COMPRENDRE ET GÉRER

UNE SÉROLOGIE DE
BORRELIA
Dr. Marc Arer

Valence, Février 2013
 Rappels 1 sur les Borrelia

Les Borrelia sont des bactéries spiralées hélicoïdales

mesurant de 5 à 23 microm. de long pour 0,2 à 0,4
micromètre de diamètre.

Elles appartiennent au groupe des spirochètes comme

le tréponème pâle (agent de la syphilis) et la
leptospire.
 Rappels 2 sur les Borrelia
On leur distingue :

- Une enveloppe externe dont une protéine A,

une protéine B, une protéine C de surface

- Un système locomoteur de 14 à 20 flagelles

(internalisés) sorte de «colonne vertébrale»
14 chez la Borrelia Burgdorferi S.S.
20 chez les Borrelia européennes

- Un cylindre protoplasmique
 Rappels 3 sur les Borrelia

Ce sont les bactéries les plus mobiles et les plus

rapides, capables de distancer largement les
macrophages.
Elles affectionnent particulièrement les milieux
visqueux (synoviales, chambres de l’oeil…).
Elles ont la capacité de se transformer :

- en formes L = sphéroplastes,
- en kystes (formes dormantes)
 Rappels 4 sur les Borrelia

Elles peuvent aussi se réunir en amas entourés

de polysaccharides complexes avec protéines
et hydrates de carbone, créant ainsi des
biofilms.

Elles peuvent se confiner à l’intérieur des

cellules du corps et se réactiver à l’occasion
d’une défaillance du système immunitaire.
 Rappels 5 sur les Borrelia

D’après l’ILADS
(International Lyme and Associated Diseases Society)
il existe plus de 100 souches aux USA et 300 souches
différentes
dans le monde.

Ce qui contribue à augmenter la variabilité antigénique

et la capacité du spirochète à échapper au système
immunitaire.
 16e Conférence de Consensus en Thérapeutique
Anti-Infectieuse
Borréliose de Lyme : démarches diagnostiques,
thérapeutiques et préventives

http://www.infectiologie.com/site/medias/
_documents/consensus/2006-Lyme_court.pdf
Question 2 du Consensus :
Place des méthodes biologiques dans le diagnostic des
différentes manifestations de la borréliose de Lyme ?
 Réponse à la question 2 du Consensus

Le diagnostic biologique de la borréliose de Lyme

repose sur la détection dans le sang ou le LCR
d’anticorps dirigés contre des antigènes borréliens
par les techniques suivantes :
- techniques immuno-enzymatiques de dépistage
(ELISA) ;
- techniques de confirmation par immuno-empreinte
(Western-Blot).
 Réponse à la question 2 du Consensus

Les techniques directes (culture et amplification

génique par PCR) peuvent apporter une aide
diagnostique dans certaines formes atypiques ou être
proposées lors d’études épidémiologiques mais elles
ne sont pas recommandées en routine et ne sont
disponibles que dans de rares laboratoires
spécialisés.
 Réponse à la question 2 du Consensus

La démarche diagnostique doit toujours comprendre

en première intention un test ELISA.

En cas de résultat négatif, il n’y a pas lieu de faire

un test de confirmation.
 Réponse à la question 2 du Consensus

Un test ELISA positif ou douteux doit être

confirmé par immuno-empreinte (Western-Blot ou
Immunoblot ).
 Une concordance de signes cliniques
assez disparates évoque une suspicion
de Borréliose chronique.
Il n’y a pas de standardisation des tests
Pour les sérologies il existe de
nombreuses marques de réactifs

en ELISA :
Bio-Mérieux
Diasorin, 
Behring,
All-Diag....
 TEST ELISA

(Enzyme Linked
immunosorbent assay)
 TEST ELISA
Test quantitatif évaluant une concentration d’anticorps
dans le sérum du patient.
Le taux obtenu est confronté à des seuils permettant
d’annoncer un résultat positif, douteux ou négatif.
Test conçu à partir de souches de Borrelia Burdorferi
en culture (Souche B31) d’où une pureté aléatoire
(Borrelia Burgorferi sensu stricto n’est présente que
dans 15% des cas d’infections européennes).

