MESURE ET SUIVI DE BIOMARQUEURS DE POLLUTION CHEZ

LA MOULE DREISSENA POLYMORPHA EN SEINE FLUVIALE AVAL

Christophe Minier1, Gilles Bocquen2, Agns Jaouen3, Thierry Guyot4, Renaud Tutundjian1,
Pierre Miramand4, Alain Abarnou3 & Franois Leboulenger1
Avec la collaboration de
Andr Ficht5
1. Rsum ............................................................................................................................................ 249
2. Introduction ..................................................................................................................................... 249
3. Matriels et mthodes...................................................................................................................... 251
3.1. Echantillons biologiques .......................................................................................................... 251
3.2 Dosages des PCB et HAP.......................................................................................................... 251
3.3. Dosages des mtaux ................................................................................................................. 251
3.4. Mesures biomtriques............................................................................................................... 251
3.5. Dosages immunologiques......................................................................................................... 252
3.6. Dosages enzymatiques ............................................................................................................. 252
3.7. Histopathologie ........................................................................................................................ 252
3.8. Traitement statistique ............................................................................................................... 253
4. Rsultats .......................................................................................................................................... 253
4.1. Inventaire des sites prsentant des populations de dreissnes .................................................. 253
4.2 Contamination par les PCB ....................................................................................................... 254
4.3. Contamination par les hydrocarbures aromatiques polycycliques ........................................... 257
4.4. Contamination par les mtaux .................................................................................................. 261
4.5. Expression de protines MXR.................................................................................................. 261
4.6. Activit actylcholinestrase .................................................................................................... 263
4.7. Histopathologie ........................................................................................................................ 265
4.8. Mesures biomtriques............................................................................................................... 265
5. Conclusions ..................................................................................................................................... 266
6. Rfrences bibliographiques ........................................................................................................... 266

Page 248

MESURE ET SUIVI DE BIOMARQUEURS DE POLLUTION CHEZ

LA MOULE DREISSENA POLYMORPHA EN SEINE FLUVIALE AVAL
Christophe Minier1, Gilles Bocquen2, Agns Jaouen3, Thierry Guyot4, Renaud Tutundjian1,
Pierre Miramand4, Alain Abarnou3 & Franois Leboulenger1
Avec la collaboration de
Andr Ficht5
1

Laboratoire d'Ecotoxicologie, Universit du Havre, 25 rue Philippe Lebon, BP 540, 76058 Le Havre
2
Laboratoire Polluants Chimiques, IFREMER, rue de l'Ile d'Yeu, 44037 Nantes
3
Laboratoire Eutrophisation et Bioaccumulation, IFREMER,Centre de Brest, BP 70, 29280 Plouzan
4
Laboratoire de Biologie et de Biochimie Marines (E.A. 1220), Avenue Marillac, 17042 La Rochelle
Cedex
5
Cellule Anti-Pollution du Service de la Navigation en Seine, Ile Lacroix, 76000 Rouen

1. Rsum
Des populations de dreissnes prleves en amont et en aval de Rouen ont fait l'objet d'une
tude de la contamination en mtaux (Cd, Cu et Zn), PCB et HAP ainsi que de leurs variations
annuelles respectives. Les rsultats mettent en vidence une capacit particulire des bivalves
accumuler ces contaminants et a servir d'organismes sentinelles pour la surveillance de la qualit du
milieu. Deux sites se distinguent par leur niveaux de contaminants. Le site de La Bouille est le plus
contamin de la zone d'tude en HAP et le second en PCB et cadmium, indiquant vraisemblablement
un apport en contaminants de l'agglomration rouennaise. Le site de Vieux-Port se distingue par des
profils en PCB et PAH sensiblement diffrents des autres sites tudis, avec notamment des teneurs en
PCB les plus toxiques en quantits plus importantes.
Paralllement, diffrentes rponses biologiques ont t enregistres. L'expression des
protines MXR dans les branchies montrent que le site de La Bouille est celui dont les contaminants
induisent la rponse la plus forte. D'autre part, cette mme rponse met en opposition les sites en aval
de La Bouille, et ceux situs en amont. Les animaux vivant en aval de La Bouille prsentent des
niveaux d'expression de protines MXR suprieurs aux autres dreissnes et semblent donc les plus
exposs diffrents toxiques. D'autre part, l'tude des rapports masse corporelle/taille des dreissnes
indique que les individus prlevs l'aval de La Bouille ont un dveloppement affect par rapport aux
autres sites.

