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Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les
établissements de santé.

Article · August 2017

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Le Gallou Florence Didier Lepelletier

Centre Hospitalier Universitaire de Nantes Centre Hospitalier Universitaire de Nantes
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  90-25-0025-A

Contrôles particulaires
et microbiologiques de l’air et contrôles
microbiologiques des surfaces
dans les établissements de santé
F. Le Gallou, D. Lepelletier

La maîtrise de l’empoussièrement des locaux accueillant des patients ou des activités à risque est un
élément de la prévention du risque infectieux lié à l’air en établissement de santé. La performance d’une
installation de traitement d’air est caractérisée de façon normalisée par des paramètres techniques,
notamment la classe de contamination particulaire, à laquelle correspond une classe de contamination
microbiologique. Le comptage particulaire et l’évaluation de l’aérobiocontamination sont des outils de
qualification des zones à environnement maîtrisé (ZEM) et des indicateurs qualité dans le suivi de leur
exploitation. L’évaluation de la contamination microbiologique des surfaces constitue un indicateur de
la qualité de l’application des procédures de bionettoyage. Aérobiocontamination et contamination des
surfaces sont deux éléments complémentaires dans l’appréciation de la maîtrise de la biocontamina-
tion des ZEM. Les contrôles microbiologiques de l’air et des surfaces peuvent également être réalisés de
façon ponctuelle pour vérifier l’efficacité de mesures de prévention de la dissémination de contaminants
fongiques lors de travaux, pour rechercher et identifier une source environnementale lors d’une enquête
épidémiologique, ou à titre pédagogique pour sensibiliser le personnel à la qualité microbiologique de son
environnement. Les méthodes les plus utilisées en pratique en milieu hospitalier sont l’aérobiocollecteur
pour les prélèvements d’air, et l’empreinte sur milieu gélosé ou l’écouvillonnage humide pour les prélè-
vements de surface. Leur réalisation doit être standardisée et leurs résultats interprétés en fonction de
valeurs cibles, alertes ou actions définies selon la normalisation, la réglementation ou les recomman-
dations. Préalablement à la mise en œuvre de contrôles, chaque établissement élabore sa stratégie de
surveillance environnementale après une analyse de risque prenant en compte ses activités, et détermine
les modalités d’interprétation et les conduites à tenir en fonction des résultats obtenus.
© 2017 Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés.

Mots-clés : Air ; Surfaces ; Contrôles microbiologiques ; Environnement hospitalier ; Prélèvements ;

Classification particulaire

Plan ■ Analyses 8
Comptage particulaire 8
■ Introduction 1 Prélèvements d’air et de surfaces 8
■ Lecture et interprétation des résultats 8
■ Contexte épidémiologique 2
Micro-organismes dans l’air et sur les surfaces 2 Lecture et expression des résultats 8
Responsabilité dans les infections associées aux soins 2 Référentiels et interprétation 8
Limites et précautions 9
■ Maîtrise de la contamination de l’air et des surfaces 2
■ Conduite à tenir 9
■ Stratégie de la surveillance microbiologique de l’air
et des surfaces 3
■ Prélèvements 3
Plans d’échantillonnage 4  Introduction
Fréquence 4
Qui prélève ? 4 La prévention des infections associées aux soins (IAS) est un
À quel moment prélever ? 4 élément essentiel de la gestion des risques en établissement
Identification du prélèvement 4 de santé. La part de ces infections liée à la contamination de
Techniques de prélèvement 6 l’environnement hospitalier est encore mal évaluée de façon
Conditions de transport et délai d’acheminement 8 générale, mais la responsabilité de micro-organismes d’origine

EMC - Biologie médicale 1

Volume 12 > n◦ 4 > octobre 2017
http://dx.doi.org/10.1016/S2211-9698(17)74812-1
90-25-0025-A  Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé
Tableau 1.
Survie de micro-organismes d’origine humaine sur les surfaces sèches
(d’après Kramer [10] ).
Micro-organismes Durée de survie
Bactéries Acinetobacter sp. De 3 jours à 5 mois
Clostridium difficile (spores) 5 mois
Escherichia coli De 1,5 heure à 16 mois
Enterococcus spp. (dont De 5 jours à 4 mois
entérocoques résistant à la
vancomycine)
Klebsiella spp. De 2 heures à plus de
30 mois
Mycobacterium tuberculosis De 1 jour à 4 mois
Staphylococcus aureus (dont De 7 jours à 7 mois
S. aureus résistant à la
méthicilline)
Levures Candida albicans De 1 jour à 4 mois
Virus Rotavirus De 6 jours à 2 mois
Virus de l’hépatite B Plus de 1 semaine
Virus respiratoire syncytial Jusqu’à 6 heures
environnementale a été documentée dans des cas précis d’IAS [1–3] ,
tout comme l’a été le rôle des surfaces comme réservoir secondaire
et relais de la transmission croisée lors d’épidémies [4, 5] .
La surveillance microbiologique de l’environnement, et en par-
ticulier de l’air et des surfaces, constitue donc un des éléments de la
maîtrise du risque infectieux en établissement de santé. Les résul-
tats des prélèvements sont des indicateurs de qualité en routine, et
des outils dans les investigations d’épidémies. Cette surveillance
doit néanmoins être utilisée dans un cadre et avec des objectifs
définis pour être utile et coût/efficace. Pour cela, chaque établis-
sement doit établir sa stratégie de surveillance en fonction de
ses activités (chirurgie, présence de patients immunodéprimés,
pharmacotechnie, etc.), en s’appuyant sur la réglementation, les
normes et les recommandations.
 Contexte épidémiologique
Micro-organismes dans l’air et sur les surfaces
L’air et les surfaces sont naturellement contaminés par des
micro-organismes d’origine environnementale ou humaine [6, 7] .
La flore atmosphérique est constituée d’une flore de base, présente
sur les supports que sont les poussières, et composée d’organismes
saprophytes résistant à la dessiccation et aux ultraviolets : bac-
téries à Gram positif (Bacillus, sarcines, etc.) et champignons
filamenteux (Aspergillus, Penicillium, Mucor, etc.). L’émission par
l’homme de gouttelettes de Flügge, la formation de droplet nuclei
(noyaux de condensation de ces gouttelettes), et la dissémi-
nation de squames cutanées, entraînent la présence dans l’air
d’une flore d’origine humaine qui comprend à la fois des micro-
organismes commensaux et d’autres potentiellement pathogènes.
La contamination des surfaces se fait par contact direct (mains) ou
indirect (objets souillés) avec l’homme, par dissémination d’eau
(milieu de vie de nombreux micro-organismes saprophytes), et par
sédimentation des particules de l’air. Cette interaction est conti-
nue puisque la remise en suspension (mouvements, techniques
d’entretien inadaptées) de particules déposées sur les surfaces et
chargées de micro-organismes peut contaminer l’air [8, 9] .
La survie des micro-organismes d’origine humaine sur les
surfaces varie de quelques heures à plusieurs mois, en fonc-
tion des caractéristiques propres de ceux-ci et des conditions
environnementales [10] (Tableau 1). Les spores bactériennes (par
exemple Clostridium difficile) sont une forme de résistance dans
l’environnement. Une humidité de plus de 70 %, une tempéra-
ture peu élevée, un fort inoculum de départ, et la présence de
matières organiques sont associés à la persistance de la plupart
des micro-organismes sur les surfaces. Certaines bactéries, comme
Staphylococcus aureus et Acinetobacter baumanii, résistent aussi à la
2 EMC - Biologie médicale
Homme
Eau
Air Surfaces
Remise en
suspension
dans l'air
Contact mains Matériel
Homme
Figure 1. Chaîne de transmission des micro-organismes entre homme
et environnement.
dessiccation et ont une survie prolongée sur surfaces sèches [11] .
Le type de matériau (plastique, inox, cuivre, etc.) constituant la
surface peut avoir une influence sur la survie [12, 13] . L’adhésion
des bactéries aux surfaces au sein d’un biofilm constitué est éga-
lement un facteur important de leur pérennité, cette matrice
de polymères extracellulaires formant une protection des micro-
organismes contre les agressions de tous types, dont les stress
environnementaux et l’action des désinfectants [14] .
Responsabilité dans les infections associées
aux soins
La présence d’un micro-organisme dans l’environnement n’est
pas une condition suffisante pour l’impliquer comme source res-
ponsable de la survenue d’une infection. En effet, sa présence
dans l’air ou sur les surfaces peut aussi être la conséquence de
sa dissémination par les patients [15–17] , la chaîne de transmis-
sion entre homme et environnement étant complexe (Fig. 1).
Le lien entre aérobiocontamination et infection a été mis en
évidence dans deux grands types de situations : en chirurgie ortho-
pédique prothétique [18] , avec implication de bactéries d’origine
cutanée ou muqueuse (staphylocoques), et pour les aspergil-
loses invasives chez des patients immunodéprimés, notamment
à l’occasion de travaux mobilisant de forts inoculum de champi-
gnons filamenteux [1] . La survenue d’infections du site opératoire
à Aspergillus sp. a également été documentée lors de la pré-
sence du champignon dans l’air en chirurgie propre [19] . La
responsabilité de la contamination de surfaces dans la survenue
d’IAS peut être difficile à prouver. Les épidémies nosocomiales
sont la plupart du temps associées à une transmission croisée
par manuportage. Néanmoins, dans ce contexte, les surfaces
peuvent servir de réservoir secondaire et amplifier ou prolonger la
transmission [4, 20] .
La possibilité de la transmission d’infections par la contamina-
tion de l’air ou des surfaces impose la mise en place de mesures
ciblées de maîtrise de celle-ci, après analyse des facteurs de risque
d’exposition (pathogénicité du micro-organisme, mode de conta-
mination, existence d’une porte d’entrée, réceptivité de l’hôte).
 Maîtrise de la contamination
de l’air et des surfaces
La maîtrise de l’aérobiocontamination d’un local ou d’une
enceinte passe par l’élimination d’une partie des particules de
l’air, supports de micro-organismes, en fonction de leur nombre
et de leur taille. Elle est réalisée par la filtration de l’air entrant
et l’application d’une surpression pour le contrôle des parti-
cules provenant de l’extérieur, et par le mode de ventilation
et le renouvellement de l’air pour le contrôle de la production
interne (activité humaine). La mise en place de l’ensemble de ces
 Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé  90-25-0025-A