Inclusion de souches Afzelii et garinii en plus de

Borrelia Burgdorferi à partir du milieu de l’année 2011.
 TEST ELISA

VIDAS® Lyme IgM (LYM) - VIDAS® Lyme IgG (LYG)

LIMITES DES TESTS

Les résultats obtenus grâce aux méthodes de détection

d'anticorps ne permettent pas d'établir ou de réfuter
de façon définitive le diagnostic d'une borréliose de
Lyme en quantité trop faible pour pouvoir être détectée.
 TEST ELISA
VIDAS® Lyme IgM (LYM) - VIDAS® Lyme IgG (LYG)
LIMITES DES TESTS

" Les résultats négatifs obtenus avec les tests VIDAS

Lyme IgM et VIDAS Lyme IgG n'excluent pas la
possibilité d'une infection par B. burgdorferi.
Les patients au stade précoce de la maladie ou sous
antibiothérapie peuvent produire des anticorps lgM
et/ou lgG
en quantité trop faible pour pouvoir être détectée.
 TEST ELISA
C'est pourquoi les patients présentant des
antécédents ou les symptômes de la borréliose de
Lyme, mais dont les résultats sont négatifs, doivent
entrer dans la catégorie des personnes "ne présentant
pas d'anticorps anti-B. burgdorferi en quantité
détectable". . .
N. B. : au stade primaire de la maladie, on estime que
chez 50 % des sujets, les taux d'anticorps resteraient
inférieurs au seuil de détection.

(D’après le Professeur Perronne la sensibilité du test ELISA varierait de 37 à 70%).

Coût de l’ELISA IgM + IgG

37,26 € remboursé

à 60% Sécurité Sociale

à 40% Mutuelle
TEST WESTERN-BLOT
 TEST WESTERN-BLOT

Il en existe 2 types :
- à Ag natifs (utilisant des broyats de Borrelia,
modifiés par la chaleur…)

- à Ag recombinants (obtenus par génie génétique) sur

5 souches présentes sur le continent européen :
 TEST WESTERN-BLOT
Ag recombinants

B.Burgdorferi sensu stricto

B.Garinii B.B
B.Afzelii sensu lato
B.Spielmanii
B.Bavariensis.
 TEST WESTERN-BLOT

Basé sur une électrophorèse avec migration des

protéïnes en fonction de leur poids moléculaire exprimé
en kDa (kilodaltons), puis transfert sur une membrane
pour terminer par une détection des Ac par réaction
Ag-Ac.
 Coût du Western-Blot
Si ELISA positif
49 € remboursé
à 60% Sécurité Sociale
à 40% Mutuelle

Si ELISA négatif et si Western-Blot

expressement demandé
par le prescripteur
49 € non remboursé
 Il existe plusieurs marques
de Western-Blot :

All-Diag,
     Bioadvance
Diasorin
    Servibio, ...
Conseils pour l’interprétation
des résultats du
Western-Blot All Diag

LYMECHEK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)
 Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Un test LYMECHECK optima IgG/IgM négatif ne

permet pas à lui seul d'exclure une infection à Borrelia
burgdorferi sensu lato.
En particulier dans la phase précoce de l'infection, il
est possible que les anticorps ne soient pas encore
présents ou en quantité non détectable.
Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Un traitement antibiotique durant

la phase précoce peut
empêcher l'apparition des anticorps.
 Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

En technique Elisa il peut exister des faux

positifs et des faux négatifs.
Un faux positif est un test de dépistage
positif en ELISA et négatif en BLOT
(western-blot ou immunoblot).
 Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Cela est relativement fréquent pour les Ac IgM

car il existe des relations croisées avec des
IgM contre d’autres bactéries (Yersinia) ou virus
(EBV, CMV) et parce que nous possédons des
auto-anticorps non pathogènes de type IgM.
 Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Un faux négatif est un test de dépistage négatif

en ELISA et positif en BLOT (western-blot
ou immunoblot).

Cela peut-être dû à un problème de seuil de détection

ou de manque de sensibilité du réactif.
 Conseils pour l'interprétation des résultats

LYMECHECK optima IgG & IgM

(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Les résultats des tests sérologiques

doivent toujours être interprétés
en fonction du tableau clinique.
 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM
(ou RECOMLINE MIKROGEN)

Ces réactions Ag-Ac apparaissent sous forme d’une

bande foncée sur la bandelette.
4 bandes de contrôle se trouvent à l’extrémité
supérieure de la bandelette réactive
 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

1-Bande de contrôle de réactions

2-Bande de contôle pour les IgG permettant d’identifier ce type
d’Ac
3-Bande de contrôle pour les IgM permettant d’identifier ce type
d’Ac
4-Contrôle du Cut Off qui fournit une base ? arbitraire ? pour
caractériser une réaction positive, douteuse ou négative.

