Quand on utilise le mode split ?

Le mode split est privilégié lorsque vos analytes à quantifier ou à identifier sont en
forte concentration. (analyse d'huiles essentielles, mélange de solvants à
recycler).

Exemple :
Le débit de la colonne capillaire est de 1ml/min.Le split ratio est de 100.
Un centième de la quantité injectée passera dans la colonne capillaire.

Le mode split est le mode diviseur pour un injecteur split/splitless.

Seule une faible partie de l’échantillon est transférée dans la colonne capillaire.

Dans un premier temps, la vaporisation de l’échantillon liquide se fait dans l’insert ou

liner.
Dans un second temps, une fois sous forme de gaz, une fraction de l’échantillon est
entrainée dans la colonne capillaire et l’autre fraction - la plus importante – vers
l’extérieur via le débit de fuite.

Le résultat est qu’une faible fraction de l’échantillon injectée se trouve dans la

colonne capillaire. On dit que l’échantillon est splitté.
Par conséquent, plus le split ratio est important, plus la fraction d’échantillon à passer
dans la colonne est faible.

Quel est le rôle de l’injecteur split ?

Le rôle de l'injecteur split est donc de diviser la quantité injectée/vaporisée. Cet

excès est éliminé/évacué par la voie de split

Quand on utilise le mode splitless ?

Le mode splitless convient pour la recherche de traces - analyte à très faible
concentration.

Le mode splitless de l'injecteur split splitless

Le but du mode splitless est de transférer la totalité de l’échantillon dans la colonne
capillaire lors d’une injection dans un chromatographe en phase gazeuse (GC,
CPG).
Pour se faire, le débit de split est réduit à zéro (vanne de split fermée).
Ensuite, l’injection de l’échantillon se fait dans le corps de l’injecteur. Il est donc
vaporisé (il passe sous phase gazeuse).
Comme la sortie de split est fermée, la seule issue est la colonne capillaire.
Sous l’effet de la pression du gaz vecteur, la totalité de l’échantillon va ainsi être
entrainée dans la colonne capillaire.
Une fois transféré dans la colonne capillaire, la vanne de split est ouverte pour
éliminer les dernières vapeurs de solvant du l’échantillon vaporisé.
 Quand utiliser la chromatographie ?
Chromatographie de paires d'ions cationique : Elle est utilisée pour séparer les
espèces ioniques chargées négativement, comme les bases par exemple.
Chromatographie de paires d'ions anionique : Elle est utilisée pour séparer les
espèces ioniques chargées positivement, comme les acides ou les sels par exemple

Comment faire une chromatographie sur colonne ?

On utilise une colonne en verre équipée d'un verre fritté et d'un robinet.
La colonne est remplie d'une poudre, généralement de l'alumine ou de la silice. Un
mélange est placé en haut de la colonne. Selon la nature de l'éluant et du contenu de
la colonne, certaines molécules sont plus facilement éluées que d'autres.

Quelles informations supplémentaires Obtient-on avec la chromatographie sur

colonne ?
La technique de la chromatographie sur colonne permet la séparation des différents
constituants d'un mélange, mais elle peut être utilisée couplée à un moyen de
détection, comme par exemple une spectroscopie UV – visible ou une spectrométrie
de masse et on obtient ainsi une chaîne complète automatisable d'analyse.

Qu'est-ce qu'une colonne capillaire ?

Les colonnes capillaires sont de simples tubes d'acier inoxydable, de verre ou de
silice fondue (matériau inerte vis-à-vis de la phase stationnaire et des échantillons)
de diamètre intérieur compris entre 0,1 et 0,5 mm, et d'une longueur typique de
plusieurs dizaines de mètres, pouvant aller jusqu'à 100 m.

Quel est l'intérêt de la chromatographie sur colonne ?

La chromatographie sur colonne est une méthode préparative qui permet de séparer
et d'isoler les constituants d'un mélange. Cette technique est fondée principalement
sur des phénomènes d'adsorption et permet de séparer pratiquement tous les
mélanges possibles.

