REPUBLIQUE DU MALI

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UNIVERSITE DES SCIENCES TECHNIQUES ET TECHNOLOGIES DE BAMAKO
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FACULTE DE PHARMACIE
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RAPPORT DE FIN DE STAGE
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STAGE D’ENTOMOLOGIE

Etudiants Sous la Supervision de :

LADEKPO OSSE Junior Yacouba DIARRA
KOUTADO François
DIALLO Djenebou Niagale
HODZI Kofi Agbetiafa
DEMBELE Yacouba
DIALLO Rokia

Session du : 24 Juillet au 18 Août 2023

PLAN
INTRODUCTION

I- A PROPOS DU MRTC : SPECIALE ENTOMOLOGIE

II- RECAPITULATIF DES QUATRES SEMAINES DE STAGE
1- PREMIERE SEMAINE
2- DEUXIEME SEMAINE
3- TROISIEME SEMAINE
4- QUATRIEME SEMAINE

CONCLUSION
INTRODUCTION

Eu égard à sa vocation de centre de formation, la Faculté de Pharmacie du Mali

organise pluri annuellement des sessions de stage dans le souci d’offrir une
formation de qualité et de cultiver l’excellence en milieu universitaire. Ainsi sur
une durée de 30 jours diverses activités ont été menées au MRTC
spécifiquement au service d’entomologie afin de remplir un certain nombre
d’objectifs.

OBJECTIFS :

 Découvrir le MRTC
 Se familiariser à l’entomologie et à son service du MRTC
 Découvrir et connaître le moustique : Sa vie, sa structure, son cycle, son
rôle de vecteur et les maladies qu’il peut transmettre
 Découvrir et connaître le Plasmodium : Sa vie, sa structure, son cycle, son
rôle de vecteur et les maladies qu’il peut transmettre
 Découvrir les principes de base pour l’élevage des moustiques en
laboratoire
 Connaître le rôle de l’entomologie dans la lutte antivectorielle
 I- MRTC : SPECIALE ENTOMOLOGIE

C’est l’un des plus grands centres de recherche en Afrique, avec une histoire
d’excellence dans la recherche axée sur l’épidémiologie et la biologie des
vecteurs et des parasites du paludisme et d’autres maladies à transmission
vectorielle, telles que la leishmaniose, la filariose, les arbovirus et les maladies
transmises par les tiques.

L’équipe du Mali a rejoint Target Malaria en 2012, hébergé par le Centre de

Recherche et de Formation sur le Paludisme (MRTC) de la Faculté de
Médecine, Pharmacie et Odontostomatologie (FMPOS) de l’Université des
Sciences Techniques et Technologies de Bamako.

L'équipe de Target Malaria au Mali travaille en collaboration avec le Centre de

Recherche et de Formation sur le Paludisme (MRTC), basé à l'Université des
Sciences Techniques et Technologies de Bamako et dirigé par le Dr Mamadou
Coulibaly.

Les locaux sont divisés en trois unités :

- L’insectarium pour l’élevage des moustiques (ici Anopheles knowlesi)

- Le laboratoire pour la dissection et la lecture des produits issus
- Le bureau pour la saisie des données et autres travaux administratifs
 II- RÉCAPITULATIF

1- PREMIÈRE SEMAINE

Elle débuta le Lundi 24 Juillet 2023 à 8h00. Ce jour fut d’abord présenté le
laboratoire, ses enceintes et dispositifs, les encadrants et pour les retardataires
furent faites les formalités pour obtenir un badge de visiteur afin de faciliter
notre accès au laboratoire. Également fut distribué un document qui servirait de
base à tout le reste du stage : Manuel de Formation à l’Entomologie du
Paludisme. Il contenait entre autres de nombreux termes techniques à maîtriser
pour la semaine suivante :

Anthropogène : Se dit de tout effet en rapport avec l’activité humaine dans la

nature ou résultant de celle-ci.

Anticorps : Protéines particulières (appelées immunoglobulines) qui sont

employées par le système immunitaire pour reconnaître et neutraliser des
substances étrangères à l’intérieur du corps, telles que les virus, les bactéries ou
parasites.

Bionomie : Quand il s’agit de moustiques, ce terme fait référence aux propriétés

biologiques, écologiques et comportementales d’une espèce ou d’une population
ayant une influence sur sa capacité à agir en tant que vecteur de maladie.

