REPUBLIQUE DU CAMEROUN REPUBLIC OF CAMEROON

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UNIVERSITE DE DOUALA THE UNIVERSITY OF DOUALA
Faculté des Sciences Faculty of Science

FILIERE BIOLOGIE (BC-BOA-BOV)

NIVEAU 1:

TRAVAUX PRATIQUES DE BIO 121

TITRE :

REGLES DE SECURITE AU LABORATOIRE ET MISE EN

EVIDENCE DES MACROMOLECULES BIOLOGIQUES

Dirigé par : Dr DONGHO DONGMO FF

Pr JAZET Pierre Michel

ANNEE ACADEMIQUE 2021/2022

OBJETIF : Dans ces travaux pratiques, il sera question pour l’étudiant de maîtriser les règles de sécurité, les
obligations, les interdictions, les pictogrammes, le rôle de certains matériel dans un Laboratoire afin de mettre
en évidence la présence des macromolécules. Alors, pour atteindre cet objectif, ce TP sera répartie en deux
parties.

PARTIE I : REGLES DE SECURITE

1- A savoir avant de commencer à travailler au laboratoire
Avant de manipuler au laboratoire, chaque étudiant doit respecter les consignes suivantes :
 Prendre connaissance du travail à faire au laboratoire quelques jours avant,
 Préparer le matériel de travail à la veille de la manipulation,
 Se familiariser avec le laboratoire :
 Où se trouve la sortie de secours du laboratoire ?
 Où se trouvent les différents chemins de fuite et les escaliers d’évacuation ?
 Comment appeler du secours et qui appeler ?
 Comment déclencher une alarme incendie ?
 Où se trouvent les moyens d'extinction (extincteurs, seaux de sable) ?
 Que faire si un liquide se répand sur le sol ou dans les canalisations ?
 Où se trouve la pharmacie la plus proche ?

2- Règles obligatoire à respecter au moment d’entrer au laboratoire

 Porter une blouse blanche longue manche en coton de préférence et non en polyester (le coton brûle au
contact de la flamme alors que le polyester fond et adhère à la peau).
 Porter les chaussures fermées, retirer tous les bijoux, ne pas porter de maquillage et attacher les
cheveux avant d’entrer au laboratoire.
 Se protéger pendant certaines manipulations : porter des lunettes de sécurités, des gants, masque et
autres.
 Se laver soigneusement les mains en entrant/sortant du laboratoire.
 Repérer les emplacements des matériels de sécurités : douche fixe de premier secours, extincteurs,
rince œil, couverture anti-feu.
 Tous les flacons et emballages doivent sans exception avoir une étiquette sur laquelle on retrouve le
nom la formule, le pictogramme, et le code de sécurité défini par le système général harmonisé et la
date de péremption.
 Installer une poubelle pour la verrerie et une autre pour les métaux.

3- Les interdictions :
Une fois au laboratoire, il est interdit :
 De boire, fumer, préparer un repas ou manger dans un laboratoire.
 De travailler seul.
 De pipeter à la bouche tout produit chimique.
 De verser à l’évier les produits chimiques, biologiques ou radioactifs
 De manipuler un produit inflammable à proximité d’une flamme ou d’un point chaud.
 De courir au laboratoire,
 De manipuler sans lunette de protection, sans blouse et sans gant adapté selon la dangerosité des
produits à manipuler.

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TRAVAUX PRATIQUE BIO 121
4- les pictogrammes de sécurités
Ancien pictogramme et Code Pictogramme Mention Remarques
mention* CLP/SGH
SGH01 Explosif Produits qui ont la capacité d'exploser lors d'un
choc ou s'ils sont exposés à une source de
chaleur.
Produit Explosif (E)
SGH02 Inflammable Produits inflammables, ils sont donc à utiliser
loin d'une flamme ou d'une source de chaleur (F
= facilement inflammable, F+ = extrêmement
Produit InFlammable (F) inflammable).
SGH03 Comburant Produits comburants, cad ils facilitent
la combustion. Ils sont donc à utiliser loin d'une
flamme ou d'une source de chaleur.
Produit cOmburant (O)
(aucun symbole) SGH04 Gaz sous pression Produits à stocker et à utiliser notamment à
l'ouverture, avec extrême précaution: éviter
choc, flamme ou d'une source de chaleur

SGH05 Corrosif Produits corrosifs, ils s'attaquent aux tissus

Corrosif (C) biologiques ainsi qu'aux matériaux.

