M.R.S.

(glose)
DM613. Milieu pour lisolement, la culture et la
numration des lactobacilles et autres bactries lactiques
acidifiantes prsentes dans les aliments et autres
chantillons.

Prsentation: voir tiquette sur la bote.

Formule*
Composants:
Concentration:
Mlange de peptones
18,0 g/litre
Extrait de levure
4,0 g/litre
Glucose
20,0 g/litre
Tween 80
1,0 ml/litre
Hydrognophosphate
2,0 g/litre
dipotassique
Citrate de tri-ammonium
2,0 g/litre
Actate de sodium anhydre
3,0 g/litre
Sulfate de magnsium 7H2O
0,2 g/litre
Sulfate de manganse anhydre
0,034 g/litre
Agar
12,0 g/litre
pH final: 6,2 0,2

Conservation

Toutes les botes doivent imprativement tre bien

fermes et stockes jusqu la date de premption
indique sur ltiquette dans un endroit sec une
temprature ne dpassant pas 25C.
Certains milieux se conservent 2-8C, se rfrer
ltiquette de lemballage.

Prcautions

Usage In Vitro uniquement. Observer les rgles de

scurit et dhygine en vigueur. Ne peut tre utilis que
par du personnel de laboratoire qualifi. Striliser les
effluents biologiques dangereux avant de les liminer. Se
rfrer la fiche de scurit du produit (disponible sur
demande ou via le site internet MAST).

Matriels ncessaires non fournis

Ractifs et quipements microbiologiques standards

(anses, supplments slectifs MAST, couvillons,
ensemenceurs, autoclaves et incubateurs, etc) ainsi
que des ractifs srologiques et biochimiques et des
additifs tels que le sang.

5. Distribuer 1 ml de la solution mre et de chacune de

ces dilutions dans des botes de Ptri spares.
Ajouter 15 ml de glose M.R.S. en fusion 45C
dans chaque bote. Bien mlanger et laisser reposer.
6. Incuber en anarobie ou microarobie (5% de CO2,
5-10% doxygne) pendant 2-5 jours 30C. Pour le
comptage des psychrotrophes utiliser une
temprature de 22-25C et de 42C pour les
thermophiles. Si le matriel pour la culture anarobie
nest pas disponible, une alternative consiste
recouvrir la glose ensemence en nappe dune
couche supplmentaire de glose M.R.S. (5 ml).
7. Ne pas laisser scher la surface des botes car cela
augmente la concentration dactate la surface de
la glose et entrane linhibition des lactobacilles.

Interprtation des rsultats

Aprs incubation, compter le nombre de colonies

(compris entre 15 et 150) pour chaque espce isole par
bote et calculer le nombre de lactobacilles et de
bactries lactiques acidifiantes par gramme daliment.

Contrle de qualit

Vrifier tous signes de dtrioration. Le contrle de

qualit doit tre effectu avec au moins une souche pour
quil soit valide. Ne pas utiliser le produit si le rsultat
dune souche de contrle est incorrect. La liste ci-dessous
montre la performance de souches de contrle que
l'utilisateur peut se procurer facilement.
Souches test
Lactobacillus acidophilus
ATCC 314
Staphylococcus aureus
ATCC 25923

Rsultat
Croissance
Pas de
croissance

Limites dutilisation

Remarque: la glose M.R.S. MAST revivifie les bactries

lactiques acidifiantes et permet la croissance des levures.
La diffrenciation des bactries lactiques acidifiantes et
des lactobacilles peut tre obtenue par lexamen au
microscope optique des diffrentes formes de colonie.

Rfrences

Bibliographie disponible sur demande.

Prparation

1. Se rfrer ltiquette de la bote pour les volumes

et quantits ncessaires. Prparer la glose M.R.S.
MAST (DM613) en dissolvant la poudre dans de leau
distille ou dsionise. Pour les sachets de milieu,
dissoudre tout le contenu du sachet dans le volume
d'eau inscrit sur l'tiquette.
2. Autoclaver 121C pendant 15 minutes.
3. Refroidir 50-55C et maintenir cette temprature.
Ajuster le pH si un milieu acidifi est requis.
4. Prparer une solution mre homogne au 1:10
laide dun stomacher ou dun mixeur puis effectuer
des dilutions srielles de lchantillon alimentaire.

IFU402 JB 09/08 V2
MAST est une marque dpose
ATCC est une marque dpose de American
Type Culture Collection, Manassas, Virginia, USA.
*La formule peut varier pour optimiser les performances du milieu