrôle
MCLT = moyenne de spasmes du lot traité
3. Résultats et discussions
3.1. Screening phytochimique
Alcaloïdes Composés Flavonoïdes Coumarines Quinones Terpènes

phénoliques et stérols
Fleurs - + ++ - - +
Graines - + + - - +
Le screening phytochimique des différentes parties de la plantes a montré la présence des

composés phénoliques et des flavonoïdes.
3.2. Extraction des flavonoïdes
1èremethod Dichloromethane/Propanol 2,43(visqueux marron)

Fleurs Acétate d’éthyle 0,70g (poudre jaune)
2èmemethod
Butanol 1g (visqueux marron)
Graines 1èremethod Dichloromethane/Propanol 0,9g (visqueux orangé)
3.3. Analyse des flavonoides par CCM

 Fleurs
L’analyse sur couche mince des extraits d’acétate et butanol des fleurs du figuier de barbarie a
révélé la présence d’un produit majoritaire en commun facilement séparable.
La révélation de la plaque avec le chlorure d’aluminium a permis de noté sur UV-366nm une
coloration jaune des taches, ce qui signifie que ces produits appartiennent à la famille des
flavonoïdes et peuvent être de types flavone ou flavanol(selon tableau 4).
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
6 7 6
7 58
8 8
9 9
10 10
CH2Cl2/C3H7OH Acétate Butanol
CH3COOEt-MeOH-H2O (85 : 10 : 5) CH3COOEt-MeOH-H2O

CCM 1ère Extraction CCM 2ème Extraction
 Graines
1
2
3
CH2Cl2/C3H7OH
CHCl3-MeOH (95: 5)
CCM 1ère Extraction
Note :Dans ce travail on s’est intéressé seulement à la séparation des flavonoïdes extraits des
fleurs (obtenue par la première méthode d’extraction). Les flavonoïdes extraits des graines
peuvent être eux aussi séparé mais sur des plaque préparative au lieu de la colonne vue que
c’est des petites quantités.
3.4. Séparation des flavonoïdes
59
Tubes 1-4 Mélange de composés 1, 2 et 3 Rf1= 0,877; Rf2= 0,795; Rf3=

0,653
Tubes 5-7 Composés 4 =>Poudre jaune Rf4= 0,612
Tubes 8-12 Mélange de composés 4, 5 et un
produit en trace
Tubes 13-15 Composé 5 =>Poudre jaune Rf5= 0,510
Tubes 16-17 Composé 5 avec un composé en trace
Tubes 18-61 Composé 6 =>Cristaux jaune Rf6= 0,3
Tubes 62-97 Mélange de composés 7 et 8 et 9 Rf7= 0,285; Rf8= 0,102; Rf9=
vide 0,06
Tubes 98-113 Composé 10
Tubes 106-141 Start
3.5. Analyse des flavonoïdes par CLHP
L’analyse par HPLC de l’extrait méthanolique des fleurs a confirmé la présence d’un seul
produit majoritaire en comparaison avec les autres produits présents dans les fleurs selon le
chromatogramme. Le composé (8)surCLHPcorrespond au composé(6) sur la plaque CCM vue
que la phase stationnaire de CLHP est une phase inverse R-18.
Figure 8.Profil chromatographique de l’extrait méthanolique des fleurs de figuier de barbarie
3.6. Analyses spectrales
60
Leproduit majoritaire séparé sur colonne chromatographique (composé 6) est analysé par
RMN H1, C13, DEPT, HMBC, UV- visible. Les autres composés n’ont pas été bien purifiés
sauf le composé 4 et le composé 5, mais ces dernierssont de faible quantité (Pour les spectres
voir ANNEXES).
MeOH 255, 355 Flavonol

5
sa6+MeOH
sa6+MeOH+NaOH
4 sa6+MeOH+NaOH+5mn
Absorbance
+NaOH 270 2
329 = > nouveau = > 7-OH

1
pic
0
414 = > + 59 = > 4’-OH 250 300 350 400 450 500

Longueur D'ande
+NaOAc 272 => + 17 => 7-OH 6 sa6+MeOH
sa6+MeOH+NaOAc
322, 391 5
sa6+MeOH+NaOAc+H3BO3
4
Absorbance
+NaOAc / 268 3
H3BO3 2
365 => + 10 pas de orhto
1
di-OH (6,7
0
ou 7,8) 200 250 300 350 400 450 500