ou Nocif Irritant
(Xi)
SGH06 Toxique Produits toxiques, ils peuvent donner la mort à
faibles doses et doivent être manipulés extrême
Toxique (T) ou précaution et des protections adéquates.
très Toxique (T+)

SGH07 Toxique, Produits toxiques ou nocifs (irritant,

irritant, sensibilisant, narcotique, etc.) qui doivent être
Nocif, Irritant (X, sensibilisant, manipulés avec les protections adéquates.
Xi) narcotique

SGH08 Sensibilisant, Produits qui peuvent occasionner des

Toxique (T) cancérogène, désagréments pour la santé, nocifs ou toxiques.
mutagène, Ils doivent être manipulés avec les protections
reprotoxique adéquates.
ou Nocif
SGH09 Nuisible pour Produits néfastes pour l'environnement, qui sont
l'environnement donc à récupérer après utilisation pour qu'ils
soient traités (cas des solvants organiques).
Nuisible pour
l'environnement (N)

5- Désinfection
 Paillasse : alcool 70° (ou eau de Javel à 3° chlorométriques) à l'aide d'un papier jetable ;
 Peau contaminée : laver au savon et à alcool 70° ;
 Instruments (pipette Pasteur, anse, etc…) : flambage ;
 Aucun instrument (pipette, anse) ni objet contaminé ne doit être posé directement sur la
paillasse ;
 Flambage des instruments et de l’orifice des tubes : sert à stériliser localement tout objet
métallique ou en verre. Ouvrir la virole du bec Bunsen. Le flambage se fait dans le cône bleu de la
flamme.
NB : Ne jamais passer du plastique ou la pince en bois dans la flamme.

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TRAVAUX PRATIQUE BIO 121
PARTIE II : MANIPULATION DES MACROMOLECULES BIOLOGIQUES
A- Manipulation des lipides

BUT : Détermination de la solubilité (propriétés physiques) des lipides.

Les lipides sont des composés organiques naturels insolubles dans l’eau et solubles dans les solvants organique
tels que : le chloroforme, l’ether, le benzène, l’hexane, le NaOH… On les rencontre chez les animaux mais
aussi chez les végétaux. Ce sont par exemples les inclusions d’huiles de graisse, d’huile d’olive…

On distingue en général :

 Les lipides simples ou Homolipides : acylglycérol, cires et glycolipides

 Les lipides composées ou hétérolipides (contenant un ou plusieurs hétéroatomes):
glycérophospholipides, sphingolipides, sulpholipides et glycolipides azotés.
 Les complexes lipidiques (lipoprotéines et membrane).
Au cours de la manipulation on étudiera les propriétés de l’huile d’arachide, constitués essentiellement d’acyle
glycérol.

Protocole : Mettre dans 3 tubes à essai respectivement 2ml d’eau distillée, 2 mL d’éthanol et 2mL d’hexane
et ajouter quelques gouttes d’huile de palme raffinée dans chaque tube. Homogénéiser le mélange en agitant.
Observer et interpréter

B- Manipulation des protides

Dans cette partie nous allons mettre en évidence les réactions d’ordre générales (test de Biuret et Bradford) et
les réactions d’ordres spécifiques (test au soufre)

But : Mise en évidence des protides (acide aminés, peptides et protéines) à partir des réactions colorées.

Les protides sont un ensemble constitués des acides aminés et de tous les polymères (peptides,
protéines) qui par hydrolyse libère les acides aminés. On les classe comme suit :

Les acides aminés : Ce terme définit une famille de composés dans lesquels on retrouve une
fonction amine et une fonction acide carboxylique. La fonction amine peut être primaire secondaire ou
tertiaire et la position relative des deux fonctions peut être alpha, beta ...oméga.

Les peptides : sont des molécules résultant de l’union de plusieurs aminoacides par le biais des
liaisons peptidiques dont la masse moléculaire est inférieure à 6000 daltons.

Les protéines sont des macromolécules biologiques présentes dans toutes les cellules vivantes. Elles
sont formées d'une ou de plusieurs chaînes polypeptidiques. Chacune de ces chaînes est constituée de
l'enchaînement de résidus d'acides aminés liés entre eux par des liaisons peptidiques.

B.I- les réactions d’ordre général

I.1- Réaction à la ninhydrine

Cette réaction permet de déterminer tous les acides aminés présentant un groupe aminé, il s’agit des réactions
générales de tous les protéines et des acides aminés.

Principe : les protéines traités par la ninhydrine en excès et à chaud, subissent une désamination avec
libération de CO et NH. La ninhydrine réduit formée réagit avec une mole de ninhydrine non réduite et avec

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TRAVAUX PRATIQUE BIO 121
l’ammoniaque pour former un complexe coloré violet. Des acides aminés particuliers comme la proline et
l’hydroxyproline donne avec la ninhydrine une coloration jaune.

