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a-
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T'T^
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!f
Mdicaux
Collection de Prcis
Volumes
i7i-S
Cette collection s'adresse aux tudiants pour la prparation aux examens, et tous
praticiens qui, ct des grands traits, ont besoin d'ouvrages concis, mais vrai-
les
ment
cartonns en
toile
profes-
Dissection, par
Anatomie pathologique,
7 fr.
-r
Artiius, professeur l'Universit de Laudition entirement refondue, 930 pages, 320 figures. 12 fr.
Biochimie,
6 dition, vi-403
pages,
de
Lille.
planches en couleurs
par E.
La.mbling,
6 fr.
professeur
Facult
la
xxui-tJOO pages
fr.
Facult de Paris.
^^
la Facult de Paris.
Prface de M. le P' R. Blanchard. Technique. Exprimentation. Diagnostic, xxiii-751 pages, 270 figures.
l'Universit
de
Genve,
Thrapeutique
et
Pharmacologie, par
A.
de Nancy.
-2"
dition,
fr.
professeur
agrg la Facult de Paris. -2" dition, xxx-984 pages ... 12 fr.
Mdecine lgale, par A. Lacassagne, professeur l'Universit de
10 fr.
Lyon. 2" dition, 866 pages, 112 figures, 2 planches
Chirurgie infantile, par E. Kirmisson, professeur la Facult de
Riciiaud,
12
fr.
Mdecine
de Paris,
sire.
Dermatologie, par
J.
122 ligures.
l'hpital Lariboi-
{Sous presse).
la Facult
de Paris, et Hist, mdecin des hpitaux, ancien inspecteur gnral
des services sanitaires maritimes d'Egypte. 810 pages, 160 figures; et
12
2 planches
Parasitologie, par E.
la
fr.
Facult de
12
fr.
Tome I.
Crne
et
Pour paratre en
Tome
IV.
fvrier 1913
P. Bgouin, pro-
de Technique opratoire
Prcis
Chaque
vol. illustr
la
plupart originales.
par
Victor
fr.
50
Veau.
Troisime dition.
Thorax
et
Abdomen,
membre
dition.
Appareil gnital de
Membre
la
femme,
661-11.
Coulomniiers. Imp,
Paul BRODARD.
1-13.
PRCIS
DE MICROSCOPIE
PRCIS
va'^
MICROSCOPIE
.
TECHNIQUE
EXPRIMENTATION
DIAGNOSTIC
PAR
LE
D^ M.
LANGERON
270 FIGURES
DANS LE TEXTE
PARIS
MASSON ET
LIBRAIRES
DE
120,
G'%
:^---
DITEURS
l'aCADMIE
DE
MDECINE
bollevard saint-germain
1913
.^m^^
i-^
pour
et
d'adaptation reserves
tous pays.
Copyright by Masson et
C'" (1913).
PREFACE
le D''
Lan^eron
est entr
au
Mon
de
lui
confier la
de
Institut
Parasitologie
savais que les lves
plus dvou
et le
direction
1
Mdecine coloniale,
de
trouveraient
dmonstrateur
en
lui
le
guide
de
je
le
le
plus expriment.
L'autorit qu'il a acquise dans ce rle, ainsi qu'auprs
des lves du Laboratoire, m'a depuis longtemps engag
micrographique. Sur
mon
un ouvrage de technique
par en
accepter l'ide, puis en ajourna l'excution, sous prtexte de connaissances insuffisantes, en ralit par un
sentiment d'excessive
il
finit
Le
insistance,
finit
il
modestie. J'insistai
encore,
et
que j'attendais de
lui, et
que
j'ai
le
grand
PREFACE
VIII
une bibliothque de
Prcis de mdecine,
mais je ne crains pas de dire qu'il a plutt l'importance
d'un Trait, en ce sens que, bien loin d'tre un livre
l'diteur
lmentaire,
il
aborde
et
dans
expose
toute
leur
ou
l'autre
ressort de la Biologie.
surannes
le
s'en
tenir
lesquels
lui
il
et
est bien
connue. Ce
lui-mme nombre de
il
l'a
fois, et l'on
exprience. Ce que
indique,
appliqu
peut s'en rapporter
sont le fruit de sa propre
qu'il
elles
je dis
l n'est
ne
fait
PREFACE
IX
va devenir indispensable dans tous les laboratoires de biologie et il sera, dans une large mesure, un
auteur.
11
dlicates,
mais d'un
main
dont une longue exprience lui a dmontr les avantages. Le succs sur lequel je compte pour cet ouvrage
viendra dmontrer que je n'ai pas apprci d'une faon
trop logieuse les mrites du D"" Langeron et que j'ai eu
lui proposer d'crire un tel livre, dont
besoin se faisait depuis longtemps sentir.
raison de
R. Blanchard,
Professeur de parasitologie
la Facult de mdecine de Paris.
le
Prface
vu
xi
xix
Introduction
PREMIRE PARTIE
^
II.
Principe du microscope
III.
III.
La
.'
10
12
18
platine
Le tube
25
Appareil d'clairage
Sources lumineuses
Emploi de l'appareil d'clairage
Rsum de l'emploi de l'appareil d'clairage.
IV.
V.
VI.
91
93
Oculaires
VIL
42
'6
88
96
34
46
Objectifs
Classification des objectifs
Notation des objectifs
Tableaux de concordance
31
la
Microscopes de voyage
98
104
105
XH
CiiAP.
VllI.
IX.
X.
Loupes
et
microscopes
...
108
....
113
dissection.
116
Appareils dessiner
1.
11.
IIS
Chambres
claires
dites.
proprement
123
127
128
III.
XI.
134
XII.
Entretien du microscope
140
XIII.
L'observation microscopique
I.
II.
XIV.
Conditions de
la vision
145
microscopique.
145
152
Consquences pratiques
Emploi du microscope
I.
Manire de
saisir
160
et
de
160
microscope
IL Installation du microscope-
le
transporter
.
....
161
m.
XV.
163
164
165
169
II.
....
Dtermination du grossissement
Vrillcation du pouvoir dfinissant.
.
Vrification du pouvoir rsolvant.
IV. Vrification de l'tendue et de la planit
III.
.
XVI.
Mensurations microscopiques
I. Mensurations dans un plan
1.
2.
Procd de la chambre
Procd de l'oculaire
claire.
XVII.
Emploi de
I.
II.
m.
IV.
la
170
173
175
178
179
180
microm-
3.
l'^O
179
horizontal.
trique
II.
161
192
lumire polarise
192
196
Microscope polarisant
Emploi du microscope polarisant
184
189
190
....
202
203
XVlll.
clairage
scopie
III.
IV.
V.
Yl.
noir
XIII
et
ultramicrc208
.
IL
XIX.
fond
I.
209
211
214
220
221
224
Appareils accessoires
227
DEUXIEME PARTIE
MTHODES GNRALES
Chapitre premier.
II.
But de
la
III.
La prparation microscopique
Examen
I.
234
230
238
....
l'tat frais
239
Liquides d'examen
241
242
IL Mthodes d'examen
IIl. Indications de l'examen l'tat frais.
231
technique microscopique.
281
246
IV.
Colorations vitales
V.
248
cification
234
255
258
202
Dissociation mcanique
IL Dissociation chimique
llI. Dcalcification
I.
VL
VIL
VUl.
Thorie de
Agents
IL
III.
IV.
V.
VI.
270
fixateurs
279
Mlanges fixateurs
I.
IX.
265
la fixation
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
Fixateurs
hase de chrome
base de sublim corrosif.
base d'acide pierique.
base de formol
base d'alcool
279
282
282
284
286
286
287
XIV
GiiAP.
X.
Pratique de
Appendice.
XI.
la fixation
290
Mthodes spciales de
295
fixation,
Mthodes d'inclusion
298
299
313
Inclusion la paraffine
II. Inclusion au collodion
III. Inclusion mixte la parafiine et au collodion
IV. Autres masses d'inclusion
I.
Xll.
Mthodes
Coupes
II. Coupes
III. Coupes
IV. Coupes
V. Coupes
1.
Appendice.
XIII.
317
318
319
main leve
325
327
329
330
339
au microtome main
par conglation
la paraffine
au collodion
341
....
342
Coupes la paraffine
H. Coupes au collodion
342
350
352
I.
XIV.
XV.
XVI.
des
mthodes
.356
de
colo-
ration
XVII.
XVUI.
Colorations au carmin
II.
XIX.
II.
III.
XX.
369
Colorations l'hmatoxyline
I.
359
373
.
401
404
417
Colorations Fhmatoxyline
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
382
382
382
392
397
Colorants basiques
A. Colorations progressives
B. Colorations rgressives
Colorants acides
Colorants neutres
Mthode de Romanovsky
Colorations combines
I.
374
376
Hmaline-osine
Chromotropes de Hcidenhain.
Mthode de Van Gieson
Mthode de Mann
Mthode au safran de P. Masson.
Triple coloration de Prenant.
Trichromique de P. Masson ...
.
418
418
421
421
422
423
424
424
XV
III.
Colorations la safranine
Colorations la fuchsine basique.
1. Maffenta-vert lumire
2.
Trichromique de Cajal
aux bleus basiques
IV. Colorations
2.
osine
Chap.
430
XXVII.
XXVIII.
XXVI.
432
436
447
430
452
macroscopiques
425
425
426
420
427
427
429
Causes et remdes.
456
459
403
TROISIME PARTIE
MTHODES SPCIALES
Premire seca'on.
Chapitre premier.
407
PROTOZOAIRES
408
Amibes
1.
II.
III.
471
471
473
475
477
Exprimentation
IV. Culture
II.
'
Flagells
I.
II.
479
480
Trypanosomes et Trypanoplasmes.
Exprimentation
III. Diagnostic des trypanosomoses humaines.
IV. Diagnostic des leishmanioses
V. Culture des Trypanosomes et des Leishma.
,,
nia
479
481
480
491
495
500
XVI
Chap.
)ll.
Spirochtes et organismes
sijirals.
IV.
Procds spciaux
518
Sporozoaires
I.
II.
III.
518
524
527
528
529
Ilmosporidies
Coccidies
Gr^arines
IV. Myxosporidies
V. Sarcosporidies
V.
Infusoires
531
Appendice.
I.
II.
111.
Deuxime
Chapitre premier.
Vaccine
liage
Trachome
section.
MTAZOAIRES
II.
m.
545
minthes
V. Sangsues
II.
Arthropodes
574
574
578
578
579
588
592
594
613
Technique gnrale
I.
II.
Linguatulides
Acariens
Ixodids
111.
Insectes
Hmiptres
Diptres
Hymnoptres
111.
IV.
Plankton
Examen
615
621
Technique iimatologique
Numralion
621
630
644
646
647
Cytodiagnoslic
Examen des crachats
Examen des urines
V.
545
549
562
570
573
IV, Exprimentation
540
540
540
543
545
Vers
I.
502
503
509
512
I.
651
VI.
VII.
VIII.
IX.
Chapitre premier.
II.
III.
Troisime section.
XVII
Technique cytologique
Analyse chromatique et microchimie
Mthode des injections physiologiques.
Technique microscopique mdico-lgale.
TECHNIQUE BOTANIQUE
Technique bactriologique
664
668
677
680
688
089
Technique mycologique
702
721
Bibliographie gnrale
734
Table alphabtioue
735
M. Langeron.
Prcis de Microscopi.
INTRODUCTION
Multumcgerunc. quiantenos
non peregerunt;
multum adhuc restt operis
multumquc restabit, noc ulli
nato post nulla scula prcludclur occasio aliquid adhuc
fuerunt, sed
a'ijicicndi.
SNQUE, Epist.,
6i.
de technique microsco-
pique.
Dans
les
ouvrages de ce genre, on
laisse
gnralement de ct
connatre pour lui. Or il n'en est rien; tous ceux qui sont
appels diriger des lves savent que, la plupart du temps, ceuxci ignorent
totalement les principes les plus lmentaires de
l'emploi
la description
XX
INTRODUCTION
011
et
l'exprimentateur.
Malheureuse-
ment
je
de
ma
part,
ni oubli, ni dsapprobation.
Je n'ai pas parl de la technique des ractions humorales (agglutination et dviation du complment), i)arce que ces procds ne
font pas partie du domaine de la niicroscopie proprement dite; ils
sont d'ailleurs exposs, d'une faon trs dtaille, dans de nom-
que
essay
et
contrl
je dcris. J'ai eu la
moi-mme presque
bonne fortune de
travailler
beaucoup de botani(|uc
et
de
dbutants peuvent tre dsorients, mme dans de trs bons laboratoires, faute de certaines indications pratiques. A plus forte
raison le travailleur isol, et particulirement le colonial, peuvent
tre arrts |)ar des obstacles, en apparence insurmontables, dont
un mot
ment que
sont de
les
moindres procds
gation exprimentale
').
INTRODUCTION
.
Mais que
le
XXI
la
perfection des
procds techniques n'est pas la condition essentielle des dcouvertes. Dans son admirable Introduction ftude de la mdecine exprimentale, laquelle je viens d'emprunter les lignes qui
prcdent, Claude Bernard dit encore, au sujet de la dcouverte,
Tide
qu'elle est
fait trouv
par
mais qu' il n'y a pas de rgles donner
pour faire natre dans le cerveau une ide juste et fconde . Plus
la mthode
loin, il ajoute que
exprimentale ne donnera pas des
hasard ou autrement
ides fcondes ceux qui n'en ont pas, elle servira seulement
dans toutes les
diriger les ides chez ceux qui en ont , que
sciences, le plus grand nombre des hommes dveloppe et poursuit
les ides
d'un
petit
qu'i^ ne saurait
matres,
tant
rudimentaires
Pasteur,
et
fondement
effectus sans le
de
colorant.
Les travaux de
nos
sang
les parasites
l'tat frais.
les
moyens excessivement simples, compenss par une grande puisles perfectionnements de la technique sont
venus ensuite, pour permettre de retrouver facilement les nouveaux objets dcouverts et d'tudier leur structure fine.
sance d'observation
Le
procd d'examen
le
en microscopie,
c'est
frais
prcisment le
ou par les colora-
tions vitales. C'est l qu'il faut dployer tous les artifices d'clai-
INTRODUCTION
XXII
el lamelle.
J'cris ceci
drer
la
de ses
pour
le dbutant,
prparation dfinitive,
elTorts. S'il
pense ainsi,
monte
il
mthodes techniques,
connaissance de
les
la vrit.
La puissance de
la
pense
et
de l'observation sont
les
dons
moyen que de
on dispose.
11
faut s'appliquer
son jugement.
En terminant cette introduction, je liens exprimer mon
excellent matre, le professeur R. Blanchard, toute ma reconnaissance pour sa prface si bienveillante, et pour la libralit avec
sa riche bibliothque". Je remercie tous ceux
laquelle il m'a ouvert
qui
m'ont donn
des renseignements
ou
des
titude
le D'"
E.
Deux
ma gra-
conseils.
foule
d'indications prcieuses
rimental et a eu l'obligeance de revoir toutes
mes preuves
je
INTRODUCTION
dois
au
XXIII
outre de
P.
Masson,
multiples dtails, plusieurs
mthodes ratioDuelles et sres, qui mritent de devenir classiques.
Je souhaite que ce Prcis vienne en aide aux nombreux traD'"
vailleurs de
le
pathologie animale ou vgtale. Le microscope n'est plus un instrument rserv aux seules
recherches de science pure; il est devenu un moyen de diagnostic
la
Paris, 31
dcembre
1912.
M. Langeron.
PRECIS
DE
MIGROSGOPIE
TECHNIQUE
EXPRIMENTATION
DIAGNOSTIC
PREMIRE PARTIE
LE MICROSCOPE
ET SES ACCESSOIRES
CHAPITRE PREMIER
PRINCIPE DU MICROSCOPE
Le microscope est un instrument (roplique qui permet de voir et
dludierdes objets que leur petitesse rend plus ou moins invisibles
il fournit de ces
Toeil nu
objets une image considrablement
;
nant
rage, d'objectifs et d'oculaires [partie optique), et enfin d'un certain nombre d'accessoires destins aux mensurations, aux dessins, etc.
Pour
M. Langeron.
utiliser
compltement
Prcis de Microscopie.
les
la
sigiiificalioii
et
fond
Elles sont construites en verre, sauf dans des cas particuhers. Elles
sont limites soit par deux surfaces courbes, soit par une surface
elles sont
la
Rfraction.
normalement
l'air. Au contraire, si ce
rayon tombe
la lame du verre, il est dvi de sa direction
sur
obliquement
rectiligne, d'abord son entre dans le verre, c'est--dire au
moment de son passage d'un milieu moins dense dans un milieu
le
PRINCIPE DU MICROSCOPE
les lentilles
convexes,
les seules
les
pour comprendre
(iig'.
c,
lentille
trois
Supposons
2).
rayons
normale
Fig.
n'est
lentille,
pas rfract.
se
Il
1.
vers une
de
&
plan-con-
parallle la surface
d'incidence.
la
surfiice
de
la
nor-
d'in-
et
s'loigneront
cidence,
passent
puisqu'ils
du verre dans
l'air.
rapprochent de
l'axe
le
rayon bn au point
Deux
Ils
se
de
la
couper
/"(lg. 2)
considrations
rsultent de ces
lois
Fig.
Rfraction,
dans
une
lentille
1
le
2.
de la
lentille.
rayons
Orifjinal.
/',
d'inci-
foyer
pas rfract
la
2 Tout rayon ne passant pas par le centre est rfract
dviation est d'autant plus grande qu'il traverse la lentille en un
point plus loign du centre. Les rayons ainsi rfracts conver;
le
foyer de la lentille.
Foyer.
les
verger
Le foyer
rayons
est
donc
parallles
le
on
point
Taxe,
viennent
aprs
con-
travers
avoir
la
lentille.
On
lentille
soleil.
Ces rayons
La distance
Distance focale.
le foyer du centre de la lentille.
pare
En
la
les
celle qui spare les foyers des plans principaux de la lentille. Les plans
principaux sont les plans perpendiculaires l'axe de la lentille, nu
niveau desquels se coupent les rayons incidents et rfracts. Prati(iuement nous ne pouvons pas tenir compte de cette marche relle des
rayons et nous compterons la
distance focale partir du centre
de la lentille.
Nous avons, pour plus de simplicit, pris le cas dune lentille
plan-convexe. La marche des
mme
Fig.
3.
yexe
^g^
dans une
(fig.
jg^
3).
diffrence
rfractions
uricniud.
bicon-
lentille
La seule
successives,
^
la
.
pre-
.-n
ces rayons, sauf celui qui passe par l'axe oplique, se trouvent tre obliques par rapport aux surfaces convexes. Pourtant, dans les constructions trs simples que nous avons faire, nous ngligerons ces deux
rfractions et nous supposerons (jue les rayons incidents ne sont
rfracts qu'une seule fois, au niveau d'un plan perpendiculaire l'axe
le
centre de
la
lentille.
Les
Prenons une
lentille
])iconvexe et
un
ohjet.
L'image de cet
1"
L'objet
de
la
lentille,
PRINCIPE DU MICROSCOPE
proch
microscope.
Ces
lois
sont les
mmes pour
les
combinaisons de
lentilles for-
Ajoutons, pour
lentilles
verse, place entre le foyer et la lentille. Cette image est d'autant plus petite et plus rapproche
(loign
de
du foyer que
la lentille.
Image
Image
virtuelle.
divergents; elles
le
les fait
tituer l'image virtuelle. Ces images jouent un grand rle dans les
instruments d'optique.
deux
Prenons
exemples
pour
montrer comment
se
forme
l'image relle d'un objectif microscopique simple et l'image virtuelle d'une loupe.
f d'une
L'objet ab
lentille
point a', o
il
rencontre
le
le
centre de
trouvent entre a et
b.
Comme
le
Tous
les
cas.
2*^
L'objet aO
(lig.
d'une
du foyer
/",
lentille bicon-
Parmi
vexe.
fracts
les
l'ob-
et
au foyer
f. Les autres, ac
et 6c, ne sont pas rse runir
continuent
fracts,
4.
Fig.
du
Image
foyer, l'image
verse.
ne peuvent conavec
les
verger
est relle,
en avant
agrandie
et
ren-
Original.
rfracts
une
rayons
pour
former
image
relle.
Mais
de
l'objet,
que
l'il
peroit.
Formation de
Limage dans le
microscope compos.
nous
savons
Ce que
des
5.
Image
est ainsi
parce
L'objet ab est
plac en
agrandie
virtuelle.
Original.
nomm
qu'il est
par opposition
la
lentilles.
Ces deux
La
lentille
nomme
objectif
PRINCIPE DU MICROSCOPE
placer Tobjet
La
lentille
Elle fonctionne
observer
comme
et
loupe
agrandir
tance
entre
rociilaire
nomme oculaire.
et sert
l'image
La
dis-
et
Tobjectif
doit donc tre calcule de telle sorte
que l'image
relle
lentille objective se
fournie par
la
forme en dedans
le
de
l'objectif,
rapproch
plus l'image
relle
Une
construction
trs
simple
rendra compte de cette marche des rayons. Soient Obj l'ob-
(fig. 6)
jectif
et
Oc
l'oculaire,
ab
6.
Principe du microscope
compos. Obj., objectif; Oc, ocu-
Fig.
laire
ab, objet.
Original.
l'objet,
le
CHAPITRE
II
parlie
mcanique du microscope
nomme
se
ou
statif.
encore monture
et
suivant
bles,
leur et
cunslruc-
le
le prix
de Tinslru-
menl.
On
divise gnralement
microscopes en grands
modles, moyens modles
les
et
microscopes de voyage.
(fig.
de
tous
les
perfectionne-
Aimum
de
rapidit,
de
prcision et de confortable
dans l'examen des prparations.
Ce sont des
ments en quelque
instru-
sorte uni-
aux
versels, qui se prtent
travaux les plus varis et
sont susceptibles de recevoir toutes les combinaisons
d'objectifs
Fig.
7.
Zeiss.
et
d'oculaires
quC tOUS
IcS appareils
accessoires
(polar iseurs,
ainsi
elc
treint.
s'ils
sont
chariot.
et
d'une plaline
pour
laboratoires
oi
vaillent de
les
tra-
nombreux
lves, auxquels il
faut fournir des mi-
que
tant
ploi
les
dles,
immersion.
Enfin
les
microscopes
dent des
])elits
rponbesoins
trs restreinls.
difficile
un
(Tv
revolver
Il
est
adapter
ou
un
appareil d'clairage;
ils
._.
ne peuvent donc
^f^jS^gfep^^^
qui
Fig.
ne conviennent
trs
lmen-
taires
Un
8.
de zoologie
et
et
petits microscopes
ce
peuvent rendre des services comme instruments de voyage
microsvritables
aux
de
encore
infrieurs
ils
sont
vue,
point
:
[liants (p.
105).
10
9.
Microscope moyen modle
de Stiassnie. Modle pliant pouvant
servir de microscope de voyage.
Fig.
Fig.
10.
finesse suffisante
I.
Il
existe
LE
PIED DU MICROSCOPE
pied,
le
pied
en
fer
Le pied en
supporte
une
en
comme
forme de
son
fer
repose tout
le
reste de
l'appareil.
Ce genre de
bifiirques ou vides.
comme
lgant que
plus
Microscope inclinant.
sont
que
dits
la
moyens microscopes
suprieure du pied
charnire autour de
laquelle l'ensemble de
du tube peut
platine et
la
se dplacer
dans un
Gnralement
vertical.
plan
et
partie
une
porte
Les grands
c'est--dire
inclinants,
le
immobilis
tre
microscope peut
dans une position quelconque au
moyen d'une sorte de clef ou levier
qui
fait
modles
Dans
pression.
(fig.
et 9), la
certains
longueur
manence un serrage
suffisant
et
"
1.
la
pour
mdiSpensable
En
tOgraphie.
effet
il
au point de vue de
de la commodit de
horizontaux.
-1
miCropho-
Il
y a avantage,
t^ig-
H-
pour
{'.es
^^
^"
de
Leltz
Microscope
sommaires avec
examens
se trouve
stabilit et
la
microscope horizontalement. D'autre part, bon nombre d'observateurs travaillent avec le microscope inclin. 11 est certain que
l'on est ainsi dans
une
position
quelle
la
lame.
On
a bien
la
12
mais on
goiille,
toin'DO
alors
un
Il
en
est
de
mme
mme
si
incommode de
la
tte et
ce cas.
II.
LA PLATINE
elle
La platine est destine supporter les prparations
prsente en son centre une ouverture circulaire pour le passage
des rayons lumineux fournis par l'appareil d'clairage.
Dans la plupart des grands microscopes
Platine tournante.
:
un plan horizontal
et
et
pour
n'ont
les
mensurations.
trs
faible
la
recherche d'organismes
Hmatozoaires dans
les
13
lames de sang.
que
Leur emploi conomise beaucoup de temps et de fatigue. Elles
sont munies de deux verniers, au moyen desquels on peut reprer
et retrouver coup sr un point quelconque d'une prparation.
Prenons quelques exemples parmi les
Platine carre.
modles de platines les plus usits. La figure 10 nous montre la
forme de platine la plus simple, qui est la platine carre. C'est
une simple plaque de mtal noirci, de verre, ou plus souvent
de Stiassnie
dans
la })latine.
Platines chariot.
d'ailleurs de l'emploi
valets.
|)lalines chariot
dispense
un
double but
toute la
Lemploi des
des
1*^
et
outre de faibles dplacements latraux. Cet tage infrieur supporte un premier chariot destin dplacer la prparation d'avant
plement par une vis, trs visible sur la figure il, et peut s'enlever
avec la plus grande facilit. On a alors une platine tournante ordinaire, sur laquelle on peut fixer des valets.
14
qui glisse frottemenl doux dans une rainure du cliariot suplixe, comme nous le verrons
Grande
moyen
Fig.
1-2.
doit occuper
chacun des
trois verniers
pour que
champ de
l'objectif.
Pour ne
laisser
15
'
du vernier. Soit 12 ce
millimtrique qui est le plus rapproch du
dans le vernier I de la figure 12. Puis on suit les divisions du
vernier, partir du U, jusqu' ce que l'une d'elles se trouve concider
avec un des traits de la division millimtrique. Soit, toujours dans le
vernier I de la figure 12, la 4" division de ce vernier, la longueur ainsi
mesure correspondra 12 mm. 4. En effet, cause de la valeur de la
diffrence entre une division du vernier et une division millimtrique,
chiffre
1.
Les verniers sont ainsi nomms du nom du gomtre Pierre Vernier,
d'Ornans (Doubs), inventeur de cet artifice, dcrit dans un ouvrage imprim
Bruxelles en 1631 et intitul La construction, l'usage et les proprit<-s du cadran
:
nouveau.
16
du vprnier
les traits
A mon
les verniers
ne servent
faire
Pour
des chariots.
avancer
la
prparation
d'arrire en avant ou d'avant
intressants,
est
il
et
la suite.
En
de
difficile
trop
remettre tout en
])lace
dans
que
pour un seul microscope.
Fig. 13.
Petite
Dans
avec
de Leitz
les platines
la platine
(fig.
du microscope
est
donc amo-
collier qui
proprement
dite
il
Le
chariot est
permet
de
ici
fixer
moyen d'une
vis
lappareil
de
pression;
et 3
vement antro-postrieur,
du microscope, au
chariot pour le mou-
colonne
la
un
un
chariot pour
le
mouvement
latral.
La prparation
est
fixe
contre
mm.
li
"7
permet donc de
chariots,
il
monture du microscope.
suffit
postrieur en
le
sion
les
Fig-. 14.
Oculaire
champ quadrangulaire
variable.
Le mouvement automatique est produit par un levier qui commande un cliquet. Il y a un levier pour chaque chariot et la
manuvre de chacun d'eux dplace le chariot correspondant d'une
quantit dtermine. L'emploi de ce dispositif doit tre combin
avec celui d'un oculaire champ quadrangulaire variable (fig. 14).
On
mouvements du
chaque
objectif, le
nombre de
levier ncessaires
laisser
rechercher
et
paration.
ainsi
dire, son
M. Langeron.
modle
particulier.
Prcis de Microscopie,
On
voit
que
toutes,
en
18
et
III.
LE TUBE
Le tube supporte la partie optique proprement dite du microscope, c'est--dire les oculaires et les objectifs. 11 est form de deux
cylindres creux, concentriques, glissant frottement l'un dans
Sa longueur est donc variable. Le tube intrieur doit
une
porter
graduation millimtrique, dont Tusage sera indiqu
l'autre.
la tige
qui sur-
monte le pied.
Dans les grands modles, destins
la microphotographie, le
tube est trs large afin d'viter les rflexions sur les parois et de
permettre de faire des photographies sans se servir d'oculaire et
sous un grand angle.
Colonne du microscope.
ment, se
nomme
la
les
modles
construits jusqu' ces dernires annes (fg. 9), cette colonne renfermait la vis micromtrique servant la mise au i)oint prcise des
objectifs.
reil
Dans
les
micromtrique
qui relie
le
tube
statifs
grands
la
est report
colonne.
Mcanisme de mise au
objectifs se fait
modernes
ment
maillre et le
mouvement
Mouvement
ment rapide
est
toujours en prise
la fois.
On
Le
petit
est
pignon
commode pour
la
rapide
Dans
en faisant glisser
bras horizontal.
port par
ploi de ces petits
inconvnients
remploi du
mouvement
vis
et
ment
19
deux grandes
actionn par
est
de ne
permettre
revolver porte-objectif et de
pas
Mouvement micromtrique.
mise au point prcise se
fait
La
encore, dans
la
dans
la
colonne et meut
un
fort ressort
tenir le
la fois
le
tube
Gnralement
mouvement
Ic?^
Ancienne vis
micromtrique des microscopes de Leitz.
Fig.
15.
Findex
fix
au tube.
La figure 15 reprsente le dtail de la vis micromtrique des microscopes de Leitz. iLa colonne est forme d'un prisme triangulaire sur
lequel glisse frottement doux une pice cylindrique taille, l'intrieur, exactement sur ce prisme. Celui-ci est creux et renferme un fort
ressort boudin, suffisamment puissant pour supporter le poids de toute
la partie optique du microscope. Le prisme se termine sa partie suprieure par une pice cylindrique, creuse d'un pas de vis qui sert
d'crou la vis micromtrique. Elle est en outre traverse par une
barre qui maintient la colonne creuse et limite la hauteur de son
ascension. La vis micromtrique possde une large tte, en forme
d'entonnoir, portant sur ses bords la division dont nous avons parl
plus haut. Sa partie filete est traverse par une tige d'acier qui appuie
sur la barre transversale fixe la colonne creuse et fait descendre
tout l'appareil optique. Le mouvement d'ascension se produit par
l'action antagoniste du ressort qui se trouve dans le prisme.
20
Le mouvement de
qu'une tendue
deux
arrts
par
brusques.
En outre, la prcision de ce mouvement est forcment limite,
car on ne peut dpasser une certaine finesse dans la taille du pas
cette vis micromtriqiie n'a
d'environ 5 millimtres et
de
la vis
il
est limit
sont
Tous
particulier.
reposent
mme
sur le
consiste
principe qui
agir sur la vis
non
pas
directement, comme
l'ancien modle que
dans
micromtrique,
nous
dans
truits,
Fig.
16.
En
le
nouveau mouve-
ment micromtrique
Mouvement micromtrique des
sans
dans
fin,
les
outre,
les
et agit
fait xis
galement
deux sens.
munis du
;/.
1.
Zeitschrift
f.
Instrumentenkunde, XVIII,
p. 129-133, 1898.
21
un
agit sur
Fig. 17.
Chacun
Berger).
des deux cts de la pice en forme de cur dessine une spirale dont la
une demi-rotation de
longueur est de 3 mm. La roue d a 60 dents
cette roue dplace le tube de 3 mm., donc chaque dent fait avancer le
mm. 1. D'autre part la roue d n'avance d'une
tube de 3/30% soit de
dent qu'aprs une rotation complte de l'axe a; comme le tambour r
que porte cet axe est divis en 100 parties, l'intervalle de chaque division correspondra donc
mm. 001, c'est--dire 1
Lorsqu'on tourne le bouton extrieur, le tube du microscope s'lve
:
ij,.
22
remonter.
Ce mcanisme produit donc la descente ou la monte du tube dans
tous les sens et sans arrt. Il n'y a pas se proccuper de savoir si
l'on est arriv bout de course. Le contact de l'objectif avec la
lamelle est mme rendu inoffensif, car, peine a-t-on dpass le point
le plus infrieur de la course du chariot que celui-ci remonte immdiatement, quel que soit le sens dans lequel on tourne la vis a.
Ce diposilif dilfre, on le voit, de celui de lcrger par la suppression
de la vis micromtrique et son remplacement par une pice taille
d'une faon particulire.
iioLiveaiix
faon dont
ils
laire
ment rapide
et
plus
et
rapide
l'autre.
Revolver.
Un
accessoire inqiortant
du tube
est le revolver,
qui permet
changement rapide des objectifs. Le revolver est
constitu essentiellement par deux calottes sphriques concenle
triques et adaptes
l'une
trs
exactement
l'autre.
rieure
La
calotte
porte
une
sur
infsrie
de bagues, sr lesquelles
se vissent les objectifs.
calotte suprieure
La
forme
couvercle
et
s'adapte
sur les bagues avec assez
Fig. 18.
sire.
La
Revolver pour
En
la calotte
trois objectifs.
qui est
plac en
avant du
il
est facile
infrieure tourne
23
les variantes
rester continue
spars, pour cliacune des bagues. Elle peut aussi
et former une vaste calotte pro-
comme
tectrice,
dans
rcents de Leitz
les
modles
Les
12).
(fig.
suffit
de rotation.
Il
n'est
est certain
deux
que
ne
objectifs
reusement
trop
enclins
munir de revolvers
l
les
triples. C'est
le
est
ncessaire
plus
d'avoir toujours sa disposition
trois objectifs sec de puissance
qu'il
Fig-.
r.t.
lisse,
Changeur
de Zeiss.
d'objectifs cou-
En haut
le
tube du
par
l'intermdiaire
d'une
il
suffise
de tourner
le
revolver pour
On
du
revolver,
24
mouvement de
rotation,
il
du microsla
mise au
chang Tobjectif.
centrage trs
emploie
il
permet l'emploi
le
changeur
d'objectifs.
1 une pice fixe
d'objectifs est form de deux pices
visse sur le tube du microscope et qui y reste demeure;
pice mobile qui coulisse dans la prcdente et qui porte
Le changeur
qui
2
se
une
l'objectif.
On
doit se
munir d'autant de
d'objectifs.
'
CHAPITRE
III
APPAREIL D'CLAIRAGE
Son but
lumire transmise. En
effet,
se
majorit des cas, l'tude des prparations
Ce
n'est
trs
que
exceptionnellement
et
fait
est d'-
dans l'immense
par transparence.
en clairant
qu'on observe en lumire rflchie, c'est--dire
surface de l'objet.
d'un miroir
L'appareil d'clairage se compose essentiellement
la
et
un diaphragme-iris.
il devra donc
est deux faces plane et concave
tourner autour de deux axes horizontaux de manire ce qu'on
couvenablement
puisse utiliser volont les deux faces et diriger
les rayons lumineux dans l'axe optique du microscope, suivant la
condensateur rend
position de la source lumineuse. L'emploi du
inutiles des mouvements plus compliqus, qui seraient destins
modifier considrablement la direction du faisceau clairant et
obtenir, par exemple, des cnes lumineux trs obliques. Nous
et
Le miroir
du condensateur.
Le diaphragme destin tre employ avec le miroir seul doit
il doit
tre plac immdiatement sous la platine
prsenter une
srie d'ouvertures de diamtres variables de manire permettre
l'aide
diaphragme
est dit
tournant
26
est assur
microscopes
le
qui
glisse
frottement
Pour changer de
diaphragme on ahaisse le
platine.
Fig. 20.
cylindre et on tire
Diaphragme
le
cylindre, remplar-aut
condensateur.
Dans
hsse.
les
complets,
plus
la
cou-
microscopes
le
dia-
est fix
incommode
la tahle
de
un diaphragme-iris
le
diaphragme
coupole, qui
demeure dans
travail,
il
causes de dtrioration.
cylindre du
est
11
expos
est plus
manchon chaque
la
incommode encore de
retirer
veut changer de
diaphragme. Le diaphragme-iris coupole remdie tous ces
inconvnients. La figure 21 montre ce diaphragme. S, prt fonc-
le
fois
Avec
que
l'on
et le
la
condensateur C ont
j'indique plus loin (p. 42), on se sert trs rarement de ce diaphragme qui, mon avis, constitue plutt une complication inutile.
Pour obtenir les grands cnes lumineux
Condensateur.
APPAREIL d'clairage
27
la
'"'"""'
^^.,^^<^^'"''
manuvrer
le
K, tige
diaphragme-iris en
H. manivelle servant abaisser le condensaC, condensateur.
coupole.
teur.
R, bras horizontal, portant le condensateur.
Z, axe autour duquel
pivote le condensateur, lorsqu'on l'cart de l'axe optique.
L, bras horizontal
portant le diaphragme-iris en coupole;
W, bouton de la crmaillre qui
lve ou abaisse tout l'ensemble de l'appareil d'clairage.
Fig. 21.
le
Heure
que
soit la
puissance
28
le
il
est form de
plus employ est celui d'Abbe
Dans le premier cas l'ouverture num1
est de 1,20, tandis que dans le second
rique
elle est de 1,40 et permet ainsi d'avoir un cne
lumineux trs large. Ces appareils sont dits con:
trois lentilles.
^^'I|f^'l'i^|j'~T*^^A
m
iL_^ii-ia^U
CondensaFig. 2-2.
teur aplantique et
achromatique de
Leitz, ouv. num. 1,40,
pour la microphoto-
ou
le
fond
densateurs ordinaires, par opposition aux condensateurs achromatiques. Ces derniers (llg-. 22 et 2.3)
construits avec des lentilles doubles plus
gQj^j.
ou moins nombreuses, d'aprs le type des
objectifs immersion. Ils sont corrigs comme
ces derniers pour les aberrations chromatique
et sphrique et pour l'aplantisme. Ils sont gnralement pourvus d'un mcanisme de centrage.
Ces condensateurs s'emploient de prfrence pour
le
Fig. 23.
la
tion,
bien plus large, telle que les nuages blancs, car alors les rayons qui
partent de divers points de cette vaste surface se runissent pour agir
sur chaque point de l'objet. Pour le travail courant les condensateurs
ordinaires sont parfaitement suffisants-.
Voir, p. 49, la dfinition de l'ouverture numrique.
Au sujet des condensateurs consulter Belles Lee, La Cellule, XIX, p. 413-419,
1902; Nelson, The substage condenser, its histor^', construction and manage1.
2.
APPAREIL D ECLAIRAGE
Le diaphragme-iris
20
chaque
fois
insrait
Les dia-
diaphragme.
phragmes
au-dessous
ils
manuvre que
permettent
celle d'agir
Tout diaphragme-iris
lames d'acier
en croissant
ques.
est
tailles
et
imbri-
Chacune
de
autour de laquelle
,,
elle
(fig.
peut tourner
24),
tandis qu'
l'autre extrmit
elle
phragme-iris, pouvant
tourner autour d'un
point
fixe.
Original.
Fig-.
25.
rieur
ches
dans un tambour.
On comprend donc
les
l'ouverture centrale.
Dans certains cas, il peut tre utile de dplacer excentriquement le diaphragme, de manire obtenir un clairage oblique.
Ce dplacement s'effectue au moyen d'une crmaillre, visible dans
les figures 21 et 26, qui permet de faire glisser dans un plan horitambour qui renferme le diaphragme. L'clairage oblique
surtout utile pour rexamen des organismes ou corpuscules
zontal le
est
les
microscop.
Soc,
p.
90,
1891
Carpenter, The
microscope,
30
(p.
d'augmenter
neux oblique
et
en vidence
les
dtails des
mettre ainsi
plus
fins
organismes qu'on
examine.
Enfin
le
porte-diaphragme
mouvement
est indispensable
dans
Ensemble de l'appareil d'clairage des microscopes do Zeiss, avec condensateur Abbe deux lentilles, diac, condensaphragme-iris et miroir.
teur; r, vis de pression servant immobiliser le condensateur dans le manchon
qui le supporte p, tige servant manuvrer le diaphragme-iris; s, bouton
de la crmaillre qui lve ou abaisse
Au milieu de
l'appareil d'clairage.
la figure, en dessous du condensateur,
on voit le bouton de la crmaillre qui
Fig. 26.
permet d'excentrer
le
diaphragme-iris
Ce
mme
porte-diaphragme, des
verres oolors ou dpolis, un
le
polariseur, etc.
montre
La figure 21
le
porte-diaphragme
cart de l'axe opti-
ainsi
que.
L'ouverture
doit tre
l'iris
maxima
l'angle d'ouverture
densateur. Enfin
mode
d'avoir
de
au moins gale
il
du concom-
est
des
divisions
elles
la
rflchis
l'objet
trouve en
mm.
mum
effet
au voisinage du plan de
au dessus de
la lentille
l'objet observ,
suprieure
(fig.
59
et 60).
environ
Le maxi-
APPAREIL D'CLAIRAGE
31
l'appareil d'clairage
modles
vis
mme
ou
mouvement
la
simplement
une
main.
SOURCES LUMINEUSES
Avant d'expliquer l'emploi de
l'appareil d'clairage,
il
est nces-
saire
d'tudier
notre expos.
Lumire du
jour.
La condition
essentielle,
est
que
la
placer
la table
de travail contre
Quand on a
cerlainement celle du nord,
pas trs grande.
la fentre,
le choix, la
surtout
si
celle-ci n'est
soleil.
Lumire
avec lesquels
elle
est
souvent
prfrable la
histologique.
La
Cellule,
XIX,
p.
103- J33,
pi.,
1902.
32
a publi ce
sujet
commander spcialement
le
condensateur.
On
a d'ailleurs raison,
car les microscopes des grandes maisons spciales sont gnralement bien compris il vaut mieux les prendre tels quels si on est
incomptent dans la matire. En outre on utilise au hasard la
;
le laboratoire
ment mises en
pratique.
o on
travaille.
Aussi
se trouve l'observateur
suivant
le
mieux
la
source de lumire
artificielle
faisant
(p.
43
et
l'office
de
lentille.
On
de placer sur
le
Un
trs
colores.
APPAREIL D'CLAIRAGE
33
En
'
des rayons lumineux non orients, avec lesquels il est trs difficile
d'tablir un clairage microscopique correct.
Des micrographes de grande valeur et d'une incontestable autorit,
comme Bulles Lee (voir p. 44), considrent que le meilleur clairage
possible pour les travaux cytologiques est celui qui est fourni par les
lampes ptrole mche plate. Une lampe quelconque de ce modle
fournit un clairage suffisant, pourvu que la mche ait environ
12 millimtres de largeur et qu'elle soit taille en pointe obtuse, de
manire fourq.ir une flamme pointue. Pourtant les lampes verres
arrondis et renfls dforment un peu l'image de la flamme. Il est donc
prfrable d'employer, lorsque cela est possible, une lampe chemine
mtallique, munie en face de la flamme d'une fentre rectangulaire
garnie d'une lame de verre plane. On doit pouvoir employer volont
1.
La
2.
Chemiker Zeitung,
Cellule,
XIX,
M. Langeron.
p. 11, 1901.
Prcis de Microscopie.
34
Fappareil
de l'loignement de la source lumineuse dans le microslumineuse est en ralit le miroir plan ou concave
source
cope
ou l'ensemble form par le miroir et le condensateur.
deur
et
la
Supposons que
ra}q)areil
d'clairage
envoie
sur l'objet
des
que
soit la
cne dpend de
sa distance l'objet
dislance,
il
et sa
phragme.
Si, au contraire,
comme
c'est
le
la
cas
tandis
l'objet
APPAREIL D'CLAIRAGE
35
donnaient
source
la
la
comme
ou
sit,
s'ils
rapprochaient.
En rsum,
l'ap-
pareil d'clairage du
microscope a pour
but, au
moyen d'une
source
lumineuse
d'une
position
et
d'envoyer sur
un
faisceau
mme
lumineux de
mais sous
intensit,
forme de cne
ouverture.
large
doit
Il
aussi permettre
facile
gradation
une
et
tendue de l'ouverture et de
la
direction
de ce cne.
Aprs avoir
ces
principes
raux
de
la
tabli
gn-
Fis.
-27.
thorie
et
du miroir
concave.
de l'clairage par la
lumire
transmise,
T'U'Il
rayons non
utiles.
la signilication et l'emploi de
parties de l'appareil d'clairage.
miroir plan ou
le
chacune des
miroir concave et
le
plus souvent
tort.
Nous
le
condensateur.
36
l*"
Emploi du miroir
nons d'abord
la
(fig. 27)
lorsque nous connatrons leurs proprits, nous
pourrons en dduire leur mode d'emploi.
cave
Soit FF' une source lumineuse, par exemple l'ouverture d'une fentre,
PP' un miroir plan, ce' un miroir concave et
l'objet clairer. Le
rayon central fmO sera rflchi de la mme manire par les deux
miroirs, mais il y a de grandes diirences pour les autres rayons. Les
rayons envoys par les bords de la source lumineuse et rflchis par le
miroir plan ne peuvent clairer l'objet que s'ils proviennent de points
de ce miroir situs entre p et/)'. Ainsi le rayon Fa; sera rflchi dans la
direction xa, le rayon F'j, dans la direction yb. La source lumineuse FF'
fournit donc, par rflexion sur le miroir plan PP', un cne lumineux
dont l'angle d'ouverture est pOp'.
Le miroir concave ce' fournira, avec la mme source lumineuse, un
cne beaucoup plus large dont l'angle d'ouverture sera cOc'. En efl'et,
les rayons qui partent des points F et F' sont rflchis sur l'objet,
suivant les directions eO et c'O.
la
Pour que
lumire,
le
il
faudrait
la ligne FJ^^.
vis--vis
des cnes lumineux, troits, plus favorables Temploi des objectifs faibles; les cnes plus larges, fournis par le miroir concave,
conviennent mieux aux objectifs forts, qui demandent un faisceau
clairant grande ouverture.
interpos entre
donne
laissera
passer
On
ou
le
troit qu'il
sera
l'clairage, avec
mouvement
vertical.
37
APPAREIL d'clairage
utile
importance dans
soit
il
plus grand, on comprend que, pour mnager l'espace obscur,
souvent ncessaire de diminuer, par lusage des diaphragmes,
est
l'angle
d'ouverture
du
faisceau
clairant et de le rendre
bien
infrieur ce qu'il devrait tre pour remplir tout l'angle d'ouverture de l'objectif.
le cne d'clairage.
Lorsqu'on
n'emploie pas de diaphragme et que la source lumineuse est
d'tendue illimite, l'ouverture du faisceau clairant dpend de la
comme
le
cas,
le
miroir concave;
il
comme nous
le
certaines limites.
du microscope empche
miroir,
si elle
rfracts par le
l'arrive
en
est trop
double de l'angle limite (voir p. 48) pour l'air et le verre,, subiraient infailliblement la rtlexion totale (voir p. 48) or cet angle
;
est
la limite
de
la
prendre le miroir plan pour des objecmiroir concave pour les objectifs forts. Mais,
outre la largeur du faisceau lumineux, il est une autre condition
de l'clairage qui a surtout une grande importance avec les objectifs
faibles
et
le
38
lifs
faibles, c'est
la
ralisalion d'un
champ
iiiiirormment clair
la partie
de Tobjet
comme nous
meut,
distance qui
le
miroir plan donne un champ clair plus vaste que celui foui'ui
par le miroir concave. Ce dernier projette peu prs dans le
de
l'objet.
le
numrique
(voir p. 49).
On
aux
condensateurs. Nous savons que ces appareils ont une forte ouvertui'e numrique.
L'objet est ]dac au voisinage et un peu au-dessous de leur foyer suprieur. Dans ces i*onditions, les rayons que
condensateur reoit du miroir sont peu prs parallles; il
n'est donc pas ncessaire que ce dernier ait une grande surface.
le
Pour uLiliser compltement la grande ouverture numriciue des condensateurs (1.20 et mme 1.40), il faut interposer une goutte d'huile de
cdre immersion enlre la lentille suprieure et le porte-objet, de faon
empcher une partie des rayons lumineux de subir la rflexion totale,
au moment de leur passage du verre dans l'air. Cette prcaution est,
d'ailleurs, rarement indispensable et ne saurait avoir d'importance que
pour les objectifs immersion. En effet, les objectifs sec ne peuvent
admettre, mme dans les circonstances les plus favorables, qu'un cne
lumineux ayant une ouverture gale au plus au double de l'angle
limite pour le verre et l'air; or le condensateur fournit facilement un
cne de cette ouverture sans interposition d'huile de cdre. Ajoutons
que l'immersion du condensateur n'est rellement. efficace que lorsque
l'instrument a t spcialement calcul dans ce but.
APPAREIL D'CLAIRAGE
Pour
on emploie
tion.
39
rtrcir le
le
Ce diaphragme
est plac
condensateur.
L'emploi du condensateur
est
exigent un
atteindre 120. Avec ces objectifs, le foyer du condensateur doit se
trouver dans le plan de l'objet ou un peu au-dessus pour que
lorsque
la
tandis qu'il
et court,
source
lumineuse
est
le
cne projet
est large
est
(lumire
lorsque la
artificielle). Cette
rapproche
mise au point du condensateur assurera donc la pntration, dans
Tobjectif, d'un cne lumineux aussi large que possible.
Certains observateurs conseillent de limiter l'emploi du con-
focale, c'est-
mme
en abaissant
le
de
densateur
40
rage
mandons vivement
beaucoup
minimum
de
cette
temps
de fatigue oculaire.
plan.
APPAREIL d'clairage
41
En
pratique,
largeur du cne
manuvre, trs
il
faut,
pour toutes
clairant en
manuvrant
le
diaphragme-iris. Cette
Au
de structure
il
des objectifs
(p. 75),
les
contours
et
d'apercevoir
en tudiant
les proprits
42
(le
grande ouverture, augmenter dans certains cas la
puissance de rsolution des objectifs et distinguer de fins dtails
de structure qui restent invisibles lorsqu'ils sont clairs par un
faisceau de faible ouverture.
neux
RSUM DE
faible
tendue (lumire
artificielle,
troite).
2
le
Emploi du condensateur
condensateur toutes
mm.
Quand
et des miroirs.
fentre
On emploie
25
la
du condensateur, on
loigne
abaisse le condensateur au
et
diminuer
vertical
du condensateur ne
mment
clair
le
un champ unifor-
il
devra
APPAREIL d'clairage
43
en
obtenu
projetant l'image de la
L'clairage oplinuim
source lumineuse dans le plan de l'objet; pour la lumire du jour,
s'en assurer en amenant provisoirement dans le champ l'image
est
barreau de
d'un
la
fentre
cette
image
suffisant.
qu'avec
un
un
objectif
objectif fort.
2*^
une
une image de
la
source lumi-
On remet
observer.
3"
voici
maximum
et
le
se
fait
centrage
foculaire et on monte ou descend
oive de
comme
le
manchon lumineux. On
On remet
la
flamme ou du
ci-dessus.
et
que
le
champ
objectif plus
fort,
soit
bien
on relve
nuire l'uniformit
d'clairage du champ. La rgle est de toujours tenir le condensateur aussi haut que possible.
Lumire
Cette
artificielle et lentille convergente.
mthode permet d'agrandir beaucoup la surface de la
source lumineu.-e et d'obtenir un clairage aussi bon que la
lumire naturelle. Prendre une lentille ou un ballon de verre
de 15 centimtres au moins de diamtre et rem})li d'eau. Colorer
l'eau avec un peu d'eau cleste ou placer un verre bleu dans le
porte-diaphragme. Disposer la lentille entre la source lumineuse
4
excellente
44
et le
un
qu'on
travaille la
lumire
artificielle.
aussi parfaites
que
possible.
Il faut se servir d'une lampe ptrole mche plate, telle que celles
que nous avons dcrites (p. 33) et d'un condensateur achromatique et
aplantique aussi bien corrig que possible. Les becs de gaz manchon
g-enre Auer donnent une lumire excellente, mais l'image du treillis du
manchon
comme
colores.
idal, 'ne
On
est oblig
miroir plan.
du champ.
c)
Prendre
l'objectif fort
qui doit
APPAREIL D'CLAIRAGE
45
jamais en touchant au diaphragme, ni la crmaillre du condensateur. Il ne faut modifier l'ouverture du diaphragme que si on ne peut
obtenir autrement la nettet de l'image, mais le diaphragme ne doit
jamais servir modrer l'intensit de l'clairage. De mme, il ne faut
abaisser le condensateur que pour obtenir une vue d'ensemble de la
prparation, puis, pour l'tude des dtails, le remonter jusqu'au point
du maximum de nettet de l'image de la flamme.
6''
Emploi d'une lentille condensatrice devant la source
Cette lentille, fixe
lumineuse (Mthode de BoUes Lee).
demeure
la
il
faut
le
Timage de la llamme.
la flamme de la lampe doit se
a) Mettre la lentille au point
trouver son foyer principal. Pour trouver ce foyer, mettre un
:
de
la
mche de
la
lampe
et
chercher
fois la
pression.
la vis
de
CHAPITRE
IV
OBJECTIFS
L'objectif est un systme optique, form d'une ou plusieurs
lentilles, et, destin fournir une image relle de l'objet. Bien
les lentilles doivent former un systme centr, c'est--dire
que leurs axes optiques doivent concider exactement pour former
Taxe optique du systme. L'objectif est viss la partie infrieure
du tube, soit directement sur ce dernier, soit sur un revolver ou
entendu,
un cbangeur
L'image
coulisse tels
relle fournie
par l'objectif
est
observe au
moyen de
du tube
elle est alors
agrandie et transforme en image virtuelle. La nettet de cette
dernire dpend donc essentiellement de la qualit de l'image
l'oculaire
plac
la
partie suprieure
si
OBJECTIFS
47
l'angle form par les rayons qui limitent le cne lumineux mis
par un point donn. On obtiendra donc l'angle d'ouverture en runissant par des lignes droites les bords de la lentille au point dont elle
doit former l'image.
c'est
Fig. 28.
natre l'tendue de la modification apporte cet angle par un diaphragme, il suffit de construire l'image du diaphragme forme par la
lentille diaphragme. Comme le diaphragme est presque toujours situ
prs de la lentille et en dedans du foyer, cette image sera virtuelle et
agrandie.
Il
suffit,
le
point
sera epe
Cette
lentille
image
ou
le
d'entre.
le diaphragme est plac entre les lments d'un systme de
l'image forme par les lentilles qui se trouvent en arrire de
ce diaphragme donne la mesure de l'angle d'ouverture du systme.
Lorsque
lentilles,
48
Fig. 29.
Original.
49
OBJECTIFS
Ouverture numrique.
nom
il
est
sur ce
cne
milieu, est constant pour un mme cne lumineux, quel que soit
le milieu travers. C'est ce
produit qu'Abbe a dsign sous le
nom
a:=: nsin.u,
Nous reviendrons'plus
en tudiant
les qualits
maintenant qu'elle
puisque c'est de l'ouverture
qualits les plus essentielles.
un mme grossissement,
En
crot
comme
et le
Prcis de Microscopie.
le
carr de l'ouverture
50
inversement
proportionnelle
cette
toutefois
n'est
grandeur.
vrai
Remarquons
que pour
les faibles
Champ.
d'un objet fournie par une lentille; en dehors de ce cercle uniformment clair et dont l'intensit lumineuse est proportionnelle l'angle
d'ouverture de la lentille, l'clairement de l'image diminue progressi-
phragme destin
diminue progressivement.
lesquelles l'clairage
Nous retrouverons
des oculaires
(p. 93).
frontale de l'objectif
microscope,
les
dissections ou
profondeur
permet l'exploration en
de
coupes ou
de
d'organismes en
variations
dpend
la
les
dislanc focale
(p.
4),
dont
d'ailleurs.
En
ralit,
la
frontale
ou
maxima
angle d'ouverture.
les lentilles
il
distance
et leur
les
jusqu'ici
systmes de lentilles
OBJECTIFS
51
un
objet,
en traversant
les lentilles
ou
les
systmes de
lentilles.
nettet, parie
mme
les
que
d'autre
part,
colores dues
bords de
les
ce qu'on
point, c'est
ce
que
l'image
les
lentilles
sont
entours
dcomposent
de
la
bandes
lumire
les
trs limit
En
effet la
luminosit
la lentille,
ce
On remplace
les lentilles
On
prsentant individuelle-
moindre que
de diriger
la
face plane
du ct de
l'objet observer.
Le moyen
le
lentilles spliri(iues
52
On
manire
l'autre.
tisme,
tisme.
1
Aberration de sphricit.
se
en ce que
les
ou moins loigns
Cette figure montre la fois l'aberration de sphricit et la correction par dfaut. Les rayons marginaux aa et a'a' coupent l'axe plus prs de la
lentille que les rayons centraux hb et b'b'.
Original.
Fig. 30.
OBJECTIFS
53
Nous avons
dit
forte;
mais
il
intervient
en gnral,
est,
est
l'indice
distance
d'une
lentille
En
de
effet la
Fig. 31.
pour une
focale.
l'indice
mme
que
les
L'aberration
de rfraction
est
qu'on
utilise
mme
longueur
et
mais de sens
fonctionne
comme une
lentille
il
sphricit.
Dans certaines
conditions, au lieu de rechercher un aplanlisme parfait, on ne corrige que partiellement l'aberration sphrique.
Deux
54
\'^
correctrice de la
L'action
lentille
de
la lentille
2
(fig.
Dans
que
le
30), parce
que l'aberration de
la
lentille
compltement corrige.
Jusqu'ici, nous n'avons considr que les points situs le long
de l'axe optique. Mais il ne suffit pas, pour obtenir de bonnes
images, de compenser l'aberration pour ces points; il faut encore,
autant que possible, supprimer Taberration pour tous les rayons
compris dans les limites de l'angle d'ouverture, quelle que soit
leur direction.
ment
On
soit la perfection
Quelle que
il
images pratiquement nettes, sinon thoriquement, d'abaisser aule diamtre des cercles de dispersion pro-
maxima.
Aberration chromatique.
t ralise la correction
2*'
ou aberration de
sphricit,
L'aberration
comme
chromatique
l'aberration de
JVlais
frents rayons
du spectre suivant
plus
OBJECTIFS
55
cette dernire est courte, plus les rayons sont dvis. Les rayons
qui composent
la
extrmes.
Il
forme par
la
lentille
est
Finr. 3-2.
pas la
mme
grandeur.
Original.
de l'image totale
gal celui des rayons du spectre. Les bords
seront donc indistincts et entours de franges colores; en dedans
elles
une image
totale
lentille
agit
Nous avons dit que l'aberration chromatique ne dpend pas seulement de la courbure de la lentille, mais encore de la nature du verre
56
(le
'
(Orang.)
(Violet.)
Flint-glass
1,6277
1,6350
1,6711
Crown-glass
1,5243
1,5280
1,5447
chromatique de
possible par
d'une
les propiits
dit
est
la
lentille
la lentille
convexe
soil
lentille
convexe.
On
ralise ainsi
un systme
employ aujourd'hui.
Pourtant cet achromatisme n'est jamais parfait. En ellet. le
mme pour
pouvoir dispersif du crown et du flint n'est pas le
toutes les longueurs d'onde, aussi un systme de lentilles pour
des silicates doubles de potassium et de calcium
pour le cristal.
de potassium et de plomb,
Le
riche en oxyde de plomb. C'est donc un verre dense et trs rfringent; il est
plus riche en plomb que le cristal ordinaire. Son pouvoir dispersif est trs grand.
Le crown-glass est, comme le verre de Bohme, un silicate de potassium et
de calcium, mais il est plus riche que ce dernier en potasse et en chaux, il est
1.
pour
On
sait
que
moins rfringent
et
le flint.
OBJECTIFS
57
Lorsque
la partie
Pourtant on
parfait
et
rayons
de
les objectifs
achroma-
runir en un
trois
couleurs.
On
arrive ainsi supprimer presque compltement le spectre secondaire. Les objectifs ainsi construits sont dits apochromatiques^
Les verres gnralement employs en optique depuis une vingtaine d."anes
par Schott et C'^ d'ina prsentent deux ordres d'avantages 1*^ les
rapports entre la rfringence et la dispersion sont beaucoup plus varis, c'est
ainsi que certains crown peu dispersifs sont aussi rfringents que duHint;
'* les verres
prsentent une proportionnalit bien plus accentue de la dispersion pour les ditlrentes zones du spectre. Par suite de ces qualits, ils permettent de raliser un achromatisme beaucoup plus parfait. L'addition d'acide
phosphorique et borique en quantits dtermines est un des principaux facteurs
1.
et fabriqus
de ces amliorations.
58
nous
les
ces
due
tement dtermin de
de l'image
l'objet et
dfauts reparaissent.
En de
et
au del
les
prits
appareils
c'est--dire facult
de dis-
ce pouvoir
tinguer les plus fins dtails de structure des objets
dpend surtout de l'ouverture numrique et non du grossissement,
:
comme nous
le
Pouvoir dfinissant,
La
ralisation de ces
(p. 63).
images
le
la
but du micros-
les plus
de structure des objets.
On parle souvent aussi du pouvoir pntrant des objectifs
microscopiques, qualit qui est surtout recherche par les dbutants, et qui permet de voir simultanment et avec nettet plu-
fins dtails
qu'aux
mme
objectifs faibles;
comme
elle
dpend de
l'troitesse
de
l'angle d'ouverture, elle se trouve tre oppose au pouvoir rsolvant. En ralit le pouvoir pntrant n'a qu'une importance trs
secondaire, car
dans une
Nous
la
manuvre de
trs large
dirons
la vis
micromtrique
le
compense
mesure.
mme
le
dfaut apparent de
plus prcieuse de l'objectif, puisqu'il permet non seulement d'tudier les contours, mais de connatre la situation relative des diffrentes parties d'un objet, de le
pntration est
la qualit
la
1.
la vis
micromtrique
et
d'en
59
OBJECTIFS
pourtant un cas o la pntration est une qualit impor(fun objectif microscopique, c'est en microphotographie.
est
Il
tante
Dans ce
en
cas,
effet,
incessante de
la vis
forts
la
manuvre
donc
un grand
par
micromtrique.
soit
grossissements et
objectifs
est
paisses.
la
cette vitesse
par
la
est
mesure
la
longueur
qu'on dsigne
grecque a. Dans la
quantit
lettre
plitude de la vibration et AB la
longueur d'onde, c'est--dire l'es-
par
la lettre
A.
60
Raie
61
OBJECTIFS
"A
Lb
Fig. 36.
pure.
Figf, '61.
Franges intrieures
extrieures
corps
trs
produites
mince CC.
par
et
un
Ori-
ginal.
Original.
elles sont
dues
Toutes
mais
les
celles-ci
Thorie d'Abbe.
62
eux-mmes
mmes.
par
el
celle
des
corps
non
lumineux
par
En ce
eux-
qui
concerne
les
elles.
L'image d'un point lumineux fournie par une lentille sera donc
forme d'un point central trs lumineux, entour de cercles de
diffraction dont Tinlensit lumineuse dcrot trs rapidement.
L'tendue de ces cercles dpend de l'angle d'ouverture de la lentille et du diamtre du diaphragme. Gomme les longueurs d'onde
sont des fractions de millime de millimtre, avec
un diaphragme
l'il
S'il
diffraction.
Donc, d'aprs Abbe, dans le cas des corps lumineux par euxmmes, l'image se forme point pour point, suivant les lois de
l'optique gomtrique.
Image
des corps
secondaire.
Les conditions de formation de l'image sont ici toutes diffChaque point de l'image de l'objet est form par la convergence de rayons provenant de tous les points de la source
rentes.
OBJECTIFS
63
de
l'objet.
donn
la
Celle-ci est
que
le
pouvoir rsolvant, ou pouvoir de rendre visibles les strucdpend en premier lieu de l'angle d'ouverture de
tures fines,
V objectif. Plus cet angle est grand, plus sera grande la portion
de l'image de diffraction, produite par la structure donne, qui
pntrera dans le microscope.
Au point de vue optique, un rseau est constitu par une srie d'espaces alternativement transparents et opaques, excessivement rapproclis les uns des autres et rg-ulirement distribus. 11 faut qu'il y ait
au moins 40 divisions par millimtre. La lumire, en traversant un tel
rseau, produit des phnomnes de diffraction caractriss par l'apparition de spectres trs purs qui prsentent un caractre particulier
en
effet le violet y est moins dvi que le rouge, aussi, ces spectres sont-ils
violets en dedans et rouges en dehors.
On peut se rendre compte d'une manire trs simple de ce qu'est un
rseau; il suffit pour cela de rapprocher les paupires de manire
entrecroiser les cils. Ces derniers forment alors un vritable rseau. Si,
dans ces conditions, on regarde la llamme d'une bougie ou d'une lampe,
on apercevra une lueur horizontale due aux rayons diffracts et on
pourra mme voir ds spectres assez nets. Un autre exemple de rseau
est fourni par le Pleiirosigma angiilatum (fig. 103), Diatome qui sert de
test-objet, dont nous aurons parler frquemment dans la suite. Si on
place une prparation de Pleurosigma entre l'il et une source lumineuse
en ayant soin de l'incliner convenablement, on voit apparatre successivement toutes les couleurs du spectre au fur et mesure qu'on loigne
oa qu'on rapproche l'il. Chacune de ces Diatomes couvertes de fines
stries fonctionne comme un rseau et fournit des spectres de diffraction.
Les irisations de la nacre et des plumes de certains Oiseaux sont dues
aussi des phnomnes de diffraction.
:
Images de
diffraction.
En
ce
qui concerne
le
micros-
64
se servant
titue par
de
ii
la
lame de
lame
est cons-
sde
double, soit 140. Ce rseau est bien conforme la dfique nous avons donne plus haut il est form d'espaces
le
nition
38.
Reprsentation simplirie
de la lamelle centrale de la lame de
diffraction d'Abbe.
Oriyinal.
Fig.
Fig. 39.
un
fort clairage et
On met
test.
OBJECTIFS
65
est plac
140
stries
diffraction
ct de l'image centrale
moins de spec-
deux
fois
tres
de diffraction
la
verse de
spare
seau.
la
les
distance qui
lignes
du
r-
exprience nous
nettement la
production de l'image de
diffraction de la source luCette
montre
^'
Fig. 40.
trs
On met
(fig. 103).
blanche
circulaire
et,
Fig 41.
Reprsentation schmatique du faisceau direct {dd) et des faisceaux diffracts
(r, r, produits par le Pleurosigma angulatum.
Original.
priphrie du champ,
6 spectres de dilfraction dont les couleurs sont d'autant plus nettes que
l'ouverture du diaphragme est plus petite (lig. 40). Bien entendu ces
spectres sont rouges la priphrie. Les trois systmes de stries du
Pleurosigma agissent comme un rseau de diffraction; ces trois systmes,
en se coupant, donnent des figures hexagonales qui se traduisent par
la
6 spectres,
Images secondaires.
la
trois
systmes de
le
stries.
micros-
Prcis de Microscopie.
66
rayons mis
Le calcul permet
nous venons
d'tablir
ne pntre pas dans l'objectif au moins un spectre de diffracen plus de l'image blancbe directe de la source lumineuse.
s'il
tion
la figure
faisceau
dd reprsente
les
De chaque ct
fract,
tandis
dans lequel
que
les
structure. D'autre part, l'angle que les faisceaux dilTracts forment avec l'axe optique est d'autant plus ouvert que la structure
Un cne plus large ne fera que rendre l'image indistincte en faisant pntrer dans l'objectif des rayons autres que ceux qui prol'objet. Nous trouvons ici une nouvelle preuve de l'utidu diaphragme-iris qui permet de rduire le cne d'clairage
viennent de
lit
(p. 40).
lois se
les
OBJECTIFS
67
aux lig-nes du rseau. L'oculaire tant enlev, on ne voit que les faisceaux centraux blancs, sans aucune trace de rayon diffract. L'oculaire
tant replac, Timaie du rseau apparat comme une surface claire, sans
qu'aucune ligne soit visible. Pour faire apparatre ces lignes, il faut
la
Fig. 42.
oculaire.
Original.
la
Fig. 43.
oculaire.
Original.
orienter le
la
Fig. 44.
oculaire.
Original.
Fig. 45.
la
lame de
oculaire.
Original.
68
la faon la plus
des
de
plus en plus
employant
diaphragmes spciaux
troits, qui diminuent l'angle d'ouverture de l'objectif, on diminue
en mme temps le pouvoir rsolvant du microscope. Cette dimi-
nette qu'en
la
si
jectif.
5* exprience.
Prendre le diaphragme trois fentes rectangulaires,
et l'orienter comme plus haut, paralllement au rseau. La fente cen-
69
OBJECTIFS
netlel de
prendrait pour la reprsentation d'une structure relle. Cette apparence est d'ailleurs conforme la thorie et poucette imaize et la
lit
des choses.
W- exprience.
4 spectre du
tangulaires, mais disposes de manire laisser passer le
deux
gros rseau et le 2^ speclre du rseau fin, on verra alors apparatre
fois plus de lignes que dans l'exprience prcdente, c'est--dire que le
Fig. 48.
la
oculaire.
rseau
fin
la
Fig. 40
oculaire.
Ot-irjinal.
paratra doubl et
le
Oriijinal.
le tout
donnant
fines stries.
fictives, tandis
que
les
deux premires
faisaient disparatre
des stries relles. Ces deux sries s'accordent pour vrifier l'exactitude de la thorie des images de diffraction d'Abbe. La seconde
srie doit mettre
d'optique dont
ils
On peut faire
trouvent tracs sur les deux autres lamelles de
tion.
losangiques,
l'autre de
mailles
la
croiss, l'un
rectangulaires.
lame de
diffrac-
form de mailles
Au moyen
de
70
Des
fait
d'Abbe pourTtude
Il
mme
c'est--dire dpassant de
pour
les objets
beaucoup
les
p.
relativement volumineux,
dimensions de
60
la
longueur
de ces longueurs
suffisent former
la table
d'onde).
diffracts.
Nous n'avons
les lois
Il
peut tre difficile d'tades images ll'tendue
de
la
et
tels
pour
disposition
objets,
mentaires de ditraction; mais il subsiste toujours, comme rgle
gnrale, que le faisceau de diffraction doit faire, avec le fais-
blir,
OBJECTIFS
71
noncer
une
fois
de plus
cette loi
le
empiriquement Timportance de Tangle d'ouverture, mais on n'arrivait pas comprendre pourquoi, dans certains cas, il fallait, pour
obtenir des images plus parfaites, employer des cnes lumineux
relativement troits.