Tableau 2. Le choix de la performance d’une ZEM est fonction de l’activité

Classes de propreté particulaire selon la norme NF EN ISO 14644-1 prévue dans cette zone et de l’analyse de risque réalisée. Pour les
(d’après [21] ). établissements de santé, la norme NF S 90-351 [22] propose des
Classe ISO Concentrations maximales admissibles classes de risque, corrélées aux classes de propreté particulaire, en
(particules/m3 d’air) en particules de taille égale ou fonction des types d’activités.
supérieure à celles données ci-dessous La maîtrise de la contamination des surfaces passe par la réalisa-
tion d’un bionettoyage régulier et adapté (procédure, fréquence)
0,1 ␮m 0,5 ␮m 5 ␮m
aux types de locaux concernés et aux micro-organismes ciblés.
ISO 1 10
ISO 2 100 4
ISO 3 1000 35  Stratégie de la surveillance
ISO 4 10 000 352
microbiologique de l’air et des
ISO 5 100 000 3520 29
ISO 6 1 000 000 35 200 293 surfaces
ISO 7 352 000 2930
L’élaboration de la stratégie de surveillance de l’environnement
ISO 8 3 520 000 29 300 d’un établissement de santé nécessite une démarche préalable
ISO 9 35 200 000 293 000 d’analyse des risques prenant en compte :
• les zones hébergeant des patients ou des activités à risque
infectieux (chirurgie, endoscopie, pharmacotechnie, patients
immunodéprimés, etc.), dont les ZEM ;
Tableau 3.
• la réglementation, les normes et recommandations existantes ;
Normes concernant la propreté particulaire et la biocontamination micro-
• les spécificités de l’établissement en termes de priorités et de
bienne des salles propres.
ressources.
Normes Salles propres et Date de Peu de prélèvements d’air et de surfaces sont réglementaires ;
internationales environnements maîtrisés publication ils concernent la stérilisation [23, 24] , la thérapie cellulaire et les
ISO apparentés banques de tissus [25] , et les secteurs de fabrication des pharmacies
ISO 14644-1 Partie 1 : Classification de la Décembre 2015 hospitalières (pharmacotechnie) [24, 26, 27] .
propreté particulaire de l’air Les contrôles microbiologiques de l’air et des surfaces per-
mettent de mesurer la contamination environnementale. Ils ont
ISO 14644-2 Partie 2 : Surveillance du Décembre 2015
maintien des performances de
pour objectifs soit d’évaluer l’efficacité d’une procédure de maî-
la salle propre pour la trise de la biocontamination (ZEM, mesures mises en place lors de
propreté particulaire de l’air travaux, processus de bionettoyage, programme d’assurance qua-
lité de secteurs sous certification), soit de rechercher et d’identifier
ISO 14644-3 Partie 3 : Méthodes d’essai Décembre 2005
une source environnementale lors d’une enquête épidémiolo-
ISO 14644-4 Partie 4 : Conception, Avril 2001 gique (Tableau 4). Ils peuvent aussi être utilisés ponctuellement
construction et mise en pour sensibiliser le personnel à la qualité microbiologique de
fonctionnement
l’environnement. En routine, ces contrôles ne sont justifiés qu’en
ISO 14644-5 Partie 5 : Exploitation Août 2004 ZEM de classe de propreté particulaire (ISO) inférieure ou égale
ISO 14644-7 Partie 7 : Dispositifs séparatifs Octobre 2004 à ISO 8, pour lesquelles des valeurs guides de performance sont
(postes à air propre, boîtes à établies (Tableau 5). Pour les secteurs de pharmacotechnie, de
gants, isolateurs et thérapie cellulaire et les banques de tissus, les référentiels [25–27]
mini-environnements) distinguent quatre classes de ZEM ou ZAC (A, B, C et D), dont les
ISO 14698-1 Maîtrise de la Septembre 2003 caractéristiques particulaires au repos et en activité correspondent
biocontamination - Partie 1 : à des classes ISO.
principes généraux et Pour répondre à ces objectifs, il est nécessaire d’adopter une
méthodes démarche rigoureuse et standardisée à toutes les étapes des
ISO 14698-2 Maîtrise de la Septembre 2003 contrôles (prélèvement, analyse, résultats) et de définir au préa-
biocontamination - Partie 2 : lable les modalités d’interprétation des résultats et la conduite
évaluation et interprétation à tenir correspondante (mesures correctives, analyse des causes),
des données de qui font partie intégrante de la stratégie de surveillance de
biocontamination l’établissement.