Longueur D'ande
+AlCl3 266, 304, 360, 1,4
sa6+MeOH
402 1,2 sa6+MeOH+AlCl3

sa6+MeOH+AlCl3+HCl
1,0
0,8
Absorbance
+AlCl3 / HCl 267, 300, 360, 0,6
401 => + 46 => 5-OH en 0,4
absence de 3- 0,2
0,0
OH
200 250 300 350 400 450 500
Longueur D'ande
Les spectres UV présentés ci-dessus ont confirmé que le composé (6) est un flavonoïde de
type flavonol, substitué en position 5, 7 et 4’ par des groupements OH.
Tableau 10.Spectroscopie RMN (500 MHz, CD3OD) pourle composé (6)
61
Composé (6)
Position δc type δH (J in Hz) HMBC
2 150.733
3 135.481
4 179.165
5 162.779
6 99.975 6.1, s 5, 7, 8, 10
7 165.907
8 94.977 6.3, s 6, 7, 9, 10
9 158.690
10 105.594
1’ 123.955
2’ 114.529 7.9, s 2, 9, 3’, 6’
3’ 148.160
4’ 158.287
5’ 116.065 6.9, d (8.4) 2, 1’, 3’, 6’
6’ 122.857 7.6, d (8.4) 2, 2’, 4’
OCH3 56.734 3.9, s 3’
1” 104.564 5.2, d (6.5) 3

2” 75.896 3.48, m
3” 78.107 3.48, m
4” 73.815 3.27, m
5” 77.234 3.40, m
6” 68.487 Ha 3.8, d (1.8) 1 , 1’’’
Hb 3.42, m
1’’’ 102.483 4.5, s 3’’’, 5’’’
2’’’ 72.031 3.64, m
3’’’ 72.236 3.50, m
4’’’ 71.548 3.27, m
5’’’ 69.746 3.41, m
6’’’ 17.891 1.1, d (6.2) 4’’’, 5’’’
62
OMe
3' O-CH3
OH
4'
HO 7 O
5 3 O-glycosides
H-6’"
OH O
H-1’" H-Glycoside
H-2’ H-8 H-6
H-5’
H-6’ H-1"
Les 3 Hydrogène à 3.9 ppm correspondent au 3H du groupement OCH 3 en position 3’ et les

multiplets entre 3 - 4,5 sont les hydrogènes glycosidiques ce qui signifie que la molécule est
un Isorhamnetine glycosidique.
Les 3 Hydrogènes à 1.1 ppm correspondent au 3H du groupement CH3 du Rhamnose
C=C
CH2
C=O
HC=C
HC=C
O-C-O O-CH CH3
O-CH3
Selon le DEPT on remarque la présence d’un pic CH 3, un pic O-CH3, 2 pics O-C-O, 8 pics O-
CH, 5 pics HC=C (Ar), un pic CH2, 9 pics C=C (Ar) et un pic C=O, ce qui fait 28 atomes de
carbones.
63
Lorsqu’on compare le chromatogramme de l’étude réalisée par De Leo et al., en 2010 avec
notre chromatogramme on remarque que le composé (6) correspond à notre composé (8).
Figure 9.Profil chromatographique de l’extrait méthanolique des fleurs d’O. ficus-indica

selon De Leo et al. [21]
Tableau 11.Données spectrale (UV) et chromatographique (CLHP) des composés détectés

dans l’extrait méthanolique des fleurs d’O. ficus-indica selon De Leo et al.[21]
Pic Composé tR λmax (nm) Quantité (mg/1g)