Il
lement de l'ouverture de
une
partie seu-
de fonctionner
Ce fait paraissait en complet dsaccord avec la ncesd'un grand angle d'ouverture pour obtenir une bonne rsolution. On sait maintenant que les faisceaux de diffraction tombent
utilement.
sit
cette qualit
indpendante du grossissement. 11 est facile de prouver exprimentalement qu'un objectif donnant un grossissement considrable
peut rsoudre moinsbienles fines stries qu'un autre objectif de grosest
avec un
la
optiques.
mesure de
la
valeur des
combinaisons
Limites de la rsolution.
La thorie de l'image secondaire
nous amne rechercher quelle peut tre la limite du pouvoir
rsolvant, c'est--dire
la
tement des
stries.
On
72
Schwendener ont
moyenne de 0,5
[jl
table
est
celte
qui
suivre.
CARTEMENT EN
DES STRIES A RSOUDRE
[i.
tabli
la
OBJECTIFS
73
C'est ainsi ([ue la photographie permet d'employer les rayons ultraviolets, dont la longueur d'onde est de 2.750 A, et d'obtenir des dtails
que l'il ne peut percevoir avec ies rayons de g-rande longueur d'onde
auxquels il est seulement sensible (mthode de Khler i). On peut arriver
ainsi abaisser la litnile de rsolution de
5
4. lltons-nous
de dire que ce procd est plus thorique que pratique et qu'il n'est pas
sans prsenter de grandes difficults, sur lesquelles nous reviendrons
plus loin (p. 79). Mentionnons ds maintenant la ncessit de se servir
uniquement de lentilles, de lames et de lamelles en quartz, car le verre
ne laisse pas passer les rayons ultra-violets. La source lumineuse doit
tre une tincelle lectrique jaillissant entre des lectrodes de cadmium
ou de magnsium ou une lampe vapeur de mercure en quartz. La
mise au point se fait l'aide de verres fluorescents, qui rendent visibles
les ravons ultra-violets.
En outre, on ne peut employer qu'une zone dtermine du spectre
ultra-violet, car, au-dessous d'une longueur d'onde de 2.000 A, les rayons
ne peuveni traverser l'air.
[jl,
\j.,
11
y a un moyen beaucoup plus simple de diminuer la longueur
d'onde des rayons lumineux. Il consiste les faire passer, avant
leur entre dans Tobjectif, non dans Pair, mais dans un milieu plus
longueur d'onde des rayons qui traverseront ce liquide sera raccourcie de deux tiers. Pour des stries distantes de
u, 5 il suffira
d'un angle de 42 pour que le premier faisceau de dilraction
pntre dans l'objectif. En employant comme liquide d'inmiersion
'J-?
24.
On
'
1,DD
lions, arriver distinguer des stries distantes de
Emploi
Un bon moyen d'augmenter
d'artifices d'clairage.
a, 24.
a) clairage oblique.
puissance de rsolution des
objectifs est d'employer l'clairage oblique. Si, au moyen de la
crmaillre reprsente fig. 26, on dplace latralement le porte-
diaphragme de
1.
Zeitschrift.
f.
l'appareil
iciss.
la
d'clairage,
on peut arriver
rgler
74
que le faisceau lumineux direct qui traverse Tobjel soit tangent au diaphragme de robjeclif aprs rfraction parla lentille. Dans ces conditions, il pntre encore dans le
microscope, et sous le mme angle, un faisceau de diffraction.
l'clairage de telle sorte
oblique
blanche du faisceau direct se trouve au milieu de l'image de diffraction et est entoure des
deux
de
cts
diffraction.
l'clairage
Au
spectres de
contraire, avec
oblique,
l'image
au
bord
du champ
visuel;
les
un des
cts
s'tendre sur
Fig. 50.
Aspect des spectres de diffraction fournis par le Pleurosigma angulatum
en lumirre oblique; d, faisceau direct.
Original.
peuvent donc
un espace deux
Il
est
d'observer
facile
phnomnes
soit
avec
de diffraction d'Abbe,
ces
la
lame
soit
avec
rique soit assez grande pour qu'avec l'clairage central le premier faisceau de diffraction tombe en dehors du champ, mais pour qu'il apparaisse
ds qu'on passe Tclairage oblique. On commence par retirer l'oculaire pour se rendre compte de l'apparition et de la disparition de l'image
de diffraction, suivant que l'clairage est oblique ou central. Ensuite on
on remet l'oculaire et, en regardant la prparation, on ne distingue aucun des deux systmes de stries. Si, maintenant, on dplace le cne lumineux, dans une direction perpendiculaire
aux stries longitudinales, de faon ce que le premier faisceau de diffraction pntre dans l'objectif, on voit immdiatement apparatre les
7o
OBJECTIFS
stries
le
porte-diaphragme de
90,
b)
trs large
de rsoudre certains dtails de structure qui, avec un cne lumitroit, ne seraient visibles qu'en lumire oblique. En effet,
neux
dans
le
et
marginaux
diffracts
naphtaline
et la
stries distantes
u, 24.
Avec
m.aximum de rsolution
-et
que
les
76
pelile
dimension,
En
ncessaires.
les
elTet,
un grossissement
les
faible,
fins dtails
11
faut
le
IHeurosigma
de se procurer dans toutes les maisons de microscopes, fournit un moyen trs simple de contrler le
pouvoir rsolvant des objectifs puissants. Ce test devra montrer,
en enlevant l'oculaire aprs la mise au point, six spectres de difqu'il est trs facile
angulatum,
fraction correspondant
la
figure 40.
aux
Mme
trois
si
systmes de
comme
stries,
l'in-
le
dique
grossissement
bien distinguer les stries, la prsence de six spectres et la rgularit de leur disposition permettront de conclure la qualit de
l'objectif.
les objectifs
les
objectifs
Objectifs achromatiques et
apochromatiques. Comme
nous l'avons dj dit plus haut (p. 57), ces deux catgories d'objectifs ne diffrent que par une correction plus ou moins parfaite des
aberrations de
sphricit
et
obtenue au moyen de
lentilles
composes,
for-
mes de verres spciaux, possdant des pouvoirs rfringent et dispersif appropris. On arrive ainsi diminuer dans une large mesure
systmes de lentilles.
Malheureusement, ces deux ordres de correction ont une tendance
s'annuler rciproquement. Aussi est-on oblig de sacrifier un peu
l'aberration de sphricit dont les inconvnients sont moins grands
si le
champ
est
par l'emploi de
chromatique
nuit
77
OBJECTIFS
irise
donc
Dans
entoure
elle
les
images.
C'est
les
achromatu/ues^
objectifs
correction du spectre
la
mme
les raies
ment
encore
les qualits
d'achromatisme.
chromatique
est
pour
diffrente. Les
nouveaux verres
Ce minral prsente les avantages suivants 1 une grande transparence; 2^ un indice de rfraction trs faible (1,4339); 3" une
:
dispersion relative trs faible (reprsente par 97, alors que les
verres utiliss en optique n'ont pas moins de 66,5 67) ^ Il remplace donc avantageusement l'ancien crown-glass. En combinaison
le flint ordinaire, il produit une dviation secondaire exacte-
avec
ment oppose
conditions, une
celle
lentille
forme de fluorine
et
de
flint
pourra cor-
riger compltement
spectre secondaire d'un systme ordinaire
de lentilles. De plus, en associant la fluorine avec un flint trs
peu rfringent, on obtient une combinaison qui corrige trs bien
le
la fluorine
tement proportionnelle.
1.
zum Gebrauch
bei mik7^oskopischen
78
subsiste plus
qu'un spectre
faible,
supprimer
tertiaire
la
spectre secondaire
cFun clat
il
ne
trs
Il
le
trs petit et
ces
suprieur que
objectifs
fournissent des images peu prs galement nettes pour tous les
comme toutes ces images ont pratiquement
rayons du spectre
:
mme
ainsi
correction plus
la
outre,
parfaite
d'utiliser plus
une augmentation du pouvoir rsolvant. Ace point de vue, lesapochromals se comportent comme si leur ouverture numrique
tait
un grossissement par
les objectifs
objectifs supporte
que pour
achromatiques.
semble.
et,
On
dans ce
En
les rserve
cas,
matique de raberration de sphricit. Puis, malgr la concidence presque parfaite des rayons de diffrentes couleurs, il y a
toujours des carts entre les distances focales de ces couleurs.
Pour attnuer
rieures
et,
le
pour
On
premier dfaut,
effacer le second,
il
il
on conserve une
non achromatique, de manire ne pas diminuer
l'ouverture du systme. Il en rsulte que les images bleues sont
un peu plus grandes que les images rouges par consquent les
rieures.
lentille frontale
OBJECTIFS
/9
champ seront un peu colors et les objets opaques paracette zone, entours d'un lisr bleu en dedans et jaune
dans
tront,
rougetre en dehors. Pour obvier cet inconvnient et compenser
ce reste d'aberration chromatique, on se sert d'oculaires particubords du
liers,
dirons
et
de
mme excessif,
la raret
en outre de
secondaire
de
la tluorine
faire
et la
spciaux
comme
objectifs
cas
*.
Les objectifs monochromatiques, calculs par Rohr et Ivhler, et fabriqus par Zeiss, sont uniquement destins la photographie en lumire
ultra-violette, avec des rayons de longueur d'onde de 2750 A (0 p., 275). Nous
avons dj indiqu (p. 72) l'emploi des rayons de faible longueur d'onde
comme un moyen de reculer les limites du pouvoir rsolvant des objectifs. Les monochromats de Zeiss possdent une ouverture numrique
maxima de 1,25, mais, grce l'emploi des rayons ultra-violets, le plus
celui
puissant de ces systmes possde un pouvoir rsolvant gal
d'un objectif ordinaire dont l'ouverture numrique serait de 2,5, chilre
d'obtenir actuellement. Ces objectifs sont dits
qu'il est impossible
monochromatiques, parce qu'ils sont corrigs pour des rayons d'une seule
moins
longueur d'onde. Ils ralisent pour ces rayons un aplantisme au
gal celui des apochromatiques.
Ces objectifs sont d'un prix excessivement lev (le plus fort systme
immersion vaut 750 francs). Les lentilles sont en quartz fondu -,
seule substance qui soit permable aux rayons ultra-violets. Les ocu1.
Se mfier des objectifs dits semi-apochromatiques ou panachromatiques
annoncs dans certains catalogues. Ces dnominations, qui n'ont rien de scientiil est bon d'tre mis en garde.
fique, ont un caractre de rclame contre lequel
'2.
On ne peut employer
le
il
est
80
tre aussi
interpos entre
objet.
Dans
la lenlille
l) est
immersion.
Les
objectifs
du milieu
rfraction (n
immersion
trs
dilrent de Tindice
moyen du
verre
Au
l,5).
rapport
l'axe
dpasse
la
rflexion
totale
(82).
frontale et
la
ncessaire de
le
Dans ce
entirement supprimes
XLVI.
1903).
la fusion
(procd de Herschkowitsch,
OBJECTIFS
treiit
celles
81
d'viter la
riorit
unes sont montes sec, dans l'air, simplement entre lame et lamelle;
les autres sont montes dans le baume. On peut ainsi passer facilement
d'un groupe Tautre. Examinons-les avec un objectif immersion: il
est clair que, pour le premier groupe, l'objectif immersion fonctionnera comme un objectif sec, puisque dans ce cas, grce la prsence
de Tair entre la lame et la lamelle, cette dernire fonctionnera en ralit,
comme
les
montes dans
devient un
et
immdiatement
le
champ
les
et brillant.
Diatomes
la
le
il
est
em-
de
1.
mme
puissance.
On
a figur
M. Lan'geron.
Prcis de Microscopie.
cf. p. 46.
82
les deux cas en une mme ligure. Soil un rayon lumineux ABCD,
il est rfract, se
pntrant en B dans la prparation
rapproche
ainsi de la ligne mdiane MM' et suit dans le verre la direction BG.
:
En G
il
quitte le verre pour passer dans l'air et est de nouveau
rfract dans la direction GD. Il ne peut donc atteindre la lentille
frontale de Tobjectif sec. Le rayon EBG'FG qui possde exactement la mme incidence n'est rfract qu'une fois, son entre
dans
la
prparation, en B.
Il
la
lentille
frontale,
pour
On
moment
de
mme
incidence
de son passage de
la
LBM
subit la
lamelle dans
l'air.
mme
puissance.
OBJECTIFS
sio devient absolument ncessaire
samment lumineuse
83
suffi-
tion.
sion.
de cdre, ayant
trs
peu
mme
indice de rfraction que le verre, les rayons lumitraversent un milieu optiquement homogne. L'indice de
le
neux
n
1,515; celui du verre des
de l,oi5; celui du verre des lames et lamelles
est environ de 1,520. Pourtant les huiles de cdre de diverses
rfraction de l'huile de cdre est
Ces
les
objectifs
immersion
beaucoup
plus employs.
D''
84
densateur de
que
les
rsoudre.
Emploi des
objectifs
immersion.
loin, en parlant de l'emploi du microscope (p. 163), quelques conseils pratiques sur la manire d'employer les objectifs immersion-
o les forts objectifs sec sont plus comdispensent de l'emploi du liquide d'immersion. Un
micrograpbe exerc saura tirer parti de l'appareil d'clairage et
obtiendra, avec un bon objectif sec, d'aussi bons rsultats qu'avec
rimmersion. Nanmoins l'emploi de l'immersion est conseiller
Pourtant
il
modes, car
ils
majorit des travailleurs et des dbutants, car il est assez diffide trouver de trs bons objectifs sec puissants et encore
plus difficile de s'en servir utilement.
la
cile
Pour
Influence de la lamelle. Objectifs correction.
de la lamelle a une importance beaucoup plus grande qu'on ne le croit gnralement. Ces
les objectifs sec puissants, l'paisseur
85
OBJECTIFS
^ig.
5-2.
Influence de
l'paisseur de
la
couper Taxe en des points d'autant plus loigns les uns des autres que
lamelle est plus paisse
c'est ce que montre l'vidence la comparaison des deux moitis de la (igure.
la
Il
le
foyer
Touverture de Tobjeclif
est
plus grande.
Les
rayons
externes
lentilles
On
que,
de corriger l'aberration de
sait
en
elfet
86
d'augmenter
de la lamelle est plus grande.
Dans
muni de
sur
l'paisseur de la lamelle
pour laquelle on
correction
doit
les
faite
pour
toujours
objectifs qui
[)Ossdeid la bague de correction. Une ngligence ce point de vue altrerait considrablement l'image
une
Fig. 53.
Objectif
correction de Zeiss.
En tournant
la
.
xj
uj
n
Mensuration de 1 paisseur des lamelles.
Pour effectuer la correction, il est ncessaire de
bague de correction
on
tries,
nombre de lamelles.
Une autre mthode consiste
par
et
le
tte
ou
le
tambour de
la vis
87
OBJECTIFS
approche de n.
Enfin Czapski
a indiqu une mthode trs prcise pour valuer
exactement l'paisseur de la lamelle d'une prparation. On prend,
comme terme de comparaison, trois ou quatre lamelles, dont on a
dtermin l'paisseur exacte au moyen du calibre. On les mesure au
moyen des divisions de la vis micromtrique, sans s'occuper de la
valeur de ces divisions, puis on divise l'paisseur relle de ces lamelles
par les chiffres obtenus pour chacune d'elles. La moyenne des quotients
donne un coefficient qui servira pour corriger toutes les mesures faites
avec la mme combinaison optique, la mme longueur de tube et le
'
mme
clairage.
on ne peut connatre l'paisseur de la lamelle, on tablit la correction par ttonnement en tournant lentement la bague dans un sens ou
dans l'autre, tout en regardant dans l'oculaire. On arrive ainsi trouver
le point ({ui donne pour
l'image le maximum de nettet.
Si
immersion
pourrait nuire
la
len-
trique.
Ce
comme beaucoup
de dbutants
le grossissement,
mais bien complter
augmenter
le croient,
la correction des
objectifs. Dans le cas des objectifs sec, le tirage
sert particulirement compenser l'paisseur des lamelles
on le
:
Zeitschr.
an
fertigen
Prparaten,
88
100
120
a).
trs
Il
dans
la
indique
position
par
la
mcamonture
le
le a*
luobile
bague
les
^q^^j.
correction
^^-^
obtient
mme
ocu-
simple au
double. Ces objectifs sont trs prcieux pour les dessins qui doivent tre excuts un trs faible grossissement.
mm.
9, 1
mm.
8,
Les objectifs apochromatiques sont tous dsigns par leur distance focale exprime en millimtres et fractions de millimtre.
On
dit,
1,5
mm.
La connaissance de
la
89
OBJECTIFS
ment
le
250
le
On
est quelquefois
trs
mm. de
distance focale,
^ 62,5.
dance entre
ou
le
les objectifs
objectifs
Ainsi
le
et le
que
le
7 de Leitz
Le
1 a toujours
les dissections
et
un
trs
long foyer:
dissociations, les
il
dessins
un
faible
grossis-
il
peut dj tre associ
revolver des objectifs plus forts. 11 faut
;
commodment sur un
commode pour
et
faire partie
Il
et,
en gnral, tous
les
travaux de topogra-
grossies.
90
les plus
botaniques.
Nous ne conseillons pas remploi des numros 8 et 9. Ces objectifs sont
toujours peu lumineux et donnent souvent des images
il est
prfrable, en gnral, d'employer les objectifs immersion. Il faut cboisir un numro fort
parmi ces derniers, 1/lSJ au moins. Le 1/15 est prfrable et le
.
Objectif faible
sec de Leitz.
Fig.o.
Fig. 56.
1/16 est encore d'un emploi trs pratique. Nous reviendrons d'ailleurs sur celte question, en traitant du choix d'un microscope.
Les figures 55 57 reprsentent la section de trois types d'objectifs achromati({ues.
Dans
la
figure
moyen
il
est
ou
tale
les
mme, dans la
sion
homogne,
hmisphrique
entre
la
un type
d'objectif
immer-
le
grossissement
et
par
la lentille
OBJECTIFS
Table de concordance
des objectifs de Zeiss, Leitz et Stiassnie.
Numro
I
Longueur
focale.
oc
a"
Ouv. numrique.
Numro
Longueur
focale.
Ouv. numrique.
Numro
Longueur
Longue
focale
91
92
Table de concordance
des oculaires de Zeiss, Leitz
et
Stiassnie.
CHAPITRE
OCULAIRES
L'oculaire du microscope est form de deux lentilles, simples
ou composes, gnralement spares par un diaphragme, et montes aux deuxextrmitsd'un tube, glissant frottement doux dans
la partie suprieure du tube du microscope.
par robjeclif.
1
Il
Tagrandit en
la
toujours renverse;
2 Il aplanit et claircit
le
champ
collectrice ou
champ et examinons de
nouveau l'image microscopique. Nous verrons que le grossissement est beaucoup plus fort, mais que le champ a diminu dans
les mmes proportions. On ne voit plus qu'une minime partie de
l'objet et
du
il
champ
d'Huyghens,
ou oculaire de
Ramsden. Les
94
deux
de
lenlilles
l'objectif.
plan-convexes, dont
Ces deux
lentilles
la
la lentille.
en
les
c'est ainsi
qu'on obtient
d'Huyghens.
les anciens oculaires du type Ramsden, on obtenait l'achromatisme en calculant les foyers des deux lentilles, de faon ce qu'ils
soient gaux entre eux et l'cartement des deux verres. Mais cet
achromatisme est toujours imparfait, aussi l'oculaire de Ramsden est-il
peu prs abandonn.
L'image relle de l'objectif doit se trouver en dehors de l'oculaire et
en dedans de son foyer, de telle sorte que cet oculaire fonctionne
comme loupe simple. Au contraire, dans l'oculaire d'Huyghens, l'image
relle de l'objectif doit tomber entre les deux lentilles. La pupille
d'mergence se trouve au voisinage du foyer suprieur.
Nous avons vu que le diaphragme se trouve en avant des lentilles,
dans le mme plan que l'image relle. Cette particularit permet d'utiliser l'oculaire de Ramsden comme oculaire micromtrique et lui donne
une supriorit, ce point de vue, sur l'oculaire d'Huyghens. En effet,
dans l'oculaire de Ramsden, l'chelle est place dans le diaphragme,
en avant des deux lentilles, et se trouve grossie galement par tout l'oculaire, tandis que, dans l'oculaire d'Huyghens, l'chelle est place dans
Dans
OCULAIRES
95
diaphra^-me, entre les deux lentilles, et n'est grossie que par la lentille
oculaire; il en rsulte des aberrations (jui nuisent la prcision des
le
mesures. Aussi
les oculaires
Oculaires compensateurs.
comme nous lavons dit })liis haut
de grossissement pour
les
(p. 79),
compenser
l'ingalit
numrique.
ordinaire,
color, qui
on
intentionnelle-
ce dfaut, afin
le corriger entirement au moyen des oculaires compensateurs. Ceux-ci sont calculs pour prsenter au mme degr
le dfaut contraire, par consquent pour compenser le dfaut
d'achromatisme des objectifs. Ces oculaires donnent donc pour
de pouvoir
rayons rouges une image plus grande que pour les rayons
bleus; il est facile de s'en rendre compte en regardant travers
les
un numro fort on aperoit le diaphragme bord d'une marge rougetre. L'image microscopique totale sera aussi pure que possible,
c'est--dire exempte de contours colors jusqu'aux bords du champ.
:
comme
dans
les oculaires
reconnatre, d'aprs la
En
lectrice,
comme
dans
les
oculaires
gnral, le type
Huyghens
90
numros
faibles, le
collectrice,
forls
la
achromatique.
forts, le foyer
la lentille
numros
lentille triple
autre diaphragme,
En
apochroma-
"
Oculaires d'Huyghens.
de
la
champ.
ont donc
Ils
un champ
trs troit,
donc
diaphragme.
Il
et
n'employer
moyens
et
numros
la
forts
maximum
chambre
numros
que dans
claire.
faibles
les cas
il
de l'image, pour
'
OCULAIRES
2^ Oculaires
compensateurs.
Il
97
mme
pour
les oculaires
18 indiqueront
oculaires
est de 2, 4, 6,
de
ces
grossissement propre
c'est--dire
donc que
8, 12, 18
le
fois.
chiffres 2, 4, 6, 8, 12,
rapidement
le
d'objeclif. Il
le
le
Pour dterminer
7,
en millimtres
la
tant
nous aurons
il
suftt
250
g =z -j-
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
CHAPITRE
VI
FORMATION DE L'IMAGE
MICROSCOPIQUE
Maintenant que nous connaissons les dtails de structure de la
et de la partie optique du microscope, nous
partie mcanique
la marche des rayons dans cet instrument et nous
tudier
pouvons
rendre compte de la faon dont se produit Timage virtuelle que
nous voyons lorsque nous examinons une prparation.
Prenons d'abord le cas le plus simple (fig. 58), en supposant
que Foculaire et Tobjectif sont forms chacun d'une seule lenL'objet 00' se trouve un peu au del du foyer de l'objectif
en 0^0^ une image relle et fortement grossie
(Obj.) qui donne
Cette
cet
de
image se forme en dedans du foyer de l'ocuobjet.
tille.
comme
vir-
et situe la distance
agrandie
Derrire l'objectif se trouve un diaphragme DD dont l'ouverture est en dd' Nous savons que l'image de ce diaphragme reprsente la pupille d'entre du microscope et que l'angle p
p' est
tuelle,
La pupille d'mergence
du microscope correspond l'image du diaphragme DD fournie
par l'oculaire comme ce diaphragme est trs loign, son image ee'
se formera dans le plan E E, trs prs du foyer /' de l'oculaire.
On voit que le cne lumineux qui sort du microscope a son
d'ouverture de l'objectif.
gal l'angle
minimum
de largeur au niveau de
la
pour que
l'il recueille le
microscope.
la
(tig,
se produit
avec
miroir
condenM,
plan
59),
G G avec diaphragme D D,
sateur
objectif obj
el
99
diaphragme dd,
oculaire de Huygheiis avec lentille collectrice coll, lentille oculaire oc et diaphragme do. Pour plus de clart dans la figure, nous
la
relle
l'objet
en 0,0\
l'objectif
si
n'tait pas
elle
rfracte en 020^2,
par la collectrice
sous forme diine
image plus
petite,
0,'
en dedans du foyer
de
la lentille
ocu-
comme
donne
loupe
la
et
grande
image virtuelle
Ofl'^ la distance
la vision nor-
de
perue
virtuelle,
par
vient
l'il,
former sur
la
tine la petite
image
r-
relle 0,0',.
La pupille d'entre
se
trouve,
ment, en
ee',
plifi
Marche des rayons dans un microscope sim(une seule lentille oculaire d'aprs Zimmermann).
Fig. 58.
comme prcdem-
der-
rire le
gal l'angle e
limite par l'image
e'.
laire;
100
-VO
Fig. 59.
teur, objectif
une
le
lentille, oculaire
crenlre,
ost
mme
plus
101
petite
(le l'il.
L'api)areil
(['clairage envoie
e(jne
loculaire, exacte-
ment au
se
plan de Tobjet
00' un
est
point o
forme l'image
OgO
la
le
dans
trouve
se
dans
fournie par
2,
lentille
collec-
trice.
La
ligure
reprsente
marche
m icroscope
Zeiss.
la
relle des
dans
rayons
60
un
de
Ce micros-
muni de
cope
la
nouvelle mise
est
un
ob-
(AA.)etun objeclif
immersion ho-
mogne
le
viss sur
revolver.
clairage
duit par
L'-
est
promiroir
un
un conplan
densateur deux
'
Fig. OU
Marche
et
lentilles. L'objet
du microscope.
La figure I montre
de l'objet situ dans
la
relle des
lame
et
le
champ.
i02
d'ouverture.
l'observateur
une image
aussi, dans
relle, petite et
renverse
la
:
ils
rtine de
forment
du microscope
entier (F'),
plan
Cette
du
l'oculaire.
de
fournie
rimage
diaphragme
par
Tobjectif
image correspond au petit cercle lumineux, situ un peu au-dessus de l'oculaire et auquel nous avons donn le nom de pupille
le
focal postrieur
de
la
et
dans
les
et
Stiassnie, de
170
mm.
chez Leilz,
du
etc.
revolver, du
La distance A reprsente la longueur optique du tube, c'est-dire la distance entre le foyer postrieur F'* de l'objectif et le
foyer antrieur F- de l'oculaire. Cette longueur diffre suivant les
elle est
:
aussi
103
rayons provenant de
la
diffracts
Dans
la figure II,
rflexion,
les
du diaphragme-iris, ce dernier
d'une source lumineuse trs loigne.
le rle
jouant
croisent au niveau
se
par exemple
le
On met au
un
point avec
6 de Stiassnie ou
le 7
de Leitz.
que
relle,
possible.
Comme
l'image
un peu au-dessus du
dia-
guerait rien.
Pour
voir
Vimage
relle fournie
par
la lentille collectrice
dernier dans
petite
le
que l'image
construction de
la
relle de l'objectif,
figure 59.
lO't
uiMcrre drpoli ou un
cai'i
de papier transparent
l'oculaire.
En
grossissement de l'oculaire.
On
et
on
le lient
verticalement an-dessus
suivant
le
voyant pour
la
(le
premire
Ibis Ttroitesse
en
de ce faisceau mergent.
rapprocher
l'objectif
la
mme
La mise au point
est
donc
trs
mtrope.
Si on vient modifier
de l'image.
de
En
effet,
qu'elle
soit
projete
au
mme
l'oculaire.
modation de
l'il.
mnager
le
mcanisme d'accom-
CHAPITRE VU
MICROSCOPES DE VOYAGE
L'essor de la uidecine coloniale et de la parasitologie a donn,
depuis quelques annes, une importance inattendue aux microscopes de voyage. L'absolue ncessit du microscope pour le diagnostic des maladies parasitaires, rend ces instruments indispensables
tropicales.
Pour rendre
les
services
que
Ton
doit
attendre
d'eux, les
qui sont quelquefois contradictoires. C'est ainsi que la lgdeux conditions incompatibles et qu'il faut
la
seconde une
et
immersion
II
faut
donc
qu'il
possde un condensateur Abbe avec diaphragme iris. Il est ncessaire qu'd ait, outre le mouvement micromtrique, une crmaillre
mouvement rapide et un revolver deux objectifs au minimum.
La platine
une platine
charge,
un
106
Fig. 61.
Microscope
Fig.
6^2.
fig. 9,
l'appareil mont).
et leur
MICROSCOPES DE VOYAGE
107
donner
est le grand
microscope de voyage de Leitz, muni de la nouvelle vis micromtrique (fig. 62). D'autres constructeurs renoncent plier les deux
--^i:u;;iiii;iiiiiiiii;iii)iiiiiijui:tiii;ii
Fig. 62 bis.
Une
fois
pli,
il
tient
ses oculaires et ses objectifs dans une caissette cubique qu'il est
facile de loger dans une valise ou une cantine.
Le microscope
trs portative
sans
<{u'il
ait
du centrage de
CHAPITRE
LOUPES
ET.
VIII
MICROSCOPES
A DISSECTION
Les modles de microscopes que nous venons d'Uidier ne peuvent gnralement convenir que pour Fexamen d'objets }trpars,
c'est--dire dissocis dans un liquide, rduits en coupes minces, etc.
et lamelle,
Pour
il
est
la
la
confection de
dissection de petits
La dissection ou
exige
un
le
le
maniement
correct
des
la
la
dcrire
ici.
109
et de leur utilit.
simples ont perdu beaucoup de leur impoilance
il
diffrence
avons
Nous
dj indiqu (}). 1) quelle
y a, au
de vue optique, entre le microscope compos et la loupe ou
point
comme
lentille
simple.
Nous savons
aussi (voir p.
4)
que
la
une
lentille
mmes
aberrations
L'aberration de sphricit
est surtout accentue dans des loupes formes d'une
simple lentille biconvexe. Aussi est-il prfrable,
pour avoir des images bien planes et non dformes, de prendre une lentille plan-convexe, dont
que
Fig. 63.
Loupe
dissection de Leitz.
on tourne vers
On
champ
sommaire de
section.
petits objets,
Fig. 65.
Lo-upe dti
type de Steinheil.
dis
HO
Le meilleur procd pour construire des loupes aplantiques et achromatiques consiste employer des lentilles composes de deux ou trois
lentilles concaves et convexes. On obtient ainsi la loupe dite de Steinheil, gnralement forme d'une lentille biconvexe de crown-glass et
de deux lentilles concaves-convexes de llint-glass (tig. 65). La correction
ainsi obtenue est presque parfaite. Ces loupes peuvent grossir jusqu'
40 diamtres.
_J
Fig. 66.
Fig.
Doublet de
du type Ramsden.
67.
Leitz
dedans
(fig.
La loupe
66).
dite
(type oculaire de
loupe, mais bien une vritable lunette de Galile distance focale raccourcie. Elle est constitue par un tube, portant une extrmit un
objectif form d'une lentille biconvexe et l'autre extrmit une lentille
s'est rpandu
que leur fabrication s'est perfectionne, l'importance des
microscopes simples a beaucoup diminu en tant que loupes
montes ou instruments de dissection. Par contre, leur utilit en
tant que loupes main ou loupes de poche est reste la mme.
La loupe sera toujours la fidle compagne du naturaliste sur la
table du laboratoire, en excursion, la loupe doit toujours tre
et
la
premire,
mme
111
caractres
dlicats.
Il
est
bien
rare
qu'un
n'ait
Fig.
68.
de
Loupe
poche.
commodes parce
qu'elles
donnent
manches
tant
trs
d'utiliser
maintes
des microscopes
simples. Enfin, pour les travaux
qui exigent des observations prolentilles
nous
est impossible
de d-
pieds porte-loupe.
i-
Fig. 69.
COG
Nous ne pou-
il
est
en aluminium et trs
lger. C'est un simple bras form d'une
barre aplatie, fixe
une
vis,
Fig. 69 bis.
112
soupoiut d'allache
porte-loupe qui, lui aussi, peut tourner aulour d'nn axe horizoutal
Ce porte-loupe peut recevoir la loupe de la fig. 63, une loupe de
Steinheil ou un doublet. Le grand avantage de ce porte-loupe est
de permettre d'utiliser,
pour
la
mise au point,
le
mouvement
on achve
la
Pour ceux
appareil
trs
siuiple,
avantageusemeut
les
CHAPITRE
IX
MICROSCOPES
A PRISMES REDRESSEURS
e
Ces
sont
microscopes
l'objectif et
l'image. En
construite spcialement en vue de la dissection ou
du dessin
ces
ou binoculaires.
Pour
les
travaux
de
dissection,
leur
moins
commode que
donnent
plus clairs.
Il
les
les
un microscope
quelconque. Dans ces derniers, Fimage est produite par un seul
objectif. Le faisceau lumineux est alors partag entre deux oculaires, par rflexion partielle sur une mince couche d'air place
Fune des deux portions est ensuite reprise
entre deux prismes
par un prisme rflexion totale.
Dans les microscopes binoculaires dissection (fig. 70), deux
images distinctes sont produites par deux microscopes redresseurs distincts. Dans le modle que nous figurons, les objectifs
sont monts par paires sur un patin commun qui glisse dans
une coulisse porte par le double tube. Celui-ci est surmont par
dispositifs binoculaires
que
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
114
==
X.*
>
.lfA
un des deux
Une
fois
obtenu
la
.une plaque
transmission s'obtient au
moyen d'un
115
aiiisi
tons sens.
d'objectifs, qui,
toute
une
de grossissements
srie
commode pour
les jietils
les
recberches sur
le
plankton
et
pour tudier
animaux aquatiques.
Non seulement
beaucoup
les
dissections
fines,
mais
encore
il
rend
les
plus
grands services pour l'tude des Insectes, des Champignons microscopiques et, en gnral, de tous les objets qui devaient autrefois
examins
En un mot,
tre
la
loupe.
tre tenue la
main
peut
alors
volumineux. Pour
faciliter
et servir
l'examen
matoscope.
On jteut encore se servir du binoculaire sans monture, en tenant
la main la partie optique. On peut suivre ainsi des parasites trs
mobiles (Puces, etc.) dans le pelage des animaux, condition de
ne pas prendre un trop fort grossissement. Avec un peu d'habitude, on devient trs adroit.
CHAPITRE X
APPAREILS A DESSINER
Quels que soient
phie,
la seule
les
le
complte
irrfutahles,
personnelle. Mais,
photographiques exige-t-elle des prparations trs minces et parfaitement planes. Plus le grossissement augmente, plus le champ
de nettet diminue la fois en tendue et en profondeur. En
outre, en raison des difticults techniques et du temps ncessit
par les manipulations, la microphotographie ne saurait tre d'un
emploi constant au cours du travail micrographique.
l'heure actuelle, nous devons donc considrer les microphotographies comme insuffisantes, elles seules, pour illustrer un travail scientifique. Elles sont indispensables,
pour montrer
ments doivent
un dessin
Ce dessin montrera
scrupuleusement
fidle.
de structure
tels
interprt, quoique
APPAREILS A DESSINER
vision microscopique, arrivent
de
la profondeur.
Ceci expliquera
microscopique
donner
la
117
sensation du relief et
l'importance
et le
que
le
attentive.
Sans parler du croquis ordinaire, qui, pour lre exact, exige une ducation de dessinateur, on peut arriver dessiner rigoureusement les
objets microscopiques sans l'aide d'aucun instrument. Il suffit pour cela
de regarder d'un il dans le microscope et de l'autre la surface sur
laquelle on dessine.
On
Nous ne mentionnons
cette
prismes
mme
celle
118
Ce
hauser dont
la
aux
dans
le
plan de
feuille
au microscope compos.
APPAREILS
I.
DESSINER
MIROIR
^
par Zeiss (fig. 71) il est constitu essentiellement par un miroir
fix l'extrmit d'un bras horizontal et par un petit appareil
;
nomm
est
La face hypotnuse
\\
Fig. 71.
A, cube d'Abbe; B,
Principe de l'appareil dessiner d'Abbe.
miroir; xy, rayon lumineux provenant du microscope; abcci, rayon lumineux
de
b
la
c.
surface
du
et
rtichi
en
et
dessin
provenant
Orif/inal.
du prisme suprieur
mdian, de 1 ou 2
mm.
les
rayons
18'J4.
APPAREILS A DESSINER
119
La position de
il
laires,
la
cube d'Abbe, de manire utiliser tous les rayons lumineux et avoir un champ aussi vaste et aussi clair que possible.
Ce rglage se fait en lixant tout Tappareil une hauteur convenable sur le tube du microscope, au moyen de la bague de
le
plac
serrage K
mme
ait la
tion sur
centre du
joint le
le
mme
surfaces rtlchissantes; en
il
on dmontre gomlriquement
avecThorizontale, un angle double
effet,
faire,
Lorsque
celles-ci sont
pour Tappareil
dessiner d'Abbe. La direction du plan du dessin est donc tout
fait
indpendante de Fangle que les surfaces rllchissanles
peuvent faire avec la verticale.
parallles,
tre d'autant
plus
la
longueur du bras
le
En
dont
il
est
ou emploie un
120
ment
que Tinclinaison du miroir soit assure exacteun arrt automatique ou par un trait de repre
est ncessaire
45 par
clinaison
du miroir.
Nous
teur voulue, au
l'oculaire,
on place
la
serrage.
On
le
enlve d'abord
cube d'Abbe, de
le
la fixa-
le
tube.
la
Le centre de l'ouverture
dcrivons,
agissant
APPAREILS A DESSINER
Plusieurs
conditions
doivent
tre
121
ralises
pour assurer
la
Pour
visibilit.
du dessin doivent
distincte,
microscopique et le plan
normale de la vision
se trouver la distance
c'est--dire
environ 250
mm.
de
l'il.
Bien qu'on
puisse dessiner sur la table qiii supporte le microscope, il est prfrable d'lever le papier dessin au niveau de la platine ou
mme un peu au-dessus, la distance de 25 cm. environ de
dessiner que nous dcrirons plus loin (fig. 84 et 85). Les myopes
devront dessiner avec des lunettes ou intercaler un verre correc-
teur sur le trajet des rayons lumineux, de faon n'tre pas obligs
d'approcher le plan du dessin trop prs de l'teil.
microscopique par
fums;
au
Dans
le
modle
trs
trajet des
122
la
bonnette.
mm.
est destin
aux
-Ai
faibles grossissements;
il
permet
(l'iilihser
%..23^
fums
et
en faisant glisser
il
la
que
(fig.
73) reprsente
la
nou-
mouvement.
APPAREILS A DESSINER
Goinine
123
la
le
Fig. 71.
totale;
miroir devra avoir la rnme direction elle dessin sera excut sur une
surface horizontale.
II.
constiUie essentiellement
(fig.
75),
})ar
deux
la
pu[)ille
pour ce l'aire, on
tube du microsle
du
dplace rajipareil
long
il est iix
une
cope, auquel
|ar
bague ressort.
d'mergence du
microscope
jiar
l'arte
perue
deux
travers
cette
arte,
aprs
Fig. 75.
claire
Chambre
variable de
angle
Ma-
lasscz.
avoir
des prismes.
Cet appareil est construit sur le principe de l'ancienne chambre
il est form de deux prismes
claire de Doyre et Milne-Edwards
suivi
rflexions
totales
sur
les
faces
77)
(fig.
1.
C.
Iriangulaires,
B. Soc.
biol..
XXVir,
angle droit.
p. 277--279, 1885.
Le
pelil ]>risme
est plac
124
au-dessus de
1
oculaire, le grand prisme est fix lalralement.
La figure 77 montre que les surfaces rflchissantes de ces
prismes ne sont pas parallles; il est donc ncessaire, pour viter
une dformation de l'image, que le plan
du dessin soit inclin suivant un certain
angle.
des
donne;
galit
due
ce
que
la
in-
moiti de la pupille
d'mergence
du
de
Malassez, le
grand prisme et le microtant
inclins
45.
scope
prisme.
Cette
chambre
ploye
claire
avec
ou avec
le
microscope
ver-
microscope inclin.
Il suffit
pour cela de faire varier
l'angle que forme son axe optique
tical
JC
II
i^:
le
\
'3/
positions
chambre
^
\
Fig. 77
Principe de la chambre
claire de Malassez.
O, prisme
-
Original.
claire
doit
alors
tre
cope
du
et le
mme
ct.
Pour
viter
les
exemple
incline
la
de Malassez
de 18, par
planchette dessiner
qui convient parti-
il
est
APPAREILS A DESSINER
microscope
et,
scope 45.
au lieu crincliner
On
le
25
commodment
est
sur
la table,
reprsente par
la
figure 76.
Si on veut interrompre le dessin pour examiner l'image microscopique, il suffit de rabattre la chauibre claire qui tourne autour
d'une
charnire
horizontale.
L'instrument
il
peut
tre
dplac
reprend toujours sa position
primitive.
lopil,
le faisceau
sans avoir
du microscope.
ISanmoins, il faut une certaine habitude pour bien se servir
de cet appareil. Gomme le faisceau d'mergence est divis par
l'angle du petit prisme, il est ncessaire, pour voir nettement la
fois l'image microscopique et la pointe du crayon, que le centre
de l'ouverture pupillaire de l'observateur concide avec l'arte
du
petit
prisme. Si
la
que
prparation ou que la pointe du crayon.
grave dfaut de cet appareil est de ne possder aucun dispositif permettant de raliser
l'galit d'clairage des deux champs.
gauche, on ne
voit
la
Un
diffre
de celle de Malassez
ou
mme
directement.
est
bique
(fig.
tnuse,
un
petit
mme
direction
que
le
faisceau xy.
bote
mtallique
126
78j.
(fig.
Deux
orifices
et
de
Fig. 79.
Fijj;.
IS.
Chambre
claire
de Nachet.
Original.
deux cbamps.
Lorsque les deux faces rilcbissantes du prisme rbombique
sont parallles, on peut dessiner sur
prsente
sa
est troil et
cliamp
cause de
faible
la
luminosit est
perle de lumire
le
au
prisme rbombique.
h'oculaire dessiner de
appartient
il
truments;
Fig. 80.
des rayons
oculaire
l'arte
Zeitschrift
f.
^.\^^yq
cet
Leitz
catgorie d'ins-
quelques
nous allons tudier.
combmc
dessiner de Leitz.
coup par
mme
grand
se distingue par
particularits que
Au lieu d'tre
- Marche
lumineux dans
la
moment
le
avcc
11
prismc rboiubique
wiss. Mikr.,
XIL
P- 289, 1895.
APPAREILS A DESSINER
dnis, mais
comme
ici
dans
la
127
L'oculaire
avec
est
deslin
dessiner
cope;
mme
lit
montre
(juc le
la
Oculaire dessiner do
Fig. SI.
Leitz. Modle destin servir avec
le microscope vertical. A gaucho
vis de pression, droite la Lote
et les deux bras articuls
portant des verres fums.
du prisme
III.
AUTRES APPAREILS
DESSINER
Nous ne mentionnerons que pour mmoire la chambre claire d'Obercet instrument a t trs employ autre.'"ois, mais il a d cder
la place aux appareils miroir cause de son incommodit. Il est construit sur un principe exactement inverse de celui des autres chambres
claires
le plan du dessin est vu directement, tandis que l'image
microscopique subit deux rflexions avant de parvenir Til de l'obhauser
servateur.
128
Comme
mme
temps
le
plan
et
P, grand prisme p,
Principe de la chambre claire d'Oberhauser.
petit prisme; O,- oculaire; T, tube vertical a:'?/, faisceau mergent rflchi en
P et p; ab, faisceau provenant du plan du dessin.
Original.
Fig. 82.
IV
le
plan du dessin
DESSINER
obtenir
dilates.
est plus
claire
presque
invisible,
trop
lumineux
que
peine perceptibles.
On
le
trajet
En
APPAREILS A DESSINER
puis on dispose
la
suivant
le
arrire,
129
de papier ct du microscope ou en
modle de Tappareil dessiner. Le plan du
feuille
250 mm. de
ne
celui-ci
que
hypermtrope.
soit
ne
Il
ni
l'il
myope,
de l'observateur, en supposant
ni
a.
pas, en
soient ga-
.O/
suffit
c^fT
la
faut encore
trouvent
la
ta
mme
distance, de faon
ce
les
(p.
0"
dfinitive se
b'
de
la
tabli la
mme
faut
hauteur.
encore
En
ra-
obtenir
images,
la
l'image
la
microscopique
longueur a' cd b'.
du
mieux
le
soit
On
la
gale
rglera
hauteur
il
Schma
du dessin 0"0"'
et de l'image
00', assurant
superposition exacte de
l'image du crayon et de l'image
de l'objet; ab, distance de l'il
l'image de l'objet; a'cdb',
distance de l'il au plan du
microscopique
la
dessin.
Original.
manire
jiossible cette
normale,
Fig. 83.
faut
il
assurer
tenir
compte
du trajet effectu par les rayons
lumineux dans la chambre claire. La
figure 83 montre en effet que, pour
lit,
il
Les pupitres dessiner, tel (jue celui que reprsente la figure 84, sont
parliculircment commodes pour raliser ce dispositif. Ce pupitre, dit
pupitre de Bernhard i, peut tre lev volont jusqu' la hauteur de
1.
Mikr., IX,
p. 439-445, 1892, et
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
f.
tciss
130
17
la table.
La
incline jusqu' 35", lorsqu'on emploie des chambres claires sans miroirs.
En outre, la planche qui supporte le pupitre et le microscope peut s'incliner aussi vers l'observateur, pour lui permettre de dessiner commodment avec le microscope inclin en arrire. Aucune dformation du
dessin n'est craindre, puisque le microscope et le plan du dessin sont
dplacs
solidairement. Enfin un
appuie-bras
permet
d'viter
toute
fatigue. La figure 84 montre l'appareil de Bernhard dispos avec le microscope inclin en arrire et la planchette dessiner incline par rapport
Fig. 84.
du
Le
APPAREILS A DESSINER
131
plus simple consiste dessiner le contour du champ du microson doit obtenir un cercle parfait, ce dont on s'assure en
cope
:
que
l'on dessine
champ, sinon
doivent
faut rec-
il
avec un grossissement assez fort (au moins 200 diam.), afin que
les traits soient spars
Fig. 85.
Comme
ces
tous
sens,
livres, etc.,
on
installe
une
tablette,
une
la
boite,
une
hauteur
pile
et
en
de
l'incli-
fix soli-
trs
fin,
supportant bien la gomme effacer (papier bristol et papier Whatman). Les crayons seront de la meilleure quaht, de prfrence
en graphite, mais, en ce qui concerne leur duret, les avis sont
132
fine et
trs
s'mousser trop
donner un
des petits blocs de papier de verre trs commodes pour cet usage.
Les meilleures gommes effacer sont celles qui sont souples et
molles, par exemple la gomme lphant de Hardtmuth. Il existe
lettes
les
ptrir
en bou-
celte
gomme
traits l'encre et
commodes pour
il
trait
la
plume.
Les meilleures plumes dessin sont les plumes Brandauer (de Birmingham) n 518 on peut employer aussi les plumes Joseph Gillott
n" 291. L'encre sera toujours de l'encre de Chine liquide.
:
Dans certains
il
y a
une grosse aiguille mousse sur une pierre aiguiser et emmanche sur
une tige de bois. On dessine lgrement les contours et les principaux
on enlve
manire ordinaire.
dtails, puis
la
le
papier dcalquer
et
on achve
le
dessin
chambre
claire;
tivement
la
la
on terminera donc
et le
APPAREILS A DESSINER
133
Gnralement,
les
faire disparatre
la plus
la
moyens.
grossis, tels
souvent avantage clairer le microscope la lumire artificielle, de manire galiser plus facilement l'clairage des deux
il
il
est ulile
de diminuer considrablement
On
et
d'une
obtient ainsi
la
une
pupille
La mensuration des dessins et la dtermination du grossisseseront tudies au chapitre des mensurations microscopiques.
ment
1. Le cadre de cet
ouvrage ne nous permet pas de nous tendre sur le dessin
micrographique; on consultera avec fruit sur ce sujet Husnot, Le dessin d'histob'e naturelle, in-8 de 19 p., 6 pi., 1900. Chez Tauteur Cahan, par Athis, Orne.
Extrait du Bull. Soc. linnenne de Normandie, 5" srie, III, 1900.
:
CHAPITRE
XI
franaises et trangres.
dans
la partie
descriptive, traitant
une bonne ide des modles les plus appropris aux divers genres
de travaux micrographiques.
Pour le travail de haute ])rcision et pour les recherches sur
des groupes difficiles, tels que les Protozoaires, ou sur des questions de cytologie fine,
monture
munie
il
est hors
des
rsolvant,
peuvent pargner
beaucoup
la
microphotographie,
la partie
la
Nous avons dit que, pour le travail courant, les objectifs achromatiques sont parfaitement suffisants. Nous allons donc indiquer
quels sont les grossissements qui, notre avis, sont les plus favorables et dcrire le modle
qui nous parat le plus pratique pour
tous les travaux.
135
Il
faut d'abord se procurer une
Choix d'un modle.
monture qui permette l'emploi de tous les objectifs et de tous les
Mme si on dispose de fonds limits et si on
appareils accessoires.
On
travaux.
tous les
la
trs simples,
faut acheter
il
d'effectuer
au fur
partie opti(|ue,
on achte un
mieux employe complter les combinaisons optiques. On choisira donc un grand modle ou un moyen modle, qui devra satisfaire aux conditions que nous allons numrer.
Il faut choisir, autant que possible, un microscope inclinant.
Bien qu'on soit oblig, la plupart du temps, de travailler avec le
microscope vertical, il est bon de disposer du mouvement d'inclinaison pour effectuer sans fatigue des examens prolongs.
La platine devra tre fixe; sa forme ronde ou carre a peu
d'importance, pourvu qu'elle soit de grandes dimensions et munie
vraiment pas pourquoi les constructeurs
des platines tournantes, mcanisme de
centrage m par deux vis de rappel. La platine tournante a sa
raison d'tre dans les statifs destins la microphotographie et
d'un chariot. Je ne
sais
fabriquer
s'obstinent
statifs
dire jamais
il
Mais
ticulier.
mme
trs
arrt par le
dplacer
cement
on tente de
de
la
l'utiliser
prparation,
la platine
est limit
par
la
trs faible
longueur des
vis.
En
ralit,
on
si
restreinte,
fait
dcrire
la
La vraie
deux
136
mouvements
}>la-
ces chariots, qu'on peut mme adapter aprs coup au microscope platine carre, si on n'a pu faire de suite la dpense d'un
L'conomie qu'on ralise en supprimant la platine tournante reprsente une partie du prix du chariot; le supplment
de dpense occasionn par ce dernier est amplement compens
chariot.
dont
le prix est
On
exemple
le petit
modle de Leitz
(fig.
13),
de 63 francs.
Vappare'd d'clairage
est
Il est
absolument
lre
le
condensateur charnire
le
peu prs
inutiles.
et le
Les seuls
carter
et
rapidement le
de l'emploi des objectifs trs faibles. Ces mouvements
peuvent tre excuts au moyen d'une crmaillre, d'une vis
d'Archimde ou mme d'un levier bascule (Stiassnie). Le dia-
moment
est
un organe coteux
et superflu.
D'aprs
les
le
miroir
les rgles
le
que
miroir n'est
pour lesquels
compltement
inutile.
Quel que
soit le dispositif
du condensateur,
il
doit permettre
un condensateur
de polarisation. C'est
137
fond noir
ou un
ai)pareil
La mise au point devra, de toute nfcessit, possder le mouvement rapide par crmaillre et le mouvement lent par vis micromtrique. Un des avantages les plus srieux de la nouvelle mise
au point avec axe horizontal, mouvement dmultipli et vis sans
fin, est de permettre de saisir le microscope par la potence, sans
porte sur
la
fera prfrer le
prcaution que nous ne saurions assez recommander. On a toujours se repentir de faire adapter a}rs coup un autre revolver
sur un ancien
stalif.
La composition optique noimale d'un microscope doit comprendre, notre avis, quatre objectifs et au moins deux oculaires.
138
un
oculaire faible)
voici trois
objectifs 2, 4, 6, de Stiassnie, 2, 4, 7,
emploi
mme
dans
les
meilleures maisons.
no 3.
Certaines
pour leurs
objectifs
pour
les objectifs
apochromatiques
(p. 95).
Quoi
qu'il
en
soit, les
et
reprsent figure 108, ou au moins un micromtre oculaire amovible (fig. 109), est indispensable pour les mensurations. Il devra
que
je les ai tous
expriments longuement
et je suis
bien adapte au
139
la
prendre
Pour prciser ces indications, je vais donner la composition de quelques types de microscopes, appropris divers ordres de recherches
microg-raphiques. Chacun de ces types est simplifi autant que possible
et reprsente le minimum indispensable pour chaque genre de travail.
1
les
travaux,
mme
les
plus dlicats.
fixe.
trois
Oculaires
Oculaire micromlrique;
:
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
les
travaux.
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
Microscope pour travaux de systmatique, ne permettant pas la bactriologie, et peine la protozoologie et la mycologie.
Monture moyen modle, platine fixe;
Appareil d'clairage d'Abbe;
Revolver 2 (ou 3) objectifs;
deux (ou trois) numros sec;
Objectifs
Oculaires deux numros;
homogne;
Micromtre objectif;
Chambre
claire.
il
commande.
CHAPITRE
XII
ENTRETIEN DU MICROSCOPE
L'eiilrelien du microscope consiste le prserver de la poussire
des vapeurs acides et du contact des ractifs.
Pour le prserver de la poussire, il faut, lorsqu'on travaille
grands
et
telle
muni de
sorte qu'on
peut y
ses objectifs et de sa
il
l'entre de la poussire,
feutre.
Un peu
de soin suffit pour prserver le microscope, et particuliredu contact direct des ractifs liquides. Lorsqu'on
elTectue des ractions microchimiijues, il faut se servir de larges lamelles
22 mm) et n'employer qu'une faible quantit de ractifs. On ab(22
sorbe l'excs de liquide avec des bandelettes de buvard pais qu'on doit
toujours avoir sa disposition sur la table de travail. Si, malgr toutes
les prcautions, l'objectif vient tre souill, il faut l'essuyer immdiatement avec un linge fin ou un peu de papier Joseph. Au besoin, laver
l'eau distille, avec le linge ou le papier buvard, puis scher avec soin.
Je crois inutile d'ajouter qu'il ne faut jamais toucher le microscope
ment
les
objectifs,
ENTRETIEN DU MICROSCOPE
141
du microscope.
Oculaires.
Un
la
la
lentille postrieure
tille est
gnralement assez difficile nettoyer. Mme lorsque le
tube ne porte pas d'objeclil, il est essentiel de le prserver de la
poussire, car celle-ci s'altacbe la paroi interne et peut ensuite
donner lieu des jeux de lumire ou tomber sur l'objectif. Adop-
tube
un oculaire
datis le
du microscope.
des
la
suftit
de faire
aussi, dvisser et
laire. Si
on dvisse
marquer
quelle extrmit
Objectifs.
ment
peut
salie
par
mme
le
La
baume,
dire que,
la fois les
la
l'huile
de cdre,
plupart du temps,
la
la
on
mauvaise qualit de
souillure de la lentille
lentille frontale.
et
il
142
immersion.
bien soin de ne pas inonder les lentilles et d'essuyer immdiatement aprs avec un autre linge bien sec. Souvent, il suffit de projeter l'haleine la surface de la lentille, puis d'essuyer
Pour enlever
les
un pinceau
doucement.
la
face pos-
trs
taill
doux,
en pointe,
a attach
un
soit
soit
petit
linge.
le
lentilles,
ni
pntrant dans
la
baume du Canada
rsulterait
monture de
l'objectif,
peuvent dissoudre
les
Il
le
en
prcautions
Ne jamais
dvisser les
lentilles.
Celte recommandation
et forts
quera
parties
que
:
la
les
objectifs
partie infrieure,
ENTRETIEN DU MICROSCOPE
143
pour
ou les
lentilles
pour
Il
en
est
de
mme
la
les nettoyer.
consiste ne dvisser
que
les
parties
Un
endommager irrmdiablement.
servera, sous
une
petite cloche
momen-
tanment.
Eviter avec soin
Appareil d'clairage.
Le miroir
et les lentilles
du condensa-
teur seront nettoys, comme les autres lentilles, avec un vieux linge
bien propre et imbib au besoin d'un peu d'alcool ou de tolune.
Une propret
pour
la
luminosit et
14i
du condensateur montre
Lorsque
les crmaillres
CHAPITRE
XIII
L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Les chapitres qui prcdent nous ont fait connatre la structure
et la manire d'employer chacun de ses organes. Il
du microscope
tait
ttonn mes
j'ai moi-mme longtemps
de
dcouvrir
des procds
beaucoup
temps
pass
d'observation que je ne trouvais dans aucun livre. J'estime donc,
au contraire, qu'il faut tracer le plus possible de rgles prcises,
ayant pour bases scientifiques les proprits physiques du micro-
dbuts
et
du microscope tous
pique, c'est--dire de
par
le
I.
CONDITIONS
il
lieu.
DE LA VISION MICROSCOPIQUE
donner
les
le
micro-
M. Langeron.
Prcis de Microsopie.
10
146
d'erreurs.
La
normale
vision
est
sensation de la distance et
identiques, elles diffrent d'autant plus que l'objet est plus que
rapproch; aussi la sensation de relief diminue-t-elle au fur et
de
l'il et
le relief et l'paisseur
des corps.
Dans
la vision
le
normale,
permet de voir nettement, l'un aprs l'autre, mais non simultanment, des objets situs diverses distances. Dans la vision microscopique, le 772cr/7?7e de V accommodation n entre pas en jeu^
nous ne percevons la fois qu'un seul plan trs mince de l'objet
examiner et, pour voir les autres plans, nous devons faire
varier la mise au point du systme oplique. Nous ne voyons donc
jamais qu'un seul de ces plans la fois et, pour nous faire une
ide
exacte de l'objet,
Plus
Une
qu'ils
rations
diffusent.
est
transparence;
jouent un
Au
examine
il
en
rsulte
que
les
phnomnes de rfraction
que dans la vision l'il nu.
l'observation microscopique
cas. des organismes
examins
147
coloration.
Ces
rfracLion\ elles
mais encore les dtails de leur structure, simplement par des diffrences de rfringence ou par des contrastes de lumire et d'ombre.
La
suite de
Enfin
la vision
iiormale par
la
voir
les
prserve de
tel (ju'il
la
dessicca-
permette de distin-
guer
rfraction
du milieu. Si
le
trs diffrent
est plong,
il
le
que
milieu,
suivant
l'indice
de
mme
l'objet a le
il
il
est
s'il
est
second,
gent que
que
le
sulfure de
disparat, car le
de rfraction.
Voici donc
un
carbone; enfin,
baume du Canada
et le
dans
le
verre ont
troisime, elle
le
mme
indice
jusqu' quel point l'apparence des corps peut tre modifie par
la rfringence du milieu qui les baigne. Pour mieux
comprendre
148
les
se produisent
phnomnes qui
dans
la vision
microscopique,
nous allons tudier deux corps d'une forme bien dtermine, trs
il faut
frquents dans les prparations microscopiques et dont
bien connatre les proprits optiques. Ce sont les bulles d'air et
les
globules graisseux.
1
On
forme sphrique.
condensateur.
sa
l'objectif au point, de faon ce que la circonbulle soit bien nette (tig. 86, B) nous verrons alors
centre form d'un cercle trs brillant, entour d'une zone
Mettons d'abord
frence de
le
la
de
des
clairs
et
minces,
correspondant
franges
triques
Si on enfonce l'objectif, de faon mettre au point la partie
infrieure de la bulle, le cercle blanc central devient plus petit et
plus clair; il est aussi plus net et a perdu sa bordure grise.
L'anneau noir qui l'entoure est plus large, flou au bord et pourvu
la priphrie de plusieurs
Enlin,
anneaux de
suprieure de la bulle, on
augmenter d'tendue. En mme temps
on met au point
si
la partie
anneau
anneau noir
par
le
microscope
l'angle limite
part,
la
pour
le
moiti de l'angle
L'OBSERA'ATION mtcroscopioue
les
variations
149
Les
explique
rayons a el a" pntreront seuls dans l'objectif, dont l'angle
d'ouverture n'est pas suffisant pour recueillir le rayon a'". Quant
au rayon a"\ il subit la rflexion totale, car il dpasse l'angle
E^J^KlNAUDj^m
E.
SALLE
dans
l'eau.
limite.
Mme
l'objectif
au
le
le
contraire,
150
bulle,
(G, a\).
positions
de Tobjectir,
la
zone
En comparant
thoriques
Fig. 87.
86
les figures
correspondent
Marche des
le
En
effet,
en examinant
la
bulle d'air,
ce
que
C'est ce
la
zone
claire et la
ainsi des
franges de diffraction.
nombreux que
le
diaphragme, c'est--dire
le
l'observation microscopique
151
plus troit
Il
il
trs facile
est
suffit
pour
Nous savons
baume du Canada.
Par
grand.
le
baume
consquent, dans
le
deux milieux
est plus
baume du Canada,
il
qui est
n'y aura que les rayons
d'air qui
pourront parvenir
l'il de l'observateur.
On
de
agite,
la
centimtres
mulsion
choisir
et
un globule assez
en ayant soin de
pas dtorm par la
et lamelle,
soit
pression.
En
aperoit
(fig.
et
Au
centre, apparat
un cercle
trs brillant et
le voit,
nettement dUmit.
152
l)iille
crair
le
baume
obscure
au
la zone
diminue
lieu
d'aug-
menter, lorsqu'on
abaisse peu peu
robjectif.
La figure
montre que
rayons a
sont
88
les
a\ a
en
dvis
sens inverse de
de
Tobservaleur
donc
verra
les
dans
a\,
la
Lil
87.
figure
1'/
direction
la
On
a"\.
a'\,
comprend immdiatement
le
quoi
clair
Fig. 88.
Marche des rayons lumineux dans une goutde graisse examine dans l'eau. Original.
telette
pourcercle
diminue
lors-
m et
au
qu'on
point
le
ple su-
H.
CONSQUENCES PRATIQUES
1
Ces
trois
Phnomnes de
rfraction.
le
ils
sont
plongs.
l'eau) prsentent
troite,
153
L OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Au
comme
Ils
contraire,
d'air
(bulles
plus claire
et
plus large, qu'on examine un point plus rapproch de leur surface infrieure. L'effet est d'autant plus accentu que la diff-
rence entre
d'air
dans
comme
les
l'eau
comportent
la
comme
comme
lumire
concaves
les objets
comportent
second cas
les
Inversement,
grande (bulle
se
est plus
le
le
dans
et
nous
fourni
est
Mammifres, examins
les globules
sanguins
entre lame et lamelle.
par
l'tat frais,
des
clair,
suprieure, le
centre parat
gris
fonc,
entour
d'un anneau
clair.
Ces phnomnes ont une grande importance pour l'interprmicroscopique des corps cylindriques pleins ou creux et
tation
pourvu
objets,
considrablement
la
la
toutefois
la
des
l'tude
bulles
d'air
et
des
globules
peroit
le relief
un aspect
l'objectif
des objets,
brillant,
si,
au
il
suffit
de savoir que
en
relevant l'objectif, il
contraire, il faut abaisser
brillant,
il
s'agit
d'une surface
portent
Pour
C'est
comme
l'tude
d'ailleurs
ainsi
154
prenons
comme exemple
de trs
fins filaments
creux.
1
Filaments pleins
rfringent
(air
on eau),
(fig.
ils
89).
de verre pleins
et
CL
Enfin, dans
un milieu de
mme
dans un
milieu
comme un
corps creux
le liquide.
dans
immerg
filament
plein prend
d'une
Taspect
bande
aplatie.
est
Il
donc
connatre
capital de
diffrence
la
de rfringence du milieu
elde l'objet, pour pouvoir
se faire
de
forme
sa
relle.
Il
miner
fine pipette
de verre remplie
nous obtenons
de
dans des
rfringence
diffrente.
2
(fig.
une
l'objet
milieux
d'air. Si
Filaments creux
Examinons
90).
sur
la
partie mdiane,
l'observation microscopique
en relevant
le
tube
155
la raie brillante
disparait,
puis elle
tube pour mettre au point la concavit infrieure. Ces apparences se retrouvent dans les
poils creux,
les fibres creuses, les canalicules creuss dans une substance
prcdent
reparat
quand on abaisse
le
Les
solide.
comme
cas contraire.
Si le filament est
senter. Si le liquide a
du milieu environnant,
celui
quement comme
le
les
dans
le
creuse
deu\ liquides,
si
celui-ci est
muins
d'une cavit,
En
lumire
obtenus
tats
ne
pas en
principe; les raies
lumineuses
sont
diffrent
dence
du
cne
Pour les
clairant.
filaments
pleins
91), la ligne
brillante est dvie
(fig.
du ct d'o vient
la
lumire,
lors-
CL
Fig. 91.
tude d'un
ment
plein en lumire
oblique, dirige de droite
gauche.
92),
il
, taise
au
les
Fig. 92.
gauche.
, mise au
point sur la surface suprieure
6,
sur
le.
plan
filaments creux
eu
lla
et
les
rainures
156
du ct oppos
En
relevant ou en
un
abaissant
sombre
et
llili'
les
est facile
parties
de distinguer
concaves des
mmes
Fig.
93.
pais-
Fig.
94. paississe-
sissements ou
ments
et
sions
demi
driques
dprescylinalternants
(d'aprs Dippel).
rgles
les
unes
inversement, suivant
de la mise
variations
les
au
point.
Dans
le
seur
et les distinguer
ornements,
il
L'OBSERVATION MICROSCOPIQUE
Phnomnes de
157
diffraction.
Il
nature
si
positif, ce sont
Dans
exagres
et.
cartes.
Nous avons
tabli,
fondamentale entre
des phnomnes
et leur interprtation
difficile; les
zones
stries
peuvent en imposer
vritables. Il faut donc tre mis
ment
les
contours des objets. Leur interprtation est donc beausujette des erreurs, car on n'est pas oblig de tenir
coup moins
3
1 Obscurit
diffraction.
Causes d'insuccs.
du champ.
la position
sateur, la position
microscope.
Une obscurit partielle du champ peut tre due au revolver,
qu'on n'a pas tourn jusqu'au cran d'arrt ou qui a t pouss
158
au
que lorsqu'on
de ce cran d'arrt.
2
Manque de
persiste, aprs
le
point attentive,
il
a)
La
nettet de
Vimage.
Si
ce
a senti la rsistance
manque de
nettet
mise au
rglage soigneux de l'clairage et une
faut en rechercher mthodiquement la cause.
salie sur
une de
ses
deux
lamelle peut tre trop paisse. Dans ces deux cas, on ne peut
mettre au point les objectifs forts (voir plus loin, p. 165).
on s'en assure en le faisant tourner, on
est sali
h) L'oculaire
la
comme
il
a t dit plus
haut
mme
temps. Nettoyer
(p. 111).
sont
c)
Il
qui
rend
la
rieurs
sur
le trajet
Dans
les
deux
cas,
dplaant lgrement
on
voit
le
immdiatement
vient le mal.
on s'assure de
la
condensateur, au
nature du trouble en
moyen de
l'clairage s'amliorer et
la
crmaillre
on reconnat d'o
L'OBSERVATION MICKOSGOPIQUE
lo9
mouches volantes
Courants
et
mouvement
le
repos.
broivnien.
Les courants
se }ro-
duisent surtout dans les prparations non montes ils sont dus soit
la position incline du microscope, soit la dessiccation
progres:
effet,
moins
est
une
sorte de
actifs.
Cette distinction
CHAPITRE XIV
EMPLOI DU MICROSCOPE
Les conseils que nous allons donner succinctement pour l'emploi du microscope ne sont point superflus. Les rgles les plus
lmentaires du maniement du microscope sont souvent ignores,
mme par des travailleurs dj exercs, qui, par des manuvres
MANIERE
DE SAISIR
ET DE TRANSPORTER LE MICROSCOPE
I.
Ce point
est trs
personnes
les
prennent par
la
saisis
par
le
Beaucoup de
pied.
le
tube
c'est
filets
sont
peu
peu
Il
ralis,
on conserverait
cale toute sa
douceur
micromtrique
verti-
et toute sa prcision.
EMPLOI DU MICROSCOPE
II.
461
INSTALLATION DU MICROSCOPE
alors les objectifs sur le revolver, en ayant soin de les placer suivant l'ordre de leurs puissances. Il est bon de visser de suite
objectif faible.
Avant de placer
comme
il
a t dit
le
une fentre, de prfrence e?.'pos^e au nord, soit devant une lampe, avec ou sans
interposition d'une lentille condensatrice. viter avec soin les
Le microscope
LU.
ainsi
platine,
apparat,
mme
Prcis de Microscopie.
It
62
Il
ou nouvelle, n'est pas vis sans fin, de toujours la tenir peu prs
au milieu de sa course' et de ne lui faire subir que des dplacements peu tendus. Si on la laisse arriver fond de course, on
s'expose soit ne pouvoir mettre au point, soit, en insistant,
arracher les filets, ce qui serait un grave dommage.
Si rimage n'apparat pas, le dbutant doit agir avec une grande
exagrant
amener
mouvement de descente du
le bris
de
la
prparation et
en
endommager srieusement
la
Donc,
recommencer ensuite
si
le
mouvement de
c'est qu'il
on peut chercher mettre au point, soit sur une bulle d"air, soit
le bord de la lamelle. On arrive ainsi trouver la distance
frontale de l'objectif faible et, en dplaant mthodiquement la
sur
ment
un
suffit
de tourner
le
Lorsqu?
revolver
et
le
facile alors
microscope
que de passer
est bien rgl,
de modifier lgrement
la
il
mise au
endommager
vite
c'est
le
tuer qu'on apprendra faire l'examen mthodique d'une prparation. Combien de fois n'ai-je pas vu commencer examiner une
coupe avec un grossissement de 300 ou 400 diamtres, ou mme
avec l'objectif immersion! C'est ce manque de mthode
que sont dues les erreurs grossires qui tent certains toute
Pour
les
Au
contraire, en
com-
mm.
'
environ.
EMPLOI DU MICROSCOPE
163
menanl rexamen de
on
la
facilite
avec
IV.
la srie
il
immersion
objectifs
le
champ;
de chercher
l'objet
avec les
et
de l'troitesse de leur champ. L'objectif faible est d'ailleurs indispensable pour rgler l'clairage.
