BAIDANI ET AL.

: METHODES DE SELECTION CHEZ LE BLE TENDRE

Comparaison de deux mthodes de slection classique avec lhaplodiplodisation pour la rsistance la mouche de Hesse chez le bl tendre (Triticum aestivum)
Aziz Baidani1, Nasserlehaq Nsarellah2, Ahmed Amri3 et Sadia Lhaloui4
Reu 2002-09-13; accept 2003-02-25

PHYTOPROTECTION 83 : 131-138 Lefficacit des mthodes classiques et alternatives damlioration gntique repose sur lvolution de la variabilit gntique des populations sgrgatives sous slection. Lobjectif de cette tude est de comparer lvolution de la frquence des gnes de rsistance la mouche de Hesse (Mayetiola destructor) sous deux mthodes classiques de slection en comparaison avec la mthode de lhaplodiplodisation. Les distributions et les proportions observes du caractre ``rsistance la mouche de Hesse ont t values pour des lignes produites par la mthode de filiation unipare (FUP), la mthode bulk et lhaplodiplodisation (DH) de quatre populations hybrides de bl tendre (Triticum aestivum). Ces populations sont issues des croisements entre des parents rsistants la mouche de Hesse marocaine et des parents sensibles mais adapts aux conditions marocaines. Les rsultats ont montr un effet marqu de la mthode damlioration gntique. En effet, malgr leur avancement la gnration F6, les lignes produites par les mthodes FUP et bulk prsentent toujours un taux non ngligeable dhtrozygotie pour ce caractre alors que la mthode DH a abouti une homozygotie parfaite. Les proportions de rsistance observes chez les lignes FUP et haplodes doubles sont approximativement les mmes que celles thoriquement attendues. Cependant, la mthode bulk a permis une slection naturelle au champ qui a favoris le caractre rsistant de manire significative. [Comparison of two conventional breeding methods with doubled haploid method for resistance to Hessian fly in bread wheat (Triticum aestivum)] The relative usefulness of conventional and alternative breeding methods relies on the evolution of genetic variability in segregating populations undergoing selection. The objective of this study was to compare the frequencies of genetic resistance to Hessian fly (Mayetiola destructor) in populations generated by two conventional breeding methods in comparison with lines advanced through doubled haploid method. Distribution
1. Dpartement de Biologie, Universit Hassan 1er, Facult des Sciences et Techniques, B.P. 577, Settat, Maroc; courriel : abaidani@hotmail.com 2. Laboratoire damlioration gntique des crales, INRA CRRA, B.P. 589, Settat, Maroc 3. Programme national des crales, INRA, Centre Guich, Rabat, Maroc 4. Laboratoire dentomologie, INRA CRRA, B.P. 589, Settat, Maroc

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and proportions of Hessian fly resistance were evaluated in four populations of bread wheat lines advanced through Single Seed Descent (SSD), Bulk, and doubled-haploid (DH) methods. These populations were all derived from crosses involving resistant parents and susceptible lines adapted to Moroccan conditions. The results of this study have shown a clear effect of the breeding method. The Bulk and SSD (F6) derived lines have shown a substantial residual heterozygocity while DH method has produced completely homozygous material. The observed proportions of resistance did not deviate from expected in the populations of lines derived through SSD and DH methods while evidence of natural selection for resistance was significant in the lines derived through the Bulk method.
rsistance cette mouche de Hesse est encore ncessaire. Pour lincorporation de ce caractre dans des varits productives et adaptes, plusieurs programmes damlioration gntique bass sur des mthodes classiques davancement (gnalogique, mthode bulk et FUP) ont t entams. Cependant, la fixation gntique de ce caractre reste un problme parce que les gnes de rsistance sont dominants. Les techniques dhaplodiplodisation, rcemment utilises par plusieurs programmes, permettent de diminuer la dure dobtention des lignes pures en fixant ces lignes en une seule gnration. Cependant, plusieurs facteurs environnementaux et gntiques limitent lutilit de cette technique dans les programmes damlioration gntique des crales. Ces travaux avaient pour objectif dtudier lvolution des frquences du caractre monognique de rsistance dominante sous deux mthodes classiques de dveloppement en comparaison avec lhaplodiplodisation.

