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A LINSERM

Contraception : chacun son tour !

Le vieux rve fministe de lgalit masculine et fminine devant la contraception enfin ralisable ? Cest ce que le RU 486 nous permet desprer. Cet antiprogestatif na dcidment pas fini de nous tonner
elon les derniers travaux de lquipe du Pr Etienne-Emile Baulieu (Unit 33 de lInserm), raliss en collaboration avec le service de biologie de lhpital de Bictre et le CECOS (Centre dtude et de conservation du sperme), le RU 486 exercerait un effet de premire importance sur les spermatozodes et serait un outil potentiel de contraception masculine rvolutionnaire. Lentre du calcium dans les spermatozodes, absolument indispensable pour leur mobilit et leur capacit de fcondation, se dclenche sous linfluence de la progestrone contenue dans le liquide folliculaire qui entoure lovocyte ; celle-ci agit trs rapidement en augmentant le taux de calcium intracellulaire, accroissant la mobilit du spermatozode et provoquant la raction acrosomiale, cest--dire lultime modification de la tte du spermatozode avant sa pntration dans lovocyte. En soumettant, en tube essai, douze spermes humains laction de la progestrone et du RU 486 (ainsi que de quelques analogues de structure de la mme famille) seuls ou en combinaison, il est apparu que : q le RU 486, utilis seul, freine immdiatement, de faon transitoire et dose-dpndante, larrive du calcium dans la cellule, diminuant du mme coup sa mobilit et la rendant incapable de fconder lovocyte ; q le RU 486 contrecarre compltement leffet dactivation acrosomique de la progestrone sur les sperPhototake CNRI matozodes. La rapidit daction du RU 486, ainsi que sa totale rversibilit, laissent augurer quil sagit l dun mcanisme mettant en jeu un rcepteur membranaire du spermatozode (sur lequel il exerce son antagonisme bien connu qui lui confre sa proprit abortive). Leffet fonctionnel de la progestrone sur le spermatozode rsulte galement problablement aussi dune liaison avec un rcepteur de surface non encore identifi. Le RU 486 et la progestrone utilisent-ils le mme rcepteur membranaire ? La question est pose, bien que les rsultats acquis jusquici soient davantage en faveur de sites diffrents. Compte tenu de la production quotidienne de spermatozodes (130 millions), il restera galement dmontrer que le produit agit sur lensemble des candidats la fcondation de luf. Pour rpondre toutes ces questions, il sera ncessaire de passer du tube lanimal (rat, cobaye et singe), en cherchant mettre au point un driv du RU 486 dpourvu de ses effets hormonaux, cest-dire ne possdant aucune affinit vis--vis de ses rcepteurs habituels : quelques ana-

logues dj tests semblent agir sur la mobilit du sperme. Enfin, toutes ces tapes une fois franchies, lpreuve dcisive avant toute application chez lhomme, consistera vrifier leffet inhibiteur du RU 486, ou de son analogue, sur la fcondation, in vitro, dun ovule par un spermatozode humain (toute prcaution thique tant prise, bien entendu). Les mthodes de contraception actuellement proposes aux hommes comportent un certain nombre dinconvnients : depuis la strilisation chirurgicale (vasectomie), tout fait dfinitive, en passant par le blocage hormonal de la spermatogense, long stablir (plusieurs semaines) comme rverser, et qui provoque des effets secondaires importants, pour arriver au prservatif dont les problmes dutilisation sont bien connus (malgr ses vertus protectrices contre les MST). Bref, aucun moyen nest compltement satisfaisant. Si un comprim, absorb quelques instants avant un rapport sexuel, pouvait tre la fois totalement et rapidement efficace ainsi quimmdiatement rversible, les hommes se trouveraient enfin face une responsabilit comparable celle qui pse depuis si longtemps sur les femmes... Un espoir, aussi bien pour les pays industrialiss que pour ceux du tiers monde. s

Des cellules germinales en culture : une avance scientifique majeure

Les cellules de la ligne germinale (prcurseurs des cellules reproductrices), en charge de notre patrimoine gntique, vont-elles bientt pouvoir nous livrer leurs secrets ? La voie est ouverte pour les cellules sexuelles mles, lobstacle technique qui sopposait jusquici ltude de leur diffrenciation hors de lorganisme venant dtre lev.
quipe de lInserm (U273, dirige par M. Franois Cuzin). Cette quipe est parvenue, pour la premire fois, mettre en culture des cellules sexuelles souches de souris mles et suivre leur diffrenciation progressive en cellules sexuelles matures, les spermatozoides. Comment ? En tablissant une coculture des cellules germinales sur une ligne de cellules de Sertoli immortalises, obtenue grce la fabrication de souris transgniques exprimant un oncogne dans leurs cellules testiculaires. Ce systme de culture va permettre non seulement daccder aux trfonds des mcanismes molculaires de cette ligne de cellules, mais laisse galement entrevoir de multiples applications techniques et
N 5 1994 A.I.M.