Quel est le principe de la chromatographie en colonne ?

Chromatographie sur colonne : principe

Certains composants du mélange sont transportés par le solvant à travers le solide

plus rapidement que d'autres. On dit que les composants qui se déplacent plus
rapidement ont une plus grande affinité avec la phase mobile. Celle-ci sépare le
mélange en ses composants.

Comment choisir une colonne chromatographique ?

Choisir la bonne colonne pour la sélectivité chromatographique
1. Bonne rétention pour une gamme de propriétés physiochimiques (polaire, non polaire, base, acide).
2. Résolution modérée à élevée (capacité maximale).
3. Les extraits d'échantillons peuvent être bruts, la colonne doit donc avoir une stabilité mécanique.

Quel est le rôle de la phase mobile en chromatographie ?

La phase mobile joue un rôle important en chromatographie, en particulier dans la séparation des
composés de l’échantillon. Elle transporte les composés dissous dans le milieu de la colonne vers le
détecteur.

Qu'est-ce qu'une colonne HPLC ?

Les colonnes HPLC contiennent une phase stationnaire liée à un support,
généralement des particules de silice poreuses, afin d'obtenir une grande surface. La
phase stationnaire sert de base à la séparation des composants de l'échantillon.
Rappel : les différentes techniques d’extraction à travers les âges

Depuis la haute Antiquité (Egypte…), l'homme utilise des colorants, des

parfums, des arômes, et les extraits de produits naturels grâce aux
techniques suivantes :

• La filtration. Elle date de la préhistoire et permet, par exemple, au travers

d’un lit de sable ou de mousse de rendre une eau boueuse limpide.

• Le pressage. Par exemple, il s'agit d'exercer une pression sur une orange
pour obtenir le jus, ou d'écraser des fleurs pour extraire les arômes comme
le faisaient les égyptiens.

• La décoction. On place la racine ou l'écorce d’une plante dans de l'eau

froide ; le tout est porté à ébullition et les constituants se dissolvent dans
l’eau. Cette méthode est très ancienne.

• L’enfleurage. Les fleurs fragiles (violette ou jasmin) sont posées sur des
châssis enduits de graisse animale très pure et inodore qui absorbe le
parfum des fleurs au contact ; en fin de séchage, les graisses sont
imprégnées de substances odorantes que l’on extrait avec de l’alcool.

• L'infusion. On verse de l'eau bouillante sur les feuilles ou les fleurs

finement hachées puis on les laisse tremper pour dissoudre les principes
actifs. Le thé en est un exemple.

• La macération. Une substance séjourne à froid dans un solvant

organique pour en extraire les constituants solubles dans ce solvant. Ex : la
présence de fruits dans l'alcool.

• Entraînement à la vapeur ou hydrodistillation. Les parfums de la plante

(huiles parfumées ou huiles essentielles) sont entraînés par de la vapeur
d'eau. Cette technique date de l'Egypte ancienne.

• Extraction par solvant. c'est un procédé plus récent (19 siècle) qui
ème

permet d'extraire des composés qui ne peuvent pas l'être avec de l'eau.

Toutes ces techniques connues depuis longtemps ont été perfectionnées et

sont toujours utilisées.
Une extraction est un procédé qui permet d’obtenir une espèce
chimique à partir d’une substance naturelle qui la contient.

2. Extraction par solvant

a. Principe de l’extraction par solvant

On peut extraire une substance grâce à un solvant lorsque l’espèce

chimique à extraire est solubilisée préférentiellement dans ce solvant.

Pour choisir un solvant dans lequel l’espèce chimique à extraire y soit le

plus soluble possible, il faut tenir compte de la solubilité de l’espèce
dans ce solvant qui doit être la plus grande possible.

La solubilité d’une espèce chimique dans un solvant est égale à sa

concentration dans une solution saturée de cette espèce dans le
solvant considéré. Elle s’exprime en g/L