Chromosome polytène : Chromosomes géants formés par plusieurs copies du

matériel génétique dont ils se composent. Ces chromosomes géants ne sont
observés que dans certaines cellules d’insectes. Du fait de leur taille, les
chromosomes polytènes sont très utiles dans une analyse cytogénétique.
Cytogénétique : Etude de la structure et de la fonction des chromosomes
(structures héréditaires portant les gènes qui déterminent le sexe et les
caractéristiques d’un organisme).

Quand la cytogénétique est appliquée à l’identification et à l’étude des rapports

entre des espèces biologiques, on l’appelle cytotaxonomie.

Dimorphisme sexuel : Différences caractéristiques entre mâles et femelles de la

même espèce.

Epidémiologie : Etude de la distribution, des profils et des déterminants des

phénomènes liés à la santé (les maladies par exemple) des populations, et la
façon dont elle est appliquée à la lutte contre les maladies et les problèmes de
santé.

Espèces biologiques : Groupe de populations ou d’organismes au sein d’une

population, qui se croisent ou qui peuvent se croiser dans la nature et produire
une descendance fertile.

Estivation : État végétatif, d’inactivité et d’endormissement auquel ont recours

les organismes pour survivre aux élévations de température extrêmes et aux
conditions arides imposées par la saison sèche.

Morphologie : Fait référence à la taille, la forme et la structure d’organismes ou

aux parties du corps (internes et externes) qui les constituent. Le terme anatomie
est souvent utilisé à la place de morphologie, du fait qu’elle étudie l’organisation
et de la structure d’organismes.

Mutation génétique : Ce terme fait référence à tout changement dans la

séquence nucléotidique de l’ADN d’un gène donné. Ces changements peuvent
entraîner des modifications de la protéine pour laquelle code le gène. On appelle
mutants les organismes portant la mutation, par opposition aux individus de type
sauvage.

Parité : Nombre de fois qu’une femelle a donné naissance. On qualifie de pare

un moustique femelle qui a pondu des œufs au moins une fois sans sa vie. On
appelle nullipares les femelles qui n’ont pas encore pondu d’œufs.

Spiracles : Orifices circulaires présents dans le corps des insectes qui permet la
pénétration de l’air dans le corps.

Les états de réplétion des moustiques :

- A jeun : Moustique n’ayant pas encore pris de repas sanguin.

- Gorgé : Moustique ayant pris un repas sanguin.
- Semi-gravide : Moustique ayant pris un repas sanguin et l’ayant à moitié
digéré.
- Gravide : Moustique ayant pris un repas sanguin et l’ayant entièrement
digéré.

Le reste des jours de cette semaine fut consacré à l’apprentissage de la collecte

des moustiques, les différents stades de vie du moustique et comment les
distinguer, l’apprentissage de la routine d’un insectarium (protocoles, partage
des œufs, collecte des nymphes, nutrition des larves et confection de jus sucré
pour les moustiques) ai si que le rôle de chacune de ses étapes polythènes ; à
l’exception du Jeudi qui est le jour dédié à la Table Ronde.
Figure : Différents stades du cycle biologique des Anophèles

Parlant de Table Ronde, il s’agit d’une rencontre entre tous les acteurs du
service d’entomologie du MRTC, du Directeur aux stagiaire où tous les acteurs
discutent et débattent de à propos d’un thème énonce peu avant. Le thème de
celui de cette semaine était : « La recherche scientifique : Utilisation et
Importance. »

Au cours de cette séance très enrichissante furent exposés et expliqués les

différents types de recherche scientifique, leurs buts et intérêts, leur
complémentarité et leur ordre ; la recherche scientifique fut aussi présentée dans
sa visée humanitaire et sociétale avant enfin d’avoir des conseils des chers
docteurs sur comment un jeune pharmacien doit se préparer s’il veut emprunter
cette voie et quelles sont les qualités qu’il doit cultiver.
 2- DEUXIÈME SEMAINE

Elle débuta le Lundi matin par une séance de cours généreusement dispensée par
le Dr Daman sur l’Arthropodologie générale, suivie de cours sur l’entomologie
médicale, les culicidés et ensuite un dernier plus spécifique aux Anophèles et
Aèdes.

