I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

Comparaison de l’activité antibactérienne de quelques agents chimiques

Ammonium
Quaternaire
(chlorure de benzalkonium)

86
http://www.easynotecards.com/notecard_set/32197
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Les gaz stérilisants

Utilisation - Stérilisation de produits ou objets instables à la chaleur

- Désinfection de locaux

Formes - Oxyde d'éthylène (à 20% dans CO2 + CHFCl2)

 Agent stérilisant très efficace
 Très toxique

Activité - Dénaturation des protéines et acides nucléiques

Spectre d'action - Sporicide

 Les essences naturelles

Activité - Pouvoir bactériostatique (composés phénoliques, terpéniques)

Les + utilisées - Essence d’eucalyptus : antiseptique des voies respiratoires

- Essence de girofle : désinfectant et cautérisant en chirurgie dentaire
- Essence de thym : antiseptique intestinal et respiratoire
-… 87
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

Exemple : Notice d’un spray assainissant

aux huiles essentielles

Question :
Conditions de tests par rapport aux conditions d’utilisation?
88
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

I.4- Evaluation de l'efficacité d'un agent antimicrobien

Contrôle des agents = processus complexe soumis à des règlementations

1ère phase - Test d’évaluation dans des conditions bien définies

 Vérification de l’efficacité de l’agent

 Détermination des concentrations d’utilisation + durée d’action

2ème phase - Analyse dans des conditions proches des conditions d’utilisation

 Méthode du coefficient phénol (test d’évaluation)

 Désinfectant de référence : Phénol

 Bactéries de référence : Salmonella typhi et Staphylococcus aureus

 Température du test : 20 ou 37°C

89
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Méthode du coefficient phénol

Exemple de résultats sur 1 bactérie-cible

(après incubation des sous-cultures)

Désinfectant
Dilution

Abs. de Croissance Croissance

Phénol
Dilution

PC = 320 / 160 = 2

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PowerPoint ® Lecture Slide Presentation prepared by Christine L. Case 90
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Méthode du coefficient phénol

Autre exemple de résultats sur 1 bactérie-cible

+ : Croissance; 0 : Absence de croissance

http://www.tutorsglobe.com/homework-help/microbiology/phenol-coefficient-technique-72664.aspx

91
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Méthode du coefficient phénol

Phenol coefficients for some disinfectants

(QAC)

(Composé phénolique)
(Comp. phénolique chloré)
(Comp. organomercuriel)
(Comp. organomercuriel)
(QAC)

QAC : Quaternary Ammonium Compound 92

I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Sensibilité ou non

(test sur milieux solides ensemencés  dépôt des disques  incubation)

93
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

I.4- Evaluation de l'efficacité d'un agent antimicrobien

 Méthode du coefficient phénol

 Technique d’évaluation utile

 Pb : Souches pures & Conditions contrôlées

→ Réalité : Populations complexes & Présence de matière organique

& Variations de facteurs de l’environnement

 Autres méthodes de comparaison des vitesses de destruction

de bactéries sélectionnées par ≠ agents chimiques

 Méthode des "porte-germes"

 Test sur un support = porte-germes (ex. cylindres d'acier inoxydables)

 Contamination : conditions contrôlées & espèces spécifiques

 Méthode choisie en fonction d'une situation réelle particulière

94
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

En résumé…

95
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

En résumé…

96
 BIOTECHNOLOGIES & MICROBIOLOGIE APPLIQUEE

I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

III- LA MICROBIOLOGIE ALIMENTAIRE

Source principale : Prescott’s Microbiology

Traduit chez Ed. De Boeck Université

97
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

Définitions Chimiothérapie - Agents chimiothérapeutiques (antibiotiques)

II.1- Le développement de la chimiothérapie

• Principe de base de la chimiothérapie : « Toxicité sélective » - P. Ehrlich, 1909

 Contexte :  Développement de la chimie des colorants (2nde moitié 19ème)

 Essor des colorants synthétiques

 Utilisation de colorants pour observer tissus / microorganismes

 Travaux de Ehrlich :
 Recherche de colorants aux propriétés thérapeutiques
1)- Fixation spécifique sur des pathogènes
2)- Action de destruction à forte concentration
 Rouge Trypan actif contre le trypanosome

 Essais avec des dérivés arsénicaux

 Salvarsan actif contre spirochète de la syphilis

 Concept de toxicité sélective démontré

 Essais de centaines de composés pour leur potentiel thérapeutique

= 1ère grande victoire de la chimiothérapie 98

II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

• Le sulfamide et ses dérivés (2ème étape) – G. Domagk, 1935

 Fin années 1920 - Important fabricant de matières colorantes

→ G. Domagk : utilisation possible de ces produits dans le traitement d’infections bactériennes?

