Université des Fréres Mentouri Constantine Facute des Sciences de la Nature et de la Vie Département de Microbiologie TD 3 Génie génétique (L3 Microbiologie 2014/2015) Exercice 1 B Site de restriction N Enzymede —/ ADN & insérer restiction = = — Ligase Figure 1 : Les diverses fonction dun plasmide En vous référant 4 la figure ci-dessus, od le gine A sat a sélectiomner les bactéries transformées et le gene Pest inactivé lors de insertion, énoncez, dans les cas de pRR322 et pUCI9, a quoi correspondent A et B. Exereice 2 Cotto figure représente la carte physique de pBR322. Enumérez, a la vue de cette carte, les principales raisons qui font que ce plasmide est si utilisé ce Pr. Mahmoud KITOUNIUniversité des Freres Mentouri Constantine Facune des Sciences de la Nature et de la Vie Département de Microbiologie Exercice 3 Proposez par un schéma une stratégie d’insertion d’un ADN¢ double brin au site Hind III d'un plasmide quelesnque par la méthode des adaptateurs. Exercice 4 La figure suivante donne sur gel d’agarose coloré au bromure d’éthidinm la migration du plasmide pSC101 lingarisé, et celle de trois fragments d’ADN ribosomique de Xenopus coupés par EcoRI. Comment interprétez-vous la structure des cing plasmides recombinants de cette figure ‘ 58 — tt le a2 a _ 39 — i> is > (C= done de as pSC 101 linéarisé ; 2- ADN ribosomique de Xenopus coupés par coRI :3- pil; 4 pl2 ; S- pl8 ; 6 pla, 7- pl5 : a- pSC 101 linéarisé; b- fragments de restriction 1, 2 &3 de ["ADN ribosomique de Xenopus produits par digestion BeoRI ; c- divers plasmides recombinants Gres par ZcoRL. Exereice 5 On souhaite étudier le géne de Salmonella homologue au géne neo aE, coli qui a été cloné dans un autre laboratoire et qui confére la résistance & la nécmycine. Pour cela, on essaie de cloner au site BcoRT du vecteur plasmidique pBR330 (voir schéma) un fragment EcoRI- EcoRI d ADN génomique de Salmonella portant le gene homelogue au géne neoA. Résistance d fe “( origine de réplication Resistance & la streptomycin 1. Clonage. Proposez un protocole de clonage et indiquez comment sélectionneriez-vous les clones recombinants ? Pr. Mahmoud KITOUNIUniversité des Fréres Mentouri Constantine Facute des Sciences de la Nature et de la Vie Département de Microbiologie 2. Analyse par restriction d'un plasmide recombinant. Un des plasmides recombinants contenant le gene neod (aopelé pBN1) est digéré par les enzymes de restriction BamlIl et ZcoRI. Aprés migration et séparation des fragments d'ADN sur gel dagarose puis coloration au bromure déthidium, on obtient les profils de restriction suivants: rt Donner la carte de restriction du plasmide recombinant pBN1 Pr. Mahmoud KITOUNI