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

Ensuite apparaissent éventuellement les bandes en correlation

avec les Ac détectés
p100 Protéine membranaire (origine B. Afzelii)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

VlsE lisoprotéine (protéine de fusion) commune aux différentes

espèces (B.Afzelii, B.Garinii, B. Burdorferi)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

p58 Ag spécifique de Borrelia non caractéristique

(origine B.Garinii)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

p41 Protéine de flagelle

(origine B.Burgdorferi senso strictu)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

p39 Protéine de membrane

(origine B.Afzelii)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

OspA Protéine de surface externe (origine B.Afzelii)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

OspC Protéine C de surface externe

(origine B.Burgdorferi S.S/B.Afzelii/B.Garinii/B.Spielmanii)

Dr. Marc Arer

 Conseils pour l'interprétation des résultats
LYMECHECK optima IgG & IgM (ou RECOMLINE MIKROGEN)

p18 Protéine de surface externe

(origine B.Burgdorferi S.S/B.Afzelii/B.Bavariensis/B.Garinii/
B.Spielmanii)

Dr. Marc Arer

 Par rapport aux résultats, il est proposé une
évaluation de l’intensité des bandes équivalant
à la concentration des Ac détectés.

BANDE INTENSITE

pas de réaction _

intensité plus faible que la bande cut off -/+

même intensité que la bande cut off +

intensité supérieure à la bande cut off ++

très forte intensité +++

 Une évaluation par points est
également applicable permettant une
estimation rapide.

Le résultat de cette évaluation

correspond à la somme des points.
 Points IgG Points IgM
p100 5 5
VlsE 5 5
p58 4 4
p41 1 1
p39 5 4
OspA 5 5
OspC 5 8
p18 5 5
 Inteprétation des résultats

Somme Evaluation IgG Evaluation IgM

< ou = 5 Négatif Négatif
6 Douteux Douteux
Au dessus de 7 Positif Positif
COMMENT LIRE UN BILAN
DE RECHERCHE DE
BORRELIOSE
 Pour les Western-Blot :

2 lectures sont faites par le laboratoire :

 
une automatique par scanner-laser
une seconde lecture à l’oeil pour chaque bandelette
afin d’éliminer les artéfacts (tache de colorant...)
 Au final les résultats sont rendus en
qualitatif par le biologiste.

Les résultats quantitatifs sont rendus par le scanner

(supérieur ou inférieur au seuil).
 Qualitatif
Quantitatif

Dr. Marc Arer

 une feuille pour les IgG

Dr. Marc Arer

 une feuille pour les IgM

Dr. Marc Arer

 Quand la réponse du laboratoire est :
sérologie positive, cela signifie que le taux
d’anticorps est AU DESSUS du Cut Off

Cut Off
Dr. Marc Arer

 Négative quantitativement
mais on voit bien les anticorps
présents

Cut Off

(Le seuil de positivité est donc purement arbitraire)

Dr. Marc Arer

 Le prescripteur doit tenir compte de l’appréciation
qualitative du résultat.
Dans ce cas présent, la sérologie peut être considérée
comme positive, et ce n’est pas un faux positif !

Dr. Marc Arer

 Lorsqu’il existe une bande p41 unique en
DESSOUS ou au DESSUS du Cut Off, cela
traduit la présence plus ou moins
importante d’Ac anti protéine du flagelle,
caractéristique commune à la Borrélia, au
tréponème pâle, à la leptospire (et à
éventuellement d’autres tissus ?).
 Anticorps anti p41 en DESSOUS
du Cut Off
La réponse devrait être : sérologie équivoque

Dr. Marc Arer

 Anticorps anti p41 AU DESSUS du Cut Off
La réponse devrait être : sérologie équivoque

Dr. Marc Arer

La lecture du Western-Blot est rendue
possible par des résultats en
IgM et en IgG.
La présence d’IgM, uniquement, pourra indiquer :

- soit une infection récente, active

- soit une résurgence de la maladie

Dr. Marc Arer

 La présence uniquement d’IgG traduira :
- soit une ancienne infection
(cicatrice sérologique)
- soit une infection chronique.