mesures techniques de traitement de l’air aboutit à l’obtention  Prélèvements

de zones à environnement maîtrisé (ZEM), nommées aussi zones
d’atmosphère contrôlée (ZAC) pour les locaux pharmaceutiques.
Leurs performances sont caractérisées par leur classe de propreté
particulaire [21] (fonction du nombre de particules présentes par
classe de taille et unité de volume) (Tableau 2), par leur cinétique
d’élimination des particules (CP ou temps nécessaire pour élimi-
ner 90 % des particules de diamètre ≥ 0,5 ␮m), et par leur classe
de propreté microbiologique (concentration maximale de parti-
cules donnant naissance à des colonies microbiennes par unité de
volume). Ces classifications sont décrites par l’Organisation inter-
nationale de normalisation (ISO) au sein de normes concernant la
propreté particulaire et la propreté microbiologique (Tableau 3),
qui ont été reprises par l’Association française de normalisation
(Afnor).
Il est habituel d’employer l’intitulé de la classe de propreté par-
ticulaire (ISO 5 par exemple) pour définir le traitement de l’air
d’un local. Dans les domaines médicaux et pharmaceutiques, les
ZEM vont de la classe ISO 5 (la plus exigeante) à la classe ISO 8.
Les normes NF EN ISO 14644-1, 2 et 3 [21, 28, 29] décrivent de façon
précise les contrôles physiques des paramètres de fonctionnement
des ZEM, alors que pour les normes NF EN ISO 14698 [30, 31] , chaque
utilisateur doit faire sa propre analyse de risque et ses procédures
de contrôle de la biocontamination. Ces recommandations sont
complétées pour les établissements de santé par la norme NF S 90-
351 et par les textes réglementaires précédemment cités [23–27] pour
les activités spécifiques.
Le contrôle de l’aérobiocontamination constitue un apport
intéressant au comptage particulaire, qui correspond à un dénom-
brement des particules viables et non viables, et qui permet de
vérifier la classe particulaire d’une ZEM. Les contrôles particu-
laires sont donc traités ici, bien que n’étant pas des contrôles
microbiologiques. La contamination de surface contribue à une
meilleure connaissance de la contamination aérienne (sédimen-
tation des particules de l’air), et son évaluation complète celle
de l’aérobiocontamination, notamment dans le contexte de

EMC - Biologie médicale 3

90-25-0025-A  Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé

Tableau 4.
Objectifs des contrôles de l’air et des surfaces suivant le type de situation rencontrée.
En zone à environnement
maîtrisé (ZEM)
Dans tous types de locaux
Comptage particulaire Aérobiocontamination Contamination des surfaces
S’assurer que la classe de propreté S’assurer que la classe de propreté S’assurer de l’efficacité du bionettoyage
particulaire est conforme à ce qui est microbiologique est conforme à ce qui et du respect des protocoles
attendu est attendu
– Lors d’une qualification opérationnelle : ouverture de nouveaux locaux
– Lors d’une requalification : après maintenance ou travaux
Suivre les résultats en tant qu’indicateurs dans une démarche qualité
Vérifier l’efficacité des mesures mises en place pour la prévention de la dissémination de champignons filamenteux lors
de travaux
Identifier une source environnementale dans le cadre d’une enquête
épidémiologique
Valider un nouveau processus de
bionettoyage
Sensibiliser le personnel dans le cadre
d’une démarche pédagogique
Suivre les résultats en tant qu’indicateurs
dans une démarche de certification
(cuisine, blanchisserie, etc.)

Tableau 5.
Valeurs guides de performance des zones à environnement maîtrisé (ZEM) au repos en établissements de santé (d’après NF S 90-351 [22] ).
Classe de propreté Cinétique d’élimination des Temps nécessaire pour diminuer de 90 % le Classe de propreté Concentration maximale du
particulaire particules de 0,5 ␮m nombre initial de particules de 0,5 ␮m microbiologique nombre de particules viables
(minutes) (UFC/m3 )
ISO 5 CP 5 ≤5 M1 ≤1
ISO 7 CP 10 ≤ 10 M10 10
ISO 8 CP 20 ≤ 20 M100 100

UFC : unité formant colonie.

travaux. L’absence de champignons filamenteux est dans tous les
cas un bon indicateur de maîtrise environnementale (pendant et
hors travaux).
Plans d’échantillonnage
Les plans de prélèvement doivent être conçus par l’utilisateur en
incluant des points critiques de maîtrise, permettant d’identifier
d’éventuelles défaillances, et des points destinés à suivre
l’évolution du système [30] . Pour les contrôles particulaires, le
nombre de points à prélever est fonction de la surface de la salle à
classer [21] . Pour les contrôles microbiologiques, la norme NF S 90-
351 [22] propose un schéma de contrôle comportant des points
dans la zone la plus critique pour les contrôles de routine (table
d’opération, lit du patient, site de l’activité à protéger), et des
points complémentaires dans la totalité de la pièce lors de la qua-
lification ou en cas d’analyse des causes. Trois points en diagonale
sont conseillés pour les contrôles d’air et cinq à dix points pour
les contrôles de surfaces au bloc opératoire ou dans les chambres
à flux unidirectionnel [22, 32] . Les localisations des points prélevés
peuvent être reportées sur un plan des locaux contrôlés.
Fréquence
En ZEM, un contrôle particulaire est réalisé lors de la qua-
lification initiale et lors des requalifications (au minimum
annuellement et après tous travaux impactant le traitement de
l’air) [28] , ainsi qu’un contrôle microbiologique de l’air [21, 22] . Des
prélèvements de surface peuvent venir les compléter [22] .
La périodicité des prélèvements de routine, réalisés dans le cadre
d’une démarche qualité, est fonction de l’analyse de risque et de
la réglementation ou des recommandations lorsqu’elles existent
(Tableaux 6, 7). Des prélèvements supplémentaires peuvent être
réalisés lors de dépassements de seuils, de travaux à proximité, ou
d’enquête épidémiologique.
Qui prélève ?
Les prélèvements sont réalisés par un opérateur formé à
l’hygiène de l’environnement (ou mieux, habilité dans le cadre
d’une accréditation Cofrac [Comité français d’accréditation]).
Dans l’idéal, il s’agit toujours de la même personne, utilisant le
même matériel, pour standardiser le recueil d’échantillon.
À quel moment prélever ?
En ZEM, les prélèvements d’air (particulaire ou microbiolo-
gique) sont habituellement réalisés hors activité (indicateurs
d’efficacité du système de maîtrise de l’environnement), sauf
pour la pharmacotechnie, la stérilisation, la thérapie cellulaire
et les banques de tissus, pour lesquelles les référentiels prévoient
également des valeurs cibles en activité (indicateurs de la maî-
trise de l’environnement en conditions normales d’utilisation des
locaux) [23–27] , et pour les chambres avec patients présents. Ils
sont effectués portes de la pièce à contrôler fermées, après le bio-
nettoyage, en respectant un temps de repos minimum de trois
cinétiques de décontamination particulaire, ou après environ une
heure si celle-ci n’est pas connue. Il est conseillé de vérifier avant
le prélèvement que l’installation est fonctionnelle (traitement de
l’air en marche, surpression, reprise).
Les prélèvements de surface en ZEM sont réalisés de façon
concomitante aux prélèvements d’air, dans les mêmes conditions.
Hors ZEM, ils sont effectués après bionettoyage, séchage et respect
du temps d’action du produit utilisé.
Identification du prélèvement
Tous les échantillons doivent être clairement identifiés au
moment du prélèvement (sur le fond de la boîte et non sur le
couvercle). Une fiche permettant de tracer les informations néces-
saires à l’attribution et à l’interprétation du prélèvement doit être
renseignée. Elle comprend au minimum [30] les informations sui-
vantes :