Donc, une
fois l'clairage et
l'objet
par le fabricant de l'objectif et dont l'indice de rfraction est calcul pour la correction des lentilles ^
Ceci
on abaisse
fait,
le
mouvement
tube avec le
rapide, en
le
serv sa convexit;
il
tale sur la
contact est
gement de forme de
l'image apparat,
mme
confuse, on achve
la
la vis
micromtrique.
Lorsque l'observation
est
termine,
il
est
indispensable
de
mouvement
relever
le
tube avec
le
Voir
comme
164
une
il
Ds que Fobser-
C'est
trs
absolu, pour
V.
le
LA MISE AU POINT
n'arrive pas
faible.
numro
La prparation
est retourne.
Ce
EMPLOI DU MICROSCOPE
beaucoup plus souvent qu'on ne
exercs;
il
croit et
rations au
baume bien
s'aperoit pas
sches.
de Terreur
et
Au
mme
165
des micrograplies
lames de sang
faible
on est tout
et les prpagrossissement on ne
tonn de ne pouvoir
face
de vrifier avec
le
il
en
prparation sur la platine. Pour les lames de sang, on s'assure,
regardant
en haut.
la
Il se
produit alors le mme
prparation est retourne. La lentille
frontale vient buter contre la lamelle et l'image n'apparat pas ou
La lamelle
la
reste confuse.
pour empcher cet inconvnient. Les lamelles qu'on trouve actuellement dans le commerce ont aussi une paisseur plus rgulire.
Toutefois, lorsque la prparation est trs paisse,
nuer abaisser
le
Il
les plans
il
profonds,
peut arriver
mme avec
lamelle, d'craser l'objet et peut-tre de dtriorer irrmdiablement la lentille frontale. x\joulons qu'avec les nouveaux mouvements micromtriques le bris de la lamelle est beaucoup moins
le
tube ds que
l'oculaire,
est
appliqu
inicrom-
la vis
166
prparation au
la
moyen des
pignons de
Examinons successivement
rle
le
de
l'il
mains.
1
et
le
Les
rle
des
avis sont
partags ce sujet la majorit des thoriciens pose en principe qu'on doit observerde Til gauche. On donne, comme raison
trs
libre
pour dessiner
En
la fatigue
d'une part,
la
optique; si donc cette table est blanche (lave maille) ou de couleur claire, il faudra la recouvrir d'un papier fonc ou noir. De
cette manire,
faible quantit
Ecrans oculaires.
Lorsqu'on doil faire des observations prolonges,
de forts grossissements, il est trs avantageux de protger les deux
yeux contre les rayons lumineux trangers, c'est--dire autres que ceux
qui proviennent du microscope. C'est dans ce but qu'ont t invents
EMPLOI DU MICROSCOPE
167
dessiner
la
chambre
claire,
Fig,
95.
cran
Fig.
96.
Ecran
oculaire anglais.
oculaire. - Oripuisque tout un ct du microsginal.
cope reste libre
On trouve dans le commerce
des crans oculaires simples ou doubles. La figure 96 reprsente un cran
oculaire simple fabriqu par divers constructeurs anglais (Baker, Flatters
and Garnett, etc.); il est form
de deux pices mtalliques
"-.
brasse
le
rv^/~y
Fig.
97.
cran oculaire
de
Stiassnie.
Original.
est trs commode et permet de regarder avec l'un ou l'autre il; son
seul dfaut est d'empcher le dessin la chambre claire, car il occupe
la fois les deux cts du microscope. On le fixe
au moyen de la bague sur le tube du microscope.
2.
droit, de faon
3.
168
Li:
Manuvre
de la vis micromtriqiie.
Nous avons
dj
dit
la
Nous savons en effet que le microscope ne i)eut nous monnettement qu'un seul plan des objets, et mme, cause de
Tinvitable courbure du champ, nous ne pouvons pas voir avec
trique.
trer
nettet,
au
mme
solides
coupe,
les
instant,
toute
la
surface
de ce plan.
Or,
si
les
objets
la
forme
successivement en manuvrant
La
nettet
de celte
la vis
micromtrique.
par deux
en rsulte rapidement une fatigue intense des muscles accommodateurs. Au contraire, en modifiant continuellement la mise au
il
la rtine
1 Mettre
afin
manuvre
correcte
de
la
vis
micromtrique, car
c'est le
seul
moyen
La
main gauche de
au moyen de la cr-
EMPLOI DU MICROSCOPE
niaillre et
du diaphragme-iris, dplace
du double chariot de
la
platine mobile.
la
En
chaque fraction
69
prparation au moyen
principe on dplace la
(p. 14)
est tu-
au moyen du
ment
latral.
dplacedfaut de
deux grands
cts, entre
le
le
Fig. 99.
ciiariot.
Original.
d'aipui
sous
la
On peut
en explorer
platine.
toute rtendue.
VII.
clart au fur et
On
faibles et
moyens
et
le travail
Nous avons dj dit plus haut (p. 71) que la grandeur de l'image fournie par une combinaison optique n'est pas une
preuve de sa valeur au point des pouvoirs rsolvant et dfinissant.
la rsolution.
CHAPITRE XV
le
nom
le grossisse-
ment,
la distance focale, la
Nous
catalogues actuels des bonnes maisons de microscopes, ces donnes sont indiques avec prcision pour chaque objectif. Nous
nous contenterons donc d'tudier la dtermination pratique du
la vrification
rsolvant.
I.
DTERMINATION DU GROSSISSEMENT
est
distincte, c'est--dire
mme,
250 mm.
Il
que
c'est seule-
171
combinaison
Ce grossissement
objectif-
nous travaillons.
renferment
les
Auparavant,
jours tre calcul pour une mme longueur de tube, 160 mm*, ou
170 mm. suivant les constructeurs. C'est une condition absolu-
comparables.
Pour les objectifs apochromatiques, combins avec les oculaires compensateurs, le grosisseraent est facile calculer; en effet le foyer infrieur de ces derniers tombe toujours au mme niveau, dans le tube du
microscope. Il en rsulte qu'avec les divers oculaires, l'image donne
par l'objectif a toujours les mmes dimensions. Il suffit donc, pour connatre le grossissement total, de multiplier le chiffre indiquant le grossissement propre de l'objectif par le numro de l'oculaire qui correspond
toujours au grossissement propre de ce dernier. Or le grossissement
propre d'un objectif est gal au quotient de la distance de la vision normale (250 mm) par la distance focale de cet objectif, calcule en millimlres. Soit un apochromat de 4 mm.; son grossissement propre sera
250
4 == 62,5. Si on combine cet objectif avec un oculaire compensa:
teur n
6, c'est--dire
grossissant 6
fois, le
grossissement total de
la
com-
effectu avec
mme
hauteur.
Nous
chambre
la
claire l'image
chambre
claire.
d'un micromtre-objectif
On
(p.
la
mme
dessine
179),
la
la dis-
172
250 mm. On
lance exacte de
a soin de tenir
11
d'il
et
la
la
chambre
claire,
comme
il
feuille
electu;''
trajet
chissantes de
les
surfaces rtl-
a t dit p.
129
(fig.
83).
mtre
trois,
on connatra
la
On
dtermi-
nera
le
16
une
division,
lorsque, sur
est de 600.
il
le
suffira
dessin, une
un de
du
mme
ct.
173
connaissance exacte du grossissement du micromtre. Or cette dernii^re ne peut (Hre dtermine commodment qu' la chambre claire. Le
rsultat n'est ({u'approximatif et ne donne que des chiffres ronds, car il
est difficile d'valuer exactement une fraction de division du micromtre oculaire.
Ja
II.
le
du micros-
objectifs.
En
l-^
Le test d'Abbe est un porte-objet sur lequel
Emploi du test d'Abbe.
sont colles une ou plusieurs lamelles argentes leur face infrieure;
dans
trs fines.
trs exacte.
me-
Dans
FifT.
100.
les
tests
troite; elle
est
taille
de
telle
(fig.
sorte
101),
({ue
(j,.
trouve donc toutes les paisseurs correspondant aux lamelles du commerce et aux corrections des objectifs.
Examinons d'abord un objectif de y rande ouverture, muni d'un oculaire
fort, au point de vue de la correction sphrique. Il suflit de le mettre au
174
point sur les dilrentes parties du test et d'examiner, dans la partie cendu champ, la qualit des images, en se servant alternativement
de l'clairage central et de l'clairage oblique. Nous avons vu, en tudiant l'appareil d'clairage (p. 29), qu'on produit l'clairage oblique en
trale
Abk's
Test-Platte
175
numrique
de la dfinition
la
est proportionnelle la
la dfinition
trs
fins.
auxquelles
se livre.
il
les
de Papillons ou
parasites
les
conservs dans
un Infusoire,de prfrence
le
Balanlidium
coli,
conserv dans
le
formol.
On
siphon de
la
larve
le
blpharoplaste, le noyau et
de
les
Schffner du
granulations
Trypanosome,
vivax, les stries longitudinales hrisses de
cils
le
flagelle
du
Plasmodium
du Balantidium.
(p.
58) que
les objectifs
que possdent
tures, par exemple de permettre de distinguer nettement les unes
des autres des stries trs dlicates. Nous avons vu que ce pouvoir
tait directement proportionnel l'ouverture numrique; mais,
bien entendu,
il
dpend aussi de
exclusivement
la
le
la
vrifier pratiquement,
valeur de l'ouverture.
17f>
(le
d'un
test naturel,
Nobert,
structure trs dlicate et
Les plaques de Nobert sont des porte-objets sur lesquels le constructeur traait 19 systmes de raies, distantes, pour le premier systme, de
un millime de ligne (2 [x 23) et, pour le dernier, un dix-millime de
ligne (0 [X 22). Dans les derniers systmes, les raies sont donc si rapproches qu'on n'arrive pas les distinguer nettement, mme avec les plus
forts objectifs. Nous n'insisterons pas sur ce genre de
test dont l'emploi ne saurait tre courant.
Les
paration
de
Pleurosigma
suivant
la
ou
puissance
de
Surirella^
des
objectifs.
\).
Ce
les
verses
Tautre
et
se
croisent sous
un angle
;j.,
177
Avec un
3.
donnant 500 diamtres, on ne voit bien ces trois systmes qu'en employant l'clairage oblique. Avec un bon objectif
immersion, on doit arriver
objectif sec
rage central.
En ralit, la carapace
de ces Diatomes parat,
un
trs
fort
grossisse-
donne aux
les
sparent
l'apparence de stries. Les
espaces qui
relve
ou
abaisse
qu'on
rol)jectif.
3 Surirella
Cette
gemma.
dont
la
Diatome,
que
pour l'examen des objectifs immersion. A un faible
grossissement
(fig.
104),
transversales
irrFig.
gulirement disposes.
Entre ces nervures et
elles
103.
Pleuro-
Fig.
104.
Surirella
gemma.
sigma
angiclatum.
Original.
se
paralllement
trouvent de trs fines lignes transversales, distantes d'environ
a 44. Avec les plus forts objectifs, ces stries se rsolvent
lumire
oblique,
mdiane, on
dirige
voit apparatre,
M. Langeron.
[x
perpendiculairement
en outre, de trs fines
Prcis de Microscopie.
a 38. En
44 sur
la
nervure
stries longi-
12
178
Pour
mme
au pouvoir rsolvant,
par consquent cboisir parmi les objectifs grande ouverture
numrique. On peut dire en quebjue sorte Tinverse des objectifs
les
premiers,
il
leur ouverture
si
dfauts
deux.
CHAPITRE XVI
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
Les mensurations microscopifjues peuvent s'appliquer aux trois
dimensions des objets et Tvaluation de leurs angles. Nous n'tudierons ici que la dtermination des trois dimensions des objets,
c'est--dire les mensurations dans un plan horizontal et dans les
plans parallles Taxe du microscope. Nous laisserons compltement de ct la mesure des angles, qui est exceptionnelle au cours
des recherches biologiques et qui ncessite des appareils parti-
culiers.
I.
mensurations microscopiques ne
directement, c'est--dire en superposant une
rgle gradue l'objet mesurer. On les pratique d'une manire
indirecte, en comparant une chelle type l'objet, par l'interm11
est
peuvent tre
faites
Nous
100
parties,
centime de
au moyen de
traits
gravs ou photo-
mm. ou 10
millimes de
mm. Comme
l'unit de
est le
180
d'immersion, lorsque
matire colore.
les
divisions
A dfaut de micromtre, on peut employer les chambres gradues des compte-globules, dont les divisions sont gnralement
distantes de un dixime de millimtre ou 100 a. On peut aussi
comme
prendre
connues
et
talon
invariables,
l'Homme, dont
le
un
tel
objet
que
microscopique de dimensions
globule rouge du sang de
le
mesures
les
ainsi
les
soit
sions, aussi
exactement
le
mme.
Pour
effectuer la
mensuration,
il
suffit
de comparer l'chelle
la confection pralable
les combinaisons
toutes
correspondant
d'objectifs et d'oculaires. On les dessine sur le bord d'une lan-
d'une
srie d'chelles,
guette de bristol fort ou on les reporte sur verre, soit l'aide d'encre
de Chine silicate, soit, ce qui est beaucoup mieux, avec un dia crire. On remplit les traits du diamant avec de l'encre et
recouvre d'une goutte de baume et d'un couvre- objet. En
employant les chelles sur verre, il faut avoir soin de superposer
mant
on
au dessin
la
le ct
du couvre-objet,
dues
rfraction.
le
la
confec-
diamtre de
l'chelle
des-
sine.
Dans
qu'
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
microns,
faut
il
se servir d'une
181
tionne.
de
teur et avec le
la
il
(^
50
10
100
150
250
200
300
Fig. 105.
;jl
500
mm.
012
= 12
u..
Vchelle fractionne permet, au moyeu du compas, de dterminer directement le diamtre rel, avec une approximation qui
dpend de la consti'uction de Tchelle. Voici comment on peut
construire cette chelle fractionne.
lo
sion
On prend pour ordonne (fig. 106) ox, la longueur d'une dividu micromtre dessine avec une comhinaison optique donne.
JS-"
Fig. 106.
Gomme
10
(x,
chaque division de
la
mtre
est
compris entre
les
coordonnes 7
et 8,
on peut l'valuer
182
moyen d'nne
chelle millimtriqne,
sur notre chelle, d'valner
une appro.ximalion de un demi-micron. En doublant la longueur
de Tabscisse, on aurait une a}tproximation encore plus prcise.
Pour effectuer une mesure, on suit Tabscisse ax avec une des
en diximes de micron, an
mais il snlil gnralemeni,
comme
pointes du
chelle
(tig.
9
8
7
6
5
3
2
1
.
au
ce
o.c et
Echelle fractionne pour un grossissement de 2000 diamtres.
Fig. 107.
a ont deux centimtres et valent 10 ;a. Les fractions de ox et de o a valent
1
;x; les fractions de ax et de oo' valent
;/,l.
de un demi-dixime de micron (0
;j.
avoir
ou en demi-centimtres de faron permettre d'valuer commodment la moiti de rintcrvalle entre deux coordonnes. Pour effectuer une mesure, on relve au compas le diamtre de l'lment
dessin, puis, comme prcdemment, on applique une des pointes
du compas au
les
fractions
s'arrter
de micron,
quand
il
l'autre })ointe
On lit alors le
comme prcdemment, que
de
la
diagonale.
suffit
de
suivre l'abscisse
ax
et
de
de
i)oinle
la
coordonne. Su}q30sons,
la
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
183
Ja
ligne o.r,
pointe infrieure et nous nous arrtons quand la pointe suprieure
rencontre la diagonale n 7. Si cette rencontre a lieu au niveau
de
la
coordonne n"
6, le
[X
65.
Dans
divisions de
la
figure 107,
oxk
1 a; Tabscisse
respondant chacune
u. 05
sions vau t
Quelle que
rations
soit la
dpend de
la
et
un crayon
tracer
trs
que des
dur,
traits
taill
en pointe
de manire ne
trs fine,
dhcats.
mme
faudra excuter
il
longueur de tube
et
la
soit
du
mme
calcul,
des chelles fractionnes. Toutefois il suffit, sans autre prcaution, de reproduire, au coin de chaque dessin, quelques divisions du micromtre pour pouvoir ultrieurement mesurer les
soit
ait
du microscope,
tel
([ue
nous l'avons
et
une hau-
teur quelconque, puisqu'on n'a pas pris les prcautions que nous
au moyen de
la
chambre
la
dterminalion du grossissement
claire.
la
il
dislance
est
de
beaucoup
la platine ou de la table, et de
relever chaque fois l'chelle micromlrique. Cette opration ne
prend que quelques instants et donne toute garantie pour l'appr-
tre prcis
n'a
184
elles
gueur du tube
est
donc, pour viter tout calcul et aussi toute indication insuffisante, de figurer une portion du micromtre
sur
to.us les
dessins.
suration la
L'va-
moyen
tels
dis-
trique.
Fiff.
Oculaire
108.
La mthode de
plus simple
et
la
mensuration
la
employer l'oculaire micromlrique. Cet instrument (fig. 108) est un oculaire d'Hiiyghens ou un oculaire compensateur dans lequel, la place du diaphragme, se trouve une chelle gradue. Nous savons qu'en ce point
se forme l'image fournie par la lentille collectrice (p. 94 et fig. 59)
micromtiique.
l'image de l'objet
mme temps sur
et
celle
la rtine
sissements diffrents. Les divisions de l'chelle mesurent gnralement un dixime de millimtre. La lentille oculaire est monte
sui"
Au
cas
l'chelle
ne
serait
185
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
Il
est ncessaire,
ct grav
la
des mensurations.
soit
Quel que
le
micromtre employ,
objectif, la va-
chaque
109.
Fig.
Micro-
mtre oculaire.
faut tablir,
il
M^
sif-<>s*i*f>n>**'t'?-5
>
>
pour
division
de
l'chelle.
Si on se sert
*Wj V -^<^!^^^>^^M-
^tefW^^^M!^^V^^'^ ^i
du
petit
micromtre amovible,
il faut dterminer cette
aBTfjW-HJliC''^
tnavVff<i>W>S^'<*t>>*<*<* rr i it W fc:.>< *
valeur
pour chaque
combinaison d'oculaires et d'objectifs. Pour
Fig.
ce faire, on installe le
platine
cope et on
110.
Aspect des
du microsmet au point
objectif.
Le
coefficient sera 2
857.
;ji.
Original.
(fig.
110
zz^z
combien de divisions
du micromtre objectif
'!/t^ie^K*}^<^*^'^^^^^^M^t
^^j^ift^f^iii^j^z^i^
sieurs divisions
cromtre oculaire.
doit
On
Fig. 111.
Aspect des deux chelles micromgrossissement de
triques superposes, un
1200 diam. 6 divisions du micromtre oculaire
correspondent 1 division (10 ;x) du micromtre
tablir la conci-
dence
des
traits
du
micromtre oculaire
avec
le
milieu des
du micromtre objectif
ou avec un de leurs
plus
le
grossissement
666. Remarquer
Le coefficient sera
concidence de l'chelle oculaire avec le milieu
des traits de l'chelle objective.
Original.
1
objectif.
la
traits
bords,
est
;j.
toujours
considrable,
le
mme.
plus ces
En
traits
effet,
parais-
186
seul rpais. Il
oculaire (|ui
des
rails
objectif
du
n"
5,
l'aiil
donc
choisir ceux
des
exactement
concident
micromtre
Si,
objectif.
sions
pour chaque
des objets
relles
du micromtre
mm.
=0 mm.
^
rA"
UUo
inkromtrique. La
par
le
le
=o
"
a.
Le
dimensions
nombre de
coefficient
r*
table de ces
calculer les
de multiplier
oculaire
moyenne
exemple, avec un
oculaire recouvrent
jry
objectif sert
suffit
il
microiulre
partie
objectif,
mm. Do
coeflicienls
la
par
10 divisions du micromtre
du
traits
avec
de
divi-
l'objectif
employ.
le
premier,
le
1
[j.
90.
Pour
])ar
faire
Pour
recommande
d'tablir
une
fois
pour toutes une table donnant, pour chaque objectif, les valeurs
de 1 10 divisions du micromtre oculaire. Si on fait les mensurations au moyen du micromtre oculaire amovible, on fera autant
de tables qu'on possdera d'oculaires.
MEXSURATIONS MICROSCOPIQUES
Exemple d'un tableau donnant les valeurs
micromtriques pour 1 9 divisions du micromtre
187
oculaire.
188
objectif,
angles
AAA
AA.A.A
A.A.A.
^^^^^^^P^^^P^^^P^r^^
Fig.
chelle micromtrique
de Gebliardt.
11-2.
(flg.
112).
Cet
artifice
difficult
L'exactitude des mensurations est proportionnelle au grossisdu microscope. En effet, plus Fimage de Tobjet est grande,
de faire concider exactement les divisions du
il est facile
plus
micromtre avec les bords de cette image et plus les erreurs de
seliient
amovible prsente
d'oculaires
Tobjet
et,
trs
forts
d'autre pari,
le
On
l'chelle.
l'chelle, Vls
LXXVII,
p. 537-538, 1909.
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
189
La mthode du
que par
chambre
claire et
du curvimlre
Oculaires microratriques
mesurer avec prcision des
procd
(p. 184).
tambour
jusqu' ce qu'on
extrmit
l'autre
ait
de
mme.
190
Celte mlhode
prcautions minutieuses et
malheureusement
ncessite des
elle
elle
11.
Pour
au point successivement
la
il
suffit,
en apparence, de mettre
de
sur
lire,
duation
la tte
la gra-
que
de
porte
la vis
mi-
dans
cromtrique,
les
grands
statifs,
les
chiffres
corres-
aux deux
pondant
de
positions
En
jectif.
Topration
l'ob-
ralit
est
un
difficile
dterminer
Fig.
114.
de
exacte-
en
ou
En
horizontal.
outre,
il
faut tenir
compte de phnomnes de
de
la vis
le
sur la
distance relle
Dans
pose entre
micromtrique ne reprsenteraient
grande que
la
couche
d'air inter-
MENSURATIONS MICROSCOPIQUES
191
la
quantit ED' car,
paraissent suivre le trajet
BD'. Pour connatre Ppaisseur rellede la lamelle (p. 187), il faut
multiplier la diffrence des deux chiffres lus sur la vis micromdu verre de cette lamelle. Dans
Irique par Pindice de rfraction
ED, mais en
ralit
il
suffit
de
le
au
au contraire,
11
CHAPITRE XVII
I.
NOTIONS SUR
LA
LUMIRE POLARISE
comme
et
point de dpart la thorie des ondulations
un
mouvedus
sont
lumineux
admettons que les phnomnes
ment ondulatoire de Tther, milieu hypothtique qui remplirait
Prenons
On
connat
0,4
et
la
longueur
0,7 a.
On
sait
vibrations par
rapidit est de 450 700 billions de
seconde. Les vibrations de Fther sont perpendiculaires la direcaussi
que leur
tion de propagation
naire
ou naturelle
elles se
les sens.
Au
et
les
plus
faibles
mme
sens.
Soil
R un
193
rayon lumineux
On
obtenue
incom-
est
plte et insufllsante
les
pour
^R
par
birfringents
la
>-'
les
corps
considrons
propageant travers
un milieu qui
prsente, dans
Nous
RR
dans
le
di-
rons que ce milieu possde une lasticit optique gale dans toutes
directions. Suivant la nature de celte lasticit, la lumire
les
naturelle
se
modifie.
Au
dans tous
si
plus gales
et la
vile,
l'lasticit
optique est gale dans tous les sens sont dits isotropes ou monorfringents. En traversant ces corps, les rayons lumineux peuvent
subir le phnomne de la rfraction (p. 2), qui traduit simplement un changement dans la vitesse de propagation, lorsque la
lumire passe dans un milieu de densit diffrente. Ces corps ne
polarisent pas la lumire. Tous les corps amorphes, non comprims,
sont isotropes. Il en est de mme des cristaux du systme
1.
F. Rinne,
aussi
M. LAXGF.nox.
p..
pi., 1892.
Prcis de Microscopie.
194
culique, parce
une
sphre.
On nomme
ticit
optique
Fig. 116.
anisolropes ou birfringents
est
ingale.
les corps
dont
l'las-
le
spath
d'inci-
si on
regarde travers un mince prisme de cette
substance une petite ouverture ronde lumineuse, on verra deux
d'Islande^;
cercles
Le rayon
clairs.
deux
par
plac
rayons
nant
avec
des
La
ingales.
montre qu'
ce corps,
le
s'est divis
rfracts.
de
Fig. 117.
les corps
ces
^i^^-^^^^
vitesses
116
figure
la
rayon incident
en deux rayons
En
liminant un
deux rayons, on
^^.^^
p^^^^,g
^^^
et
1^
les
de
sortie
tous
que
iso-
la
comparaison
195
trs ingnieuse
droit
La notion de VelHpse
un
plan,
les
phnomnes
lumineux plac
les directions. Si le
la
au contraire,
le
mme
du systme cubique.
mme
droites perpendiculaires, le
optique. Le point o
d'une
diffrents.
maximum
et le
se rencontrent ces
minimum
d'lasticit
il
un
vident que la
ellipsode de rvoluest
On
Polarisation rectiligne.
:
dans laquelle
mme
ici
que de
la polarisation rectiligne,
le
plan, dit
la lumire polarise en
ligne
un rayon de lumire naturelle un
prisme de spath d'Islande. Nous savons qu'aprs ce passage le
rayon naturel est dcompos en deux rayons polariss, vibrant
dans deux directions perpendiculaires. En effet, tout rayon qui
196
pntre dans
nn
cristal
birfringent,
du
cristal, se
galit
ligne droite et
de ces deux rayons se produisent dans deux plans perpendiTun l'autre. Pour obtenir de la lumire polarise dans
tions
culaires
un
il suffit de
supprimer un de ces deux rayons on
gnralement ce rsultat l'aide des prismes dits de
seul plan,
obtient
Nicol.
APPAREILS DE POLARISATION
II.
deux
longitudinal. Les
sont polies, puis
Canada.
(fig.
prisme de Nicol.
Ijc,
plan de section
occup par une couche de baume du
Canada
ordinaire (RO,
ment
rayon
sur
(v.
le
p.
et n'a
ordinaire.
Original.
baume
48).
Il
rfract
RE, rayon
RO.
extraordinaire;
O'
raison inverse de
donc
le
plus fortement
Marche
des rayons dans un
Fis:.
subit
donc
la rflexion
totale
et
est
absorb par
la
rfrangible,
ment
traverse
baume
le
et
sort
197
extraordinaire,
moins
du prisme complte-
polaris.
la lace
(fig.
119), form de
fils
jiarallles,
ne laissant
le prisme
d'un faisceau de lumire polarise dans un seul plan
qui nous la fournit se nomme polariseur. Dans le microscope, ce
:
prisme est fix entre le miroir et la platine, la place ou au-dessous du condensateur ^ Mais cet appareil, employ seul, ne nous
donnerait que des renseignements trs incomplets, sur la faon
dont les objets microscopiques agissent sur la lumire polarise.
C/est tout au plus si on peut observer le plochrosme, c'est-dire la pro])rit des cristaux d'absorber la lumire d'une faon
diffrente suivant les directions.
Pour reconnatre
si
un corps
il
lui-mme
la
lumire.
il
maximum
En
sort
effet, le
les
198
Tangle des deux prismes atteint 90" les deux rayons sont compltement rfracts et n'arrivent plus Til de l'observateur.
On voit donc qu'en tournant l'analyseur de 360, on passe deux
fois par une position o les plans de polarisation des deux niois
sont parallles (clairement maximum), et deux fois par une position o ces plans sont croiss angle droit (obscurit complte).
reprenons
faits,
comparaison de Rinne
la
sont
lages
mme
sens
second
p
Fig.
119.
l'analj'seui'
Relations du polariseur et de
1.
niois
d'aprs Rinne.
deux niois
reprsents par deux grillages forms chacun de fils
parallles. Si ces deux grilles
supposons
A, analy-
orients dans
le
le
119, 1),
(fig.
laissera
passer
les
sens
les
des
grillages
fils.
sont
Mais
si
croiss
Examen en lumire
objet transparent sur
les niois
champ
croiss.
la
Deux
il
s'claire plus
ou bien
le
ou moins.
Lorsque
le
que l'objet est isotrope ou monorfringent. Si, en faisant tourner l'objet, on voit reparatre la lumire c'est qu'on a affaire
un corps anisotrope ou birfringente En effet, l'interposition de
tions, c'est
on
Chacune
199
de ces quatre extinctions correspond au moment o les axes d'lasticit de Tobjel sont parallles aux plans de polarisation des niois.
Les quatre phases (Fclairement maximum correspondent aux
moments o
ment
sont
teintes
les
mmes que
de savon ou des
couches d'huile
trs
nouveau
marche
et 35)
on
d'interfrence qui se manifestent par le renforcement, Taffaiblissement ou mme l'extinction totale de la lumire. Lorsque ces deux
ils
diffrence de
marche
est
les
deux
autres
mme
couleurs
compltement
subsistent
incolore,
l'tat
de mlange
et l'objet,
couleurs que prend l'objet entre les niois parallles sont compl-
rouge de
l'^''
ordre, le
champ
parat
200
Entre
les
niois
croiss,
un maximum
pair de la
demi-longueur d'onde
et
un
maximum
cristalliss.
birfringence et
pour
se fondre
En
1"
ordre, rouge de
2*^
ordre, etc.
rieur,
1. Ces
plaques sont montes de telle faon que leurs axes d'lasticit sont
dirigs 45" du plan de polarisation des niois croiss.
201
est plus facile reconnatre que les alternatives d'clairement et d'extinction qui, pour les corps faiblement birfringents, sont peine perceptibles.
mica,
de quartz ou de
202
G ordres,
le 5* et le
m. MICROSCOPE POLARISANT
Il n'est
question ici que du microscope ordinaire, transform
en microsco]x; polarisant par l'addition de deux niois; nous lais-
Fig. 120.
A, analyseur; P, polariseur.
sons compltement de ct la description des microscopes minralogiques. Pour transformer un microscope ordinaire en micros-
cope polarisant,
analyseur.
il
suffit
donc de
le
et
d'un
Lepolariseur(fig. 120, P) est form d'un nicol dont les faces terminales sont obliques par rapport Taxe optique il est serti dans
une monture qui se place gnralement dans le porte-diaphragme
;
de Tiris de l'clairage Abbe. Il faut avoir soin de retirer auparale condensateur ou de l'carter hors de l'axe, suivant la con-
vant
du microscope.
L'analyseur est un nicol dont les faces terminales sont normales
Taxe. C'est gnralement un prisme du type Hartnack-Prazmowski. Il est mont de telle sorte qu'il puisse se placer sur l'ocustruction
laire; la
(fig.
120, A)
203
un
un index
la
premire
cercle gradu en
360\ En
saisissant Fanalyseur par la bague moletle, on peut le faire tourner autour de Taxe du microscope et observer les alternatives
d'clairements et d'extinctions que nous venons de dcrire. On
rserve gnralement, dans la monture de ranalyseur, une chancrure dans laquelle on peut introduire la lame de gypse donnant
le
rouge de
IV.
1'"''
ordre.
nous pouvons en
tirer d'utiles
n'est capable
de fournir.
mme
Il
Prcautions prendre.
Par
204
la
miroir.
En outre, pour les recherches trs dlicates, sur des corps trs
faiblement birfringents, il faut s'assurer que les lames et les
lamelles ne prsentent aucune trace de birfringence. Pour cela,
on
les
examine avec
sensible.
Il
la
la lame de quartz
birfringence des ocu-
gn par
la
d'en examiner
prcipits cristallins desschs, il est ncesune partie sec et l'autre partie dans le
fait
mieux
conseille,
jietite
croiss.
lle
cette seule condition qu'elle pourra tre utilise; autrement, pendant la rotation de la i)latine, l'objet sortira du champ optique. Si
le
ration la
et
avec un
main sur
la platine,
})eu d'habitude,
ce
({ui,
aux
fait
tourner
la
prpa-
faibles grossissements
trage approximatif au
Il
un cen-
205
milieu du
ment
et le fixer avec les valets, puis lourner lenteInvitablement l'objet sort du champ; il faut Ty
champ
la platine.
maintenir en
le
la platine
une
que Tobjet
sorte
alors
Si l'objet s'teint quatre fois et s'claire quatre fois, dans des positions qui sont 45 l'une de l'autre (ce
il
l'analyseur),
est
videmment bir-
Il
reste obscur
faible. Si le
champ
effet, si
comme un
duire
il
il
se
comporte
Le corps est birfringent, mais trop faiblement pour proun clairement. Dans ce cas, passer l'examen avec la lame
dans toutes
gypse laissent
le
le
changement
d'orienta-
les positions.
faible
maximum
de
la
Il
faut d'abord
birfringence.
prparation, en employant une source
lumineuse intense. En outre, on s'aide soit de la plaque de gypse donnant le rouge de i" ordre, soit de la plaque de quartz teinte sensible,
donnant le violet sensible n" 2 de 3" ordre. Des corps birfringence
trs faible, peu ou pas visible entre les niois croiss, exercent pourtant
la facilit
avec laquelle
les
l'objet et
le
rouge passe
violet
206
On peut encore employer une plaque de mica, dite mica quart d'onde,
c'est--dire taille de telle sorte que les deux rayons polariss sortent
de cette lame avec une dilTrence de marche d'un quart d'onde. Les
didreuces do marche, produites par l'objet et le mica, s'ajoutent ou se
retranchent, comme pour les autres lames sensibles, et la teinte monte
ou descend.
Avec toutes ces lames sensibles et pendant la dure d'une rotation
complte, un corps birfringent apparat quatre fois de la couleur de la
plaque, deux fois avec une couleur plus haute et deux fois avec une
couleur plus basse.
11 est bien entendu que, pour obtenir la teinte que doivent fournir les
lames sensibles, celles-ci doivent tre orientes en diagonale par rapport aux niois croiss, de telle sorte que l'axe de plus faible lasticit,
c'est--dire correspondant l'indice de rfraction maximum, soit 45"
des plans de polarisation des niois. Gnralement cette direction est
marque sur la monture des lames sensibles. Par exemple, pour la lame
de gypse, il faut qu'entre les niois croiss on obtienne un rouge bien
franc, qui se change en vert entre les niois parallles.
Nous bornerons l nos tudes sur la polarisation au microscope. Nous
laissons intentionnellement de ct la dtermination des axes d'lasticit, des corps uniaxes et biaxes, des corps positifs et ngatifs. Nous
renvoyons pour ces recherches aux ouvrages spciaux.
Examen
Parmi
Ce mode d'clairage constitue mme un trs bon procd de diagnostic spcifique des diverses sortes d'amidon.
Entre les niois croiss, les grains d'amidon se comportent
comme des sphro-cristaux ils prsentent une croix noire sur
polarise.
la
marque
le bile
du
du
bile central.
et
celle des
situation des
niois
et
les
espaces
clairs
sont
alternativement
bleus et jaunes.
Ils
se
On
explique ce
comportent comme des
207
le
structure
les
le
ufs d'Helminthes).
On
dsigne, sous
Voir
le
nom
p.
521.
de plochrosme,
dpendant de
la
plochrosme, citons
dans l'autre seulement des rayons rouges. Les membranes cellulosiques, colores en violet par le chlorure de zinc iod (p. 726),
prsentent aussi de trs beaux phnomnes de plochrosme.
CHAPITRE XVIII
du microscope
est
produit
par
lumire
rayons mis par la source lumineuse pntrent directement dans Tappareil, aprs avoir travers
Tobjet qui agit sur eux par absorption, rfraction et diffraction.
Au contraire, dans les appareils fond noir^ aucun rayon lumi-
transmise
autrement
dit, les
s'est tabli
les esprits
mme
})rincipe,
il
le
fond
maniement
de
l'il
dlicat,
presque
en
est tout
209
plus
installer, la porte
PRINCIPE DE L'CLAIRAGE
I.
FOND NOIR
L'clairage fond noir n'est pas une nouveaut, comme cerC'est une mthode connue depuis longtemps
sans remonter plus loin qu'une vingtaine d'antains le croient.
sorte de
.,
P
m pariait.
^
d'examen
est
rcemment
cette
mthode
objets ullramicroscopiques.
L'clairage fond noir ncessite
dans
et
manchon
un
clai-
La dcouverte du Trponme
praticiens.
M. Langeron.
Prcis de Microscopie,
14
210
frottis
ne
il
actuelles,
iaiil
nanmoins
])as
c'est
perfectionnement
et la simplificalion
profit des
lement
invisibles.
Dans
sur
points brillants
comme
des
ciel constell
d'toiles
objets
trs
deviennent
Voici
trs
comment on
arrive le raliser.
On
ai tifice.
s'arrange de manire
On y
l'objectif.
parvient au moyen d'un diaphragme,
diamtre correspond l'ouverture de l'objectif et qui est
interpos, sous le condensateur, sur le trajet des rayons lumi-
tement dans
dont
le
neux. Par contre, l'objet examiner est clair viveuient par les
rayons qui traversent la zone annulaire entourant le prcdent
diaphragme. Cette zone est situe au del des limites de l'angle
d'ouverture de l'objectif.
Il
la
les
fait
les rfractant et
en
il
modifie
les dilractant et
pntrer ainsi dans l'objectif; cet objet parat donc brilclair sur le fond obscur. Le phnomne est analogue
lamment
chambre obscure
dans
l'air.
dans
un bon clairage
l'objectif;
214
II.
Nous n'tudierons
la
pratique
Toutefois,
complet,
ici
que
les appareils
courante.
tre
pour
nous dirons
Diaphragme
fond noir.
Le plus
est le
qui
se
diaphragme
place
condensateur
et
sous
le
qui
est
un perfectionnement de
l'ancien
diaphragme que
nous venons de dcrire
121). Le diaphragme
(fig.
construit exclusivement
Fig. 122.
On
place
cet
installe d'abord
un
1,40.
on
haut
produit pas, parce qu'il arrive dans l'objectif des rayons lumineux
directs.
2"
fig.
123):
tille
du
porte-objet. Le
les
rayons dont
Cl
celle des
l'air,
condensateurs
s})liriques,
Condensateur
I,
carts de
est plus
facile
manier que
les
P, parabolode
parabolique (Zeiss).
huile de cdre; O, prparation.
B, diaphragme
moins paisses.
Ce condensateur
place
du couvre-objet. La
Le condensateur parabolique
Fig. 123.
la sortie
s'introduit,
du condensateur ordinaire.
Il
de manire tre
En
effet,
dans
le
cas contraire,
fond noir.
Les objectifs
leurs rsultats,
interceptant les
forts,
lorsqu'ils seront
rayons marginaux.
central
Ce
rflchissantes,
(fig.
convexe
une interne
Il
et
126).
immer-
munis
d" un dia-
objectifs
sion
213
phragme
spcial
soit
intrieur
(fig. 1^27),
de
rayon marginaux
di-
rects et ne laisser
rayons
diffracl es.
Le condensateur
de Leitz existe sous
Fig.
1-2-4.
(Leitz).
la place
Fig.
1-25.
Condensateur
Petit
125)
est
modle, se
fixe
(fig.
244
microscopes grands
peut
tre
centr
et
moyens;
facilement
il
et
peut
tre
plac
sur
tement
et
on a de
la prparation maintenue
des
valets et par Fadhrence
par
de rhuile de cdre. Nanmoins
trage,
de voyage
et
pour
peine
ce cen-
la
comme
appareil
RElViRQUES CONCERNANT
TOUS LES APPAREILS A FOND NOIR
lit.
l'immersion du condensateur.
De
lame
la
du condensateur
l/huile d'immersion
et
il
doit tre
la
21
">
prpa-
trs fluide,
parfaitement
limpide et exemple de bulles d'air. On peut trs bien employer,
au lieu (rhuile de cdre, de Ihuile de paraffine, de la glycrine
mme
ou
suffit,
le
Avec
les
la
platine,
la platine, le }>etit modle de Leitz possde le grand avantage d'avoir un levier, permettant ces lgers dplacements verticaux. Avec tous ces appareils, on peut donc se servir de lames
sur
tels
de dire dcoule
la
ncessit de ne faire
dehors de
gnent l'observation.
Elle a
la
mme
importance que
84). Comme on
ne faut pas ngliger
(p.
il
216
Les objets
6^ Milieu de montage des prparations.
examiner doivent tre monts dans l'eau ou Thuile de cdre, mais
ni
aucune image.
Si le milieu
et
lumineux.
7o
Il
tmes
sec
numrique
moyens ou
forts,
dont l'ouverture
le
numimmer-
avec
les objectifs
Fig. 127.
Diaphragme
intrieur pour objectif
immersion.
rants,
intrieurs doivent
(fig. 127). Ces diaphragmes
gnralement tre ajusts par le constructeur; ils sont amovibles ou non suivant
les cas.
Pratiquement, et pour les travaux couon emploiera donc les objectifs sec, associs des ocu-
pour augmenter
le
plus possible
le
grossis-
217
il
faut
faire placer
mettre au
et
90
Choix de
rants,
source lumineuse.
la
arc
les
lampes
d'ailleurs maintenant de
nent avec
les
Pour
les
lampes
travaux cou-
on construit
arc
les
Il
faut savoir
que
cette
lampe ne s'allume
la
avec prcaution,
rement
et,
le filament
dans
le
ne faut
tomber
Pour
la
le
filament en
mme
le
raison,
temps
il
stric-
consomme
renvers.
La lumire
branche sur
le
troide
et
plus condense.
secteur lectrique.
218
En
du laboratoire
dehors
notamment en voyage, on
el
emploiera
les
exprimenter
l'efficacit.
incandescence
est la petite
lampe
de projection
elle
marche au moyen d'une soufflerie en caoutchouc, genre thermocautre. Le manchon est petit, mais trs lumineux et en donnant
au moyen de
employe pour
la
poire
une
les appareils
facilement transporlable
forte pression,
sufft
mme
pour cela de
le
tremper dans
nomm
un
il
est prfrable
fuites.
obscure.
10''
Ces oprations sont de premire importance, car le meilleur clairage donnera des rsultats trs mdiocres s'il n'est pas soigneuse-
ment centr.
Le centrage
s'effectue en
deux temps
on centre d'abord
de
lentille condensalrice, le
ne se sert pas
centrage est
il
sans dplacer
le
Si on
l'clai-
Si
on se sert d'une
lentille
plie d'eau)
du
le
plan
soit
il
parfaitement claire.
Il
est
notamment indispensable
que
219
cela
on place
lumineuse
source
de
environ
Fig. 128.
la
est
:20
place
lentille,
centimtres
un peu haut, de
telle sorte
que
plan de
la
Avec
la
ou deux
colore
litres,
en bleu
sulfate de cuivre,
une hauteur
il
le
suffit d'lever la
suffisante
le
pour que
lampe
son image
miroir plan.
approche ou on loigne
le
Fig. 129.
Aspect
des cercles de re-
microscope, jusqu'
surface du papier, correspondant au
miroir, soit exactement couverte d'un cercle lumineux bien uniformment brillant. Par quelques ttonnements on rgle ensuite
ce
la
que
la
du miroir.
Centrage du condensateur fond noir.
position dfinitive
h.
La plupart des
deux
Il suffit,
220
^,
d'abord
dplacements antro-postrieurs
du centrage.
petits
tion
IV.
et latraux
jusqu' obten-
empcher
la
rivent l'objet. Si le prlvement du liquide organique est insuffisant, on diluera donc avec de l'eau distille, de la solution
Canada,
etc.).
Quel que
trs
Mise au point.
face
infrieure de
la
lame
et
le
condensateur. Le contact de ces deux gouttes assure la continuit optique et, grce cet arlifice, on vite la formation de
(voir plus liant p. 215). On met alors au point
d'abord avec un objectif faible (obj. 3 et oculaire 0). Si le miroir
est bien orient, on doit apercevoir une tache au milieu du
bulles d'air
champ. Cette tache, qui correspond l'image de la source lumineuse, doit tre rendue aussi petite que possible par de lgers
mouvements verticaux du condensateur. On remplace alors l'ob1. Ces cercles ne sont visibles
que
recouverte d'huile de cdre.
si
la
jectif faible
un
fort
221
ocu-
pas parfait,
le
Lorsque
Aspect du champ.
ou
le
un fond
lumineux mobiles
immobiles.
faut
Il
savoir reconnatre,
parmi
sire
simplement en mettant
une goutte d'huile de
cdre entre lame et lamelle.
Parmi
biles,
les
les
lments mo-
les
autres
progressive
sont rellement anims de
,
mouvements
propres.
Il
Fig. 130.
Aspect de la srosit d'un chancre
syphilitique, examine avec l'clairage fond
noir.
mouvement
V.
INDICATIONS
ment de grand
courante,
il
services; mais, en
doit rester
222
mthodes de recherche. En
ce
effet,
mode
du contraste entre
obscur.
En
outre,
les ohjets
fortement clairs
et le
les
fond
images
il
cette
l'examen
hou
l'tat frais,
un peu
11
est
superfi-
ciels
i\lais le
les
sources
recom-
mander.
Ces rserves
faites,
disons que
est la
la
Le type de
la
cette
syphilis,
dtail p. 513.
Un
ment
1.
Uuhde,
la
XXIV,
p. 76, 1911.
iiu
de prparations
Ullramikroskop. Avchiv
f.
Prolisten-
223
de
particulirement difficiles, puisque rien
de
document
servir
ne
subsiste,
justificatif
qui puisse
permanent
et de matriel de comparaison.
obtenus
rsultats
faut
donc
tre
trs
Meyer
Bactries
cilies
En
Ils
technique courante
et
entrans.
la visibilit
effet,
prits optiques,
ni
une substance collode qui favorise la coarende ainsi plus visibles. Les non-lectrocils invisibles, tandis que les acides
lytes et les bases rendent les
et les sels sont les corps les plus favorables. Le meilleur milieu
ferme un leclrolyte
lescence des
et
cils et les
cils
condensation de
nets
que dans
concerne
la
les
les Protozoaires,
membranes, myonmes,
cheurs
1.
trs spcialiss.
224
VI.
NOTIONS SUR
L'
U LT R AM C R
I
OSC O P
qui spare deux points, il faut que cette distance soit plus
grande que l'espace qui spare deux lments sensibles de la rtine.
Nous ne pourrons donc pas distinguer les limites d'un objet, si ces
limites sont comprises dans un espace d'tendue infrieure cette
donne anatomique. En ce qui concerne le microscope, nous avons dit
(p. 71) que ce qui importe n'est pas le grossissement linaire, mais le
pouvoir rsolvant, et nous avons tabli les limites de la rsolution des
meilleurs objectifs. Nous savons que, praliquement, celte limite est de
5 et que, dans certaines conditions particulires, elle peut tre diminue de moiti et porte
25, soit un quart de micron. Ce dernier
chiffre ne peut tre obtenu qu'avec l'clairage monochromatique ultraviolet et l'image ne peut tre vue que par l'intermdiaire de la plaque
photographique (p. 73 et 79).
Il faut
non seulement envisager ces conditions, mais encore la
la distance
[j,
ij.
[j,
lumire, quelles que soient les radiations employes. Aussi, pour voir
ultramicroscopiques, c'est--dire celles dont les dimensions sont une fraction de micron, qui peut mme descendre au millionime de millimtre, a-t-il fallu chercher un procd dtourn.
On est arriv rendre visibles ces particules au moyen de l'clairage
les particules
1.
p. 195-208, 1905.
. Cf. p. 208, note 1.
CLXXIX,
225
diffrence fondamentale entre le fond noir et l'ulirainicroscope. Dans le premier, l'objet est encore dfini morphologiquement, on peut le recon-
les
comme dans
Dans cet
Ultramicroscope fente de Siedentopf et Zsigmondy.
appareil, le liquide examiner n'est plus enferm entre lame et lamelle,
mais dans une cellule de forme particulire. Cette cellule est claire
par un faisceau lumineux qui traverse d'abord une fente rglable, puis
un objectif qui projette une image trs rduite de celte fente. On arrive
ainsi raliser, dans les liquides ou les solides, des coupes optiques
trs
le
solides.
M. Langehox.
Prcis de Microscopie.
15
226
La cause en
pratique.
motion
il
ne faut pas
Quoi
qu'il
en
soit,
les
les
CHAPITRE XIX
APPAREILS ACCESSOIRES
la
courant.
Je signale, sans le dcrire, V opak-illuminator C'est un
dispoqui permet d'examiner des objets opaques en lumire rtlchie,
.
sitif
mme
il
consiste
clairer l'objet au
jectif
la
mtal-
lographie microscopique.
Un accessoire trs important, pour les micrograplies qui sont obligs de se livrer l'ensei-
Oculaire
Fig. 131.
indicateur.
on
dmonstrations
faisant
et
on peut s'assurer
montrer avec
si
l'aiguille le
^On
petit orifice
cetorihce on
1.
dans
fait
Van Walsem,
Zeitschr.
du diaphragme. Dans
une
passer
pingle qu'on peut enfoncer plus ou
le
Uebcr
eiu
cint'aehstes
1904.
fakultalives
Demonstratiousokular.
228
moins. R. de Sinty
place au-dessus du diaphragme un mince
anneau de lige, dans lequel il pique une trs fine aiguille.
Les conslrucleurs fabriquent presque tous des oculaires indica'
avec un
Leitz
mouvement de
la
manuvre de Taiguille
Nous figurons celui de
rotation de l'oculaire.
(fig.
Le marqueur
servir
y a beaucoup de ujoiJles de
marqueurs un des meilleurs est celui qui
possde une pointe de diamant (fig. 132).
l'il
nu.
11
v^
Marqueur
Fig. 1.3'2.
pointe de diamant.
On
du champ optique.
dfaut de marqueur, ou aura recours, pour retrouver un
point dans
une
pri)aration,
aux
petits
moyens
trs simjdes
que
on
suggrera. En voici quelques-uns
sur
la
tracer
un
cercle
avec
une
et
de
l'encre
lamelle,
peut
plume
indlbile (p. 455), en se servant d'un ol)jectif faible. Pour les
l'ingniosit de
chacun
lui
aiguille.
de
la
le
le
bord
trac
ploi,
1.
.
lame. Avec
on
trace
684.
Fischer.
4''
cdit.,
1902.
cl'.
229
APPAREILS ACCESSOIRES
la
Pour centrer
la jdatine
Fig. 133.
On
de nouveau, on emploie
le
mme
artifice.
moyen de
trois points
correspondant
Enfin, rap}areil dit chercheur Mallawod et les appareils simipourront rendre des services. Thoriquement les verniers
laires
des platines chariot devraient suffire au reprage. Malheureusement, comme il a t dit (p. 16), leur emploi est peu pratique et
les indications qu'elles donnent n'ont de valeur que pour un seul
11
on
les
1. De Vcsoovi, Un
semplicissimo marcatoro goomctrico per micrografia. Zool.
Anzeiyer, XV, p. 203, 180-2.
2. Curreri, Metodi vecchi e uuovi por dctcrniinare e ritrovare la posizione di
uno o pi piuiti iateressanti di jircparati microscopici. Richcrche lahor. anat. noi-m.
Roma, XII, p. 53-85. pi. III, 1906. Trs important mmoire o tous les appareils
de l'eprage sont passes en revue. Bibliographie trs complte.
230
ductibilit,
alcool ou
un bec Bunsen
petite
flamme.
Parmi
celles de Pfeiffer,
1.
le
de Strickcr
et
de Ranvier.
DEUXIME PARTIE
r
METHODES GENERALES
CHAPITRE PREMIER
BUT DE LA TECHNIQUE
MICROSCOPIQUE
L'tude du microscope nous a montr que les objets, observs
avec cet instrument, doivent tre trs minces et trs transparents.
Nous savons, en efet. que. dans l'immense majorit des cas, ces
objets sont examins en lumire transmise. L'emploi de la lumire
rflchie est trs rare; il ne s'applique gure qu' Ttude des
On
Mme
quels.
disso-
mer
entre lame
MKTIIODES (JKNIIALES
232
nilives, susce|li!)les
il
esl
lmi
outre insuffisaiU pour nous montrer tous les dtails de Forganisalion. Nous savons (juc la })lu|)arL des objets doivent tre
colors,
de faon
diffraction
illusions d'optique
(p.
157).
dans Texamen
que
les
images par
colorations
devrons-nous
la
sur du matriel
aux
mthodes de montage
et
ou mdiums.
(jui
tranches minces,
de
les colorer et
des cas
Dans
la
de
les
deux groupes
lin.
La
lin, c'est
avant tout
la
connaissance exacte de
233
la
struc-
La prparation,
soit, n'est que
bien excute et
si
agrable regarder qu'elle
de
parvenir cette lin. Voil ce qu'il
moyen
ne faut pas oublier, si on veut faire de bonne besogne scien-
tifique.
si
le
CHAPITRE
II
LA PRPARATION MICROSCOPIQUE
enfermer
sert supporter
l'objet,
la
lame
c'est
ce
c'est le porte-objet
dernier vocable
ou
qne nous
est en verre
LA PRPARATION MICROSCOPIQUE
23^
dernires sont plus lgantes et permettent d'employer la tournette pour faire des bordures bien rgulires. Pourtant, j'ai
l'usage.
pour
coupes.
Un
un
cliiffre
On
trop
faible
la fragilit,
moyen pour
corrigs.
Nous
^-^-^-^^,^.,
,.
pig. 135.
mme
temps
^^"^^ raicooi.
el
loin (p.
236)
les
ici
ne
Bocaux
^^'^i^s
mme
que,
neuves, elles
telles
dans
l'alcool.
Lames
el lamelles seront
moment de
s'en servir
L'objet peut tre mont entre lame et lamelle, soit dans l'air, ce qui
cas le plus rare, soit presque toujours dans un milieu liquide.
Parmi ces derniers, les uns sont solidifiables, soit par refroidissement,
soit par vaporation, les autres sont des solutions aqueuses. Dans le
est le
premier
le
METHODES GENERALES
236
cimeiil ou
lui.
Nous tudierons en
ces procds
dtail
de fermeture
(p. 447).
La prparation, une
colle de prfrence
fois
gauche de
frottis dessclis,
mais
il
recouvrir d'huile
Dans
pour que
verre, peut s'taler rapidement ou former une calotte sphrique, suivant (|ue le verre est mouill ou non. Dans le premier cas, le
liquide s'tale et l'objet n'est plus couvert; dans le second, il y aura
des jeux de lumire dus des ingalits de rfraction et de rilexion.
nne lame de
Lamelles en glatine.
Pranter
eu
l'ide
ingnieuse de
parentes dont on se sert pour envelopper certaines denres alimentaires (pain d'pices, etc.). Ce procd ne peut convenir que pour
et
p. 159, 1901.
montes au baume ou
fiir
Dcckglascr. Ztsclir.
f.
la trbenthine
wiss.
Mikr., XVIII,
LA PUPARATION MICROSCOPIQUE
237
pour
Lames neuves.
les froUis
Pour
de sang,
Pour
il
travaux dlicats
les
est prfrable
el
notamment
neuves.
les
frottis,
pelucheux.
on n'ouvre
les
l'eau et
supprimer
toujours un peu
les
Pour
un avantage. Le
le
nettoyage
des
lames
il
lames
il
conomique de
que de
les
METHODES GNRALES
238
on
resservir,
les fera
mlange suivant
100 gr.
100
1000
Bicliromate de potassium
Acide sulfurique
Eau
puis on les lavera grande eau
dans Falcool.
que ponr
les
et,
Lamelles.
3.
le
les
pouce
et l'index
gauche.
est plus ncessaire encore que pour les lames de les laver
l'alcool acide, car elles sont souvent recouvertes d'un enduit blanIl
chtre adhrent.
On
jusqu'au moment de
les
l'emploi.
En Europe,
les
lames
et
Dans
rapides
les lamelles,
opalescente et mettre hors d'usage non seulement
les lames.
mais encore
Il
vnients
peu de moyens pratiques pour lutter contre ces inconil faut d'abord choisir des lames et lamelles en verre de
Ce moyen
trs
soigneux
et
CHAPITRE
III
mthode
liistologique la fois la
plus simple et
la
moyen de
courants protoplasmiques, phnomnes de digestion intracelluOn emploiera l'examen l'tat frais, non seulement pour ces
divers ordres de recherches, mais encore pour l'examen prliminaire
du sang et des autres liquides organiques, la recherche de certaines
Bactries, des Champignons microscopiques et parasites, et enfin, d'un
bon nombre de parasites animaux.
tions,
laire, etc.
Cette
mthode
est
minces
et
est
trs prolonges, et
enOn
elle
METHODES GENEIULES
240
des
(l('lails
de
slriictiire. Poiirlant,
on peut arriver
lescenlrosomes Bresslau
:
en choisissant convenablement
les objets,
les
observe Ttat
frais,
dans
les
que
ufs
de Mf'sosloma Ehrenbergi, Turbellari qui vit dans les marcages peu profonds (20 30 cm.), fond d'humus et de feuilles
mortes, de prfrence dans les endroits ombrags.
L'examen Ttai frais ncessite certaines prcautions. Etudions
sont d'ordre optique. Comme il s'agit de pr[)ase reportera ce qui a t dit ce sujet
clairera la prparation avec des faisceaux aussi troits
d'abord celles
rations
146.
p.
fjui
non colores, on
On
possible, qu'on obtient en rtrcissant convenablement l'ouverture du diaphragme iris, de manire ne pas noyer les dtails
que
dans une lumire trop intense. L'clairage joue ici un rle considrable car il s'agit le plus souvent d'objets dont l'indice de
rfraction
dilre
peu
de
celui
les
examine.
L'emploi du fond noir'
examens
les
(p.
I.
taille et trs
dissmins.
LIQUIDES D'EXAMEN
Il
uns servent
les
examiner
les
organismes
l'tat
l'tat frais
vivant, les
Liquides physiologiques.
naturels ou artificiels,
l'tat
naturel.
On
les
nomme
qu'ils n'exercent
les
000,
dite solution
physiologique"^.
1.
241
le sang-.
le
srum
Eau
135
distille
Blanc d'uf
Chlorure de sodium
Pour
pour
cm^
15 gr.
0,20 gr.
les Invertbrs
les
et,
aprs fixation;
il
l'tat
frais
consiste traiter
les
rend
plus apparents.
les
et
permet de reconnatre
les fibres
Facide
las-
actique qui
milieux de
les
Amann
ment.
Nous pouvons mentionner ici l'emploi de Vencre de Chine que nous
tudierons plus fond en parlant des prparations sches (p. 7U0). On
M.
I^iANGERON.
Prcis de Microscopie,
16
METHODES GENERALES
242
choisira de Tencre
dty
11.
MTHODES D'EXAMEN
Le principe de celte
Examen entre lame et lamelle.
mlhode consiste examiner l'objet vivant enli-e lame et lamelle,
dans des conditions qui se rapprochent autant que possible de
celles de son milieu naturel. Le i)rocd le plus simple se rduit
un peu du liquide renlermanl en suspension les objels qu'on veul tudier. On dpose celte
et on recouvre d'une lamelle bien
goutte sur une lame propre
d'une pipette effile,
prlever, Taide
...
2 parties
1
en poids.
partie.
243
soit
fine
ou du
lui solide
comme
il
la
prpabords
les
la paraf-
est dit p.
448.
ni
l'craser
le
tuer.
On
em[doi8 dans ce but des instruments iiarticuliers, dits compresseurs, il en existe beaucoup de
modles, donl les uns agissent
par des ressorts, les autres par
des vis de pression. Certains appa'
reils
trs
,..
,.,..
r ly. lob.
'
_,
compliqus,
tels
^
,^
Gompresseui' de tourment
modifi par Brumpt.
que
modifi par Brumpt (fig. 136 1. Il a t calcul pour servir avec des
lamelles carres de 22 mm. sur lesquelles il exerce une pression
trs
uniforme
Examen
et facile rgler.
des
animaux
vivants.
des colorations
vitales).
la
Citons
digestion et
l'excrtion
comme exemples
les
Nous aurons
peu pigments,
etc.
METHODES GENERALES
244
Lame concavit
l'examen en goutte pendante.
Fig.
137.
pour
Ori-
r/inal.
suprieur au
trs
est
prc-
sur
137),
(iig.
An138.
neau de verre
Fig.
pour
cellule.
que
la
vient en
alors elle
s'tale
immdiatement. En outre,
si la
comme nous
l'avons souvent
ment l'talement de
Cellule
Fig. 139.
11
donc
faut
ment
la goutte.
l'alcool.
Une
fois
la
Un
on lute
la vaseline
ou
la paraffine.
anneau
une lame
un
de
Ces anneaux
vei^re.
se
(fig.
138)
tout
prpars
commerce. On
trouvent
dans
le
les fixe
au moyen de baume du
Canada, de lut solide
la
245
142.
Fig.
6,
c, cellule
rigole circulaire.
en verre;
s,
disque
d'eau cette cellule de carton (flg. 141). Au besoin on la strilise par bulli11 suffit de la maintenir humide
pendant la dure de l'observation.
tion.
est
la
,.,,..,
..:.. ........,
.
...._.
Fig,
d'paisseur entre le
lule.
Original.
la
la
chambre
diffrence
qu'on dpose la
goutte de liquide, on
recouvre ensuite d'une
lamelle qu'on lute
la
vaseline ou la paraffine.
La goutte
se trouve
prisonne entre
la
em-
Fig. 144.
till.
Original.
face
de rilexion
la
surface
et
dune
Voir
examens
l'tat frais
M KTIODES
240
KNKRALES
Ce genre de prparation, pour oti'o irnssi, exige certaines prcanlions. La goutte doit tre assez petite pour ne ])as dborder le
plateau aprs application de la lamelle. Dans le cas contraire, elle
rpand dans
se
rigole ou
la
mrne sur
la
lame
et les
organismes
Microaquariums.
reils
nomms
'
'^1
</
Fig. 145.
-/i
Micro-aquarium
le
Sciiaudinn.
l'eau et les animaux exapeut encore, plus simplement, coller sur une lame des bandes
dcoupes dans une autre lame et limiter ainsi un espace carr, ferm
sur 3 cots (fig-. 145); on recouvre cet espace avec une lomelle colle sur
les bandes de verre. Ces aquariums restent ouverts sur un ct, mais
l'eau ne se rpand pas, car elle est retenue par la capillarit. On peut
introduire avec les animaux quelques filaments de Spirogyres qui servent arer l'eau. Pour coller les pices de ces aquariums on emploiera
soit du baume du Canada, soit du lut la colophane (p. 447).
miner.
On
en
III.
INDICATIONS
On
trouvera, au
DE L'EXAMEN
L'TAT FRAIS
F.
ici
les principales.
En
247
lymphe,
et
l'ois
etc.
mme
CHAPITRE
IV
COLORATIONS VITALES
Nous avons reproch la technique d'examen Ttat frais de
ne pas nous montrer les dtails des ohjets. La mthode des coloun procd intermdiaire entre cette
des
colorations
aprs fixation. Elle a pour but
technique
de faire apparatre certaines parties de la cellule, telles que le
rations
vitales
constitue
et celle
novau ou
les
physiques ou chimiques pouvant amener la dformation, Taltralion et finalement la mort de Flment examin. Celui-ci finit
bien par mourir, mais non pas uniquement du
fait
de
la coloration.
Les colorations vitales permettent de dmontrer la ralit de l'existence de certaines inclusions cellulaires qui pourraient tre prises pour
des prcipits colors, autrement dit pour des artifices de prparation.
Cette existence relle ne sera prouve qu'autant que la coloration aura
eu lieu sans que la vie de la cellule soit arrte. C'est ainsi qu' l'aide
du roug-e neutre, on a dmontr le rle digestif des granulations et des
vacuoles de beaucoup de Protozoaires. On a dcouvert, grce cette
mthode, des phnomnes intra-cellulaires d'oxydation et de rduction
qu'on met eu vidence par la dcoloration de certains ractifs (p. 2.52). Il
faut savoir en outre que, parmi les inclusions cellulaires, tout ce qui se
colore n'est pas vivant des pigments divers et des cadavres de Bactries
se colorent souvent trs intensment. Enfin, dans beaucoup de cellules,
surtout chez les Protozoaires, les noyaux sont bien plus difficiles
:
ment
que
la
la cellule
249
COLORATIONS VITALES
colorations,
Il y a donc
il
Je ne
ci'ois
serai
dont on trouvera
la
technique
peuvent trouver un emploi journalier que dans Ttude des Protozoaires et du sang, etdans certaines ractions microchimiques. On
trouvera dans les chapitres qui y sont consacrs (p.
indications suffisantes.
469
et
624) des
250
MKTIIODES liNKRALES
Vitaux^ ne devront
(les
en
})as
parmi
qui conviennent
le
favorables. D'ailleurs, cette rgle n'est pas absolue, car des corps
trs voisins et de mme raction peuvent produire des effets trs
diflerenls, sans qu'on puisse expliquer celte lection particulire
des tissus. Parmi les thories qui tentent de rendre compte de ces
dans
les lipodes.
notamment
vis--vis de la cholestrine
et
Les
j^lus usits
sont
1 p. 500,
p.
1000,
1 p.
10 000.
p.
1000
624).
Azur I ii[ II
(i^.
Rouge neutre
389).
(p.
251, -469
Colorants indicateurs
et
625).
252).
des colorations vitales.
(p.
Technique
cipaux moyens d'employer
les
colorants
H y
vitaux.
deux prinbien on
Ou
lute
Les
pour
viter la dessiccation.
colorants
vitaux
s'emploient
toujours en solutions
trs
tendues
diircli
die lebcnde
COLORATIONS VITALES
251
sion,
La coloration dite posl-vitale, d'aprs Arnold, se fait en dtachant des fragments d'organes, des lambeaux de membranes ou
mme en raclant des lments cellulaires la surface des
muqueuses. Ces bhnents sont plongs dans
le
faut, aprs
et le
(p. ^^84)
doit
tre
chimiquement pur.
On
la
la
le violac.
On
en
fait
acides ou alcalins.
la liqueur
Une
faible
belle couleur
1.
et
une
la coloration vitalo
du sanp:
METHODES GENERALES
252
Une
virer au jaune
que
celle
les solutions plus concentres. Ces phnomnes permettent d'tudier les ractions du cytoplasme et de ses inclusions, particulire-
ment chez
En
solution alcoolique,
535).
le
rouge neutre
est
brun rouge en
Ce corps
est trs
trs
les Souris
meurent gnrale-
Colorants indicateurs.
Les proprits indicatrices du rouge
neutre nous amnent parler d'une srie de colorants qui, sans
fournir des colorations vitales proprement dites, peuvent tre utiavantageusement, dans les examens l'tat frais, pour dter-
liss
Le rouge Congo se ]rsente sous forme de poudre brun rougetre, facilement soluble dans l'eau. C'est surtout un bon ractif
indicateur qui vire au bleu avec les acides. Scholz s'en est servi le
premier pour colorer vitalement les Piotifres et mettre en vidence la raction acide du tube digestif, qui tranche en bleu sur
fond rouge de l'animal. Il est bon de savoir que ces ractions
ne sont pas toujours fidles le virage au bleu ne se produit pas
en prsence de l'ammoniaque, ou d'un coagulum albumineux
le
en outre
L
l'acide
Zeitschrift
f.
carbonique
wiss Mikr.,
XIX,
p.
176-185, 1902.
COLORATIONS VITALES
Les iropolines 00 (orange
de
Gas^ella)
eL II
de
Le Sudan III
tains
HiJclisl) et
rougissent immdiatement
253
avec
la
moindre
trace
carbonique.
colore lectivemenl les graisses (p. 656) et certels que la cire, la culine et la subrine
lments vgtaux
le dimthylamidoazobenzol, s'emploie
(p. 729). Un colorant voisin,
aussi en solution alcoolique (0,4 p. 100) il colore le protoplasma
les graisses et certaines vacuoles en rouge.
en
;
jaune,
rgnre.
Injections intravitales.
La couleur verte
n'est jamais
nerai les injections de poudres colores, ncessaires pour les travaux sur les cellules ou les organes phagocytaires les substances
:
les plus
CHAPITRE
DISSOCIATION.
DIGESTION ARTIFICIELLE
DCALCIFICATION
Je vais insister assez longiiemeiil sur
la
procds qui s'y rattachent, parce que les dbutants sont trop
enclins aujourdMiui ngliger ces mtliodes. Sduits par la facilit
les
On
trs fausse de la forme vritable de ces lconnat que sous l'aspect qu'ils revtent dans les
sections minces. Si on prsente l'lve la mme cellule, isole ou simplement coupe dans un sens auquel il n'est pas habitu, il ne la reconnat plus. On oublie trop que l'il humain est fait pour prendre connaissance des objets extrieurs suivant trois dimensions et que nos
thories sur les rapports et les fonctions des organismes sont bases
sur la reprsentation que nous nous faisons de ces objets dans l'espace.
Gomment comprendre la complexit des mouvements nuclaires qui
prsident la mitose ou les rapports multiples que prsentent entre eux
les lments si varis d'un organe parenchymateux, si nous en sommes
rduits nous les reprsenter sur un plan, nu moyen de coupes optiques? C'est grce une longue habitude que les micrographes exercs
se fait ainsi
ments car on ne
une ide
les
arrivent, comme nous l'avons expliqu (p. 168), superposer ces coupes
optiques, pour reconstituer loljjet entier dans l'espace. Le dbutant en
aussi n'aura-t-il qu'une connaissance incomplte et une
est incapable
ide fausse de la forme des lments cellulaires, s'il ne s'astreint pas
d'abord les tudier isolment, les faire tourner en quelque sorte
sous ses yeux, pour les voir sous toutes leurs faces. La mthode des
:
une base
255
La
consisie
dissociation
tissus. Elle
au moyen
dissociation
mcanique
intercellulaires
lments.
alors
est })rcde
miques peut
mme
'agilalion interviennent
sparation. L'action des ractifs chitre plus profonde, tout en restant lective, et
pour en parfaire
la
dcalcification.
DiSSOCITION MCANIQUE
I.
On
frais, soit
sur du matriel
excellente pour
atermir
la
main
et
lui
donner
riiabilet
qui
lancole.
ils
Aiguilles.
et,
il
que
la
surface en
soit
parfaitement polie.
emmanche dans
des |)orte-aiguilles
les aiguilles
elle est
MTHODES GNRALES
256
puis de les polir sur un cuir, mais ces oprations sont assez longues et
on ne russit pas toujours trs bien. Je conseille donc de prfrence
l'emploi de bonnes aiguilles emmanches pointe trs effile et base
solide, non Ilexible, ou, leur dfaut, d'pingles Insectes de premire
qualit, qu'on {\xe dans un porte-aiguilles.