Fut étudié sur ces derniers les critères de comparaison inter-espèces comme
intra-espèce entre les différents sexes, les maladies qu’elles véhiculent, leurs
spécificités et une introduction à d’autres notions développées plus tard, tout au
long de la semaine :

Cycle sporogonique : Partie du cycle biologique du parasite du paludisme qui

se déroule à l’intérieur du moustique. Il commence quand le moustique prélève
du sang d’un hôte humain (ou autre vertébré) infecté. A l’intérieur de l’estomac
du moustique, les stades sexués du parasite (gamétocytes) se transforment en
gamètes mâles et femelles, qui s’accouplent pour former un œuf (ookinète) qui
va se fixer sur la paroi cellulaire de l’estomac. L’ookinète se transforme en
oocyste dans la face externe de la paroi stomacale. A l’intérieur de l’oocyste, un
processus de division cellulaire (méiose) produit des sporozoïtes. L’oocyste
éclate alors et libère les sporozoïtes qui vont envahir les glandes salivaires. Une
fois dans les glandes salivaires, les sporozoïtes seront transmis à un hôte humain
au cours du prochain repas de sang du moustique. Il existe des antipaludiques
qui ciblent des stades particuliers du parasite durant le cycle sporogonique.
Cycle gonotrophique :

- Portion exo érythrocytaire

Le cycle commence par la piqûre de l’anophèle femelle qui va inoculer à

l’homme en même temps que la salive les formes infestantes appelées
sporozoïtes : ces sporozoïtes ne restent que très peu dans le sang circulant soit au
maximum une demi-heure. Très rapidement ils gagnent le foie et pénètrent dans
l’hépatocyte où ils se cachent sous le nom de cryptozoites. Ces derniers qui sont
des éléments arrondis à un noyau vont se nourrir, grossir ; leur noyau va se
diviser plusieurs fois et en une semaine environ on aura un schizonte mature. Au
stade

mature, chaque noyau de schizonte va s’entourer de fragment cytoplasmique

donnant ainsi un élément renfermant de milliers de noyaux entourés de
cytoplasme. Chaque élément ainsi constitué s’appelle un mérozoïte. A ce stade
le corps bleu va éclater pour libérer les mérozoïtes qui vont gagner le sang
circulant. Ceci se fait de façon progressive et peut durer un mois ce qui explique
la récidive des accès palustres. Pour les espèces ovale et vivax, certains
sporozoïtes qui ont pénétré dans les hépatocytes sains se transforment en
éléments endormis appelés hypnozoites. Ces derniers après un délai variable qui
dépend de la souche et de l’espèce plasmodiale vont se réveiller et être à
l’origine d’accès de reviviscence ou de rechute. Ces hypnozoites n’ont pas été
mis en évidence avec P. falciparum et P. malariae. Il n’y a donc pas d’accès de
réviviscence avec ces derniers mais. Les périodes pendant lesquelles il n’y a pas
de parasites dans le sang correspondent à la période d’incubation de la maladie.
 - Portion endo érythrocytaire

Les mérozoïtes dans le sang circulant vont pénétrer par effraction dans les
globules rouges et à ce niveau, le mérozoïte prend une nouvelle forme : le
trophozoïte qui est un élément arrondi avec un noyau coloré en rouge et un
cytoplasme en bleu avec une vacuole nutritionnelle incolore. Le trophozoïte
va se nourrir aux dépens de l’hémoglobine. Son noyau va grossir et se diviser
de même que son cytoplasme et les éléments à plusieurs noyaux s’appellent
les schizontes endo érythrocytaires. A ce stade on a la formation de pigment
malarique encore appelé hémozoine. Au stade de rosace (schizonte mature ou
corps bleu) l’hématie fragilisée va éclater pour libérer des mérozoïtes et on
peut noter que l’éclatement des rosaces est synchrone de l’apparition de la
fièvre et des autres signes cliniques du paludisme. L’hémozoine qui va être
libéré en même temps que les mérozoïtes est une substance pyrogène. Les
mérozoïtes libérés vont parasiter de nouveaux globules rouges. Chaque cycle
schizogonique endo érythrocytaire dure 48 h pour P. falciparum, ovale et
vivax, 72 h pour P. malariae. Après plusieurs cycles schizogoniques endo
érythrocytaires, certains mérozoïtes qui ont pénétré dans les hématies saines
se transformeront en élément à potentiel sexuel : les gamétocytes mâles et les
gamètes femelles qui seuls peuvent évoluer chez l’anophèle femelle.

Il est à savoir que les médicaments gamétocytocides tels que la primaquine tuent
les gamétocytes, alors que les sporontocides tuent les sporozoïtes.