4 EMC - Biologie médicale

EMC - Biologie médicale

Tableau 6.
Fréquences minimales de réalisation des contrôles de l’air des zones à environnement maîtrisé (ZEM).
Type de contrôle Objectif Locaux hospitaliers Stérilisation (locaux traités) Pharmacie fabrication Thérapie cellulaire et banques
(patients ou activités de tissus
à risque)
ISO 5, 7, ou 8 ISO 8 A et B ISO 5 C et D ISO 7 ou 8 A et B ISO 5 C et D ISO 7 ou 8

Classification Qualification À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture

Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé  90-25-0025-A
particulaire Requalification Au minimum annuelle et après toute action susceptible d’impacter les conditions environnementales (pour tous les types de locaux)
Démarche qualité À définir par l’équipe Annuelle À définir par les responsables Semestrielle Annuelle
d’hygiène
Aérobiocontamination Qualification À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture
Requalification Au minimum annuelle et après toute action susceptible d’impacter les conditions environnementales (pour tous les types de locaux)
Démarche qualité À définir par l’équipe Semestrielle À définir par les responsables Trimestrielle Semestrielle
d’hygiène
Référentiels NF EN ISO 14644-1 et 2 [21, 28] , NF S 90-351 [22] (pour tous les types de locaux)
CTIN 2002 [32] BPPH 2001 [24] , circulaire BPP 2007 [26] , BPF 2015 [27] , BPPH 2001 [24] Décision 27 octobre 2010 [25]
20 octobre 1997 [23] , AFS 2005 [33]

CTIN : comité technique national des infections nosocomiales ; BPPH : bonnes pratiques de pharmacie hospitalière ; BPP : bonnes pratiques de préparation ; BPF : bonnes pratiques de fabrication des médicaments ; AFS : association
française de stérilisation.

Tableau 7.
Fréquences minimales de réalisation des contrôles de surfaces des zones à environnement maîtrisé (ZEM).
Type de contrôle Objectif Locaux hospitaliers (patients Stérilisation (locaux traités) Pharmacie fabrication Thérapie cellulaire et banques de tissus
ou activités à risque)
ISO 5, 7, ou 8 ISO 8 A et B ISO 5 C et D ISO 7 ou 8 A et B ISO 5 C et D ISO 7 ou 8
Contamination Qualification À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture À l’ouverture
de surfaces Requalification Au minimum annuelle et après toute action susceptible d’impacter les conditions environnementales (pour tous les types de locaux)
Démarche qualité À définir par l’équipe Semestrielle À définir par les responsables Mensuelle
d’hygiène
Référentiels NF S90-351 [22] NF S90-351 [22] NF S90-351 [22] NF S90-351 [22] NF S90-351 [22] NF S90-351 [22]
CTIN 2002 [32] BPPH 2001 [24] , circulaire BPP 2007 [26] , BPF 2015 [27] , BPPH 2001 [24] Décision 27 octobre 2010 [25]
20 octobre 1997 [23] , AFS 2005 [33]

CTIN : comité technique national des infections nosocomiales ; BPPH : bonnes pratiques de pharmacie hospitalière ; BPP : bonnes pratiques de préparation ; BPF : bonnes pratiques de fabrication des médicaments ; AFS : association
française de stérilisation.
5
90-25-0025-A  Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé

• site de prélèvement (service, code de géolocalisation de la pièce,

localisation exacte du point) ;
• date et heure de réalisation ;
• identité du préleveur ;
• contexte/objectif (démarche qualité, qualification, requalifica-
tion, travaux, enquête épidémiologique) ;
• existence d’un traitement de l’air, caractéristiques techniques
(flux unidirectionnel ou non unidirectionnel, classe ISO) et état
de fonctionnement ;
• nature de l’échantillon (air, surface) ;
• si air, volume prélevé, appareil et milieux de culture utilisés ;
pour les appareils, la validité de leur étalonnage ;
• si surfaces, technique (écouvillonnage ou boîte contact) et
matériel (masse, applicateur) utilisés ;
• toute information concernant les conditions de réalisation sus-
ceptible d’être utile à l’interprétation (après bionettoyage, au
repos ou en activité, hors ou en présence humaine, etc.) ;
• problèmes rencontrés lors du prélèvement ou autre information
utile à l’interprétation du prélèvement.

Figure 2. Aérobiocollecteur avec crible stérilisé.

Techniques de prélèvement
Comptage particulaire
Un compteur optique de particules est utilisé pour le comptage
des particules de l’air en fonction de leur taille. L’appareil doit
être conforme à la norme ISO 21501-4 [34] , calibré une fois par
an par un service de métrologie spécialisé et utilisé avec un cer-
tificat d’étalonnage en cours de validité, conditions nécessaires
pour valider une classe ISO, selon les normes ISO 14644-1, 2
et 3 [21, 28, 29] . Le prélèvement est réalisé par aspiration de l’air par
une pompe calibrée avec un débit déterminé, et les particules sont
mesurées une à une par un faisceau laser. La sonde du compteur
de particule est positionnée vers le haut, à hauteur de l’activité,
en suivant le plan d’échantillonnage.

Aérobiocontamination
La contamination microbiologique de l’air est évaluée de façon
active à l’aide d’un aérobiocollecteur dont la fonction est d’aspirer
l’air et de récupérer les particules viables qui seront mises en évi-
dence par culture. Ce dispositif de prélèvement doit être conforme
à la norme ISO 14698-1 [30] : débit de 100 litres par minute per-
mettant de prélever 1 m3 d’air en dix minutes (volume suffisant Figure 3. Boîte de Petri mise en place dans l’aérobiocollecteur.
pour mettre en évidence des micro-organismes avec un niveau de
contamination faible, et pas trop élevé pour éviter le dessèche-
ment de la gélose), avec une vitesse d’impaction permettant de
piéger les particules de taille supérieure à 1 micron tout en garan-
tissant leur viabilité (< 20 m/s). L’appareil est calibré une fois par
an en service de métrologie spécialisé et utilisé avec un certificat
d’étalonnage en cours de validité. Le prélèvement s’effectue tête
de l’appareil vers le haut, à hauteur de l’activité, en suivant le
plan d’échantillonnage. Le volume d’air prélevé est fonction de
la classe particulaire du local : 1 m3 en classes ISO 5, 6, 7, et 200 à
500 litres en classe ISO 8.
Les appareils habituellement utilisés en établissements de santé
collectent les micro-organismes par impaction directe sur un
milieu de culture : un volume d’air déterminé est aspiré en
flux régulier et canalisé vers la surface d’une gélose à travers un
crible (tête perforée le plus souvent en inox ou en polycarbonate)
(Fig. 2 à 4). Les critères de choix d’un aérobiocollecteur [30] sont
la facilité de bionettoyage, la possibilité de stériliser les cribles,
l’autonomie, et la présence d’une télécommande ou d’un départ
différé, permettant à l’opérateur de sortir de la pièce à prélever et
de limiter l’influence de sa présence sur l’aérobiocontamination.
Il existe d’autres dispositifs actifs utilisant la filtration de l’air à tra-
vers une membrane de gélatine, ou le barbotage en milieu liquide, Figure 4. Aérobiocollecteur en fonctionnement.
mais ils ne sont pas utilisés en pratique courante hospitalière.
La sédimentation consiste à recueillir les micro-organismes sur
une gélose ouverte pendant un temps donné ; elle correspond à d’une surface pendant un temps d’exposition donné (unité for-
un prélèvement passif ne permettant pas de récupérer la totalité mant colonie [UFC]/unité de surface/unité de temps). Elle est
des particules viables (vitesse de sédimentation fonction de leurs préconisée pour les contrôles dans les enceintes de stockage des
taille et poids), ni de ramener le résultat à un volume défini. Cette endoscopes thermosensibles [35] et les isolateurs [27] pour lesquels
méthode évalue le risque de biocontamination par voie aérienne les aérobiocollecteurs ne sont pas utilisables ; le temps d’ouverture

