Dossier Cancrologie

Nouveaux concepts en chimiothrapie

LA CHIMIOTHRAPIE INTERVIENT AU STADE DE LA DIVISION CELLULAIRE

q Elle bloque laction de lenzyme topo-isomrase I, indispensable la duplication de lADN (on voit ici, en rouge, les chromosomes migrer vers les ples de la cellule en division lors de lanaphase) q Elle entrave la dformation des microtubules (filaments verts) ncessaire lors de la sparation de la cellule mre en deux cellules filles.

rincipes de base de la chimiothrapie

Les cellules cancreuses sont avant tout des cellules en multiplication rapide. Cela leur impose une srie de contraintes : tout dabord, la rplication des chromosomes doit atteindre une efficacit maximale. Ensuite, comme la multiplication cellulaire, cest aussi une division (ou mitose), il faut activement organiser les mouvements et la rpartition de tous les lments intracellulaires.

Pr Jan De Mey/CNRI

Finalement, pour fabriquer de nouvelles cellules, il faut des constituants chimiques et de lnergie. Cela implique une importante augmentation du trafic des molcules travers les membranes cellulaires. Autour de ces trois contraintes rplication des chromosomes, mouvements intracellulaires, trafic membranaire sorganise le combat entre les cellules cancreuses et les molcules anticancreuses. Chacun sait que les chromosomes sont constitus dune double hlice dADN. Mais lorsque lon dessine la double hlice plat sur une feuille de papier, on ne ralise pas bien que les deux brins de lhlice sont enrouls lun autour de lautre en une torsade. La longueur totale de lADN dune cellule humaine est denviron deux mtres. Il est tout entier contenu dans le minuscule espace du noyau. Tous ceux qui ont pratiqu (mme une fois) la pche la ligne devineront sans peine ce qui ne peut manquer darriver deux filaments trs fins de deux mtres de long enrouls lun autour de lautre et rangs dans une bote grande comme le noyau dune cellule !

Il serait bien sr sans espoir de demander des pcheurs de sparer de tels filaments. Cest pourtant bien ce qui se produit au cours de la rplication de lADN : chaque filament pre est dml pour tre utilis comme modle pour la fabrication dun filament fils avec lequel il doit reconstituer une nouvelle hlice. De plus, si lon tire sur les deux brins de lhlice pour les sparer, cela entrane immanquablement un mouvement de rotation du reste de lhlice encore intacte (comme dans le cas dun petit avion propuls par un lastique). Un tel mouvement, surtout sil est rapide et il lest : un tour dhlice est droul et recopi en moins dune seconde impose de tirer de plus en plus fort, en dautres termes de consommer de plus en plus dnergie. Il ny a pas de magie dans la cellule. Il est clair quil est impossible de rsoudre un tel casse-tte sans une bonne paire de ciseaux. Et, bien sr, dun tube de colle susceptible de rtablir lintgrit des filaments coups aprs copie. Il existe dans la cellule des enzymes qui jouent exactement le rle de ciseaux recolleurs : il sagit des topo-isomrases.

Source
Dr Pierre Sonigo, directeur de recherches INSERM (Institut Cochin de gntique molculaire, Paris).

Tubuline a

ADN au repos : double hlice desserre

2
Enzyme topo-isomrase I

ADN tendu : double hlice resserre

LADN retrouve son tat dtendu

Tubuline b

La topo3 isomrase coupe un brin de lADN

Une fois 4 les tensions relches, la topo-isomrase I ressoude le brin coup

LE SQUELETTE CELLULAIRE, CIBLE DES POISONS DU FUSEAU ET DES TAXANES

Les microtubules constituent un des systmes de filaments qui composent le cytosquelette. Ils sont indispensables aux mouvement cellulaires accompagnant la mitose. Les microtubules sont en fait des micro-cylindres faits de deux sortes de protines, les tubulines a et b. Ces microtubules ont une extrmit fixe au centrosome, prs du noyau, et rayonnent vers lextrmit distale de la cellule. En sallongeant ou se raccourcissant, les microtubules donnent au cytosquelette la souplesse ncessaire aux diffrentes dformations qui ont lieu lors de la division cellulaire. Pour sallonger, un microtubule capture son extrmit libre de nouvelles molcules de tubuline. Pour se raccourcir, il en relargue. Les poisons du fuseau et les taxanes entravent ces processus.

Nuclotides ADN hlicase ADN polymrase

LA DOUBLE HLICE SOUS TENSION

Au moment de la division cellulaire, la double hlice de lADN de la cellule mre est spare en ses deux brins par une ADN hlicase. A partir de chaque brin, des ADN polymrases reconstituent un ADN complet en assemblant sur lADN monobrin des nuclotides prsents dans le cytoplasme de la cellule mre. Une fois lopration termine, chacun des deux nouveaux ADN double hlice ainsi fabriqus quipera une des deux cellules filles issues de la division. Mais la phase de sparation tend resserrer la double hlice de lADN mre, un peu comme lorsque lon tire sur les extrmits libres dun cble lastique fait de deux brins torsads.