2. Introduction
Les groupes de recherche impliqus dans la thmatique "Edifices Biologiques" ont pour
objectif de mieux comprendre les relations entre les tres vivants et leur biotope et les relations interorganismes; ceci afin de discerner comment ces relations et la physiologie des organismes sont
affectes par les polluants du milieu.
Un tel travail est imprativement multidisciplinaire puisqu'il ncessite des connaissances sur
les contaminants en prsence, sur les tres vivants et les rseaux trophiques ainsi que sur les
mcanismes biochimiques et cellulaires permettant cette vie. Ainsi des chimistes et biologistes
collaborent ce projet.
L'tude prsente ici s'inscrit totalement dans cette dmarche. Elle vise relier, ou mettre en
vidence des relations entre les contaminants chimiques prsents et les changements dans les
mcanismes vitaux d'une population particulire d'individus: la moule zbre, Dreissena polymorpha.
En effet, il est important de connatre la nature et les concentrations des contaminants
potentiellement toxiques dans le milieu, en l'occurrence l'eau de la Seine. Cependant ces
concentrations ne permettent, seules, de tirer de conclusion sur la qualit du milieu pour les

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organismes vivants. Quelle importance qu'un compos soit en grande quantit s'il n'est d'aucune
consquence pour les tres vivants?
Or beaucoup de facteurs peuvent moduler la rponse des tre vivants la prsence d'un
compos chimique dans l'environnement. Pour que ce dernier ait un effet, il lui faudra arriver au
contact de l'organisme, traverser de nombreuses membranes biologiques afin, finalement, de parvenir
au niveau d'une cellule cible sous une forme active.
Il est donc vident que seule la concentration dans les organes sensibles et le temps de
rsidence sont importants pour l'organisme. Un compos toxique peut tre immobilis sur des
particules, transform par des bactries (par exemple), incapable de traverser des membranes
biologiques, adsorb sur les tissus externes des individus, accumul dans des organes de stockage (des
tissus adipeux par exemple) sans que l'individu en souffre. Ceci illustre l'importance de la
biodisponibilit, traduisant la portion de contaminants interagissant avec l'organisme.
Une approche possible permettant d'estimer cette biodisponibilit, est de doser
chimiquement certains composs dans les tissus. Ceci a pour avantage de mettre en vidence que ces
composs ont pu pntrer et interagir avec l'organisme (et ventuellement conduire des effets
dltres).
Ainsi, au cours de ce travail, les concentrations de 14 hydrocarbures aromatiques
polycycliques (HAP), de 20 polychlorobiphnyls (PCB) et de trois mtaux potentiellement toxiques,
cuivre, cadmium et zinc, ont t mesures dans les tissus de la dreissne.
Cependant cette prsence n'est pas suffisante pour affirmer que ces composs ont un
quelconque effet sur les dreissnes. La signification biologique de cette prsence et de l'exposition
d'autres toxiques ne peut apparatre que lors de l'tude des organismes eux mme.
Dans cette optique, diffrents niveaux d'organisation biologique ont t tudis. En effet, si
les contaminants interagissent avec les constituants molculaires des cellules vivantes, les
consquences de cette action peuvent se rpercuter, plus ou moins rapidement, au niveau cellulaire,
tissulaire, de l'organe puis de l'organisme tout entier. Ainsi, cette tude a vis intgrer diffrents
biomarqueurs susceptibles d'apporter des informations sur les rponses des organismes au niveau
molculaire, tissulaire et de l'organisme entier.
Des protines membranaires impliques dans le transport de composs toxiques (Gottesman
et Pastan, 1993) ont t recherches chez la dreissne. Ces protines responsables du phnomne de
rsistance multixnobiotique (MXR) apparaissent comme un lment important permettant de rguler
l'entre de toxiques dans la cellule (Toomey et Epel, 1993). Le niveau d'expression de ces protines
MXR est ainsi reli l'exposition de nombreux toxiques (Minier et al., 1993 ; Minier et Moore,
1996a), ce qui fait de ce biomarqueur un outil de diagnostic de l'tat de sant de l'individu.
Les ractions biochimiques peuvent aussi tre affectes par l'interaction avec des
contaminants (qui sont alors considrs comme des polluants). Lors de travail, la possibilit que des
composs chimiques du milieu puissent agir comme des inhibiteurs de l'activit actylcholinestrase a
ainsi tudi. En effet, cette activit est essentielle pour la transmission de l'influx nerveux (Holland et
al. 1967 ; Coppage et Braidech, 1976). Son inhibition est ainsi rvlatrice d'un effet dltre,
notamment de pesticides organophosphors et carbamates non doss lors de cette tude (Payne et al.,
1996, Bocqun et al., 1998).
Les ventuelles consquences des effets sur les tissus de moule peuvent tre visualises par
histopathologie (Auffret, 1988). Une tude prliminaire a donc t entreprise afin d'observer des
modifications avec une attention particulire aux niveau des branchies.
Enfin, un indice de condition gnrale a t mesur chez les individus de dreissnes. Cet
indice correspond au rapport masse des tissus / taille de la coquille.
Cette tude a donc pour objectif d'identifier les sites o la dreissne se dveloppe dans la
partie aval de la Seine afin de pouvoir effectuer des mesures la fois chimiques et biologiques sur des
individus prlevs in situ. L'ensemble de ces mesures visent donc donner une signification
biologique la prsence de contaminants dans le biotope et ainsi aider au diagnostic de l'tat de sant
des organismes.