6 EMC - Biologie médicale

 Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé  90-25-0025-A
Figure 5. Prélèvement de surface par boîte contact avec masse.
Figure 6. Applicateur pour prélèvement de surface par boîte contact.
Figure 7. Positionnement de la boîte contact dans l’applicateur.
Figure 8. Prélèvement de surface par boîte contact avec applicateur.
de la boîte de Petri doit être adapté pour éviter le dessèchement
de la gélose.
Contamination des surfaces
Technique par empreinte sur milieu gélosé
Les micro-organismes cultivables sont récupérés par
l’application standardisée (surface, temps et pression) d’un
milieu gélosé sur la surface à prélever. Les boîtes de gélose
« contact » (milieu gélosé convexe dans des boîtes rondes de
25 cm2 ) sont préférées aux lames gélosées (dont l’application
est plus difficile à standardiser) pour la détermination de la flore
totale, mais celles-ci peuvent être utilisées pour des recherches
spécifiques. Une pression uniforme et constante est appliquée
pendant quelques secondes, par exemple 25 g/cm2 pendant dix
secondes [30, 36] . Elle est obtenue par utilisation d’une masse et
d’un chronomètre (Fig. 5) ou d’un applicateur (Figs. 6 à 8). Il
ne doit y avoir aucun mouvement circulaire ou linéaire lors du
prélèvement. Cette technique est adaptée aux surfaces planes,
lisses et sèches, et permet d’obtenir un résultat quantitatif s’il est
standardisé.
Technique par écouvillonnage
La récupération des micro-organismes cultivables peut être
réalisée en frottant la surface à prélever avec un écouvillon sté-
rile en fibres (naturelles ou synthétiques), en mousse ou en
EMC - Biologie médicale
Figure 9. Schéma de prélèvement de surface à l’écouvillon.
Figure 10. Prélèvement d’une grille de reprise par écouvillonnage.
nylon floqué. L’écouvillon est sorti de son fourreau protecteur,
humidifié par un liquide stérile (eau, sérum physiologique ou
diluant-neutralisant) [30] , et passé sur la surface à prélever en stries
parallèles rapprochées en le faisant tourner, puis avec des stries
perpendiculaires aux premières (Fig. 9), en respectant un angle
de 45◦ et avec une pression constante. Il est possible de définir le
nombre précis de passages de l’écouvillon sur la surface et d’utiliser
un gabarit (stérilisable ou désinfectable) pour délimiter une zone
standard entre 20 et 100 cm2 [36] . Le prélèvement par écouvillon-
nage est adapté à des surfaces irrégulières (Fig. 10), non planes,
difficiles d’accès, ou plus grandes que celle des boîtes contact,
et à des recherches de micro-organismes spécifiques (recherche
de champignons filamenteux ou enquêtes épidémiologiques par
exemple). Les résultats sont qualitatifs ou semi-quantitatifs (par
utilisation de gabarits).
D’autres dispositifs par essuyage humide (éponges, compresses,
carrés d’essuyage) permettent de prélever de plus grandes surfaces.
La technique de lavage/rinçage n’est pas utilisée habituellement
à l’hôpital.
Méthodes indirectes de détection des micro-organismes
L’adénosine triphosphate (ATP) est un composé énergétique
présent dans toutes les cellules vivantes (eucaryotes et proca-
ryotes). Le principe de la méthode d’ATP-métrie consiste à doser
l’ATP par bioluminescence, en le considérant comme un indi-
cateur de l’activité métabolique des micro-organismes présents
dans l’échantillon prélevé. L’activation d’un complexe lucifé-
rine/luciférase entraîne une émission de lumière proportionnelle à
la quantité d’ATP présente dans les cellules vivantes, microbiennes
ou non. Cette technique de mise en évidence de cellules présentes
sur les surfaces n’est donc pas toujours corrélée avec les résultats
des prélèvements microbiologiques, d’autant plus que la présence
de résidus de produits détergents ou désinfectants peut interfé-
rer avec la réaction enzymatique [37] . Néanmoins, l’ATP-métrie
pourrait être utilisée dans les établissements de santé pour éva-
luer la qualité globale du bionettoyage [38] même si, actuellement,
cette technique sert surtout dans l’industrie agroalimentaire pour
vérifier l’absence de salissures.
D’autres méthodes sont décrites (cytométrie en flux, épifluo-
rescence, polymerase chain reaction, puces à acide désoxyribonu-
cléique [ADN]) qui ne sont pas utilisées en routine à l’hôpital.
7
90-25-0025-A  Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé
Figure 11. Étuis de transport pour boîtes contact et boîtes de Petri.
Figure 12. Positionnement de boîtes contact dans l’étui de transport.
Organisation
Le préleveur respecte les procédures du secteur à contrôler,
notamment concernant l’accès au site, l’hygiène des mains,
l’habillage, et la désinfection du matériel utilisé pour les prélève-
ments. Les prélèvements d’air se font de préférence hors présence
humaine avec déclenchement retardé ou à distance ; si le préle-
veur reste présent, il doit se placer près d’une bouche de reprise.
Dans une même pièce, les prélèvements d’air sont réalisés en pre-
mier, avant les prélèvements de surface. L’empreinte sur milieu
gélosé et l’écouvillonnage peuvent être utilisés de façon complé-
mentaire lors des contrôles de la contamination de surface. Quelle
que soit la technique utilisée, il est de bonne pratique de passer
sur la surface concernée une lingette ou une compresse imprégnée
de détergent-désinfectant ou d’alcool après le prélèvement pour
ne pas laisser de résidus de milieu de culture et d’humidité.
Conditions de transport et délai
d’acheminement
Les conditions de transport des prélèvements microbiologiques
de l’environnement doivent à la fois assurer la survie des micro-
organismes recueillis et éviter tout risque de contamination
externe [30] . L’ouverture accidentelle des boîtes de milieux de
culture (prélèvement d’air et boîtes contact) est prévenue en les
scotchant, en les emballant dans du film plastique, ou en les
plaçant dans des étuis en plastique préformé spécifiques à cette
utilisation (Fig. 11, 12). Les boîtes sont transportées couvercle vers
le bas (pour diriger la condensation sur le couvercle), à tempéra-
ture ambiante (pas de réfrigération), et le transport avant prise en
charge au laboratoire ne doit pas excéder 24 heures.
Les écouvillons, protégés par leur fourreau, sont transportés
rapidement au laboratoire à température ambiante pour éviter la
dessiccation. Si leur délai d’acheminement est supérieur à quatre
heures, sans dépasser 24 heures, ils sont réfrigérés à 5 ± 3 ◦ C.
La traçabilité des conditions de transport est assurée pour garan-
tir la validité des résultats à rendre. Les échantillons sont identifiés
individuellement et accompagnés de leur fiche de prélèvement
complétée.
 Analyses
Comptage particulaire
Le comptage particulaire ne nécessite pas d’analyses
complémentaires au laboratoire car il s’agit d’une mesure
immédiate. Les valeurs moyennes de comptage et la classification
qui en découle sont données directement par l’appareil.
8 EMC - Biologie médicale
Prélèvements d’air et de surfaces
Milieux de culture
Les milieux de culture et les conditions d’incubation sont choi-
sis en fonction des micro-organismes à rechercher. En général, des
milieux de culture pauvres non sélectifs type trypticase soja (TS)
ou plate count agar (PCA) [22] sont utilisés pour le dénombrement
de la flore mésophile totale (bactéries et champignons), auxquels
peuvent être associés des milieux spécifiques pour la recherche
des champignons filamenteux (gélose à l’extrait de malt ou gélose
Sabouraud glucosé, avec ou sans antibiotiques). Dans le cas de la
recherche d’un micro-organisme spécifique (enquête épidémiolo-
gique), des milieux sélectifs peuvent être utilisés.
Les boîtes contact contiennent des neutralisants des produits
détergents-désinfectants (Tween 80, lécithine, L-histidine, etc.)
pour éviter les faux-négatifs par persistance de résidus actifs. Des
liquides diluants-neutralisants peuvent être utilisés pour les pré-
lèvements par écouvillon.
Conditions d’incubation
Les boîtes ensemencées par aérobiocollecteur et les boîtes
contact sont mises en incubation sans traitement supplémen-
taire. Les écouvillons sont déchargés sur un milieu de culture,
directement ou après dilution si on prévoit un nombre élevé de
micro-organismes. Un enrichissement en bouillon est possible [39]
pour une recherche ciblée dans un cadre d’enquête épidémiolo-
gique.
L’incubation recommandée pour recherche de flore mésophile
totale (bactéries et champignons filamenteux) est en général de 5
à 7 jours à 30 ± 2 ◦ C [22] , avec des variantes de 2 à 5 jours pour les
bactéries seules [30] , de 3 à 5 jours pour la stérilisation [33] , et de 2