1 Non identifié 22,14 255, 350 1,54
2 Non identifié 22,76 255, 355 1,69
3 Quercetine 3-O-rutinoside 23,61 255, 355 7,09
4 Kaemferol 3-O-rutinoside 24,64 260, 350 4,00
5 Quercetine-3-O-glucoside 25,12 255, 355 4,47
6 Isorhamnetine 3-O-robinobioside 27,15 255, 355 42,69
7 Isorhamnetine 3-O-galactoside 28,17 255, 355 9,79
8 Isorhamnetine 3-O-glucoside 28,76 255, 355 7,24
9 Kaemferol 3-O-arabinoside 29,80 265, 350 3,24
En plus que l’absorbance de la molécule des ondes Ultra-Violet des deux composés sont les
mêmes à 255 et 355nm, ce qui signifie que les deux composés sont identique et que le produit
majoritaire qu’on a séparé des fleurs de figuier de barbarie est l’isorhamnetine 3-O-
robinobioside
64
OMe
OH
HO O
O
OH O OH
O
O O
OH
OH
HO OH
OH
3.7. Dosage des composes phénoliques

3.7.1. Dosage des polyphénols totaux
1.2
f(x) = 0.11 x − 0.24
1 R² = 1
0.8
Absorbance
0.6
0.4
0.2
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Concentration acide gallique (mg/L)
Figure 10.Courbe d’étalonnage de l’acide gallique
Tableau 12.Teneur des différents extraits en polyphénols totaux
Méthanol-eau (80:20) Acétone-eau (80:20) Infusion

Teneur en Fleurs Graines Fleurs Graines Fleurs Graines
mg/L 241,75 25,5 205,75 61,25 210,5 19
65
Selon les résultats décrits dans le tableau 12, on remarque que le taux des polyphenols
présents dans les fleurs du figuier de barbarie est important dans les trois extraits tandis que
pour les graines, le taux des polyphénols est faible pour les trois extraits.
3.7.2. Dosage des flavonoïdes totaux
0.9
0.8
f(x) = 0.08 x − 0.22
0.7 R² = 0.99
0.6
Absorbance
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Concentration catéchine (mg/L)
Figure 11.Courbe d’étalonnage de la catéchine
Tableau 13. Teneur des différents extraits en flavonoïdes totaux
Méthanol-eau (80:20) Acétone-eau (80:20) Infusion

Teneur en Fleurs Graines Fleurs Graines Fleurs Graines
mg/L 302 104 459 230 138 53
Selon les résultats décrits dans le tableau 13, on remarque que l’extrait acétone-eau (80 :20),
présente le taux de flavonoïdes le plus important, malgré que dans notre travail, on s’est
intéressé à l’extrait méthanol-eau (80 :20)
3.8. Activités biologiques

3.8.1. Test de toxicité aigue
Aucune souris morte n’a été observéependant les 48h, ce qui signifie que l’extrait
méthanolique de la plante et l’isorhamnetine 3-O-robinobioside ne sont pas toxiques à la dose
de 5000 mg / kg.
3.8.2. Activité anti-inflammatoire

66
Selon les résultats obtenus au cours de l’analyse (tableau 14), l’extrait méthanolique des
fleurs du figuier de barbarie a diminué le volume de la patte des souris traitées en
comparaison avec le volume de la patte des souris non traitées. L’isorhamnétine-3-O-
robinobioside, flavonoïde isolé des fleurs, à la dose de 5000 mg / kg a montré une inhibition
de l’œdème à 77,51% plus importante que l’extrait méthanolique qui est de 53, 88% et celle
du Diclofenac à 12mg/K (AINS de référence), ce qui signifie que l’isorhamnétine-3-O-
robinobioside a pu inhibé l'histamine, les sérotonine, et les prostaglandines libéré par la
carraghénane.
Tableau 14.Effet de l’extrait méthanoliquedes fleurs de figuier de barbarie et l'isorhamnétine-

3-O-robinobioside sur l'œdème induit par la carragénine chez la souris
Lot Dose Moyenne du poids de pattes % %