Pour manipuler de trs petits objets (Infusoires, Diatomes, etc.), on
peut employer, comme les anciens, une soie de Porc, ou mieux un cil de
Porc, qu'on fixe avec un peu de lut la cire (p. 447) l'extrmit d'un
petit bton.
droite,
une
Il
faut
deux
aiguilles,
une pour
On peut
ou sous
le
commerce. Qu'on
tant
que
travaille la
soit
la
convenablement
claire.
il
est
impor-
Pour cela il
on le
228)
prparation
faut disposer d'un fond mi-parlie noir et blanc (fig.
ralise au moyen d'une plaque de verre sous une moiti de laquelle
on colle du papier blanc et sous l'autre du papier noir. On peut ainsi
:
immdiatement sur
le
fond, de manire ce
l'objet.
On
ment
On
peut employer
deux
fois
ce qu'elle soit
une bote de
un fragdment
simj
cet effet
ou entre-croiss.
En
effet, si
on dila-
257
fibres;
une moili, nous diviserons l'autre, et nous rpterons cette oprade manire obtenir des filaments de plus en plus fins. Dans
ce cas, on dissocie dans le sens de la longueur, en appliquant les
tion,
aiguilles
la
mme, pour
deux
est vident
faire
sec,
II
sous
La
imagine par Ranvier, s'applique au tissu conform d'lments entre-croiss de telle sorte qu'il s'tire en tous
sens sans se dclnrer. En talant ce tissu sur une lame de verre et en
lui faisant subir un commencement de dessiccation, on arrive faire
demi-dessiccation,
jonctif,
la
lame
et
obtenir
la
sparation des
lments.
Vagilation de fragments ou de tranclies d'organes avec une petite
quantit de liquide, dans un tube essai bouch, donne quel([uefois de
bons rsultats'.
Le raclage ou grattage avec un scalpel permet d'isoler facilement les
lments superficiels d'une mu({ueuse ou d'une tumeur.
Le brossage avec un petit pinceau trs fin convient pour les organes
lympboides on chasse ainsi les leucocytes et on peut tudier plus facilement les cellules fixes et la trame conjonctive. Ce brossage s'opre
sur des tranches minces, dans une goutte d'eau physioloi:i(iue.
La compression ou lcrasement modrs peuvent faciliter la dissociatrs
ne puis
du diapason lectrique de
Bovier-Lapierre;
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
17
METHODES GENERALES
258
IL
DISSOCIATION CHIMIQUE
Nous dislhiguerons
sant la dissociation.
Ce sont
les dissocialeurs
la
chimiques produi-
proprement
dits,
les
Il est
impossible de citer tous les
la dissociation ou macration. Je
de
produire
corps susceptibles
me contente d'indiquer les plus usuels et les plus faciles
Agents dissocialeurs.
employer.
eau chaude
Valcool au
tiers,
l'tude despithliums.
cils vibratiles.
On
le
Il
permet d'tudier
prpare en mlangeant
Alcool 90
Eau
distille
vol.
laisse
pour l'tude des lments des organes glandulaires. Pour ces derniers, on prolonge l'action du ractif pendant plusieurs jours.
Mann recommande vivement rem|)loi de l'alcool au tiers, modifi
selon Flix en
le
On
double
le
temps
pour
muscles
parfait
:
les
laire.
On emploiera donc des solutions 30 ou 40 p. 100, frachement prpares avec de la potasse ou de la soude en pastilles,.
figurs.
trs
2o9
bien en (laons
On
faibles
Les
Les agents fixateurs^ convenablement modifis^ peuvent produire d'excellentes macrations. On peut donc, en combinant les
concentrations, les faire agir isolment ou successivement comme
fixateurs
et
comme
ncessaire de n
car,
employer qu'une
mme aux
Dans ce dernier
volume
est
cas,
il
est
faibles concentrations,
de
dissociateurs.
ils
peuvent agir
comme
la pice.
Vacide osmique
100
et fixe partir
de 0,5 p. 100.
fixe
p.
partir de
100
et fixent
Vacide chromique
0,25 0,50
p.
de 3 40
METHODES GENERALES
260
le
pepsine ou avec
la
pancratine.
On peut
employer
Pepsine.
une fistule gastrique, ou
par
(1 })artie
la
le
commode de prendre
dans de l'acide chlorliydrique 0,2 p. 100. [,e litre de cette solution de pepsine peut varier de 0,1 0,5 p. 100, suivant la puissance du produit et l'effet qu'on veut obtenir. On opre la
temprature de 37^ ou mieux de 40 et on surveille attentivement,
pour arrter l'opration au moment o le rsultat dsir est obtenu.
de Jousset
(p.
les pullula-
695).
fait
cristal
de thymol.
La digestion pancratique
la
du
bacille de la
(p.
694).
2G1
uii
petit tube,
aux
le
simplement sur
la
lame.
L'emploi du pinceau peut rendre de grands services. La dilacration proprement dite avec les aiguilles est quelquefois ncessaire. Enfin la percussion ou le tapotement entre lame et lamelle
donnent souvent de meilleurs rsultats que toutes les autres
mtbodes. Ce procd demande beaucoup de lgret de main
et
la
lamelle. Cette dernire doit donc tre soutenue par une cellule en
les
papier dcoup ou par quatre boulettes de cire places sous
de
242). L'objet est plac sur la lame avec un peu
On
sur
ses
recouvert
la
lamelle
supports.
par
pose
liquide
ou
tapote alors doucement au-dessus de l'objet avec une aiguille
angles
(p.
et
une
petite tige
de verre ou de bois.
les pitbliums,
une sparation
On
Lorsque
la
(lissociateur,
il
Les lments
lamelle. Celle-ci est supporte aux quatre angles par des boulettes
et on fait passer sous elle tous les liquides successifs des-
de cire
tins
au lavage,
l'objet et
ne pas dplacer
la lamelle,
il
ne
faut pas introduire plus de liquide qu'on n'en relire. Les bandelettes de buvard, pour agir efficacement, ne doivent pas tre
dchires au
ciseaux.
Il
hasard,
faut leur
mais
donner
dcoupes
la
rgulirement avec
largeur du petit ct de
la
des
lamelle
METHODES GENERALES
262
et
On
on
dpose sur
le
bord de
la
lamelle.
doit
les
la
une partie du prcdent, surtout lorsqu'il y a entre eux une diffrence de densit. Autrement le nouveau liquide, au lieu de pn-
Fig. 146.
la face
suprieure de
avant de continuer
la lamelle,
les
il
oprations.
III.
Cette
opration
imprgnent
DCALCIFICATION
consiste
dissoudre
les
en gnral, tous
sels
calcaires
qui
263
de
les
les
tudier par
la
liquides dcalcilianls,
sels solubles.
Du
cut
du
il se
produit donc
bases terreuses.
dcalcifiant,
les
En
deux cueils
du matriel
mais jamais
on emploiera un liquide trs pn liminer tel que le picroformol de Bouin (p. 284), ou
formol 5 p. 100, surtout s'il s'agit de grosses pices.
Comme
frais.
trant et facile
fixateur,
simplement le
2" Ne jamais employer
les acides minraux forts (except l'acide azotique), sans addition d'une substance destine empcher le gonflement
du collagne.
plus possible la dissolution des sels calcaires et, pour
cela, employer un trs grand volume de dcalcifiant, suspendre l'objet
dcalcifier au milieu du liquide et changer frquemment ce liquide si
ou
la gliflcation
Acclrer
l'os est
le
volumineux.
Il
est indispensable,
On
comme
dcalcifiants, un grand
ceux
qui forment des sels
parmi
solubles avec les bases alcalino-terreuses. Remarquons que tous
les fixateurs acides agissent plus ou moins comme dcalcifiants,
Dcalcifiants.
nombre de corps
Le meilleur
l'emploie,
(Mayer),
a propos,
acides, choisis
V acide azotique.
On
soit
soit
glucine.
i Solution aqueuse (F acide azotique 2-15 p. JQO d'aprs
Schaffer. Cette solution se prpare en ajoutant 3-23 volumes
d'acide azotique concentr, de densit J,4, la quantit d'eau
distille ncessaire pour faire 100 volumes. Ses avantages sont les
elle dcalcifie plus vite que tous les
suivants d'airs Schaffer *
autres acides (12-24 heures) et elle ne gonfle pas le collagne,
:
2G4
MCTIIODRS GENKRALES
condilioii
(le
pas mettre
110
le
ment
nient
le fonfle-
toutes les formules proposes ont, d'aprs lui, Tinconvde relarder beaucoup la dcalcification i (sauf la phloro-
glucine-).
L'acide sulfureux
aussi ra]nde
est aussi
un
l'acide azotique et
que
mlanges la phloroglucine. Son emploi a t rgl j^ar
Ziegler, dont la mthode est recommande par Schaffer, Mayer et
Mann.
On hxe d'abord les fragments dans le formol, puis on les plonge
dans une solution aqueuse d'acide sulfureux commercial
5 p. 100. Le phosphate Iricalcique insoluble est converti en mono-
que
les
phosphate
trs soluble,
de
telle
sorte
et
-f-
3o et de gros os
longuement l'eau
on dshydrate graduellement pour inclure la paraflave
ou au collodion.
1. Pourtant Malassez obtenait de trs bons rsultats avec une sohition aqueuse
sature d'acide picrique, additionne de -2 p. 100 d'acide azotique.
2. D"aprcs xVndecr et
Haug, la phloroglucine prserve les tissus de l'action destructive des acides et permet de les employer en solutions concentres. Haug
dissout 1 gr. de phloroglucine dans 10 gr. d'acide azotique pur, en chautiant lgrement, puis ajoute 50 gr. d'eau. On complte le volume de 300 cm^ avec de
l'acide 20 p. 100 ou moins fort. L'action est trs rapide. Ensuite on lave deux
jours l'eau courante.
GIlAl>ITHi-:
VI
THORIE DE LA FIXATION
Les mlhodes (rexamen rtal irais ne donnenl que des renseignements insnllisanlssnr la cellule vivante, parce que les lments
qui la constituent possdent tous peu prs le mme indice de
rfraction. La nature des rayons auxquels Til humain est sensible ne permet pas de surmonter cet obstacle par des procds
optiques et d'arriver ainsi distinguer nettement les dtails de
structure du noyau et du cytoplasme. Nous avons vu (p. 80) que
l'emploi des rayons ultra-violets permet, jusqu' un certain point,
de rvler ces dtails sans colorations, mais c'est une mthode
La
cellules,
en
Dfinition de la fixation.
lion
po&sible, dans
bonne
l'tal
fixation doit, en
elles se
quelque
fixation est
les
trouvaient pendant
sorte,
immobiliser
la
Une
vie.
la cellule,
con-
Une
empche bien
les
morlem, mais
elle
sent
MTHODES GNRALES
266
En
? Il
est certain
masse
mettant part
la
conglation et
Mann
a trs bien fait ressortir la diiTrence qui existe entre ces deux
la coagulalion (bien distincte de la solidification par le
refroidissemenL), est produite par les agents physiques, tandis que la
prcipitation, toujours accompagne de modifications chimiiiues, est produite par les agents chimiques. Le vritable but de la fixation est donc
de produire une coagulalion ou une prcipitation aussi compltes que
possible de tous les albuminodes cellulaires, en leur conservant un
aspect correspondant leur nature amorphe (cytoplasme), granuleuse
phnomnes
etc.
Elle doit les durcir suffisamment pour leur permettre de rsister, sans
dformation, toutes les manipulations subsquentes (dshydratation,
inclusion, coupes, etc.). il faut bien savoir que le durcissement est une
la plupart des fixateurs actuels duropration distincte de la fixation
:
cissent suffisamment les tissus, mais la rciproque n'est pas vraie et les
anciens liquides durcissants ne sont pas pour cela des fixateurs. C'est
pour
cette raison
Pourtant,
il
avec
d'autres colorations.
De ces diffrentes ractions peut rsulter aussi
une vritable
diffren-
contenu
dans la
rfrangibilit de ses diverses parties. Il en rsulte que des dtails, invisibles l'tat vivant, parce que leur indice de rfraction tait trs
THORIE DE LA FIXATION
fixateurs a notablement lev cet indice,
suivant la nature de chacun d'eux.
267
pour en
faire
morlem,
jjost
Il
est
superflu, aprs ce
que
l'tude microscopique.
la difficult
La rapidit des
des examens
l'tat frais et
altrations
de la colo-
On
en
et
le
fixation.
Si ces
mthodes
aux productions
excutes in vitro,
admettre que la coagulation du protoplasma est toujours due un phnomne de prcipitation. Chaque albuminoide cellulaire aurait sa figure
de prcipitation et chaque fixateur produirait sa fig-ure de fixation. Les
prcipits obtenus peuvent tre plus ou moins loigns de l'aspect vital
dans certains cas, ils peuvent tre purement artificiels
des lments
et constituent alors des artifices de prparation, dont il faut toujours se
:
dfier.
d.e
Mann, Physiological
190-2.
268
MTHODES GKNKI'.ALES
rnclion de
une
toule
srie de ractifs.
Si le
dans tous les cas, il est corlain (|ue l'objet rvl prexistait rellement
et ne nous tait invisible qu' cause de ses
proprits optiques. Il reste
savoir si la fixation nous montre cet objet dans son tat naturel ou si
nous ne le voyons jamais que modifi. L'emploi des fixations convergentes, suivant l'expression de Henaut, c'est--dire du plus grand nomltre
de fixateurs possibles, appliqus au mme objet, peut seul permettre de
formuler une opinion sur l'aspect morpbologique rel le plus probable.
Dans
l'emploi des lixalions convergentes il faut, avec Apathy, distingnraux qui permettent d'obtenir une fixation peu
prs homogne de tous les lments et les fixateurs diffrentiels qui
mettent en vidence certains dtails au dtriment des autres.
Remarquons enfin, que le pouvoir de prcipitation n'est pas proportionnel
guer
\es fixateurs
au pouvoir fixateur
l'acide osmi({ue, qui est un fixateur trs puissant
(p. 272) a un indice de prcipitation trs faible. D'autre part, le tannin,
qui prcipite nergiquement tous les albuminodes, n'a aucune proprit
fixatrice. Les fixateurs ne produisent pas tons des prcipits; il y en a
qui donnent des congulations homognes. Nous aurons occasion de
revenir sur ces particularits en tudiant les diffrents agents fixateurs.
Nous pouvons donc conclure la haute valeur de la fixation, pourvu
qu'elle soit accomplie dans certaines conditions bien dfinies, au
moyen d'agents possdant des qualits parliculires.
:
un
Le lixaleur idal
serait celui
(jtii
vivant, en
La
est
la
puissance de
de manire
les tissus,
ce
la
que le liquide puisse fixer aussi bien les zones profondes que
couche sujieriicielle. Le tannin est un fixateur di)lorable,
Le fixateur
doit produire
le ractif.
nodes, mais cela ne veut pas dire que la coagulation doive tre
Il faut, au contraire,
que la coagulation soit
en quelque sorte fractionne afin d'viter les contractions. Von
Tellyesniczky a bien montr que, dans les mlanges base d'acide
violente et instantane.
comme
les
prpare
la
THORIE DE LA FIXATION
269
tuer
coagulation doit tre mdiate. 11 ne faut pourtant pas que la diffusion soit trop leule, sous peine de caus5r des altrations dans
des parties profondes.
L'acidit du fixateur est donc une qualit indispensable. L'acide
la plupart des fixateurs en
actique est l'acide le ])kis employ
les cellules
renferment de
fixateur de la
les tissus.
de
la
Uona
et
les
}tar
En
eiet
un
Rubenthaler
(p.
296).
Notons enfin qu'un bon fixateur ne doit pas ratatiner les tissus,
ne pas les noircir ni les rendre cassants et friables, enfin ne pas
gner
Pourlaul V.
Je
XIV,
p. 139-1419
205-i>ll, 1905.
n'ai
2.
Studien, XXII,
191-2.
in
GHAPITHE
VII
AGENTS FIXATEURS
Les agents fixateurs peuvent tre d'ordre physique ou d'ordre
chimique. Nous allons tudier sparment les uns et les autres.
Agents physiques.
Il
est
avantage
Nous aurons
Ceci nous
amne
cieuse
si
elle
malheureusemement
niques
(p.
365).
ici l'emploi de la narcotisation comme adjuvant de
Ce procd a t employ par Rubenthaler (p. 296) pour les
est d'usage courant (p. 537 et 619) pour les petits animaux
Nous mentionnerons
la fixation.
tissus et
il
aquatiques.
AGENTS FIXATEURS
271
en solution
1 p.
distille.
Son action
fixatrice
ne
s'exerce
qu'en
tration et
produit, dans
il
le
donne lieu
protoplasmes. Par contre
il
la
de chrome dans
il
les
artificiels,
empche en outre
formation d'oxyde
partie de nom-
fait
Liquide incolore,
cristalli-
sant au
Golodetz,
il
augmente
augmente
la colorabilit
les
et,
empche
contrastes,
la
sparation
de tous
les tissus.
Employ
aqueuse
cytoplasme
1 p.
et ses
enclaves.
qu'on emploie en solution aqueuse sature ou en solution alcoo0,6 p. 100, beaucoup plus
lique ^ Solubilit froid dans l'eau
:
soluble chaud.
Pour prparer
la
1. L'acide picrique fait des taches indlbiles sur la laine et la soie. Sur le
linge les taches s"effacent au lavage. Les taches des doigts s'enlvent trs facilement avec une solution de carbonate de lithium. .Jellinek (Z^sc/ir. f. wiss. M'ikr.,
XI, p. 243, 189-2i a montr que ce sel forme avec l'acide picrique une combinaison
trs soluble. On peut proliter ventuellement de cette proprit pour dcolorer
rapidement
(p. 348).
272
MTHODES GNRALES
IVuiicri,
uue
Teau
d(^
En
histologie ani-
male, l'acide picrifjue, qui est un des ractifs les plus pntrants,
fait partie de
mlanges dont le type est le liquide de Bouin (p. 284).
Bichromates.
L'action de ces sels est bien connue grce aux
de strontium
les
noyaux.
de
et
Au
le
en deux groupes
AzH', Mg) et mme ceux
cytoplasme, mais dtruisent
les divise
baryum, de calcium
cuivre
fixent
et
(ju'on obtient
(llgCl-j.
eau ( froid
dans
l'alcool
et
on dcante
le liquide clair
doit entrer
en contact avec
les solu-
qu'il
ne possde pas en
p.
.'537,
1897.
AGENTS FIXATEURS
273
gr. 1
La manipulation
des diflicults [)articuliies. Il est
met sans cesse des vapeurs extrmement irritantes;
gr.
de ce corps prsente en
trs volatil et
il
effet
sV
exposer, car
ncessit de prendre des prcautions sppour prparer la solution. Le titre babituel est de 1 ou
cularits
ciales
dcoule
2 p. 100;
1 p. lO'O.
mieux
elle
peut tre
comme
encore,
la
faite
dans de Teau
distille
Sous
celle dernire
et se prte
on mieux
cbromique
conserve beaucoup
fixation par les vapeurs osmielle se
forme,
parfaitement la
des mlanges chromo-actiques.
On peut
encore, d'aprs Gori, ajouter la solution aqueuse une trs petite
quantit de permanganate de potassium, sufiisante pour produire
ques
et la fabrication
une coloration
On
rose.
On
5 p. 100.
On
qu'il
soit
soins particuliers.
M. Laxgeron.
ou l'ammoniaque, dont
les
Prcis de Microscopie.
18
MTHODES GNRALES
274
sonl dangereuses, mais il laut les prserver avec soin de la poussire qui les rduit trs rapidement, avec formation d'un
prcipit
noir. Comme c'est un prodiii[ 1res coteux, on a intrt
emp-
cher autant que possible cette rduction qui rend les solutions
inutilisables. Il faut donc essuyer avec soin le pourtour du bouchon et du goulot avant d'ouvrir la bouteille, ne jamais y reverser
un liquide dj employ,
mme
ne
L'acitle
sels,
mme place que l'aldhyde formique parmi les composs orgaGomme lui,
fixe sans prcipiter, c'est--dire d'une toute autre
liques, la
niques.
manire
il
11
le
homogne.
Ces inconvnients se prsentent surtout avec la solution aqueuse,
aussi l'emploie-t-on trs rarement isolment. On l'associe gnralement
aux acides chromique et actique dans les mlanges du Ivpe Flemming
(p. 280).
il
cette forme, le
col,
bouch
mieux
Tmeri
est
(fig.
Pour
les
frottis
humides ou desschs, on procde plus simplela lame tout entire dans le bocal qu'on
L'exposition dure de 30 secondes
ment, en introduisant
ferme immdiatement
1 minute.
Alcool thyliqiie.
Ce corps ne peut
servir
de fixateur
AGENTS FIXATEURS
275
l'lat isol que sous orme d' alcool absolu K Aux autres concentratious, l'action dshydratanle Temporle sur raction fixatrice et pro-
nerveux.
Dans
l'alcool
siste
Il fixe
louche,
ne
mme
s'il
mlange
un tube
essai
ne se produit aucun
L'preuve contraire
avec un excs
trs bien
en
le
On ne
que
seul est
On
ferment environ 80
la
si
Lorsqu'on emploie l'alcool bouillant, il tant opi'er au bainmarie (l'alcool thylique bout 4- 785) et avec prcaution,
cause de l'infiammabilil des vapeurs.
D'aprs Kittsteiner-, on pourrait employer l'alcool dnatur par
1. i^a fixation par des alcools de concenlratiou croissante, trs
employe par les
anciens liistologistes, est tout au plus bonne pour conserver leur forme aux objets
destins aux recherches de systmatique.
2.
Kittsteiner. Untersuchungen ber die Einwirkuug
des denaturierten
Alkohols auf tierische Organe und seine Vorwendbarkeit in der mikroskopischer
Technik. Zlschr. f. miss. Mikr., XXVI. p. 191-192. 1909.
MTHODES GNRALES
76
la pyridine, dans les ninies conditions que Falcool 90'\ c'est-dire comme constituant de mlanges fixateurs et comme liquide
de lavage, mais jamais comme fixateur unique, parce que les bases
pyridiques contractent les noyaux et en dissolvent certaines parties. L'acide actique neutralise cette action.
Alcool mthyliqiie.
des
frottis
desschs
Actone.
{\).
Ractif
trs
important dans
la
technique
-411 et 630).
Ce corps
i)eut
un
fixateur assez passable pour les frottis desschs (p. 411) mais il
n'est pas recommander pour les tissus, car il cause encore plus
de contractions que
tation (p. 303).
nom
un agent de dshydra-
Formaldhyde.
porte le
la
solution
commer-
On
notamment abus de
ce produit
comme
Comme
fixateur,
il
mire
dont
fois
la
Le formol du commerce
est
un
mais
vapeurs
beaucoup moins dangereuses que
celles de l'acide osmique. 11 est fort dsagrable de manipuler des
pices imbibes de formol, cause des violents picotements qu'on
trs
irritantes
1.
C.
2.
Ztschr.f.
3.
Anot. An::., p.
li.
Il
faut viter
p. 1278, 1802.
"
4.
Sjobrins:,
p. 273, 1900.^^
loiss.
als
An:;.,
XVII,
277
AGENTS FIXATEURS
et
durci d'une
titre
des dilu-
pour nous, le pourcentage visera toujours la solution commerciale 40 p. 100. Ainsi on prparera une solution 5 p. 100
tions
p.
2i de formol, dans
le
second cas
1 p. 9.
!.a
solution commerciale prsenle quelquefois une altralion particumanifesle par une apparence laileuse et par la formation
lire, qui se
sodium (employer le
papier de tournesol comme indicateur), et surtout employer, comme
lifiuide de dilution, la solution physiologique (sauf pour les yeux entiers
qui exigent la dilution dans l'eau pure, sous peine de se contracter).
MTHODES GNRALES
278
les tissus
la
que
dans
l'alcool,
dans
mmes conditions, sont gnralement macLa meilleure dilution est 5 p. 100, c'est-partie de formol pour 20 jtarties d'eau pure ou
les
res et inutilisables.
dire renfermant 1
physiologique.
Dans
les
organes
p.
100
1
.
25
cm-^
pendant 10 minutes. Laver deux fois dans Peau, cin([ minutes chaque
passer dans Palcool 80" pendant cinq minutes, puis laver de
nouveau. Aprs ce traitement, les hmaties se colorent trs bien par
fois,
Posine.
comme
1.
J.
(p.
liquide conservateur.
Verocay
Schnitten, Centralbl.
f.
aihj.
Pathol.
u.
pathol. Anat.,
XIX,
mikroskopisclieii
p. 769-774, 1908.
CHAPITRE
VIII
MLANGES FIXATEURS
Le bref
principaux agents fixateurs, nous a montr qu'aucun de ces derniers n'est capable de runir k lui seul les qualits que doit possder un bon fixateur (p. 268). Dans la technique moderne, il est
les tissus, d'employer un agent
presque exclusivement de mlanges,
combins de manire complter l'action d'un fixateur par un
donc
trs
du moins pour
rare,
fixateur unique.
On
se sert
les
cellules
cellules d'un
tissu
et
De
les divers
cette manire,
lments de ces
iossible.
Je crois prfrable de classer ces mlanges par grou})es, caractriss par l'lment le plus actif.
1.
FIXATEURS
en compltent et en
Les principaux sont les acides actique et
chromique el le chlorure de platine. Il faut en exclure a priori les
agents rducteurs tels que l'alcool. L'acide actique ralise l'acia tent d'y adjoindre d'autres ractifs qui
modrent
l'action.
possde un pouvoir
comme mordant
safranine et
le
coagulant considrable
nergique pour
bleu de toluidine.
et,
en outre,
agit
que
la
.METHODES G KNEIIALKS
280
les
Johnson.
existe
Il
Nous ne
donnerons que
dites
celle
mlange fort
du mlange
comme
l'a
et
faible.
mlange
fort^
qui
fournit
montr Carnoy,
les
Eau
\).
100
11
distille
100 cm^.
2 gT.
Au moment de
Si
vol.
pour
logiques.
Il
trs [tetits
plus
ne
l'acide
fait
vraiment utilisable
et
se produisent
dans
les
niczky ^ etc.
1.
Bau
2.
3.
Anat.
MLANGES FIXATEURS
Le volume du
menls
et
et la
281
liquide doit tre environ 4 fois celui des tiagla fixation de vingt-quatre heures au moins,
dure de
le
remploi de
Irichromique de Cajal
Mlange de
Ce mlange
(p.
126).
Hermann
on plalino-acto-osmiqae.
de celui de Flemming- en ce que l'acide ctiromiqiic est reinplac par du clilorurc de plaline. On prend par exemple
dilTre
15 vol.
1
Il
est bon de ne pas prparer la fois de grandes quantits de ce
mlange. Le mode d'emploi est le mme que pour le Flemming.
La valeur de ce liquide a t trs conteste par certains auteurs.
ses deux principaux drivs sont les
Aussi a-t il l souvent modifi
mlanges de Borrel et de Lindsay Johnson.
:
Mlange de Borrel.
Acide osmique
Chlorure de plaline
Acide chromique
Acide actique cristallisable
Eau
On
fixe
heures.
2 gT.
2
3
20
350
distille
On
p.
100
....
70 vol.
10
15
5
dure de
volume des
mode de lavage,
exactement les mmes.
la fixation, le
objets
la colorabilit
MTHODES GNRALES
282
II.
FIXATEURS
BASE DE CHROME
seuls,
cui'e, ils
on ne
donnent
la facilit
Tous
les
les
lesquels
il
comme
irrationnels.
Ijichromate de potassium
Acide acti({ue cristallisable
Eau
constitue
Il
gr.
cm
100
un
conserve
la fois le
actique).
On
C'est le
'
III.
FIXATEURS
On
parmi
MLANGES FIXATEURS
283
Sublim actique.
Solution aqueuse satare de sublim
Acide actique cristallisable
Sous
celle
forme
le
^,
subiim
est
95
o
un excellenl
cni-^
lixaleiir
peu
prs universel, convenant trs bien pour tons les travaux courants.
Il
pntre vite
et
ne gne pas
les colorations,
mais
il
ne faut
pas
le laisser
agir trop
:
pntrs.
vol.
'Ce ractif joue un rle trs important dans l'tude des Protozoaires.
l'emploi froid, ou chauff 60"-7.
Je ferai deux remarques son sujet
on peut le prparer avec de
Tacool 90, les rsultats sont exactement les mmes. En outre, ce
On
1. C'est dessein
que je n'indique pas, dans le texte, la formule du ml-oif/e
de Dorainici au sublim iod et formol. Ce lxateur a donn d'excellents rsultats
entre les mains de Dominici et de ses lves. Personnellement je ne le trouve
pas suprieur aux formules courantes et je lui fais le grand reproche d'tre
irrationnel
METHODES GENERALES
284
Mlange de Gilson.
On
le-
mlange suivant
Alcool absolu
Ce fixateur
des objets
est
trs
fixer
',
(cls
([ui
vol.
que
ufs de Nmatodes
{Ascaris, p. G06,\
Mlange de Zenker.
Bichlorure de mercure
Bichromate de potassium
Sulfate de sodium
Eau
5 gr.
100 cm-^
5
2,5
1
distille
moment
de l'emploi).
Pour
le
mode d'emploi de
fixation, se reporler
lY.
ces mlanges
aux pages 288 el 29i.
FIXATEURS
et
pour
le
lavage aprs
Picroformol de Bouin.
Solution aqueuse sature d'acide picrique.
Formol 40 p. 100
30 vol.
10
Ce
un
Chloroforme
Alcool absolu
Acide actique cristallisable
3 vol.
6
1
Ml'XANGES FIXATEURS
mme
sortes de travaux,
emploi
pour
les
285
recherclies de cytologie.
Son
Mlange de Duboscq-Brasil.
Ce mlange
nomme
se
Bouin-Duboscq, ou de Brasil.
pour
que
les
Arthropodes ^
150 cm'.
00
Alcool 80
Formol 40 p. 100
Acide ocliquc cristallisablc
Acide picrique
Mlanges au sublim
15
t
gr-
et l'acida picrique.
Ces mlanges, prconiss d'abord par Mann et RabI, puis par Branca,
Bouin, etc., sont aussi d'excellents fixateurs universels.
Mlange de Mann.
Bichlorure de mercure
Eau
2,5 gr.
100 cm^
bouillante
Au moment
...
gr.
20 cm-'
On
Eau
distille
Acide azotique 25
Acide picrique
p.
100
100
5
q.
cm3
s.
pour saturer.
1. Pour
les travaux trs dlicats, Bouin et Duboscq recommandent d'viter
l'emploi de l'alcool absolu. On passe de l'alcool 00" d'un mlange parties
absolu et do chloroforme, puis au chloroforme pur. On imprgne
d'alcool
gales
286
MKTHODES GNRALES
Ce mlange
est destin
11
Kleinenberg.
donne des
FIXATEURS
V.
Le formol
est
BASE DE FORMOL
comme
fixateur hislolo-
des corps
bien pour
le
systme nerveux
Alcool
Formol
Vl.
9U vol.
100
FIXATEURS
la
658)
Oi)
a 40 p.
10
BASE D'ALCOOL
l'alcool diffrencie
trs
mal
le
noyau
et le
cytoplasme (voir
teur. Par contre,
ment sur
(p.
p.
la colorabilit
Il
se
ther)
(p.
il
630),
beaucoup.
CHAPITRE
IX
CHOIX D UN FIXATEUR
Je m'efforcerai, dans ce chapilre, de guider le choix du dbuLe travailleur exerc counal les fixa leurs qui conviennent
lant.
d'ouvrages
et
Aucun de
d'objets.
est
pourtant
le
type
du
fixateur universel, ne convient gure pour l'histologie vgtale et fixe assez mal le rein et le testicule des Mammifres. Le
l'objet et
la
du but
mthode des
sera sr de n'avoir
aucun insuccs
ques essentiels.
En
cas \irrjence ou en voyage, si on n'a pas de liquide fixala main, il faut employer le formol 5 p. 100, dans
teur sous
que
1.
s'il n'est
pas em])loy en grande quantit, macre
rend toute tude histologique impossible ^
l'alcool,
tissus et
systmalique.
formol
et
s'il
n'employer que
les
l'alcool.
MKTHODES GENERALES
288
trois
groupes.
d'histologie gnrale, (pion peut encore nommer
travaux topographiques. On employera le mlange de Tellyesniczky (p. 282), le sublim actique (p. 283), le mlange de Zenker
1.
284), les
(p.
et
Travaux
surtout
2.
le
mthode de
vement puissants
Carnoy
3.
(p.
284, note
1).
Recherches microchimiques.
Dans
vaux,
que dans l'analyse chromatique proprement dite,
c'est--dire dans la recherche de l'affinit des lments pour les
colorants acides, basiques ou neutres, il faut modifier le moins
ainsi
type est l'alcool absolu, ou, lorsque cela est possible, aux agents
phvsiques tels que le froid (p. 329), la chaleur et la dessiccation.
(p.^270).
Bien entendu, ces indications n'ont qu'un caractre trs gnral elles
nous servent simplement classer les fixateurs en grands groupes et
orienter le dbutant dans le ddale des formules. En ralit, il faut,
pour chaque cas particulier, choisir le fixateur le mieux appropri;
;
dans
CHOIX
d'l'N
fixateur
289
c'est ainsi
et le rein.
que
le
A un
aux couleurs d'aniline. Les mlanges picriqus prparent admirableles colorations l'hmatoxyline. Le sublim se prle toutes les
ment
teintures.
11 sera donc ncessaire de complter plus loin ces indications, dans le
chapitre des mthodes spciales, et d'indiquer, pour chaque catgorie
d'objets, le fixateur qui convient le mieux.
M.
ii.vx.-iERON.
Prcis do ^iicrosc<5pii
10
CHAPITRE?X
PRATIQUE DE LA FIXATION
Aprs avoir
fait
quelle manire il doit tre appliqu aux tissus, pour donner les
meilleurs rsultats. Nous laissons de cl les procds physiques
(dessiccation, chaleur), dont Ttude sera mieux place dans les
mthodes spciales. Nous ne nous occuperons que du traitement
le
mode de prlvement
des pices, le volume de fixateur empjoyer, la dure et la temprature de la fixation et enfin le traitement conscutif au lavage.
comme
ici
il
le
est expliqu
ranimai ouvert
pour
et l'organe
Nous supposons
d'extraire cet organe, sans lui faire suLir de traumatisme qui puisse
Pour le librer de ses attaches conjonctives.,
altrer sa structure.
Une
la
fois
que le
Organes non contractiles.
le
systme nerveux,
la rate,
le
rein.
les
Pour
mlange de Bouin,
Premier temps.
la
organes parenchymateux
travail
le
courant,
On coupe
tels
les glandes,
que
le foie,
notamment avec
en deux temps.
le
1.
Dans un bocal ou sous une cloche pour les petits anioiaux. dans le four
Pasteur pour les gros animaux on fait arriver le gaz par une des tubulures du
:
couvercle.
PRATIQUE DE LA FIXATION
291
Deuxime temps.
c'est--dire au bout
Ds
qu'ils
ne pas se
les retire
un
un,
Pour couper les organes, il faut prendre une lame la fois large,
mince et bien tranchante, telle qu'un couteau cerveau. A son dfaut,
on se servira d'un rasoir rserv cet usage, cause de l'action du
fixateur sur la lame. 11 est ncessaire de poser l'organe sur une plaque
de lige, afin que les sections puissent tre compltes, franches, et que
le tranchant du couteau puisse pntrer lgrement dans le support,
sans toutefois s'mousser. Pour pratiquer les sections, il ne faut pas
appuyer la lame mais la tirer soi d'avant en arrire, de manire
diviser les tissus sans les craser. On comprend qu'un scalpel ou bistouri, mme trs affil, a une lame trop troite et trop lgre pour effectuer correctement ces mouvements.
Lorsque les tranches dfinitives sont dbites, on les porte dans un
nouveau liquide fixateur frais, sur une lgre couche d'ouate. On laisse
ainsi s'achever la fixation.
Organes contractiles.
le
tube digestif et
sion,
afin
que
Dans
cette catgorie,
les
de
couches musculaires ne
nous rangeons
en exten-
les fixer
dforment pas
la
MTHODES GNRALES
292
et
on plonge
dans
le loul
le fixaleur,
en maintenant
la
pice S!is-
fils
en rondelles.
l)eut dbiter
Estomac.
Pour
les
comme pour
fixer
que
dans de
paraffine dure
la
(60"),
bien imbibe. Cette prcaution est indispensable pour empcher le liijuide fixateur de mouiller le lige et
de faire diffuser le tannin dans la pice fixer.
manire ce qu'elle
soit
que
la
membrane
soit
en dessous. Si on
s'est
d'une lame
strvi
modrment avee
lies
au col
le
dans
et
le fixaleur.
plonges
Oprer
comme pour l'estomac, en ayant
normal.
pas distendre plus qu'
Poumon. y deux cas distinguer. Lorsque
Peau.
soin de ne
l'tal
Il
les
poumons
les
si
et les
petits
on ne
remplir de fixateur en
peut
les
mieux
nagent
le
et se iixent
mieux
est
Volume des
293
PRATIQUE DE LA FIXATION
commune
lous les
pntranls,
il
mme
fixateurs;
bonde
n'est pas
paisseur
le
Volume du
fixateur.
est ncessaire
Il
trs
petits,
de
et raccourcir
que
la
composi-
tion
possible, pendant
les actions osmotiques et
Il
faut
donc employer
les
organes ligaturs (intestin), soit en faisant flotter imemsur lige), soit en mettant une couche d'ouate
liranes piques
au fond du rcipient,
soit enfin
nouet de mousseline.
Dure de
chaque mlange
la fixation,
la fixation.
fixateur.
En
Nous
principe,
il
les pices
les
que juste
les
le
objets cassants.
Temprature de
on
fixe la
la fixation.
temprature ordinaire
osmis, cause de
la
trs
grande
Dans
la
volatilit
c'est la rgle
294
METHODES GENERALES
l'luve 37"
se produisent
ou 40
dans
le
glacire avec
principe, ds que
tt possible les
la
la
nature du fixateur.
Les pices fixes par les mlanges osmis et bichromates, doivent tre
laves Veau courante ou au moins souvent renouvele. Il est essentiel que celte eau ne soit ni trop calcaire, ni slniteuse, de fagon
ne pas former de dpts adhrents la surface des pices. La dure de
ce lavage sera peu prs gale celle de la fixation. On ne transportera les pices dans l'alcool 70" qu'aprs ce lavage, de manire
viter la foimation des prcipits. Pour les pices fixes au Tellyesniczky
(p. 282) il faut d'abord passer par l'alcool 15, et n'employer l'alcool
PRATIQUE DE LA FIXATION
295
des prcipits
'.
Il
les
n'y a pas
ment leur
colorabilit
notamment, par
API^ENDIGE
1. Les avis sont partags sur la question de savoir si on peut employer aussi la
solution aqueuse criode dans l'iodure de potassium. En tout cas, l'addition d'un
peu d'iodure de potassium l'alcool de lavage ne peut que favoriser la solubilisation des prcipits mercuriques. Mais il ne faut jamais employer l'iodure de
se dcomseul, car il donne naissance du protoiodurc de mercure qui
potassium
METHODES GENERALES
296
beaucoup plus parluile que celle que peut donner l'ablation des organes
immersion pure et simple dans le liquide fixateur. Nous devons
aussi dire un mot de la fixation des animaux marins.
Fixation par injection.
On trouvera dans Fouvrage de Mann la
description complte de celte mthode. Les principaux avantages sont
la rapidit de la lixation (toutes les cellules sont tues en 50 secondes),
et leur
'
teur
2.
plaant par
un
Fixation progressive.
quart,
un demi,
trois
1.
2.
Mann,
cause de
la
Rubentlialcr,
artefacts. Ztschr.
f.
uss. Mikr..
XXIV,
p. 133-13^,
1907.
les
PRATIQUE DE LA FIXATION
297
La premire prcaution jtrendrc est de bien goulter les ani})our cela, on les dpose sur
maux, quand on ne peut les ouvrir
un linge ou sur plusieurs doubles de papier Joseph. En effet, s'ils
:
maux en
extension.
a
Dekhuysen
marins calcaires
On
les fixe
propos deux
et
non calcaires
animaux
3.
Liquide A, pour tous les tanimaux sauf les Tlostens, bas sur le fait
la pression osmolique des Invertbrs et des Slaciens est gale
que
celle
de l'eau de mer.
Bichromale de polassium
2.
p. 100.
non
250 cm'^
25
54
mations calcaires.
On
recristallis et
n'arrive pas
et
compltement viter
l'acidit
Quel que soit le fixateur employ, les lavages doivent tre trs
3.
Se, CXXXVII,
p. lir,-117;
115-117. 1903.
/?.
Acad. des
CHAPITRE
XI
MTHODES D'INCLUSION
La grande majorit des objets fixs doivent tre traits par la
mthode des coupes; c'est le cas des organes et tissus qui font
Tobjet du travail courant. Que ces pices soient colores en masse,
avant Tinclusion, ou sur coupes aprs inclusion, la mthode est
la
mme.
lames
Aussi,
comme
la
Vinclusion
est
On
deTinclusion.
cellulaires
les
plus
dlicats.
mmes
trs petites,
parfaitement orientes pour tre
un
dans
dtermin.
De plus, les tissus acquirent
sens
coupes
une consistance (|ui permet de les dbiter en tranches d'une
pices,
dernier ne
la
Il
sur rulililet
la
ncessit de l'inclusion.
les
animaux
entiers.
Il
sont encore employs l'heure actuelle et rendent de grands services dans des cas particuliers. Ce sont la mllwde des coupes par
main
Nous
iMETHODES D'INCLUSION
299
Les substances employes pour l'inclusion se nomment masses dlnckision. Pour pntrer les objets, elles doivent tre Ttat de fusion ou de
dissolution. Aprs refroidissement ou vaporation, elles doivent avoir
I.
La
INCLUSION
paraffine, dont le
nom
LA PARAFFINE
affiiiils
chimiques
solides,
ils
de
fusion
lev
sont
dites
dures,
par
paraffines
point
parafilnes
opposition aux paraffines tendres dont
le
est bas.
point de fusion
METHODES GENERALES
300
table
les paraffines dures donnent un son clair et lev, les
paraffines tendres un son sourd et bas.
Il fanl savoir
que le i)oint (rbuUition des paraffines est aux
environs de 300 et que leurs vapeurs s'enflamincnt facilement,
:
la loi
pby-
sique qui veut que tant qu'il reste une portion non fondue, la
temprature ne s'lve pas au-dessus du point de fusion. Cette
loi n'est
vraie
mlanges.
Il
surveiller la
faut
La
le
paraffine est insolulile dans l'eau, trs peu solublc dans Talcool
dans Tactone, beaucoup plus soluble dans
(i p.
chloroforme
p. 100), le
le xylol (17 p.
100), etc.
le
giques.
Les inconvnients reprociis au procd la paraffine (altrations des
tissus et du contenu des cellules) proviennent presque toujours d'une
mauvaise technique. On les vitera srement en suivant la marche que
nous allons indiquer.
effectuer successivement
^
;
4 L'inclusion dfinitive.
Dshydratation.
L'objet, fix et lav, est port successivement dans des alcools de concentration croissante et finalement
dans l'alcool absolu. Pratiquement, pour les objets courants, on
1.
fixes
].
l'actone
("p.
303).
METHODES D INXLUSION
30i
da
alcools.
d'entamer un litre entier, il faudrait rpartir de suite cette quandans des petits fiacons de 100 200 grammes, bien bouchs avec
uu lige fin et souple. 11 ne faut jamais laisser en vidange un flacon de
grande contenance, sous peine de voir le titre baisser, par suite de
l'absorption de la vapeur d'eau atmosphrique. Bien entendu, il ne faut
jamais laisser dbouch un flacon renfermant de l'alcool absolu.
L'alcool 90' se trouve tel que dans le commerce. Pratiquement, il
remplace les alcools 91, 93", 90" indiqus dans certaines formules.
C'est cet alcool qui sert prparer les dilutions plus faibles. Il ne faut
jamais diluer de l'alcool absolu qui cote au moins deux fois plus cher
oblig-
tit
que
l'alcool 90".
Alcools faibles.
On les
Table de dilution de
l'alcool.
02
METHODES GENERALES
Pour l'usage courant, voici une table donnant, en chiffres ronds, les
dilutions faire pour l'alcool 90.
Alcool obtenir
303
MTHODES d'inclusion
demie
trois
heures.
On
le
Si le moindre
xylol reste limpide, la dshydratation est bonne.
il faut effectuer un nouveau passage par Falcool
louche apparat,
absolu.
Il
comme pour
pour l'inclusion.
la valeur exacte de ce procd.
11 est difficile de se prononcer sur
L'actone parait donner de bons rsultats et ne pas altrer les tissus.
Nanmoins, pour des recherches trs dlicates, la dshydratation classique par l'alcool absolu reste la mthode de choix.
i^'rsonnellement, je ne vois ce procd que l'avantage de Tconomie.
est certain que l'actone dissout mal la paraffine; comme, d'autre
Il
dans les
part, sa volatilit est extrme, il doit se produire des dgts
tissus au moment de l'immersion dans le bain de paraffine, par suite du
dpart brusque de l'actone, non compens par une pntration quivalente de la paraffine.
Pavlov i conseille, aprs fixation
Dshydratation par la crosote.
et lavage l'eau, de dshydrater par un sjour de 4 24 heures dans
la crosote de Htre, suivant les dimensions de la pice. Aprs un
second bain de 2 3 heures, on essuie au buvard, et on passe au bain
soit
aprs
un bain de
tolune. Je
n'ai
donnent ce
1.
Ztschr.
f.
iciss. iVik,-.,
XXII,
p.
ISG-IS":.
195.
METHODES GiNERALES
304
parce que les liquides euij)loys sont gnralement des hydrocarbures ou des essences aromatiques, dous d'une haute rfrin-
le
la
xylol cl l'essence
loluae,
sont les plus volatils, par consquent les plus faciles
liminer; ce sont aussi les moins chers. Le xylol ne prsente pas
lolun.',
il
d'avautage particulier,
normment
est
dans
et
il
durcit
34"
lenzol
46
Actone
oG"
Tolune
Acide actique.
Gliloroforme
Alcool mtliylique
Alcool tliylique
01"
Xylol
Sulfure de carlone.
80"
111"
...
66"
Essence de cdre.
78"
Glycrine
119"
140"
.
237"
290"
Enfin
elle
supporte que
la
peut convenir, parce qu'elle produit avec l'alcool absolu un abondant ])rcipil blanc. Au contraire, l'essence fluide deboisde cdre
est
parfaitement
miscible,
en toutes proportions,
avec l'alcool
absolu.
Je ne dirai qu'un mot du chloroforme et du sulfure de carbone. Le
il pntre difficilement les objets
premier prsente deux inconvnients
et, lorsqu'il en reste des traces dans la paraffine, celle-ci devient friable
et se coupe 1res mal (voir cependant p. 285, note 1). Quant au sulfure
de carbone, trs vant par Ileidenbain, sou odeur dsagrable et son
inflammabilit ne sont pas compenses par des avantages suffisants
:
Lorsqu'on veut conserver la graisse dans les tissus fixs par les mlanges
il faut
employer le chloroforme ou mieux l'lher de ptrole (voir p. 656).
osmis,
MTHODES D INCLUSION
Pour
travail coiiraiil
le
On
tolune.
rservera
le
j('
conseille donc
procd
305
d'imprgner par
-le
Je considre,
Technique de l'imprgnation.
plupart des histologistes, les mlanges successifs
la suite de la
d'alcool absolu
suffisante
c'est
que
pour
la
la
dshydratation
En employant
fermant
cdre pure.
Dure de t imprgnation.
On n"a pas s'en proccuper
avec l'essence de cdre, car les objets }ieuvenl y sjourner presque
iudfiniment sans s'altrer. 11 n'en est pas de mme pour les
hydrocarbures qui durcissent beaucoup
rendent
cassantes.
est
tolune,
il
1.
On peut
le
ou au moins translucide.
M. Langerox.
Prcis de Microseopic.
moyeu
d'une pipette.
-0
METHODES GENERALES
306
fiul
Bain de paraffine.
^o"
'.
de faire de bonnes
usages. VAle permet, dans les pays temprs,
coupes de toutes les paisseurs et n'a pas rinconvnient de sou-'
mettre les pices une temprature trop levje. La paraffine
trs fines (de 6
trop tendre ne permet pas d'obtenir des coupes
[/.),
sion dfinitive.
p. 309.
Chauffage de
doit
la
paraffine
fusion. Cette
Pendant toute
la dure du bain,
exactement son point de
absolument indispensable pour
la paraffine.
tre maintenue
prcaution
est
11
mtallique.
L'tuve sera d'un trs petit modle
On trouve
commerce des
2,
car
il
suffit
que ses
trois
dimen-
paraffines fondant tontes les tempratures comprises entre 35 et 75". Les points de fusion vont gnralement de 10 en
10'\ Pour vrifier le point de fusion d'une paraffine, en aspirer un
peu dans un
fragment d'effilure de pipette et laisser solidifier; attacher ce tube capillaire au
rservoir d'un thermomtre, plonger le tout dans un vase rempli d'eau et chauffer
lentement. Faire la lecture au moment exact o la paraffine commence couler
du tube capillaire.
2. U existe dans le commerce un grand nombre de modles d'tuves
paraffine'
plus ou moins compliques. Une des plus pratiques est le bain-marie dit deiS'aples. Bien entendu, il faut proscrire absolument les bains-marie ordinaires,
car la paraffine ne doit jamais tre en co,:it ict. avec de Veau, ou de la vapeur d'edu1.
clans le
METHODES D INCLUSION
307
on se sert gnralement de
sioas intrieures soient de 15 20 cent.
petites tuves en cuivre, douille paroi remplie d'eau. Il est indispenceux qui sont
sable que cette tuve soit munie d'un thermomtre
:
inclusions
On
en S
(fig.
147), de manire
fournir toute
une
gamme
comme
}rc-
ou
Pour contrler
la
lure de la
l'huile.
^.
Fig.
,.
14
tempraparaffine, on dis-
^
Etagre ou platine chautfante
de Maassez.
,-,
pose d'un signe infaillible lorsque la paraftine fondue est recouverte en partie dune pellicule solidifie, on est sr de ne pas
:
Il
une
libre sur
bord du rcipient.
existe des modles perfectionns de platine chauffante, tels que
la platine de Radais et celle de Gatin. Ces instruments ne sont
sur
le
Il
pas indispensables.
Rcipients pour Vindusion.
On
peut
dans un
308
MTHODES GNKIALES
rcipient (|uelcon(iue, en porcelaine, en verre ou en mtal. Je ne conseille pas l'emploi des verres de montre (jui man({Lient de profondeur
et se renversent trop facilement. Les petites botes de Ptri et les petits
cristallisoirs en verre de Bohme ou, encore, les couvercles de cylindres
Borrel (fiii'. 107) conviennent trs bien pour l'tuve. Pour la platine
chaulante, je prfre les petits rcipients mtalliques, meilleurs conducteurs de la chaleur et ncessitant par consquent une temprature
moins leve pour produire la fusion de la paraffine, ce qui diminue les
servant
mais
les
opinions
les
Les
avis sont
plus auloi'ises
li-s
partags
s'accordent sur
deux points 1 la dure du bain doit tre aussi courte que possible pour les objets faciles pntrer et couper, ou qui durcissent ("acilement (centres nerveux, l'oie); 2 il n'y a aucun inconvnient prolonger la dure du bain pour les objets peu permables,
:
tels
que
Dans
la
peau.
le
])reniier
30 minutes
et la
cas,
dure du bain de
la
Dans
la
le
i^aralline sera
volume de
considrer
de
l'objet
Ici
les
la
tetnpra-
en
fusion.
Il
n'y
pas
mme
craindre d'altrations,
pour
les
prcaution,
})our ne
pas
endommager
les
petit
pices
dlicates.
Le
ciistallisoir et l'objet
sera saisi avec des pinces ou transport avec une spatule de mtal
ou de carton lger. Il faut avoir bien soin que l'objet baigne imm-
diatement dans
rait
des
la
dommages
pai^afiine,
la
(jui
amne-
dessiccation. L'ti-
309
MTHODES D'INCLUSION
quelle,
crite
objets dans
au crayon ou
l'encre
de Chine,
(jui
a suivi les
la
paraffine.
Pour assurer
l'liniinalion
Tessence de cdre,
il
faut
le
sons un objet qui doive resler une heure dans la paraffine
de
la paraffine ayant dj servi, durera trente
dans
bain,
premier
:
minutes. Pendant
de
la
paraffine neuve.
Avec les dissolvants
la
la
mme paraffine peut servir
bain
volatils,
le
Inclusion dfinitive.
dans
de
chaudes.
Il
plat sont
les
commodes pour
de l'eau.
Il
en
est
])ices,
il
est prfrable
(lig. 148). Ces moules sont constitus par deux pices mtalliques
rectangulaires, qu'on pose sur une lame de verre et qu'on rapproche plus ou moins, suivant la dimension du bloc obtenir, lis don-
MTHODES GNRALES
3iO
lient
Fi"-. 118.
faciles
manipuler
et
ranger.
Barres de Leuckart.
Fabrication
149.
d'une bote en papier
ou en tain. Trac des
lignes de pliage.
Fig.
Original.
Fabrication
Fig. 150.
d'une bote en papier
on en tain. Premier
Il
En
Fabrication
d'une bote en papier
ou en tain. Rabattement des cts.
Fig. 151.
Original.
ne reste plus
fig.
152.
Bote en papier ou en
Fig. 152.
tain termine.
Oriyi)iul.
paraffine.
Quand aux
ckart se
objets en verre,
il
suflit
la paraffine
si
de
elle
est adhrente.
MTHODES d'inclusion
On remplit
Technique de l'inclusion.
311
le
moule de paraffine
certaine
dextrit,
ou Tobjet, ce dernier
masse du bloc.
si
car,
est
on
laisse
mal inclus
et
ne
fait
du moule.
qui doit tre coupe concide avec un ct dtermin
Pour cela on se sert encore de la pince chauffe. L'objet est facile
immobiliser dans une bonne position, car la paraffine se solidifie
rapidement sur
le
fond
et les faces
^
pteuse, dans laquelle on enfonce l'objet en bonne place
L'orientation termine, il faut refroidir la paraffine. La
trs
majorit des auteurs recommande d'oprer ce refroidissement
la cristallisation
de
la paraffine.
Il
semble, en eiet, que cette substance, refroidie trop lentement,
forme des masses lamelleuses, cristallines, non homognes, de couleur
blanchtre, irrgulirement rparties dans le bloc. Personnellement, il
m'est arriv d'obtenir d'excellents blocs, en les laissant refroidir sur la
table et d'avoir de trs mauvaises inclusions malgr un refroidissement
rapide dans l'eau. La cristallisation et le dfaut d'homognit de la
paraffine sont donc dus d'autres causes.
La premire est la prsence, dans la masse, de traces du dissolvant.
Ces traces suffisent provoquer la formation de zones molles et blan-
p. 31-2,
d'Infusoires.
p. 530, 1909.
312
MlhllOD!:S GKNKIALI-S
Au
On
35". D'ailleurs la
son
j)oids le
Dans
facile
avec
les verres
de montre et
on attend simplement
la
d'une
assez
surface
soit
couverte
que
paisse, dont on
pellicule
acclre Tappariiion en ventant le moule. Ds que ce rsultat est
les capsules d'lain.
le cas contraire,
obtenu, on immerge doucement. Cette immersion demande quelques prcautions, autrement la paraffine, encore liquide, pourrait
tre
}rojele
particuliers.
s'api)lique qu'aux
autrement. Toutes
soires).
les
313
MTHODES D'INCLUSION
5.
Insuccs.
1.
Paraffine molle
et
fil
de
fer
chaud
paraffine,
procd
se
(\\\\
181).
(fig.
Les
tissus, bien
imprgns de
de beaucoup
le
solutions
les
lments cellulaires
et les
faite.
la
de
paraffine fondue la surface de section des blocs entams, afin
On
l'air.
commerce des
les blocs
mthodiquement
II.
les collections
INCLUSION
L'inclusion au collodion ou
de blocs.
la
AU COLLODION
celluidine,
du
quoique
terrain.
trs
vante
A mon
avis,
METHODES GENERALES
314
elle
lre
incontestable
11
beaucoup plus
dlicate. Elle
;j.,
rj,,
exprience personnelle me permet d'affirm.er le concerveau, le cervelet bien inclus se coupent admirail suffit
blement
de prparer des tranches minces et de raccourcir
autant que possible le bain de paraffine. Pour la peau, on doit prolonger
la dure de ce dernier (p. 662).
tre coups.
traire.
Le
Mon
foie,
le
On
allgation.
paraffine
2' Pour les objets renfermant des parties de consistance trs
;
diffrente, tels
est
de
donner une
On n'est
masse transparente, permable tous les colorants
donc pas oblig de Tliminer comme la paraffine et on arrive ainsi
.
de
l'objet
que
du milieu rendent
exemple dans
les
pays chauds.
MTHODES d'inclusion
La cellodine (de Schering)
se trouve
3lb
dans
le
commerce eu
comme
le
On
absolu et d'lher.
c'est--dire
de
la
dissout ensuite.
tement.
Cette inclusion
dans un moule
d'un liquide
gales d'alcool absolu et d'ther, jusqu' obtention
la solution forte qu'on tend de deux
C'est
et
sirupeux.
pais
la solution faible.
cellodine sche suivant Apathy, on peut procder
et la
par pese. La solution faible sera, par exemple, 4 p. 100
Avec
la
solution forte 10
2.
on
p.
Prparation de
le
100.
l'objet.
Aprs dshydratation
le
absolu-ther.
3.
complte,
mlange alcool
L'objet
sjourne dans
la
sohilion faible
pntration.
1
On
a prconis
rcemment
remplacer le collodion et
p. 28*, 1" juillet 1911.
la cellodine.
MTHODES GNUALES
316
va sans
Il
diic
que ces
sont
oi)ratioiis
A.
ordinaire avec de
mthode rapide
la
L'objet,
dshydrat et imprgn
mis dans un tube essai ou nn tube fond plat
la
On
plonge
le
Inbe dans
5.
Enrobage.
On verse
la
cellodine paisse
dans un moule de papier (fig. 152) de forme rectangulaire ou mieux de forme ronde (fig. 153).
on
Ces derniers sont trs faciles faire
:
Support
en lige et bote on
papier pour inclusion au collodion.
On
BoUes Lee,
est trs
commode,
soin de couvrir le
car le bouchon
microlome.
bouchon
et
le
11
faut avoir
papier d'une
ceci pour
laisse scher com})llement
des
bulles
la
d'air
dans
cellodine.
ne
viennent
se
que
loger
peut aussi prendre comme moules les petits tubes de verre
;
viter
On
la
dshydratation.
Durcissement.
Mthode
Valcool.
Lorsque la surmoule a pris, par vaporalion, une consistance un peu ferme, on transporte le tout avec
prcaution dans de l'alcool 80". Lorsque la masse est compltement durcie, ce qui est assez long, le bloc est retir du moule. Si
on s'est servi du procd du bouchon (fig. 153), il suffit de drouler
6.
pour
il
317
MTHODES D'INCLUSION
ce qu'elle soit pntre de toutes parts. Pour
la retirer
facilement,
est
expose, eu vase clos, aux vapeurs de chloroforme. Ds qu'elle
devenue assez rsistante, on la sort du moule (si c'est un moule en
un
un avantage
considrable.
LA
nombre.
Breckuer- emploie un
petit
Ryder.
Au
sortir
trouble.
2.
iciss.
XXV,
p. 29, 1909.
f.
MTHODES GNRALES
318
Nous devons
diierente
citer aussi la
c'est
pure.
lY
Je ne mentionnerai d'autres mthodes d'inclusion ((u' titre de renseignement, car elles ne sont pas d'usage courant. La gomme glycrine est
un mlange de trois parties de solution sirupeuse de gomme aral)ique et
elle sert inclure froid des objets trs
de une partie de glycrine
:
durs, tels que des poils ou des organes chitineux. On laisse paissir
en couche mince, renfermant l'objet, justiu' consistance suffisante.
La glatine glycrine (mthode de Nicolas '^) peut rendre des services
1.
Gandolfi,
XXV,
2.
3.
4.
Ueber
cin
est de les
f.
uiss. Mikr.,
p. 4-21, 1908.
3*^
dit., p. 115.
1908.
CHAPITRE
XII
c'est la
Enfin
sont les
La plupart d'entre
elles ncessitent l'emploi d'instruments sprnicrotomes, destins rgler plus ou moins automatiquement l'paisseur des coupes et guider la marche du
rasoir. Nous tudierons ces microtomes au fur et mesure, car
ciaux,
ils
nomms
Il
que
microtome, souvent trop nglig, et sans lequel il n'est pas de
bonne coupe possible. C'est le rasoir. Sans qu'il soit besoin d'inle
sister,
bien.
Toute
la
Forme du
rasoir.
Elle diffre
suivant
la
la
qualit et
nature des
METHODES GENERALES
320
coupes excuter.
Pour
les
un
rasoir
un
|)eu
et
Fig. 151.
lourd
volumineux, qui
mieux en main que
modles lo-ers Pour
est
les
les
coupes au microtome
main et au microtome
paratiuc.
Rocking, les mmes rasoirs peuvent servir; mais, pour les grands
microtomes, il faut des rasoirs si)ciaux. Les microtomes glissire du type Jung sont toujours accompagns de leurs couteaux
de grande
particuliers,
dimension. Le choix est
difficile
pour les
microtomes genre Minot,
plus
sent par
la figure
la
il existe un
nombre
de types
grand
de lames. La meilleure
du rasoir de Walb (jui est lepr-
une
forte
pour lesquels
lame
faces planes,
doid
que dans
Fig.
15G.
Schma du
tjiseau fa-
cettes
des
le collodion.
En ce (jui concorne l'paisseur de la lame et du tranchant, on peut i;uider son clioix sur les considrations
suivantes. Les lames du type x (lig-. 155), Irau-liant trs
uiince, conviennent pour les objets tendres et dlicats,
tandis que les lajiies du type j (lig. 155), plus paisses,
(ranchant en forme de triangle isocle, sont ncessaires
rasoirs
321
faut
il
second cas,
lite
il
beaucoup
le
seront d'autant
pntrant dans les tissus pour les diviser. Les coupes
le tissu moins altr que ce coin sera plus mince et
minces
et
plus
et l'paisseur de la lame, il fau t
plus poli Quelles que soient la forme
donc que le tranchant, biseaut ou non, prsente un poli parfait.
Moins il y aura de stries mici^oscopiques, plus le coin pntrera
facilement dans les tissus et moins il y causera de lsions. En
.
que laisse dans Tacier un repassage imparde pntrer et se terminent par des
tranchant
empchent
dents et des crans microscopiques qui dchirent les cellules et
effet, les petites stries
le
fait
tranchant
tend
devenir
pour
Il
faut
rectilier la
forme des
que possible.
Le repassage a cess
Nouvelles mthodes de polissage.
d'tre une pratique empirique, exerce par certains professionnels. Il est devenu un procd scientifique et tout micrographe
doit pouvoir maintenir ses rasoirs dans un tat de poli suffisant.
optique
Prcis de Microscopie.
^i
MTHODES GNRALES
322
suflit,
ou
le
en
se
Nous devons
dcrire ces
les
faire
le
com-
merce.
L'afftage
pierre et le
cuir.
redresser un tranchant trop arrondi le cuir sert parfaire l'aiguisage obtenu sur la pierre et raviver le tranchant lorsqu'il est
;
Appareils d'afftage.
Quel (jLie soit le mode de repassage, pierre ou
condition essentielle raliser est de conserver au rasoir la
cuir, la
forme et l'inclinaison de
son tranchant. Pour cela,
il
faut que ce tranchant
pendant le repassage,
une inclinaison convenable
ait,
par
rapport
la
surface
1.
On trouvera dans
pour rasoirs
le
soirs mici'otome {Coviptes rendus Assoc. des Anatovtistes, Run. 10, p. 294, 1009)
des renseignements trs complets sur la manire de pratiquer soi-mme l'afftage
d'Arkansas et d'une dalle do
scientifique, par l'emploi successif de la pierre
glace, combin avec une pte d'alumine calcine et lvige.
2.
Cette mthode est longuement dcrite par W. Ssobolow. Thorie und Praxis
1909.
f. miss, Mikr., XXV, p. 05-79,
Comme
323
peu relev, de
il
main
anile trop
cette inclinaison, on se
rasoirs paraffine et
assez ouvert, on doit
l'inclinaison voulue;
tringle mtallique.
Pierres aiguiser.
mieux
grains
il
et
de
la
pierre pour
retourne
la
la
mmes pr-
METHODES GENERALES
324
on
la
la
mme.
mineux,
le
poids de
la
lame
suffit
mme, avec
assurer
Morftl.
Il
la
le
repassage.
lame
11
est
mme nomhre
le
enlever sur
la pierre,
ferait
Ce polissage
en insistant,
il
ne
la
ainsi
Sur
le
cuir,
avant.
le
les
utilise
On
la
toute la
appuie trs
le cuir.
il
se
dprime sous
le
poids du couteau, ce qui permet au morfil de se hriser et de disparatre. En outre le tranchant devient uni, poli et durahle.
y a ijeaucoup de modles de cuirs rasoirs. Un des meilleurs est
cuir carr quatre faces de Zimmer (fig-. 158). Une des faces sert de
pierre, deux autres sont enduites de ptes Fmeri, noire grain
11
le
Fig. 158.
Fis. 159.
Cuir de Wall).
([ui
sont
commodes pour
les
grands rasoirs.
Walb
(fig. I.i9)
soit le
modle de
il
cuir,
325
que
le polis-
sage dfinitif ne peut se faire que sur un cuir non enduit de pte
en effet ces dernires agissent exactement comme la pierre et ser:
le
le
3.
Mode
d'action du rasoir.
ou non,
Le
rasoir agit de
deux faons
la
c'est-
main ou au
la main ou
microlome mcanique.
comme un
d'allonger
et
coin
la
:
d'amincir
surface couper.
Dans
les
deux
cas,
il
la position
la
l'objet
rasoir.
n'est
jamais attaqu
En
plaant le rasoir
obliquement, on augmente simplement la distance de la base au
tranchant, ce qui donne en ralit ce dernier un angle plus aigu.
Avec les objets lastiques, susceptibles de se courber sous la
une de
})eut
attaquer
le
bloc normalement
ses faces.
I.
COUPES
MAIN LEVE
326
METHODES GENERALES
tre coups
ainsi.
une
un bon
l'ace
})]ane,
et
et
on
le divise longitu-
dinalement,
soit
affile,
Fig. 160.
Tenue du
main leve.
On
est
le
le
rasoir de la
main
comme
droite,
mais
le
et aussi
couper
Quoi qu'il en
l'objet el
il
d'appuyer
soil,
le
faut utiliser
la
le
tranchant
el
l'objet
rasoir doit
la
chaque
de gauche droite, de
secousses et
la
d\m mouvement
base l'extrmit de
uniforme.
On
la
peut
si
de
l'objet.
le tailler
Pour
faciliter l'attaque
lame, sans
327
la
surface
du cylindre de moelle, on
pralablement en biseau.
Dans
les
deux
petit cristallisoir
plaque de verre
monter.
rsultats
trs
employe autrefois
que
celles
11.
que donnent
les
microtomes automatiques.
COUPES AU MICROTOME
MAIN
METHODES GENERALES
328
le
enrob dans
la
vis micromtrique,
piston, actionn par une
petites quantits.
Le
rasoir
la
que
finesse
fait
Un
monter robjet de
moelle de Sureau.
la
du tranchant
cl
la
perfection
de
la
vis
il
le
pratiquer un enrobage
la
paraf-
heureusement modifi.
microlome main de Leitz,
fine,
a t
Dans
le
Ficr.
161.
!\Iicrotome
main
de Leitz.
la tte
de
la
vis
et
micromtrique
mme
de 5 a, car
assez larges pour qu'on puisse en apprcier la moiti avec prcision. Comme les coupes sont trs rgulires, on peut trs bien
leur donner jusqu' 15 mm. de diamtre ^
Pour
gauche,
tenu de
le
tire
la
la
ct.
il
un
main
Le microtome
main
trs
le
pouce
Pour obtenir un mouvement bien rgulier, sans saccades, l'avant-bras et la main doivent
former un ensemble rigide et le dplacement du rasoir doit tre
produit uniquement par des mouvements du bras.
On coupe
sec
ou en mouillant
le rasoir et
l'objet,
suivant la
nature du tissu. Dans les deux cas, on recueille les coupes dans un
cristallisoir plein d'eau ou d'alcool. On peut, auparavant, li1. Le microtoinc main de Peltrisot, serrage central,
bonne modification du microtome Ranvier.
est aussi
une
trs
329
rasoir les
le
dbris de moelle de
aiguille.
Aux microlomes
main
se rallache
le
la
Fig. 162.
Microtome
le
de Lelong.
la tte
porte un
beaucoup de
stabilit et n'a
Il est,
mon
avis, trs suprieur aux microtomes main pour les coupes dans
on peut trs bien couper aussi dans le collola moelle de Sureau
dion. Au besoin, on inonde d"eau ou d'alcool la pice et le rasoir
:
et,
une
fois les
l'ins-
trument.
III.
COUPES
Je ne mentionnerai que
PAR CONGLATION
mme
tre
METHODES GNRALES
330
On
peut congeler des tissus frais, en collant la pice sur le portemoyen d'un peu d'eai. Ce procd, trs expditif et (jui dispense de toute fixation ou inclusion, est quebiuefois employ dans les
services de chirurgie pour le diagnostic rapide des tumeurs. Naturellement, le rsultat ainsi obtenu ne peut lre que trs mdiocre, car le
froid ne constitue pas une mthode de fixation. La conglation rapide et
bratale des tissus dtermine la formation d'aiguilles de glace et produit
des dchirures cellulaires.
Il est gnralement prfrable de congeler des tissus dj fixs. C'est
sous cette forme que la mthode peut rendre le plus de services. Pourtant,
je crois (ju'il faut la rserver pour des cas trs limits, car l'avantage de
la rapidit et de la simplicit est fcheusement compens par des
altrations invitables et par la difficult de manipulation des coupes.
Celles-ci peuvent tre transportes une une, la spalule, de li(iuide
en liquide, dans des verres de montre, ou mieux encore colles sur
lames. On emploie pour cela le procd d'Anilschkov i. Les coupes,
durcies dans de l'alcool 50% sont tales sur la lame enduite d'albumine de Mayer (p. 345). On appuie avec du buvard, pais on porte dans
objet au
les alcools 95" et 70", puis dans l'eau. Pour colorer les graisses, on
plongera d'abord dans de l'alcool-formol (alcool 50, 50 cm^ et formol
7,5 cm^j, puis dans de l'eau.