Page 250

3. Matriels et mthodes
3.1. Echantillons biologiques
Pour chaque chantillon, 72 individus de Dreissena polymorpha d'une taille comprise entre
20 et 27 mm ont t prlevs, amens au laboratoire dans leur milieu et immdiatement traits.
Les collectes ont t ralises dans un double objectif: tudier les variations temporelles et
spatiales des diffrents paramtres choisis. Des chantillons ont donc t prlevs de mars 1997
fvrier 1998, au niveau d'un site, l'Ile Lacroix Rouen. D'autres chantillons ont t prlevs, en juin
puis en septembre 1997, au niveau de 6 sites diffrents (Figure 1): Poses, Oissel, Rouen, La Bouille,
Le Landin (ou alternativement Villequier en juin) et Vieux-Port.
Trente individus ont t soumis une puration par incubation dans de l'eau de source
pendant 24 heures puis congels -20C. Quinze dreissnes ont t utilises pour le dosages des
mtaux. Les 15 autres ont permis le dosages des concentrations en PCB et HAP.
Quarante-deux individus ont t immdiatement utiliss pour raliser les mesures
biomtriques et la dissection des branchies qui ont t conserves - 80C jusqu' leur utilisation pour
les mesures biochimiques.
3.2 Dosages des PCB et HAP
Les chantillons ont t pess puis lyophiliss et broys. Ils ont ensuite t extraits suivant la
technique Soxtec utilisant un mlange hexane/actone. Ces extraits ont alors t purifis par
chromatographie d'absorption sur colonne d'alumine et de silice permettant de rcuprer deux
fractions: une fraction contenant les PCB ( la fois majoritaires et coplanaires) et une fraction
contenant les HAP.
Les diffrents composs prsents dans la fraction contenant les PCB ont ensuite t spars
par groupes par HPLC sur colonne PYE (colonne particulirement efficace pour la prsparation des
composs en fonction de la planarit de la molcule). Seule la fraction contenant les PCB a t
fractionne en HPLC de faon sparer les PCB ortho-substitus des PCB non ortho-substitus ou
coplanaires (CB 77, 126 et 169).
L'analyse instrumentale finale des diffrents composs a t ralise par chromatographie en
phase gazeuse (CPG). Les composs PCB ortho-substitus et non ortho-substitus ont t quantifis
par couplage de cette chromatographie avec une dtection en capture d'lectron (CPG/DCE) tandis que
la dtermination des HAP a t ralise par couplage CPG - spectromtrie de masse (CPG/SM).
L'essentiel des ces tapes est schmatis dans la figure 2.
Les concentrations en PCB ont t exprimes en ng/g de poids sec ou, pour les composs les
plus toxiques, en "quivalents dioxine" en prenant pour facteur de toxicit les valeurs recommandes
par l'organisation mondiale de la sant (Ahlborg et al., 1994).
3.3. Dosages des mtaux
Les chantillons ont t dcongels, tris, diviss par groupes de trois individus afin
d'assurer une tude statistique. Les individus de chaque groupe ont alors t extraits, schs puis
homogniss par broyage. Les concentrations en cadmium, cuivre et zinc ont t mesures par
spectrophotomtrie d'absorption atomique selon la technique dcrite par Miramand et collaborateurs
(1995).
3.4. Mesures biomtriques
La longueur, largeur et hauteur de la coquille de chaque individus utiliss ultrieurement
pour mes analyses biochimiques ont t mesures l'aide d'un pied coulisse. Les animaux ont alors
t extraits de leur coquille, goutts puis pess.

Page 251

3.5. Dosages immunologiques

Les branchies de dreissnes ont t homognises par sonication dans un tampon contenant
des dtergeants (triton X-100) afin de solubiliser les protines membranaires. La partie soluble a alors
t spare par centrifugation et la concentration en protines dose par la mthode de Bradford
(1976) en utilisant l'albumine srique bovine (BSA) comme tmoin.
Les protines apparentes aux P-glycoprotines (nom des protines de type MXR) connues
ont t recherches par immunochimie aprs sparation dans un champ lectrique (Laemmli, 1970),
puis transfert sur membrane de nitrocellulose (Towbin et al. 1979) l'aide de l'anticorps monoclonal
C219 reconnaissant toutes les protines apparentes dont la squence gnique est connue (Georges et
al., 1990) dans les conditions dcrites par Minier et collaborateurs (Minier et al., 1993).
3.6. Dosages enzymatiques
Les chantillons de branchies de dreissnes ont t dcongels, homogniss l'aide d'un
broyeur Ultra-turax puis centrifugs. Le surnageant a ensuite permis de raliser les dosages
spectrophotomtriques des protines selon la mthode de Bradford (1976) ainsi que le dosage de
l'activit actylcholinestrase par la mthode d'Ellman (Ellman et al., 1961) selon le protocole dcrit
par Bocqun (1990).
3.7. Histopathologie
Les dreissnes ont t fixes dans du liquide de gendre, dshydrates par bains successifs
dans l'thanol, puis enrobes dans de la paraffine. Des coupes de 7,5 m ont ensuite t ralises au
microtome.
Les coupes ont t colores au trichrome de Gage (Gabe, 1968) ou alternativement l'azan
puis observes au microscope photonique.