INTRODUCTION
La mouche de Hesse (Mayetiola destructor (Say)) [Diptera : Cecidomyiidae] cause de srieux dgts dans les pays mditerranens, principalement en Afrique du Nord. Le Maroc est lun des pays les plus affects par ce ravageur. De nombreuses pidmies ont t rapportes depuis 1930 (Anonyme 1934). Linsecte a t signal dans toutes les zones cralires marocaines. Les pertes en rendement du bl tendre, estimes par comparaison avec des varits traites ou non par le Furadan (5G) (Lhaloui et al. 1992), ou par comparaison avec des lignes isogniques (Amri et al. 1992) sont respectivement de 42 et 36 %. Lutilisation des insecticides a permis de minimiser les dgts. Cependant, le cot lev de ces produits les rend inaccessibles aux agriculteurs. La mthode de lutte la plus adquate est la rsistance varitale. Au niveau mondial, 29 gnes de rsistance cette mouche ont t identifis chez certaines espces de crales : Triticum aestivum L., Aegilops squarrosa L. et Secale cereale L. Tous les gnes identifis sont dominants lexception du gne h4 (Hatchett et al. 1994). Au Maroc, les travaux sur la rsistance gntique la mouche de Hesse ont t entams en 1984 lInstitut National de Recherche Agronomique (INRA). Ces travaux ont commenc par lidentification de gnes de rsistance aux biotypes marocains. Les gnes H5 , H7H8, H11, H13, H21 et H25 sont connus au Maroc (El Bouhssini et al. 1988, 1992 et 1997; Lhaloui et al. 1998). Mais lobtention de gnes additionnels de

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MATRIEL ET MTHODES
Matriel
Les populations utilises dans cette tude ont t constitues partir de croisements entre des parents rsistants au biotype marocain et des parents sensibles mais adapts aux conditions marocaines. Ce matriel gntique est constitu de lignes produites par haplodiplodisation, par FUP et par la mthode bulk issues des croise-

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ments : 1) Tilila/1764 ; 2) PI321644/Tilila ; 3) Sas/L254 ; et 4) Mehdia/L222. Les parents 1764, PI321644, L254 et L222 ont t choisis pour leur rsistance la mouche de Hesse. Les parents Sas, Tillila et Mehdia ont t utiliss comme parents et comme tmoins sur la base de leur adaptation agronomique aux conditions marocaines. La varit Tilila a t choisie principalement pour son aptitude gntique landrogense.

Mthode de production des plantes haplodes doubles (DH)

La production des plantes haplodes doubles a t effectue partir des populations de gnration F2 issues des quatre croisements tudis. Deux mthodes ont t utilises, il sagit de landrogense et des croisements intergnriques par deux varits de mas (Zea mays L.) (G5 et G15). Cette opration a t effectue pendant les deux premires annes afin dobtenir un grand nombre dhaplodes doubles pour chaque croisement. La troisime anne a t consacre la multiplication en serre des lignes obtenues.

an. Une graine de chaque plante (environ une centaine de plantes par population) de la gnration F2 a t seme individuellement dans un pot et lensemble a t conduit jusquau stade de rcolte. Cette opration a t rpte (propagation par une seule semence par plante) pour les trois gnrations dautofcondation (F3, F4 et F5). Comme pour lavancement par la mthode bulk , les graines des plantes F5 ont t mises en multiplication pour pouvoir valuer les lignes produites par cette mthode.

Test de rsistance la mouche de Hesse en serre

Pour lvaluation de la rsistance la mouche de Hesse des diffrentes lignes issues des diffrentes mthodes, un chantillon denviron 50 plantes a t soumis au test dinfestation par linsecte sous conditions contrles dans la serre du laboratoire dentomologie de lINRA de Settat. Le semis des lignes avances a t fait dans des bacs en plastique. Chaque ligne a t seme dans une range et le nombre de graines reprsentant chaque ligne variait suivant la disponibilit des semences (avec un maximum de 50 graines). Les quatre ranges du centre du bac de semis ont t utilises pour les tmoins Nesma et Sada, qui sont les tmoins sensibles et rsistants, respectivement. Les bacs placs en serre ont t maintenus sous une temprature de 22C environ. Au stade trois feuilles, les bacs ont t recouverts par une tente en tissu afin dviter lvasion des mouches, et linfestation a t faite durant 5 j par des mouches femelles fcondes. Aprs 20 j, les plantes sensibles devenaient rabougries et prenaient une couleur vert fonc, alors que les plantes rsistantes gardaient leur croissance normale. Des observations la loupe binoculaire ont t faites pour sassurer de la rsistance caractrise par la prsence des larves mortes au niveau des nuds.