mdicales. Ces travaux sont publis dans la revue Cell du 3 dcembre 1993. La maturation des cellules de la ligne germinale assure une fonction cruciale dans le maintien de la diversit humaine. A lorigine de cette diversit, un mcanisme complexe, la miose, qui rduit de moiti le nombre initial de chromosomes de la cellule(1) tout en recombinant au hasard les gnes pour chaque chromosome. Au final de cet vnement : chaque cellule sexuelle est gntiquement unique. En charge de notre patrimoine gntique et responsable de la diversit des espces, la diffrenciation germinale se situe ainsi au cur de nombreuses questions de sant, voire de socit. Quels sont les risques datteinte de la ligne germinale par des agents toxiques de type polluants chimiques et radioactifs ? Quelle est lincidence des traitements thrapeutiques telles que les chimiothrapies anticancreuses et antivirales ? Quelle est la cause de certaines strilits masculines ? Autant de questions qui demeurent sans rponse faute dun outil permettant dtudier, hors de lorganisme, les mcanismes intimes de la diffrenciation germinale, qui restent aujourdhui encore largement mystrieux. Les cellules sexuelles ne peuvent vivre et se dvelopper seules : elles sont sous la haute dpendance des cellules de Sertoli qui assurent leur isolement, leur nutrition, voire leur protection, mais aussi dirigent et

coordonnent les diffrentes tapes de leur maturation. Etablir une culture germinale exige donc la mise en culture pralable des cellules de Sertoli. Mais tous les efforts dans ce sens se sont rvls dcevants, ces cultures dgnrant rapidement avant de disparatre. Quelle parade trouver ? Les chercheurs de lInserm ont choisi linsertion dans le gnome des cellules de Sertoli, dun oncogne, lantigne grand T du virus polyome : un oncogne connu pour immortaliser les cellules sans pour autant modifier leurs proprits intrinsques. La cellule de Sertoli, ainsi modifie, peut se diviser linfini tout en restant fonctionnelle. La transfection directe du gne dans la cellule tant trs peu efficace, les chercheurs ont tabli une famille de souris transgniques qui expriment loncogne, chez le mle, dans les cellules testiculaires (germinales et de Sertoli). Ainsi, ont pu tre tablies des lignes de cellules de Sertoli portant loncogne. Mises en coculture, des cellules germinales de souriceaux mles immatures gs de 8 jours(2) ont pass avec succs les tapes successives de la maturation (miose) : les chercheurs ont pu observer, au bout de 10 12 jours, des cellules sexuelles matures dont le contenu en ADN a effectivement t rduit (cellules haploides) et possdant les caractristiques morphologiques classiques de ces cellules. Ainsi, pour la premire fois, un mo-

dle dexprimentation de la diffrenciation in vitro est disponible. Couple avec les mthodes performantes de la gntique molculaire, cette nouvelle technique va permettre lidentification des gnes et donc des protines impliques dans le mcanisme complexe de la miose. Elle va offrir galement la possibilit de sattacher aux effets des produits toxiques sur la ligne germinale et de dvelopper des moyens de protection efficace de la ligne germinale et de la fertilit. Certains points restent encore bien mystrieux. Les spermatozodes issus de ce type de culture auront-ils gard leur pouvoir fcondant ? Le transfert de gne sera-t-il techniquement possible dans les cellules germinales ? Ces questions, encore bien loin dtre rsolues, laissent toutefois entrevoir une ouverture sur la transgnse. Aussi, paralllement lacquisition des connaissances et aux avances techniques et mdicales majeures que peut apporter ce travail, se poseront bien videmment dans lavenir des questions dordre thique auxquelles la socit se doit de rflchir. s
(1) Toutes les cellules comportent normalement deux copies du gnome, dorigines respectivement paternelle et maternelle. La miose rduit le contenu en ADN du noyau une seule copie. La situation de double copie sera reconstitue au moment de la fcondation, spermatozode et ovule amenant chacun une copie. (2) 8 jours : le processus de miose na pas encore commenc, les cellules sont au stade diplode. Les premires mioses dbutent partir du 9e jour. Les premires cellules haplodes sont observables au bout du 18e jour.