IV.
COUPES
LA PARAFFINE
est
de
les
f.
loiss.
Mikr.,
XXVII,
p. 71, 1910.
fait
une
fois
331
faut-il
Nous avons
le
procd
particulirement sur
blocs de pai'affine ^
Rasoirs.
la
p.
320,
fig.
134,
le
les
type des
rasoirs
le rasoir est
immo-
au bti de l'appareil,
par ses deux extr-
mo-
rencontre
et
rasoir
bine
la
le
une cer-
avec
com-
masse du
chariot et du
volant,
facilement
duire trs
la
section
du
bloc.
Ce
Fig. 163.
Leitz.
automatiques. C'est au Minot que nous donnons la prconstitue, pour nous, le type du microtome destin
au travail courant de micrographie.
frence;
il
METHODES GNRALES
332
comment
(jui
se produit cet
la vis
est le principe
micromtri([ue, ce qui permet d'avoir 10 paisseurs de coupes diflerentes; d'autre part, les autres modles ne possdent qu'un seul levier,
ce (jui limite le nombre des paisseurs possibles 6. Mais la maison
[j.
fabriqu par Stiassnie, est un instrument parfait, dont le seul dfaut est son prix lev. Il cote en elfet 500 francs,
alors qu'un bon Minot ne vaut que 200 250 francs. Dans le Radais, le
porte-objet n'a qu'un seul mouvement vertical; le mouvement micromtrique horizontal est report sur le cluiriot du rasoir. On peut couper
indiffremment le collodion ou la parafline, en modillant l'inclinaison
du rasoir. Nous verrons (jue le Minot possde le mme avantage.
Le microtome Radais
',
effet,
il
n'y a pas
ici
une trajectoire, d'o il rsulte que les coupes sont des calottes
sphriques trs faible courbure, au lieu d'tre planes comme avec le
Minot ou le Radais. Malgr ces inconvnients, le rocking est un excellent instrument, trs srieux et bien moins cher que le Minot ou le
Radais. Il est iiulispensable qu'il soit muni d'un porte-objet trois
axes indpendants, permettant une orientation parfaite de l'objet.
A la rigueur, on peut faire des coupes la parafline avec les microtomes celloidine des types Jung ou Thonia, mais les rsultats ne sont
pas aussi bons et il est notamment difliril(> d'obtenir des coupes en
dcrit
1.
M. Radais, Microtonie
expcr. et yen.
(4), I,
cliariot
notes et revue,
verlicat
sans
p. 65-75, 1903.
glissire.
Arch.
de zool.
333
rubans. Ceci
Cel
Prparation de
1.
l'objet.
forme convenable
et fix sur
le
masse de paraffine en forme de prisme rectangulaire. La paraffine doit tre dbite par petits copeaux, avec une lame bien tranchante. Il ne faut jamais essayer de couper un bloc en deux ou
d'enlever une portion paisse, car on risque de voir la masse se
fendre irrgulirement et de dtriorer l'objet. Les rognures de
paraffine sont soigneusement mises part pour tre refondues,
filtres
au besoin
et
poiu'
servir
confectionner de nouveaux
blocs.
Pour fixer
le
vrir ce dernier
Au moment
dune couche
de fixer
le bloc,
on
fait
fine
avec
le fer et
On
procde alors
la
taille dfinitive
importe que
mais il est essentiel que les faces suprieure et infrieure soient
parallles, au moins dans le plan de section. S'il en est autrement,
1. Il va sans dire
que le microtome doit tre solidement tix la table avec
des vis ou avec deux presses vis. Pourtant, avec les modles lourds comme
celui de Leitz, il suffit de poser l'instrument sur une main de papier jo=eph pour
lui assurer une stabilit suffisante.
MTHODES GNRALES
334
ment;
trs
disgracieux.
On
taille
rasoir.
Il existe des appareils (|ui facilitent beaucoup cette opration et permettent de donner aux blocs de paraffine une forme gomtrique. Un
des plus pratiques est reprsent par la figure 164. C'est celui de Zimmermann de Leipzig. Le porte-objet est fix dans une coulisse, termine
deux
tiges verticales.
La
face
tre
doit
suprieure
la
Fig.
Appareil pour
de parafnne.
tailler
taill,
les blocs
chariot et, au
indpendants, ou de
la
exactement
pour
l'objet,
axe et paralllement
trois
le
axes
la
l'inclusion.
2.
moyen de
et
Orientation du rasoir.
Le
moment de
que
l'objet,
ne puisse toucher
Une
incli-
on arrte alors
le rasoir. Si
trique et
si
on
fait faire
l'objet
le
mouvement de
une course
la vis
microm-
verticale, on constate
les
coupes sont
})lisses et
d'paisseur ingale.
cou})e, la
lame vibre
et
et lev.
les
335
chaque
Non seulement
elles sont
ondules,
et
minces.
En
outre,
de temps
Tluclinaison
est
Si
des
autre,
par trop accencoupes manquent.
un racloir,
un
mais
comme
comme
le
rasoir
coin,
tue,
n'agit plus
elles
et,
comme
adopter,
rgle pratique,
venablement inclin
on libre
l'arrt
du microtome
et,
pince d'orientation,
saisissant le volant,
on amne
le placer
l'objet au-dessus du rasoir, de manire
bien paralllement au tranchant. Il est trs important que, pendant celle opration, l'objet ne touche pas le tranchant; il faut
avec prcaution
trique.
Il est
prfrable, pour chaque nouveau bloc, de ramener la vis
micromlrique son point de dpart. Avec le Minot de Leilz,
cette
manuvre
ciale qui
du
permet de dsembrayer
la vis.
avec
la
coulisse
objet, suivant la
du
rasoir, soit
hauteur du bloc.
particulire
du
rasoir,
car
Si,
il
pour entamer
faut rserver
la partie
le bloc,
on veut
METHODES GKNERALES
336
faire des
le
bien afft et
la
qui
de
coupe qui
si
la
la
prcde
et
la
coupe
la suit.
puler et coller sur les lames. Pour les coupes en srie, on est
absolument sr de Tintgrit de la srie et de la conservation de
soit
faire
On
laisse les
On peut en
coupes se font bien. Pour
couper le ruban, on prend un bon scalpel, au moyen duquel,
sans lcher la pince, on recueille l'autre extrmit du ruban sur
tout en
tournant
la
si les
la
manipulant les rubans. Un autre accident provient de l'lectrisation du ruban, qui se tord et ondule dans l'air et vient souvent
toucher une pice du microtome laquelle il se colle. Pour
viter cet ennui, on ne dbitera que de courtes portions
la fois.
4.
faut aussi
ni excs de serrage.
les
337
Le rasoir
de
la
blement
si le
Lorsque
microtome ne
le
sert pas,
il
d'une
iMinot,
qui
le
1.
la
et remdes.
Malgi la perfection du mcanisme
dbutant est souvent aux prises avec des difficults
Insuccs
5.
du
le
t)as la
cause
et le
remde.
vis
devant
l'objet.
entend un bruit mtallique, dont il faut chercher la cause. Normamicrotome est silencieux, on ne doit entendre que le bruit du
levier qui rencontre l'excentrique et celui de l'encliquetage. Les autres
bruits proviennent toujours du rasoir, dont l'inclinaison est mauvaise;
2.
On
lement
le
faut donc vrifier cette inclinaison. 11 peut arriver aussi, avec les
il
blocs trs bas et trs plats, qu'une des vis d'orientation vienne buter
sur une des pices du chariot porte-rasoir. Dans ce cas, on modifie
suffit.
4.
})0ur le
n 3.
En
outre,
il
mmes
suffit
causes et
quelquefois de
M. Langeron.
Prcis de Microscopi,
-^^
iMETHODES GENERALES
338
dure.
Ces
dans
les
parallles.
l'inclusion.
9. Les coupes sont la fois plisses et ondules: leur paisseur n'est pas
uniforme. Cet accident se produit avec un rasoir trop inclin ou avec
des objets trs durs. Dans le premier cas, le rasoir vibre avec un bruit
sec; dans le second les tissus crient sous le couteau et se coupent jiar
saccades, il faut alors bien alfter le rasoir et couper trs lentement,
en recueillant au besoin les coupes une une.
10. Les coupes se pulvrisent. Ccl accident arrive avec des tissus trs
durcis, cuits ou mal pntrs par la paraffine. Il n'y a aucun remde, si
ce n'est de collodionner la surface de section. Pour cela on se sert d'un
petit pinceau et de cellodine fluide, mais schant en deux ou trois
secondes, sans laisser de traces luisantes la surface de la paraffine.
On passe ce pinceau trs lgrement sur la surface de section avant
chaque coupe. Il faut avoir bien soin de ne pas mouiller les grands
cts du bloc, car les coupes adhreraient au rasoir. Pour couper, on
attend que la pellicule de collodion soit sche. Les coupes sont recueillies une une et colles au Schllibaum (p. 350).
mme
1. Il ne faut pas confondre cet accident avec un autre phnomne qui rsulte
de l'lasticit de la paraffine. Quand on cesse pendant quelques instants de
manuvrer le microtome. le bloc, qui a t comprim par suite des cliocs successifs contre le tranchant du rasoir, reprend sa longueur primitive. Aussi la
premire coupe qui se dtache, quand on recommence un autre ruban, est-elle
toujours plus paisse, mais les suivantes reprennent l'paisseur primitive.
339
les deux vis de pression. L"oI)jcl doit tre petit el pas trop dur. Aux
causes d'insuccs dj numres, s'ajoutent celles provenant de la
rsistance de l'objet qui peut dpasser la puissance du ressort antagoniste.
V.
COUPES
AU COLLODION
place
microtomes auto-
coUodion; il faut
leur donner un dbit plus
mais le Radais
[leut convenir pour cet usage,
Minot s'y adaptent trs bien. Pour ce dernier, on rem-
Le rocking ne
le
et
les
le
le
et on prend
porte-rasoir horizontal par une pince oblique
un
Thoma
travailleur habitu la
le
marche
sance,
les glissires
encrasses ou rouilles
et le
conseillerai plutt
je
Uuel que
soit le
1.
un
Prparation de
l'objet.
la
microtome,
mme.
(p.
la
Lorsque
est la
coup. nO
pince porte-objet. Mais ce moyeu
316),
bouchon dans
technique fondamentale
il
dans
le
chloroforme ou
Le porte-objet
on
l'alcool faible.
est orient
de
et
La
on durcit
face infrieure
du bloc
mouille d'alcool-ther.
telle sorte
que
le
bloc de cellodine
METHODES GENERALES
340
transparence du bloc.
Le rasoir doit tre plac trs
2. Orientation du rnsoir.
la
pice, de manire utiliser la plus
obliquement par rapport
de
la lame pour cba(jue coupe. 11 est
grande longueur possible
est facile
bon
grce
d'avoir,
la
pour
le
collodion,
un
moins
plus question
ici
du
rasoir doit
3.
que
le
chariot
Avec
les
microlomes
glissires,
telle sorte
On
difficult.
saisit
ce
mouvement
Le mouvement microm-
le
rasoir d'un
trique
plus que l'objet est mobile et qu'il est peut-tre un peu plus difficile
les
microtomes
glissires.
On
coujie
Lorsque
la
mthodes ordinaires,
la
un
installer
que
On
il
les
coupes
peut verser
dispositif,
goutte automatiquement.
Aprs traitement par le mlange de chloroforme et d'essence de
cdre, on peut couper sec, ce qui est beaucoup }dus propre et
plus commode. Je recommande particulirement celte mthode
Quel que
dans de
soit
le
et
l'alcool 70,
K
Pour empcher l'enroulement des coupes au collodion,
ultrieur
1.
comme
la ijomnio
g-lycrines se font
le
exactement
moyen
341
un angle ou
le
le
sommet.
APPENDICE
du domaine du
bref leur
sujet.
scier, avec une petite scie dcouper, un disque
Ce disque est d'abord poli sur une face, puis coll au
baume sec sur une lame et eniin us et poli sur l'autre face. Il ne r^ste
plus qu' monter en prparation.
Le polissage se fait successivement sur une pierre fine aiguiser,
puis sur un verre finement dpoli. On n'emploie ni meri, ni aucune
poudre polir, mais seulement de l'eau; on use en dcrivant des cercles
la surface de la pierre polir. Pour coller la prparation sur la lame,
on se sert de baume pais naturel, non dissous, dont on dessche une
flamme.
goutt sur lame, en chauffant avec attention sur une trs petite
viter avec soin la production de bulles. Par refroidissement, le [baume
doit former une masse dure. On peut employer aussi la glycrine glatine (formule de Deane, p. 337, note 1).
Quand l'objet est devenu assez mince i)Our tre transparent, on mont
sec ou mieux dans le baume fondu (ou la glycrine glatine); on peut
On commence par
de l'objet
polir.
Pour
CHAPITRE
XII
TRAITEMENT ET COLLAGE
DES COUPES
I.
COUPES
LA PARAFFINE
On
peut conserver
o on
de l'enseignement.
coupes sur lames, on prlve, avec un bon
ou
une
scalpel,
plusieurs coupes et on les dpose sur une lame
bien propre, c'est--dire lave pralablement l'alcool (p. 236). Ce
toires
Pour
fait
coller les
sible
largeur
(lig.
165, 1) ou en hauteur
(fig.
165,
2]
343
Il faut, en
compte de la dilatalion qu'prouvera le ruban, une fois qu'il sera sectionn dans
rinlervalle qui spare deux coupes. Cette opration ne prsente
aucune difticult avec les objets volumineux ou de teinte fonce
calculaiil les
dimensions, tenir
coupes
et
petits cts
respondant chacun
spare
la
ligne qui
On
de
crans,
dlimitant
les
>
i
j
MTHODES GNRALES
344
diffiCLill
pour que
coupes
les
il est facile
d'y
paraffine fonde. Avec un peu d'attention,
arriver, en choisissant sur l'tagre l'endroit o la temprature
que
la
Il
faut aussi
que
les
coupes
flottent
librement
la
vent se produire.
Les coupes ne se dplissent pas, mme en levant la temprature. Cet
le plus frquent, car si les coupes fronces s'talent d'ellesmmes, les plis vritables sont beaucoup plus difficiles faire disparatre. Dans ce cas il faut, avant de chauffer, dplisser les coupes sur la
1"
accident est
du
goutte de liquide avec des aiguilles. Pour cela, on coupe les bords
ruban de paraffine en face des plis et on exerce de lgres tractions
sur
longitudinales. On fera bien, pour les coupes incolores, d'oprer
fond noir (fig. 228). Il est inutile de tenter le dplissement aprs chauiage
et commencement d'talement, car alors les plis sont irrmdiablement
'
colls.
il
est ncessaire
2 Il peut y avoir des huiles d'air sous les coupes
de les enlever avant de chauffer. Pour cela on dplace lgrement les
coupes la surface du liquide. En cas de bulles particulirement
tenaces, la dernire ressource est de piquer la bulle, travers la coupe,
avec une aiguille.
:
3"
Il
ijue
suffit
1. Cette opration est d'autant plus facile que les murs latraux du bloc (p. 333)
sont moins pais.
2.
Weber, Notes critiques sur l'talement et les dformations des coupes la
paraffine. C. B. Assoc. des anatomistes, 3" session, p. 72-77, 1901.
34;j
de l'viter
et
tends que ces petits dfauts des prparations sont d'un fcheux augure,
car un travailleur qui ne sait pas s'astreindre les viter, manquera
peu prs srement une prparation difficile. C'est en s'habituant travailler proprement et minutieusement qu'on arrive excuter des
techniques dlicates et voir ce que les autres n'ont pas encore vu. II
faut donc remdier la courbure du ruban et aligner correctement les
coupes. Pour cela, aprs talement, on coupe, avec un bon scapel, de
petits triangles de paraffine, entre chaque coupe, de manire rtablir la rectitude de l'alignement.
Gomme
Teau albumineuse
et
de
la glatine.
Nous tudierons
ensuite les
Eau
distille.
la
proprit que
Deux
les traiter
lames sans
les
essuyer.
La mthode l'eau
ne
laisse,
entre
la
lame
et les
l'eau
les
fixs
1.
et
la
matriaux
MTHODES GNRALES
346
dans
commerce
le
((Triibler).
On
peut,
la
faire
soi-mme en
gramme de
La
fiUralion
salicylate de
est
extrmement lente;
il
On
poussire.
peut encore liltrer part
blanc d'uf pralablement coup ou battu et le mlanger ensuite
avec la glycrine.
pour
prserver de
le
la
le
XV
A 50
de solution albumineuse
de formol
Ce procd
mlanger
pour tanner
Quel que
soit le liquide
employ,
faut, ds que les coupes sont tales, faire couler avec prcaution l'excs de ce liquide et placer les lames sur un goutloir, de
sans
prfrence l'tuve 37. Pour se dbarrasser du liquide,
il
dranger
aiguille,
les dispose
une dernire
fois
la
lame sur
s'coule
goutloir plaques photographiques. L'excs d'eau
trs bien et l'adhrence devient parfaite.
un
dbarrasses de
Masson
tale la
les laisse
347
Il
et trs adlirentes.
limination de la paraffine.
est bien
Il
Mme
le
si
monter au baume.
commence par chauffer modrment la lame, de manire
il
On
Cette fusion
En
de Malassez
(fig.
la
fusion qu'avec la
commodes pour
la
ces oprations..
Mais
les
si
coupes.
me
Je
sers
d'un
bloc
de bois
'
Fig. i66.
Flacon
compte-gouttes
tolune
pour
ei
aicooi.
soudre
1.
2.
quantit do liquide.
Gg. 1701
qui exigent
En
sor-
de Scliillingi.
une moindre
MTHODES GNRALES
348
tant
du troisime
Fi;?. 167.
alcool,
les
Batterie
de cylindres Borrel
dans un bloc de bois.
Fig. 168.
(fig.
169} en verre ou
en porcelaine.
On
croit
gnralement
qu^il faut
erreur. Je
Fig.
Je
169.
Cuve rainures en
verre o en porcelaine.
recommande
90
et
me
ce
jamais.
le
le
l'eau
alors les
170.
Batterie de tubes
Jolly dans une tagre en fil
Fig.
de
Ds
tes,
fer.
({ue les coupes sont bien hydrafaut les colorer, car il est trs
il
mauvais de
Un bon moyen
le
1. En mettant dans
chaque cylindre un prisme de Borrel (fig. "245, p. 630) on
diminue la quantit de liquide et on peut traiter trois lames la fois ou mme
349
y plonge
coupes on voit alors le trouble
disparatre et l'alcool jaunir. On ajoute peu peu la solution de carbonate de lithium, jusqu' ce que le prcipit ne se dissolve plus. A ce
moment les coupes sont dcolores et il ne reste plus qu' les laver
dans un dernier alcool.
l'alcool se trouble.
les
A mon
avis, le
Chine
traits
un
petit
de
silex.
p.
455
le
le
verre, soit
moyen
mme
avec un fragment
une
pointe d'aluminium.
Ces procds, qui suppriProcds rapides de collage.
ment l'talement des coupes, ne peuvent tre employs qu'avec
De
plus, i! ne
coupes colles et non colores.
cette
condition.
Albumine de Mayer.
On
donc dj
permet pas
tend sur
la
la
MTHODES GENERALES
350
(le
plisses.
Le seul insuccs qui puisse se produire, dans le traides coupes avant coloration, est le dcollement. Cet accident
lames mal nettoyes, coupes mal
peut tre d diverses causes
sches, tissus trs sclreux, etc. 11 n"v a (|u'un remde, applicable seuInsuccs.
leuKMit
20
40
40
II.
COUPES
AU COLLODION
Le
siler
coupes
que
mesure dans
l'alcool
70".
y a
Il
351
deux uilhodes
})Our
les
On
ensuite.
avec Talcool
absolu, qui
dun
dissout le coUodion.
phniqu
On
se
contente
phniqu de Weigert
ou aniline (ne dissout pas les
le x\}lol
On
la paraffine
et les coller
mine de Mayer
l'albu-
et la cellodine.
prserve
le
mieux
les
faible.
buvard imbib
d'alcool.
Quand uue
on
la
ren-
CHAPITRE XIV
la
que, dans
cet
ouvrage, nous
no
pouvons
Il
est bien
tudier
entendu
toutes
les
constitueront
mine
que
les divers
la
ncessit
Nous verrons de
lectives,
affinit
particu-
353
montr,
ont
est
il
Il
ne faut pas
la
bon de
le rpter,
que
Mann
s'illu-
a bien
fait
dans
la
manire d'tudier
les
coupes.
Il
est certain
que
la
science
histologique
norme
faut
logie et
que
le
les colorations ne sont pas toute l'histodu micrographe n'est pas d'tre un
devoir
premier
teinturier,
que
les
telle
le
il
faut
que
Dans
ne peut
aupara-
qu'on
nomme mordant
par mordanage
binaison que
le
le
prpare recevoir
le
colorant
laque ^
On
Aucune
Du moins
n'est
acides.
M. Langerox.
Prcis de Microscopie.
23
MTHODES GNRALES
354
si
bien
(lu'il
pas au
sait
jiislo
liislologiques.
matires
colorantes,
allinit
il
qui
est
se produit
un
la
base
des
vritable sel,
sur les recberclies de savants tels (ju'Elirlicb, JMayer, Flemmin^-, Ucidenbain, Unna, Benda, Micbaelis, Giemsa, etc. La molcule albuminode est considre comme renfermant des groupements acides et
basi(|ucs, auxquels la prcipitation n'enlve rien de leurs proprits
cbimi(ities g-nrales et qui se combinent avec les groupements acides
des matires colorantes. Unna et Golodelz ont insist rcemrle considrable que joue l'oxygne dans
et sur la ncessit de paralyser les proprits rductrices des tissus, par l'emploi de fixateurs et de mordants
oxydants.
Les partisans de la thorie physique, dont le protagoniste est A. Fischer,
ne veulent voir, dans les colorations, qu'une fixation mcanique des
matires colorantes, par suite de phnomnes d'adsorption i, sorte de
condensation ou d'attraction, de nature purement pbysiiiue, comparable
l'action exerce par le noir animal sur les gaz et sur certaines matires
colorantes. On objecte Fischer et ses disciples (jue l'lectivit manifeste par certains lments, pour des colorants dtermins, ne concorde
pas avec une condensation purement physique, qui devrait s'exercer
indiirremment sur toutes les matires colorantes. Au contraire, on
constate toujours que cette lectivit correspond la prdominance des
ou
l>asi(iues
interstices (jui sparent ces lments. C'est alors un phnomne superpos la vritable coloration et auquel on remdie par la diffrencialion (p. 360).
2.
Ztschr.
/'.
j)hys. C/iemie,
V, p,
3'-2?,
1810.
355
du sulfure de carbone.
Bien que cette thorie
soit
chimique du colorant.
un exemple,
je
la trs
citerai
ingnieuse
autrefois
les
chi-
1.
et
[lathoijenen Protozoeii,
I,
p.
18, 19IJ.
CHAPITRE XV
Les colorants naturels^ extraits directement de produits anisont le carmin, Fhmatoxyline, Torcine et le
maux ou vgtaux,
safran.
la
Ils
La
Tinfini,
classification
que
le
noyau
et
le
cyto|)lasme
parce que leur .composant colorant actif est une base colore; les
autres sont cytoplasmir/ues ou acides et caractriss par un acide
color. Il est trs rare qu'on utilise les bases ou les acides libres,
cause de
qu'on
les
leur
])eu
artificiels,
tels
des sels.
sels,
dont
la
nom
de bleu de
357
de la
mlhylne, c'esl--dire un sel form par la combinaison
base du bleu de mlhylne avec Tacide chlorhydrique.
Dans les colorants acides, c'est la base qui est incolore et Tacide
de l'osiqui est color. Ainsi, Fosine n'est pas autre chose que
nate de potassium ou de sodium, dans lequel Tacide osinique
(ttrabromonuorescine) est color, tandis que la potasse et la soude
sont incolores.
un
si
la coloration
du sang
et
des
Protozoaires.
Il est bon de ranger dans la catgorie des colorants in diffrents,
cre par Michaelis, ceux qui ne sont ni acides, ni basiques et ne
Ces
possdent pas de groupements capables de former des sels.
Ponceau ou Scharlach R.
Enfin, Giemsa propose rcemment de nommer aniphochrouies
certains colorants neutres, constitus par des bases colores poly-
Avant d'tudier en
est ncessaire
il
donne
lieu
la
comme
les
ambocepleurs ou
d'une fagon indirecte, car il ne peut aij^ir seul. Sa prsence, dans une
molcule, ne la rend pas encore colorante, mais la sensibilise en la
transformant en chromogne.
L'auxochrome est comparable au complment ou alexine; c'est lui
qui complte le chromogne et rvle ses caractres latents. 11 est
ncessaire que cet auxochrome se fixe la molcule de chromogne,
pour que le colorant soit constitu. En outre, l'auxochrome modifie la
358
MTHODES GNRALES
Au fond, nous ne devons pas nous laisser tromper par ces mots qui
ne nous servent (\n'k masquer notre ignorance. Nous ne savons pas ce
que sont ce chromophore et cet auxochrome, ni pourquoi ils confrent
des corps incolores des colorations intenses. Mais en prcisant bien
l'avance la valeur relle de ces termes mtaphysiques, il est utile et
commode de les employer pour concrtiser nos ides.
La classification des colorants artificiels en colorants basiques, acides
une trs grande importance, car c'est sur elle qu'est fonde
l'analyse chromatique, dont les rsultats sont si prcieux pour la cytologie et pour la physiologie cellulaire. Elle ne rpond pourtant pas
et neutres a
tous les besoins, car elle n'a t base par Ehrlich que sur des recherches
faites sur des leucocytes isols et fixs par la clialeur. Aussi faut-il,
d'une part, la complter en distinguant d'autres affinits (corps azurophiles, sidrophiles, fuchsinophiles, etc.), et, d'autre part, la modifier un
peu dans certaines circonstances. Ainsi certains colorants acides, tels
la
(jue l'orange G, peuvent donner des colorations nuclaires par
mthode rgressive, tandis que des colorants basiques, tels que la safranine et le bleu de mthylne, peuvent donner des colorations plasmatiques, le premier aprs mordanage et le second dans les colorations
vitales.
CHAPITRE XVI
copie.
les unes teignent les objets d'une faon diffuse, tandis que
autres se fixent lectivemenl sur certaines parties, toujours
lions
les
les coloranls
mmes,
sont les seules qui nous occuperont; ce sont elles qui nous
permettent de raliser la diffrenciation optique, dont nous avons
parl plus haut, sur laquelle sont bases presque toutes nos connaissances histologiques. Les colorations lectives sont dites sp-
un tissn, on colore exclusivement un lment ou un groupe d'lments (coloration des fibres lastiques, de
il
Dans la mthode progressive., on emploie des solutions colorantes faibles, qu'on fait agir longtemps sur les tissus ou les
coupes. Lorsque l'objet est retir du colorant, il doit avoir sa colo-
MTHODES GNRALES
360
ration dfinilive,
comme
ton et
comme
La seule
intensit.
inter-
cier.
vidence. Autrement
on
la diffi-
Dans
la
lore ensuite
Ici, l'action
du micrographe,
se fait
est destin
il
beaucoup plus
sentir, car le
rsultat dfinitif varie, suivant l'insistance avec laquelle la diffrenciation est pousse.
rsultats, la
mthode rgressive
trs
doit tre
minces
et
361
diffrenciation.
La diffrenciation ou
ment, pour
e:^lraclion
rejeter,
lments
par Temploi
des
mordants.
Les
colorations
elles sont
miclaire^ ou plasma-
matiques. Dans
le
les
lments sont
teints
du
du bain
colorant, tandis que, dans le second cas, certains lments font virer la couleur un ton diffrent; c'est ce que nous
ton
Dans les colorations simultanes, chaque lment agit gnrament pour son compte, du n^oins dans les formules rationnelles,
car il faut se dfier de certains liquides donnant automatiquement
des colorations triples ou quadruples, dont le rsultat est presque
toujours dfectueux ou inconstant. Un bon exemple de coloration
simultane nous est fourni par le triacide d'Ehrlich.
1.
Mayer
METHODES GENERALES
362
Il ne faut
4" Colornlions ; anoptiques.
pas confondre ces
colorations avec les colorations combines; dans ces dernires, en
on ne
effet,
fait
agir
que
les
agents
des
est la
mtbode de Roma-
combines.
5
Colorations en masse.
Les procds de
la
technique
certains de
colorations
maux
ques
et n'atteignent
Ce procd
monter
conomique, car
au baume^ ds
immdiatement
coupes
est trs expditif et
il
permet de
qu'elles sont
dparaftlnes, sans avoir besoin de passer par Talcool. iMais on
n'obtient jamais de colorations aussi dlicates que par le traite-
ment
les
exallaiit
avec
le
leclivit
colorant
un
et,
363
(.l'autre
prcii)it
l'eau.
les
tions,
qui semblent tre directes, ne sont pas autre cliose que des
c'est le cas, en particulier, des
mordanage
colorations aprs
en gnral,
pices fixes par l'acide chromique, les bichromates et,
tous les sels mtalliques.
Unna et Golodelz ont montr rcemment (p. 269, note 2) que
en augmentant
le
les colorants.
colorant, de
manire
produire
teint
du
mordant.
du mordanage. Dans
ples de ces deux modes d'application
coloration l'hmatoxyline ferrique, qui est la fois indirecte et
est l'alun de fer,
rgressive, on fait agir d'abord le mordant, qui
on diffrencie de
enfin
et
est
le
colorant, qui
l'hmatoxyline,
puis
nouveau avec le mordant. Lhmalun de Mayer, au contraire,
la
est
de
fer).
METHODES GENERALES
364
Le
2"
tannin, seul
les
pour
on
traite les
de
la
teinture
(p. 394).
Il
compltement
l'iode,
car
il
dtruirait
dans
(Unna
et Golodelz).
une
tats
obtenus.
Accentuateurs.
On
les
mordants
Ces corps,
qu'il
nomme
est
notamment en
bactriologie.
l'^ Potasse
Accentuateurs basiques.
Bleu de
caustique 1 p. 1 000
Lfller (p. 392). Elle est remplace par le carbonate de potassium dans
la solution d'Azur II de Giemsa (p. 389).
note
2.
Pour
le
mordanagc par
le
1.
p. 2C-1, 189:.
Ztschr.
f. iviss.
Mikr.. XI, p.
r)03.
1805.
Borate
de
sodium.
Bleu
de
boracique
Manson
et
365
de
Sahli
(p. 391).
soit
en modifiant
la
un
on
prpare
la
que
comme
mordants
de vrais
363)
minales mtalliques
(p.
comme
notamment
1.
faut
donc
tenir
295).
p. 50-54, 1899.
2. Morel et
l'acide
celles
p. 8-29-833,
1897.
Ztsckr.
/".
et
uiss. Mikr.,
des
XVI,
MTHODES GNRALES
366
Mtachromasie.
les colo-
rations
jouent un rle considrable dans la technique moderne, nous devons donner leur sujet
ait
quelques mots d'explication. D'aprs Ehrlich, pour qu'il y
mtachromatiques; comme
elles
tion et
et les
d'aprs la
chromolropes 2,
Les colorations mlachromaticiues s'opposent donc aux colora-
tions orthochromatiqiies^, ces dernires n'tant pas accompagnes d'un virage du colorant.
Les principaux colorants mtachromatiques sont le violet de
mthyle et le dahlia, colorants violets, qui colorent en rouge la
:
le
colore la matire amylode en bleu et les granulations des labrocolore les noyaux
cytes en rouge; la safranine, colorant rouge, qui
en rouge
et le
mucus en
jaune.
En somme,
les
principaux colo-
normale
est
bleue ou violette et
la
nuance mtachromatique
rouge.
la
matire
amy-
rants monochromatiques.
A. Le lileu de Nil et le bleu de crsiji hrilhint sont aussi des bleus
tiques.
aux
colo-
mtachroma-
fondamentale du cartilage.
les colorants
mucus
3G7
et la substance
en
colors
et violets.
masie.
Il
laut
libres.
iMicluielis
considre la mtachromasie
comme une
modification iaulo-
Ce serait quelque chose d'analogue aux changements de coloration que certains corps, tels que l'iode, prsentent au
contact de diffrents dissolvants. Par exemple, les solutions alcooliques
d'iode sont brunes, tandis que les solutions chloroformiques sont violeltes. Giemsa obtient des rsultats analogues au moyen d'une exprience trs lgante. On fait une solution aqueuse trs tendue de
chlorhydrate d'azur de mthylne chimiquement pur. Cette solution
doit tre transparente. On en remplit au tiers trois tubes essai,
disposs dans un porte-tubes. On met dans chacun d'eux la base en
libert, au moyen de quelques gouttes de lessive de soude trs dilue;
puis on agite le contenu d'un tube avec de l'ther de })trole, d'un
autre avec de l'ther sulfurique et du troisime avec du chloroforme.
mhre'' des sels colorants.
La base
et prend respectivement
base peut tre combine
puis mise une seconde fois en
libert, et ainsi de suite, il s'agit videmment, dans ce cas, d'un phnomne de taulomrie. De mme, Michaelis a montr que la thionine
bleue et la thionine rougie par le mucus sont tautomres.
Si j'entre dans ces dtails, c'est parce que l'interprtation tautomrique de la mtachromasie ne repose pas seulement sur ces analogies,
mais encore sur des faits exprimentaux prcis, mis en lumire par
Nietzki et Michaelis. 11 est en effet dmontr que la couleur du sel
est extraite
Comme
la
il
se
1. Deux corps sont tautom6res lorsqu'ils ont la iiimc l'ormulc brute et ne diffrent i[ue par la disposion des atomes daus la formule do constitution.
MTHODES GENERALES
368
faits,
Hansen
aussi
'
montes au sirop
de
lvu-
Ce qui
Mtachromasie basophile et neutrophile.
complique eucore Ttude de ia mlacbromasie, c'est Texistence
trs probable de plusieurs espces de mtachromasie. Dans uu
rcent travail^, Pappenheim distingue en
effet
une mtachromasie
cytoplasme des Protozoaires. Elle est produite par les bleus basiques
mtachromatiques (bleu de toluidine, thionine, bleu de INil, bleu
de crsyl brillant), mais non par le bleu de mthylne pur.
La seconde n'est produite que par le mlange d'azur ou de
violet de mthylne avec une substance telle que l'osine (mlange
de Romanovsky)
rle de mordant
donc
11
ici
probablement le
d'une coloration
(p. 387).
s'agirait
Cette mtachiomasie neutrophile est celle de
maline des Protozoaires et des corps azurophiles.
indirecte.
1.
llauscD,
wiss. Mikr.,
Ueber
XXV,
die Ursaclicn
la
chro-
f.
p. 145-153, 1908.
comment
Voici
3.
Pappenheim,
note
2.
CHAPITUE XVII
COLORATIONS AU CARMIN
Le carmin est un produit rouge pulvrulent, extrait de la
Cochenille, c'est--dire du Coccus cacti, Hmiptre parasite d'un
Cactus du Mexique. Le carmin provient seulement des femelles et
n'existe chez elles que dans le corps graisseux et le vitellus des
ufs. C'est essentiellement une combinaison d'acide carminique
avec de l'alumine, de
la
chaux
et
des albuminodes.
On
peut donc
Cochenille, du
prparer
carmin ou de l'acide carminique. 11 n'y a pas d'avantage se
servir de la Cochenille elle-mme, nous passerons donc sous
les colorants
au carmin, en partant de
la
Le carmin
copie. Gppert et
commena
rations.
1.
M. Langeron.
X,
p. 480, 1892.
Prcis de Microscopie.
%^
MTHODES GNRALES
370
les
travaux d'anatomie
microscopique
drique alcoolique
carmin alun
p. 100.
Carmin
Grenacher \
.
100 cm3.
2 3 gr.
Pour
pas aprs les fixateurs osmis; les bichromates et l'acide chromique ne gnent pas, pourvu que le lavage ait t bien fait.
les
les
entiers.
Le paracarmin
rationnelles,
COLORATIONS AU CARMIN
Carmin chlorhydrique
371
alcoolique.
Eau
15
Acide chlorhydrique.
...
Carmin
cm''.
XXX
1,5 cm'^ ou
4
Ce
irouttes.
gr.
:
est
cique et altre moins les tissus, pourvu que ceux-ci ne renferment pas de parties calcaires. Si la coloration est trop intense et
un peu
80
de colorant et viter sa prcipitation par Talcool 90. Cette coloration se conserve trs bien dans le baume.
100 cm3.
Alun de potasse
Carmin
^
1
'''
o^
Faire bouillir quinze vingt minutes petit feu, laisser refroidir, puis
filtrer et ajouter un cristal de thymol, pour viter le dveloppement des
Moisissures.
Il
Teau
mais
il
un colorant
ration. C'est
il
Picrocarmin de Ranvier.
en dsu-
est difficile
METHODES GENERALES
372
mthode,
le
tuer et colorer les Protozoaires entre lame et lamelle. Son action est
analogue celle du vert de mthyle actique (p. 383), mais certainement
moins
prcise.
CHAPITRE
COLORATIONS A
XVIII
L'H MATOXYLl
NE
L'hmaloxyline est une substance cristalline, incolore ou lgrement jauntre, extraite du bois de Campche (Hmatoxylon
campechianum), Lgumineuse arborescente de l'Amrique centrale. Ce corps n'a, par lui-mme, aucun pouvoir colorant, mais
il est trs facilement
oxydable et se transforme d'abord en hmatine, qui s'oxyde son tour et
finit
pour la coloration. Les anciennes solutions d'hmatoxyline devaient donc mrir, c'est--dire s'oxyder, pour acqurir leur
tilisables
d'hmatoxyline
Unna
et
sujet.
Il est
bien dmontr maintenant que ni l'hmatoxyline ni
l'hmatine seules ne peuvent fournir de colorations, mais qu'elles
doivent tre associes une base, avec laquelle elles forment un
tre l'alumine,
de chrome, de vanadium
etc.
Dans
un
la
sel
de
fer,
de cuivre,
aluminique, celle-ci est prforme dans la solution, qui agit gnralement par teinture progressive. Avec les autres laques, lemor1. M. Iloidcnhain, Uebcr
Yanadiunihfpmatoxylin, Pikroblauschwarz
korinth. Ztschr. f. loiss. iVikr., XXV, p. 401-410, 1908.
und Kongo-
METHODES GNRALES
374
daol et
dans
le
laque se forme
et
la
l'eau, tandis
et
L'hmatoxyline
l'alcool
soluble dans
que riimatoxyline
se prsente dans le
COLORATION
I.
la
l'est
mthode correspond l'ancienne coloration par ThmaLe terme d'hmatoxyline est rest dans le langage usuel,
mais nous savons trs bien que l'hmatoxyline n'est pour rien
Cette
toxyline.
mo\en de prparer
et stables,
il
les
que Mayer a
de toutes
les
anciennes recettes
ouvrages de technique.
masse
Hmalun de Mayer
Eau
1000 cm^^,
On mlange
le tout et
on
gr.
gT. 2.
50 gr.
temprature
ordinaire.
litre
Hydrate de chloral
Acide citrique
et
on
1.
50 gr.
1
gr.
laisse dissoudre.
Je ne donne
f. iviss.
Mi/cr.,
ici
XX,
que
la
formule
la
p. 410.
Carazzi prfre employer l'iodate de potassium, qui est plus facile obtenir
{Ztsclir. f. iniss. 3/ikr., XXVIII, p. 273, 1911). Ces corps
agissent comme oxydants et transforment instantanment l'hmatoxyline en
2.
parfaitement pur
hmatine.
3. Avoir soin de
le
COLORATIONS A L'HMATOXYLINE
375
masse
Ce
(24 48 heures'.
liquide esl
en masse
ture des
Tosine
existent
pour
la coloration
(p. -418).
il
suffit
de laisser
les pices
le lavage,
l'eau ordinaire.
Eu
ou
cas de coloration
les pices
p.
100
et
non de
l'eau
ordinaire
qui rendrait
la
coloration
diffuse.
Les colorations
le
baume,
MITHODES GENERALES
376
Quelquefois
les
les
mdium
coupes.
Glychmalun de Mayer
Peser 0,4 gr. d'hmatine de Geigy, de Ble, et broyer dans un moravec quehjues gouttes de glycrine. Quand on a obtenu une pte
bien homogne, on lave le mortier, par portions, avec le licinide suivant, de manire entraner toute la pnte
tier
Eau
70 cm'K
distille
30 cm^.
Glycrine
Alun de potasse
dissoudre
Faire
rine.
On
chaud
peut acidifier en
5 gr.
l'alun
dans
ajoutant 2
l'eau,
p.
lisable.
Je crois
nergique,
raison de perptuer cette antique formule alors que le glychmalun nous donne une teinture aussi puissante, trs stable et de
de
prparation instantane. Il faut abandonner aussi l'hmatoxyline
Bohmer qu'on voit encore citer dans quelques ouvrages.
Le mode d'emploi du glychmalun est le mme que celui de
l'hmalun. On peut procder par la mthode progressive, ou surcolorer
II.
et
COLORATION PAR
LA
LAQUE FERRIQUE
Eau dist. 400; glycCarazzi (Ztschr. f. wisR. Mikr., XXVIII, p. 273, 1911)
rine 100; alun '20; iodate de potassium 0,01: hcmatoxylinc 0,5. Mler le tout
ensemble et laisser dissoudre, sans chautier.
:
377
1.
deux
ractifs suivants
(1891).
Prparer
Solution 3 p. 100 d'alun de fer (sulfate double d'amMordant.
monium et de sesquioxyde de fer).
Solution aqueuse d'hmaloxyline 1 p. 100, prpare
2" Colorant.
en mlangeant 10 cm"', de solution d'hmaloxyline 10 p. 100 dans
l'alcool 90 avec 90 cm-\ d'eau.
Pour prparer la solution d'alun de fer, il ne faut employer que des
s'ils prsentent une teinle jauntre, ils sont
cristaux violets bien clairsaltrs et doivent tre rejels. Pour avoir srement du bon alun de fer,
il ne faut pas acheter de petits cristaux, ni de l'alun de fer pulvrulent;
mais, suivant le conseil de Francotte, exiger de trs gros cristaux qui
se conservent parfaitement en bocaux bien bouchs l'meri. Au
moment de faire la solution, on racle avec un scalpel la ([uanlit
ncessaire et on obtient ainsi une dissolution immdiale. Le licjuide,
qui est jauntre, doit tre absolument limpide. 11 ne faut pas prparer
l'avance une quantit de cette solution, car elle ne se conserve pas.
11 est essentiel de faire la solution froid.
La solution d'hmaloxyline est d'autant meilleure ([u'elle est plus
ancienne. Elle devient noire, par suite de l'immersion des coupes
imprgnes d'alun de fer, mais il n"y a pas s'en occuper. D'aprs
Mayer, il ne s'y formerait pas (riiinaline, mais d'autres composs
plus ric'ies en oxygne.
1
cl
la coloration
diffre
Voici la
MTHODES GNRALES
378
Colorer
dans
la
solution
criimatoxyline
pendant
trente
On
^ La pr-
A'^
distille
11 faut
prendre un liquide
de celui qui sert mordancer. La concentration peut
mme ou plus faible (1 p. 100), s'il y a intrt ralentir
tre la
l'eau et
on
les
services.
sur
la
la
d'une plaque
examen ne
de
Bien
il
entendu, cet
faut enlever
la partie amovible.
6"
on
le
utile
par un
colorant
l'eau, colorer
plasmatique (voir p.
si
397 colo-
pousse plus ou moins loin, suivant les parties qu'on veut mettre
en vidence. C'est l la fois l'avantage et Fcueil de la mthode
de Heidenhain;
elle
mais encore
il ne faut
pas prendre tous les corpuscules siddes
nuclaires ou cytoplasmiques, ni
inclusions
rophiles pour
tirer des conclusions errones d'une diffrenciation incomplte ou
tion,
379
le dtail
pour
dmontrer.
russie,
un fond
les
structures nuclaires
et
de
la protistologie.
(1904).
Hmatoxyline
Alcool
ensemble sur
crist.
de Grbler
Eau
95
distille
Au moment de
parties gales de
l'emploi (ou
et
de
mieux
et
gr.
lOU cm3.
4
95''
B.
les coupes.
colorer avec ce
mlange pendant
/'.
MTHODES GNRALES
380
mme
moins, suivant
la
nature des
L'avantage de celte mthode est d'tre trs rapide et progresne produit donc pas de surcoloration et ne ncessite pas
sive. Elle
Morel
et
Bassal
Perchlorure de fer
Acide chlorhydrique
Actale de cuivre 4
B.
Eau
2cm-*
95
1
p.
100
distille
On
Il
est
curieux de constater que l'hmatoxyline, dont la constitution chimique est inconnue et dont le mode d'emploi est rest pendant
trs
longtemps empirique,
est
les plus
elle n'a
Unna
et
le
moyen de prparer
encore
part cela,
avec
on
la
laque aluminique.
Ce qui assure la supriorit de l'hmatoxyline, sur le carmin et
l(;s couleurs
d'aniline, c'est qu'elle peut colorer aprs tous les fixa1.
Morel
et Bassal,
Journ. Anaf.
2.
cl PlujsioL,
XLV,
p. 632-633,
1909.
COLORATIONS A L'HMATOXYLINE
381
Il
musculaires
CHAPITRE XIX
leurs
gnrales
neutres.
de
coloration
I.
et
COLORANTS BASIQUES
par
rarement des mordants proprement dits ', mais plutt des accentuateurs (formol, aniline, phnol). Pourtant Tiode peut, dans certains cas, servir avec avantage
A.
au mordanage
Colorations
(p.
364).
progressives.
peu sont
383
un colorant acide
le vert
le
vert
(p. 400).
le
triacide
d'Ehrlich.
Thionine ou
violet
bleu de mthylne et
de
un
C'est un
Laiilli.
du
mtachromatiques
prits
(p.
On
Nicolle-.
Solution sature de thionine dans l'alcool 60"
2 p. 100
Eau phnique
me semble assez
tre, ce qui
partie.
La thionine phnique
et se
matine qui
aurait
l'alcool, ce
de
soit teinte
un peu de
'^
On
surcoloration,
il
suffit
de
Au
cas
il
diffrencier dans
la coloration.
\.
Loco
2.
On peut prparer
3.
Le mucus
MTHODES (NRALES
384
baume neutre
<[ue
le
la base libre
qui est mtacbromatique
bleu de mtbylne alcalinis, c'est un nouveau corps, car
base libre est bleue et non mtacbromatique. Par contre, le bleu
le
dans
la
le
la
D'aprs Mann
combin
l'osine.
c'est,
peut remplacer
le
notamment pour la recherche des corps de Nissl (p. 660), pour les examens bactriologiques rapides (Thry) (p. 089), et pour la prparation
du bleu polychrome
Eau
(p.
390)
que MnrlinoUi
formule ainsi
75
distille
Carbonate de lithium
Bleu de toluidine
cm'.
0,5 gr.
1
gr.
20
5
Glycrine
Alcool 95
Celte solution est
'
lorsqu'elle a pris
gr.
cm3.
une
teinte
rouge.
Bleu de mthylne.
Ce corps,
est le
ici
p. 24-27, 1910.
comme
Il
le
387)
que
385
et constitue
le
bleu poly-
le
bleu de
que
bleu de toluidine.
le
A mon
avis,
il
Au
-Ijleu
contraire, le bleu de
ce dernier usage et pour la mise en vidence du ciment intercellulaire, des lymphatiques, etc., il prsente certains avantages
En
effet,
il
est
les tissus
nerveux, il a la prcieuse
pour
ne
colorer
ce qui permet de
de
lments,
que quelques
pi'oprit
rapide
et
En somme, en
vitales, le bleu
de mthy-
aucun emploi en
lne
pur
Toutes
n'a
Ce mme que
devient que
s'il
le
M. Lakgeron.
mthyle
PivN'is de Microscopie.
(p. 3G7).
25
MTHODES GNRALES
386
Azur de mthylne.
hydrate;
il
est
importants de
Ce corps s'emploie sous forme de chlordevenu un des coloranls ctjtologiques les jjIus
la
technique moderne.
'
de rosine
1.
Romanovsk}^ Zur Frage der Parasitologie und der Thrapie der Malaria.
Sl-Pctersbourg med. Woch., VIII, p. 297-307, 1801.
2. Ztschr. f. iviss. Mikr., VII, p. 447, 1891.
3. Nocht, Zur Farbung der Malariaparasitcn. (Jeniralblatt f. Bakt., XXIV,
p. 839-817, 1898, et
XXV,
p. 764, 1899.
387
'
mthylne non
altr,
du
violet
gnral des substances dites azurophiles. Cette coloration spcifique ne peut se produire qu'en prsence d'une couleur acide, particulirement de l'osine. Il faut bien savoir pourtant que l'osine
bablement
corps, tels
que
Non seulement
1.
dans
2.
Ne pas
la
la
et prod'autres
remplacer par
agent chimique
rle
Bakt., Orig.,
XXIX,
p. 763-769, 1905.
f.
METHODES GENERALES
388
de toutes
mais encore
elle est
spci-
que
Protozoaires.
Ce
par Pappenheim,
en bleu
et
la
mucine
et la
1.
pas
Bien entendu
la possibilit
il
de la coloration par
le
3.
4.
2. C.
p. 135-163, 1908.
la
mdecine coloniale.
389
l'oxyde d'argent. Je n'y reviendrai pas ici, car je considre que celte
mthode a fait son temps et j'ai compltement renonc son usage.
On
prpar
le
commerce de Tazur
le
la
Il
est
1res pur,
donc bien
solution de
nom
Giemsa
'azur I est du
encore inconnue,
les proprits
en
qu'il
A. Azur
de
mme
de mthylne.
pour
le
violet
Solution d'azur
II
de Giemsa.
est
II
Eau phnique
0,5 p. 100
gr.
100 cm-^
Se conserve indfiniment.
B. Carbonate de
sodium ou de potassium
p.
100.
Diluer A avec de l'eau distille jusqu' obtention d'une solution transparente. A 10 cm", de cette dilution, ajouter 1 10 gouttes de B. Colorer
10 15 secondes.
Ce liquide remplace avantageusement tous les bleus alcalins (bleu de
Manson, bleu de Sahli, bleu de Lffler).
Violet de mthylne'.
il
mthylne;
ment avec
l'azur de
les conditions
mthylne
de l'exprience.
et
bleu de
concurrem-
XXXYIII,
p.
113-131, 1901.
Pdslcur, 1904.
3. Aiui. Insi.
MTHODES GNRALES
390
Ce
mmes
les
runit en
somme
Tazur. Pourtant,
il
et
les proprits
ne colore pas
du bleu de loluidine
comme Tazur
celles
il
Il
de
d'autres substances
les solutions
alcalis.
Ce
rle a t
Si,
position de l'azur.
1.
Mac
fait
chez Griibler.
p. 41-2-433, 1906,
p. 60-2, 1906.
Pappenheim, Panchrom, eino Verbesserung der panoptischen Universalfarfiir Blutpraparate jcder Art nebst Ausfiihrungen iiber metachromatisrhe
Farbstotfe und die metachromatische Potcnz des polychromen Methylenblau.
2.
blsung
391
renferme
plasmocyles
la fois
(p.
le
granoplasma
granuleuse du
(partie
Eau
distille.
'.
Glycrine
0,2o gv.
0,25
iOO
100
faut
Eau
comme
bouillante
Borate de sodium
Bleu de mthylne de Hchst
On
et
du
violet
100 cm-\
3 gr.
2 gr.
on l'emploie concentre.
Ce
de
Eau
distille
3 vol.
METHODES GENEiiALES
392
alcaline de
Giemsa
B.
fp.
s''ap[)liquer
bien uniformes,
si
389)
colorants agissent
les
cependant certain
matriaux
les
que
chromiques donnent de meilleurs
de fixation, on peut chromer par
364);
(p.
II
conserva-
la
Colorations rgressives \
Nous savons dj
peuvent
de Khnc^ dont
el
la coloration sera
La concentration des
fixs
rsultats;
le
la fois
solutions
sans moi'dayit^
par
les
il
mlanges
dfaut de ce
mode
des
lentement,
comme
le
conseille
La diffrenciation
s'effectue
mon
avis, son
inutile,
car
il
La meilleure
est
certainement
la
safranine
de Grbler pour
COLORATIONS
PAl
393
coloration
~
*"
On recommande gnralement do
avec
la
je
violet,
conseille de
qui
est
beaucoup
i)lus
pur
prcises.
Ces divers violets s'emploient
alcoolique
ou de
il
l'acide
est
phnique.
On
et
jiar le cristal-
comme
phniqu,
bactriologie
viennent non moins bien en histologie.
et
aniline
et
qui con-
MKTHODES GNRALES
394
Cristal-violet
Alcool 90"
gr-
10 cm3.
'
phniqu
Actique
et doit tre
2 gr.
crist
On
particulire,
les
couleurs
la
(violet
Celle-ci
n'est
pas
dissocie,
Gram
mais entrane.
La coloration des
la com-
est
la
1.
Beaucoup d'auteurs indiquent Talcool aljsolu. Je ne vois pas trs bien
pourquoi, car la couleur se dissout aussi bien dans l'alcool 90 et il me semble
inutile de prendre de l'alcool absolu pour l'hydrater ensuite.
le tissu
C'est
est
qui
une coloration
teint
la fuchsine
395
phnique. Thoriquement,
un driv de
si
on se
la
para-
chlorhvdrates
(p.
et
d'actates
de rosaniline
et
de
pararosaniline
39).
Certains auteurs
Mordancer par
Nicolle)
le
la
raction^
lodure de potassium
Iode
Eau
laisser
distille
frottis
gr.
200 ce.
en contact avec
minute. Les
2 gr.
1
la
ou
la
noir.
4.
Laver rapidement
Teau.
6.
Alcool absolu
Actone
la
diffrenciation et colorer le
et le xylol et
monter
au baume.
Cette marche fondamentale peut tre lgrement modifie, suivant les cas indiqus dans les mthodes spciales. Ce qu'il faut
bien savoir c'est que le temps dlicat est celui de la diffrenciation. Si on le prolonge trop, la dcoloration
pourra tre complte,
sans respecter aucun lment;
la diffrenciation
cherche.
si
Comme
toutes les
colorations indi-
2.
le
Lugol.
Il
n"y a pas
1884
II,
METIIODHS GiNKlALKS
396
rectes
el
rgressives,
rsultat
le
la
dpond de
mthode de Gram
manire dont
la
ii'esl
pas aiilomaliqiie
on conduit
la
diffren-
ciation.
la mthode de Claii-
dius
Eau
distille
^
"^^
Eg'outter, ponger doucement au buvard et diffrencier par le chloou l'essence de girolle, jusqu' ce que ces liquides ne se
colorent plus en bleu.
4.
roforme
5. Xylol,
baume.
nvroglie
Il
y a toute une srie de colorants
et qui, dans le commerce, sont
sous
ce
nom
qu'on peut ranger
fuchsine
intituls
rubine,
rubinc,
magenta, solfrino, diamantfuchsine, etc. Tous sont des colorants basiques qu'il ne faut pas
Fuchsine basique.
:
confondre,
comme
je Tai
ou rubine acide
dites
(p.
ou chlorhydrates de rosaniline.
Pratiquement,
1.
p. 33-2, 1897.
de
307
pararosaniline.
La meilleure solution
comme
est la
prpare
phniqu (p. 394), avec cette diffrence
qu'au lieu de 2 gr. d'acide phniqu on en prend 5 gr. On emploie
aussi la solution de magenta sature dans Teau pour le trichroviolet
le
bines
vert
le
II.
lumire
le
com-
picro-indigo carmin
liquide de Ziehl est d'un emploi
et
avec
le
COLORANTS ACIDES
Acide picrique.
Sa couleur
etc.).
Colorant plasmatique
s'allie trs
la coloration
par la laque ferrique, car la coloration
la laque aluminique plit trop et prend une vilaine teinte bruntre, sous l'influence de l'acide picrique. On l'emploie surtout
associ la rubine acide, pour la coloration de van Gieson
indiqu aprs
(p.
421)
(p.
652).
et
la
Colorant plasmatique
Orange G -.
On l'emploie seul, en solution
intense.
coloration
trs
1 p.
du collagne
prcis,
mais peu
Les colorants des graisses seront tudis plus loin, au chapitre consacr
microchimie (p. 655 et 673).
2. Ne
pas le confondre avec l'orange III (orang de mthyle, CJoldorangc) qui
sert de ractif indicateur (p. 253).
\.
la
MTHODES GNRALES
398
toxyline
trs
ferrique.
nuances dans
comme
colorant et
de Unna
(p.
comme
407, note
Magenta S.
11
429).
Il
agit la fois
2).
Fuchsine acide.
de FuchsinS, Rubin
(p.
Ce corps
est
le
nom
ne faut pas
le
confondre
avec
ses
homonymes
basiques (p. 396) qui ont des proprits toutes diffrentes. Nous
savons que la rubine acide proprement dite est un driv sulfon
de
la
la
la rosa-
niline.
le
neutralise,
il
se
particularit
trs
transforme en un
lorsimportante
neutre incolore;
:
sel
aussi est-il
ment
les
rapideprparations colores la
faut les laver Teau acidule par Tacide ac-
fuchsine acide,
il
trs faibles.
trs
les
p.
1000.
triacide d'Elirlich
osines.
la
fluorescine.
11
catgorie
que
399
les
drivs ttrabroms
sont bleutres.
quand on
acido[)liiles.
obtenir ce rsultat, est d'employer les osines en coloration rgressive. On surcolore dans une solution aqueuse 1 p. 100 et on
rgresse, d'abord par l'eau, puis par l'alcool 70 (p. 419). On peut
obtenir ainsi une lection trs nette pour les granulations osinophiles des leucocytes et pour les lments musculaires.
un
ractif microchimique important, pour la dtermination de l'alcapar la raction de Mylius (p. 669).
4. Je mentionne seulement, pour tre complet, la safrosine ou osine
carlate, qui est un driv bromonitr de la lluorescine et la phloxine,
qui est un sel de sodium de la tluorescine chlore. Leur emploi ne
est
linil
Chromotropes de Hchst.
les
soit
de prfrence
mi:thodes genirales
400
les osines,
colores Ihmatine et
mode
un grand
rle
On remploie en
(p. 123), safranine-lichtgriin (p. 425).
gnral avec les colorants nuclaires rouges (safranine, magenta,
Prenant
carmin).
Bleus d'aniline.
On comprend
sous ce
nom
toute
une
dite
que tous
font
basiques et beaucoup ne
bleus basiques et les
les
bleus acides.
Tous
les
d'aniline
proprement
sulfons.
de coloration du tissu conjonctif (p. 052). A ce groupe appartiennent aussi le bleu Veau (Wasserblau et Methylwasserblau) et les
bleus
pour micrographie n
et
tri
11
triphnylrosaniline
Blochmann
de
la
mme
(p.
529)
et
trisulfone
le
sel
Carmin d'indigo ou
employ dans
la
mthode de
C'est encore
sulfo-indigotale de sodium.
colorant acide qui n'a aucune parent avec le carmin. On
l'associe l'acide picrique sous le nom de picro-indigo carmin
un
1.
Zischr.
401
OU carmin d'indigo-picrique
riimatine,
Orcine.
la
L'orcine
gories que nous venons d'tndier. Je la place la suite des colorants plasmatiques acides, car je ne peux pas lui consacrer un
chapitre spcial. Elle serait mieux au voisinage de l'hmatoxyline,
puisque
c'est aussi
un colorant basique
et
un colorant
acide.
On
l'extrait des
la fois
Lichens
orseille
de
[Lecanora, Roccella);
l'orseille
elle
du commerce
coUagne en jaune
d'or.
Voir
ce sujet p. 423.
m. COLORANTS NEUTRES
C'est encore Ehrlich
rants
neutres
dans
la
technique microscopique.
dans
coupes. Les travaux de Rosine puis de Laurent^, ont beaucoup contribu nous faire connatre les colorants neutres et
les
Les colorants neutres peuvent tre trs nombreux, car il suffit, pour
prparer, de mlanger en proportions convenables une couleur
basique et une couleur acide en solution aqueuse. On peut obtenir
les
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
26
f.
allg.
METHODES GENERALES
402
ainsi
purifi.
t proposes
gentiane-orange G.
part, le
et
et d'osinates
nomme mlange
d'azur
de Romayiovsky.
403
est essentiel
qui sont
de bleu
'
masie, qu'il
nomme
phile, produite
de toluidine,
par
neutropliile, par opposition la mtachromasie basoles couleurs basitiues telles que la thionine, le bleu
le
(p. 368).
En
de Romanovsky.
Ce qui
fait
l'importance
mlange de Romanovsky,
de cette mtachromasie
spcifique.
neutrophile
du
Ce mlange
est,
388. note 1) qui permette de mettre en vidence la chromatine des Protozoaires. Ni l'osinate de bleu d mthylne, ni l'osinate de bleu de toluidine ne peuvent la colorer.
Centralbl.
/'.
11, p.
265-268, 1902.
404
MTHODES GNRALES
Ce mlange
})eiil
tre
les
coupes que
pour
Il
le
a-t-il,
de May-Griinwald en
Pappenheim
(p.
mme
temps que
la
mthode panoi>tique de
406).
faut bien
savoir
Il en est
de mme du mlange Vosinate de bleu de toluidine de
Pappenheim (19ti). On peut le prparer soi-mme en mlangeant deux
solutions aqueuses 0,1 p. 100 de bleu de toluidine et d'osine, recueillant le prcipit sur un filtre, le desschant et le dissolvant 0,5 p. 100
Mthode de Romanovsky.
Nous savons que
cette
de violet de mthylne
Nous avons expliqu
rants neutres.
et
(p.
de bleu de mthylne.
387
et
408)
le
mode
Nous savons
mais que
la
d'effet utile,
mlange n'ont
405
de Laveran, etc.).
Les procds Valcool mthylique jouissent de la faveur parce qu'ils
donnent des rsultats beaucoup plus sirs et plus rapides. Ils reposent
sur l'isolement du colorant neutre et sur sa dissolution dans l'alcool
mthylique (principe de la mthode de Jenner, 5" mode d'emploi des
colorants neutres, p. 402). Mais, sous cette forme, le colorant neutre ne
peut agir; il faut le mettre en libert par addition d'eau. Celle-ci doit
tre mnage de telle sorte que la matire colorante reste encore un
certain temps l'tat de dissolution et puisse exercer son action. En
effet, ds que la prcipitation du colorant neutre est complte, le colorant n'agit plus, ni froid, ni chaud; il est inutile de prolonger le
contact avec l'objet colorer, car il ne reste plus en solution que
l'excs de colorant basique qui sert retarder la prcipitation.
Les solutions
coloration de
Pour le
ment l'emploi de la mthode panoptique de Pappenheim et
surtout du mlange panchrome de Pappenheim qui runissent
les
et
Comme
Leishman.
frottis
applicables
aux
frottis
humides
et
aux
coupes.
I. Mthode
Ce procd est
panoptique de Pappenheim '.
bas sur lemploi successif du mlange de May-Grnwald et do
celui de Giemsa. Le premier colore surtout les lments acido-
le
I.
Klinik, IV.
2,
p.
1244, 1908.
fiir
Blutpraparate. Afedizinische
METHODES GENERALES
406
ment, chacune
incomplte, car
tout les
de
le
ment en vidence
trophiles.
1 Fixation.
granulations neu-
Verser sur
le frottis
10 gouttes^ de liquide de
minutes.
//
est
essejiiiel
le
que
".
Un grand avantage
est
Bote de
Fig. 171.
Ptri, pour colorations
au Romanovsky, daprs
Pappenncim.
^
^'
pour
les colonies,
,1.1
il
2" Coloration.
Premier temps.
10 gouttes d'eau
En deux
temps.
Dcouvrir le frottis, verser sa surface
distille
le May-Griinwald,
en inclinant la lame en
tous
Laisser
sens.
agir
COOlT C"
Fig. 17'3.
tions au
Pappcnlieim.
et
tous
pour but de
lments
les
avantage du support en
verre avec cuvette reprsent par la figure 172. On opre ainsi trs
proprement, sans tacher la table et on peut mme laver la pisselte
sur la cuvette.
Deuxime temps.
Rejeter
le
colorant
Ou
prcdent
et,
sa?2s
2. Si
407
un
frais
frottis
demande en gnral 10
15 minutes de
coloration.
Lavage.
On
distille, la pissette,
ou
coloration.
Quelques
secondes
suffisent.
diffrencier- en prolongeant
alors dans l'eau distille.
la
A Schage.
scher
le
Ds
frottis
par
que
le
compression,
Joseph.
Il
buvard une
Examiner
avec
l'objectif
immersion dans
une goutte
examen, enlever l'huile de
les
de
l'air (p.
465).
Pilaires, etc.),
on tend avec
cdre sur
le frottis,
examiner un
aucun
le
frottis
dtail.
2.
MTHODES GNRALES
408
d'iiiiile
goulte
faire
immersion avec
examen, plonger
d'elle-mme.
la
lame dans
le
lolune
La
la
lamelle se dtache
le
Giemsa
dilu.
Lsung
Azur
Azur
II
osine
0,8
II
Glycrine de Merck
Alcool mthylique de
125
Kahlbaum
375
gr.
mtachromasie neutrophilo spciliciue pour les corps azuroNous savons aussi (p. 390) que, dans les flacons un peu
anciens de solution de Giemsa, il y a toujours un peu de violet de
mthylne. Naturellement le liquide renferme aussi de l'osinate de
bleu de mthylne et un excs de colorants basiques (bleu de mlhylne et azur de mthylne), calcul de maniie retarder la prcipitation de l'osinate d'azur, au moment de la dilution, sans toutefois
dou de
la
influencer la coloration.
La g-lycrine a pour but de donner des solutions plus concentres en
matire colorante que l'alcool mthylique seul ne pourrait le supporter
et d'obvier l'extrme volatilit de cet alcool (qui bout 67). Primitivement la teneur' en glycrine tait de 50 p. 100, mais, depuis 1907-,
elle a t abaisse 25 p. 100, sans que la puissance colorante et la
facult de conservation du liquide aient t intluences.
'
En
oprant
la
dilution,
il
il est mme
prfrable qu'elle soit lgrement alcaline. Les moindres traces d'un
acide organi(|ue ou minral et mme l'anhydride carbonique nui:
sent la coloration.
pour altrer
comme
les
1. Giemsa, Eine Vereinfachung und Vervollkommung meincr MethylenazurMethylenblau-Eosin Farbemethode. Centralbl. f. Bakt, Orig., XXXVII, p. 308, 1904
2. Giemsa, Beitrag zur Farbung der Spirochate pallida in Ausstrichpraparaten
Deutsche med. ^yocll., n" 17, 1907.
3. Ces dtails sont
emprunts Giemsa. Deutsche med. Woch., n" 12, 1910.
mthode
la
prendre
l'alcool
soluliou
409
la
ajouter
1 p.
faible
A la
aprs
mais nette.
rigueur, on peut se servir d'eau de pluie ou de neige fondue,
et fillration. Dans les eaux de source, les sels
bullition
La dilution
Le mlange ne doit pas tre concentr.
7iormale esi de 1 goutte de Giemsa pur pour 1 cm^ d'eau distille.
On peut, pour la mthode panoptiqiie de Pappcnheim, porter la
2
On
cm%
concentration
prcipiter rapidemeit, mais, en outre, la trop grande
en glycrine et en alcool mthylique nuit la coloration. Giemsa
insiste
beaucoup sur ce
po'int,
la dose.
et lamelles).
Ne pas agiter le
de diamtre on mesure l'eau distille dans une prouvette spcialement destine cette usage et on la verse dans le large tube o
on fait le mlange. On a soin d'y introduire d'abord l'eau et de
:
METHODES GENERALES
410
mlange,
gouttes.
5^ Prparer le
mesure qu'on
fait
tomber
les
avons vu, en effet (p. 405), que le colorant produit son effet maximum au moment o la solution alcoolique est additionne d'eau.
Lorsquun mlange a
qu'il
de jeter
le
mlange, de bien
instrument mtallique.
7 Conservation des colorants neutres.
Le
meilleur moyen, pour conserver intactes les solutions alcooliques de colorants neutres (Giemsa,
Fla-
Fig. 173.
con
compte
gouttes
t-
tine.
(lig.
Giemsa
rapide,
shman,
etc.), est
compte-gouttes
ttine,
du modle
reprsent
usuels.
On
avec
le
mme
les liquides.
En
mme
le
rem-
Elle consiste
fixer par la
puis inonder la prparation
avec une quantit dtermine d'eau distille.
Nous avons vu (p. 4.08) que la solution mre de Giemsa renferme
II.
solution alcoolique
25
p.
du
colorant,
conservation,
tion
1.
Giemsa, Uebor eine neue Sclincllfarbiing mit meiner Azureosinlsung. Mnclii\^ 47, 1910, et Archiv fiir Schiffs-und Tropenhygiene, XIV, p. 695, 1910.
med. W'och.,
411
nilhylique ou d'aclone. Je
donne celte dilution le nom de Giemsa rapide. Les liquides de
dilution doivent tre trs purs, anhydres et sans trace d'acide.
11
ne faut prparer
la fois
mre.
l
Fixation.
Mettre
le
frottis
qu'une petite
comme
la
solution
2 Coloration.
30 secondes.
Verser sur
la
lame lo
doucement pour homogniser. Colorer de 3 o minutes, ou beausi on veut avoir une coloration
plus intense.
et
D'aprs Giemsa ce procd pr.^enle sur celui de Leislimari les avantages suivants
1 La teneur en azur est plus constante et Texcs de colorant basique
est moins grand, d'o coloration plus rgulire et plus intense.
2 La prsence de la glycrine empche l'vaporation rapide du
mlang-e et la formation de prcipits.
3" La solution mre peut servir volont pour ce procd rapide ou
pour d'autres colorations *.
:
III.
chromgemisch de
Griibler).
ments
toutes les
mtachromasie bas)[)hile
et
neu-
trophile.
c'est la facult
1.
412
MTHODES GNRALES
l'azur de
toluidine et
le violet
Bleu de mthylne
Bleu de toluidine
Azur
gr.
0,5
Violet de mthylne
0,75
osine
250
200
50
Glycrine
Actone
Verser sur
On
Fixation.
mlange
parties
absolus.