Mthode davancement bulk

La mthode davancement bulk a t conduite la station exprimentale de Sidi El Aydi (INRA, Maroc) raison dune gnration par an. partir des gnrations F2 des croisements 1 et 4, un chantillon alatoire de semences issues de chaque population a t sem dans des parcelles de 10 m2 et conduit jusqu la rcolte. Ceci a t appliqu pour les trois gnrations dautofcondation (F3, F4 et F5). Des irrigations ont t effectues au besoin. partir de la gnration F5, des choix ont t effectus au hasard sur des plantes individuelles au stade maturation des plantes. Les graines des plantes choisies ont t rcoltes sparment et multiplies pendant une saison pour permettre leur valuation.

Mthode davancement par filiation unipare (FUP)

Lavancement par la mthode FUP a t men en serre (Centre Rgional de la Recherche Agronomique Settat de lINRA) raison dune gnration par

Analyses statistiques
Ltude dun caractre monognique dominant est base sur la proportion des plantes rsistantes au sein de chaque ligne. La distribution de

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frquence de la rsistance des diffrentes lignes doit tre compare aux proportions thoriques. Le test 2 avec un risque derreur de 5 % a t utilis pour comparer les proportions calcules avec les proportions attendues.

RSULTATS
Le tableau 1 prsente le nombre final des lignes produites par chacune des mthodes damlioration gntique (FUP, mthode bulk et DH) partir des diffrents croisements et soumises linfestation par la mouche de Hesse.

tance sont absentes. De mme, pour tous les croisements tudis, ces distributions sont assez similaires pour toutes les populations amliores par la mme mthode. Par contre, leffet de la mthode damlioration gntique est bien visible du fait que les trois mthodes utilises (FUP, mthode bulk et DH) prsentent chacune des distribu-

Distribution de frquence de plantes rsistantes par ligne

Les distributions de frquence de la rsistance la mouche de Hesse chez les lignes produites par les mthodes FUP, bulk et DH, et par population, sont prsentes dans les figures 1 9. Les distributions sont discontinues ou bimodales du fait que les valeurs intermdiaires des pourcentages de rsisFigure 2. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 1 et dveloppes par la mthode DH.

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Figure 1. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 1 et dveloppes par la mthode FUP.

Figure 3. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 2 et dveloppes par la mthode bulk .

Tableau 1. Nombre de lignes produites par mthode davancement et par croisement Populations Mthodes FUP Mthode bulk DH Total Croisement 1 113 34 147 Croisement 2 94 38 132 Croisement 3 86 33 119 Croisement 4 105 60 29 194

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Figure 4. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 2 et dveloppes par la mthode DH.

Figure 7. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 4 et dveloppes par la mthode FUP.

Figure 5: Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 3 et dveloppes par la mthode bulk .

Figure 8. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 4 et dveloppes par la mthode DH.

Figure 6: Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 3 et dveloppes par la mthode DH.

Figure 9. Distribution de frquence de la rsistance chez les lignes issues du croisement 4 et dveloppes par la mthode bulk .

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tions bien spcifiques. En effet, les lignes dveloppes par la mthode DH sont ou bien 100 % rsistantes ou 100 % sensibles (figs. 2, 4, 6 et 8), ce qui indique une homozygotie absolue pour ce caractre au niveau des lignes fixes par cette mthode. Inversement, les lignes dveloppes par FUP ou par la mthode bulk ne prsentent pas cette homozygotie complte puisque leurs proportions de plantes rsistantes varient de 60 95 % pour les lignes FUP et de 60 98 % pour les lignes de la mthode bulk . Aucune rsistance ou sensibilit de 100 % na t observe dans ces deux types de populations (figs. 1 et 7 pour la mthode FUP et figs. 3, 5 et 9 pour la mthode bulk ). Cette diffrence est attendue vu le stade davancement de ce matriel la gnration (F6).

de bulk prsentent un pourcentage de rsistance significativement plus lev que prvu selon le test 2. Les mthodes damlioration gntique ont donc un effet sur les proportions finales de rsistance et de sensibilit.