a Seine de Poses la mer

Seine-Maritime
LE HAVRE
Caudebec en Caux
6

Duclair

Port-Jrome

ROUEN

10

3
5

Estuaire
1

2
4

8
15

Honfleur

11
14

Limite de l'influence saline

12

Stations de prlvement
de A. Ficht

16

13

17

Eure

19

21

22

20

Elbeuf

Sites de prlvement de ltude

18

Barrage de Poses
Limite de la mare dynamique

Autres sites prsentant des dreissnes

Cellule Antipollution de la Seine

Etang dit de La grande No

Figure 1 : Sites de prlvement et autres sites o des dreissnes ont t visualises.

Page 252

3.8. Traitement statistique

La significativit des variations inter-sites ou intra-site a t teste par ANOVA avec
rptition de l'exprience.
L'analyse biomtrique a ncessit une rpartition des chantillons en classe de taille.

ECHANTILLON

PCB

LYOPHILISE

PCB

ANALYSE

NON ORTHO-SUBSTITUES

CPG/DCE

PRESEPARATION
HPLC (COLONNE PYE)

EXTRACTION

PURIFICATION

HEXANE/ACETONE

ALUMINE/SILICE

PCB

ANALYSE

ORTHO-SUBSTITUES

CPG/DCE

ANALYSE
HAP

CPG/SM

Figure 2 : Protocole analytique pour la quantification des PCB et des PAH.

4. Rsultats
4.1. Inventaire des sites prsentant des populations de dreissnes
Une recherche systmatique des localits prsentant des populations de dreissnes a t
ralise entre l'aval du barrage de Poses et Tancarville en priode d'tiage. Cette recherche a permis
d'chantillonner au niveau de six sites rpartis rgulirement sur le cours aval de la Seine et de
localiser avec prcision plus de 10 autres sites (figure 1).
L'analyse de cette rpartition montre que le site au niveau de Vieux-Port constitue le lieu le
plus aval o des dreissnes vivantes ont pu tre visualises. Pourtant des dreissnes adultes ont bien
t trouves au niveau de Notre-Dame de Gravenchon (Port-Jrme), mais elles taient mortes,
recouvertes d'un dpt vaseux. D'autre part, aucune dreissne n'a t trouve Tancarville, peut-tre
en raison de la trop forte influence marine cet endroit.
Cette prospection a galement permis de vrifier la prsence de dreissnes dans l'tang dit de
"La Grande No", plan d'eau de la rserve ornithologique de Val-de-Reuil, qui est en fait une
ballastire dpourvue de toute communication avec la Seine. Situ plus de 2 km du fleuve, le secteur

Page 253

 dreissnes localis sur cet tang peut constituer un site tmoin au regard des points de prlvement
en Seine.
4.2 Contamination par les PCB

PCB (ng/g poids sec)

La figure 3 montre les profils en PCB obtenus par dosage de 20 polychlorobyphnyls dans
les tissus de dreissnes prleves le long de l'axe fluvial de la Seine. D'une faon assez gnrale, le
profil est similaire pour l'ensemble des prlvements.
Le congnre majoritaire est ainsi le CB 153, prsent une concentration de l'ordre de 170
ng/g de matire sche de tissus. Le CB 138 est aussi trouv une concentration importante, de l'ordre
de 150 ng/g de matire sche tandis que les CB 149 et 101 ne reprsentent plus que la moiti, en
concentration, de celle du CB 153. Ces concentrations sont du mme ordre, bien que lgrement
infrieures, celles trouves dans les tissus de dreissnes en 1996 dans cette mme partie de la Seine
(Carru et al., 1997).

200
150
100
50
0
Mars

Mai

Juillet

Septembre

Novembre

CB31

CB28

CB52

CB101

CB110

CB149

CB118

CB153

CB132

CB105

CB138

CB187

CB128

CB156

CB180

CB170

CB194

CB77

CB126

CB169

Figure 3 : Profils de contamination par les PCB dans les chantillons de dreissnes prleves
Rouen de mars novembre 1997.

Le profil de contamination par les PCB semble indiquer qu'une variation saisonnire des
niveaux de contamination existe. Ceci est plus apparent sur la figure 4, regroupant chacun des
congnres par priode de prlvement. Une diminution de l'ordre de 30% par rapport aux mois de
printemps et d't est observe en septembre. Cette diminution est peut-tre lie la baisse de la
quantit de lipides dans les tissus de dreissnes qui dcroissent de 50% aprs la priode de
reproduction (Bruner et al., 1994). En effet, les lipides correspondent un site privilgi
d'accumulation de composs non polaire et hydrophobes (Geyer et al., 1985) et l'accumulation de PCB
est corrle la quantit de lipides corporels (Bruner et al., 1994). Cependant, faisant suite cette
diminution une valeur encore plus forte que celle observe au printemps est obtenue en novembre.
Chacune de ces variations semble affecter dans les mme proportions l'ensemble des congnres
doss.
L'tude de la contamination des individus prlevs au niveau de diffrents sites rpartis le
long de l'axe fluvial de la Seine montre que les profils sont trs similaires quelque soit le site (rsultats
non reports).