à 5 jours à 30–35 ◦ C pour la thérapie cellulaire et les banques de
tissus [25] .
La recherche spécifique de champignons filamenteux s’effectue
à 22 ± 2 ◦ C pendant 5 à 7 jours. Si une première lecture est posi-
tive avant ce délai, il est conseillé de ne pas réincuber le milieu
car la dissémination des spores de la culture pourrait fausser le
dénombrement final par l’apparition de nouvelles colonies. Cer-
tains référentiels recommandent une incubation de 20 à 25 ◦ C [25] ,
20 ± 2 ◦ C [26, 27] , ou 25 ± 1 ◦ C [33] .
La température et le temps d’incubation sont adaptés en cas de
recherche d’un micro-organisme particulier.
 Lecture et interprétation
des résultats
Lecture et expression des résultats
Pour le comptage particulaire, l’appareil restitue immédiate-
ment le nombre de particules d’une taille donnée (0,5 microns par
exemple) par mètre cube d’air pour chaque point de prélèvement,
et peut éventuellement donner aussi la classe ISO.
Pour les contrôles microbiologiques, un dénombrement des
colonies bactériennes et fongiques est réalisé sur chaque milieu de
culture au terme de la période d’incubation. Les résultats quanti-
tatifs sont exprimés en UFC par volume ou par surface :
• UFC/500 litres ou UFC/m3 , pour un prélèvement d’air par aéro-
biocollecteur ;
• UFC/surface exposée/durée d’exposition, pour un prélèvement
d’air par sédimentation ;
• UFC/25 cm2 , UFC/écouvillon, ou UFC/surface du gabarit, pour
les surfaces.
Une identification est réalisée en cas de suspicion de micro-
organisme pathogène (entérobactéries ou staphylocoque doré,
champignon type Aspergillus par exemple), de flore monomorphe,
ou de recherche d’un micro-organisme particulier, et le résultat
qualitatif est restitué en termes de présence ou absence de celui-ci.
Référentiels et interprétation
En routine, l’objectif n’est pas de diagnostiquer une conta-
mination mais plutôt d’identifier un dysfonctionnement des
 Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé  90-25-0025-A
Tableau 8.
Niveaux cibles des résultats des prélèvements d’air et de surfaces.
Type de ZEM Air - classe ISO Air - classe microbiologique
(UFC/m3 )
Au repos En activité Au repos
Salle d’intervention, chambre de 5 ≤1
patient immunodéprimé
7 (6) ≤ 10
Locaux ISO 8 8 ≤ 100
Stérilisation (locaux de 8 ≤ 100
conditionnement et de sortie
d’autoclave)
Pharmacotechnie A 5 5 <1b
Thérapie cellulaire B 5 7 ≤ 10 b
Banques de tissus
C 7 8 ≤ 100 b
D 8
UFC : unité formant colonie ; CTIN : comité technique national des infections nosocomiales ; BPPH : bonnes pratiques de pharmacie hospitalière ; BPP : bonnes pratiques
de préparation ; BPF : bonnes pratiques de fabrication des médicaments ; AFS : association française de stérilisation.
a
Avec absence de micro-organismes pathogènes et de champignons filamenteux.
b
Avec absence de champignons filamenteux.
procédures de maîtrise qu’il faut résoudre avant qu’il ne soit
révélé par la survenue d’une infection. Lors de l’élaboration de
la stratégie de surveillance de l’environnement, les modalités
d’interprétation des résultats sont établies au préalable, en amont
de la réalisation des prélèvements. Elles s’appuient sur la défini-
tion de trois niveaux [22, 30, 31] :
• niveau cible : niveau défini par l’utilisateur ou les référentiels
comme objectif des contrôles, vers lequel on doit tendre dans
les conditions normales de fonctionnement ;
• niveau d’alerte : niveau donnant une première alerte en cas
de dérive par rapport aux conditions normales, entraînant une
vérification des conditions de réalisation des prélèvements et la
mise en œuvre de mesures correctives ou préventives ;
• niveau d’action : niveau qui, s’il est dépassé, déclenche une
action immédiate avec évaluation du maintien de l’utilisation,
recherche des causes et action corrective pour permettre de
revenir rapidement au niveau cible.
Les normes indiquent des niveaux cibles pour le comptage par-
ticulaire [21, 22, 28] et l’aérobiocontamination [22] des ZEM au repos et
hors présence humaine, et des recommandations [32] en proposent
pour les surfaces (Tableau 8). Les référentiels de pharmacotech-
nie [26, 27] , stérilisation [24, 33] , thérapie cellulaire et banques de
tissus [25] fournissent également des niveaux cibles en activité
pour l’air et les surfaces (Tableau 8). La mise en évidence de
micro-organismes potentiellement pathogènes tout comme celle
de champignons filamenteux constituent des non-conformités.
La présence de ces derniers sur les surfaces traduit leur présence
antérieure dans l’air.
En fonction de l’analyse de risque, pour une zone donnée, les
résultats des prélèvements sont à comparer avec les niveaux cibles
attendus. Une analyse graphique de résultats successifs (cartes de
contrôles) est intéressante pour étudier l’évolution des résultats
au fil du temps [31] . Les prélèvements d’air et de surfaces réali-
sés de façon concomitante permettent d’avoir une vision globale
de la contamination environnementale d’une ZEM. Dans tous les
cas, l’interprétation et l’utilisation de résultats non conformes
nécessitent une collaboration entre l’équipe d’hygiène, les ser-
vices techniques et les utilisateurs de la ZEM concernée afin d’en
explorer les causes potentielles.
Dans le cadre d’une enquête épidémiologique, l’objectif des
prélèvements est l’identification d’un réservoir environnemental,
mis en évidence par l’isolement du micro-organisme recherché.
Les prélèvements en cours de travaux ont pour but de vérifier
l’efficacité des mesures de prévention mises en place par l’absence
de mise en évidence de champignons filamenteux dans les ZEM à
protéger.
Limites et précautions
La réalisation de contrôles microbiologiques de l’air et des sur-
faces impose d’être conscient de leurs limites et des précautions
EMC - Biologie médicale
Surfaces Référentiels
(UFC/25 cm2 )
En activité Au repos En activité
≤5a NF S 90-351 [22]
CTIN 2002 [32]
≤5a
≤5a
≤ 200 b
≤5a ≤ 15 NF S 90351 [22]
BPPH 2001 [24]
AFS 2005 [33]
<1 BPP 2007 [26]
≤5 BPPH 2001 [24]
≤ 25 BPF 2015 [27]
Décision du
≤ 200 b ≤ 50 27 octobre 2010 [25]
avec lesquelles il convient d’interpréter leurs résultats. En effet, ces
contrôles ne permettent pas d’apprécier la contamination micro-
bienne réelle de l’environnement, du fait de plusieurs facteurs :
• les micro-organismes présents font partie d’écosystèmes
complexes au sein desquels leurs états physiologiques varient
(viables, « stressés ») ;
• suivant les conditions de culture (milieu de culture, tempéra-
ture, durée d’incubation, atmosphère), ces micro-organismes
sont ou ne sont pas cultivables ;
• les techniques de prélèvement ne permettent la récupération
que d’une fraction de la population microbienne, du fait de son
organisation en biofilm au niveau des surfaces, de la variabilité
du « décrochage » suivant le type de surface, et de l’effet direct
de l’impaction sur la viabilité des micro-organismes de l’air.
Le rendement (nombre de micro-organismes cultivés/nombre
de micro-organismes réellement présents) est donc variable sui-
vant les techniques de prélèvement et de culture utilisées [40]
(< 50 % pour les boîtes contact). Cette absence de reproductibilité
peut être limitée par la standardisation des méthodes, imposée par
la réglementation ou proposée par les normes ou d’autres référen-
tiels. Hors enquête épidémiologique, les résultats des contrôles de
l’environnement réalisés dans un établissement avec les mêmes
méthodes présentent une utilité dans le suivi des ZEM, mais il n’est
pas possible d’effectuer des comparaisons entre établissements [41] .
De plus, ces contrôles ne représentent que les points tests pré-
cis au niveau desquels ils ont été effectués, et leurs résultats sont
différés du fait de délai de pousse des micro-organismes. Il ne faut
donc pas les considérer comme des certificats de conformité, ni
les rattacher à un risque infectieux immédiat (sauf exception),
mais les utiliser comme des indicateurs qualité, au même titre que
les indicateurs techniques (surpression) et que les évaluations des
pratiques (bionettoyage, comportements).
 Conduite à tenir
La conduite à tenir en fonction des résultats obtenus est à définir
en amont de la réalisation des prélèvements. Elle comporte :
• l’évaluation du risque pour le patient ou l’activité, conduisant à
des mesures correctives ou préventives immédiates (arrêt d’une
activité par exemple) ;
• l’analyse des causes, avec l’identification d’anomalies de fonc-
tionnement concernant la technique (centrale de traitement
d’air), les locaux (étanchéité, travaux), le bionettoyage (pro-
duits, procédures), l’organisation (circuits), le personnel (tenue,