DISCUSSION
Dans cette tude, la discontinuit des distributions observes chez toutes les lignes tudies pour le caractre rsistance la mouche de Hesse nest pas inattendue. Comme ce caractre est contrl par un seul gne dominant (El Bouhssini et al.1996), laugmentation de lhomozygotie par amlioration des gnrations devrait amener la distribution de 3 :1 (R :S) en F2 33 :31 en F6 tel que confirm par les tudes o un seul gne contrle la rsistance aux maladies (Paward et al. 1989; Picard 1984). Pour les mthodes FUP et bulk , lhtrognite rsiduelle demeure un problme pour les caractres quantitatifs aussi bien que qualitatifs (Baidani 2001). Par contre, pour les lignes fixes par DH, lhomozygotie est fixe 100 % pour tous les gnes ds le ddoublement chromosomique, ce qui prsente plusieurs avantages dans le but dune valuation globale de toute la ligne (Baidani 2001; Courtois 1994). Les proportions de rsistants/sensibles observes pour les lignes FUP et DH sont conformes celles prvues thoriquement (tableau 2), puisque aucune slection na t faite lors de lamlioration de ces lignes. Pour ces deux mthodes et malgr le faible effectif des lignes DH, on a obtenu les sgrgations et les volutions deffectifs attendues pour ce caractre. Plusieurs chercheurs arrivent une conclusion semblable, tant avec la slection par FUP (Snape et Simpson 1981) quavec la mthode DH (Powell et al. 1986; Senghor 1990). Cependant, des rsultats contradictoires ont t observs, notant que les lignes DH ne transgressent pas thoriquement certains caractres qualitatifs. Ceci est expliqu soit par lexistence dune liaison entre ces caractres et les gnes responsables du phnomne de lhaplodiplodi-

tude des proportions observes

Les populations dveloppes par FUP ou par la mthode bulk doivent tre considres comme des populations F6. Thoriquement les rsultats attendus pour ces deux types de populations sont comme suit : 48,44 % des lignes doivent tre homozygotes pour la rsistance, 48,44 % homozygotes pour la sensibilit alors que 3,12 % doivent tre encore sgrgatives pour la rsistance et la sensibilit. tant donn que les htrozygotes sont aussi rsistants que les homozygotes rsistants, une proportion de 51,56 % des plantes devraient tre rsistantes et 48,44 % des plantes devraient tre sensibles. En ce qui concerne la mthode HD, 50 % des lignes devraient tre rsistantes et 50 % sensibles. Les proportions des lignes rsistantes calcules pour ces diffrentes populations FUP, mthode bulk et DH partir des 4 croisements sont prsentes au tableau 2. Pour les mthodes FUP et DH, les proportions de rsistance calcules sont proches de celles attendues pour tous les croisements tudis selon les tests 2. Par contre, pour les populations dveloppes par la mthode bulk , on note des diffrences entre les proportions observes et les proportions attendues pour tous les croisements tests. En effet, toutes les populations dveloppes par la mthoPHYTOPROTECTION 83 (3) 2002

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Tableau. 2. Proportions observes et attendues des lignes rsistantes dans les diffrentes populations issues par les mthodes davancement FUP, mthode bulk et DH Populations Mthodes FUP Mthode bulk DH Proportions Croisement 1 Croisement 2 Croisement 3 Croisement 4 Observe Thorique Observe Thorique Observe Thorique 47,0 51,56 45,0 50 72,8* 51,56 43,7 50 61,3* 51,56 52,3 50 53,2 51,56 63,5* 51,56 53,3 50

* Diffrence significative calcule par le test 2.

sation, ou par la prsence dune slection gamtique (Arcia et al. 1978; Picard 1984). Par contre, pour tous les croisements tudis, les proportions de rsistance observes chez les lignes dveloppes par la mthode bulk prsentent une dviation significative vers la rsistance par rapport aux proportions attendues (33 :31). Ceci peut tre expliqu par le fait que lavancement par la mthode bulk a t fait dans le site de Sidi El Aydi en prsence de la mouche de Hesse. Il y aurait eu une slection naturelle pendant les cycles damlioration gntique en faveur des plantes rsistantes. Plusieurs travaux ont t effectus pour tudier le phnomne de slection naturelle dans les gnrations de la mthode bulk . La corrlation entre les gnes recherchs et les gnes slectionns est variable et dpend des croisements et des caractres eux-mmes (Harlan et Martini 1938; Khalifa et Qualset 1974). Il est donc essentiel dvaluer dans quelle mesure les caractres associs la pression de slection observe ont un impact positif ou ngatif sur la valeur agronomique des lignes dveloppes. En conclusion, en plus du gain de temps escompt, la mthode DH est la plus efficace pour la fixation complte du caractre de rsistance la mouche de Hesse. Cette fixation reste un problme majeur par les deux autres mthodes (FUP et mthode bulk ). Il serait donc pertinent denvisager linsertion de cette mthode dans des programmes marocains de bl tendre,

dautant plus que plusieurs tudes fondamentales dhaplodiplodisation ont t faites sur ce matriel gntique.

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