Dr. Marc Arer

En fait tout cela est bien théorique car en réalité on
pourra trouver en cas de borréliose chronique toutes
les possibilités :

IgM dans une infection chronique

IgG dans une réactivation...
La présence simultanée d’IgM et d’IgG (situation
paradoxale) pourra traduire :

- soit une nouvelle réinfestation sur une infection

ancienne

- soit une résurgence de la maladie.

CAS DE SÉROLOGIES
NÉGATIVES
AU WESTERN-BLOT
 1ère explication : absence de Borreliose
(est-ce si fréquent ?)

2ème explication : «paralysie» du système

immunitaire

3ème explication : non perception du spirochète

par le système immunitaire

Cut Off

Dr. Marc Arer

 IL N’EXISTE PAS DE
CORRÉLATION ENTRE
LA GRAVITÉ DE
L’ATTEINTE ET
LA TRADUCTION
SÉROLOGIQUE.
LA SÉROLOGIE NE FAIT
PAS
LE DIAGNOSTIC.
 Exemple : F. BRUNO
Aucun symptôme clinique

Mordu par tique au

niveau du nombril

Bilan cerba 2011 positif

A déjà pris Amoxicilline en avril 2012 donné

par son médecin traitant suite à érythème migrant

Bilan octobre 2012 toujours positif !

 BILAN CERBA 2011
F. Bruno Aucun symptôme clinique

Dr. Marc Arer

F. Bruno 2012 feuille IgM

Aucun symptôme clinique

F. Bruno 2012 feuille IgG
Aucun symptôme clinique
ÉVOLUTION DES
SÉROLOGIES
 Une sérologie équivoque peut devenir
positive
Le fait de mettre en place un traitement à visée anti-
infectieuse ATB ou autre peut modifier la sérologie :

Sérologie positive passant à négative

Sérologie positive passant à très positive

Sérologie négative passant à positive

Sérologie négative passant à équivoque

RÉCAPITULATIF POUR
LECTURE DE
LA SÉROLOGIE
 Récapitulatif pour la lecture de la sérologie ;
1- Lecture du résultat de l’Elisa
2- Lecture du Western-Blot :
Quelle est la réponse du scanner laser ?
Y-a-t-il des bandes repérées, même EN DESSOUS du
cut off ?

Dr. Marc Arer

 Récapitulatif pour la lecture de la sérologie
3- Confrontation des symptômes du patient en fonction
des tropismes des différentes espèces détectées :

SYSTEME ARTICULAIRE,
B.BURGDORFERI S.S.
CARDIAQUE
B.GARINII SYSTEME NERVEUX
B.SPIELMANII SYSTEME ARTICULAIRE
SYSTEME CUTANEO
B.AFZELII
MUQUEUX
B.BAVARENSIS SYSTEME NERVEUX
«La maladie de Lyme partage bien des caractéristiques
avec d’autres maladies humaines à spirochètes... Ces
similitudes incluent une entrée par la peau ou les
muqueuses... spirochétémie au début de la maladie, avec
une grande dissémination à travers les tissus et les
fluides corporels ; puis un ou plusieurs stades de la
maladie, souvent avec des périodes de latence
intermédiaires.»

Schmid GP, Centers for Disease Control

Epidemiology and clinical similarities of human spirochetal diseases
Reviews of Infectious Diseases, 11(supple6): S1460-9 1989
 «Initialement considérée comme une affection
commençant dans la peau et impliquant progressivement
les articulations, la maladie de Lyme est maintenant
classée comme l’une des grandes imitatrices d’autres
maladies d’une manière semblable à ce qui fut attribué
à la syphilis».

Duray PH.
Clinical pathologie correlations of lyme disease.
Reviews of Infectious Diseases, Vol.11(supple6): S1487-S1493 1989
 «Comme dans d’autres spirochétoses, telle que la
syphilis, les symptômes peuvent être fulminants, avec un
début soudain, ou peut se développer insidieusement au
cours des années.
Les manifestations cliniques variables ont conduit à la
connaissance de cette affection en tant que «Grande
Imitatrice» qui doit être considérée comme un
diagnostic différentiel de nombreux maux,
particulièrement dans les zones géographiques où le
spirochète est endémique».

Cooke WD, Dattwyler RJ.

Complications of Lyme Borreliosis
Annual Review of Medicine 43:93-103. 1192
 «La véritable
philosophie
consiste à réapprendre
à
regarder le monde»
Merleau Ponty

ou
à regarder en
dessous de ce
qui est visible…