I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Seuil de coupure (Molecular Weight Cut Off, MWCO) : définition

= MM (Da) des plus petits solutés retenus à 90% par la membrane
dans des conditions opératoires données

Rétention (%)

Masse moléculaire (kDa)

Remarque : la rétention d’un soluté ne dépend pas uniquement de sa taille

(+ conditions hydrodynamiques et environnement physico-chimique)
53
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Cas particulier de l’osmose inverse (membrane dense)

Mécanisme = Solubilisation puis diffusion dans le matériau membranaire

http://eduscol.education.fr/rnchimie/gen_chim/triboulet/rtf/osmose_inverse.pdf

P = pression exercée
P = pression osmotique
54
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Conditions de stérilisation

Si plus petits organismes ou particules = - Bactéries  MF (membrane 0,2 µm)

- Virus, spores,  MF (membrane 0,1 µm)

mycoplasmes ou UF

- Petits virus, prions  NF

• Facteur limitant : le colmatage

 Phénomène complexe (physique, chimique, biologique)

 3 mécanismes : - Dépôt d’espèces en surface (gâteau)

- Blocage interne des pores
- Adsorption sur le matériau membranaire

 Effets négatifs : -  Flux de perméation

-  Pression
-  Fréquence de lavage
- Rétention possible de particules ≠ (perméabilité et sélectivité ≠ )

 Choix du type de membrane et taille des pores important

 Choix du mode d’opération important 55
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Modes classiques d’opération

 Mode frontal
→ Accumulation de matière en surface

→ Procédé discontinu

→ Applications en laboratoire pour petits volumes

Alimentation

Ptm

(source : thèse Benjamin Espinasse, 2003)

(Source : cours Génie des procédés. S. Laborie-Manton)

56
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Mode tangentiel
→ Réduction de la formation du gâteau de filtration

→ Procédé continu (recyclage du rétentat possible)

→ Applications en laboratoire ou échelle industrielle

Si recyclage

Alimentation

Ptm

P
(source : thèse Benjamin Espinasse, 2003)

(Source : d’après cours Génie des procédés. S. Laborie-Manton)

57
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Exemples de modules de filtration tangentielle

 Modules à fibres creuses

http://fr.spectrommlabus.c/filtration/Edge.html

http://hmf.enseeiht.fr/travaux/bei/beiere/book/export/html/1280
(J-M. Berland, 2002)
58
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Exemples de modules de filtration tangentielle

 Module spiralé

http://hmf.enseeiht.fr/travaux/bei/beiere/book/export/html/2307

59
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Avantages de la filtration dans le contrôle des microorganismes :

- Procédé sélectif

- Réalisation à température ambiante sans additifs chimiques

- Installations compactes et modulables

- Fonctionnement en continu possible

• Inconvénients :

- Colmatage des membranes

- Sélectivité imparfaite

- Durée de vie parfois limitée des membranes

60
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Cas de la centrifugation = autre procédé de séparation

 Elimination partielle des microorganismes

 Prétraitement (≡ Pré-filtration)

  Efficacité pasteurisation. Ex. : La bactofugation

• Appareil = bactofuge

• Objectif = Réduction des spores du lait (Clostridium) + bactéries

• Concentré de spores et bactéries du lait = bactofugat

61
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

Extended Shelf-Life
62
http://www.slideshare.net/GBarnes/world-dairy-summit-presentation-presentation
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

Membrane 1,4 µm et non 0,2 µm

63
http://www.slideshare.net/GBarnes/world-dairy-summit-presentation-presentation
Pourquoi une microfiltration à > 0,2 µm

64
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

65
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

66
http://www.slideshare.net/GBarnes/world-dairy-summit-presentation-presentation
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

67
http://www.slideshare.net/GBarnes/world-dairy-summit-presentation-presentation
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Applications de la filtration

 Stérilisation de l’air  Masques – bouchons de coton

 Hottes de sécurité biologique à flux laminaire

ou P.S.M.

Hotte de sécurité biologique à flux laminaire (PSM de type II)

HEPA : High Efficiency Particulate Air 68
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

PSM : Poste de Sécurité Microbiologique Publié par Denis Etienne

http://slideplayer.fr/slide/457944/

69
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Stérilisation de solutions

• Laboratoires de recherche ou d’analyse

• Industries pharmaceutiques et biotechnologiques (MF et UF)

 Stabilisation / Clarification / Concentration de solutions

• Industrie agro-alimentaire

 Traitement de l’eau
• Industries de traitement des eaux
par NF ou OI
 - Décontamination
microbiologique et chimique

- Dessalement
 …
70
Usine d'eau potable de Méry-sur-Oise, nanofiltration
© Laurent Mignaux/METL-MEDDE/Sedif
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

I.3- UTILISATION D'AGENTS CHIMIQUES

• Pas d'agent efficace dans tous les cas

 Choix = f (usage)

• Qualités importantes :
- Spectre d'action large, à concentration modérée & en présence de matière organique
- Non toxique
- Stable, soluble dans l’eau et non corrosif pour les matériaux

• Activités :
- Oxydation ou dénaturation des protéines
- Altération des structures membranaires
- Inactivation de composés ou de fonctions essentielles

71
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

I.3- UTILISATION D'AGENTS CHIMIQUES

• Caractéristiques des détergents, désinfectants et antiseptiques

Détergent Désinfectant Antiseptique

inerte ou inerte
Support vivant
vivant (vivant)
Toxicité pour les
faible forte faible
tissus

