II- Partie expérimentale 

:
1- But de l’essai :

Le but de l’essai c’est d’étudier la toxicité aiguë provoquée par le sulfate de

cuivre et le sulfate de cadmium sur la lentille terrestre vicia Lens.
2- Principe de l’essai :

Le test de toxicité sert à déterminer la concentration des produits testés

provoquant une inhibition de la croissance de 50% des lentilles terrestres ; (La
CI50%) ; cultivées dans un milieu de culture artificiel (coton + eau) effectuée en
lumière monochromatique en effectuant deux essais en répétabilité pour
chaque produit testé et sur une durée de 7 jours.
3- Matériaux et réactifs utilisés :

Les matériaux :
o Les lentilles
o Vortex Balance
o Pipette de
o Pro-pipette
o Papier absorbant
o Pince de laboratoire
o Tubes à hémolyse
o Porte-tubes
o Coton
o Fioles de 50 ml
o Agitateur
o Barreau magnétique
Les réactifs :
o Sulfate de cuivre à une concentration de 1000 ml/l
o Sulfate de cadmium à une concentration de 1000 ml/l

1
 4- Mode opératoire :

On a commencé par la sélection de 50 lentilles qui repose sur un tri objectif.

Le choix des 50 lentilles porte sur un aspect homogène du tégument qui ne doit
pas être déchiré pour calculer la moyenne puis l’écart type des poids mesurés
afin de déterminer l’intervalle sur lequel on va se baser pour choisir les 50
lentilles.
Echantillon Poids Echantillon Poids
1 0,0276 26 0,0461
2 0,0382 27 0,0386
3 0,0357 28 0,0358
4 0,0295 29 0,0339
5 0,0319 30 0,0384
6 0,0368 31 0,0354
7 0,0357 32 0,0303
8 0,0424 33 0,0383
9 0,0355 34 0,0384
10 0,0401 35 0,041
11 0,0423 36 0,0359
12 0,0365 37 0,041
13 0,0311 38 0,0351
14 0,0368 39 0,039
15 0,0368 40 0,0365
16 0,0291 41 0,0317
17 0,0322 42 0,0314
18 0,037 43 0,0389
19 0,0282 44 0,0241
20 0,0377 45 0,0423
21 0,0428 46 0,0382
22 0,0369 47 0,0431
23 0,0325 48 0,0335
24 0,0306 49 0,0311
25 0,0402 50 0,032
Tableau : Poids des échantillons de lentilles

moyenne 0,0354
ecartype 0,0045

Préparation des dilutions :

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 - Préparation des réactifs :
Pour préparer une solution de sulfate de cuivre de concentration de 1000 mg/l,
on a pesé 0,05 g de sulfate de cuivre, on l’a mis dans une fiole de 50 ml, on l’a
dilué manuellement avec un peu d’eau distillée, puis on a ajouté de l’eau
distillée jusqu’à le trait de jauge et on a agité jusqu’à l’homogénéisation de la
solution mère. De même, pour préparer la solution de sulfate de cadmium.
Pour étudier la toxicité des deux polluants, on a effectué 2 séries de mesures
pour chaque produit. Chaque série contient 16 tubes à hémolyse avec des
différentes concentrations. Pour ce faire on est parti d’une concentration de
1000 mg/l jusqu’à 0,48 mg/l en procédant une dilution sérologique qui consiste
à faire des dilutions successives avec un coefficient de 1/2. Parmi les 16 tubes il
y a 4 qui sont des témoins qui ne contiennent que de l’eau distillée (0,5 ml).
On a versé 1 ml de sulfate de cuivre dans le deuxième tube et 0,5 ml de l’eau
distillée dans les autres tubes, puis on a prélevé 0,5 ml du deuxième et on l’a
ajouté dans le tube qui se suit et on a continué de la même manière jusqu’à le
dernier tube sauf les témoins de telle façon d’avoir 0,5 ml comme quantité de
milieu dans chaque tube d’essai.
N.B : Les 0,5 ml prélevé du dernier tube doit être jeté.