Mode opératoire ; à 1mL de solution d’acide aminé contenu dans chaque tube, ajouter 1mL d’une solution
fraichement préparée de ninhydrine à 2%. Porter au bain marie puis observer les résultats, noter les
colorations et interpréter.

I.2- Réaction de Biuret

Cette réaction est très générale aux protéines, caractérise la liaison peptidique et s’applique à l’analyse
quantitative des protéines et des peptides. Elle est également positive avec le Biuret (d’où son appellation),
composé renfermant deux liaison peptique séparée par un atome d’azote.

Principe : les protéines donnent en présence d’une solution alcaline de sulfate de cuivre une coloration variant
du rose-violet (protéine à chaine courte) au bleue-violet (protéines à chaine longue).

Protocole : Introduire dans un tube à essai test 1ml de solution protéique (BSA) et 1ml d’eau distillée dans un
tube à essai témoin. Ajoutons ensuite 0,5ml de lessive de soude (solution de soude à 40%) mélanger puis laisser
couler goute à goute le long de la paroi du tube à essai une solution de sulfate de cuivre à 1%. Homogénéisez,
observez et interprétez.

NB : éviter d’ajouter trop de sulfate de cuivre car au contact de la soude, il se forme l’hydroxy cuivrique bleu
foncé qui de par sa couleur propre peut masquer la réaction.

I.2- Méthode de Bradford

La méthode de Bradford est un dosage spectroscopique, utilisée pour mesurer la concentration des protéines
en solution.

Principe : Il est basé sur le changement d’absorbance (à 595nm) se manifestant par le changement de couleur
du bleue de coomassie après liaison (complexification) avec les acides aminés basique (Arg, His et Lys).

Protocole : Introduire dans un tube à essai test 1ml de solution protéique (BSA) et 1ml d’eau distillée dans
un tube à essai témoin. Ajoutons ensuite 0,5ml de réactif de Bradford. Homogénéisez, observez et interprétez.

B.II- les réactions d’ordre spécifique

II.1- Réactions de soufre

C’est la réaction du groupe sulfhydryl-SH et du pont disulfure S-S

Principe : lors de l’ébullition d’une protéine en présence de soude, du soufre est libéré (provenant en grande
partie de la cystine et de la cystéine) sous forme de sulfure de sodium (NaS), qui donne en présence d’acétate
de plomb du sulfure de plomb noire.

Protocole : on effectuera la réaction sur une solution de cystéine à 2% et un peu de blanc d’œuf. Mettre dans
un tube test 2ml de solution de cystéine et 2mL d’eau distillée dans un autre tube témoin puis ajouter 5 à 10
goutes de soude à 40% dans chaque tube. Bien homogénéiser et faire bouillir pendant 3minutes (au bain marie)
puis noter la coloration et y ajouter 3 goute de solution d’acétate de plomb neutre à 10%. Mélangez, observez
puis interprétez.

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C- Manipulation des glucides

BUT : mise en évidence des glucides par des réactions colorées.

a- Réaction avec la liqueur de Fehling

La liqueur de Fehling est un réactif contenant un complexe cuivrique, de soude et de complexant des ions
Cu2+ : le sel de seignette (tartrate double de sodium et de potassium) dont le rôle est d’éviter la précipitation de
l’hydroxyde cuivrique
Principe : En milieu alcalin et chaud, les ions cuivriques oxydent les fonctions aldéhydiques et cétoniques en
une fonction diol très réductrice avec formation d’un précipité rouge brique d’oxyde de cuivre Cu 2O selon
l’équation :

Protocole : Introduire 1ml de solution glucidique (glucose et saccharose) dans deux tubes à essai tests
différents et introduire 1ml d’eau distillée dans un tube à essai témoin. Puis ajouter 1 ml de liqueur de Fehling
dans chaque tube et porter au bain marie bouillant pendant 3 min. Observez et interprétez.

b- Test au lugol : étude d’un polyholoside (amidon)

L’iode est absorbé sur les chaines α-(1,4) Glucose, à raison de deux molécules d’iodes par tours de spires. La
coloration obtenue est bleue avec l’amidon et brun acajou avec le glycogène.

Protocole : Introduire 1ml d’empois d’amidon dans un tube à essai tests et 1ml d’eau distillée dans un tube
à essai témoin. Puis y ajouter quelques goute de lugol dans chaque tube. Mélanger observez et interprétez.

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