Page 254

La figure 5 montre que des variations significatives de concentration des diffrents PCB
existent selon les sites. Celles-ci sont trs importantes Poses, site le plus amont, o la somme de
l'ensemble des composs atteint 930 ng/g de poids sec (PS). Une diminution graduelle est observe
jusqu' Rouen pour atteindre des valeurs de 600 ng/g PS. Cette concentration devient alors plus
importante La Bouille (725 ng/g PS), puis rechute et se stabilise 500 ng/g PS.
Il semble donc que les apports en PCB aient une origine prpondrante situe en amont de
Poses et que de nouveaux contaminants apparaissent ou deviennent plus biodisponibles entre Rouen et
La Bouille. Le fait que l'on n'observe plus de baisse le long du trajet de la Seine entre Le Landin et
Vieux-Port peut laisser supposer qu'un phnomne similaire mais de moindre importance celui
observ La Bouille s'opre Vieux-Port.

900
800

PCB (ng/g PS)

700
600
500
400
300
200
100
0
Mars

Mai

Juillet

Septembre

Novembre

CB31

CB28

CB52

CB101

CB110

CB149

CB118

CB153

CB132

CB105

CB138

CB187

CB128

CB156

CB180

CB170

CB194

CB77

CB126

CB169

Figure 4 : Concentrations des 20 PCB doss dans les tissus de dreissnes prleves Rouen de
mars novembre 1997.

Page 255

1000
900
800

PCB (ng / g MS)

700
600
500
400
300
200
100
0
Poses

Oissel

Rouen

La Bouille

Le Landin

Vieux Port

CB31

CB28

CB52

CB101

CB110

CB149

CB118

CB153

CB132

CB105

CB138

CB187

CB128

CB156

CB180

CB170

CB194

CB77

CB126

CB169

Figure 5 : Concentrations des 20 PCB doss dans les tissus de dreissnes prleves le long de l'axe fluvial
de la Seine.

Depuis quelques annes, une attention particulire a t porte sur les relations existant entre
la conformation des PCB et leur impact sur les organismes. De rcentes tudes des relations stuctureactivit ont rvl que les PCB coplanaires, c'est--dire les congnres non-ortho- et mono-orthosubstitus, possdent une forte toxicit dont les caractristiques sont similaires celles provoques par
la 2,3,7,8-ttrachlorodibenzo-p-dioxine (Safe, 1992). Ainsi, en accord avec les recommandations de
l'Organisation Mondiale de la Sant (Ahlborg et al., 1994), la toxicit potentielle de ces composs peut
tre exprime en "quivalents dioxine" (figure 6).
Ces valeurs de toxicit montrent une distribution diffrente selon les sites. Se dmarquant
des autres lieux de prlvements, Vieux-port montre de relativement fortes concentration en PCB nonortho-substitus, les congnres 126 et 169, bien que ces valeurs ncessitent confirmation. Si ces
donnes taient confirmes, elles seraient alarmantes et les organismes consommant les dreissnes,
tels que les perches et les gardons, seraient exposs des doses toxiques trs importantes.
En tout tat de cause, ces donnes semblent indiquer une certaine spcificit de ce site dont
le taux de contamination pourrait tre influenc par la zone d'activit de Port-Jrome situe juste en
aval.

Page 256

quivalents dioxine

1000

100

10

Poses

Oissel

CB118

CB105

Rouen

CB156

La
Bouille
CB170

CB77

Le
Landin
CB126

Vieux
Port

CB169

Figure 6 : Equivalents dioxine des congnres coplanaires calculs selon les spcifications de
l'Organisation Mondiale de la Sant (Ahlborg et al., 1994).
4.3. Contamination par les hydrocarbures aromatiques polycycliques
La figure 7 montre les concentrations de 14 hydrocarbures aromatiques polycycliques (HAP)
mesurs dans les tissus de dreissnes prleves Rouen de mars novembre 1997. Le chrysne est le
compos dominant parmi ces hydrocarbures atteignant une concentration de 180 ng/g de poids sec.
Si les concentrations de ce compos sont stables dans le temps, pour la plupart des autres
HAP une distinction peut tre faite entre les valeurs obtenues au printemps et celles obtenues en t et
en automne, mettant en vidence une augmentation de celles-ci dans la seconde moiti de l'anne 1997
(Figure 8).

Napht

200

Hydrocarbures (g/g poids sec) .

Fluorne
Phen
Anthr

150

Fluor
Pyr
100

BaAnthr
Chrys
BbFluo

50

BkFluo
BePyr
BaPyr

IndenoPyr

Mars

Mai

Juil

Sept

Nov

B(ghi)Pery

Figure 7 : Profils de contamination en HAP des dreissnes prleves Rouen de mars

novembre 1997.