comportement), les prélèvements (matériel, contamination de
laboratoire), d’où découleront des mesures correctives et pré-
ventives ;
• les procédures de mise en place et de levée des restrictions
d’activité (réalisation et conformité de nouveaux contrôles) ;
• et les modalités de communication interne et externe.
9
90-25-0025-A  Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé
“ Points essentiels
• Chaque établissement de santé élabore sa stratégie de
surveillance environnementale en fonction d’une analyse
de risque.
• Les contrôles particulaires et microbiologiques de l’air
ne sont justifiés en routine qu’en environnement maîtrisé.
• Les méthodes de contrôle de l’aérobiocontamination et
de la contamination de surface doivent être standardisées.
• Les résultats d’aérobiocontamination et de contamina-
tion de surfaces sont des indicateurs qualité de maîtrise
d’un processus (traitement d’air, bionettoyage).
Déclaration de liens d’intérêts : les auteurs déclarent ne pas avoir de liens
d’intérêts en relation avec cet article.
 Références
[1] Vonberg RP, Gastmeier P. Nosocomial aspergillosis in outbreak set-
tings. J Hosp Infect 2006;63:246–54.
[2] Alberti C, Bouakline A, Ribaud P, Lacroix C, Rousselot P, Leblanc T,
et al. Relationship between environmental fungal contamination and
the incidence of invasive aspergillosis in haematology patients. J Hosp
Infect 2001;48:198–206.
[3] Caballero MJ, Mongardon N, Haouache H, Vodovar D, Ben Ayed I,
Auvergne L, et al. Aspergillus mediastinitis after cardiac surgery. Int J
Infect Dis 2016;44:16–9.
[4] Das I, Lambert P, Hill D, Noy M, Bion J, Eliott T. Carbapenem-resistant
Acinetobacter and role of curtains in an outbreak in intensive care units.
J Hosp Infect 2002;50:110–4.
[5] Bourigault C, Corvec S, Bretonnière C, Guillouzouic A, Crémet
L, Marraillac J, et al. Investigation and management of multidrug-
resistant Acinetobacter baumannii spread in a French medical intensive
care unit: one outbreak may hide another. Am J Infect Control
2013;41:652–3.
[6] Best EL, Fawley WN, Parnell P, Wilcox MH. The potential for airborne
dispersal of Clostridium difficile from symptomatic patients. Clin Infect
Dis 2010;50:1450–7.
[7] Creamer E, Shore AC, Deasy EC, Galvin S, Dolan A, Walley N,
et al. Air and surface contamination patterns of methicillin-resistant
Staphylococcus aureus on eight acute hospital wards. J Hosp Infect
2014;86:201–8.
[8] Clark RP, de Calcina-Goff ML. Some aspects of the airborne transmis-
sion of infection. J R Soc Interface 2009;6:S767–82.
[9] Paton S, Thompson KA, Parks SR, Bennett AM. Reaerosolization of
spores from flooring surfaces to assess the risk of dissemination and
transmission of infections. Appl Environ Microbiol 2015;81:4914–9.
[10] Kramer A, Schwebke I, Kampf G. How long do nosocomial pathogens
persist on inanimate surfaces? A systematic review. BMC Infect Dis
2006;6:130.
[11] Hirai Y. Survival of bacteria under dry conditions from a view-point
of nosocomial infection. J Hosp Infect 1991;19:191–200.
[12] Oxford J, Berezin EN, Courvalin P, Dwyer DE, Exner M, Jana LA,
et al. The survival of influenza A(H1N1)pdm09 virus on 4 household
surfaces. Am J Infect Control 2014;42:423–5.
[13] Grass G, Rensing C, Solioz M. Metallic copper as an antimicrobial
surface. Appl Environ Microbiol 2011;77:1541–7.
[14] Espinal P, Marti S, Vila J. Effect of biofilm formation on the survival of
Acinetobacter baumanii on dry surfaces. J Hosp Infect 2012;80:56–60.
[15] Weber DJ, Rutala WA. Role of environmental contamination in the
transmission of vancomycin-resistant enterococci. Infect Control Hosp
Epidemiol 1997;18:306–9.
[16] Lerner A, Adler A, Abu-Hanna J, Meitus I, Navon-Venezia S, Carmeli
Y. Environmental contamination by carbapenem-resistant Enterobac-
teriaceae. J Clin Microbiol 2013;51:177–81.
[17] Weber DJ, Rutala WA, Kanamori H, Gergen MF, Sickbert-Bennett
EE. Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: frequency of hospital
room contamination and survival on various inoculated surfaces. Infect
Control Hosp Epidemiol 2015;36:590–3.
10
[18] Lidwell OM, Elson RA, Lowbury EJ, Whyte W, Blowers R, Stanley
SJ, et al. Ultraclean air and antibiotics for prevention of postoperative
infection. A multicentre study of 8,052 joint replacement operations.
Acta Orthop Scand 1987;58:4–13.
[19] Heinemann S, Symoens F, Gordts B, Jannes B, Nolard N. Environmen-
tal investigations and molecular typing of Aspergillus flavus during an
outbreak of post-operative infections. J Hosp Infect 2004;57:149–55.
[20] Nseir S, Blazejewski C, Lubret R, Wallet F, Courcol R, Durocher
A. Risk of acquiring multidrug-resistant Gram-negative bacilli from
prior room occupants in the intensive care unit. Clin Microbiol Infect
2011;17:1201–8.
[21] NF EN ISO 14644-1 (2016) - Salles propres et environnements maî-
trisés apparentés - Partie 1 : classification de la propreté de l’air.
[22] NF S 90-351 (2013) - Établissements de santé - Zones à environne-
ment maîtrisé - Exigences relatives à la maîtrise de la contamination
aéroportée.
[23] Circulaire DGS/VS 2-DH/EM 1/EO 1 n◦ 97-672 du 20 octobre 1997
relative à la stérilisation des dispositifs médicaux dans les établisse-
ments de santé.
[24] Arrêté du 22 juin 2001 relatif aux bonnes pratiques de pharmacie
hospitalière. Annexe : Bonnes pratiques de pharmacie hospitalière.
[25] Afssaps. Décision du 27 octobre 2010 définissant les règles de bonnes
pratiques relatives à la préparation, à la conservation, au transport, à la
distribution et à la cession des tissus, des cellules et des préparations
de thérapie cellulaire. 2010.
[26] Ministère de la Santé, de la Jeunesse et des Sports ; Agence française
de sécurité sanitaire des produits de santé. Bonnes pratiques de prépa-
ration. BO n◦ 2007/7bis.
[27] Ministère des Affaires sociales et de la Santé. Les Bonnes Pratiques de
Fabrication des substances actives et des médicaments à usage humain
(BPF partie I). BO n◦ 2015/12 bis.
[28] NF EN ISO 14644-2 (2016) - Salles propres et environnements maîtri-
sés apparentés - Partie 2 : surveillance du maintien des performances
de la salle propre pour la propreté particulaire de l’air.
[29] NF EN ISO 14644-3 (2006) - Salles propres et environnements maî-
trisés apparentés - Partie 3 : méthodes d’essai.
[30] NF EN ISO 14698-1 (2004) - Salles propres et environnements maîtri-
sés apparentés - Maîtrise de la biocontamination - Partie 1 : principes
généraux et méthodes.
[31] NF EN ISO 14698-2 (2004) - Salles propres et environnements maîtri-
sés apparentés - Maîtrise de la biocontamination - Partie 2 : évaluation
et interprétation des données de biocontamination.
[32] CTINILS, Ministère de la Santé. Surveillance microbiologique de
l’environnement dans les établissements de santé. Air, eaux et surface;
2002.
[33] AFS. Maîtrise et contrôles d’environnement en stérilisation; 2005.
[34] ISO 21501-4 (2007) -Détermination de la distribution granulométrique
- Méthodes d’interaction lumineuse de particules uniques - Partie 4 :
compteur de particules en suspension dans l’air en lumière dispersée
pour espaces propres.
[35] NF EN 16442 (2015) - Enceinte de stockage à atmosphère contrôlée
pour endoscopes thermosensibles traités.
[36] NF ISO 18593 (2004) - Microbiologie des aliments - Méthodes hori-
zontales pour les techniques de prélèvement sur des surfaces, au moyen
de boîtes de contact et d’écouvillons.
[37] Shama G, Malik D J. The uses and abuses of rapid bioluminescence-
based ATP assays. Int J Hyg Environ Health 2013;216:115–25.
[38] Huang Y, Chen Y, Chen M, Cheng A, Hung I, Wang J, et al. Comparing
visual inspection, aerobic colony counts, and adenosine triphosphate
bioluminescence assay for evaluating surface cleanliness at a medical
center. Am J Infect Control 2015;43:882–6.
[39] Meunier O, Hernandez C, Piroird M, Heilig R, Steinbach D, Freyd
A. Prélèvements bactériologiques des surfaces : importance de l’étape
d’enrichissement et du choix des milieux de culture. Ann Biol Clin
2005;63:481–6.
[40] Ougier-Diebolt M. Les prélèvements microbiologiques des surfaces
en milieu hospitalier : revue bibliographique, enquête de pratiques et
étude de rendement. [thèse], Faculté de Pharmacie de Bordeaux. 10
avril 2013.
[41] Hartemann P, Blech MF, Simon L. Les contrôles microbiologiques de
l’environnement hospitalier. Rev Fr Lab 1997;291:43–7.
Pour en savoir plus
Aspec. La Biocontamination – salles propres, environnements maîtrisés et
zones de confinement. Octobre 2008.
EMC - Biologie médicale
 Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques des surfaces dans les établissements de santé  90-25-0025-A

