TP technologie de la matire grasse

& R.G

1 Objectifs
Dterminer la concentration dacide ascorbique dans un jus et de benzoate de
sodium dans une eau gazifie par HPLC.

2 Principe
Les composs sparer (soluts) sont mis en solution dans un solvant. Ce
mlange est introduit dans la phase mobile liquide (luant). Suivant la nature des
molcules, elles interagissent plus ou moins avec la phase stationnaire dans la
colonne.
Une fois le mlange est inject, les molcules vont tre lues plus ou moins
rapidement selon leur affinit avec la phase stationnaire (polaire ou apolaire), en
sortie de colonne grce un dtecteur UV des pics sont obtenues avec un temps
de rtention et une aire de pic bien spcifique.

3 Mode opratoire
3.1 Prparation de lluant
La prparation du tampon : pour une solution de 200 ml constitu de 102 ml
dacide actique et de 98 ml dactate de sodium de 0.1 M
Remarque les relations suivante ont ts appliqu :

C=

nombre de mole
V

nombre de mole=CV la masse=nombre de molela masse molaire

pourcas de l ' acide actique :

masse

Une fois le tampon prpar 67 ml d actonitrile (75% 25%)

3.2 Prparation des solutions de rfrence

Concentration mg.ml-1
0.8
0.60
0.4
0.2
Volume prlev de solution0.8
0.6
0.4
0.2
mre (ml)
Volume deau distill (ml)
0.2
0.4
0.6
0.5
Volume total (ml)
1
1
1
1
partir de deux solutions (eau distille acide ascorbique et eau distille benzoate
de sodium) de concentration 1mg.ml-1 les concentrations suivantes sont
obtenues : 0.8 mg.ml-1, 0.6 mg.ml-1 ,0.4 mg.ml-1, 0.2 mg.ml-1 comme suite :

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3.3 Prparation des chantillons

Lchantillon est filtr sur une membrane Millipore pour viter le colmatage,
dgazer par agitation pendant quelques minutes et est inject la prparation
obtenue.

3.4 Conditions chromatographiques :

Colonne : Eurospher C18 (5*3.9mm)

Dtecteur : UV (254 nm)
Temprature : 30C
Dbit de lluant : 1mL/min
Phase mobile : actonitrile/tampon pH4.5 (25/75)

3.5 Rsultats et discutions

3.5.1 Acide ascorbique
Jus 1 = jus avec des conditions de conservation optimales.
Jus 2 = le pack a t ouvert depuis longtemps.
Concentratio
20
40
60
80
Jus 1
Jus 2
n acide
ascorbique
Aires des
10940.
20777.
28277.
34035.
13857.
12499.
pics
811
279
816
332
166
311
Temps de
2.35
rtention
Le temps de rtention de lacide ascorbique : 2.35 min qui reste constant
indpendamment de la concentration donc les pics obtenus sont superposs.

Courbe d'talonnage acide ascorbique

0tan14a576914
0tan4a57564
0tan25a574225

f(x) = 45878.36x
R = 0.99

0tan15a572815
0tan6a57156

aire des pics

Linear (aire des pics)

0tan25a570125
0tan16a568716
0tan6a56736
0tan28a566028
0tan28a566028 0tan28a566028 0tan29a566029

Figure 1 : courbe dtalonnage de lacide ascorbique

2

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Jus 1 =

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Aire de pic de l ' chantillons

2=0.302 mg/ml
45878

Aire de pic de l ' chan tillons

=0.272 mg/ml .
Jus 2 =
45878
Le jus 1 contient plus dacide ascorbique que le jus 2 car le jus 2 et plus
susceptible dtre oxyde sur au contact avec lair la lumire favorisent
l'oxydation et puis lacide ascorbique est un antioxydant il soxyde le premier.
Pour le jus le CODEX STAN 192-1995 ne limite pas lutilisation de lacide
ascorbique et mentionne BPF
3.5.2 Benzoate de sodium
Concentration acide
ascorbique
Aires des pics

20

40

60

80

2314.4
35

4691.4
18

6925.5
12
2.29

81433.6
78

990.4
05

Temps de rtention

Le temps de rtention du benzoate de sodium: 2.29 min qui reste constant

indpendamment de la concentration donc les pics obtenus sont superposs.

Courbe d'talonnage du benzoate de sodium

0tan24a568224
0tan29a567929
0tan3a56763

f(x) = 11597.79x
R = 1

0tan6a56736
0tan12a567112

aire des pics

Linear (aire des pics)

0tan15a566815
0tan19a566519
0tan24a566224
0tan28a566028
0tan28a566028 0tan28a566028 0tan29a566029

La concentration de lacide ascorbique dans le jus dorange frais =

Aire de pic de l ' chantillons

2=0.17 mg/ml
11598

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Norme CODEX STAN 192-1995 : 600 mg/l

Lchantillon prsente une concentration en benzoate de sodium de 170 mg/l ce
qui respecte bien les normes.