Page 257

B(ghi)Pery
700

BaPyr
BePyr

600

HAP (ng/g poids sec)

BkFluo
BbFluo

500

Chrys
400

BaAnthr
Pyr

300

Fluor
Anthr

200

Phen
100

Fluorne
Napht

Mars

Mai

Juil

Sept

Nov

Figure 8 : Concentrations en HAP des tissus de dreissnes prleves Rouen de mars

novembre 1997.
L'tude des concentrations mesures dans les tissus de dreissnes prleves en diffrents
sites montre que le profil des hydrocarbures est similaire de Poses au Landin (figure 9). Par contre, le
profil observ Vieux-Port est sensiblement diffrent, notamment en ce qui concerne le
benzo(ghi)perylne et, dans une moindre mesure, le phnanthrne, le benzo(e)pyrne et le fluorne
dont les proportions relatives sont sensiblement plus fortes, mettant en vidence la particularit de ce
site.
Enfin quantitativement, les concentrations en hydrocarbures apparaissent plus fortes La
Bouille et plus faibles au Landin indiquant des modifications dans le niveau d'exposition ou de la
biodisponibilit des hydrocarbures au niveau de ces sites.

Napht

400

Fluorne

HAP (ng/g poids sec)

350

Phen

300

Anthr

250

Fluor
Pyr

200

BaAnthr

150

Chrys
BbFluo

100

BkFluo
50

BePyr

BaPyr

Poses

Oissel

Rouen

La
Bouille

Le
Landin

Vieux
Port

IndenoPyr
B(ghi)Pery

Figure 9 : Profils de contamination en HAP des dreissnes prleves en amont et en aval de

Rouen en septembre 1997.

Page 258

Cadmiun (g/g PS)

2.5
2
1.5
1
0.5
0
Poses

Oissel

Rouen

La Bouille Le Landin Villequier

VieuxPort

25

Cuivre (g/g PS)

20

15

10

0
Poses

Oissel

Rouen

La Bouille

Le
Landin

Villequier

VieuxPort

300

Zinc (g/g ps)

250
200
150
100
50
0
Poses

Juin

Oissel

Rouen

La Bouille Le Landin Villequier

Septembre

VieuxPort

Octobre

Figure 10 : Concentration en cadmium (A), cuivre (B) et zinc (C) dans les tissus de dreissnes
prleves dans la partie aval de la Seine. Les barres reprsentent l'cart-type (n = 5).

Page 259

1.8

1.6

Cadmium (g/g PS)

1.4
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
mars

avr

mai

juin

juil

aot

sept

oct

nov

dec

25

Cuivre (g/g) .

20

15

10

mars

avr

mai

juin

juil

aot

sept

oct

nov

dec

300

Zinc (g/g PS)

250
200
150
100
50
mars

avr

mai

juin

juil

aot

sept

oct

nov

dec

Figure 11 : Concentration en cadmium (A), cuivre (B) et zinc (C) dans les tissus de dreissnes
prleves Rouen de mars dcembre 1997. Les barres reprsentent l'cart-type (n = 5).

Page 260

4.4. Contamination par les mtaux

La figure 10 montre les teneurs en cadmium, cuivre et zinc mesures dans les tissus de
dreissnes. Les concentrations respectives des trois lments varient de 0,5 2,5; de 10 20 et de 120
250 ng/g poids sec selon les chantillons.
Ces valeurs sont relativement leves si on les compare celles mesures dans diffrents
organismes de l'estuaire. En effet, les valeurs des concentrations en cuivre, cadmium et zinc des
dreissnes sont toujours suprieures celles trouves chez des animaux tels que le coppode
Eurytemora affinis, le mysidac Neomysis integer, le dcapode Palaemon longirostris et le poisson
Pomatoschistus microps, l'exception de la teneur en cadmium des coppodes qui est comparable
(Miramand et al., 1997). Ainsi les concentrations sont gnralement 2 100 fois suprieures selon
l'lment et l'espce compare.
Aucune variation significative inter-site n'est observe pour les concentrations en cuivre et
zinc dans les zones tudies. Par contre les concentrations en cadmium sont multiplies par quatre
entre Poses et Le Landin puis divises par 2 jusqu' Vieux-Port.
Cette volution amont-aval des teneurs en cadmium ne correspond pas aux rsultats trouvs
par Carru et collaborateurs, qui n'avaient pas observ de variation significative en 1996 (Carru et al.,
1997). Par contre, elle corrobore celle retrouve, par ces mme auteurs, dans les tissus de gardons. La
concentration la plus importante de cadmium avait alors t obtenue Jumiges tout prs du Landin.
L'tude des variations saisonnires montre que les concentrations en cuivre sont
sensiblement plus faibles de mars juillet que de aot dcembre (Figure 11). Les concentrations en
cadmium et zinc, quant elles, ne montrent aucune variation significative.
4.5. Expression de protines MXR
Les recherches immunologiques ont permis d'identifier chez la dreissne une protine
apparente aux transporteurs responsables de la rsistance multixnobiotique d'environ 120 kDa
(figure 12). Dans les mmes conditions, une bande de 170 kDa est retrouve chez Mytilus edulis, en
accord avec de prcdentes analyses (Minier et Moore, 1996b).