 Toxicité sélective du rouge Prontosil (Domagk, 1935)

 Protection contre les streptocoques et les staphylocoques

 Activité in vivo (souris & humain) – absence d’activité in vitro

 Rouge Prontosil converti en para-aminobenzène – sulfanilamide ou sulfamide

= Véritable facteur actif (J. et T. Tréfouel, 1935)

 Synthèse du sulfamide possible en laboratoire

 Etude du sulfamide et de ses dérivés (> 5000 synthétisés en – de 10 ans)

Sulfanilamide : 1ère substance bactéricide d’usage courant

 Procédures d’analyses rigoureuses (A.M.M.)

99
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

• Les antibiotiques (3ème étape) - A. Fleming, 1929

 1877 : Pasteur et Joubert

- Pouvoir bactériostatique de certains microorganismes vis à vis d’autres

 1929 : Fleming
- Inhibition de la croissance de staphylocoques par des moisissures du genre Penicillium
- Extraits de Penicillium bactéricides et non toxiques pour les cellules animales
- Principe actif = pénicilline

 1939 : Florey et Chain

- Purification de la pénicilline
- Essais thérapeutiques : résultats spectaculaires (drogue miracle)

 2nde Guerre Mondiale : Production industrielle de la pénicilline

 1939 + 20 ans ~ : Isolement de centaines d'antibiotiques

- Source principale, les Streptomyces, bactéries filamenteuses (Voir Tableau dia suivante)
= Principaux antibiotiques encore utilisés

 Depuis 1965 : Développement d'antibiotiques semi-synthétiques

 Nouvelle définition d’antibiotiques 100
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

101
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

II.2- Les caractéristiques générales des substances antimicrobiennes

• Toxicité sélective ( niveau / dose thérapeutique et dose toxique )

• Indice thérapeutique ( rapport dose toxique / dose thérapeutique )

 Indice élevé : Inhibition fonction microbienne spécifique (ex. Pénicilline)

 Indice faible :
→ Inhibition même processus (Microorganismes / Cellules hôtes)
→ Cellules hôtes affectées par un autre mécanisme

• Effets secondaires = Effets indésirables (voir Tableau dia suivante)

→ Liés à l’effet pharmacologique (diarrhées – mycoses)
→ Non liés (allergies)

• Spectre = Champ d’efficacité (voir Tableau dia suivante)

→ Spectre étroit
 Classement / groupe microbien cible
→ Spectre large

102
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

103
II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

• Synthèse (par des microorganismes ou méthodes chimiques)

→ Antibiotiques naturels (synthétisés par bactéries ou mycètes)

→ Agents chimiothérapeutiques synthétiques (anti -bactériens, -viraux, -protozoaires)

→ Antibiotiques semi-synthétiques (naturels + groupes chimiques)

• Effets (voir Tableau dia précédente)

→ Effet –cide : variable (concentration, espèce cible)

→ Effet –statique : croissance inhibée réversiblement

 Elimination de l’infection : fonction des mécanismes de résistance propres à l’hôte

• Evaluation de l’efficacité

→ Concentration Minimale Inhibitrice (CMI) [Minimum Inhibitory Concentration (MIC)]

→ Concentration Minimale Létale (CML) ou Bactéricide (CMB) [Min. Lethal Conc. (MLC)]

Substance bactériostatique : CMB >> CMI (CMB /CMI > 32)

bactéricide : CMB /CMI > 2 -4 (32 > CMB /CMI > 2-4)
Souche tolérante à un ATB à effet -cide : CMB /CMI > 32

→ Détermination des CI50 – CI90 – CL50 [IC50 – IC90 - LC50] 104

II- LA CHIMIOTHERAPIE ANTIMICROBIENNE

→ Détermination des CI50 et CI90 : Exemple

Tiec et al. 2002. La lettre de l’infectiologue.

105
Contexte & tests préliminaires Matériels et méthodes Résultats et discussion Conclusion et perspectives

Dia oral M2 L. Kerloch

Effet du cuivre sur la croissance de TC8 CE : Concentration efficace [EC]

Test en microplaques (VNSS):

Croissance de TC8 en présence de différentes

concentrations en cuivre (7h d’incubation)
Choix des concentrations d’intérêts

Croissance de TC8 en fonction du temps et pourcentage de croissance de TC8 à 7h (pour différentes concentrations en cuivre)

Concentrations retenues : 400µM (CE25) et 700µM (CE50)

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