2
Coloration.
panoptique
(p.
gales
d'alcools
Premier
temps.
le frottis
moins 20 minutes
Lavage
Gomme
et
dans
thylique
la
et
diffrencier par le
un mlange de 15 gouttes
Colorer au moins cinq
prfrable de colorer au
distille.
il
est
l'tuve 37".
la
il
variantes de la mthode de
et
mme
est
bon de
75
25
Actone
est
mthode
mlange suivant.
Alcool mthylique
Ce procd
mthode
406).
mtliylique
les autres
etc.)
les Protozoaires,
Il
413
30 secondes.
cipit,
et
de
indiqu pour
les
coupes
Procd de Giemsa ^
alcoolique de Schaudinn
heures.
(p.
(p.
416).
Dans
1 Fixation.
le
comme
il
subhm
Lavage
Premier temps.
Laver rapidement Teau et
minutes dans du Lugol faible * ainsi constitu
1901.
2.
dans
le
100.
note
1).
METHODES GNRALES
414
Eau
100 cm'^
distille
lodure de potassium
Lugol ordinaire (p. 395)
Deuxime temps.
2 gr.
3 cni-^.
Immdiatement aprs
Fean
el i)longer dix
HyposuHite de sodium
Eau
distille,
le
Irailemenl an
miaules dans
^
:
0,5 gr.
100
cm^.
cube d'eau
on conserve
les frottis
Lavage
quelque temps,
ils
prolonge.
liquides suivants
1.
3.
4.
Actone
2.
+
+
+
95 cm=^.
70
70
5 cm'^
Xvlol
30
30
Xylol pur
et
la paraffine liquide.
des diffrenciations
frottis
Procd de Giemsa ^
aux
Ce procd
humides.
diffre trs
peu de
frottis
2.
COLORATIONS
iWll
415
mm.
de 5
(p.
le
On peut employer
Dshydrater par
paraffine et
comme
il
couper
est dit p.
les alcools,
[x
au plus. Bparaf/mer
la
coupes
347.
les
le Lugol.
Employer soit 1-e
70 additionn de 3 p. 100 de
Lugol
Lugol
ordinaii^e
la
teinture d'iode
faible.
trs favorable
soit
(p. 395),
simplement de
il
doit
alors durer
rhyposulfile
sodium
de
0,5 p. 100;
c.
Lavage de 5 minutes
Teau ordinaire;
traiter ensuite
le
colorant aprs
comme
les frottis
Ce procd, excessivement
par
le
xylol et
dparafliner
monter au baume.
med.
MTHODES GNRALES
416
III.
Zenker
Procds de Pappenheim ^
(p.
284), formol 10
iod, dshydrater
p.
Fixer de prfrence au
i)uis l'alcool
et inclure la paraffine.
hislologique)
distille.
4.
Colorer au May-Griinwald
comme
ci-dessus.
3.
le
panchrome de
distille.
p.
100,
laver de nouveau.
4. Traiter par l'actate d'uranyle 1 p.
mine 8
p.
5. Dshydrater par
puis par
6.
et
de
100 ou Tactate
d'alu-
et
d'actone (aa),
l'alcool absolu.
CHAPITRE XX
COLORATIONS COMBINES
que les colorations combines les plus utiles.
ces colorations sont presque toujours destines aux coupes,
c'est dans ce chapitre que
je donnerai la marche suivre pour
Je ne- dcrirai
Comme
mme
la
paraftine.
la
pour
coupes au collodion In seule diffrence consiste,
au lieu de traiter les coupes sur lames, les passer gnralement
de godets en godets, dans les divers liquides colorants et interles
mdiaires
(p. 35).
La mthode type
mon
avis,
est la
sera la coloration
l'hmatine-osine, qui,
et pathologique.
les colorations
simultanes. Je
mthodes
crois
qu'il
n'y a pas
intrt
comme on
pulvriser
les
a quelquefois
polychrome de Unna)
d'aprs
basiques, etc.).
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
27
418
INJTIIODES
1.
COLORATIONS
Mthode
i.
GiNUALLS
A L' H
M AT
XYL N E
I
hinatineosine.
remplie
d'eau.
ou Jolly renfermant
Hmalun
lame de Teau
1 Sortir la
et
la
plonger dans
l'hmatine-.
sans inconvnient,
acide
Falcooi
*,
Laisser
Virage.
Ce virage est
et assurer
l'acide
1
100
p.
par
la
le
teinte nuclaire,
(p. 373).
Ou un mlange
extra
BA
exclusivemont nuclaire.
COLORATIONS COMBINEES
une minute dans l'osine;
6 Laver abondamment Teau pour enlever
419
5" Colorer'
tout
l'excs de
colorant;
7"^
disparu
la teinte
que
rouge
difiiise
et
On pousse
ments.
moins
loin
suivant
dsire
les
la
plus ou
dcoloration,
parties
mettre en
qu'on
vidence.
8 Dshydratation.
Ce temps est trs important, car c'est de lui (jue
dpend la russite du
montage au baume. Les
coupes, au sortir de l'al-
Fig.
n4.
Bien essuyer
de la lame et
diffrent.
le
dessous
la
plonger
mthodiquement
et
rapidement]
Essuyer rapidement
9 Eclaircissement.
le
dessous de
la
porte un petit cristallisoir pour y rejeter l'alcool qui, au besoin, pourra servir
d'autres usages (^lavages, collections, etc.).
420
MTHODES GNRALES
10
Montage au baume.
au xylol
buvard
Pour viter srement les bulles d'air, employer le tour de main suivant
dposer une goutte de baume sur la coupe et une autre sur la lamelle,
mettre les deux gouttes en contact et appliquer doucement la lamelle.
Celle-ci ne doit pas tomber brusquement sur les coupes, mais lre applique d'abord par le cl gauche, puis abaisse lentement, en la soutenant du ct droit avec une pince (p. 438).
:
il
en versant du xylol
Pendant toute
sui- la
lame
cette srie de
et
reprendre par
manipulations
baume
l'alcool absolu.
(de
la
coloration
j^cis
entre
deux oprations.
employer
le
Perroncito.
touchent.
On dcoupe
On
les relire
une une,
la
lame
et le
aux
dispositifs
le xylol.
Pour cette opration, je prfre le X3'lol au tolune qui est trop volatil.
3. Se mtier do Talcool plus ou m'oins hydrat, qui peut rester adhrent la
face infrieure de la lame et qui produit un louche, mme aprs une bonne dshy2.
421
COLORATIONS COMBINES
plus ou moins compliqus, au moyen desquels on les
ensemble. Voir aussi le petit appareil de Funck qui est
et qu'on peut construire soi-mme.
i
relire
toutes
trs pratique
2.
comme
\.
plus baut.
2.
Plonger
3.
la
d'alcool 90.
Alcool 90 pur.
Colorer en solution alcoolique concentre de chromotrope 2
6 B, jusqu' obtention de la teinte rouge (voir p. 399).
G. Alcool absolu, xylol, baume.
4.
5.
3.
mtlioJe
Celle
ainsi
que
ou
1res bien en
les basales et le
vidence
le
lissu conjonclif,
non
cautions.
La coloration
''
^.
f.
wiss. Mik)'.,
XXVI.
p.
4'2i2,
1909.
2. Le 2R s'emploie en solution plus faible que le GB. Frhlicli passe rhmalun, dshydrate, colore en solution d'acide picraminique dans l'alcool absolu (3
5 min.), lave l'alcool absolu et colore de nouveau par solution alcoolique d'un
chromotrope. Collagne rouge, lastique jaune, muscle brun, hmaties jaunes.
Ztsch.
f.
iviss.
Mikr.,
XXVII,
p. 549-352, 1910.
Le procd chaud, indiciu p. 378, est le plus rapide. A la rigueur, on pourrait virer au noir, dans l'alun do fer, une coloralion l'hmatine.
4. Avant de colorer par le mlange de van Gieson, P. Masson passe les coupes
pendant 5 10 minutes dans une solution 1 p. 100 de jaune mtanil de Poirrier.
3.
La
MTHODES GNRALES
422
p.
10 cm-^.
100
100 cm^.
On
la
donne d'excellents
Laver
4.
trs
rsultats.
6.
brillant.
7.
Monter au baume.
Causes
cVinsiiccs.
comme un
On
mais
il
4.
1.
Tlnde du
tissu conjonclif.
Mthode de Mann.
comme
d'iia-
bitude.
2.
Mann
1.
par
Colorer
le
fond par
le
Woiyert dshydrate
le xylol
les
plicniqn (xylol
et les olaircit
COLORATIONS COMBINES
Laver
3.
423
(suivre au microscope).
4. Alcool 90", alcool absolu, xylol,
5.
recommande parliculiremenl
Je
rsultats
les
baume.
remarquables et qui
pices fixes au Bouin.
cette
A mon
avis,
avec
1.
2.
5.
suit
Faire bouillir 1 gramme de safran du Gtinais de Vanne dans 100 centimlrcs cubes d'eau de source, pendant une heure. Fillrer. Ajouter
1 cm'^ de tannin 5
p. 100 et 1 cm^ de formol du commerce.
8. Laver, dshydrater, monter.
Le
rsultat est
beau
et trs dmonstratif.
fonc,
protoplasmes ross ou saumon, les fibres nerveuses,
et
musculaires rose franc vif, les fibres conjonctives,
lastiques
Tossine, la chondrine jaune d'or brillant, les granulations osinoles
6.
1.
Colorer
Thmatoxyline ferrique.
ii
Colorer
mthylosine ou Trythrosine
solution concentre pendant 10 minutes.
2.
1.
p. ^lasson,
le
I.e
fond par
la
bioloijie,
en
LXX,
p. 573, 1911.
METHODES GENERALES
424
3.
Laver
lame.
Colorer par
le
verl lumire
essuyer
4.
dos de
le
p.
100 dans
si le vert lumire
agit trop
temps dlicat de la mthode
longtemps, il dplace compltement l'osine et donne la prparation une teinte \ert sale trs dsagrable. Le vert lumire ne
l le
La chromaline
le
7.
la cellulose.
'.
1.
Colorer l'hmaloxyline ferrique de Heidenhain. Diffrencier dans l'alun de fer jusqu' dcoloration compbMe du tissu
du cytoplasme.
conjonctif et, autant que possible,
2.
Laver
l'eau.
1 p. 100.
5.
phosphomolyl)dique
p. 100.
1
p.
100.
*^
Les noyaux sont noirs; la coloration cytoplasmique est particulirement bonne, avec toute une gamme de rouges plus ou moins
colores en bleu
vifs; les plus fines fibrilles de collagne sont
cette mthode est la meilleure qui existe
mise en vidence du collagne, mais, en outre, elle est
d'une russite absolument certaine et les i)rparations se conser-
intense.
pour
Non seulement
la
1.
42o
COLORATIONS COMBINES
II.
COLORATIONS
A LA
SAFRANINE
1.
!ir-
400 cm-^.
Alcool 90
-^
Curtis).
que
je
violet
application
travail courant
III.
-^
COLORATIONS
Ces mthodes,
comme
LA FUCHSINE BASIQUE
toutes celles
o on emploie le magenta,
au Flemming.
ou mme du vert lumire en solution aqueuse ce qui, mon avis, est contraire
l'esprit de la mthode.
und
Hans
von AViniwarter,
3. On trouvera de minutieux dtails ce sujet dans
iciss.
G. Sainmont. Erfahrungen ber die Flemmingsche Dreifarbung. Zfschr. /'.
anat. ynicr., IV, p. 157Arch.
aussi
Laguesse,
Mikr., XXV, p. 157-16-2, 1908. Voir
1.
2.
218,
1901.
MTHODES GNRALES
426
1.
1.
magenta
phniqu, prpar
p. 100
dans
l'alcool
95.
4. Diffrenciation dans l'alcool picriqu, jusqu' ce qu'il ne s'chappe
plus de nuages rouges.
5. Alcool absolu, xylol, baume.
Cette mthode ne russit qu'avec les pices fixes au Flemming.
2.
Pour
1.
les
Eau
magenta dans
l'alcool
absolu
Laver largement
3.
la
solution de Cajal
Teau
Eau
25 centigr.
100 cm''.
Rincer
Tean.
Carmin d'indigo
5. Diffrencier
vol.
i2.
4.
...
distille
distille.
2 minutes dans
100 cm3.
distille
2 gouttes.
le tissu
bleu pur.
les
cytoplasmes jaunes,
le
collagne
bleu.
fixes
le
et
osmiques.
magenta (mme
gnral.
2. Je dois mon excellent ami, le D"" Pierre
Massoo, ces indications trs prcises sur la manire
d'appliquer le procd de Cajal.
427
COLORATIONS COMBINICES
Laver
2.
k Teau.
3. Colorer
30 secondes dans
Carmin d'indigo
Sol. aq. sat. d'acide
Le
reste
IV.
i.
comme
plus haut.
390
40 centigr.
100 crn^.
picrique
la
c'est
de mthylne.
C'est un colorant cytologique de premier ordre qui convient
surtout pour l'lude des lsions intlammatoires et pour celle du
cytoplasme dans les divers lments cellulaires du tissu conjonctif.
est applicable aussi bien aux frottis qu'aux coupes et
diffrenciation trs dlicate.
Il
donne une
1.
dans
le
cas,
le
Diffrencier par l'ther glycrique {Glycerinaethermiscliung) de Unna tendu de trois parties d'eau, au moins.
4. Laver longtemps et fond, dans l'eau ordinaire, de manire
3.
liminer
5.
Dshydrater
6. Xylol, huile
Telle est la
d'une
infinit
de cdre.
la
elle
est susceptible
Le point important
cela,
est
de bien effectuer
la diffrenciation.
Pour
chung de Unna.
MTHODES GNRALES
428
dissous clans
d'alcool absolu et de
glycrine.
Ce produit est prpar par Grdbler et Schucbardt depuis 1S92; on ne
connat pas au juste sa composition centsimale, mais on sait que sa
partie active est un ther ou mieux un anbydride de la glycrine. Pour
l'obtenir, on soumet la glycrine la distillation scbe fractionne avec
2 p. 100 de cblorure d'ammonium i
on recueille les produits, on les
mlange de nouveau, on les additione du tiers de leur poids d'alcool
absolu et on ajoute assez de glycrine pour donner une consistance con;
venable.
Je crois qu'on peut appeler ce mlange clher glycrique
je propose
cette dnomination, pour qu'enfin on puisse dsigner en franais un
produit important, d'usage journalier dans les laboratoires. En tous cas,
c'est le terme que j'adopte pour cet ouvrage.
On emploie trs rarement l'tber glycrique pur, parce que son pouvoir
dcolorant est trs grand. Unna conseille gnralement de l'tendre de
trois volumes d'eau. Je prfre une dilution encore plus grande, par
exemple V gouttes pour 10 centimtres cubes d'eau distille. Le mlange
on peut l'employer tel quel ou le filtrer.
est toujours trouble
:
en etTet, ii dcolore
trs spciale
chromatine avant le cytoplasme il est donc tout particulirement propre
dmontrer les inclusions basophiles (corps de Nissl, granulations basola
philes, etc.). En outre, il met admirablement en vidence les granulail les dpouille compltement
tions mtacliromatiques des labrocytes
de toute teinte bleue et les fait apparatre en rouge pur. On peut mme,
en prolongeant la diffrenciation, arriver ne plus avoir que ces gra:
examines de
lits
II
Les
COLORATIONS COMBINES
429
mme
2.
bleu polychrome.
dshydrater dans
3. Diffrencier et
dans Talcool
le
0,25 p. 100
70.
baume.
celle
2.
Mthode
Ce procd,
11
et
dit
fine
qu'il a t
a t publi par
Mann
France
d'une assez
cd pour
la
dtermination quanlitative de
une excellente
la
chromatine. C'est
jours infrieure au
Rubens Duval
mthode,
Romanovsky.
a prcis avec
beaucoup de soins
la
technique
suivre.
1.
Orange G
(Griibler)
i2.
Laver rapidement
3.
l'eau
p. 100
p. 100
aa
1. Mann, Ueber die Behandlung der Ncrvenzellen fur experimentell-histologische Untersuchungen. Ztschr. f. rviss. 3Iikr., XI, p. 489, 1894.
2. Rubens Duval, Cijioloi/ie des
inflammations cutanes. Thse de Paris (mdeFixer les pices au Dominici, au
cine), in-8 de 2'/2 p., 3 pi., 1908; cf. p. 24-28.
sublim actique ou au Bouin.
METHODES GENEKALES
430
4.
Laver
5.
rapidenieiil l'eau.
6. Xylol.
7.
On
()).
427), laver
soigneu-
sement l'eau et achever par Talcool absolu. Au lieu de bleu de toluidine, on peut employer le violet hexamthyl. Rubens Duval a eu de
bons rsultats en mordainjant 15 secondes dans l'alun de fer 1 p. 100;
l'lection acidophile est plus prcise.
rouge
russie,
vif, les
les
noyaux bleus,
les
granulations osino-
vif, les
MTHODE DE MANN'
AU BLEU
DE MTHYLE-OSINE
V.
Je donne cette mthode en mme temps que les procds gnraux, parce qu'elle est susceptible de nombreuses applications.
Nous avons dj vu (p. -422) qu'elle constitue une excellente coloration de fond, aprs la teinture l'hmatine. Elle a, en outre, une
grande importance pour l'tude du systme nerveux, ])our celle
la
540).
(p.
Le colorant de
Mann
est
et
d'osine. Les proportions de ces deux colorants acit/es sont conjbines de manire viter la prcipitation du bleu
:
Eau
distille
...
35 cm^.
45
100
Ce mlange
fixes par le
sublim
et
les
l.Mann,
la
"2.
p. 100 l'tude
de ce colorant acide.
COLORATIONS COMBINEES
Il
est
ou des coupes
la parafllne el colles
Mthode rapide.
Au sortir de l'eau, colorer
1.
les
Laver
l'eau
Mthode
lente.
3.
pour diffrencier
Alcool absolu, xylol, baume.
l'roUis
TaUjumine.
431
la
l'effet dsir.
1.
2.
Rincer 30 secondes
3.
Dshydrater par
4. Diffrencier
dans
Alcool absolu
Polasse caustique
l'eau distille.
l'alcool absolu.
l'alcool alcalin
*.
30 cm-^.
1
p.
-.
gouttes.
5.
ressortir en
rouge
vif,
les
somes en pourpre \
7. x\lcool absolu, xvlol,
baume.
ordinairement nette.
rouge
Les hmaties ressorlent d'une faon extraLes muscles stris sont aussi colors en
vif.
1.
On peut remplacer
'2.
la
CHAPITRE XXI
IMPRGNATIONS MTALLIQUES
conD'aprs la dfinition d'Apathy, l'imprgnalion mtallique
des
dtermins
siste essentiellement produire, sur des lments
conmis
en
Le
mtal
est
mtal
rduit.
de
un
fin
tissus,
prcipit
la rduction est
avec les tissus sous forme de solution saline
due, en partie Faction propre du tissu, en partie l'action de substances rductrices ou d'agents physiques tels que la lumire. Les
tact
argentique
Imprgnations l'argent.
Le
sel
d'argent
le
le nitrate,
On imprgne
l'argent
lores.
2 Les lments
433
IMPREGNATIONS METALLIQUES
eux-mmes.
1''
comme exemple
Choisissons
le
msentre de
la
Grenouille et
mthode de Ranvler.
1. Isoler une partie du msentre de la Grenouille et la tendre
sur un anneau d'ternod ou, plus simplement, sur une plaque
de lige, perce d'un trou de 20 mm. de diamtre. Le point important est que la membrane soit parfaitement tendue, sans faire
aucun pli.
2. Laver rapidement Teau distille avec une pissette.
3. Arroser avec une solution de nitrate d'argent 1 p. 500
dans Teau distille et exposer une vive lumire.
4. Au bout de deux minutes environ, lorsque le tissu a bruni
la
procdons par
la
membrane, dsormais
fixe et
durcie.
7.
Dshydrater
et
monter au baume.
Pour imprgner les animaux marins, il faut liminer les chlorures qui
immdiatement le nitrate d'argent. Harmer lave d'abord
les Bryozoaires, llydrodes, Mduses, Eponges, Annlides, etc. dans le
nitrate de potassium o p. 100 ou le sulfate de sodium 4,5 p. 100, puis
'
prcipiteraient
2"
Mthode de Ramon y
'K
technique moderne
1.
2.
3.
systme nerveux.
Cajal, Un sencillo metodo de coloracin del rticule protoplssus efcctos en los diverses centres nerviosos de Vortehrados c Inverte-
Ramon y
S.
mico y
brados. Trabajos
Madrid, II, 4,
Nancy, XIV,
de.l
p.l-29-L'-21,
p. 1-03, 1905.
T.ANGERON.
Prcis de Microscopie.
^o
434
MTHODES GNRALES
Lapin de 1 30 jours, sur lequel on prlve des petits fragments de centres nerveux ayant au plus 3 4 mm. d'paisseur.
est le
2.
3.
gr.
5 15 cm3.
100 cm3.
Ecau distille
4. Laver, dshydrater
au dammar.
el
inclure
la
paraffine.
Couperet monter
Cet expos gnral del mthode est trs simple, mais il montre aussi
le procd est lastique et combien il demande de tact de la
part de l'oprateur. Cajal nous a du reste fourni de minutieuses instructions, dont je vais donner un court rsum.
Titre de la solution arijentiqiic. Le chiire moyen de 3 p. 100 permet
d'imprgner en une seule fois un certain nombre de fragments. On a de
meilleurs rsultats, en harmonisant la concentration avec la nature des
combien
pices.
Solution 3 p. 100. Titre moyen applicable tout et pntrant en 4
6 jours.
Solution 6 p. 100. Prfrable pour les Invertbrs et pour les fixations
nergiques et rapides. Agit en 2 3 jours. Produit facilement des sur-
la totalit
Donnent quelquefois
(bulbe, moelle,
Souris et Rat d'un mois, Vertbrs infrieurs) de meilleurs rsultats
que les liquides concentrs. Agissent en 3 jours.
XX,
f.
iciss.
le
et
Mikr..
p. 401-4U8, 1903-1904.
neurofibrilles par
435
IMPRGNATIONS METALLIQUES
que
poids de nitrate d'argent, dissous dans ce volume de
liquide, soit suprieur au poids des jjices.
le
Une
au
sortir
de
l'tuve,
Mthode de Sand
cylindre-axes.
1. Fixer des blocs de 5
mm.
et des
90 cm^.
10
Actone anhydre
Acide azotique
Changer
5.
Eau
000 gr.
10
Carmin
Eau
distille
Sulfocyanure d'ammonium 2
Chlorure d'or 2 p. 100
7.
Laver,
80
p. 100
....
17
3
cni-^.
1.
CHAPITRE XXII
MILIEUX D'OBSERVATION
ET DE CONSERVATION
Monter un objet en prparation microscopique consiste
enfermer cet objet, entre lame et lamelle, dans un liquide rfringent qui sert la fois de milieu d' observation et de milieu de
conservation. Ce milieu ou
mdium^ dans
objets microscopiques, doit possder des qualits optiques et chimiques qui assurent la fois la visibilit parfaite de tous les
tre
et
rester tels
sans qu'il soit ncessaire de les lu ter. Les meilleurs milieux solisont les rsines, qui permettent un vritable embaume-
difiables
ment des
On
objets.
est
il
lut.
Milieux solides.
11
y a deux catgories de milieux solides ou solidifiables les
rsines, solubles dans l'alcool ou les hvdrocarbures, et les milieux
:
la
Baume du Canada.
employe parce
Celte
rsine est de
beaucoup
balsamea
et
la
plus
du Nord (Abies
canadensis).
commerce sous
diverses formes.
Il
existe
437
masse qui
le xylol.
est parfois
trs fonce.
commode pour
est
vritable
baume du Canada
et l'addition d'alcool
Le xvlol
est le
dans
n'est
la
le
chloroforme, qui altre les couleurs d'aniline, et l'essence de trbenthine, qui dcolore l'hmatine.
Pour
les
coupes
et
objets minces,
il
faut
de
l'air
On garde le
Emploi du baume du Canada.
baume du Canada dans des flacons dits baume
(lig. 175), ferm's par un capuchon de verre el renfermant un
son extrmit.
On
ne peut monter dans ce milieu que des objets parfaitement dshydrats. Il est donc ncessaire de les
soumettre d'abord l'action de l'alcool absolu, puis
de chasser l'alcool par le xylol. Lorsque l'objet est
liacon
baume.
les traces d'eau qu'il renferme produisent immdiatement, au contact du baume, un prcipit de gouttelettes
rsineuses opaques, qui enlve la prparation sa transparence.
On s'aperoit immdiatement de cet accident la teinte laiteuse
mal dshydrat,
que prend
la
un fond
METHODES GENERALES
438
noir.
la
reprises, puis
on reprend par l'alcool absolu. Lorsque la dsliyon passe de nouveau au xylol et au baume.
suiviT. la
les
Montage des
objets spars.
isols (Vers,
taux, etc.)
baume, sans difficult
i.
Lorsque
il
est
souvent
verre ou de papier.
].
439
e zinc; ce mlai est assez tendre pour se laisser entamer lgrement et permettre ainsi une section trs nette des papiers, sans
aucune bavure. En mme temps, il est assez rsistant pour ne pas se
dformer. Toutes les fois qu'on veut dcouper correctement du papier
ou du carton, avec une pointe ou une lame tranchante, il faut toujours
prendre comme support une lame de zinc. C'est le seul moyen d'obtenir
une coupure correcte, sans bavures et sans endommager le tranchant de
la lame. Pour les objets de grande dimension, les cellules ouverture
ronde deviennent insuffisantes. On dcoupe alors, sur la plaque de zinc,
avec un bon scalpel, une cellule carre ou rectangulaire (flg. 177) de la dimension d'une lamelle.
avec
du
se
collent
baume. Les
sur
cellules
la
de
.,
,,
Cellule
reciig. Iti.
tanguiairc en papier.
On
la
on remplit de baume
charge au pralable d'une
prfrable d'employer un excs de
la
cellule
^,
baume, de manire
Il
est
la
cavit de la cellule, ce qui obligerait recommencer toute l'opralion. On chasse ensuite l'excs de baume par compression et on
L'emploi de ces cellules est trs commode avec les objets pais. Sans
prend une position oblique qui peut gner l'observation. En outre, le baume, en couche paisse, est insuffisamment retenu
par capillarit et coule trs facilement en dehors de la prparation.
Celle-ci est excessivement longue scher et doit rester des semaines
l'tuve. Enfin, la compression est trs difficile exercer et on risque de
briser la lamelle. Tous ces inconvnients sont vits par l'emploi des
cellule, la lamelle
cellules.
Au lieu de cellules, on peut souvent se servir avec avantage de fragments de lamelles, de poils ou de cheveux qui soutiennent la lamelle,
assurent son horizontalit et permettent aussi de comprimer la prparation sans craser l'objet (p. 242).
Montage de
sries d'objets.
Le montage des
objets spars
moment o on
applique
la
lamelle.
1. Lorsque Tobjet est imprgn d'un dissolvant non vohitil (ierp'inol, essence
de girofle, chloralphnol), il faut le dposer auparavant sur une bandelette de
buvard, de faon al^sorbcr la majorit du li(|uido.
MliTIIODES GENllALES
440
couche de collodion. On
rangs sur
la
instants, puis
Compression des
objets.
et les
,.o
.
rig.
1/8.
presseur
com-
r
Com-
dit pin-
gie anglaise.
la
car
il
ne peut durer
assez
longtemps.
existe de petits compresseurs ressort, dits pingles anglaises, forfil d'acier recourb (fig-. 178). Ces appareils sont trs commodes,
mais on peut les remplacer par des petits poids do cuivre, des balles de
II
ms d'un
revolver ou de
plat,
primer.
11
ter
est
que
une prcaution
le
tout est
recommencer.
Schage du baume.
les bords de
et
la
l'tude 37"
les
les pr-
441
paraliolis paisses
semaines.
Tant que le baume n'est pas parfaitement sec, les lames doivent tre
conserves plat. En ng-ligeant cette prcaution, on s'expose voir les
lamelles glisser, le baume couler et les botes salies 11 faut donc garder
les prparations soit plat, dans des carions (fig. 179), soit en dressant
verticalement les botes rainures, de
manire ce que
les
lames soient
bori-
zontales.
Bulles
dans
le
est la
'd'air.
Un grand cueil
prsence de bulles
d'air.
On
vite
Fig.
n9.
prparations microscopiques.
420
obliquement (p.
moyens de les liminer
dernire
il
tenue
y a plusieurs
lamelle avec une aiguille, sur l'un des cts, en ayant soin de
caler le ct oppos avec une autre aiguille, pour viter le glissement. Ce moyen est le meilleur.
Les
petites
bulles
le
disi)araissent
baume
la
d'elles-mmes en quelques
rentre de
l'air
Trbenthine de Venise'.
benthine de
particulirement prcieux pour les Arthropodes et les tissus vgtaux, car il })ermet de simplifier beaucoup les manipulations. La
dOnilion est excellente, la transparence est parfaite et les lins
dtails sont plutt
l'indice
1.
la
le
baume,
trbenthine.
Un
cause de
autre avan-
sur le
METHODES GENERALES
442
pour
les
et
coupes
les
objets colors.
Voici comment je prpare la lrljenlliine de Venise, l'imitation de
Vosseler. Je mets dans un grand flacon, bien boucli, volumes ^aux
de trbenthine et d'alcool absolu ou au moins 95. 11 faut que l'alcool
soit assez fort pour que le mlange ne se trouble pas. A l'tuve 37
la
dissolution
est
assez
lent
1.
Huile de cdre.
(et
non l'essence
de cdre) est peut-tre le meilleur de tous les milieux. C'est certainement un de ceux qui mnagent le mieux les coloi^ations. particulirement celles qui sont effectues avec les colorants basiques du^
c'est--dire celles qui
(p. 383-389),
doivent tre conserves dans un milieu non rducteur. Nous avons
pour empcher
Ce milieu
Glycrine glatine-.
pour
dit.
est
un des
plus employs
On
commo-
a propos de trs
7 gr.
Glatine
Eau
42 gr.
50 gr.
distille
Glycrine
Acide phnique^
o^-
absolu
1. On peut
employer aussi le baume du Canada, dissous dans
selon Seiler, mais ce milieu est moins tolrant pour des traces d'eau.
2.
On dit souvent glatine glycrine, mais cette expression me parat
est
impropre, parce que, dans ce cas, le vritable milieu est la glycrine qui
l'alcool
simplement
3.
4.
thymol.
443
feuilles
filet
On peut monter certains objets peu dlicats en passant directement de Teau la glycrine glaline mais, gnralement, il
est prfrable
d'imprgner d'abord par la glycrine ou le laclo;
En
phnol.
Il
la
un
la
glycrine glatine.
On
peut
masse
la
de nouveau
plat.
Il
On
est
bon de
que produirait
la
la
Comme
forte chaleur.
(ripolin) ou
luler,
sent jamais dans la glycrine glatine; il faut donc les viter avec
soin et ne pas agiter ce milieu lorsqu'il est fondu, car il emprisonne
trs facilement de l'air, dont il est trs difficile de le dbarrasser.
L'bullition y dveloppe aussi des bulles gazeuses trs gnantes.
Sirop d'Apathy ^
Gomme
arabi([ue
Eau
Aprs dissolution, ajouter
1.
Ztschr.
f.
iciss.
>
an
2 p. 100 de formol ou
un peu de thymol.
MTHODES
444
G.NIIALES
Il
de
la
pourraient se contracter sont plongs d'abord dans ce milieu fortement tendu d'eau on laisse ensuite le liquide se concentrer peu
;
Milieux liquides.
Au
emploi
rations.
est la difficult
Il
employer,
la
a pourtant
soit
avec laquelle on arrive fermer les prpabeaucoup de cas o on sera oblig de les
ou des dilacrations
Je
tels
me
difficiles, etc.
la
448) la manire
de luter'les prparations faites avec ces liquides.
Je mentionne en outre quelques milieux moins connus et
eau
utiles.
Lactophnol de Amann.
publie par Amann en 1896
La
formule de ce liquide a t
Acide plnique
Acide lactique
crist.
ctiimiquement pur
...
1
1
Glycrine
Eau
distille
gr.
bien pur. Le
ne tarde pas
brunir sous Tinfluence de la lumire, ce qui est d'ailleurs sans importance. Pour le conserver incolore, il faut le garder en flacons jaunes.
L'acide phnique doit tre parfaitement blanc
mlange frachement prpar est incolore, mais
Je considre ce ractif
comme une
et
il
und Einschlussmedien
1. J. Amann, Conservirungsflussigkeiten
Chloro- und Cyauophycccn. Ztschr. f. loiss. Miki\, XIII, p. 18, 1896.
fiir
Moose,
445
tracts.
Son indice de
de voir de
fins
permet
gnralement dans les
bien plus agrable manier
que
objets possibles et je
m'en trouve
trs bien.
gomme au lactophnol de Amann. Je prfre monter la glycrine glatine ordinaire ou au sirop d'Apatliy, aprs imprgnation
la
le
par
lactophnol.
Ce
Terpinol.
lilas et
un produit synthtique,
il
peut servir de
est
mdium
girolle
Kronig
l'alcool 90.
'
du lactophnol. Enfin
sa neutralit et son
absence de pouvoirs
rducteur
et
lui
1.
les
Nmatodes.
C. R. Soc. de bio-
logie,
^.
f.
wiss.
Mikr.,
XXVI,
p. 5-23, 1909.
3. Kowntrcc, Note on the use of paraflinum li({uidum as an immersion
Journ. ofpat/i. and bact., XIII, p. :28, 1909.
4. Soixante-quinze centimes les cent grammes au lieu do cinq francs.
oil.
METHODES GENERALES
446
el la solubilit
SOLUBILITE
INDICE
DE
PRINCIPAUX
MILIEUX d'observation
RFRACTION
MOYEN
Air
Eau
Eau.
Alcool.
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Xvlol
distille
Lactophnol
Acide lactique
Glycrine
Paraffine liquide
Trbenthine de Venise
Terpinol
Chlorallactophnol
Huile de cdre
Chloralphnol
Essence de girofle
1,33
1,37
1,39
1,44
1,44
1,45
1,47
1,47
1,48
GhJoralchlorophnol
1,49
1,51
1,52
1,53
1,53
1,54
Monobromonaphtaline
1,50
Baume du Canada
-r
u
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
RACTIFS
CHAPITRE XXIII
LUTS ET VERNIS
Il existe d'innombrables formules et
procds pour la fermeture
des prparations. Ces manipulations sont chres aux amateurs de
microscopie et aux marchands qui cherchent, avant tout, obtenir
Ou
bien encore
il
n'excute que
Lut de Krnig.
le lut le
plus simple
Pour
et le
les
meilleur
Cire jaune
2 parties
79
Colophane
On
en poids.
fait
3.
ripolin.
.J'y
trs rapide.
2.
Arch.
f.
mikv. Anat.,
XXVII,
p. 657, 1886.
Les botes mtalliques des cigarettes de luxe sont excellentes pour cela leur
couvercle charnire permet de conserver le lut l'abri de la poussire.
3.
448
METHODES GENERALES
de
'^^
mm. On
22
soit
moyennes,
chauffe
modrment
le lut,
contact du
difie
instantanment.
ne reste
Il
lter
gulaire.
Fer
trian-
Fer
Fig. 181.
lutcr coud.
Ori-
bordure
soit
ginal.
d'elles
celui-ci
soit
lame
sur 3
recouvre chacune
mm.
environ. Le
bien fondu
le lut soit
la
Original.
et la lamelle et
cheval sur
le
la
et
forme
condition
faut donc,
avant de luter, enlever la
parfaitement iiropre
et
sec.
Il
moindre trace du
li(juide
conservateur. Le mieux
est
d'entourer
le
doigt
la
nature
du liquide enlever.
Pour la glycrine et le
lactophnol, l'alcool est excellent. Pour ne t)as dranger la lamelle,
on peut d'abord la fixer aux quatre coins et procder ensuite au
On
fine
peut ])rparer un lut analogue avec parties gales de parafou de colo( 60") et de baume de Canada (Apathy)
dure
les
mmes.
Ce mdium,
Sirop d'Apathy.
pour
les Hipiidcs
liquide.
On
non aqueux,
tels
rappliipn^ an })inceau.
dcrit p.
que
le
M3,
terpinol ou la paralfinc
LUTS ET VERNIS
Ce corps
Bitume de Jude.
tournelle. Une excellente formule
geance de M. Benoit-Bazille
449
que je dois
l'obli-
aa en
poids.
pinceau. Au moyen de la tournette, on fait une celune lame bien propre. Quand la cellule est sche, on la
remplit de liquide, on place l'objet et on recouvre d'une lamelle ronde.
On essuie l'excdent de liquide et on borde la tournette avec le mme
lut. Les prparations ainsi obtenues sont trs jolies, malheureusement
le procd est long et ne peut convenir au travailleur press.
On applique au
Maskenlack.
Ce vernis
se
trouve tout
fait
dans
le
com-
la
On
couleur du vernis.
bitume de Jude.
11
Il
est trs
l'applique avec
un pinceau qu'on
cellules,
comme
le
luts,
la
main ou
la tournette, avec
une pre-
on ne doit
(dilu avec de l'alcool). En regardant par transparence,
voir aucune fente dans la bordure, sinon appliquer une nouvelle
couche.
sur
le
la
rations extemporanes.
M. Langeron.
Prcis de Microscopic.
29
CHAPITRE XXIV
DPIGMENTATION
La (lpigmen talion
est
souvent ttonner,
je vais
immerge
l'objet
au
le proc<l
et Mestrezat)
suivant
-.
du sulfate de baryum insoluble et de l'acide chlorique qui reste en dissolution. Aprs 48 heures, dcanter en flacon l'meri et conserver
l'obscurit.
15 cm^ d'alcool
1.
NeapeU
II, p. S, J880.
DEPIGMENTATION
42**
10
et laisser
12
451
On
heures en contact.
Oprer
passe
ensuite par les alcools, puis on lave l'eau.
Les coupes doivent tre colles Teau distille et, au besoin,
collodionnes par la mthode de Regaud (p. 350).
3o Persulfate
d'ammonium.
Ce corps, qui
est
employ
Eau oxygne.
trs
Cent grammes de
Permanganate de potassium
On
par
le
permanganate de potassium
24 heures. On
et acide oxalique.
traite l'objet
1
p.
ou
les
coupes
000 pendant 2
lave grande eau et on dcolore par l'acide oxalique 1 p. 300. On lave ensuite l'eau. Herzog conseille de
diluer cinq fois ces solutions pour les coupes la paraffine.
2.
3.
Monitore zool.
1.
iial.,
VIII,
p. 57, 1897.
CHAPITRE XXV
LIQUIDES CONSERVATEURS
POUR
COLLECTIONS MACROSCOPIQUES
Les deux principaux liquides conservateurs sont alcool et le
formol. Le premier convient surtout pour les Arthropodes et pour
les animaux dont on doit faire Tlude morphologique, car, s'il
conserve gnralement mal la structure histologique, il permet de
rendre aux spcimens leur forme naturelle en les plongeant dans
Teau. Pour les collections, on prend au moins de l'alcool 70, ou
plus gnralenip.nt 90'-. Quand on y plonge des animaux frais, il
faut le renouveler au moins une fois, car son litre baisse beaucoup
et les pices
En
outre,
copiques.
il
donne de
Malheureusement,
les
ni utiliss
la
et la facilit
de son emploi,
le
formol doit-
il
tre
spciales.
la
dmons-
LIQUIDES CONSERVATEURS
453
Iration ncessite des prcautions particulires cause de la difficult de conserver les couleurs. Si le formol et Talcool, convena-
blement employs, peuvent donner une conservation morpholoet histologique suffisantes, ces liquides sont
gique
empcher
la
disparition des
couleurs;
or
il
est
impuissants
essentiel
que
celles-ci soient
magne
Mthode de Kaiserling'.
liquide suivant
de Kaiserling
celles
et
Fixer
les
pices dans le
Phosphate de potassium
Phosphate de sodium
Chlorure de sodium
Azotate de potassium
Formol du commerce
130 gr.
60
10
50
400 cm^
4 000
Eau
11 est bon
que la pice repose sur du coton et ne soit d'aucun
ct en contact avec le verre. 11 est essentiel qu'elle soit entire-
les pices
Eau
Actate de sodium
000 cm3.
225 gr.
100
Glycrine
frais
Crosote de htre
Azotate de potassium
2 gr.
10
200
800 cm3.
Glycrine
Eau
1908.
METHODES GENERALES
454
La dure du bain est d'au moins vingt-quatre heures. On conserve ensuite les organes dans de Thuile de vaseline ou de ptrole K
Les petites pices donMontage la glatine glycrine.
nent de trs jolies prparations lorsqu'elles sont incluses' dans la
On
-.
glatine glycrine
de Kaiser
(p.
la
la
gele glycrine,
Prparations transparentes.
Spalteholz arrive, en combinant l'emploi de liquides d'une rfringence particulire avec
celui des injections, obtenir des pices anatomiques transparentes, trs dmonstratives. Les liquides qui lui ont donn les
meilleurs rsultats sont Tlher mthylique de l'acide salicylique
et le benzoate de benzyle.
Durcissement des
piques.
Freclet
''
pour
objets
les
coupes
macrosco-
line
5).
Un
Pour
les
quand
il
est sec.
ciment
ou obturer
les
bouchons de
Cimenl Latasle.
pour
de verre
lige.
On
le
pour que
le
mlange ne s'enflamme
p. 75, 191v>.
4. Xlll'' Congr. inlcrn. de md., Paris, 1900.
5. Zool. Anzevjer, XXVIII, p. 406-407, 1904.
455
LIQUIDCS CONSEIIVATEUIIS
pas.
bon
Iiolte
tirage,
cause de
ciment
k^.
et
en
Gomme
arabique.
crites
seul
moyen de
pour
les
conserver propres
dement,
et
on y ajoutera 2
un
Colle
de sulfate d'alumine
gr.
trs
Encre pour
crire sur
le
verre.
Encre noire
une
partie de
silicate
Crayon pour
peut
aussi
crire
avec
un fragment de
feuille
On
d'aluminium,
la
silicate
de potassium, puis en
CHAPITRE XXVI
PRHENSION, CONTENTION,
ANESTHSIE
Le premier soin d'un bon exprimentateur doit tre de saisir et
de maintenir correctement les animaux en exprience, tant pour
les inoculer
Non
Chien.
cou.
S'il
solidement
iar la
S'il est
nud
peau du
coulant
on peut alors le
soumettre une demi-strangulation
museler et lui attacher les pattes. L'n bon nud coulant peut tre
fait avec un fouet de charretier, l'extrmit
duquel on attache,
et
la
le
place de la mche,
cet anneau.
connatre
la
Pour la contention, l'enrouler dans une pice de toile (p. 476). Pour
l'anesthsie, le projeter dans un grand bocal avec un tampon
457
Voir
Le
Oiseaux.
p.
586,
fig.
199.
rsolution.
Cobaye.
Le
saisir
par
la
On
'ocuia-
la
p."''
"^
Cet appa^^^^'^
^
construire
en
maintient
bois,
ouverte la bouchedel animal.
parioritice.on
tion.
11-
11-
'^'^'^-
et saisir la base
de
la
Souris grises
trs
dangereux
Rats
une
introduit
Le Hat
,j
et
Mors
Fig. 183.
peut
queue.
^
nuque avec
facile maintenir.
gris.
manipuler;
il
T^
gris est
faut avoir deux
Au
comme
les
Singes.
fig.
200
la
Rats
Voir
p.
manire de
622
la
On
et
on
Il
est
relire
les attacher.
un peu d'habitude. La
difficult est
Marmottes.
Le seul moyen de
faire mordre est de les prendre et de
saisir les
Marmottes sans se
les porter
la
par
la
queue.
On
MTHODES GNRALES
458
reil
de conteiiUoii ne convient
la
Marmotte, cause de
la
forme
CHAPITRE XXVII
un peu longues. Aussi j'ai pens qu'il serait bon, pour fixer les
de rsumer sommairement la succession des oprations
qu'on doit faire subir un organe, ou un objet monter.
Premier exemple.
Faire des coupes dans un organe.
ides,
L Fixation.
Instruments un rasoir, une plaque de lige; bocaux ou tubes fond plat.
Ractif
Picroformol de Bouin (p. 284).
:
1"
2"
IL Lavage dans
90 renouvel
l'alcool
trois fois
(p.
IV.
Imprgnation dans
le
294).
trois fois
(p.
305).
nels aux
les
passages dans
METHODES GENERALES
460
Dresser
YII.
(p.
le
333).
(p.
345).
et 2, alcool
l,
paraffine
d'alcool 90.
4.
Plonger dans
la cuvette rainures.
ment
])erdues.
100),
2.
Rincer Teau.
3.
5.
6.
7.
8.
9.
dans
l'alcool
461
chlorhydrique.
Virer au bleu noir par un sjour de cinq dix minutes dans l'eau.
Colorer une minute dans l'osine.
Laver l'eau.
Diffrencier dans l'alcool 70.
Passer dans l'alcool 90.
XV. Dshydrate?'
(p.
419).
1.
(p.
420
et
438).
dessous de
le
2.
3.
la
dans
d'abord
la
de
8.
9.
Deuxime exemple.
isol
Mouler dans
le
laclophnol un objet
ou dissoci.
2.
lancole.
4.
5. Laisser
les
de
la
prparation.
el
que
l'objet s'tale
au centre
MTHODES GNRALES
462
6.
Appuyer
trs
calcul, le liquide
lgrement. Si
ne dpasse pas
le
les
la
a t bien
lamelle et on peut
lu ter de suite.
7. Si le liquide dpasse les bords de la lamelle, aspirer Fexcs
avec des bandelettes de papier buvard
nettoyer avec le doigt
entour d'un chiffon imbib d'alcool, jusqu' ce qu'il n'y ait plus
aucune (race dehc[o[^hno\. viter de dranger la lamelle.
:
la lamelle plat; si on
a. Il faut laisser tomber
Remarques.
vers
l'applique de gauche droite, comme plus haut, l'objet est chass
la droite, surtout s'il y a trop de liquide,
b. S'il y a des bulles d'air (n 6), soulever lgrement la lamelle avec
une aiguille et la laisser retomber doucement; caler de l'autre ct
avec une aiguille pour empcher la lamelle de glisser. On arrive ainsi
CHAPITRE XXVIII
PRINCIPAUX INSUCCES
DES PRPARATIONS. - CAUSES
ET REMDES
Nous avons
survenir lors
rlj signal les accidents qui peuvent
confection des coupes (p. 337) et du collage sur les lames
(p. 344). Il nous reste tudier les insuccs ou les altrations qu'on
constate dans les prparations termines.
de
la
vibrations
du
rasoir ou d'une
mauvaise inclusion
(p.
338). Pas de
remde.
3.
natre
notamment lorsqu'on
La cause de ce dfaut
baume
enlever dlicatement
baume au moyen du
repasser par
5.
le
la
tolune et
le
baume.
comme
MTHODES GNRALES
464
la
dparaffiner,
en
soit
flamme. Pas de
remde.
Une
autre
cause est
la
dessiccation des
coupes. Nous en
nous avons
(p.
420
les
et 460), et
le
baume
par
le
et recolorer.
7. Coloration trop intense
par sjour trop prolong dans le
bain colorant; par diffrenciation insuffisante; par suite d'une trop
grande paisseur des coupes. Dmonter la prparation et revenir
:
ractifs.
Nous pouvons
les
ranger dans
(p. 398).
sublim, soit comme mordant. Ce corps se combine probablement aux substances albuminodes des tissus et fait plir ensuite les
colorations. Le meilleur remde consiste liminer l'iode par l'hyposulfite de sodium (p. 414). Heidenhain conseille l'emploi d'une solution
2,5 p. 100, qu'on tend de 9 parties d'eau, au moment de l'emploi.
c. Action du baume du Canada.
Toutes les rsines sont acides,
liminer
le
1.
M. Heidenhain, Ueber die Haltbarkeit mikroskopischer Praparate, insbesonderc ber die Nachbehandlung jodierter Gewebe mit Natriumthiosulfat.
Ztschr.
f.
wiss. Mikr.,
XXV,
p. 397-400, 1908.
46o
frottis
9.
qui supportent
la dessiccation.
Bulles d\dr.
l'oxydation
les
du baume
la
(p.
Ml). Pour
peut ajouter du
baume
la
dans
pri)aration
enlever ou soulever
10.
de
la
la
la
pour ramollir
tolune,
baume, puis
le
l'air.
et lame salies,
Des dpts de colorants, de
d'huile de cdre, etc., salissent quelquefois les deux faces
Lamelle
baume,
prparation
un
avec
le
dranger
et
dissolvant
la
coins avec
le lut
de Krihiig
(p.
447).
On voit souvent
Nuages de gouttelettes rsineuses.
en boites, un
conserves
sur
les
apparatre,
prparations longtemps
11.
nuage de
fines gouttelettes
recouvrant
la
lame
et la
lamelle.
Il
faut
enlever ce nuage avec un chiffon imbib de tolune, avant d'examiner la prparation. Ces gouttelettes apparaissent aussi dans les
prparations montes sec. dans
prparation
et la nettoyer.
l'air; alors
il
Certains animaux
faut
dmonter
la
et certains tissus
Ne pas oublier que la <lc'=siccatiou des objets peut amoner leur contraction
Nous rptons pour eux ce que nous avons dit pour les coupes jamais
dlinitive.
M, Langeron,
Prcis de Microscopie.
30
MTHODES GNRALES
466
baume
pour essayer de
traiter
(p.
l'objet
par
le
seul
moyen dont on
les
le
chloralphnol
ou
le
la
dispose
prparation et de
cbloralchlorophnol
baume.
un objet ne doit scher entre deux oprations, il faut toujours
dans un liquide. 11 n'y a d'exception que pour les frottis desschs
le
maintenir
(p. 625).
TROISIEME PARTIE
MTHODES SPCIALES
Dans
aux mdecins
et
aux
vulnrants.
Nous exposerons
les
nant
la
mthodes, pour Ttude dautres types d'intrt purement zoologique. Les seuls animaux dont nous ne parlerons pas en dtail
sont ceux qui appartiennent la faune marine (Spongiaires,
il est bien rare
Clentrs, Echinodermes)
que le mdecin ait
s'en occuper et il trouvera dans les ouvrages spciaux les indications qui lui seront ncessaires.
:
maux de
fait
pratique
et lui
un
intrt tout
les
techniques
diagnostic microscopique.
PREMIERE SECTION
PJ{OTOZOAJJiES
Pexamen
Dans
rle
lion
Quand
cousidrable.
il
s'agit
ne conviennent que pour trouver plus facilement les microoret pour rvler certains dtails de la strncture cylolo-
ganismes
L'examen
l'lat frais.
Protozoaires.
Ce
des
maladies
genre d'examen ne
diagnoslic
l'tat frais prsente aussi
ment,
mme
au
coloration des
lit
du malade.
Il
matriaux recueillis
Mais, pour simple que soit cette mthode, elle exige une parfaite
ducation de l'il
et
du microscope.
la
piques (p. 146), que ces images sont de deux sortes. Celles que
fournissent les prparations colores sont dues des phnomnes
d'absorplion et se forment selon les lois de l'optique gomtrique;
ces images sont faciles observer et ne peuvent donner lieu
aucune erreur, lorsque la coloration est correcte. Au contraire,
les
rflexion, de rfraction et de diffraction; leur production est soumise des lois beaucoup plus compliques. Les dtails ne sont
PROTOZOAIRES
469
ou moins lumineuses. L'interprtation en est d'autant plus dlicate que, dans certaines conditions, on peut voir apparatre des
cne d'clairage,
le
soit
du condensateur. Les
intensit et le
mme
stries relles
moyen de
les artifices
dont
la
la fois
dans
toute
les
prparations
incertitude se
L'clairage fond noir pourra rendre des services, notamment pour le diagnostic des maladies Trponmes. Par suite
de phnomnes de diffraction, ces organismes paraissent plus volumineux qu'ils ne sont rellement, ce qui, combin avec l'aspect
les Protozoaires.
Le
Journ. de
pltijsiol. et
de pathol. gnr., n
3. 1901.
470
MTHODES SPCIALES
Le rouge
iieulre
n'est
le
karyosome
inditrent.
Il
1.
mycki.
CHAPITRE PREMIER
AMIBES
I.
1.
facile
II est
Amibes aquatiques.
de se procurer des Amibes vulgaires, au printemps ou en t.
'
employs par eux pour s'en procurer consiste mettre, dans un grand
vase cylindrique en verre, 20 g. de paille hache et arroser avec un
litre d'eau ordinaire bouillie. Ds qu'il se produit un voile la surface,
on en prlve une portion pour l'examiner et au besoin pour Tensemencer sur glose spciale. On traite de mme la terre, le tan, etc.
Amibes
parasites.
en examinant
On
le tartre et la
froid,
notamment de
d.
2.
MKTHODES
472
SPliCIALES
Dans
trouve
la
soil
partie
Amba
Chez
tivable).
Amibes pathognes.
La recherche
selles
avec
le
fil
et
mouvements,
leurs
vacuoles
il
ils
Amibes bien
vase
et
ou bassin pralablement
Il
n'est
pas
ncessaire
la
-;
1.
Voir
2.
Wenyon, Arch.
473
AMIBF.S
ront faciliter
selles.
Dans
1.
2.
3.
il
philes.
4.
5.
Dans
i. II
2.
3.
la dysenterie bactrienne
n'y a pas d'Amibes ou seulement des
:
Amibes du type
coli;
Nombreuses hmaties;
Leucocytes excessivement nombreux, mais peu ou pas d'osino-
philes:
4. Cellules pithlia'cs
desquames
et
mme lambeaux
de muqueuse
ncrose;
5.
Un nombre
Dans
variable de Bactries.
diag-nostic.
II.
FIXATION ET COLORATION
en fixant des
toxvline ferrique ou le
Fixation.
On
Romanovsky.
sang
628).
faut
Il
traner en la laissant
petites
Avant que
dans
se hte de le plonger
Je
et
recommande
de Bouin
(p.
le frottis n'ait
le
eu
le
temps de scher on
fixateur.
MTHODES SPCIALES
47 4
ncessitent que des manipulations trs simples. Le sublim alcoolique de Scliaudinn, trs vant par Tcole allemande, ne donne
von Wasielewski
un lavage
minutes par
le sublim
chaud (-1-70), puis vingt-cinq minutes froid; il lave ensuite
une heure Talcool iod et conserve dans Talcool 70. Au contraire, avec les mlanges picriques, si on ne veut pas colorer de
suite le matriel fix, il suffit de laver les frottis une ou deux
reprises Talcool 70 et de les conserver dans ce mme liquide,
iod. Ainsi,
fixe cinq
sans se proccuper de la lgre coloration jaune qu'il peut conOn peut mettre ainsi en rserve de grandes quantits de
server.
lames charges d'Amibes. L'essentiel est que le matriel soit toujours dans un liquide et ne sche jamais autrement les Amibes
seraient dformes et deviendraient mconnaissables.
:
Coloration.
retenir
Pour
le
Thmatine-osine,
hain, le Ronianovsky.
1 Hmaline-osine et
mthodes sont
rhmatoxyline au
hmatoxyline au
fer.
fer
de Heiden-
Russissent
jusqu' ce que
le
protoplasma
soit
parfaitement clair
Russit
et
que
sa charpente de chromatine.
le
Les
bistre.
technique pour
les frottis
humides
p.
Employer de prfrence
413.
colore au
en dessous,
coloration,
est
il
mis face
lave l'eau de
1.
n 3, 1911.
AMIBES
475
leur coloration bleu fonc sur les lissus ncross et les dbris.
Il
ne
uniquement
protoplasme en rose ple; le bleu de mthylne colore bien le caryosome; de mme pour le violet dahlia, mais celui-ci tue l'Amibe.
On
dans
le fixateur
colore
comme prcdemment
-.
Krnig
(p. 447).
IIL
EXPRIMENTATION
fait
d'aprs les
On peut
de Mallory et Wright
1.
2.
mme
p.
que pour
il4), on fixera de
les frottis) la
mthode
L Ann.
Inst. Pasteur,
XVI,
p. 480, 1902.
2. Voir aussi la mthode de Hart {Journ. of trop, med., VI, p. 380, 1905), qui
colore directement les matires dans du glychmalun dilu, filtre sur gaze, vire
l'eau et monte la glycrine.
METHODES SPECIALES
476
4.
Laver l'eau
ou
p.
100
cette
et a le
la
trouve dans les selles est de l'inoculer au jeune Chat. lien est
d'ailleurs de mme pour les Amibes des abcs du poumon, du foie
bouche ne
russit
d'Amibes.
11
que lorsque
les
antrieur
il
est trs
mucus
technique dpend de
la
la
sonde;
si
on peut
retire
la
doucement
quelque temps
la
la tte
sonde
et
on
maintient
en bas, puis on
le
l'animal
]endanl
remet en cage.
et
du
AMIBES
CULTURE
IV.
j)oint
477
a fait Tobjet
de dpart
les
de travaux considrables,
et de
recberches de Mouton
et
les
On
conseille
un
Bacille
'<
faut environ
Ponr obtenir de
peut employer
Wasielewski
Hirschfeld.
1.
En
goutte pendante,
des Amibes.
la division
et
cultures.
la
de
cultures, on
Deetjen, recommand
par von
145-150, 1911.
METHODES SPCIALES
478
On
visihles
sur
Au
il
la
les
et
conserve
les
avec avantage
Bouin
utiliser aussi
le
et
le
on laisse agir le
action ds qu'au microscope les noyaux sont devenus bien apparents. On lave deux heures l'alcool iod, on rince l'alcool et
seulement alors qu'on peut dtacher la lamelle de la glose.
moment, on peut laver la prparation sous un filet d'eau,
c'est
ce
qui entrane
On
et
le
et
Bomanovsky
on diffrencie
prparations
le
Brumpt emploie
mlanger sur
de
tit
mucus
la
nasal.
de salive
lame
On
suffit
le
fait
pour
faire
adhrer
les
Amibes.
CHAPITRE
II
FLAGELLES
II
dis-
Parmi
trois
groupes
du tube digestif
les Flagells
I.
fixs
Le Lamblia
les djections
on dilue sur
la
lame
les
on tale
et
on
fixe
humide.
MTHODES SPCIALES
480
se conservent assez
des prparations bien lutes. En chambre humide, leurs mouvements diminuent peu peu d'intensit, ce qui permet d'viter
l'emploi des narcotiques. La coloration vitale russit bien et
permet
Pour
mme
d'tudier
la
trs dilu.
II.
Ce
FLAGELLS SANGUICOLES
Grenouille
la
le
7'.
rolatorium; chez
le
Surmulot
le
T. Letrisi;
chez rAnguille
le
certain
pour
les
la
paroi.
La ponction du cur
est la
1. L'entretien de ces virus est trs coteux, car il ncessite un matriel considrable et rclame beaucoup de temps. Je dois l'obligeance de ]NL le Professeur
Mesnil, de l'Institut Pasteur de Paris, les virus dont je me sers tous les ans,
pour les travaux pratiques de l'Institut de mdecine coloniale; je tiens lui en
exprimer ici toute ma reconnaissance.
FLAGELLS
481
Trypanosomes
Examen
Ftat frais.
et
Trypanoplasmes
Vexamen
de ces organismes
La goutte ne
lamelle.
',
car.
si la
couche
de sang
est
On examine
autres.
et tre
avec un
500 diamtres.
On
ments
reconnat immdiatement les Trypanosomes leurs mouveet aux dplacements qu'ils impriment aux hmaties. Pour
rations, afln
temps
les
un peu prolonges,
d'empcher
la
dessiccation.
il
On
Les colorations
vitales
V examen
l'tat
aprs coloration
humide.
Frottis secs.
Les
frottis
ou
fixs
mthode
Romanovsky. Je
panoplique ou
le
conseille particulirement le
Giemsa rapide
et le
panchrome de Pappenheim.
et
1.
p. 6-23,
frais.
2. Minchin, Observations on the Flagelltes parasitic in tlie Idood of freshwater
Fishes. Proc. Zool. Soc. London, 1909.
3. Minchin, The structure of Trypanosotna Leivisi in relation 1o microscopical
technique. Quart. Journ. of micr. Set., LUI, p. ^55-800, 1909.
M. Langero.v.
Prcis de Microscopie.
31
METHODES SPECIALES
482
la
Frottis humides.
les
frottis
humides.
2.
3.
On
On
montant de
10 en 10 p. 100
le
Babs
1.
2.
3.
(p. 393).
et vieilli l'tuve
Eau
1.
III,
2.
100
distille
gr-
I,
j).
410, 1907-1908.
FLAGELLES
Laver Teau
4.
483
le
par
tannin-orange
Xylol et baume.
En sortant de l'alcool iod, redescendre la
6) Hmatoxyline an fer.
srie des alcools pour arriver l'eau
1. Bain d'alun de fer 3,5 p. 100 pendant une heure;
8.
2.
Eau
1/2
heure
distille
100
o
Hmatoxyline
froid
Mthode de Minchin.
Minchio
la
travaux cits plus haut (p. 481, notes 2 et 3). Je ne saurais trop
engager ceux qui veulent se livrer Ttude ap})rofondie de ces
fixant
\.
Rosenbusch. Trypanosomen
296, 1909.
2. Je crois
tStudien.
Arch.
f.
Prolisienkunde,
XV,
p. 263-
METHODES SPECIALES
484
vapeurs
il
et les fixer
285). Dans
(p.
humides
ce cas,
il
est
frottis
282),
liquide de
(p.
le
et
le
il
sublim
Mann
en rsulte tou-
(p.
actique
283), et le
(p.
Coloration.
cette mthode est
1.
285).
Roman ovsky.
dmontre
mieux
les caractres gnraux des Trypanosomes, surtout aprs la double fixation osmioalcoolique, suivie de la dessiccation. Mais, comme nous venons de
celle qui
le
il lui
reproche d'exagrer et de voiler les dtails de la
structure nuclaire. Notons que les frottis ainsi fixs se colorent
le dire,
la
mthode de
fixation;
Unna
On
(Grii-
sche ou
Pour Minchin,
Jo crois qu'on pourrait aussi employer avec avantage le Bouin et le Duboscqen efict, Mincliin a remarqu que le liquide de Mann, qui renferme de
Tacido picrique et du formol, fixe mieux que le sublim seul, et met notamment
mieux en vidence les dtails de la structure nuclaire.
1.
Brasil
FLAGELLES
485
longer
a.
les
Le
sjours clans le
frottis,
mordant
pralablement
et
fix,
dans
est
colorant.
le
une heure dans l'alcool absolu, puis pass par une srie d'alcools,
en descendant de 10 en 10 degrs jusqu' l'eau distille.
b. Mordaneage dans Falun de fer 3,5 p. 100 pendant une
nuit (voir p. 377).
c.
Lavage rapide
Teau
distille.
d. Coloration dans
Thmatoxyline
Hmatoxyline
Alcool 'OO
10
Eau
90
dist
flotter
gr.
cm3
y tre immerges.
Diffrenciation, qui est Toprationla plus importante. Aprs
la lamelle dans la solution
lavage Teau distille, iMinchin plonge
e.
alors
il
faut
la diffrenciation est
pousse
frottis
n'ait
glycrine.
METHODES SPECIALES
486
cette
1
partie
mn;
solution
et
une
frijttis face en dessous, pour viter les prcipits. Aprs coloon diirencie par l'ther ^lycriquo de (Jnna (p. 427) 2 p. 100
dans Teau, pendant 1/2 ou 1 minute, puis on dshydrate par l'alcool
absolu et on monte au baume. Les prparations doivent tre fixes par
un liquide renfermant du sublim.
Cette mthode donne des colorations trs dlicates, mais qui manquent de contrastes. Elle ne convient pas pour les prparations de
dmonstration, mais, d'aprs Mincliin, elle rvle la structure du noyau,
aussi bien que l'hmatoxyline ferrique. Le noyau, le blpharoplaste et
les granules chromatodes sont rouges, le flagelle et le priplaste sont
verts, le protoplasme parat verdtre.
mettre les
ration,
Exprim en ta tion
1.
Inoculation.
et inoculer ce
consiste prlever
Trypanoplasmes
et
des
Mammifres,
il
suffit
de sectionner l'extrmit de
queue d'une
la
accidents,
le
(p.
les
494)
l'Homme.
Lorsque l'animal
est trs
peu infest
On
el
faut prlever
le recueille alors dans
il
une solution
de citrate de sodium 1
lation.
1.
La
On
Un
3.
simplement
bouillie
dans un
petit
4.
le tout strilis
Au
coagu-
2.
1.
la
lieu de
ou
ou 2 centimtres cubes
et
son aiguille,
bouilli.
FLAGELLES
487
snivanl
et
agiter continuellement
doucement
le cristallisoir
ponr mlanger
immdiatement le sang avec le liquide anticoagulant. Si Tanimal
est indocile on si le sang s'coule difficilement, on fera bien de
au fur et mesure qu'il sourd, au
puiser le sang dans la plaie,
2 ou 3 cm'' suivant
sang
et
la taille et
seringue,
s'il
Singe; dans
d'un Rat.
s'agit
Flat de l'animal.
:
sous
la
peau du
20 gouttes
Le mlange de
avec
la
comme
le
flanc,
taille
d'une Souris ou
Lorsqu'on veut conserver certains virus qui tuent trs vite la Souris
Rat (sommeil, nagana, surra, etc.), il peut tre avantageux, pour
viter une surveillance constante et de nombreux passages, d'employer
le Cobaye ou le Lapin. On obtient, chez ces animaux, une maladie plus
lente, pouvant durer plusieurs semaines. Il y a peu ou point de Trvpanosomes dans le sang priphrique, mais il suffit d'inoculer une Souris
avec 1 cm3. de sang, pour les faire apparatre chez celte dernire. Le
Cobaye et le Lapin peuvent donc servir, dans certains cas, conserver
les virus Trypanosomes.
Dans le cas o un animal inocul vient mourir inopinment, on peut
tenter de sauver le virus en puisant du sang dans le cur, aprs ouverture du thorax, et en l'inoculant un animal sensible. Ce procd est
trs bon aussi lorsqu'on veut saigner compltement un animal. La ponction du cur proprement dite est dcrite p. 498.
et le
2.
volution.
Les
tale sont
on
raliser
quelles
peut
les rsultats
ordinaire
METHODES SPCIALES
488
pour
iiii
Uavailleur
({iii
veut tudier
a.
Trijpanosomes ou Trypanoplanmes
Evolution des
et
des
lires
comme nous
mode
le
d'inoculation.
Nous conseillons au dbutant d'tudier l'volution du Try|ianosome de V kngrnWe {Trui^anosoma granulosum Lav. et Mesn.)
chez Hemidepsis narginataK
est facilo de se procurer partout, au printemps, des Anguilles adultes
des alevins d'Anguilles; on en trouve chez tous les marchands de
Poissons, en Europe. La plupart des Anguilles adultes hbergent ce
Trypanosome; il est facile de s'en assurer en examinant un peu de sang,
prlev soit au niveau des branchies, soit par piiire de la queue. Les
alevins sont presque srement indemnes. Kn etl'et ils sont capturs dans
les estuaires au moment de la remonte; or les Sangsues capables de les
infester vivent exclusivement en eau douce et ne s'avancent jamais dans
les eaux demi-sales o on capture les alevins. D'ailleurs, on peut contrler ces derniers, en les faisant piquer par des embryons d' Hemidepsis,
comme nous le verrons plus loin.
Il
et
Hemidepsis marginata
ces expriences
c'est
jusqu'au
moment de
1. Tous les dtails de cette volution sont dus aux recherches de Brumpt. Les
renseignements que je donne proviennent en partie de ses publications; je dois
le reste des communications verbales, de sorte que beaucoup de dtails sont
indits, .l'ai d'ailleurs t tmoin do ces l^elles expriences.
489
FLAGELLS
client alors au ventre de leur
et
l'animal au
:
exj)riences,
on
il
faut avoir
un levage de
au printemps, des
adultes qu'on nourrit sur un Poisson quelconque et qui ne tardent
pas pondre. Les embryons sont toujours indemnes de parasites,
cela,
se procure,
donc
dans
la
est fixe
une
ficelle,
termine
un
petit
bton
ne faut jamais
c'est le seul
les
moyen de ne
prendre avec
les doigts,
pince.
Lorsque
les
la
1. Lo mme artifice peut tre employ avec toutes espces de Poissons. Pour
exprimenter sur les Tortues, on les attache une pierre ou un poids qui les
maintient au fond de l'eau, tant que dure le repas des Sangsues.
490
MTHODES
Sl'CIALIS
infectieuse ou non.
Pour
l'estomac et de l'intestin,
pendant
sa digestion.
est ncessaire
il
On coupe
soit la partie
postrieure;
on en
alors,
fait
soit
la
sourdre
flagelles
de
de sacrifier l'animal
partie antrieure,
le
sang en
fixe et colore
la
com-
par
les
piques par les Sangsues infectieuses, les petites Anguilles prsentent des Trypanosomes au bout de 4 ou 5 jours.
I^nrsqu'on veut tudier l'volulion des Tivpanoplasmes, on peut
s'adresser soit Ileinlclepsis manjiiiata, soit une Ictittiyobdellide, Piscicola geometra. Je ne conseillerai
elle est trs difficile trouver et
captivit.
FLAGELLS
491
b.
Glossines obtenues par levage; les faire gorger sur des aniuiaux
infests et tenter de contaminer des animaux sains et non immu-
tudier
niss.
contenu de
le
la
trompe
et
du tube
digestif des
le
Trypanosomes sont
Ctenocephalus serraliceps
111.
de NuUer- sur
et celles
495)
(p.
(p. 596).
DIAGNOSTIC DES
T R Y PA N OS
M OS ES
HUMAINES
Maladie du sommeil.
1.
Lorsque l'ensemble des symptmes cliniques et des commmopermet de souponner la maladie du sommeil, le diagnostic
ralifs
souvent fort
est
difficile,
Examen du sang
1.
prlve
cins,
priphrique, d'abord
Vtat frais.
le
On
sang au doigt ou Toreille; s'il y a des rythmes ciron prlvera de prfrence ce niveau. Examiner entre
le
lame
et lamelle,
pour
viter la dessiccation. Parcourir la prparation mthodiqueau moyen del platine k chariot. Multiplier les prparations.
ment
enlutant au besoin
la
vaseline ou la paraffine
\. Voir ce sujet
Roubaud, Recherches sur la biologie et les adaptations de
la Glossina palpalis; les Trypanosomes pathognes et la Glossina palpalis. Rapta
mission
de
d'tudes de la maladie du sommeil au Congo franais, 1906-} 908,
port
:
in-8
de 121
dies considres
comme
panosomides chez les Insectes. Bull. Soc. patliol. exot., IV, p. 66-2, 1911.