MWM (kDa)
225
160
105
75

Figure 12 : Western blot d'extraits protiques de Mytilus edulis (ligne 1) et de Dreissena

polymorpha (ligne 2)

Page 261

L'absence de raction croise avec toute autre protine de l'extrait de dreissne autorise
l'utilisation de la technique du slot blot afin de quantifier le niveau d'expression en protines MXR des
dreissnes. Une tude pralable montre qu'une bonne corrlation (r2 = 0,95) peut tre obtenue entre la
quantit de protines dpose et l'intensit du marquage (figure 13).

14000

Intensit de marquage (units relatives)

12000
10000
8000
6000
4000
2000
0

0.1

10

100

1000

Proteines (g)

Figure 13 : Calibration du niveau d'expression de protines MXR en fonction de la quantit de

protines dposes. (A) marquage immunologique des protines; (B) courbe de corrlation
intensit du marquage - quantit de protines (r2 = 0,95).

Page 262

La technique du slot blot a donc t utilise afin d'tudier les niveaux d'expression de ces
protines en amont et aval de Rouen ainsi que les variations saisonnires au cours de l'anne 1997.
La figure 14 montre les variations mensuelles des protines dtectes. Celles-ci sont
prsentes un niveau modr au printemps puis augmentent significativement (p <0,001) de juin
aot et retrouvent leur niveau basal en octobre. Un second pic transitoire a t mesur en janvier 1998.
Ces variations sont corrles avec les variations de temprature (p = 0,76) et de carbone
organique dissout dans le milieu (p = 0,88) (mesures de la Cellule Anti-Pollution, non reportes). Le
pic de janvier montre que la temprature n'est pas le facteur dterminant dans cette expression de
protines MXR. Au contraire, et conformment aux rsultats de Smital et Kurelec (1998), un ensemble
de micro-polluants contribuent l'expression de ce systme de dfense. Ce pic de janvier faisait ainsi
suite de fortes prcipitations qui ont t l'origine de problmes de potabilit de l'eau dans le pays de
Caux.

Proteines MXR (dunits relatives)

5500
5000
4500
4000
3500
3000
2500
2000

mars

avril

mai

juin

juil

aot

sept

oct

nov

dc

jan

fv

Figure 14 : Variations saisonnires du niveau d'expression de protines MXR.

La figure 15 montre les niveaux d'expression de protines MXR pour des dreissnes
prleves en amont et en aval de Rouen. Des variations significatives sont observes selon le site
d'chantillonnage pour les deux priodes tudies (p <0,001). En juin, les dreissnes des sites de La
Bouille et de Vieux-Port se distinguent par leurs niveaux levs, tandis qu'en septembre, une partition
encore plus nette s'observe entre les animaux des sites en amont de Rouen et ceux des sites en aval de
Rouen. Ces derniers ont, en effet, un taux d'expression en protines MXR qui est entre 50 et 100%
suprieur ceux des dreissnes originaire de lieux situs en amont de Rouen.
4.6. Activit actylcholinestrase
L'activit actylcholinestrase a t mesure au niveau des branchies de dreissnes prleves
en amont et en aval de Rouen (Figure 16) et, pour le site de Rouen, les variations saisonnires ont t
tudies (rsultats non prsents). Les niveaux d'activit mesurs (de 0,5 4 U/mg de protine) se
situent au niveau du seuil de sensibilit de la mthode ce qui, par consquent, rende dlicat toute
tentative de comparaison des valeurs obtenues.

Page 263

Protines MXR (units relatives)

6000
5500

Juin

5000

Septembre

4500
4000
3500
3000
2500
2000

Poses

Oissel

Rouen

La Bouille Le Landin Villequier Vieux Port

Figure 15 : Variations amont - aval du niveau d'expression de protines MXR.

Ces valeurs d'activit chez la dreissne sont de 20 250 fois plus faibles que celles
gnralement observes pour d'autres bivalves telles que l'hutre ou la palourde (Le Bris, sous presse).
L'interprtation de ces rsultats est dlicate. Ils pourraient signifier que ces enzymes sont trs
fortement inhibes par les polluants chimiques en prsence. Une autre possibilit serait que les
dreissnes possdent des neurotransmetteurs diffrents. La discrimination entre adaptation et
inhibition mriterait de plus amples recherches.

5
4
juin

octobre

Vieux-Port

Rouen

Oissel

Villequier

1
La Bouille

Activit spcifique (U/mg protine)

Figure 16 : Activits actylcholinestrase de dreissnes prleves dans la partie aval de la Seine.

Page 264

4.7. Histopathologie
L'tude histologique montre l'absence sur certains filaments branchiaux de cils frontaux et
leur remplacement par des granules, probablement intraciliaires, qui pourraient constituer un signe
d'altration morphologique (rsultats non reports).
Ces observations, qui n'ont pas de valeur statistique, constituent nanmoins un indice
intressant qui est susceptible d'apporter des informations importantes dans le cadre d'une
comparaison inter-site.
4.8. Mesures biomtriques

Rapport masse/taille des dreissnes (mg/mm) .