LENZYME CISEAUX/COLLE, CIBLE DES CAMPTOTHCINES

Pour viter que les tensions engendres par la sparation des deux brins de la double hlice nentravent la rplication normale de lADN, une enzyme, la topo-isomrase I, coupe un des deux brins de lADN mre en amont du point de rplication. Puis, une fois ces tensions relches, le brin est ressoud par lenzyme. Cette double opration coupure-soudure est rpte un peu plus haut, et ainsi de suite, au fur et mesure quavance le complexe enzymatique charg de la duplication. Les campothcines bloquent la topoisomrase I aprs la coupure.

Pour sallonger,
un microtubule capture des tubulines a et b, protines qui se trouvent toujours par paires dans le cytoplasme. Colchicine et vinblastine dstabilisent cette construction.

Pour se raccourcir,
un microtubule relargue des tubulines. Les taxanes empchent cette dpolymrisation.

omment les topo-isomrases dtendent lADN

omment les campothcines bloquent les topo-isomrases

omment bouge le cytosquelette

La capacit des cellules adopter un grand nombre de formes et accomplir des mouvements coordonns, notamment lors de la mitose, repose sur lexistence dun rseau de filaments ou cytosquelette. Ce sont les mouvements du cytosquelette, lis ses dformations et sa restructuration dynamique, qui engendrent les mouvements de la cellule. Le cytosquelette comprend trois systmes de filaments : les microtubules, les filaments dactine et les filaments intermdiaires (voir AIM n20). Les microtubules sont indispensables un grand nombre de mouvements cellulaires et notamment ceux qui accompagnent la division cellulaire. Ils sont constitus dun cylindre form de deux sortes de protines, les tubulines a et b. Dans les cellules nerveuses, les tubulines constituent 20 % des protines totales. Ce chiffre reflte limportance des microtubules dans les processus dlongation des cellules nerveuses. Les microtubules ont une extrmit fixe, accroche un organite intracellulaire, le centrosome, situ peu prs au centre de la cellule, proche du noyau. Cest de l que rayonne lensemble des microtubules. Lextrmit distale du microtubule est mobile. Cette mobilit provient des variations de longueur du microtubule. Mais il ne sagit pas ici dun mcanisme de contraction, quantit de matire constante, comme dans le muscle. Cest en fait la capture de nouvelles molcules de tubuline par lextrmit libre, ou au contraire leur dcrochage, qui modifie la longueur du tubule. Chimiquement, ces variations correspondent des phnomnes de polymrisation et de dpolymrisation. Ceux-ci consomment de lnergie stocke dans une liaison

phosphate. En effet, les molcules de tubuline contenant de la guanosine triphosphate (GTP) ont une forte affinit entre elles et se polymrisent, ce qui allonge le microtubule. Au contraire, lorsque la molcule de GTP contenue dans la tubuline est hydrolyse en guanosine diphosphate (GDP), le polymre est dstabilis et raccourci (voir dessin ci-dessus).

Cest ainsi que le paclitaxel a une activit synergique avec la radiothrapie.

es cancers qui rsistent tout

Quil sagisse de cellules cancreuses, comme de virus, de bactries, de parasites, voire mme dinsectes nuisibles, la polychimiorsistance pose de srieux problmes. Elle entrane, en ce qui concerne la cancrologie, la mort de plusieurs milliers de patients chaque anne. Dune manire gnrale, la rsistance apparat du fait dune modification de la cible ou du produit lui-mme. Il peut sagit dune linactivation du cytotoxique, mais ce nest pas le seul mcanisme. Comme nous lavons dj voqu, du fait de leur activit mtabolique acclre, les cellules tumorales captent des quantits plus leves de molcules, donc de mdicaments, que les cellules normales : do leur plus grande vulnrabilit. La rsistance au mdicament peut donc provenir aussi dune baisse de ses concentrations intracellulaires. Cette baisse peut rsulter de stratgies multiples : augmentation de llimination, ou bien squestration de la molcule dans un compartiment cellulaire ne contenant pas la cible. En cancrologie, contrairement ce qui se passe en antibiothrapie antibactrienne (voir AIM n16), la rsistance nest pas transmissible dun patient lautre. Cest laugmentation relative du nombre de cellules rsistantes par slection au sein de la tumeur qui est provoque par le mdicament, et non leur apparition proprement dite. Avant la slection, les cellules rsistantes passent inaperues (ce qui a port croire que le mdicament les faisait apparatre).

A priori, on pourrait sattendre ce que soit maintenue la sensibilit un cytotoxique suffisamment diffrent pour ne pas tre inactiv par les mmes procds, ou un produit sattaquant une autre cible. Malheureusement, la pratique clinique a montr que lchappement thrapeutique une chimiothrapie pouvait saccompagner dune rsistance de nombreuses molcules, mme non apparentes, et non utilises auparavant chez ce mme patient.