2. NUer, Die Uebertragungsweise der
Rattentrypanosomen durch Flohe.
krchiv
f.
Protistenkunde.
XXV,
p. 3SG-4-2-1.
l'.U-?.
METHODES SPECIALES
492
ce
Si
moyen
faire
clioue,
moins. Fixer
douzaine au
iiii
bon nombre de
une
frottis^
au
et colorer
Romanovsky (Giemsa
ou panchrome). Quelquefois on n'aperoit un Trypanosome
rapide
Lorsque l'examen
panosomes,
il
morphologique du
On
l'tat frais a
dmontr
peut employer
prsence de Try-
la
pour
faire l'tude
parasite.
la
mthode des frottis pais de Ross. Etaler grossire(fig. 244). Scher l'air. Dissoudre
Acide actique
Formol
Fixera
2 p.
100
p.
100
--
dit p. 628.
On a signal Vaiito-oggluLinaiion des hmaties
comme
comme
tant
il
est
un signe de
piles
de monnaie.
et
2.
1.
Centrifugation.
citrate
de sodium 1 p. 100.
en tournant
manivelle
la
d'arbre pour
le
la vitesse
de 65 tours de
(p.
500 tours
647).
3.
Ponction ganglionnaire.
Ponctionner
inguinaux.
Voici, d'aprs Wiirtz,
tion,
comment on
184)
FLAGELLS
"
bien fixer
le
faire le vide
2*^
493
du rservoir avec
le corps de la seringue
dilacrer lgreen
tous
sens
en
on doit voir
dplaant
l'aiguille
ganglion
pntrer dans le rservoir un peu de suc ganglionnaire.
tioo
ment
'S'^
le
retirer Faiguille,
Fig. 184.
parties de la seringue
et
chasser
le
Ponction lombaire.
retire
5.
fois
Inoculation exprimentale.
il
la
ont chou,
10
rachidien, suivant
une seule
On
Lorsque tous
ces
animaux
moyens
sensibles.
Le
expriences d'infestalion par les Glossines. Il est facile de se procurer cette espce en Europe, soit chez les marchands d'animaux,
les jardins zoologiques d'Anvers et de Hambourg. Ces
sont
Singes
gnralement trs doux et faciles manipuler. A leur
dfaut, on pourra prendre des Macaques, de prfrence le Macacus
soit
dans
assez doux; le
METHODES SPCIALES
494
Il faut liminer
compltement le Lapin et le
Cobaye qui, bien que contractant une maladie mortelle, ne prsentent que peu ou point de Trypanosomes dans le sang priphrique.
La
d'argent
p. 100.
On
gangrne
Tous
les
ment
pour
la
rare dans
le
maladie du sommeil, le parasite est gnralesang prii)hri(]ue ou bien son apjiarition y est
FLAGELLS
495
et
Punaises s'infectent
IV.
frotlis
les
flagelles caractristiques.
1 Bouton d'Orient.
la
de
le
bord des
non avec le
sang, mais avec des lments du tissu enflamm. Pour les lsions
non ulcres, ponctionner la seringue, avec une aiguille
d'acier fine et neuve. Aspirer un peu de pulpe sanglante et taler
sur lames. C'est ces lsions non ouvertes qu'on devra s'adresser
ulcrations ou le fond, de manire faire des frottis,
1.
1909.
-2.
AIrm.
n,i'l. .s-oc.
Inst.
Oswaldo Cruz.
Il,
paUiul. n.roL. V, p.
p. ^O-SIO, 1910.
^2->--2G
et 360-364, 1912.
I,
p.
139,
MTHODES SPECIALES
496
les
'
en
fait
des
frottis.
ponction de
D'aprs
la rate.
Ponction de
la
la
la rate.
on doit pratiquer
Ini, ce
choisir l'aiguille.
trs
peu de
tissu
hmorragies et
cours de ponctions de
la
Avec une
aiguille fine,
au contraire,
on obtient immdiatement un petit cylindre de tissu. Des aspirations rptes amnent en apparence une ponction blanche, mais,
en ralit, on a dans la cavit de l'aiguille assez de pulpe splnique
pour faire 3 ou 4 frottis ou pour ensemencer quelques tubes.
Donc proscrire les grosses aiguilles en platine iridi, qui dchirent les tissus. viter aussi les aiguilles usages et rouilles, qui
piquent mal. Ne prendre que des aiguilles en acier, fines et
neuves. Striliser
la
seringue
et avoir soin
de
la
desscher com-
Prendre une aiguille fine, mais plus longue et plus rsistante que
pour l'Homme. Immobiliser parfaitement l'animal. Piquer dans le
dixime espace intercostal droit, un ou deux travers de doigt des
apophyses pineuses. Pour trouver facilement cet espace on compte
partir du bas; c'est donc alors le troisime, mais il faut bien
savoir
1.
2.
3.
4.
le
Chien.
Pen-
497
FLAGELLS
daiit
une couche de
pas trop de parties molles traverser; appliquer
teinture d'iode et trpaner Tos avec un petit foret m par un porteou
foret
drille (on
Le
1ers).
s'arrter ds
En
foret a t bouilli
que
retirant le foret,
deux
la pointe est
faire
un ou
frottis.
V.
CULTURE DES
T R Y PA N
OSO M ES
ET DES LEISHMANIA
La culture des Trypanosomes
se fait
en ensemenant
le
sang
ou
glose au sang.
Ce milieu,
trs
improprement
nomm
milieu de
fait
pratique.
On
ni alcaliniser
Eau
prpare
le
900 gr.
ordinaire
Glose
14
Sel marin
On
CXLVI,
p. 843, 1908.
XXII,
p. 397, 1909.
2.
Manceaux, Sur
la
M. L.\NGERON.
Prcis de Microscopie.
32
MTHODES SPCIALES
498
cultures.
suffit d'ajouter
la
culture desTrypanosomes, il
de son volume de sang de
tiers
le
pro-
Pour ponctionner le ventricule droit, on opre de la faon suil'index gauche est appuy sur Tangle form par la septime
cte gauche avec Fappendice xyphode. On remonte en comptant
vante
4 espaces intercostaux.
qu'on pique 3
le
myocarde.
FLAGELLES
une ponction blanche.
manire que la pointe seule
fait
faut alors
11
soit
dans
la
499
retirer
un peu
l'aiguille,
de
on pique de nouveau.
Ainsi pralique, la ponclion du
l'animal, condition qu'on ne lui
mme
animal peut
(Hre
ponctionn
plusieurs
fois,
avec des
intervalles.
On
retire Taiguille
glose liqufie.
Un
garnit de sang
un second aide
la solidification.
Des tubes bien russis doivent prsenter une glose rouge sang,
A la base de la couche de gele, il doit y avoir
bien transparente.
mlanger
On
le
sang
les
Ensemencement.
On ensemence
les
Trypanosomes dans
o cette dernire ne
abondante, on ajouterait un peu de solution physiologique strilise. Ce milieu convient aussi bien aux Trypanosomes des Pois-
METHODES SPECIALES
bOO
sons qu' ceux des Maumiifres. Hrunipl a reconnu que les premiers donnent de plus belles cultures dans ces conditions que sur
des milieux au sang de Poisson (Raie, Chien de mer).
Les meilleurs
centrifugeant
frottis sont
le liquide
nouveau.
On
on
tale le culot.
rypanosomes, ainsi que les Leishmania sur un milieu prpar en ajoutant simplement,
un volume de glose nutritive (ou mieux de glose
sale de Nicolle), un ou deux volumes de sang dficultiver certains
brin de
Buf ou
Le mlange
Fig. 185.
Pr
e d
est effectu
du double
Aprs soliditication, striliser, soit par plusieurs chaufMauceaux fagcs 75-80 OU 100'\ pendant une heure; soit
pour con- l'autoclavc
minutes. Les sub120, pendant
quinze
^
^
,
server les
tubes
de
milieu Nicolle
Original,
slauccs
dtruites en
.
Milieu
mama
et
organismes voisins;
dissoute dans
un milieu
il
fluide et
est
ne
hmaties.
1.
2.
of Leishmania
and
med. journ.,
I,
p. 1119, 1912.
growth
Il
FLAGELLS
aOl
comme
comment il opre
de sang par ponction veineuse aseptique;
2. Dfibriner eu agitant avec des billes de verre;
Prlvera
3.
strilise
cm'^
10 volumes d'eau
distille
tout
On les recherche
Trypanosomes normaux des Bovids.
le
de
^
le
Delano
Prlever
sang aseptiquement la
par
procd
jugulaire, dlibriner, ensemencer 2 heures aprs dans du bouillon
ordinaire (3 cm^ de sang pour 10 cm'^ de bouillon). On peut repiquer sur milieu Nicolle.
1. Mai'iel Roberison,
Transmission of Flagelltes living in the blood of certain freshwater Fishes. Phii. Trans. Ro'j. Soc. Londoii, CCII, p. 45, 1911.
2.
Communication verbale.
3.
2.
1011.
CHAPITRE
III
SPIROCHTES
ET ORGANISMES SPIRALES
Nous runissons
aux Protozoaires
ces organismes
(section des
lieu de
Flagells) pour simplifier notre expos. Ce n'est pas ici le
discuter leurs affinits; mais, comme les mmes mthodes tech-
men
l'tat frais
noir
208).
(p.
sera
pour
les
grandement
volume
et
du peu
d'affinit
facilit
procds dj connus
et
prouvs.
o03
j'indiquerai,
le
par
certains.
ces groupes, nous tablirons des sections suivant la nature chimique du colorant. Ces mthodes conviennent indistinctement
le
et
Treponema pallidum.
possible
absolus, l'acide
les
que
divers
le
fixateurs
I.
MTHODES POUR
LA
COLORATION
DES FROTTIS
1.
Mthode de Romanovsky.
0.
XXVI.
p.
l-.'3-l-28,
l.i-2.
504
MTHODES SPCIALES
facilitent
beaucoup
des Spirochies et
frottis
immersion dans
'
jiar
l'alcool absolu
la
recherche
Fixer
le
pendant 10 minutes
(p. 630).
Colorer par
(1 goutte
le
1
pour
renouveler
coloration
de
Procds rapides.
Je mentionne simplement l'ancien
procd chaud de Giemsa -, qui a cd le pas son nouveau
b.
procd
Procds
de
Pappenheim.
La
mthode
pnnoptique
donnent
Romanovsky
2.
(p. 390i.
Cette mthode, qui consiste employer des solutions concende bleu de mthylne, de divers violets, de fuchsine
tres
1. Pour la recherche des Trponmes, le frottis sera fait avec les prcautions
habituelles (p. 513). On s'efforcera d'obtenir, la priphrie du chancre, de la
srosit aussi peu mlange de sang que possible,
2. Giemsa, Beitrag zur Filrbung der Spirochato pellida (Schaudinn) in Ausstrichpraparaton. Bisch. mnd. AVoch.. n" 17. l'.'OT.
oOo
basique, donne
est 1res
nique
mais
ils
ne ressorlent ni sur
les autres
lments, dont
la
le
fond de
la
prparation ni parmi
comme tona-
intensit.
Il
trs
existe
un
trs
et
par Ehrlich
et
Lenartowicz
-.
A.
Coloration par les bleus basiques.
Sabrazs colore avec sa
solution de bleu de mtiiyine 1 p. oOU (p. 625). Les Trponmes restent
incolores sur fond bleu.
Gunter emploie
Eau
Fuchsine 2,5 p. 100 dans
Acide phniqu
l'alcool
absolu
1.
2.
3.
1.
5.
le violet
phniqu.
Joiirn.
r. n. Soc. do bioloijie,
LVIll.
100 cm3
100
50 gr.
40
Tannin
puis colorent 10 minutes dans
....
p. 1041, 1905.
MTHODES SPCIALES
506
3.
p.
100.
1
Il
Imprgnation par
existe de
nombreuses
nitilhodcs
du procd classique
de Van Ermengen pour la coloration des cils des Bactries.
Procd de van Ermengen.
1. Fixer le frottis pendant
Spirochtes sur les frottis
toules drivent
L
2.
une minute
:i C.
R.
.Soc.
20,
LIIL
o()
dans
lUO
p.
goutte.
Eau
Sans
Eau
10
350
distille
Sans
r.
200 cm3.
distille
Acide gallique
Acide tannique
Actate de sodium fondu
5.
16
4.
507
8 cm"^
cni'"^.
noire.
6. Laver,
Procd de Yamamoto ^
suit,
Yamamoto
a modifi
ensuite
Texamen des
Il
comme
il
Ta appliqu
Protozoaires.
1.
Etaler
2.
Imprgner dans
d'argent 5 p.
nitrate
le
100 pendant
Acide pyrogallique
Acide tannique.
Eau
Ce bain
2 gr.
2
100
distille
doit, autant
que possible,
cm^
quatre heures.
4.
Essuyer dlicatement
le
prcipit
noir
avec un buvard
tre excellent
a-t-il
la
fixation la
flamme
et
cipil.
1.
Centralblatt
f.
Ba/ct., Orifj.,
XLVII,
p. 570, 190S et
LUI.
p. 38, 1910.
le jir-
METHODES SPECIALES
508
Procd de Balfour
et
Buchanan K
Ce
2.
Fixer
Laver
froid
Teau
distille.
tion argenti([ue.
Vaseliner
le
37 par
Acide pyrogallique
Acide taniquc
Eau
6.
7.
du
2 gr.
1
100 cm-'.
distille
l'eau courante.
37,
liquide frais.
8.
La russite de
la
prparation dpeml de
la
1.
2 gr.
100 cm^.
Largine
Eau
3.
distille
Rduire
5 p. 100.
'2.
3.
C. TL Soc.
Iiiol.,
LXV\
p. 1003, 191-2.
p. 438, 1908.
l'acide
pyrogallique
SPIROCHETES ET ORGANISMES
Procd de Zt'itnow^.
SI'H'.ALKS
509
consisle
II.
la
ces mthodes, la
mme marche
Mthode de Romanovsky.
En
d'organes,
se
elle
d'imprgnation
en verre jaune
et
et,
Parmi
les
1.
2.
beaux
rsultats.
510
MTHODES SPCIALES
Mthode de Levaditi
et Manoulian.
Celte mlhode, qui
une modification du procd })rimitif de Levaditi, est une des
plus employes en France. Ces deux procds drivent d'ailleurs
de celui de Cajal (p. 433 et 661), dout ils ne sonl qu'une modifica-
est
adapte
Fixation.
tion,
la
les tissus.
trs
minces, ayant 1
2 mm. d'paisseur, et fixer vingt-quatre heures dans du formol
10 p. 100. Durcir dans Talcool 95 pendant vingt-quatre heures.
fermant
l'meri, ren-
10 cm'.
90
Pyridine pure
bon de suspendre
les
fils.
Rduction.
tion suivanie
Laver
frachement prpare
Pyridine pure
Actone
Acide pyrogallique en solution aqueuse 4 p. 100.
15 cm^.
10
90
Inclure
faire
et
la paraffine
ou au bleu de toluidine
Tther glycrique de Unna
20 cm^ d'eau
On
peut
dist.)
(p.
'.
La
507).
Il
fixation se fait
d'habitude.
p.
Mthode de Yamamoto.
les
comme
couper
Minassian
ment comme
il
[Giortt. ilal. d.
suit
mal. ven.
e.
(c'est
d. pelle, I,
le
grand avantage),
1910)
l'' Fixer et
imprgner en vingt-quatre heures o^ dans nitrate d'argent 1.5,
formol 5, eau 50;
2 Rduire en vingt-quatre licures froid dans
acide pyroformol
10, eau 100. Renouveler quatre ou cinq fois ce liquide;
galliquo 3,5,
3 Dshydrater et inclure.
en
flacons
Oprer
jaunes.
511
(p.
507), puis
fait la
paraf-
ou de prfrence au coUodion ^
Mthode de Golgi - pour la coloration de l'appareil rticulaire interne, applicable la recherche des organismes spirales
dans les tissus. Le grand avantage de cette mthode est de colorer
fine
en noir
les
ou mieux
1.
taille
Formol 25
p.
le
mlange suivant
100
Alcool 90
Acide arsnieux^ en
2.
la
soi.
aq. sat
ca.
le nitrate
d'argent
20 gr.
5 gr.
50 cm^.
1000
Hydroquinone
Sulfite de sodium
Formol
Eau
4.
dparaffiner
5.
les
Virer par
coupes
la
paraffine,
et
couper
^.
le virage
en cristaux.
4. D'aprs une communication verbale que je dois l'obligeance du D"" Aldo
Perroncito, de Pavie, Veratti fixe et imprgne soit par la mthode de Golgi
pour l'appareil rticulairc interne, soit par la mthode de Cajal pour les neurotibrilles (p. 433) et continue comme il va tre dit.
512
iMTIlODES SPCIALES
Snirocyanure d'nmmnniiim
liyposuUile de sudium
3 gr.
3
Eau
Chlorure d'or brun
6.
100 cm'.
1
p.
lOl)
quelques goutles.
prcaution, dans
trois
minutes)
et
avec
Permanganate de potassium
Acide sulfurique pur
gr.
1
Eau
000
50
cm^.
Au
6.
7.
Cette
m. PROCDS SPCIAUX
1.
Ces
Duboscq-Brasil ou le
sublim de Schaudinn, mais ce dernier, d'aprs Schellack, rend
souvent les organismes granuleux et mconnaissables. Colorer
ensuite rhmatoxyline alune ou f(M*rique.
fixes
le
de
jusqu'
apparition
entendu, ce
les Spirochtes
3.
du sang.
On
catgories les
1.
Romanovsky.
des frottis
513
et
srement
le
diagnostic
microscopique de
la syphilis,
Prlvement de lexsudat.
faire
strilise
ou
mme
liite
la vaseline
ou
la
paraffine,
on
est
il
faut
absolument
1.
M. Langeron.
191-2.
Prcis de Microscoiuc.
33
METHODES SPECIALES
514
ments de dimensions
liales sous forme de lambeaux de mosaque, gros lments polygonaux, finement granuleux, avec un gros noyau sombre. Dans
les espaces vides circulent des granulations de toute laille, plus ou
moins mobiles
et,
parmi
elles,
les
Suivant
la
couservation,
la
est trs nette et les extrmits effiles bien visibles. D'autres fois
mouvements de fanimal.
il faut bien
distinguer les dplacements
propres de ceux qui sont ds aux courants. Les mouvements
j)ropres se manifestent par des ondulations qui parcourent la spire
d'un boAit fautre. L'animal se dplace ainsi, soit dans le pian de
un plan
vertical et oblique
dans ce
plus ou moins compltement et,
pour le suivre, il faut changer la mise au point. Mais ces mouvements sont trs lents et bien diffrents de ceux de tous les autres
la prparation,
dernier cas, on
soit
<lans
le voit disparatre
rature.
3"
Diagnostic
Treponema pallidum
Il faut
savoir distinguer le
d'autres espces morphologiquement voi-
diffrentiel.
sines V
Dans
les
lsions gnitales.,
moins serre
et ses
Spirochta refringens
il
est
est
trs
mouvements
1.
D'aprs Mucha [Med. KUnik., p. 1498, 1908) les Trponmes paratraient
blancs, tandis que les autres organismes spirales auraient une teinte jauntre ou
515
On
Spirochta
moins rgulire
et
sans
cils
Trponme, mais
spire
terminaux.
court,
plus serrs.
C'est peine
s'il
est besoin
hastilis.
On
du
On
pian.
nema pallidulum
est si voisin,
morphologiquement, du T. palli-
Examen par
la
mthode
l'encre de Chine.
Cette
de fournir, par un
analogues
que donne l'clairage sur fond noir. Le
examiner
est
mlang avec de l'encre de Chine et tal
liquide
celles
Voici
i.
comment on
513).
(p.
mlange
que
rapidement
et aussi
parfaitement
possible.
3.
le
MTHODES SPCIALES
516
Le
plaline.
ple.
Scher par
(p.
les
700)
5.
Biopsie
et
frottis d'organes.
le
il
les tissus,
}'
et
par une
encore
il
permet
peut avoir une
Trponmes, on coupe un
et
on l'imbibe d'eau
au buvard
1.
Cxins,
Centralhl.
Wien.
et
petit
distille
klin.
BakL,
Orig.,
Woch., n"
LU,
26, 1909 et
qo 22, 1910.
2.
3.
Med.
Klinik.,
n''
20, 1907.
Hecht
et
AVilenko,
les frollis.
un colorant basique
soit
517
au Giemsa,
avec
soit
phiiiqu.
tats.
La
avec du formol
10
p.
100
dilution
oi)tenue et de mlanger
1.
2.
une goutte de
XX,
1909.
comme
il
cette
est
dit
CHAPITRE
IV
SPOROZOARES
1.
HEMOSPORIDIES
derons
Oiseaux
trs parasits.
Plasmodium
Les Singes
tre porteurs de
peut faire rencontrer un animal })arasil '. Ces Singes ne sont pas
trs chers (20 25 fr.) et sont faciles se procurer soit Paris chez
les
1.
la
R. Blanchard et M. Langeron, Le paludisme des Macaques. Arch. de paraXV, p. 529-54->, pi. VIII et IX, 1912.
siloloyie,
SPOKOZOAIRES
OU Hambourg, dans
les jardins
zoologiques
519
qui les
expdient en
colis postal.
Enfin
les
animaux
fourniront
facilement
',
Tortues)
non pig-
(cf. p.
Examen
1.
524).
l'tat frais.
les
mouvements des
Hmosporidies et les phnomnes qui accompagnent la fcondation. 11 faut, en outre, s'habituer faire le diagnostic chez l'Homme
et les animaux, par exajiien direct, sans coloration. Ce genre de
prsente pas de difficults particulires, lorsqu'on
bien la manuvre de l'appareil d'clairage et du dia-
ne
travail
connat
iris.
phragme
la
Prlvement du sang.
fins
en procdant mthodiquement on peut faire
un grand nombre de coupures sur chaque oreille, en alternant, un
jour d'un ct, un jour de l'autre. Les premires coupures ont
soit
Mthode de
1.
cuit,
V, p.
2.
3-]7,
1915.
LXXIX,
1908.
MTHODES SPECIALES
520
Cette recherche
jeune.''.
annulaires,
la
jaune de Thmalie; une portion de Tanneau est gnralement ])lus paissie. Quand le pigment existe, on n'en trouve
la teinte
frais,
excessivement
difficile,
exercs.
2.
l^lasmodies adu'tes.
nique.
le
l'tat
On
mme
la
(poussires diverses). A mon avis, cette mthode n'est indique que lorsqu'il est
impossible de dceler les parasites dans le sang. L'examen du sang- frais ou
color donne une certitude absolue et est en somme beaucoup plus rapide J'ai
essay moi-mme, en Tunisie, la mthode d'Urriola, sur des paludens avrs,
dont le sang tait richement parasit. Les rsultats obtenus ont t trs irrguliers et souvent trs incertains, quant la nature exacte des poussires trouves
.
dans
le culot.
SPOROZOAIRES
Plasmodium vivax
produit
une
521
globulaire
hvperlro})liie
trs
de pseudopodes trs mobiles. Le pigen fins btonnets d'un brun rougetre, surtout visibles
grandes formes. Au contraire P. malari atropbie le
ment
est
dans
les
globule rouge, sa motilit est trs faible et son aspect plus comle parasite est toujours plus petit, moins diffus; le
pigment
en grains irrguliers, plus volumineux, de couleur brun cho-
pact;
est
colat.
Gamtes.
3.
Les corps
sphriques remplissent
fournis de }igment.
4.
le
Leucocytes pigments.
Leur importance
abondamment
est trs
grande,
faut bien savoir qu'il peuvent tre rares, mme dans des
cas svres. Pour les reconnatre sans erreur, il faut d'abord s'as-
mais
il
nifres)
presque toujours
le
des
grands mononuclaires,
pigment qui
est toujours
abondant
et
non
localises.
En lumire
fringent
Le pigment
polarise
cette proprit
d'hsitation, mais
ment
est
trs
il
203),
le
pigment paluden
faut
opaque
(p.
et
employer un
faiblement
les
birfringent.
est bir-
doutes en cas
les parasites
Le pigment
la forme de
pigments
et
il
parait brillant,
comme
les autres
corpus-
METHODES SPECIALES
522
gence particulire.
2. Crneliires.
Peuvent
des lvations de
3.
Hmatohlastes.
156) et
non
mise au point,
Ce sont donc
inclus.
2.
Examen aprs
Frottis desschs.
indique p. 626.
Ross (p. 628), on
fixation
la
et
On
ExciUer
peut essayer
la
coloration.
les iVollis selon la
mthode des
mthode
frottis pais
de
de Cropper et de James-. La
coloration se feront suivant une des nombreuses
^
les modifications
variantes
de
chrome de Pappenheim
(p.
ili).
Diagnostic
colors au
frottis
ici le
lieu
desschs et
de dcrire
les
Cropper, Rapid diagnosis of malaria, Brit. med. Joiuni., p. 891, 20 avril 191-2.
South, med. Joitrn., III, oct. 1911. Analyse dans Bull. Inst. Pasteur, X, p. 877,
191-2. Dposer sur la lame une goutte suffisante pour faire un grand frottis (7 mm';
mais ne pas taler. Scher. Dissoudre l'hmoglobine dans l'alcool chlorhydrique
(X gouttes pour 50 cm^). Laver l'eau, scher, colorer.
1.
2.
SPOROZOAIRES
523
la
forme
ce soit
est
tirera
Vacuoles colores.
lorsque Ttalement a t
MTHODES SPCIALES
524
Babsies.
3.
diflicnlts
on
tourner
suivant
la difficult
la
une
et Mitchell
cl lamelle.
rouge-brique.
II.
COCCIDIES
dfaut du Cuccidium cuniculi^ on pourra rechercher le 6'. Schiibergi chez un Myriapode, le Lithobius forficalus^ frquent sous
les
en captivit
c'est
dans
il
la solution
fait
ses
Ou
Je crois qu'on peut oprer aussi bien avec du sang- citrate, ce qui est beaucoup plus simple. Employer comme d'iiabitude le citrate de sodium 1 p. 100.
3. Une question encore Ttude est celle des
kystes de Gilruth, parasites qui
se rencontrent dans la muqueuse digestive du Mouton, du Kanguroo, etc. Voir
ce sujet Gilrutli, Bull. Soc pathol. exot., III, p. 297, 1910 et Proc. Roy. Soc. Victoria. 24 (N. 8.), II, p. 432, 9 pi., 1911 Chatton, Arch. zool. e.pr., V, p. CXIV, lUlO.
2.
i.
SPOROZOAIRES
examine ensuite
pour en
52o
ou on
fixe l'intestin
faire des
coupes.
peut encore reclierclier A'iossia helicina cliez Hlix hov-
On
comment on opre
Voici
tensis.
on casse
d'aprs Salomonsen
"2" tour de
spire; on
la
battre.
du cur
ct
se trouve le rein,
et le
cur qu'on
sous
la
forme d'une
et
aux ciseaux.
Au
bord de
la
mer,
les
Agrjregata du Poulpe
et
de
la
voit
Seiche
Examen
l'tat frais.
dans
parasits, soit
viscral
ou
le
la solution
physiologique,
srum de l'animal
soit
dans
dans
le
liquide
le
liquide
de von Wasielewsky.
Eau
200 cm3.
20
Blanc (l'uf
marin
Sel
Frottis.
gr.
apposition (p.
Pour
Eau
10 cm^.
distille
Arch.
et
H
X
gouttes.
Duboscq,
E.Lger
Brumpt. Prcis de Parasitologie,
1.
caux. 1010
cf. p.
f.
37.
P.-B. Hadiey. Regarding the value of the van Gieson and thc Romanovsky
malarial stains for the dtection of Coccidia. Centralbl.f. Bakt.. Oric/., LU, p. 1472.
150, 1909.
.3.
je ne connais que le
et de fuchsine).
MTHODES SPCIALES
526
Coupes.
le
hermtiquement
On
autant que
pourra suivre
ainsi,
sporocyste, eii
11 est assez difficile de se
procurer des animaux neufs pour les
d'infestation.
Dans
certaines rgions, et noiamment
expriences
presque
Paris,
aussi faut-il, pour les expriences, lever une porte avec des
soins particuliers, pour que les petits ne s'infestent pas avec des
Pour
mrs avec
le
de manire
une
faire
donne
manger aux
cinq
jours.
Au
bord
Portunus
de
la
chez les
schizogonique des Aggregata dont la sporogonie a lieu chez les Cphalopodes. Il suffit de
donner aux Pagures et aux Portunus des intestins de Seiche ou
et
les
de Poulpe infests
Pagurus"^^
1.
Arch.
state
2,
le
la
SPOROZOAIRES
GREGARINES
III.
On
527
d'Invertbrs et
par une trs belle espce ^ Dans les testicules du Lombric (au
niveau des segments 11-13) on trouve frquemment, surtout au
printemps, le Monocystis ngilis, espce trs mobile. Le Sty-
lorhynchus longirostris,
dans
l'intestin des
Homard
se trouve
belle
Grgarine
Blaps morlisaya
trois
adulte.
vit
segments,
Dans
l'intestin
du
gigantea).
Vexamen
les grains
car-
ces
animaux
II
est prfrable
de
les
cause du volume de
monter
la glatine glyc-
cds habituels.
Outre les colorants classiques, on se trouvera bien d'employer l'excellente mthode de Mallory qui, malheureusement, ne fournit pas de
les coupes la paraffine sont d'abord colores
rsultats constants
:
1.
Kuschakewitsch, Arch.
f.
Protistenkunde, Suppl.
1,
p. 202-249, 1907.
MTHODES SPCIALES
528
1
p. 100 pendant 1 3 minutes, puis, aprs
lavage l'eau, plonges dans de l'acide phosphomolybdique 1 p. 100
pendant 1 2 minutes, et enfin bien laves, puis colores cinq minutes
dans
dans
la
fuchsine acide a
Eau
200 cm^
Bleu d'aniline
0,5 gr.
Orange G
Acide oxalique
Laver rapidement
baume.
l'eau, passer
mthodes d'imprgna-
MYXOSPORIDIES
IV.
Nous joindrons ce grou])e celui des Microsporidies (cnidospores quatre noyaux el une capsule polaire), qui renferme un
]>arasite im})orlant, celui de la pbrine des Vers soie, le Nosema
Gomme
bombycis.
planeta orientalis, ou
trosteus
ganglionnaires de
le
la
Giugea loplni
polaires) sont
divers et
notamment chez
toire,
etc.;
on
les
mettre en vidence
Pour
1.
faire
f.
SPOIOZOAIRES
529
mme
ou
glycrine, solutions iodes
minraux
(actique),
eau distille et enfin suc
gas-
moyen
putrfaction peut aussi rendre des services dans certains cas. Les
spores du /\osema bombycis sont excessivement rsistantes tous
ces ractifs.
mmes
ractifs.
Frottis.
De prfrence
frottis
humides.
les mtliodes
Coupes.
Outre
(p. 527) et
V.
Les animaux
Porc
et le
SARCOSPORIDIES
les plus
Mouton. Dans
frquemment
on trouve presque
1.
Blochmann
le sel
2.
gique, 1895.
M.
L.\ngf:ron.
Prcis de Microscopic.
34
MTHODES SPCIALES
530
trs particulier.
On
Vexamen
et
libres
dans
le
sang.
1.
y.
On
laites
sur du matriel
p. 56-Gr, 1908.
CHAPITRE
INFUSOIRES
Il
trs facile
esl
gnautes,
paille,
les
de se procurer des Iiifiisoires les eaux staet macrations de dbris vgtaux (t'oiu,
:
iufusious
feuilles,
fumier de
esl
une
effilure de pipette.
On examine chaque
fois
au microscope
mcies.
comment, d'aprs
Iiaclie le
l'intestin
d'un grand
coll.
mais on n'en
l.'Voir ce sujet
Schuberg, Die Protozoen des Wiederkuermagens. Zool.
Jahrb. Sijst., III, p. 36i, 1888 et Eberlein, Ztschr. f. wiss. ZooL, LIX, p. -^o-i, 1895.
:
METHODES SPECIALES
532
individus examins. Les Batraciens sont plus commodes se procurer; chez presque toutes les Grenouilles de France on trouve
encore diverses espces intressantes. Metcalf^ signale en particulier Opalina inteslinalis et 0. caudata, qui se trouvent dans le
rectum de Bombinator igneus et de B. pachypus, et qui ne
possdent que deux masses nuclaires. Ces mmes espces, ou
des varits, se rencontrent en abondance chez Bufo calamita et
Brumpt
moins
efficace
que
l'infestation rectale.
En
prati-
sant avec des djections renfermant des kystes d'une espce donne
d'Infusoires. J'ai t tmoin des belles expriences encore indites
de Brumpt
et j'ai
pu me convaincre que
les
Batraciens constituent
un
il
les espces.
mangent jamais
on ne
les
avec
les
tions.
Pour
les
milieux naturels
On
et
dans
Batraciens
f.
Protistenkunde,
533
INFUSOIRES
amas
la surface de la
muqueuse.
trs
l'observation
movens
pour
et lamelle,
lorsque
la
mouvements
est
aux liquides
l'emploi de substances mucilagineuses qu'on ajoute
de culture ou d'examen. Brumpt emploie simplement de la salive
dpourvue de bulles
d'air.
conviennent
a fait
le
la
mieux
celles
se pr-
hquide, sirupeuse
distin-
et collode.
Ce sont
les
on
les
retire
534
METHODES SPECIALES
peut aussi suspendre l'Algue clans de petits sachets (4 6 gv. pour lUO cm-^
de culture). En trois jours le li(iuide est devenu assez consistant. Mais
on peut le rendre plus pais en en faisant vaporer une petite portion
dans un verre de montre ou sur lame.
Certaines espces, notamment les Paramcies, finissent par dgnrer
dans ce milieu, qui est alors envahi par ColpidUun colpoda et Colpoda
ciicallus, qui peuvent vivre fort longtemps dans des milieux trs consistants. On peut empocher la disparition des Paramcies en lavant la
culture l'eau frache, aprs trois ou quatre semaines, mais en ayant
soin de maintenir le niveau exact du liquide par le procd que nous
indiquons plus loin. Au bout de trois jours, on remet quelques branches
de Fucus, et, en renouvelant rgulirement ces oprations, on peut
conserver les Paramcies pendant des mois.
Si on craint de perdre une culture prcieuse, on n'en paissit qu'une
faible portion, dans un petit rcipient.
Les graines de Cognassier donnent normment de mucilage il faut
les employer dans la proportion de
pour 50 parties d'eau. Elles permettent de prparer rapidement un milieu trs cousislant. La gomme
d'Astragale (gomme adraganle) s'emploie encore en moindre proportion:
on en met de 2 5 dcigrammes au fond du vase de culture. Le milieu
peut tre rendu ainsi trs pais en peu de temps. La gomme de Cerisier
et la gomme arabique se dissolvent trs lentement et donnent de moins
bons rsultats.
L'agar se dissout bien chaud, mais trs lentement froid. Aussi
convient-il particulirement pour les cultures pures, en vases hauts et
troits. On y met 100 200 cm^ d'eau, 3 7 gr. d'agar en morceaux de
8 10 cm. de long, et des traces de carbonate de sodium et de phosphate de calcium. Deux ou trois jours aprs, on y ensemence les Infusoires qui s'y dveloppent trs lentement. Le liquide ne devient consistant qu'au bout de trois ou quatre mois. Ces cultures sont trs
propices l'tude du chimisme de ces animaux.
La glatine, prconise par Ludloi, est fortement dconseille par
Statkewitsch. Il faut, en effet, liqufier chaque fois la gele de glatine et on n'arrive jamais la mlanger parfaitement avec le liquide
de la culture. En outre, les Infusoires s'y dforment et leurs mouvemenis
ne sont plus normaux. Quant aux geles d'albumine, d'amidon ou de
dextrine, les Infusoires ne peuvent y vivre, cause de la dcomposition
rapide de ces substances
Dans certains cas, il peut tre intressant d'tudier les mouvements des
cils dans des suspensions colores (carmin d'indigo, charbon porphyris, poudre de Lycopode, etc.). Le volume des grains devra tre proportionn la taille des Infusoires. Le procd l'encre de Chine de
Burri (p. 099), appliqu sans dessiccation, pourra rendre de trs grands
services. Mais tous ces moyens ne montrent que le sens du mouvement
des cils et non les cils eux-mmes.
:
le
noyau
les
INFUSOIRES
COU})
mieux que
le
53 5
10000 ou
1 p.
le violet
JEE de
100 000, pour colorer
structure du cytoplasme
obtenue n'est pas durable.
Culture des Infusoires.
la
et
du noyau. La coloration
ainsi
-.
On
les
tenir
longtemps
divers moyens.
1.
Lavages successifs. On
au
moyen
de
la sensibilit
des espces
les Parancies sont trs exigeantes
Il va sans dire
que ces lavages doivent tre
:
ce point de vue.
1.
Maupas
METHODES SPECIALES
536
mme
de
Enlever
la
les
Neutralisation
3.
la
surface.
trs faible (1 p.
100) de
carbonate de sodium.
Addition
4.
en poudre.
Tsujitani
Glose
Bouillon
Dcoction de paille 20
5 g.
p.
000
50 cm3.
000 cm^
montent
que
les
Amibes, auxquelles
ils
peuvent
tre
tube.
Chlorure de
Chlorure de
Chlorure de
Bicarbonate
calcium anhydre
potassium
0,07 gr.
0,01
sodium
de sodium
0,06
0,01 0,03
Eau
100
cm3
semaines
'
Chlorure de sodium
Tartrate de sodium et de potassium
100 gr.
5
Eau
400
distille
cm^
petites
1.
Tsujitani,
Gesell.
die
537
INFUSOIRES
Fixation.
d'excuter des
Il
frottis
la
mthode des
frottis
humides,
De trs nombreux
comme pour tous les
lixateurs
que
l'acide
osmique
un
et,
ds que les
mouvements ont
Il est certain
que le formol seul, en solution 5 ou 10 p. 100,
donne des rsultats merveilleux. Les Infusoires s'y conservent
aussi beaux qu' l'tat frais
en usant d'un clairage convenablement rgl, on peut les tudier sans coloration aussi bien qu'
:
est prfrable
frais,
qu'on tudie au
1.
et
il
MTHODES SPCIALES
538
La
})icriqu.
encore meilleure
lixalion est
animaux
les
que prennent
est
trs
5 p. 100, auquel il
284); ce liquide sert la fois de
conservateur; on lute au lui de Kronig ou
100 de Bouin
mdium
(p.
d'Apalby.
comment on
conserver au mieux
Etude
doit procder
pour tudier
et
ci/tologique.
Sur
frottis fixs
humides au Bouin, au
etc., puis
colors.
Pour
le
faciliter
procd de
On
la
lame, employer
Brumpt.
en masse par cenlrifugalion. Pour conserver
rieur, de
peut se perdre. On ferme au collodion le cylindre intmanire que son contenu ne glisse pas entre les deux
cylindres et ne soit pas cras. Le tout est jet dans l'alcool fort
95 ou 90, mais non 80, qui ramollit la glatine.
2 Etude morphologique. Dposer sur une lame une goutte-
lette
Bouin
d'une lamelle
el luter.
Avant d'ajouter
le
liquide fixateur,
il
est
la
la
Coloration.
Le carmin
et
Thmatoxyline sont
les
meilleurs
el
n'est
(p.
539
INFLSOIUES
crois qu'ici encore
on peul
la
J'ajouterai
m'a
donn
la
la
conservation
sont
nergique
beaucoup plus
le
et
glyc-
dont
aises.
p.
examiner
Comme
faces.
Hochst aprs
fuchsine acide aprs l'hma-
l'hmalun ou
le
glychmalun
et
la
toxyline ferrique.
soires fixs
1.
540
METHODES SPECIALES
bon moyen de
en vidence
nieltre
dans
examiner dans
APPENDICE
I.
consiste
inoculer
la
vaccine
la
IL
Les trs nombreux procds, proposs pour colorer les corpuscules de Negri, peuvent se ramener quatre sections.
/''^
section.
Mthode de Negri.
d'Ammon
corne
de
l'animal
Pour plus de
chung,
-2,
Beihefte
dtails voir
Aufl., p.
z.
Arch.
/'.
(p.
430).
von Prowazek,
et Keysselitz, Arch.
Schiffes- u. Trop. Hyg., 1909.
78.
Mayer
CHLAMYDOZOAIRES
541
'
rapide permet
3^ section.
On
colore ensuite au
le
Mtliode de Lenlz.
et demie
une minute par
la paraffine
100 cin^
tiO
Eosine extra
Laver
et
BA
de Hochst
Potasse 0,01
p.
0,5 gr.
100
cm3
100
de Hochst
30
Alcool absolu
cm^
V gouttes
Soude caustique 1 p. 100 dans l'alcool absolu
est essentiel que cet alcool soit parfaitement anhydre.
.
Il
encore
comme
Lentz
fait
rence
la
en bleu.
Mthode des
frottis.
Harris
fait
d'Ammon
METHODES SPECIALES
542
<le
mthylne
rapiflement
et
diffrencie dans
ralcool 95.
Alcool absolu
Eosine l'alcool de Grbler
Acide actique crist
100
1
0^3
gr.
la
le
diagnostic
rage, car elle respecte bien la forme des cellules ner-
suffit
la
Les Amricains emploient volonliers, aprs fixation l'alcool mthypour colorer les corps de Neg-ri, la mthode de Ira van Gie?on
que nous avons donne plus haut (p. 525). Ces corps se colorent en rouge
i
lique,
cramoisi, tandis que leurs inclusions sont bleues Celte mthode, appliaux frottis de substance crbrale suspecte, serait trs rapide, trs
facile et trs sre-; on peut colorer aussi ces frottis au Romanovsky
(jue
(p. 659).
3*^
section.
Mordanage par
l'iode.
'
coupes.
Les
frottis
Eau
100
distille
lodure de potassium
Eosine B de Griibler
Iode
cm3
0,2 gr.
1
0,1
3.
Neri,
Le diagnostic rapide de
la rage. Centralbl.
/'.
CHLAMYDOZOAIHES
Dissoudre, d'une
50 cm d'eau
'
et,
o43
Fiodure de potassium
pari,
el
2.
3.
4.
dans
iiode
000.
5.
baume.
colors en bleu ^
La mthode
mme
4^ section. Coloration au
et
Employer
les
Romanovsky
des frottis
des coupes.
404
t dcrites p.
416.
m.
On
ou,
avec
le
on
des
fait
si la
La mthode de Romanovski
est
les
BakL,
3.
Orly.,
XLIV,
pT 374-378, 1907.
Oriy.,
LV,
p. 429, 1910.
f.
Bakt.,
MTHODES SPCIALES
544
Un
le
initial
corps
Giemsa.
peu
])lus
lard,
supprimer
la
Eau
Formule A.
10 cm3.
distille
Solution de Giemsa
Acide actique 1
Formule
V gouttes.
p.
100.
Giemsa
B.
p. 100.
Les Bactries,
colors en
bleu
la
l'eau distille.
les
les labrocytes et
sont
roses
une heure
corpuscules de Prowazek
les
fonc,
cellules
le
cytoplasme.
que
L'examen sur fond noir ne
rsultats pratiques.
Bhlman
vu nettement
donn encore de
trois sortes
de cor-
des lments
puscules qu'il considre comme caractristiques
et
des globules
mobiles
des
masses
bactriformes,
protoplasmiques
le
rle
confrer
il ne sait
Mais
}>athogne. Au
auxquels
jauntres.
:
point de vue
du diagnostic microscopique,
ct.
1.
Beitr.
z.
Aurj enheilkunde
LXII, 1905.
DEUXIME SECTION
MTJlZOJnJiES
CHAPITUE PREMIER
VERS
Nous
ou Helminthes
et les
I.
les
les tissus
ou
il est donc
organes des Vertbrs
indispensable de savoir faire
correctement une autopsie. Les iiistruments ncessaires sont
:
pour
les ctes.
Marche de
riens) (v. p.
sur
le dos,
membres
animaux (Balraciens, petits Rongeurs, [letits Oiseaux) peuvent tre piqus avec des pingles, sur une plaque de lige ou dans
une cuvette dissection fond lig on peut encore se servir
petits
1.
M. Langeron.
le
plankton
Prcis de Microscopie.
(p. 619).
3o
METHODES SPECIALES
546
mlange suivant
Paraffine 60"
2 parties
.
_
Caoutchouc
partie
OU simplement
mlange de noir animal.
Les pingles pntrent trs bien dans ces masses, dont la coude la paraffine 60
Ouverture de l'animal.
avec
le scalpel et
on
la rcline
la fixant
au besoin
s'il
y a
la
cavit
thoracique,
en
dsinsrant
le
diaphragme sur
ct, dans leur
\.
sa priphrie et
fixs
par
trois lacs,
un plac sur
le
cou, les
deux autres
plumes.
VERS
surface des poumons.
la
carde,
On
547
note
la
prsence de liquide,
le paquet
pour cela de poser une ligature on une pince
forcipressure aussi haut que possible dans le cou, de manire
lier Tsophage, la trache et les gros vaisseaux. On coupe audessus de la ligature puis, en tirant sur la pince ou la ligature,
viscral
il
suffit
On
et
explorer
doit plus rester, dans cette dernire, que la vessie et les organes
gnitaux. La vessie est lie sa base, puis enleve. On l'ouvre
dans un
cristallisoir et
(bilharziose
Examen
on examine
le
liquide, puis la
muqueuse
et
prlve l'panchement s'il y a lieu le cur est extrait, les ventricules sont ouverts et on v recherche ventuellement les Filaires
:
on note
la
congestion,
la
monaire) ou de Trmaiode^ (Par ago7nimi s Westermanni^ Trmatodes pulmonaires des Grenouilles) On recherche ensuite, dans
les foyers
ou
On examine
Nmatodes ou Trmatodes^
ensuite la trache et le
diaphragme
dans ce
comprimant
(fig. 186).
passe ensuite au foie, dans lequel on peut trouver des
Trmatodes. On commence par ouvrir la vsicule biliaire dans un
On
cristallisoir;
le
contenu
On coupe
est
dilu
au besoin dans
physiologique.
entre les doigts pour faire sortir les Trmatodes.
1.
Chez
la Grenouille, les
la
solution
Trmatodes vivent
mme
le
On
aperoit
sac pulmonaire.
548
xMTHODES SPCIALES
faut, quelquefois,
rechercher sur
les surfaces
le
la
veine porte et
le foie
On
saisit cette
une
pince
tranche avec
ou
avec
les
doigts et on l'applique en
CudroitS d'uue
plusieurs
^
Le pritoine
lorsqu'on
doit tre
souponne
examin avec
la
prsence
l'piploon
et
tous
les
replis
du
msentre.
Il ne reste
plus examiner que le tube digestif. Celui-ci est
droul en entier. On a soin de couper le msentre de faon
Lorsque
le
il
est prfrable
de
le
couper entre
deux ligatures,
il faut
procder lentement et avec prcaution de manire ne pas couper les Helminthes. On doit avoir
sa porte un cristallisoir ou une cuvette photographique noire,
:
au fur
et
mesure qu'on
les
540
VERS
trs fragiles, doivent tre enlevs avec des prcaulions particulires. Au besoin, on arrose linleslin d'eau physiologique pour
on
la
contenu intestinal.
portion d'intestin
phique noire. On
doucement. Les
lgers,
dans un
laisse
dbris
alimentaires,
entrans avec
sont
trs
le
liquide;
plus
les
denses, tombent
Helminthes, toujours
rapidement au fond et y restent. Si le rsidu
est trop pais, on agite et dcante une seconde
^^^^g^e ^
^^^ ^^^
tond mi-panie noir
^:,;j.:^:;<^-
,::';
Helminthes.
physiologique.
Il est de la
plus haute importance de pratiquer ces recherches
avec beaucoup de mthode et de noter exactement en quel point
on a trouv les parasites. Leur situation dans Tintestin est rgie
par un dterminisme rigoureux qu'il importe de mettre en vidence; lorsque l'animal autopsi est frachement tu, tous les
parasites sont encore en place et la plupart fixs la
FIXATION
II.
muqueuse.
ET CONSERVATION
l'tat
frais.
les
vritables
l'animal vivant.
observations
biologiques
doivent
les
tre
faites
sur
MKTHODES SPECIALES
550
Cestodes.
La grande difficult surmonter, dans la prparation de ces
animaux, est leur contractiUt il faut s'efforcer de les fixer en
:
extension.
Conservation totale.
testin et la
le
et
la
solution physiolo-
On
gique.
cesser leurs
instant, puis
musculaires.
contractions
on remplace
la
On
laisse
dposer
un
aqueuse
Liilie^ fixe aussi par agitation dans un tube avec du sulilim concentr des espces assez grandes, jusqu' 15 cm. Il supprime l'agitation
pralable dans la solution physiologique. 11 couche le tube aprs agitation.
Pour les grandes espces, le traitement est beaucoup plus difficile.
Looss conseille de les fixer dans une cuvette remplie de solution physiole Cestode
logique additionne de i 2 p. 100 de sublim. On tient
avec une pince en bois ou en corne et on l'agite vivement de droite
Centralbl.
fiir
BakterioL,
Abth.,
XXX,
p. 167, 1901.
VERS
551
que
les
couler du sublim
fait
le
2o
p.
100.
Fixation histologique.
mon
avis, le meilleur
moyen
d'avoir de jolies pices colorer au carmin et monter en prparations microscopiques, consiste fixer des fragments de Cestodes
laire
on dcoupe, dans du buvard blanc, une grande cellule rectangude la dimension des lames (fig. 117). Lorsque les anneaux sont
le
fixateur. Celui
je prfre
90
90'^
Formol 40
que
p. 100
10
anneaux sont
fixs
Borrel.
avant
la
Il
est bien
partie centrale
plus lgre.
les
corpuscules calcaires.
Larves de Cestodes.
de
en
des fragments
de
instructives d'j^cAi/vocor/t^es
membrane
fertile
la
compression,
MTHODES SPCIALES
552
dans ce cas, devra tre trs lgre, pour ne pas craser les lles.
-Les Cysticercodes^ qui sont toujours de trs petite taille, peu-
Ils figureront aussi dans la collection de prparations macroscopiques, aprs fixation dans Talcool ou le formol,
soit isolment, soit avec les viscres dans
lesquels ils se sont
dvelopps.
4 Conservation en collection.
Les plus
jolis chantillons
les
fil.
On
peut encore faire scher les Cestodes sur une lame de verre noir
ou transparent laquelle ils adhrent trs bien. Marotel combine
ce procd avec une coloration jtralable au carmin.
5 Coloration des prparations de Cestodes.
Le meilleur
carmin
le
le
l'hmatine-osine ou par la
laquelle les
safran i ne.
crochets sont
mthode de Curtis
teints
lectivement en
(p.
652), avec
rouge par
la
dans
le
Trmatodes.
1
Rcolte.
les rcolte
difficiles
553
VERS
intestinale avec
et
on agite
tions,
comme
il
a l dit p. 550.
On
est
que les petits Ti'matodes. Il est prfrable alors de couper Tintestin en morceaux
qu'on agite fortement avec de la solution physiologique;
la
est
procd
^ Fixation.
la
solution
fixateur
en
remplaant
physiologique par
Bouin, alcool-formol, alcool) comme il a t dit p. 550. Il faut proportionner la violence de l'agitation la musculature des Vers et
(sublim,
ne pas oublier que c'est celle agitation qui les met en extension.
Bien entendu, lorsqu'on n'a que quelques Vers traiter, on les
fixe entre lame et lamelle ou entre deux lames, en les comprimant
lgrement.
Parmi
il
y a deux catgories distinguer
peu muscles se fixent admirablement
par compression entre deux lames retenues par des tours de fil,
avec emploi ventuel d'une cellule en papier- (fig. 177). Il ne faut
les
grosses espces,
la sortie
Les espces
dans
la
de
s'ils sont contracts ou
plisss, il est impossible
leur rendre leur forme primitive. Au contraire, les chantillons
fixs et conservs dans l'alcool (sans formol) reprennent facilement
leur forme et leur souplesse, par simple immersion dans l'eau
l'lude. Mais,
distille.
4 Coloration.
Syst. Geogr.
MTHODES SPCIALES
554
On monte
Les grosses espces, qui seraient trop opaques, par suite de leur
paisseur, seront dshydrates et claircies dans la crosote. On
peut
les
vit.
Les
lut
que
les
Paragoniinus, peuvent
Nmatodes.
Les Nmatodes sont particulirement difficiles monter en prparations microscopiques, cause de la rsistance de leur cuticule.
Deux
le plissement de
peut en rsulter d'apercevoir
ne peut tre question de monter
la
contraction et
En
organes internes.
les
outre,
il
spciale
les
Ankylostomes ^
Rcolte et nettoyage des adultes.
et
devient
pour
les
impossible
Ces
la
Sclrestomids, dont les capsules et les bourses copulasouvent encombres de dbris alimentaires ou pith-
trices sont
liaux.
On met
les
tiers
rempli de liquide,
le
et
Efjiipt.
2.
VERS
555
plus trouble
il
les gros
morceaux qui ne
On
un
lique, sous
robinet.
On
fin
tamis de
mtal-
toile
Helminthes
Fixation.
On
Looss.
La meilleure mthode
est
videmment
celle
de
fait
commencent
la
parafline. Pourtant,
s'il
chaud, l'extension
Aprs
la
fixation,
on
dans
l'alcool 10"
Il
est
556
OU
MTHODES SPCIALES
le
mme
en est de
Il
intestinaux.
J'ai prconis autrefois
le formol comme fixateur pour les Mmatodes.
Ce liquide donne des chantillons de collection macroscopique beaucoup
plus jolis que ceux qu'on obtient avec l'alcool. Les prparations microscopiques russissent trs bien avec le lactophnol, dans lequel les Vers
ainsi fixs restent parfaitement ronds. Mais ils se contractent gnralement et s'claircissent mal dans la glycrine et la crosote et se ratatinent toujours dans l'alcool, ce qui explique pourquoi Looss rejette
compltement le formol. En outre, ce liquide durcit trop et empche do
faire de bonnes inclusions la parafline. Donc, sans liminer compl*
tement,
Montage en prparations.
tre
peuvent
sissements,
dtermins qu'au
aussi
faut-il
les
claircir
parents.
Pour
pour
les
C'est la
mthode prco-
(1
espces
3
dlicates,
pour 100).
manire ce
qu'il
viter le
ralatinement,
il
glycrine pure.
Pour
faible
ne reste que de
la
les Vers.
On
peut conserver indfiuiment les chantillons dans la glycmonter en prparations dans ce li(|uide. Le seul inconvnient est la difficult du lutage.
rine ou les
L M.
Amann pour
le
Mikr.,
XXIV,
p.
278-279, 1907.
f.
VERS
557
On
et
on
lger poids, de
rsultat obtenu,
compltement
la
Si on
veut remettre
une
teinte
les
Lactophnol.
les chantillons,
le
normment
les
Nmatodes; mais,
si
on
les
prparations ne sont
les
rendent inutilisables.
pas dtruites,
1.
Employer
la
il
s'y
formule de Kaiser
(p. 44-2)
ou celle de Deane
glycrine 4, en poids.
2. Ce procd est minutieusement dcrit par Looss. Zoco citato,
glatine
1,
eau
p. 554. note 1;
-2,
MTHODES SPCIALES
558
quent
examen
qu'on peut colorer Thmaau Pappenheim. Pour Ttude hislologique des lsions
musculaires, fixer des fragments au Bouin et faire des coupes;
l'tal frais et par frottis
tine ou
et
monter au baume.
Filaires.
Filaires adultes.
dans
le pritoine
Au cours
qu'il sorte de
utilisables
pour l'tude.
Microfilaires sanguicoles
1.
Examen
Ftat frais.
Mettre
VERS
559
de
la
citrate,
sang
sodium 1 p. 100.
2. Colorations vitales.
PeneP
Mlanger sur une lame une goutte de sang avec une goutte de solurecouvrir d'une lamelle et luter,
aqueuse d'azur II 1 p. 3 000
sauf en deux points opposs des petits cts, par lesquels on introduit,
au bout de quelque temps et par capillarit, une trs faible solution
d'osine. On met ainsi en vidence les cellules sous-cuticulaires, le corps
interne et deux groupes de cellules que les Allemands dsignent sous
le nom de cellule excrtrice et de cellules g;nitales, correspondant aux
deux pores excrteur et gnital. Le colorant pntre d'abord par ces
deux pores, comme Penel Ta vu le premier 3 les cellules excrtrice et
tion
3.
ou
de Schilling-Torgau
A. Coloration des frottis.
celle
born"*
11
recommande beaucoup
fixe,
suivant Looss
c,
la
mthode de
(p. 624).
a.
Frottis humides.
Sabrazs
Fille-
ces frottis.
taler le
sang sur
1. Manson, pour observer cet appareil, fait sortir les embryons de leur
gaine
par sjour des prparations la glacire. Brit. med. Journ., I, p. "392-794, 1893.
2.
Rodenwaldt, Studien zur Morphologie der Mikrotilarien. Archiv fur Schiffsund Tropenkygiene, XII, Beiheft 10, p. 18-20, 1908.
Ditierentialdiagnose
zwischen Mikrofilaria nocturna und dinrna. Ibidem, XIII. p. 215-220, pi. IV. 1909.
3. Penel, Les Filaires du sang de V Homme. Thse de Paris
(mdecine), 1905;
560
MTHODES SPCIALES
Frottis dessches.
recommandent de
mthode
lentement
(jue
et
toutes
les
dans
les
En
dformations
produites
outre, les prparations sont loin d'tre planes; les Pilaires peuvent
tre recouvertes de leucocytes et d'hmatoblastes et elles sont
le
la
en appuyant
trs
peu
la
lamelle, de faon ce
En examinant
du
frottis,
En
on
est
sr de trouver
les frottis
que
bords et
les
ne
la fin
y en a.
en pratiquant aussi
l'examen
l'tat frais,
en plus,
si
on
De mme, en
l'avis
constante.
Dans un
frottis
convenablement excut
et
1. Le
liquide formo-actiqiie de Ruge dissout l'hmoglobine
temps formol 5 p. 100, 95; acide actique crist., 5.
:
dessch, les
et fixe en
maie
VERS
561
En
humides
frottis
et
en toute circon-
schs, colors
l'azur
p.
rique.
Dshmoglobiniser
la
distille, face
en
dessous, puis fixer l'alcool. Fixer seulement les deux autres. Compter
les Microfilaires dans les trois lames.
Mthode d'enrichissement.
indi(iue
1.
2.
Cf.
Fiilleborn,
f.
Schiffs
und Tropen-
h;/f/iene,
3.
gentiane,
sol. alcooliq.
conc. de violet de
2.
M. Langkro.n.
Prcis do Microscopic.
-'O
METHODES SPCIALES
362
une dernire
fois.
Acanthocphales.
Ces Vers sont surtout frquents chez les Poissons, les Batraciens et les
Oiseaux acjualiques. Chez le Porc on trouve Giyantorhynclms glgas et chez
le Rat G. moniUfonnis. Lorsqu'ils sont fixs fortement la muqueuse,
il faut sectionner un
fragment de celle-ci, et dbarrasser ensuite dlicatement la trompe des dbris de tissu. Faire gonfler les Vers dans la
solution physiologique, puis les fixer dans l'alcool chaud ou, s'ils sont
de petite taille, les comprimer entre deux lames et les immerger dans
l'alcool ou l'alcool-formol. Ce dernier procd est le meilleur lorsqu'on
doit monter les Vers en prparation microscopique et les colorer. Le
meilleur colorant est le carmin chlorhydriiiue; on monte ensuite au
baume. Ne jamais colorer dans une solution n({ueLise (\m gonflerait les
Vers. Les grandes espces se conservent admirablement dans le formol
"OU dans l'alcool.
IH.
RECHERCHE ET CONSERVATION
DES UFS D'HELMINTHES
le diagnostic, doit
le
la
technique coprologique.
Technique coprologique.
Elle
et
microscopique des
selles.
t.
Je prfre employer
mieux
la coagulation.
le
citrate de
sodium
p.
100 qui
empche encore
VERS
563
L'examen
comme
il
a t dit p.
549
et
y rechercher
faut aussi
gros parasites.
s'aider de la loupe pour rechercher, dans le sdiment, les Helminthes de trs petite taille, tels que les Trichines ou les
Heterophyes.
les
Il
L examen
rclame
microscopique
aussi
des
prcautions
malgr sa simplicit,
est
lorsqu'il
appliqu
avec
mthode
et
patience.
1
Employer toujours de
trs
grandes lamelles
22x22
ou
22x32.
2 taler le
la lamelle,
mais en
la
mouvement
tournant.
mieux
avec
4
Ne
comme
Mthodes d'enrichissement.
ufs sont
surface de la lamelle
il
ra lions.
la
la platine chariot,
trs
et
de faciliter
le
peu nombreux.
Le temps qu'exigent
MTHODES SPCIALES
564
prolong
mthodiquement une prparation de
matires fcales, exige une attention soutenue et toujours en veil,
cause de la varit des objets et de la ncessit de dterminer la nature
exacte de ceux qui peuvent ressembler des ufs d'Helminthes, surtout
lorsque ces derniers sont trs rares. 11 en rsulte une grande fatigue
crbrale et oculaire, dont on peut supprimer une partie au moyen des
procds de concentration.
La concentration est une des mthodes les plus employes en micrographie gnrale, pour l'tude des lments isols et pars dans un
milieu solide ou liquide. On la produit par des procds mcaniques
et infructueux. Parcourir
miner tous
On
a propos
Maurice Hall
a publi-
C'est ce travail
suivre, mais
a. Sdimentation simple.
Laisser dposer les matires liquides.
Diluer les matires solides avec un excs d'eau, laisser reposer pendant
5 minutes, dcanter le liquide trouble, recommencer plusieurs fois,
jusqu' ce que les eaux de lavage soient peu prs claires. On limine
ainsi les matires solubles et les particules amorphes; on produit donc
une concentration partielle et on rend la pte fcale moins obscure.
6. Centrifugation.
C'est une sdimentation rapide, applique de
3
reproche ce procd d'altrer la
petites quantits de matire. Letulle
forme des oufs {Schistosomum, Ankylostomum)\ je n'ai pas constat cet
accident, bien que j'aie eu centrifuger de grandes quantits d'urines
bilharziennes.
c. Tamisage.
Le passage des matires travers un tamis mailles
fines (1 mm.) a pour but de sparer les parties grossires, qui restent
L Voir
note
565.
?, p.
C. Hall,
Maurice
565
VERS
sur le filtre, des portions les plus fines, renfermant les o.'ufs, qui passent
avec l'eau de lavage. Ce procd est employ par de nombreux auteurs
(Bass, Telemann, Garrison, Brumpt) avec diverses variantes. C'est une
bonne mthode pour trier de suite les gros parasites. Les ufs passent
avec les eaux de lavage, qu'on recueille et qu'on sdimente. On peut
laver encore le sdiment plusieurs reprises, pour le concentrer et le
dpouiller des particules amorphes.
La sparation des divers
d. Traitement par les liquides denses.
lments des sdiments, suivant leurs densits, au moyen de liqueurs
plus ou moins denses, est un procd trs employ dans certaines branches de la micrographie, notamment en lithologie microscopique. Au
point de vue gnral, je considre ce procd comme trs suprieur la
''.
1. J.
Cliapelot. 1907.
XVII, 1900.
2. A.
Lauby, Nouvelle mthode technique pour l'tude palo-phytologique
des formations sdimentaires anciennes. Bull. Soc. botanique de Irance, LVI,
.Vmoire ia, 1909.
3. Journ. Amer. med. Assoc, XLVII, p. 185-189, 1906 et Arch. intern. med.
du produit employ.
6. Une solution 26 p. 100 de sel anhydre pse peu prs 1,2415 15. Une
solution 55 p. 100 de sel hydrat pse 1,252 18".
7. Wellmann, Comrnents on tropical medicine. Calif. State Journ. med., VIII,
p. 312-313, 1910.
8. W. Telemann, Eine Mthode zur Erleichterung der Auffindung von Parasitoneiern in den Fteces. Dtscli. med. Wocli., XXXI V, p. 1510, 1908.
MTHODES SPECIALES
566
des matires
et
le
mlange suivant
aa
L'lher dissout les graisses neutres et les acides gras, tandis que
Tacide dissout les alhuminodes, les savons, la mucine, les phosphates,
les sels de calcium. On passe au tamis fin, puis ou centrifuge. 11 se
forme trois couches
au-dessus, l'tlier avec les graisses; au milieu,
l'acide avec les bactries et les fines particules; au fond, le culot renfermant les ufs le traitement a produit une concentration assez notable
de ces derniers. Cette mthode ne donne pas de rsultats suprieurs
celle de lall et elle prsente le trs grave inconvnient de dtriorer
i"apidement le microscope, cause des vapeurs acides que dgagent
:
les prparations.
f.
Mthode mixte de
Division.
Hall.
les tamiser,
sdimenter
et enfin centrifuger.
librer
les parasites et
Indispensable pour
leurs ufs et mettre tous les lments en suspension dans l'eau.
Agiter les matires dans un flacon bien bouch, aux trois quarts
au besoin, diviser d'abord avec un agitateur en
rempli d eau
1.
2.
Premier tamisage.
Prparer
six
Tune dans
l'autre.
Le fond des
cuvettes a t dcoup et on a
soud sa place une toile mtallique en laiton. Les mailles doivent avoir 3 mm. pour le premier
tamis,
et des
Fig.
diamtre au fond
Emboter
et leurs
les six
tamis et mettre
le tout
(fig.
dans un grand
188).
cristal-
lisoir.
Verser
tamis.
Pour viter
fer galvanis
la rouille,
ou en zinc.
examiner macros-
les
prendre en
VERS
567
Deuxime tamisage.
3.
un
toile
de ce diamtre). Tenir
blanc identiques aux
prcdentes,
crible
la soie
_^^=3
c'est--
"^^"^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
prives de leur
fond les deux cuvettes
dire
wMu\
4,
Sdimentation.
a travers le tamis
On
de soie
sdimenter^
le
le
l/i
189).
i^^^^^^^^pj'
l^^^
^^wim\r\
rsidu,
si
c"est
fois
est
abandonn
ce sdiment et
clair et centrifuger
ncessaire,
par plusieurs
centrifugations. Il est important de centrifuger trs peu, juste
assez pour sdimenter les ufs. A la vitesse de 1 230 tours la
On
dans
les
deux tubes du
centri-
fugeur.
L'opration termine, laisser un des tubes tel quel. Jeter le
liquide de Tautre et le remplacer par une solution de chlorure de
oo
6. Faire
et
sert
de contrcMe.
Pour viter
ajouter 2 3
p.
et
mme
le
100 de formol.
568
MITHODES SPCIALES
ment
ufs
dans
les
j'ai
remarqu
genres suivants
Paragonimus, Trichocephalus.
Les essais de coloration qui ont t tents n'ont rien
Colorants.
donn de satisfaisant. Le Sudan 111 ne convient que pour la recherche
des graisses et l'iode ne montre nettement que les grains d'amidon et
les Levures.
norcliis,
h.
'^
n'a encore
relations entre le
les selles
nombre des
et
s.
En
'2.
1911.
3.
empche
en partie
Lutz, Ueber Ankyiostomum duodenale und anhylosLomiasis. Yolkmann's Sammlung klin. Vortrage, Leipzig, Breitkopf und Hartel, 1885.
5. Leichtenstern [loco
cltato) divise par 47 le nombre d'ufs d'Ankylostomes
trouv dans un gramme de matires et connat ainsi le nombre de femelles. Ce
est
bas
sur
de
nombreuses
procd
autopsies.
4.
569
VERS
2 Lorsqu'il n'y
3 Lorsque les
Causes d'erreur.
ufs pour
les
signalons
la
forme d'anneaux.
poils
Il
ne faut pas
et
embryons
une base
d'implantation tronque.
prparations dfinitives.
Il
les besoins
soit
Matriaux de collection.
soit
en
prparations microscopiques.
Le produit
de
sdimentation des
la
l'avantage
leur enlve un peu de leur aspect naturel.
METHODES SPECIALES
570
lesquelles les
claircis,
en conservant
procde comme il suit pour monter la glycrine gladlayer les matires avec de Peau et liminer les gros
fragments; fixer en mlangeant la bouillie avec de Talcool 70"
Looss
line
">
p. 100), chauff -I- 70. Aprs refroidissement,
dcanter, ajouter de l'alcool glycrine frais, vaporer Ttuve et
glycrine (
IV.
En
d'tre
claircis
par
EXPRIMENTATION
Looss
2.
Brumpt
produit
de raclage de
la
mutiueuse. Dans
la
VERS
o71
cidia (flg.
190).
Nmatodes.
La ncessit de
Fig. 190.
rada et Hashograwa.
animal
et
Ptri.
Mlanger
tendre
Le noir ne
sistante
la
de noir
gales de matires et
bote de
une
dans
en
couche
mince,
pte
parties
le
Le noir
la
putrfaction et are
vases,
il
Todeur
agit en enlevant
faut
effectus avec
mme
et la raction acide;
la culture.
Pour
les cultures
empche
il
en larges
Le procd de Looss
Exposer
est
une amlioration de
jusqu' dessiccation
On
larves, attendre
que
celles-ci
aient travers
le
filtre,
1.
Centraltdalt
2.
Becords of the
f.
l'Jgi/pt.
MTHODES SPECIALES
572
le
nez
et les
yeux pour
la respiration,
le
qui leur arrive d'autre part. Appliciuer et attacher, l'endroit choisi,
rectangle de toile, l'imbiber avec le liquide riche en larves, pour raliser
les conditions naturelles d'infestation par les vtements mouills. Au
besoin, renouveler Timbibition plusieurs fois. L'exprience finie, on
enlve le bandage, on nettoie la place, on la sche, et on dlivre le Chien.
Le bonnet empche l'infeslalion par la voie buccale. Tuer l'animal par
le chloroforme, le plonger dans le formol 2 p. 100, aprs ouverture de
l'abdomen et du thorax et remplissage des cavits naturelles. Prlever
les pices
aprs durcissement.
Fixation
difficile.
Mthode de
Fulleborn'-.
entonnoir en verre
(fig.
Placer les
malires
Au
fond, on
filtre
met du
dans un
en papier,
sable strilis
un
triangle de
fil
de
fer.
On
vite ainsi la
1.