(mg/kg) (mg) Œdème inhibition
Patte gauche Patte droite
Contrôle - 239.88 ± 2.04 187.18 ± 7.37 28.15 -
Extrait 5000 198.56 ± 10.56 175.74 ± 8.53 12.99 53.88
méthanolique 2500 227.14 ± 3.35 185.84 ± 7.88 22.22 21.07
Isorhamnetine 3- 5000 179.66 ± 3.05 168.96 ± 2.44 6.33 77.51
O-robinobioside 2500 204.84 ± 6.63 179.42 ± 3.51 14.17 49.68
Diclofenac 12.5 193.60 ± 6.40 164.06 ± 3.38 18.01 36.05
3.8.3. Activité antispasmodique
Selon les résultats obtenus au cours de l’analyse (tableau 15), l’extrait méthanolique des
fleurs du figuier de barbarie et l’isorhamnétine-3-O-robinobioside, à la dose de 5000mg/
kg,ont montré une inhibition de spasmesà des pourcentages très proche 78,39% et 79,17% qui
ressemble à celui du Phloroglucinol (antispasmodique de référence) 74,26%, ce qui signifie
que l’extrait méthanolique et l’isorhamnétine-3-O-robinobioside ont pu inhiber les médiateurs
endogènes tels que les prostaglandines,libérés par l’acide acétique,qui contribue à
l’augmentation de la sensibilité des nocicepteurs.
67
Tableau 15.Effet de l’extrait methanoliquedes fleurs de figuier de barbarie et l'isorhamnétine-

3-O-robinobioside sur les spasmes induitspar l'acide acétique
Lot Dose (mg/kg) Spasmes % inhibition

Contrôle - 101.8 ± 1.16 -
Extrait méthanolique 5000 22.0 ± 1.00 78.39
2500 42.4 ± 1.21 58.35
Isorhamnetine 3-O- 5000 21.2 ± 1.28 79.17
robinobioside 2500 37.0 ± 1.58 63.65
Phloroglucinol 80 26.2 ± 0.86 74.26
68
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[21] De Leo, M., De Abreu, M. B., Pawlowska, A. M., Cioni, P. L., Braca, A. (2010).
Profiling the chemical content of Opuntia ficus-indica flowers by HPLC–PDA-ESI-MS and
GC/EIMS analyses. Phytochemistry Letters, 3(1), 48-52.
70
CONCLUSION GENERALE
L’Opuntia ficus-indica connue sous le nom de figuier de barbarie est une plante de la
famille des cactacées, très cultivée en Algérie pour ses délicieux fruits, mais qui est aussi
Conclusion générale
connue pour ces vertus thérapeutiques. Notre travail de recherche est centré sur la valorisation
de cette plante, essentiellement ses fleurs qui sont moins étudiées par rapport à ses fruits, ses
cladodes et ses graines.
L’objet de notre travail a porté sur le dosage et la séparation des composés phénoliques
présents dans les fleurs, puis l’étude biologique de ces derniers dans le but de confirmer ou
infirmer l’utilisation traditionnelle de ses fleurs.
Les fleurs de figuier de barbarie sont utilisées en médecine traditionnelle dans diverses
applications, soit pour traiter l’asthme, soit pour soulager les douleurs de la prostate et les
douleurs des calculs rénaux (coliques néphrétiques).
L’étude phytochimique des fleurs du figuier de barbarie a montré la présence des
composés phénoliques. Le dosage de ces composés dans les extraits méthanolique et
cétonique a confirmé que ces extraits sont riches en flavonoïdes qu’en polyphénols.
L’analyse CLHP de l’extrait méthanolique a montré la présence d’un composé majoritaire
qui a été séparé par la suite par chromatographie sur colonne et ce dernier a été analysé par
UV-visible et RMN et a été identifié en tant que isorhamnetine-3-O-robinobioside, un
flavonoïde de type flavonol.
L’étude de l’activité anti-inflammatoire et l’activité antispasmodique in vivo de l’extrait
méthanolique et de l’isorhamnetine-3-O-robinobioside en comparaison avec des médicaments
de référence, ont montré que l’isorhamnétine-3-O-robinobioside peut être considéré comme
un AINS à un effet antispasmodique et que ce dernier est le produit responsable de ces
activités dans les fleurs.
En conclusion, notre étude a identifié le phytonutriment responsable des activités anti-
inflammatoire et antispasmodique des fleurs du figuier de barbarie, déjà connues en médecine
traditionnelle. L’isorhamnetine-3-O-robinobiosidepeut en posséder d’autres activités qui ne
sont pas encore connues mais qui peuvent être étudiées par la suite, vu que les fleurs du
figuier de barbarie sont devenues une nouvelle source à partir de laquelle on peut extraire
cette molécule.
72
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‫وزارة التعليم العالي و البحث العلمي‬

MINISTER DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE

UNIVERSITE BADJI MOKHTAR ‫عنابة‬-‫جامعة باجي مختار‬

FACULTÉ DES SCIENCES

Présentée en vue de l’obtention du diplôme de Doctorat 3ème cycle

Etude ethnobotanique et chimique du figuier de

Option : Chimie Organique appliquée

Directeur de thèse : Mr. Belgacem LEGSEIR Pr. U.B.M. Annaba

Je remercie le professeur Belgacem LEGSEIR d’avoir accepté la direction de ma thèse.