Les topo-isomrases de type I coupent un seul des deux filaments, laissent les tensions de rotation se relcher puis le recollent. Le filament non coup sert de pivot la rotation. De plus, comme les liaisons chimiques (simples liaisons) peuvent pivoter sur elles-mmes librement, le filament pivot ne se torsade pas sur lui-mme. Les topo-isomrases de type I permettent donc de dissiper les tensions lies la sparation des deux brins de lhlice dADN au niveau de la fourche de rplication, cest--dire de dmler les torsions dune hlice sur elle-mme (voir dessins ci-dessus). Les topo-isomrases de type II ont une activit encore plus radicale. Elles sont capables de couper puis de relier les deux brins en mme temps. Ces enzymes sont donc charges de dmler les noeuds qui se forment entre deux doubles hlices ou entre des parties distinctes de la mme hlice (nuds inter-hlices). Les topo-isomrases de type II sont indispensables la vie : tous les organismes vivants en possdent, alors quon peut se passer de topo-isomrases de type I, comme le font certaines bactries.

Laction des camptothcines (irinotcan (1) et topotcan) sexerce sur la topo-isomrase I. Lactinomycine D, ladryamycine, la daunorubicine, lactate delliptinium, la mitoxanthrone (anthracycline), ltoposide, le tniposide et lamsacrine agissent sur la topo-isomrase II. Certaines de ces molcules (notamment celles agissant sur la topo-I) interrompent linteraction entre lADN et la topo-isomrase. Plus prcisment, lactivit de ciseaux est maintenue, mais pas lactivit de recollage : lenzyme reste ainsi accroche au point de coupure et le brin est coup de manire irrversible. Ces mdicaments transforment donc les topo-isomrases en agents de destruction de lADN (toxicit dynamique). Les autres camptothcines agissent plutt en rigidifiant la structure de la topo-isomrase. En effet, lenzyme forme normalement un anneau qui souvre pour accueillir lADN, puis se referme sur lADN pour le couper-recoller et doit finalement se rouvrir pour librer la double hlice dmle. Lanneau rigidifi ne libre plus lADN.

omment la chimiothrapie paralyse le cytosquelette

lycoprotine P, lennemi public n 1

Parmi lensemble des modifications observables dans les cellules rsistantes, la plus notable est labondance dune glycoprotine membranaire appele glycoprotine P, dont la surexpression est capable elle seule de confrer une polychimiorsistance aux cellules en culture. La glycoprotine P appartient une famille de protines spcialises dans le transport membranaire et capables de lier lATP (transporteurs ABC, pour ATP binding cassette). La protine CFTR, dont laltration est responsable de la mucoviscidose, appartient aussi cette famille. La glycoprotine P est capable de rejeter les mdicaments anticancreux lextrieur de la cellule , rduisant ainsi leur concentration cytoplasmique. Habituellement, chaque transporteur membranaire est spcialis dans le transport dune seule molcule (ou famille de molcules) : il sagit de molcules hydrosolubles quil est ncessaire daider passer la frontire lipidique des membranes cellulaires. La glycoprotine P, elle, peut transporter des molcules trs diverses et hydrophobes, ce qui est le cas de beaucoup de celles utilises en chimiothrapie. Lidentification de la glycoprotine P gnre tout de mme un espoir : celui de mettre au point des mdicaments susceptibles dinhiber son activit, pour les associer la chimiothrapie. s
(1) Lirinotcan vient dtre commercialis par les Laboratoires Bellon (groupe Rhne-Poulenc Rorer) sous le nom de Campto. Indiqu dans les cancers colorectaux mtastatiques aprs chec du 5-FU, cest le premier traitement capable dobtenir une prolongation notable de la survie chez ces malades. Son association au 5-FU donne de grands espoirs, dans ces cancers comme dans dautres tumeurs.

Dans les annes 60, le National Cancer Institute amricain a pass au crible plus de 30 000 produits naturels. Parmi eux, un extrait de lcorce de lif du Pacifique (Taxus brevifolia) a rvl son activit anti-tumorale. Ainsi sont ns les taxanes ou taxodes. Le paclitaxel (Taxol) a t autoris depuis 1990 dans de nombreux pays, notamment pour le traitement des cancers de lovaire et du sein (la synthse chimique permettant dviter de dtruire des forts entires pour en fabriquer). Dans les annes 80, les chercheurs de Rhne-Poulenc et du CNRS ont prpar un taxode semi-synthtique extrait des aiguilles de lif europen (Taxus baccata) . Cet agent, le doctaxel (Taxotre) est intensivement test lheure actuelle et donne de bons rsultats dans de nombreux cancers. On sait maintenant que les taxanes stabilisent le polymre de tubuline et provoquent une accumulation de microtubules. Au contraire, la colchicine et la vinblastine, antitumoraux plus anciens, ont un effet de dstabilisation des microtubules. On aboutit dans les deux cas au blocage des mouvements cellulaires. Mieux : il se trouve que les cellules sont bloques une phase du cycle o elles sont trs sensibles aux radiations ionisantes.