Efficacité sur les

faible importante moyenne
micro-organismes

• Utilisation de l’azoture de sodium (azide)

- Propriétés biocides
- Agent de conservation (solutions, membranes, colonnes)

72
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

Azoture de sodium
http://www.societechimiquedefrance.fr/azoture-de-sodium.html

« Dans l’airbag pour automobile, on utilise en fait des pastilles où sont mélangés NaN3 ,
KNO3 , et SiO2 . Lors du déclenchement par impulsion électrique provoquée par un
accéléromètre associé à l’informatique embarquée, les réactions suivantes ont lieu :

2 NaN3 ------> 2 Na + 3 N2
10 Na + 2 KNO3 ------> K2O + 5 Na2O + 3N2
K2 O + Na2 O + SiO2 ------> K2 Na2 SiO4

Les quelques grammes qui détonent par déclenchement électrique en cas de choc
frontal de l’ordre de 20 à 30 km/h libèrent en quelques 50 à 150 millisecondes de 35 à
70 L de diazote dans un sac qui se déploie devant le conducteur ou le passager : à titre
de comparaison, le clignement de l’œil se fait en environ 150 ms… »

73
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

(+ faible concentration)

(70%)

74
75
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

4 : Utilité maximale
76
0 : peu utile
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les composés phénoliques :

Phénol : 1er désinfectant et antiseptique largement utilisé (Joseph Lister, 1867)

Spectre d'action - Bactéricides (M. tuberculosis) et fongicides

- Peu actifs sur les spores bactériennes

Activité - Dénaturation des protéines

- Altération des membranes cellulaires

Avantages - Efficaces en présence de matières organiques

- Actifs longtemps après leur application

Inconvénients - Odeur désagréable

- Irritation de la peau

Utilisation - Désinfection (hôpitaux, labos)

77
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les alcools :

Parmi les désinfectants et antiseptiques les plus utilisés

Spectre d'action - Bactéricides et fongicides - Non sporicides

- Non germicides pour quelques virus

Forme - Ethanol - Isopropanol à 70-80 %

Activité - Dénaturation des protéines

- Dissolution des lipides membranaires (?)

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 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les halogènes :
 Iode : Utilisé comme antiseptique de la peau

Activité - Oxydation des constituants cellulaires

- Protéines cellulaires iodées
- Tue certaines spores à concentrations élevées

Forme - Teinture d'iode (solution d'iode à 2%)

- Iodure de potassium dans eau + éthanol

Inconvénients - Coloration, irritation de la peau

- Risques d'allergie

Iodophores : iode complexé à un transporteur organique

Avantages - Non tachant, stables

- Brûlures et irritations de la peau réduites

Utilisation - Antisepsie préopératoire de la peau

- Désinfection (hôpitaux, labos)

Exemples - Bétadine et proviodine 79

 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les halogènes :

 Chlore : Un des désinfectants les plus communs

Utilisation Traitement des eaux - désinfection de locaux / objets

Formes 1/- Gaz (Cl2)

2/- Hypochlorite de calcium (Ca(OCl)2)
3/- Hypochlorite de sodium (Na(OCl)) ~ eau de Javel

1/ Cl2 + H2O  HCl + HClO

Activité
2/ (ou 3/) Ca(OCl)2 + 2H2O  Ca(OH)2 + 2HClO
HClO  HCl + O

 Oxydation des constituants cellulaires

Spectre d'action - Bactéricide - Fongicide

- Non sporicide

Inconvénients - Inactivation par les matières organiques

- Irritation de la peau 80
I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

81
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 L'eau oxygénée (H2O2)

- Agent oxydant

- Désinfectant efficace

 Les métaux lourds

- Effet bactéricide de certains métaux (Hg, Ag, Cu, Zn, As)

- Sels de métaux lourds + efficaces (Ex. sulfate de cuivre, algicide)

- Inactivation des protéines (fixation aux groupes sulfhydryle)

- Inconvénients : toxicité; existence de plasmides de résistance

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 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les ammoniums quaternaires

 Savons : Pouvoir antiseptique variable ~ Agents mouillants

 Détergents : Pouvoir mouillant et bactéricide

- anioniques : renforcent l'action d'autres désinfectants

- cationiques = désinfectants + efficaces

 Composés d'ammonium quaternaire

Spectre d'action - Bactéricides

- Peu efficaces sur spores et virus

Activité - Déstructuration de la membrane plasmique

- Dénaturation des protéines

Avantages - Stables, doux

- Incolores, inodores

Utilisation - Désinfectant
- Thérapeutique locale
83
 I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

• Propriétés et utilisation de quelques groupes de désinfectants et d'antiseptiques courants

 Les aldéhydes

Formes - Formaldéhyde : HCHO (+ eau, +/- alcool)

- Glutaraldéhyde : OHC-(CH2)3-CHO

Activité - Dénaturation des protéines (+ ac. nucléiques)

Spectre d'action - Sporicides efficaces

Utilisation - Désinfection de matériel

- Stérilisation

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I- LE CONTROLE DES MICROORGANISMES

 Les aldéhydes Glutaraldhéhyde : fixateur de choix en microscopie électronique

 Conservation des structures fines

 Dénaturation des protéines

(alkylation et pontage)

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