A SUIVRE... A LINSERM Cancer du sein : un signal dalarme des mtastases osseuses ?

ans la qute dun marqueur prdictif des mtastases osseuses dans le cancer du sein, les travaux de Mme Zhor Bouizar (U 349 Inserm, dirige par Mme Marie-Christine de Vernejoul) balisent la piste dun peptide, le PTHrP (Parathyroid Hormone Related Peptide). Une forte expression du gne de ce peptide dj responsable du syndrome dhypercalcmie maligne(1) serait, en effet, le signe annonciateur de la survenue ultrieure de mtastases osseuses. Quelques tudes avaient montr la prsence de ce peptide dans un grand nombre de cancers du sein, cette expression tant plus frquente chez les patientes dveloppant par la suite des mtastases osseuses. La production du PTHrP ne serait-elle pas lie la capacit des cancers du sein stablir et crotre dans los ? Difficile de rpondre avec les techniques utilises jusquici. Pour pousser plus loin linvestigation, Zhor Bouizar sest arme de la Polymerase Chain Reaction (PCR) pour identifier et quantifier le taux dexpression du gne du PTHrP(2) dans des tumeurs primaires de 38 patientes normocalciques traites au centre Ren Huguenin entre 1981 et 1989 et suivies pendant au moins cinq ans. Les chantillons issus dune banque de tumeurs ont t slectionns en trois groupes : patientes sans rechute ni mtastases, patientes avec dveloppement ultrieur de mtastases dans les tissus mous, patientes avec mtastases osseuses. Lexpression du PTHrP a t retrouve, et cela pour la premire fois, dans toutes les tumeurs, excepte une. Nanmoins, le taux diffre selon le type de tumeurs. En effet, si le niveau dexpression du PTHrP est sensiblement identique dans le groupe des patientes sans mtastase et dans celui avec mtastases dans les tissus mous, il se rvle en revanche beaucoup plus lev (environ 3 fois) pour les femmes ayant dvelopp par la suite des tumeurs osseuses. Ainsi, une forte expression du gne du PTHrP dans la tumeur primaire pourrait bien tre un facteur prdictif de mtastases osseuses chez des femmes atteintes dun cancer du sein. Si ces rsultats sont confirms par de plus vastes tudes prospectives, ils devraient permettre denvisager la mise en route dessais thrapeutiques pour le traitement spcifique et prventif des mtastases osseuses chez les femmes risque. s
(1) Ce syndrome se caractrise notamment par un taux lev de calcium dans le sang accompagn dune perte progressive de la masse osseuse. (2) Isolement de lARN messager, synthse de lADN complmentaire, puis amplification par la PCR.

Tabac : attention au stress des coronaires !

La cigarette, dj coupable de participer au dveloppement de lathrosclrose, la thrombogense et lobstruction des vaisseaux, entre autres mfaits, sattaquerait galement directement lendothlium des artres coronaires, perturbant ainsi gravement une de ses fonctions essentielles, la vasodilatation de la paroi artrielle.
ela pourrait expliquer en partie pourquoi, chez de jeunes (30, 40 ans) et grands fumeurs chroniques, coronographiquement normaux, ni hypertendus ni hyperlipidmiques, ne prsentant aucun signe dathrosclrose, surviennent les infarctus du myocarde les plus graves. Quelle est donc lacti!on exerce par le tabac chez de tels individus, pourvus de coronaires parfaitement normales angiographiquement ? Les chercheurs (Alain Nitenberg, U 251 de lInserm dirige par Claude Amiel et le service dexploration fonctionnelle de lhpital Bichat) ont fait le pari que la rponse se situait au niveau des cellules endothliales qui jouent un rle trs important dans les variations de diamtre des artres coronaires. A ltat normal, ces cellules sont sources de plusieurs facteurs intervenant dans la vasomotricit, en particulier lun dentre eux autrefois appel EDRF (Endothelium Derived Relaxing Factor), a t identifi rcemment comme tant le fameux NO (monoxyde dazote), qui peut tre synthtis sous leffet stimulant dun neurotransmetteur, lactylcholine (voir p. 19). Lendothlium, de par sa position anatomique stratgique entre le sang circulant et la musculature lisse vasculaire, est donc une cible particulirement sensible tous les facteurs de risque cardiovasculaires, dont peut-tre le tabac... Afin dvaluer une ventuelle perturbation de la fonction endothliale lie la cigarette, un protocole comportant des injections de doses croissantes dactycholine directement dans les coronaires a t appliqu 10 sujets (lors de coronographies de contrle) : 5 fumeurs impnitents(1) (4 hommes et 1 femme gs de 33 38 ans) mtre de lartre chez les non fumeurs, on observe une rduction de 26,5 % de la lumire artrielle pouvant aller jusqu 42 %, donc une trs importante vasoconstriction. Or, le muscle lisse ntant pas en cause(2), cest bien lendothlium qui est atteint. Le fumeur nest donc plus physiologiquement protg des effets de la vasoconstriction provoque par les motions, les efforts physiques, le stress, puisque le NO endothlial nassure plus la rgulation ncessaire. Voici donc un effet du tabac dont on ignore encore comment il sexerce : intervient-il directement au niveau de la synthse de NO, de sa libration et de quelle manire ?
Photothque Inserm - Nitenberg A. PR

