FACULTE

De
PHARMACIE

Tutorat UE2 2011-2012 Cytologie - Fiche n1 complter

Microscopie
Microscopie optique Microscopie lectronique
Coupe Extemporane Frottis vivante MET x 500 000 MEB x 100 000
Coupe Cryofracture Cryodcapage
Fixation Aldhydes (formol, Une dessiccation Double fixation On refroidit lchantillon -196C Double fixation
Inactivation des glutaraldhyde) ou peut suffire. glutaraldhyde + post (azote liquide) + cryoprotecteurs glutaraldhyde + post
Enzymes, tat sels oxygns de NB : MGG inclut fixateur OSO4 fixateur OSO4
proche du vivant mtaux lourds des fixateurs de
(KMnO4) faible efficacit
(mthanol)
Dshydratation Bains dOH de degrs
croissants
Puis solvant
organique Sublimation

Inclusion Procd physique Mthode chimique

rversible paraffine irrversible : rsine
poxy
Coupe Microtome Cryotome 50nm
5-10m 15m ultramicrotome

Fracture passant par les zones de

moindres rsistances
Rhydratation Dparaffin avec
solvant organique
puis ramen leau
Redonner le volume
initial avec CO2 liquide
Coloration -signaltique = topographique : reprer la forme prcise de la -vitaux (vert janus B -signaltique : aprs Ombrage mtallique : vaporisation de Ombrage mtallique
cellule et des organites les plus volumineux (rgion basophile = pour la mitochondrie, inclusion = Pt
noyau, REG, lysosomes hmatoxyline , rgion acidophile = bleu de Trypan pour le imprgnation par les
protines osine) test dexclusion) sels de mtaux lourds
-cyto-histochimiques : colorent les diffrentes substances -spcifiques : avant
chimiques de faon spcifiques inclusion
Observation Lame porte objet Enzymes = activent membrane Cytosquelette cortical Surface de lobjet
Objectif sec ou cyto-
immersion histoenzymo

Microscopes Transmission : Transmission : Transmission : Microscope invers Rflexion

Absorption Absorption Absorption objectif maximal x40
Rmission Rmission Rmission (toutes les techniques
sont applicables)
2011-2012 Tutorat UE 2 Cyto/Histo/Bio cell Fiche n 1 1/1