Figure: Préparation des dilutions

La même procédure est refaite pour le sulfate de cadmium.

Après préparation des tubes, des morceaux de coton ont été introduits dans
chaque tube et tassés modérément et sur lesquels sont répartis unitairement

3
les graines de lentille et enfin les tubes doivent être bouchés par le coton de
façon non hermétique pour permettre l’échange de gaz.
Les lentilles sont exposées à une lumière avec une photopériode de 16 h de
lumière et 8 d’obscurité et à une température comprise entre 17 et 21 °C. La
lecture de l'essai est pratiquée après 7 jours en mesurant et en comparant les
germinations.

Lecture des résultats :

Après 7 jours de culture, en présence du toxique, des mesures du poids et de
longueur ont été faites pour suivre l’évolution des graines. On a donc mesuré le
poids et la longueur de toutes les lentilles germées et non germées et celles des
témoins.

Figure : Culture des graines

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 III- Résultats et interprétations :
Dans cette séance on a fait une lecture des résultats après 7 jours de culture en
présence des substances toxiques afin d’exprimer les résultats de l’essai en
pourcentage d’inhibition de croissance des lentilles contaminées par rapport
aux témoins et avoir le degré de toxicité de chacun des deux. L’évaluation
quantitative de la germination d’une graine de lentille puis la croissance de la
plante sur 7 jours est basée sur l’augmentation de son poids et la longueur de
tige.
1- Pour sulfates de cuivres :

On a traité l’effet du sulfate de cuivre sur la germination des gaines. Les

résultats après la mesure des poids et longueurs pour les 3 essais sont réunis
dans les présents tableaux :

poids Longeur
MOYEN P Moy L T C% I% TC% I%
1000 0,10073333 1,83333333 64,4487097 35,5512903 39,5683453 60,4316547
500 0,10316667 2,06666667 66,0055449 33,9944551 44,6043165 55,3956835
250 0,10776667 2,1 68,9486031 31,0513969 45,323741 54,676259
125 0,1115 2,33333333 71,3371721 28,6628279 50,3597122 49,6402878
62,5 0,11476667 2,83333333 73,42717 26,57283 61,1510791 38,8489209
31,25 0,11663333 2,96666667 74,6214545 25,3785455 64,028777 35,971223
15,62 0,12633333 3,3 80,8274685 19,1725315 71,2230216 28,7769784
7,81 0,12966667 3,56666667 82,9601194 17,0398806 76,9784173 23,0215827
3,9 0,13136667 3,8 84,0477714 15,9522286 82,0143885 17,9856115
1,95 0,13176667 4 84,3036895 15,6963105 86,3309353 13,6690647
0,97 0,1328 4,13333333 84,9648113 15,0351887 89,2086331 10,7913669
0,48 0,1434 4,36666667 91,7466411 8,25335893 94,2446043 5,75539568
T 0,1563 4,63333333        
Moyennes des lentilles non germées = 0

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 TAUX INIBITION (LONGUEUR)
70
60
50
40 LONGUEUR
30 CL50

20
10
0
00 50
0
25
0
12
5 .5 5 2
.2 5.6 7.8
1 9 5 7
3. 1.9 0.9 0.4
8
10 62 31 1

Figure : Taux d'inhibition de germination des graines (longueur) en fonction de la dose de sulfate de
cuivre

- Interprétation des résultats :

Notre essai consiste à déterminer la CI50%, c’est à dire la concentration des
produits testés provoquant une inhibition de 50% de la croissance de la lentille
terrestre. On le détermine par la projection sur l’axe des abscisses et on relève
la concentration qui inhibe 50% de la population.
On a trouvé donc :
Pour la longueur : CL50 = 93,75 mg /L
2- Pour le sulfate de cadmium :