Coronarographie dun jeune fumeur. A g., tat basal, dr., aprs injections de doses croissantes dactylcholine, on observe une vasoconstriction au lieu dune vasodilatation.

nayant pas fum depuis 12 heures et 5 non fumeurs (2 hommes, 3 femmes dge comparable) : chez les non fumeurs, on observe une augmentation du diamtre de lartre, proportionnelle la concentration dactylcholine injecte. En revanche, chez les fumeurs, non seulement il ny jamais vasodilatation, mais encore, une dose qui provoque une augmentation de 12,5 % du dia-

Autant de questions poses, dont les rponses pourront sans doute permettre dviter quelques uns des accidents cardiaques parmi les plus graves et damliorer notre connaissance des mcanismes vasomoteurs des gros vaisseaux. s
(1) Ayant consomm en moyenne 39,7 cigarettes par jour pendant plus de 10 ans. (2) Le muscle rpond en effet normalement une substance agissant spcifiquement sur les fibres musculaires lisses.

Une drgulation de la thermognse lorigine de lobsit ?

La thermognse est un intressant mcanisme sur lequel nombre de nutritionnistes se penchent. Les travaux raliss par Martine Laville (U 197 Inserm dirige par R. Mornex) jettent un clairage nouveau sur ce phnomne en montrant quil serait impliqu dans lorigine de lobsit.
a thermogense se traduit, dans les suites dun repas, par laugmentation de la chaleur mise par le corps, soulignant que les premires ractions biochimiques de la digestion seffectuent mais que ce mcanisme se drgule parfois et lquilibre subtil qui existe entre apport alimentaire et dpense dnergie se rompt. Chez les obses, une de ces drgulations se traduit par une baisse de la thermogense lie lalimentaN 5 1994 A.I.M.

tion. Que se passe-t-il alors ? Lorganisme stocke de manire plus ou moins importante lnergie, qui saccumule alors, participant peut-tre ainsi la prise de poids. Cette baisse est-elle une cause ou une consquence de lobsit ? Le dbat est ouvert entre les nutritionnistes. En utilisant un test de tolrance au glucose, la thermogense due au glucose a t mesure par lquipe de lInserm dans trois groupes de femmes : Groupe 1 : 12 femmes obses depuis plusieurs annes. Ces femmes taient, par ailleurs, insulinorsistantes (pathologie dont les causes biologiques sont encore mal connues mais qui existe chez la plupart des obses, et traduit lincapacit de linsuline jouer un rle hypoglycmiant). Groupe 2 : 12 femmes sans antcdents dobsit, en cours dascension pondrale (ayant pris brusquement 10 kg dans lanne). Ces femmes ne prsentaient

pas de signe dinsulinorsistance. Groupe 3 : 8 femmes minces. Les deux premiers groupes ont prsent un dfaut totalement identique de thermogense. Ce dfaut tait aussi important dans le groupe 2 des femmes qui taient en cours dascension pondrale que dans le groupe 1, o les sujets taient installs dans lobsit avec son cortge de troubles mtaboliques (comme linsulinorsistance). Cette comparaison tend donc montrer que le dlfaut de thermogense nest pas secondaire aux autres troubles de lobsit (notamment linsulinorsistance), mais antrieur dans la chronologie des vnments et pourrait tre prsent pendant des mois ou des annes avant le dclenchement de la prise de poids. Dautres arguments, provenant dtudes effectues par ailleurs sur danciens obses vont dans ce sens puisque ces personnes conservent ce

dfaut en dpit dune normalisation de leur poids. La cl des difficults que rencontrent les obses pour quilibrer leur poids trouve peut-tre l une explication, dans ce dfaut de gestion nergtique. Mais quel niveau se situe ce problme et vers quel systme orienter les recherches ? Les chercheurs lyonnais proposent une piste intressante : le systme nerveux sympathique ; le rle de celui-ci dans la thermogense est bien connu, comme le montrent par exemple les effets de la cafine, et de lphdrine : ces stimulants de lactivit sympathique provoque chez les obses une augmentation de la thermogense et une diminution de poids. La piste de la thermogense est ouverte. Recherche suivre... s