Sporozoïte : Etape du cycle de vie du parasite du paludisme chez le moustique

qui est capable de produire une infection chez les hôtes humains (ou autres
vertébrés). C’est donc le stade du parasite du paludisme qui est infectant pour
l’homme. Les sporozoïtes se trouvent dans les glandes salivaires du moustique.
La paroi cellulaire externe du sporozoïte est couverte d’une protéine spécifique à
ce stade et appelée protéine circumsporozoïtaire. Cette protéine est celle que
l’on recherche en laboratoire pour déterminer si un moustique est infectant (s’il
est capable de transmettre le parasite du paludisme au moment de la piqûre) ou
non.

Le Jeudi de cette semaine eut lieu la Table Ronde avec pour sujet de discussion :
« Utilisation et importance des réseaux sociaux dans la recherche
scientifique ».

Il y fût évoqué le rôle important des réseaux sociaux dans la vulgarisation des
connaissances issues de la recherche scientifique, mais surtout l’importance pour
un scientifique chercheur d’avoir une identité virtuelle afin de favoriser
l’interconnexion des chercheurs mais également de donner une visibilité à nos
recherches.

3- TROISIEME SEMAINE

Elle fut essentiellement une semaine pratique. Après une leçon sur l’anatomie du
moustique et une autre sur le protocole de dissection des moustiques le premier
jour, tout le reste de la semaine fût dédié à la pratique de la dissection des
femelles Anophèles consistant en une extraction de leurs viscères abdominaux à
la lampe biloculaire.

- Matériels
 Loupe biloculaire
 Pince
 Mini seringue
 Une solution de Mercurochrome pour immersion, eau à défaut
 Pipette pasteur
  Anophèles femelle asphyxiée
 Blouse
 Gants
- Protocole
 Etouffer au préalable les moustiques
 Brancher la loupe Biloculaire et la régler
 Prendre une lame
 La placer sous la loupe et y placer une goutte d’eau ou de
mercurochrome prélevée à l’aide d’une pipette pasteur
 Prendre un anophèle asphyxié par la trompe à l’aide de la pince et
la placer sur la goutte, abdomen vers le haut
 Immobiliser le moustique à l’aide de l’aiguille de la seringue en la
posant sur son thorax
 Pour la dissection de l’estomac : A l’aide de la pince, saisir le 3 e
segment de l’abdomen (en comptant de la fin vers le début, cuticule
exclu) et tirer tout en maintenant l’immobilité par la seringue.
Seront ainsi extraits les tubes de Malpighi puis l’estomac, qui
seront séparables par simple cisaillement à l’aide de la pince
 Pour la dissection des ovaires : A l’aide de la pince, saisir le 1er
segment de l’abdomen (en comptant de la fin vers le début, cuticule
exclu) et tirer tout en maintenant l’immobilité par la seringue.
Seront ainsi extraits les ovaires puis les tubes de Malpighi et pour
finir l’estomac, qui seront séparables par simple cisaillement à
l’aide de la pince
- Intérêt :
  Pour la dissection de l’estomac : l’estomac, pour détecter les
oocystes du parasite du paludisme
 Pour la dissection des ovaires : les ovaires, pour évaluer l’âge
physiologique de la femelle (par ex. l’état de parité) ;

Il n’y eût pas de Table Ronde ce Jeudi-là.

4- QUATRIEME SEMAINE

Elle fut dédiée au perfectionnement de la technique de dissection et à

l’approfondissement des notions théoriques plutôt vues au cours du stage.
L’intérêt de la dissection fut exposé plus en profondeur avec en prime un bref
exposé sur un projet phare de ce laboratoire : le vaccin PFS230. Fut aussi
expliqué le maintien d’une colonie dans l’insectarium

Résume succinct :

 Tout d’abord on collecte les anophèles gravides dans la nature et

 Les mettre dans un tube avec un peu d'eau numéroté contenant un papier
blanchâtre puis
 Mettre le tube dans un endroit sombre
 Après 2 jours on collecte les oeuf.et puis chaque femelle pour la lecture
chromosomique a l'aide d’une PCR permettant de distingue les femelles
de forme s et m ainsi nous conserverons les œufs de la forme que nous
voulons pour la colonie. Ce maintien a pour but de Fournir des espèces
pour le test.

Ce maintien a pour but de Fournir des espèces pour les tests.

CONCLUSION

Bien que court, chaque seconde de ce stage fut rentabilisée. Par sa dualité
théorique et pratique, il permit une assimilation aisée rapide et aisée des
différentes notions abordées, ainsi que la naissance d’une passion pour la
recherche pour les jeunes scientifiques que nous sommes. De grands
remerciements sont adressés à tout le corps encadrant pour cette opportunité.