Je remercie les membres de jury d’avoir accepté d’examiner ma thèse.

Mots clés : Figuier de barbarie, fleurs, isorhamnetine-3-O-robinobioside, anti-inflammatoire,

Key-words: Prickly pear, flowers, isorhamnetin-3-O-robinobioside, anti-inflammatory,

‫المفاتيح‪:‬التينالشوكي‪ ،‬الزهور‪ ، isorhamnetin-3-O-robinobioside ،‬مضاد االلتهاب‪ ،‬مضادالتشنج‬

LISTE DES ABREVIATIONS...................................................................................................................i

AINS : Anti-Inflammatoires Non Stéroïdiens

CCM : Chromatographie sur Couche Mince

CE : électrophorèse capillaire

CG : Chromatographie Gazeuse

CLHP : Chromatographie Liquide à Haute Performance

DEPT : Distortionless Enhanced Polarization Transfer

DRO : Dérivés Réactifs de l’Oxygène

HDL :High Density Lipoprotein

HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation

L.: Carl von Linné

LDL: Low Density Lipoprotein

Mill. : Philip Miller

Rf : Facteur de Rétention

RMN : Résonance Magnétique Nucléaire

RP-18 : Reversed Phase

SM : Spectrométrie de Masse

VLDL :Very Low Density Lipoprotein

Certainement, l’établissement scientifique propose une théorie beaucoup plus structurée et

Acide glycyrrhizique Acide glycyrrhétinique

Matricaria recutita (Astéracées) est connue pour ces activitésanti-inflammatoires et

(-)- α-Bisabolol Oxyde de Bisabolol A Oxyde de Bisabolol B

Il est donc nécessaire d’identifier le maximum de constituant possible afin de comprendre et

Les flavonoïdes sont des composants d’alimentation de nombreux herbivores et omnivores,

Glycosides de lutéoline- (<1%), acide Cholérétique,

Fleurs de Reine-des-près Glycosides de quercétine, la plupart quercétine-4'-

Fleurs de Reine-des-près Glycosides de quercétine, la plupart quercétine-4'-

Tous les flavonoïdes dérivent de l’enchaînementbenzo-γ-pyrone (figure 1), et peuvent être

Figure 1. Structure de l’enchaînement benzo-γ-pyrone

Tableau 2. Structure moléculaire de chaque groupe de flavonoïdes

Groupe Structure Exemples et sources

Myricétine 5, 7, 3’, 4’, 5’ –OH

Isorhamnetine 5, 7, 4’–OH, 3’-OCH3

Flavanones Naringénine 5, 7, 4’-OH

2. Biosynthese et diversite structurelle

2.1. Biosynthese des precurseurs de flavonoïdes

La première étape commence par la désamination de la phénylalanine par l’enzyme L-

La deuxième étape est l’hydroxylation de la trans-cinnamate catalysé par cinnamate 4-

La troisième étape est la formation des esters de thiol-Coenzyme A (4-coumaroyl-CoA) à

Finalement, le noyau hétérocyclique des flavonoïdes est établi par l’isomérisation

2.2. Formation des anthocyanidines

(2R, 3R)-dihydroflavonols (DHFS) obtenue par réaction stéréospécifique sur (2S)-flavanones

2.3. Formation des proanthocyanidines

2.4. Formation des flavones et flavonols

2.5. Formation des isoflavonoides

L’entrée dans la branche isoflavonoïde se produit par l’action de 2-hydroxyisoflavanone

hydroxyisoflavanones, soit spontanément, soit sous l’action de l’isoflavone déshydratase

3. Propriétés physico-chimiques des flavonoïdes

4. Méthode d’analyses des flavonoïdes

Plusieurs méthodes d’analyses existent pour les flavonoïdes. Ceux-ci vont de la

4.1. Chromatographie sur couche mince (CCM)