Société française d’hygiène hospitalière. « Risque infectieux fongique et http://www.boutique.afnor.org/normes-produits-edition

travaux en établissements de santé – Identification du risque et mise
en place de mesures de gestion ». Hygiènes. Mars 2011.
Société française d’hygiène hospitalière. « Qualité de l’air au bloc opératoire
et autres secteurs interventionnels ». Hygiènes. Mai 2015.
CClin Sud-Ouest. « Surveillance microbiologique de l’environnement dans
les établissements de santé - Guide de bonnes pratiques ». 2016
http://www.sf2h.net
Vidéos sur les prélèvements d’air et de surfaces du CClin Sud-Ouest :
https://www.cpias-nouvelle-aquitaine.fr/outils videos/prelevements-
denvironnement-surfaces/
https://www.cpias-nouvelle-aquitaine.fr/outils videos/prelevements-
denvironnement-air/

F. Le Gallou (florence.legallou@chu-nantes.fr).
D. Lepelletier.
Service de bactériologie-hygiène, Unité de contrôles microbiologiques, Institut de biologie, CHU de Nantes, 9, quai Moncousu, 44093 Nantes cedex 01,
France.

Toute référence à cet article doit porter la mention : Le Gallou F, Lepelletier D. Contrôles particulaires et microbiologiques de l’air et contrôles microbiologiques
des surfaces dans les établissements de santé. EMC - Biologie médicale 2017;12(4):1-11 [Article 90-25-0025-A].

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