L'chantillonnage effectu, consistant prlever des dreissnes de taille comprises entre 20

et 27 mm, s'est rvl inadapt pour une analyse comparative des rapports masse/taille des organismes.
En effet, les chantillons avaient des distributions de taille significativement diffrentes selon les sites
ce qui est susceptible d'interfrer avec les rsultats. Afin de corriger ces carts, une sparation des
chantillons par classe de taille a t effectue. L'analyse statistique a ainsi t ralise sur le groupe
d'animaux dont la taille tait comprise entre 22.5 et 24.5 mm (aucune diffrence significative des taille
n'est alors observe entre les groupes d'individus des diffrents sites).
Les rapports taille/masse des organismes provenant des diffrents sites sont reports dans la
figure 17. Ces rsultats montrent que cet indice est significativement diffrent selon les sites (p <
0,002 ; n 15). Les animaux des sites en aval de La Bouille semblent ainsi les plus affects.
Il est difficile de relier cet indice avec une ventuelle action des polluants, de nombreux
paramtres pouvant interfrer. Il est cependant notable que le site o les dreissnes possdant l'indice
le plus faible correspond Vieux-Port. Or ce site possde une distribution en contaminants qui est
singulire, notamment en ce qui concerne les PCB coplanaires.

18
16
14
12
10
8
6
4
2
0

Poses

Oissel

Rouen

La
Bouille

Le
Landin

VieuxPort

Figure 17 : Rapports masse / taille des organismes provenant de diffrents sites la partie aval de
la Seine. Les barres reprsentent les intervalles de confiance 95%.

Page 265

5. Conclusions
Les dreissnes apparaissent comme des organismes ayant une aptitude particulire
bioaccumuler les contaminants. Les concentrations en mtaux lourds, cadmium, cuivre et zinc, sont
suprieures de 2 100 fois celles mesures dans des coppodes, mysidacs, dcapodes et poissons au
niveau de l'estuaire (Miramand et al., 1997). De mme, les teneurs en PCB des tissus de dreissnes
sont suprieures celles trouves dans les muscles de gardons (Carru et al., 1997).
Ces animaux sont ainsi particulirement intressants pour tudier les niveaux et les
variations de la contamination du milieu car ces capacits d'accumulation se superposent de faibles
capacits de biotransformation et un mode de vie qui les rend reprsentatifs de leur lieu de
prlvement.
Parmi les contaminants du milieu, les hydrocarbures aromatiques polyinsaturs et les
polychlorobiphnyls tiennent une place particulire puisqu'ils sont dtectables dans tous les
compartiments de l'cosystme et comportent des composs potentiellement toxiques. La prsente
tude montre que deux sites se distinguent pour leur teneurs en PAH et PCB. Le site de La Bouille
apparat comme le site le plus contamin en HAP et le second en PCB, indiquant vraisemblablement
un apport en contaminants de l'agglomration rouennaise. Le site de Vieux-Port se distingue par des
profils en PCB et PAH sensiblement diffrents des autres sites tudis, avec notamment des teneurs en
PCB les plus toxiques en quantit plus importante. L'origine de cette particularit reste peu claire mais
l'influence de la zone d'activit de Port-Jrome situe juste en aval est une piste parmi d'autres.
Les rponses biologiques obtenues ont t de deux ordres : une expression prononce d'un
systme de dfense faisant intervenir des protines MXR et une altration du rapport masse/taille des
individus collects.
Les protines MXR identifies, d'une masse molaire molculaire de 120 kDa, sont exprimes
plus fortement par les populations de dreissnes collectes en aval de Rouen. Les plus hauts niveaux
d'expression ont t mesurs La Bouille corrlant les mesures chimiques et mettant en vidence
l'effet de la contamination sur les organismes. Il est aussi notable que les niveaux d'expression des
protines MXR sont significativement plus levs de Rouen Vieux-Port qu'en aval de Rouen. Ceci
indique que les dreissnes sont exposes des niveaux suprieurs de polluants l'aval de Rouen,
polluants que les analyses chimiques ne sauraient tous dtecter individuellement mais dont les effets
sont intgrs dans la rponse biologique.
D'autre part, une rduction significative du rapport masse/taille en aval de La Bouille montre
une altration du dveloppement des animaux dans ces sites, altration qu'il est difficile de relier une
contamination. Une explication possible de l'absence de rponse de ce critre chez les animaux
prsents La Bouille pourrait tre l'existence d'une adaptation de cette population une pollution
chronique. L'expression d'un systme de dfense de type MXR (ou autre) entre dans ce cadre. Les sites
en aval de la Bouille et en particulier celui de Vieux-Port pourraient voir leur population de dreissnes
plus affectes par la prsence de toxiques particuliers.

6. Rfrences bibliographiques
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