2.
et l'infeslalion
Schiffs-und Tropenhijyiene,
XV,
p. 368-371, 1911.
fi'ir
b73
VERS
fond noir.
le
Ttuve
sont favorises
et
Pour
parois.
mentation,
mches
les
Texpri-
on
prlve
on
et
'^J
les
peau de Tanimal.
Trichine.
fester
les
Pour
in-
Brumpt
un bocal
Souris,
Il
facile
d'exprimenter
sur les Crustacs d'eau
douce, qui servent d'htes
intermdiaires certaines
espces.
Asellus
aquaticus
et
verre.
pour E. angus-
plusieurs espces
Poissons.
SANGSUES
Anesthsier les animaux dans l'eau chloroforme ou plus simplement
avec de l'eau de Seltz, puis fixer par le sublim ou tout autre fixateur.
Dbiter ensuite en tranches pour inclure et couper.
Pour les travaux de systmatique, la fixation dans l'eau bouillante ou
l'alcool 70 bouillant suthsent parfaitement. Conserver les animaux
dans l'alcool. Pour l'levage des petites espces de Sangsues, voir
p. 488-4U.
tuer,
pour cela, on les garde quehiue temps sur du papier buvard humide ou
du marc de caf. Ces substances, surtout la dernire, se coupent passablement bien dans la paraffine.
CIIAPITUE
II
ARTHROPODES
Les seuls x\rlliropodes qui nous intressent au point de vue
les Arachnides et les Insectes ^ Ils sont caractriss
mdical sont
de vue
les
transparence.
Dans le second cas, au contraire, il faut, ou se dbarrasser du
squelette chitineux, ou. au moins, le ramollir suffisamment, pour
les
mthodes
histolo-
giques.
1
Nous supposons
l'animal tu.
Il
Nous verrons
s'agit de
le
les
procds
et
ARTHROPODES
respeclanl mieux
575
paisses,
rapports des divers
On
dans
un aplatissement
obtenir
certains
cas,
organes.
peut,
modr en tuant l'animal par le chloroforme, en le ramollissant
inimdialement dans Feau trs chaude et en le disposant entre
les
reliefs et
les
deux lames qu'on charge de poids progressifs (petits tubes contenant du mercure, p. 440;; aprs aplatissement, on lie les deux
lames avec un fil et on plonge le tout dans l'alcool pour durcir.
Mthode de
Ce procd
trbenthine de Venise.
est le plus simple de tous et donne des rsultats parfaits. L'animal
doit avoir s^'journ quelque temps dans l'alcool 95 on l'en sort,
on le dpose dans une goutte de trbenthine de Venise, prpare
A.
la
comme
il
Mthode du chloralphnol.
B.
est
un
excellent
Le baume du Canada
il
temps
Aman
et j'ai
II
'.
Arthropodes.
ordinaire
Il
se prpare de
deux faons
2 parties.
1
avec du para-monochlorophnol
liqufie ces
Monochlorophnol
deux mlanges
(para).
^
^
On
avec du phnol
soit
et
on
les
1. M. Langeron, Emploi du
chloralphnol de
Arthropodes. C. R. Soc. de biologie, LXX, p. 457,
2. .J.
Zisclir.
Amann
191
pour
le
montage des
1.
f. iriss.
576
MICTHODES SPCIALES
hiver
on
peiil
trante et tenace.
passage
comment on opre
Voici
Tanimal,
frais
o;i
conserv dans
l'alcool, est
douze heures
renouveler
et
le
ne pas toucher
et le
la lamelle,
aspirer le chloral-
traction, ni gonflement.
3 Dissection facile des pices chitineuses (pices buccales) car les animaux deviennent trs mous.
11 ne faut pas laisser les
objets fragiles (larves) pendant trop longtemps
dans ce liquide, sous peine de les voir clater et se dissocier. Pour les
objets trs opafjues, Amann conseille de saturer ces mdiums, avec du
salicylate de sodium (fondre une douce chaleur, p. 724;.
La seule contre-indication a trait aux animaux gorgs de sang, qu'il
faut faire bouillir dans la potasse.
ques
10
p. 100.
On peut
oprer
la
causti-
temprature ordinaire
(quelques jours),
enfin
qu'il
l'tuve 37
la
produit;
il
est
distille
pure,
puis
ARTHROPODES
577
En
glycrine'.
de
cas
surcoloration,
rgresser
faible.
chlorhydrique
D. Rgnration
[)ar
du matriel dessch.
Talcool
Enderlein
conseille le traitement par la potasse faible. Je trouve bien prfrable d'employer le lactophnol chaud ( Ftuve 37), ou
encore de faire bouillir dans le lactophnol 10 p. 100 dans
le
chloralphnol ou Talcool.
Insuccs et remdes.
Les deux principaux insuccs, dans le
montage des Arthropodes, sont l'opacit ou la transparence trop grande
qui masque les dtails.
1 Transparence trop grande.
lique ou employer un milieu
Colorer
la
le
baume.
Gomme
(p. 556).
2" Opacit.
principe, les
les traiter
les laisser
mourir d'inanition.
le
sang ou mieux,
si
il
En
faut
possible,
Le plus souvent,
l'opacit est due la rentre de gaz dans les append'un phnomne particulier aux objets dont la cuticule est difficilement pntrable
lors du passage d'un mdium peu
dense et volatil (tolune) dans un mdium plus dense (baume), le
premier sort plus vite que le second ne peut entrer; il en rsulte
un vide partiel, qui est rempli par de l'air ou des gaz provenant des
liquides employs. Cet accident est gnralement irrparable, mme par
le vide ou l'bullition. 11 ne se produit jamais avec ma mthode au
chloralphnol et il est trs rare avec la trbenthine de Venise.
dices.
Il
s'agit ici
2"
Mthodes
histologiqiies.
A. Fixation.
Employer des liquides trs pntrants, tels que le
Duboscq-Brasil (p. 285), le Carnoy (p. 284) oue Gilson (p. 284). Cameron,
Burgess, Semichon 3, etc., conseillent le mlange suivant, qui ne rend
pas les objets friables
:
Alcool
UO cm''.
70"^
Formol 40
Acide
p. 100
actique cristallisable
mikr. Terhnik,
1.
Mayer. Gninchge
2.
Zool. Anzeiger,
3.
Communication verbale.
M. Laxgeron.
XXVII,
3"^
et
p. 479, 1904.
Prcis de Microscopie.
'
^~
70.
METHODES SPCIALES
578
B. Inclusion.
coUodion et la
C'est
ici
le
Field et Martin.
traiter alors par de l'eau de
dernire en face des points chitineux
Javel qui ramollit seulement les points non protgs par la paraffine.
On peut aussi inclure la celloidine (Low).
Looss a montr depuis longG. Ramollissement de la chitine.
temps - que l'eau de Javel (p. 722) ramollit et rend transparente la
chitine des Arthropodes. On peut oprer l'bullition, mais, si on
veut conserver les parties molles, il faut oprer froid avec de l'eau de
Javel tendue de 5 vol. d'eau.
:
LINGUTULIDES
I.
mouler dans
les rsines.
II.
ACARIENS
les
maux
ment
appendices
et
le
ou
le
formol;
second durcit
Il
faut proscrire
absolu-
le
les
impossible toute manipulation ultrieure. L'alcool actifi, prconis par Benoit-Bazille % m'a i)aru infrieur l'alcool chaud.
Les
/>eiO(iex" seront
ou mieux
comdons.
l'huile
Il
examins en
de paiaffine,
la
est habituelle-
qu'en insistant on arrive tou les trouver. Ils sigent surtout la base des comdons,
parasites et
1. s. Metalnikoff, Sur v.n procd nouveau pour faire des coupes microscopiques dans les animaux pourvus dun tgument chitineux pais. AjtA. zool.
ARTHROPODES
579
dans
Kraus
se
Neelsen
(p. 694).
le
chlorallaclophnol ou dans
la
il
faut gratter
le
produit de
potasse
les petits
30
p.
100
Acariens
ren-
IXODIDS^
Ces Acariens de
du matriel exprimental.
Rcolte '^
Les Argas ont les murs des Punaises. Ils vivent pendant le jour dans les fentes troites des parois des habitations qu'ils
1. Du Bois, Recherche du Demodex
folliculorum dans la peau saine. Ann. de
dermat., n 4, p. 188-190, 1910.
2. A. Kraus, Ueber farbetechnische Methoden zum Naclnveis des Acarus folliculorum. Arch. fur Dermat. vnd Syph.. LVIII, p. 351, 1901.
3. R. Blanchard, L'Insecte et l'infection. 1*"' fascicule, Paris, 1910.
4. Je suppose connues la distribution
gographique et la biologie de ces
animaux.
METHODES SPECIALES
580
ciles apercevoir
Fig. 192.
Original.
et
il
tombent dans
On
chasse.
ARTHROPODES
581
Mthodes d'examen.
Animaux
vivants.
gorgs,
Pour
les
cela
la
morphologie
On
temps dans
cette position.
Il
ne faut luter
ils
Conservation en prparations.
trbenthine de Venise.
la
On
la
lors-
entre
mous
long-
moisissent.
Le meilleur
tue les
animaux par
mdium
est
l'alcool 70
chaud
rsine.
dices.
car ou perdrait la notion exacte des plans et de la position respective des parties -.
solidit parfaite et
et
Brumpt a remarqu que, par la dessiccation, les palpes des Ixodins s'cartent
mettent trs bien en vidence les pices buccales.
2. Les prparations commerciales prsentent souvent ce dfaut.
1.
et
Nuttall [Parasitolodij I, p. 162, 1908) traite les Ixodins froid par la potasse
colore au xylol satur d'acide
p. 100, lave l'eau actifie, dshydrate,
il conpicriquc et monte au baume. Pour obtenir un claircissement maximum,
seille l'emploi de l'acide phnique fondu. Je crois que le chloralphnol, simple
donne des rsultats de beaucoup suprieurs ceux de ces deux
ou
3.
10
salicyl,
mthodes.
Galli-Valerio
recommande
(CenfraZ6^.
f.
BakterioL, Orig., L,
p. ^02, 1909),
pour
MTHODES SPCIALES
582
Les
Ai'^asiiis, qui muent beaucoup plus que les Ixoabandonnent une dpouille qui conserve les plus fins
dtails de la morpbologie externe et mme de pices buccales. Il
est avantageux de recueillir ces mues, beaucoup plus faciles
monter que les animaux eux-mmes, qui sont souvent trs pais
Mues.
dins,
et trs
et
montes
la trbentbine de Venise.
Mthodes d'levage
Tout
le
'
.
une propret
parfaite et dans la
hygromtrique appropri. Brumpt a reconnu
a
des exigences particulires ce point de vue;
espce
que chaque
faut donc ttonner pour trouver Toptimum.
il
Comme
il
m'est
impossible d'entrer dans le dtail des cas particuliers, on se guidera sur les indications gnrales qui vont suivre.
Ixodins.
On peut partir d'un point quelconque de l'volu-
tion
uf ou animal
Pratiquer
la
rcolte
^o?'j7e (cette
comme
il
a t
est
mise dans un
petit tube, juste assez gros pour lui livrer passage; au fond on
conserver leur aspect aux gros Argasins, de les imprgner vingt-quatre heures
dans le liquide de Nastioukow (p. 453), puis de les monter dans une cellule
remplie d'huile de paraffine et ferme par une lamelle ronde colle au baume.
1. Tous les
renseignements concernant l'levage des Ixodids sont entirement
dus des communications verbales de mon excellent collgue et ami le
D""
Brumpt. Sa comptence et les succs remarquables obtenus dans ses expriences sont la meilleure garantie de la perfection de ces mthodes, dont les
dtails sont encore indits.
ARTHROPODES
met un
petit chiffon
On
de papier Joseph
et
i83
un cylindre Borrel
193), au fond duquel se trouve de Touate hydrophile recouverte deau, de manire saturer de vapeur d'eau
du
naire.
(fig.
Tatmosphre
temprature ordinaire ou on met l'luve
La ponte a lieu dans
( 25^ au plus).
les tubes et Vclosion se produit au
tube; on laisse
la
^^
les
larves
37%
larves se
en deux
gorgent.
temps
pour que
L'opration se
1 on
les
fait
met l'animal
2"^
On bouche
Quand les
le
tube au
larves
sont
fixes,
un
vase
garni
couche d'eau
d'une
et le tout est
recouvert d'une
194)
cloche, de manire assurer l'aration,
sans nuire l'tat hygromtrique. Les
(fig.
F\g. 193.
tale
Ponte
des
exprimen-
Ixodins,
d'aprs
Brumpt.
l'animal en contact
2
Quand
les para-
les excr-
1. Ceci s'applique aux larves ubiquistes. Certaines espces ne peuvent se dvelopper que sur les Vertbrs sang froid.
MKTHODES SPCIALES
584
men'is
^ Les
liil)es
comme
plus haut
Aprs
nymphes
(fig.
la
195).
mue,
les
sont mises
le
coup moins
l'avora-
bles et on a toujours
avec eux de fortes
Aprs gorge-
pertes.
ment,
cueillies
dans Peau,
schesau buvard
et
comme
prcdemment. On
fait de mme
pour
rinstalles
les arfM//P5,
toujours
194
le
Argasins.
principes
Les
sont
les
atmosphre moins
sature
et
d'humidit
supportent
trs
bienTtuve 37".
OrnithodoLes
riis
peuvent
tre
levage
Fig. 195.
des larves de Bhipar le
procd de Brumpt.
picephalus
Orif/inal.
Fig. 196.
Original.
les excrments. Si
ARTHROPODES
58:
cristallisoir
plein
gordans
ges peuvent pondre
Pour
le sable.
les
recueillir
on
jeunes nymphes^
une grande
portions, sur
feuille
on
de papier
rouler
fait
filtrer;
sable en
le
bords de
la
relevant
les
feuille et
on aperoit alors
facilement
les
nymphes
comme
Les
servs
Borrel
coton
celle des
dans
(fig.
peut aussi
faire
pondre
les
un
un
Les
traites
sont
Argas
On
cVeau et
plein
au
bouch
nymphes
au papier.
qui restent accroches
femelles dans des petits
petit tube
Fig. 197.
Argas.
sont
contubes
des
196), sur du
en
pli
papier buvard
accordon. Un petit tube,
rempli
d'eau
et
bouch
pour
Fig.
198.
larves
'.-i?'^as.
gorger
les
Orifjinal.
femelle
mettre
chaque
dans un petit tube, mais ce n'est pas ncessaire.
Les larves des Argas doivent tre gorges sur des Oiseaux. On
bac de
prend, par exemple, un jeune Poulet qu'on met dans un
METHODES SPECIALES
586
Fig. 199.
s'y
accumulent. Aprs
ment.
Orif/inal.
on
les
met en
petits tubes
ou en
du papier pliss.
cylindre Borrel, sur
Les nymphes d'Argas devront tre gorges sur un Oiseau
immobilis comme le montre la figure 199. On plume un des
lianes,
Fig. 200.
Manire d'attacher un
Singe pour
le faire
le
fond
piquer exprimentalement.
Ori//inal.
du buvard
et
on rinstalle en tubes.
ARTHROPODES
587
La figure 200 montre comment on peut immobiliser trs simplement un Singe, sur une planche perce de trous. Pour ne pas
blesser Tanimal,
nud
dont
l'animal
la
tire, le
les
liens seront
attachs aux
nud
se serre
il
membres par le
temps. Quand
les diffrents
se relche
quand Tanimal ne
2
Fig.
lire plus.
la figure.
Fi^. 902.
-201.
Manire de
faire le
nud
physiologique.
Original.
Manire
le
montre
est prf-
comme
le montre la
figure 202.
Les repas des adultes, se font de la mme faon.
Pour un court voyage
Expdition des Ixodids vivants.
de quelques jours, les Lxodes et Argas voyagent trs bien, emballs
dans du papier Joseph, dans des tubes de verre bien bouchs. Pour
un plus long transport, mettre lxodes et Argas dans des tubes de
MTHODES SPCIALES
588
III.
Pour tudier
INSECTES
les Insectes,
il
ARTHROPODES
b89
le
que par leurs vapeurs. On en imbibe un petit tampon, qu'on spare des
Insectes par une rondelle perfore de lige ou de carton, llowlett
a
^
construit
un appareil
jours.
Pour les
Modes de conservation des Insectes.
travaux de systmatique, il est indispensable d'avoir
des Insectes prpars sec -. C'est le seul moyen de
conserver convenablement les couleurs, poils, cailles,
etc., qui servent de base aux descriptions.
Les chantillons conservs dans l'alcool ne sont
bons que pour les tudes anatomiques. On a bien la
ressource de les sortir de l'alcool et de les scher,
mais les couleurs sont toujours altres et les
cailles dtaches; on dit que les chantillons sont
lavs.
Manire de piquer
les
Insectes.
Pour con-
il
Fig.
-203.
Tube
de Howlett poiinterchanson
geable pour tuer
et trop lastiques.
Les gros Insectes sont piqus directement avec les fortes pingles
piqus sur un disque ou un rectangle
de carton (ou un cube de moelle de sureau) avec une pingle trs fine
et le carton est support son tour par une pingle forte (fig. 234). Cette
:
mthode
petit
est
carton,
dcrite
L Howlett, On
III,
p. 485-489. 1911.
2.
p. 547-563, 1906.
Pcisleur,
XX,
MTHODES SPCIALES
590
Il
comme
les
Hmiptres.
au milieu du thorax.
Hymnoptres, Diptres, Nvroptres, Lpidoptres
Pour manipuler les Insectes piqus et pour
Pince piquer.
enfoncer convenablement les pingles dans les botes lig:es, il faut se
servir d'une pince piquer, dont les extrmits sont recourbes et
arrondies (flg-. 204), Il est
^^^
i
1T^^lli]]]II]I][ll]]ll]SM^!^!^^
commode
Pince piquer
'
Fig. 201.
les Insectes.
numros
d'pingles.
blanc
au-dessus
et
paraffine 60-, 80; naphtaline, 20. Ce lige paraffin est bien suprieur au lige couvert de papier.
Il faut y apporter tous ses soins, car un
tiquetage des Insectes.
chantillon d'histoire naturelle non tiquet est sans valeur. L'tiquette
la localit, la date, le nom du coldoit tre fixe l'pingle et porter
mlange suivant
vivant, etc.). Lorsque de nombreux chantillons d'une mme espce ont t rcolts en mme temps,
on peut les runir avec une tiquette collective ou en indiquant seulement pour chacun d'eux un numro d'ordre.
Les Insectes piqus voyagent
Transport des Insectes desschs.
lecteur, la station (sur
un animal mort,
1.
Deegener
{Zool. Anzeiger,
XL,
p.
-29,
1912)
met
dans de l'eau froide qu'il fait bouillir 30 60 secondes pour les tuer. Les chenilles
ne doivent pas tre jeun, pour viter les contractions. Laisser refroidir, puis
passer dans les alcools 40, 60, 90, 100, puis dans un mlange parties gales
d'alcool et de xylol et enfin dans le xylol. Scher l'tuve sur du buvard, puis
piquer avec une pingle et mettre en collection. Ce procd s'applique toutes
les larves et
pupes d'Insectes.
2. C'est ainsi que sont disposes les collections du Musum d'histoire naturelle
de Paris. Je dois ces renseignements l'obligeance de M. R. du Buisson.
3. Parasitolofiy lY, p. 174, 1911. A'oir aussi Howlett, Ibidem, III, p. 485, 1911.
,
ARTHROPODES
on veut
591
difficilement;
si
les
longs
au
(8
lige.
Enfoncer un tampon de colon bien serr jusqu'audessous du niveau du liquide (fig. 20.^), de manire
immobiliser les Insectes et empcher l'introduction de bulles d'air. Cette dernire condition
est essentielle car l'agitation du liquide avec de
Fig.
-205.
Manire
de parasitoloyie.
infailliblement les appendices. On peut
mettre plusieurs Insectes dans un mme tube.
Ne pas oublier de placer, Vintrieur du tube, une ti([uelte crite au
crayon ou l'encre de Chine et portant un numro d'ordre ou l'indication du lieu et de la date de la capture.
Ramollissement des Insectes desschs.
En principe, il est prfrable de piquer les Insectes aussitt aprs leur mort, mais souvent
cela n'est pas possible en voyage. 11 faut donc ramollir les Insectes
l'air brise
desschs, pour les piquer sans les briser. Un des raniollissoirs les plus
un cristallisoir ou un bol
pratiques est celui de Villeneuve ^ (fig. 206)
est moiti rempli de sable fin mouill, on recouvre le sable avec
quelques paisseurs de papier filtrer, sur lequel on dpose les Insectes
:
1. Certains
entomologistes proscrivent absolument l'emploi du coton. Avec un
peu de soin, on arrive en dbarrasser les pattes des Insectes sans les briser.
C'est, malgr cet inconvnient, le procd de transport le plus pratique.
2.
XXXV,
p. 45, 1?05.
METHODES SPECIALES
592
tre
gnralement.
Appareil de Sergent (fig. 207).
Indispensable pour l'tude des Insectes
piqus, sous le microscope ou le binoculaire. Se fixe la platine avec la vis de
pression
et
dans toutes
crainte
de
dtriorer.
On enfonce
le bouchon de lige
l'pingle qui
supporte l'chantillon tudier.
dans
HM IPTRES
RamoUissoir de
Fig. 5206.
Villeneuve.
Original.
parasites de l'Homme, sont assez difficiles conserver parce qu'ik sont trs voraces, et meurent trs
on ne
vite, si
les
gorge
diculus
vestimenti
Fantham
garde
les
ments de
dans
flanelle
vtements
nourrit
il
les
fois
.
c.
et
ruSSisSCUt
bien.
Reports local Governt. Board Publ. Healtli and med. malters, London,
Sries, n
2.
Appareil de Sergent
pour l'tude des Insectes.
Fig.
1.
^^
-207.
'2,
1909.
LXXXIV,
p. 506, 1912.
New
ARTHROPODES
593
D'aprs Ch. NicoUe, Tlat hvgromlrique a une grande importance, ainsi que la lempralure qui ne doit pas dpasser 25.
Ces animaux sont faciles tuer par le jene, le cyanure ou
Talcool chand. Ils se montent sans difficult dans la trbenthine
ou fendilles des
les
par
sui-
procd
Dans un grand
bac en verre, on insvant.
talle
ches avec du
Au
grain.
Fig. 208.
fond du bac, on
l'levage
Original.
le
il
Pour conserver
il
les
est parfait
On
fait
et
relever
un lam-
495). Les
Conorhinus megisius
et infcstans peuvent
en
France,
pourvu qu'ils
expdis d'Amrique
soient emballs dans des rcipients ars (botes en bois ou en fer-
trs
(p.
bien
tre
Prcis de Microscopie.
38
METHODES SPECIALES
594
lve ces
les
mme
des pontes.
DIPTRES
Pupipares.
Il
faut
Ils
saisir ces
animaux dans
le
collection.
Puces.
La
les
fait
Pour avoir
les
Puces vivantes,
il
mthodiquement
et
1. Certaines espces qui ne sautent pas {Ctenopsyla musculi, Ceratophyllus fasciatus et divers Ceratopsylla) sont plus faciles capturer que les espces sauteuses.
2. Tiraboschi, Les Rats, les Souris et leurs parasites cutans. Ai^cli. de paras!-
ARTHROPODES
et
595
essai
ou mieux
petits
si
on
du chloroforme
si l'action
seulement tourdies.
t proposes,
mais
gorges, seront
jusqu' ce qu'elles
et
les
digrer;
donc
conserves
aient
achev
Puces gorges
et
de
mortes
monter
par
les
l'alcool
employer
baume
chloralphnol et monter au
le
le
Opration
Elevage des Puces.
trs facile russir. Brumpt met les
adultes
sur
des
Souris
en
bocaux
Fig.'209.
On
une
Brumpt.
sur
Souris.
les nourrissant
D'aprs
avec du sang
dessch. Les cocons sont dposs contre les parois ou sur des corps
trangers. J'ai souvent employ un autre procd. J'isole dans un
abdomen
Non seulement on
gonfl et blanchtre]
elles
ne tardent pas
MTHODES SPCIALES
59G
On
au stade dsir.
la trbenthine de Venise.
en procdant
soit
comme
On
comme pour
Moustiques
(p.
607),
soit,
et le tordre
fait
pntrer
de pattes. Deux bouts hbres de 1 cm. permettent de plier ra})paen forme de chevalet, maintenant Tanimal en position de
reil
piquer.
On
peut
n'est ap})licable
Brachycres.
La capture des Brachycres se fait soit avec
de mousseline, soit avec des tubes de chasse.
Avec le filet, on peut
Capture au filet.
au vol ou
(fig.
deux
le filet
toffe trs
le
ruban de
du
filet
toile,
de tulle ou
du cot
le
cousu un
plus
fort
sera plus
ou moins long
le
modle que
j'ai
fait
construire
1. Noller, Dmonstration einer neuen Arbeitsmethode zum Studium der Krankheitsiibertragung durch Flhe. Centralhl. f. Bakt., Beferate, Beilage 2, LIV,
Archtv f. Protistenkunde, XXV, p. 386, 1912.
p. 251, 191-2.
ARTHROPODES
597
et
14
15 cm.
'
;
ja longueur
^^^^^^^^^^,,,,^^
le
filet,
il
cercle par un
poche
mouvement du poignet, de faon enfermer
ranimai. On le pousse ensuite peu peu vers
faut replier
sur
la
le
le
rente;
tricles),
une prdi-
La meilleure
on
couleur sera donc le vert ou le noir
obtiendra ces couleurs par teinture du tulle
avec une teinture commerciale.
Quelquefois un
Capture au tube.
lection
pour
les
toffes
noires.
trouve
large tube de verre, au fond duquel se
j^jcr.
oio
main
en
Filet
tullo
de
moustiquaire pour la
capture des Insectes.
Orii/inal.
un tampon de
dans
l'alcool
ou dans
la bouteille
tr::^
cyanure.
on l'applique
on
bouche prestement.
On
peut
le
fond
et
conserver
de
la
chasse
(fig.
-,-,..
1.
Il
On prend du
211.
Capture
conservation des
f*
Insectes vivants.
Fig.
Original.
exemple
sur 10 cm.
MTHODES SPCIALES
598
iiitrodairc
les
dans
l'alcool.
rotateur capillaire.
pour prparer l'appareil mle des Glosmtliode est applicable tous les Insectes, car la systmatique a de plus en plus tendance utiliser la structure microscopique
des organes gnitaux du mle.
1. Couper l'abdomen de l'Insecte dessch et le mettre dans un tube
essai, avec de la potasse 10 p. 100. Bouillir 15 minutes au bain-marie.
2. Laver l'eau cinq minutes. Appuyer sur l'abdomen avec" un pinceau
de martre n 1, en le roulant vers rhypopygium, de manire distendre ce dernier. Chasser compltement tout le contenu de l'abdomen.
3. Passer par les alcools, l'essence de girolle et monter au baume
de profil pour le groupe de la Glossina fiisca; en position dorso-ventrale,
Mthode de Newstead
sines.
Celte
le ventre en haut,
levage.
captivit
il
sulTil
C. R. Soc. de biologie,
2.
Newstead,
p. 13, 1911.
LXX,
p. 97-98, 191
of entomol. research,
II,
ARTHROPODES
(fig.
599
(tig.
larves.
le
nombre de
On met
Ds que
sec.
Les adultes pourvus d'une vsicule cphalique traversent, aprs leur closion, des
bouchons de coton mme trs serrs faute
:
d'tre averti,
ainsi
non
le
pro-
Fig. 212.
Dispositif pour
l'levage des larves de
Muscides dans le son
mouille.
Onginal.
seulement
conditions
diverses
Il
est
(par exemple des Lucilia) peuvent venir pondre sur la toile qui
renferme les tubes et introduire leurs ufs l'intrieur de ceux-ci.
Larves.
Le
meilleur
moyen de
dans
et
meurent en extension
On
parfaite et
on
dans la potasse,
peut
par
obtenir de belles prparations de la cuticule et de ses ornel'alcool 90'\
les vider,
biillition
1. M. Langeron,
Remarques sur la ponte du Stomoxys calcitrans et l'levage
des larves de Muscides. C. R. Soc. de biolorjie, LXIX, p. 230, 1910.
2. Pour la fixation histologique des iarves on peut employer le liquide de
alcool absolu 6, chlorovan Leeuwen [Zool. Anzeiger, XXXII, p. 316, 1907)
forme 1, formol 1, acide actique crist. 0,5 et ajouter 1 d'acide picrique pour
:
100 parties
du mlange.
METHODES SPECIALES
600
meiils. Pour tudier la forme des stigmates antrieurs et postrieurs, ou enlve ces organes avec
un rasoir et on les monte dans la trbenthine de
Venise.
Nmatocres.
Fig. 213.
positif
Dis-
pour
vantses^Mous"
humaine
tiques adultes,
liques en pathologie
phenset Chris-
P^^^'' ^^^^^'
tophers
a conduit crer
Moustiques ou Culicides
Capture des adultes.
Surtout dans
dans
habitations
les
les
Eu
posant doucement
fond
avec
et
le doigt.
(p.
588).
Pour conserver
les
animaux
garde isolment
ConFig. 214.
servation des
Moustiques
vi
petit
vants d'ans un
Un
-%uiTr^'
^1'"" C'jt
On
a rcemment fait
moyen de capture rapide.
par du tulle
(fig.
215) sert
la
capture.
1. R. Blanchard, Les
Moustiques, Histoire naturelle
de 673 p.. 1905.
2.
Adie,
A handy mthode
et
mdicale, Paris,
3, p. 55,
in-8
1911.
ARTHROPODES
601
laine de
Dans
les
pays paludisme,
il
Conservation des
pcrcje d'une
est indispensable de
capturer des
tablir le
infests de sporozotes.
absolument
air)
adultes vivants.
11
faut [iroscrire
pntrer dans
pour
se
animaux puissent
les
que
s'accrocher,
car,
sur le verre,
ils
tombent
rapidement,
meurent. On ferme le bocal avec
fatiguent
et
du
travers lequel
tulle,
les ani-
maux
soit
les
'2\h.
Fig.
Appcircil
d'Adie
(Poulet, Pigeon).
en mettant dans
faire piquer,
de mousseline,
et
un
petit
Il
caoutchouc
avec du
le
facilite
tulle,
beaucoup
tampon d'ouate.
1.
Paludisin, n
cette opration.
3.
p. 6-2,
1911.
On
orilice,
MTHODES SPCIALES
602
la larve.
On
faciles
voir,
cbappent
trs
et d'Anophles
aux
recherches,
frquemment
fin,
mthodiquement dans
effectues
on
gtes appropris,
les
par en trouver.
Ces pches sont
Pches au filet fin.
la faune des
connatre
indispensables pour
finit
Filet main,
-JIG.
en soie bluter, pour
la
poche des larves
de Moustiques et du
plankton d'eau douce.
Fig.
Original.
pour
levage,
les
les
et pour se procurer,
animaux neufs ncessaires
expriences.
tasse,
fig.
c
Fig. 217.
ture de
Arma-
pour la
pche dans les eaux
douces.
canne
c,
en bambou de 1 mtre
filet
on peut ajouter,
frottement dur, la
rallonge d de
longueur.
mme
Ori-
(jinal.
1. La soie bluter est le seul tissu qui soit assez rsistant et dont les mailles
gardent un cartement assez constant.. Le canevas ne convient pas du tout.
ARTHROPODES
603
un
fort
ruban de
fil
de profondeur.
Un
reprsent
(\g.
cercle
fix,
et
par quatre
Dtail du cercle
Fig. 218.
de la fig. 217.
La tasse (flg. 219) sera de prfrence maille et blanche l'intrieur. Les tasses en aluminium sont
trs lgres et moins fragiles, mais on y voit moins bien les animaux.
La pipette (flg'. 220) est un simple
tube de verre de 10 15 cm. de longueur, arm d'une ttine en caoutchouc.
Pour pcher, on promne le iilet
dans les eaux oii se trouvent les
larves la soie fait liltre et retient
tous les organismes plus gros que
les mailles. Pour examiner le produit de la pche, on remplit la tasse
:
Fig. 220.
Pipette
pour
le Iriage
des pches.
Original.
METHODES SPECIALES
604
Stations des larves
ciles et se
i.
Les (lulicins sont gnralement peu diffioii il y a une collection d'eau, si petite
qu'elle soit. Ces faits sont bien
connus et nous n'avons pas y
insister. La dcouverte des larves
dveloppent parlout
'2-21.
Marcages Anophlines.
Vgtation fixe, n, niveau normal
de l'eau; A, hautes eaux; b, basses
eaux. D'aprs Daniols.
Fig.
mon
toute
garnit
(fig-.
221)
la
berge
et alors l'eau
la
suit le
favorable
des larves
la
puUuIation
d'Anophles,
principalement sous les tro-
piques.
2-23.
Original.
1.
11
mme
nymphes.
dit
ARTHROPODES
605
Fig.
^2i.
pli
sans dmontage.
Original.
les
les
nymphes s'accommodent du
morceau de
un bocal
tulle,
niais,
demi
pour
la
combin un mo-
emporter en
ayant
cm. de
2-25.
Cage pour Flevage des Moustiques.
Bti pli, aprs dmontage partiel de deux
montants verticaux.
Original.
Fig.
tulle,
petites faces
fil.
Une des
METHODES SPECIALES
606
et
le
bras
226).
installe
un ou plusieurs vases
(cristallisoir,
et
Si
cela
est
vivaient les
possible il est bon d'employer l'eau dans laquelle
leur
avoir
et
doivent
sont
trs
voraces
larves. Celles-ci
disposition un plankton
Conser-
suffisant.
p^rvT^feferK!^
)ap?s
veries levages de
larves en pleine
'*-'L^''''*''
lumire
^
ii?
S-'
it
non au
et
soleil.
Se mtier
ennemis des
des
lar-
ves,
aussi
faut-il
trier
avec
soin la
rcolte la pipette
et enlever tous les
autres
Fig. 226.
animaux
la
cage,
tube de
tuer
un Moustique
quelques
durcir
aussitt
aprs
son
mais attendre
closion,
heures
forme.
p.
601.
Ils
se reporter
peuvent gnralement
aux indications
faire leur
premier repas
la
ponte
ARTHROPODES
sont les femelles gravides
On
(ig.
227)
les inslalle
du verre de
607
on
fait
(fig.
la
213), qu'on
surface de
Teau,
moyen
sur
c'est
le
un bon
papier;
d'avoir des ufs A' Anophles.
On
Elle
^xg. 221.
Aspect
femelle gravide de
tique, a, de profil; h, de
f^ce. D'aprs stephens et
'
sporozotes des
Plasmodium.
Il
dune
Mous-
christophers.
ne faut
Anophles
infests,
dans
les endroits
deux bonnes
fond noir
et
aiguilles
blanc
(fig.
Fig.
emmanches, un
228.
Fond noir
et
228) prpar en
une
feuille
de verre.
3.
1.
En
le jabot,
au-dessous les
ovaires.
dissection ne peut tre etfectue que sur des Moustiques frais, venant
d'tre tus. Les chantillons conservs dans l'alcool sont inutilisables.
3. D'aprs Perry {Paludism, n 5, p. 4i, 1912], la bile facilite beaucoup ces
manipulations. On en tend une gouttelette sur la lame, avant d'ajouter l'eau;
celle-ci s'tale parfaitement sur le verre dgraiss par la bile.
4. Stephens, Methods for detecting sporozoits and zygotes in Mosquitos infected
2.
La
reseai^ch, II, p.
1-8,"
1911.
METHODES SPECIALES
608
lique
sa/' le
Avec
suprieure
de l'sophage, encore altache au
jabot rempli de bulles gazeuses, et
couper aussi l'intestin au-dessous
des tubes de Malpighi.
6. Enlever tous les dbris,
ne
soin
1.
atteindre 40-60
On
ij.
dislingue trs
de
Fig-. 2-29.
tif des
et Cliristopliers.
Coloration.
fixer l'estomac
Le mieux
est
au Bouin ou au
Duboscq-Brasil, de l'inclure la
paraffine et de colorer les coupes
rtimatoxyline ferrique ou au
Romanovsky. On peut encore desscher l'estomac sur lame et colorer
au Romanovsky,
de sang-.
comme un
frottis
3.
ment dans
4.
Arch.
II
1.
p. 1000.
On peut
l'eau formole.
f.
Scliiffs-und Tropenhygiene,
XV,
p.
513, 1911.
ARTHROPODES
600
le
(ou
la
glandes.
3. Couvrir d'une lamelle et examiner en
Les digitations des glandes sont bril-
diaphragmant fortement.
lantes et rfringentes.
4. Sparer les glandes de la tte.
Poser l'aiguille gauche sur la tte et
dilacrer la petite masse blanche avec
l'aiguille droite.
peu de liquide
Il
et veiller ce
que les
glandes n'adhrent pas l'aiguille.
.5. Faire un frottis avec les
glandes,
scher rapidement et colorer au Roma-
cienne mthode.
novsky.
Ancienne mthode,
sment le segment
ainsi
Ce
isol.
Couper en
soigneu-
pro-
cd peut servir, au
cas o la mthode de
russi et o
arrach la
sans
tte
les glandes.
Mthode
Presser surd'Eysell.
thole
en g
les
et/,
pour sparer
deux moitis
qu'
la
tte.
Fig. 231.
jus-
salivaires.
Fixer
en la transflxant en h et extraire
la tte
1.
Eysell,
les
glandes
salivaires
avec
l'autre
aiguille.
M. Laxgero.n.
Prcis de Microscopie.
39
II.
METHODES SPECIALES
610
dissection,
comme
les
chercher
et
novsky
les
sporozotes.
Collections
de
Moustiques.
Les
Moustiques conservs
dans Talcool (lig. 205)
sont gnralement peu
soit
utilisables,
parce
23-2.
Procd de
la bote d'allumettes
pour
la conservation et l'expdition des Insectes fragiles. Manire de disposer les chantillons dans
le tiroir
sibilit
ensuite.
Lorsqu'on n'a
pas le temps ou la posde les piquer, le mieux est de les conserver par le procd
des botes d'allumettes on garnit
:
le tiroir
comme
ligures 232
de
tirer le
Insectes.
et
233,
tiroir
On
le
montrent
et
les
permettant
peut en mettre
]lu-
Fig. 233
de papier.
sissures;
tiroir,
sous
la
ouate,
AHTHUOPODES
quelques cristaux de naphtaline.
611
bande de papier.
Pour piquer les Moustiques ainsi desschs, mettre sim])lement
le tiroir ouvert au ramollissoir (iig. t^06). On peut alors enlever
les
(fig.
1) et
234,
x?^
la
gueur
4.
<c^
2.
de tourbe avec
le disque et piquer
Moustique exactement entre les
pattes, de manire ce que l'pingle
ressorte de 1 millimtre environ sur
le dos, bien au milieu du thorax
le
(flg.
5.
234, 2 et 3).
Retirer
portant
le
doucement
la
micro
discjue et le Moustique,
prendre
une
le
Fig. 234.
piquer; b, pingle
carton; d,
c, rectangle do
ou d'agave. D'aprs
de
tourbe
plaque
gles. a, pince
micro;
Daniels.
Le Moustique
est ainsi
solidement
fix
au
petit appareil
form
et les
-^
On trouve dans
qu'il suffit
A System of mounting,
sujet
n" 3, p. 57-61, pi. III, 1911,
:
METHODES SPECIALES
612
et mme ponr
procd excellent pour le transport, Texpdition
la dmonstration, car il permet de faire circuler les chantillons entre les mains des lves.
Ne
minimum
de manipulations et
Un Moustique
incorrectement piqu, mais intact, vaudra toumieux qu'un Moustique bien piqu, mais
viter avec soin les frottements.
jours
de ses cailles.
qui a perdu une partie
Em-
ou
ployer
son dfaut un bouchon coll sur une lame,
Texamen au microscope ou au binocul'appareil
de
Sergent
(fig.
207)
pour
laire
Les ufs
Prparations microscopiques.
seront monts au lactophnol ou la glycrine
seront
glatine (p. 442). Les larves et les adultes
tus dans Talcool et monts la trbeuthine
SkionsFig. 235.
tique piqu par la
Ori-
de Venise. Pour
la dissection et la sparation
des pices buccales, ramollir dans le chloralphnol et passer directement au baume. Ne
bouillir
jamais
dans
la
potasse ni
larves ni
gorgs.
Petits Nmatocres.
Psychodids.
maux domestiques
on
les
trouve donc
dans
les
maisons, mais
ils
pendant qu'ils piquent. Les larves et nymphes sont extraordinairement difficiles dcouvrir; il est probable qu'elles se dveloppent
dans
les crevasses
recherches de Newstead
faire
pour connatre
la
et
ARTHROPODES
On
les adultes,
Gnralement on
trs dlicate.
fre la
613
les
dcouvrir dans les eaux cours rapide, sur les pierres et les
herbes. L'levage des larves en captivit est difficile raliser, parce
que Teau courante est indispensable; mais Tclosion des nymphes,
petit filet
tillons
dans l'alcool
et
monts au baume.
Chironomids.
Ge groupe renferme un
trs
grand nombre
vivent dans la sve qui coule des plaies des arbres (Ormes); j'ai
fait connatre des larves d'Orthocladius
qui vivent dans les sources
'
incrustantes, jouent un grand rle dans la formation des tufs calcaires et dont les traces se retrouvent jusque dans l'ocne infrieur.
comme
les
Simulids.
Ils
sont gnrale-
ment
mme
dans
les
eaux cou-
manire.
HYMNOPTRES
L'levage des Hymnoptres parasiles des Insectes nuisibles aux
plantes cultives (Gochenilles, Ghenilles, etc.) a t ralis par un
grand nombre d'entomologistes et d'agronomes amricains et franais
^.
Texas,
a
METHODES SPCIALES
6d4
la
Pommier,
Canne
etc.
d'une
toile
auxiliaires
utiles et
dans
E.
Brumpl
parasite
des
dcouvert,
en France, un
petit
c'est
Hymnoptre
VIxodiphagus
faite lui a
il
Ixodes ricinus^
Hymnoptre,
infester
HxmophysaUs concmna
exprimentalement
et II.
l'Homme,
la
^
propose de tenter Tacclimatation de VJxodipharpis Caucurtei
dans les Monlagnes Rocheuses, o il pourra trs probablement
trouver des conditions d'existence favorables. C'est la premire
fois
qu'on
pathologie
propose
un
humaine
ou
semblable
moyen
Les
animale.
])roi)liylactique
milliers
de
en
nymphes
d'IxodidsqueBrumpt
nymphe
prconise pour
les
Tiques
(p.
583).
il
Quand
infeste
il
pivoit que
un Hrisson avec des
1.
2.
CHAPITRE
III
PLANKTON
Il
lie
mme sommaire
Pche du plankton.
la
faune
et
de
soie hlulcr
XXX,
extra
et
retiennent
de
une
tasse,
la p-clie est
ou bien on peut
Prparation et triage.
trier les
taille.
Pour pratiquer
dans
De
la
la
que celui de Francotte^, qui est trs simple, trs ingnieux et trs
pratique (fig. 236). Le filtre pipette se compose d'un tube D qui
Consulter, par exemple, ce sujet
Steuer, Planktonkundc, IVUO etLeitfaden
Planktonkunde, 1911.
de
et
C, 39, rue Jcan-Jacques-Rousseau,
Renaud, Levque
Catalogue
Paris. Certaines maisons anglaises, par exemple Flatters and Garnett. 3-2, Dover
Street, Manchester, fabriquent des appareils trs perfectionns, pour la pche du
plankton d'eau douce.
3. Francotte, Appareil pour la prparation et le triage du plankton. /hdf.
Institut ocanofi ra phiqne de Monaco, n'^ 2-2^, 2c> janvier 1912.
1.
(1er
2.
METHODES SPECIALES
616
mme un
numro
bluter de
appropri,
retenu
tube
le
'
Le llankton
ration.
On comprend comment E
si
pleins d'eau,
se produit en
il
amorce
liltration
le
Fig. -236.
Appareil de Fran
cotte pour le triage du plank
le
tube
le
plankton
g^
pour
Fran-
cotte
pour la
flxation
du
restant
au
pour remettre
triages, faire
la
la
le
Appa-
de
trois fois
un appareil qu'on
main gauche, pendant
pipette T de la main droite.
Lorsque tous les animaux sont
les
rassembls dans
reii
aspiration qui
On
qu'on dirige
Fixation.
Fig. 237.
siphon.
tant
P\
tube D,
peut laisser la
ou
en pinant
bien,
s'oprer
saisir par aspiration tel ou
le
vivement deux ou
et l'enfoncer
en
le
s'coule de
se colmate, par
filtre
T une
et
tel
le
tube,
on soulve
laisser couler la
l^^rmtiquement
majeure partie de
le
tube
G avec
l'eau, fei'mer
l'index
(fig.
237)
plankton, flottant dans quelques centimtres cubes d'eau -, dans le vase H renfermant
ct porter le
Le tube de caoutchouc a
11 mm. de diam.
le tube Ta IQ mm. et est effil
Ces dimensions varieront suivant la nature du plankton.
2. La plus
petite quantit possible pour ne pas diluer trop le fixateur. 11 ne
faut pas non plus que les organismes collent la soie bluter.
1.
la partie infrieure.
PLANKTON
617
le lien
pousser
et Tagiter
d'habitude.
Fixateurs.
Flemming
faible
Tous
'
conviennent, notamment le
sublim saturation. Francolte emploie
les fixateurs
le
et
aussi le liquide de
faible et
nismes.
ont propos rcemment l'emploi de la
Yaney
c/uinone 24p. 1000. Ce ractif doit tre frachement prpar
Meunier
car
il
et
et
les prparations
colorante
microscopiques.
55 cm3.
20
20
Eau
Alcool 90
Glycrine
Formol 40
p.
100
Vsuvine
Vert malachite
Solution B, conservatrice
0,05 cgr.
0,10
50 cm3.
20
30
Eau
Alcool
Glycrine
2.
3.
A.
4 juin 1910.
4. Bail. Institut
la
quinone.
ocanographique de Monaco, n
C.
140, 1909.
R. Soc.
de biologie,
METHODES SPECIALES
618
la
table de
celles de la figure
15
10
238
et
mesurant
du
soit la
faut, chose
rcipient,
oublie
souvent,
qu'on
trop
prserver
taille
il
les
Fig. 238.
Un bon moNcn
tout.
un
de
raliser
en
recouvrant
clairage oblique,
l'aquarium
d'une
gaine
de
hermtiquement, de faon
Rotifres.
Les l^otifres ont une grande importance pour caractriser les
planktons d'eau douce. De Ccauchamp a donn des instructions minutieuses et trs pratiques pour leur prparation. Les formes plagiques
sont pclies au filet fin; pour recueillir les formes non plagiques, on
transporte au laboratoire, dans un linge mouill, des plantes aiiualiques, en choisissant les formes flottantes {NupJtar, Nympha) ou feuilles
'
trs
on
les
1. P. de
P.eauchamp, Instructions pour la rcolte et la fixation en masse des
Rotifres. Arch. de zool. e.rpr. et r/nrnle, 1, IV, Notes et Revue, p. xwii-
XXXIII. 1906.
PLANKTON
619
est
Chlorhydrate de cocane
Alcool mlh}lique pur
10 cm^.
Eau
10
distille
gr.
Quand
ou en papier.
Foraminifres.
Ces animaux sont presque tous marins. On se les procure en pchant
filet fin et en examinant des boues marines convenablement choisies. On les fixe - soit aux liquides picriciues (Bouin ou Duboscq-Brasil),
soit au sublim alcoolique, soit l'acide osmique I p. 100 3. On colore
l'hmatoxyline alune ou ferrique, au carmin alun, la safranine, etc.
On peut dissoudre les carapaces dans l'eau de Javel ou dans les les-
au
sives alcalines.
Debes
mercure
'
isole
et
les
animaux par
de potassium)
et
la liqueur de Thoulet
(iodures de
prconise des procds particuliers de
-^
montage.
On, dans certains cas, avec la stovanc 1 p. 100 nie Beauchamp). Voir
mthode d'auesthsie sous lamelle, applicable aux Rolifres et
autres organismes du plankton.
Voir p. 617, les mthodes gnrales de fixation du plankton, et notamment la
2.
mthode la quinone de Meunier et Vaney.
1.
aussi p. 5o7, la
4.
p. 370-37-2, 1911.
5.
Voir
p. 56r>,
note
1.
620
MTHODES SPCIALES
Radiolaires et Hliozoaires.
Pour ce groupe, comme pour le prcdent, nous ne pouvons donner
que des indications trs sommaires. La recherche de ces animaux
exige du temps et de la patience. Il faut examiner minutieusement les
(jui se trouvent sur les vgtaux aquati([ues et sur les dbris
vgtaux pourrissant dans l'eau. Le plus grand nombre sera captur
en pchant au lllet fin. La majorit de ces organismes vit dans la mer.
Tous les auteurs qui ont tudi des genres de l'un ou l'autre de ces
groupes ont conseill des mthodes particulires dont nous ne pouvons
donner ici l'numralion complte. Toutes se ramnent l'emploi du
sublim alcooliijue, de l'acide osmique, du Duboscq-Brasil ou du Flemming comme fixateurs. On colore avec des teintures d'hmaloxyline
ou de carmin.
dpts
CHAPITRE
IV
HM
ATO LO G Q U E
I
la prise du
sang, Y exacolorations vitales, la mthode des frottis
mthode des frottis humides et enfin la numration
men
Viat frais,
les
desschs, la
des divers lments du sang.
de prfrence
La piqre
la face
doit
et
aprs
la
prise de sang.
METHODES SPECIALES
622
Les pels Rongeurs (Rat, Souris) seront saisis par la peau du cou avec
une pince hmostatique ou une pince kyste (fig. 230). On accroche
l'anneau un clou, un boulon de tiroir, etc. On saisit la queue de
l'animal, en tirant assez fortement et on sectionne l'extrmit. Pour
l'hmostase, brler la plaie avec une veilleuse de gaz, une allumette,
un fer rouge, etc. Pour les virus dangereux, voir p. 494 le procd du
sabot et de la plaque de carton. Chez le Cobaye et le Lapin on fend
lgrement l'oreille. Cautriser au fer rouge.
Chez le Singe, on prend de prfrence l'oreille (p. 494 et 519).
Pour saisir ces animaux, revtir la main
droite d'un gant d'escrime et plonger
rsolument le poing ferm dans la cage
acculer l'animal dans un coin, s'il mord
:
lui
prsenter
ct
le
peut ter
Chez
le
gant.
la
i, on pique
veine qui runit le membre postrieur
la queue et qu'on voit par transparence
travers la membrane.
les Chauves-Souris
Les
Pince pour
Fig. 239.
les petits Rongeurs.
saisir
chez
le
les
Lapin.
Comte
{7in.
Chauves-Souris au chaud
2, C. Ji.
Soc,
biol.,
LV,
{2z>)
Inst. Pasteur.
et
p. 815, 1903,
623
risque de
externe, les repres anatomiques sont les mmes que pour le Cobaye.
Chez le Chien, prendre la petite saphne ou veine externe du membre
postrieur; elle est facile trouver, la partie suprieure du tendon
d'Achille. Ne pas inciser la peau.
Chez les Oiseaux, prendre la veine axillaire ou celle de la patte (p. 519)
au genou.
Chez l'Homme, la ponction veineuse est trs facile faire, sans danger
non douloureuse. Choisir le pli du coude, ligaturer le bras, faire une
application de teinture d'iode, ponctionner la mdiane cphalique
avec une aiguille d'acier neuve, de calibre un peu fort et bien permable.
Enfoncer progressivement (le dbutant enfonce toujours trop et dpasse
la veine) et s'arrter quand on voit sourdre le sang. L'aiguille doit tre
dans l'axe de la veine et presque parallle la peau, la pointe dirige
vers le haut du bras. Adapter
la seringue et aspirer ou laisi
ser simplement le sang couler
et
par
dtruire
orifices.
le
Il
masser pour
paralllisme
est
un pansement.
des
inutile de faire
MTHODES SPCIALES
624
parasites.
la
paraffine ou
Border la
la
pour empcher
vaseline,
dessiccation.
en rouleaux au lieu de
On
recherche
s'taler.
ainsi
formes pigmentes
les
Trypanosomes,
des
Plasmodies
spirales et lesFilaires.
les
organismes
11
peut rendre des services pour
tudier les dformations globulaires mais, part les hmoconies',
ne montre gnralement rien de plus que Texamen en lumire
Emploi du fond
noir.
fait,
la
manuvre du
diaphragme.
Les hmoconies sont particulirement abondantes aprs ingestion
de matires grasses et chez les jeunes Mammifres au sein.
Coloration vitale.
Trs
utile
a. Mthode de Pappenheim.
Faire une solution alcoolique concentre
avec le colorant, en taler une goutte (comme pour un frottis de sang),
sur une lame bien propre et flambe, puis scher. On peut prparer les
lames d'avance et les conserver Fabri de la poussire.
Dposer une goutte de sang sur la lame ainsi prpare, recouvrir
d'une lamelle assez large pour que le sang n'en atteigne pas les bords.
Les meilleurs colorants sont le bleu de crsyl brillant, Tazur II, le
sudan
III
les bleus
625
deux solutions
C
l
l
-).
Prparer les
Sudan
0,04 gr.
111
Alcool absolu
10
0.02
Brillankresylblau
Alcool absolu
10
rentiel
sudanophiles)
philes).
e.
vitalit
1. Gaz. hebd. sci. md. de Bordeaux, 29 nov. 1908 et passim, 1909 et 1910.
Folia hspniatolorjica, Archiv,
Arch. maladies cur, vaisseaux, sang, III, 1910.
C. l. Soc. de bioloffie. LXX, p. 247, 1911.
X, 1910.
di
1901.
Torino, p. 180,
2. Giorn. R Accad. di med.
3.
les
polynuclaires
i
-
et les
M. Langeron.
Levures incluses
et tablir le
Prcis do Microscopic.
rapport
^'
Levures
r-r.
polynuclaires
*0
METHODES SPECIALES
626
/.
le
brun acajou.
lations
Frottis desschs.
logie.
Prparer
dans
conserves
(p.
l'alcool
90"
melles 22
comme
il
haut
(p.
621).
ronde
et
le sang a tendance se
coaguler ou s'taler autour de la
plaie, bien essuyer la peau et faire
,,
SOUrdrC UUC UOUVelle gOUttC par UUC
Lorsque
Fiff. 241.
de sang;
le
prsenter
doit
aspect que
termin.
D'aprs Langeron in Archives de
pressiou
lgre.
^
,,
ij
,r
Confection deS frottlS.
parasitohMjie.
IcmpS
tis
e,
frottis
ClUq
n-
sang
de
la
b.
lamelle.
avec
petit ct en contact
de sang
la
lame, au point o
ait
fus
(fig.
241,
c)
627
par capillarit
tout le loug
cl.
Tirer la lamelle (fig. 241, d), eu appuyaut lgreiiieut, de
faon taler le sang eu couche mince et uniforme. 11 y a deux
ou bien on tire la lamelle de gauche droite
faons de procder
:
et alors les
241, d),
rouler
ni
comprimer
les
l-
de
tirer la lamelle
et
sans s'arrter
ni se reprendre.
et
des parasites.
complet
1
Mince
les
frottis.
Il
doit tre
mince
Complet
la
et spars les
ne pas
/Ve
frottis.
la
MTHODES SPCIALES
628
et
microscopique.
Autres procds.
En cas de besoin, on peut faire le frottis avec une
aiguille (fig. 243) ou avec une autre lame, dont on a cass un coin, de
telle sorte que la couche de sang n'alteigne pas le bord de la premire
grasse.
2. Le frottis se termine par une ligne droite et paisse
goutte de
sang trop grosse ou lamelle trop appuye, ou encore on s'est repris
plusieurs fois et on a tir la lamelle en hsitant.
3. Le frottis se termine par de grandes dentelures ou de longs pro:
pays chauds.
Frottis
pais.
Ce procd, d Ross^,
en
trs petit
nombre. Dposer
sur une lame plusieurs grosses gouttes de sang (fig. 244, a),
les runir en une seule nappe
(fig.
244, 6)
Sans fixer,
Giemsa dilu
et laisser scher.
colorer par le
(1
Fig. 244.
la
Excution
dun
dist.),
frottis
pais par
Frottis
1.
2.
humides
-.
En
qu'il
donne des
1,
1903.
629
'
Ils
trs
se
En
conservent
il
voyage,
ne
enferms
l'abri
mesure
qu'ils
vieillissent;
(hmatine-osine,
triacide d'Ehrlich.
bleu polychrome)
ces
ils doivent passer main:
tenant dans
spciales.
prcises et
\.
2.
constantes,
Pour
METHODES SPECIALES
630
tiques.
On
chromatine des Protozoaires, corps en demi-lune, hmaties granuleuses) que les autres mthodes ne peuvent
pas mettre en vidence.
Qu'il s'agisse
logique ou de
zoaires
(p.
la
par
la
mthode panoptique
de
zoaires
et
les
granulations
azurophiles,
d'un
Fig. 245.
frottis
les
absolu.
par
l'alcool
sont violacs.
Procds particuliers.
Original.
le frottis (cinq minutes dans l'alcool mthydans l'alcool absolu, fig. 245), laisser scher, puis
Hmatoblastes.
les
ouvrages,
mthode de
et le
Contrairement
hmatoblastes
la
1.
chez
trs
faciles
dans certains
colorer par la
prparations colores
de
sont
ils
l'tat
normal, chez
le
trs caractristiques.
Lapin
comme
et surtout
631
On
soit
dans des
frottis
ordi-
numration
technique
Ayuaud
Le
'.
exacte par
assez
la
est
plus prcise
fait capital,
la
et
que les
donc indis-
est
Prlvement.
Seringue en verre de 5 cm^, avec aiguille d'acier de
mm. de longueur et de 1 mm. 7 de diamtre. Aspirer 2 cm^ de
citrate de sodium 10 p. 100 pralablement strilis. Dsinfecter la
peau avec un liquide aqueux (pour viter la vaso-constriction). Ponctionner rapidement la veine, pousser un peu de citrate, puis aspirer.
Verser le sang- dans un tube paraffin ou dans le fixateur.
Laisser sdimenter, puis prlever du
Examen l'tat frais.
plasma et examiner en goutte pendante, sous lamelle vaseline. Les
hmatoblastes apparaissent sous forme de petits fuseaux trs ples.
Frottis desschs faits avec le sang citrate. Le RomaColoration.
2
novsky russit seu/. On peut aussi fixer le sang en masse avant de l'taler.
hmaties
Elle est destine a tablir le rapport
Numrations.
^hmatoblastes
15
.,,,,,.,
= ^.
est
Il
comme
indispensable de recueillir
seringue, en laissant
numrer
le
l'aiguille pour
les hmaties. Ajouter
sodium
Formol 40
p. 100
un peu
10 gr.
5
Q.
distille
remplir
Chlorure de sodium
Eau
s.
et de numration
1. Aynaud. Le globulhi de l'Homme. Mthodes d'observation
52 avril 1911; Annales de V Institut
applicables en clinique. Progrs mOical,
Pasteur, XXV. p. 56-78, 1911.
100 avec
2. Par exemple dans un mlange de 9 cm^ d'acide osmique 5 p.
5 gouttes de sang dans
1 cm' de citrate de sodium 10 p. lUO. On fait tomber
colorer au
10 cm- de fixateur. Centrifuger deux fois, taler le second culot et
Romanovsky.
de
3. Aynaud, Mthode de numration des globulius de l'Homme, C. R. Soc.
Brodie and Russel, The enumeration of blood platelets,
biolorje., 18 juin 1910.
Journ. of pliysiolof/ij, XXI. 1807. Helber, Zhlung der Blutplattchen, Dtsch.
Archu:
f.
klin.
Med.,
LXXXl,
1905.
MTHODES SPECIALES
632
le
rapport
j-.
Pour connatre
ce rapport.
mieux sur
une
cellule de
rappeler que les parasites du sang sont rarement isols. Ne pas oublier
que le buvard, avec leijuel on sche les prparations, peut transporter
d'une lame l'autre hmaties et parasites. Les dbutants se mfieront
des prcipits colors.
2 Corps trangers d'origine interne.
Dans le sang frais hmaties
crneles, vacuoles (quel([uefois trs trompeuses), granulations issues
des leucocytes, hmaties altres par le chaulage (intentionnel ou
accidentel),
hmatoblastes, hmoconies,
corps
flagelliformes indter-
mins.
anneaux de
125, 1911.
2.
1911.
C. H. Soc. de biologie,
p. 588-596, 1911.
des
sciences,
LXX,
Conr/rs
p. 43-1,
de Dijon.
633
'
et azurophiles).
d Hmatozoaires nouveaux ou
Brumpt, 1910. Corps de Hfer, corps
douteux.
Sergentella Iiominis
de Howell et Horrocks, retrouvs
par Balfour2 chez l'Homme (extra ou endoglobulaires, forms d'une
masse centrale colornble en bleu, entoure d'une capsule rose).
A ces causes d'erreur, on peut ajouter celles qui ont t signales
rcemment par Schilling-Torgau 3. Je ne suivrai pas cet auteur dans ses
N U M R AT
L'appareil de numralieu le plus rpandu est celui de Thomamais le meilleur, mon avis, est celui de Malassez. L'ap-
Zeiss,
d'Hayem
pareil
pratique que
A.
Cet
pour
les
humide
un
excellent instrument,
mais moins
Appareil numration de
appareil
les
est aussi
comprend deux
pipettes
Thoma.
pour
dilution,
Tune
planes.
1.
p. 457-462,
1912.
2.
3.
Loco
XXII.
Schilling-Torgau, Ueber die Bedeutung neuercr hamatologischer Befunde
citaio, p. 332-365, pi.
und Meihoden
1,
p. 87-99,
Centralbl.
f.
pi.
fiir
VU,
METHODES SPECIALES
634
boule correspond
\g^
La
p. 100.
tige porte,
faibles
plus
1
(lp.200,
p. 300, etc.).
La pipette des
cocytes est la
large; elle est
que du
a-.mrigoasr<igimT.Tmmffii'.m:!KiifiTOmimiCTrrgra^^^
-216.
Fig.
Chambre gradue ^
est
mar-
reprsente 10 parties
pour la boule et une
Compte-globules de Tlioma.
donc
Examiner d'abord
la
pour
partie
la
leu-
plus
tige;
10.
p.
la graduation avec un
grossissement d'environ
200 diamtres (diaphrag-
mer).
Des
(fig. 247),
fines
stries
qui se coupent
carrs
:::4i:::^::^::^:
mm.
ont 1/20 de
qui
de
petit carr a
Chaque
une surface
de 1/400 de
mm.
ct.
carr
1
I
Il JZ
ZL
Soit 10 le
nombre
d'h-
chambre de
facilite
trs gale
635
la
4 000
suivante
nombre de
compts
Il est parfait,
lorsque la boule de verre
n'adhre pas la paroi. 11 faut donc, inimdiatcrnent aprs la numraLion
1. Adapter le caouthouc la pointe et souffler le reste du sang dilu.
2. Aspirer de l'acide actique tendu.
3. Laver l'eau distille plusieurs reprises.
4. Laver l'alcool absolu deux ou trois fois.
5. Laver l'ther deux ou trois fois en le laissant couler, sans
:
souffler.
Si
dilution
(2 fois).
Ne jamais
dernier par digestion artificielle (p. 260), 37, avec une solulion de
gr. 1 de pepsine pour 100 cm'^ d'acide ehlorhydrique 1 p. 100.
Laver les chambres gradues l'eau distille puis l'alcool.
Sulfate de
Eau
Formol
1.
Piquer
sodium
5 gr.
100
distille
40 p.
100
cm^
la face dorsale
la
lymphe
(p.
621).
METHODES SPECIALES
636
2.
Poser
la
la
y en
a,
p. 100)
1 p. 200)
pour
le
sang
pour
le
sang
recommencer
l'opration.
choisi.
4. Aspirer rapidement le liquide de dilution jusqu'au Irait 101
exactement. Enlever doucement le caoutchouc. Il ne doit pas y
Fig. 218.
Compte globules de Thoma-Zeiss. E, perle de verre
la pipette; G, tube do caoutchouc; M, embout d'aspiration;
il
r.
la
S, extrmit
de
coupe de
la
6,
rigole; B,
chambre
chambre gradue;
faut
recommencer
l'opration.
5.
Tenir
le
deux ouvertures de
la
pipette et
la tige (2 gouttes),
la cellule
gradue.
la
lame
et
le
637
tre
uniformment
distribus dans les carrs. Si ces conditions ne sont pas exactement ralises, laver et scher la cellule et remettre une nouvelle
goutte.
Attendre que
8.
hmaties dans
le
les
plus grand
Pour compter,
mm\
carr,
compter
en suivant
la
ligne
du haut
et
De cette manire on
mmes lments-.
est
en
violet.
Verser
le
p. 1942, 1910)
dilue
p.
10
avec
actone,
;
osine 1 p. 100, 10:
grossissement, dans une
y a de 100 200 osinophiles par mm'.
le
liquide suivant
numre un
il
faible
MTHODES SPCIALES
638
horizonlale car
le
boucher au coton
la
Il
est
Lon de
cet accident.
3.
Essuyer
4.
Fermer
la pipette et affleurer
la
pointe avec
le
5.
et
Aspirer lgrement
commenc aspirer. Tenir
jusqu'au
Le
trait
exactement au
doigt et
ne retirer
la
chiffre 1.
plonger dans
le
liquide.
doigt qu'aprs avoir
horizonlale et remplir
le
pipette
11.
reste
mais, cause
Fig.
219.
Chambre
compresseur
de Malassez.
gradue
la
chambre gradue,
400
carrs. Lorsqu'on a
dilu au 1/10,
par
100
leucocytes
le
chiffre
correspond
1/100
permette d'avoir dans
ig.
248,
h pipette,
Thoma-Zeiss;
au 400'\
On
mm
de
le
trouv,
car
de multiplier
chaque
carr
c).
B.
1.
de
il
du compte-globules
Compte-globules
dite
elle
obtient le
de Malassez.
mlange au
1.
le
tube
639
La chambre gradue {iig. 249) est enchsse dans une plaque mtaltrois vis qui font saillie et sur lesquelles
lique. L'paisseur est rgle par
vient s'appuyer la lamelle; la saillie est de 1/5 de mm. Cette disposide la chambre en verre de
permet une construction beaucoup plus
la lamelle repose seulement sur
prcise, mais encore, par le fait que
trois pointes, il y a moins de danger de voir un corps tranger s'interde la cellule et causer de grosses
poser, venir augmenter l'paisseur
tion est,
mon
elle
diminues.
Le
quadrillage est
un peu
diff-
face
plifie
normment
les calculs.
les uns ne
Fig. -250.
Aspect d'un rectangle de
la cliambre
sont pas subdiviss, les autres sont
gradue de Malassez.
^^ng normal, dilution au 400.
traverss par des lignes horizontaies ou verticales, d'autres enfin
sont subdiviss en 20 petits carrs. C'est dans ces derniers seuls qu'on
compte
les
globules rouges.
Prise de sang.
Oprer comme il est dit plus haut.
Diluer au 400' (division 4) pour le sang normal et au 100'^ (division 1) pour les sangs anmiques.
1.
2.
Mise en prparation.
la
avec
le
manche
compresseur portant
la
lamelle
frappant lgrement
le
Numration.
Attendre que
les
METHODES SPECIALES
640
Pour
la
dans un rectangle ^ Si
la
chambre
est
chiffre
le
Pour
et
prendre
le
chiffre
moyen.
Pour plus
d'exactitude, compter
deux
fois
Faire
la
moyenne.
Numration des leucocytes.
prendre
et
se
les
un
mm%
suffit
il
sol.
les
p.
L'hiifatocrite
hmaties par
se
dilution,
On
peut aussi
le
p.
100
On
peut aussi
liquide actique indiqu p. 634.
violet
penlamthyl.
Hmatocrite.
et
Fig. 251.
Il
la
mm\
100 de
G.
centrifugation
rec-
correspond
aq.
hmolyser
surface
lOO*"
comme
nettement
les colorer,
de
les leucocytes,
cent
les
nombre de leucocytes au
le
un mlange au
trouvent dans
compter
globules qui
tangles subdiviss ou non. Gomme cette
pour avoir
plus de rectangles et
(lig.
251),
641
On remplit rapidement
pipette spciale.
dans l'armature,
zro en dehors;
le
il
les
est essentiel
rouge
la
tin
de l'op-
srum, sinon
il
Les rsultats obtenus sont trs suffisamment exacts et toujours comparables, condition que la longueur et le diamtre des tubes soient
Fig.
-202.
la mme vitesse
toujours les mmes et (lue la manivelle soit tourne
dans des temps gaux. 11 faut s'astreindre minutieusement oprer
toujours exactement dans les mmes conditions.
Pour nettoyer
les
distille et y faire
attach un
bicyclette
fil
tubes
passer
de
un
Thoriquement,
les
Ne
rsultats
Thoriquement,
les
compte-globules sont
Prcis de Microscopie.
''t
METHODES SPECIALES
642
services, cause de
la
rapidit de
la
iiimiralion et parce
qu'il
encore
qu'avec
les
compte-globules,
s'astreindre oprer toujours scrupuleusement dans les
plus
il
cet
faut
mmes
des variations dans les dimensions des hmaties, au cours de certains tals pathologiques. On peut cependant tirer de ce fait des
que
la
moyen
globulimtrie.
tels que le
employer des cellules grande capade Fuchs-Rosenthal (3 mm^) ou de Nageotte
liquide cphalo-rachidien
cit telles
que
celles
(10
le
Comme
la
numration, l'tablissement de
la
formule leucocy-
Il faut
que la goutte de sang
irrprochables et surtout complets.
soit sortie du doigt sans pression, qu'elle soit petite et tale en
entier.
On comprend que
faits
si
une partie de
la
goutte a t entrane
hors de
la
les varits
de leu-
cocvtes.
Pour tablir la formule leucocytaire, on explore donc mthodi chariot, de prfrence sur
quement un frottis, avec la platine
uniformment
rjjartis.
les
643
Rejeter l'extrmit o
les
leucocytes
que
les
Seguin
prpare,
et
dune
la
formule leucocytaire en
une seule
NaCl
4 gr.
3
Acide phnique
Formol
Borax
Eau
0,tO
000
1
distille
cm3 de
10
Stitt''-
(1
CYTODIAGNOSTIC
n'y a pas proprement parler de technique spciale pour le
cytodiagnostic. Les procds de fixation et de coloration sont
Il
les
le
sang.
On
tale
le
liquide examiner,
4,
Philippine Journ. of
se.
Med., V,
p. 233, 1910.
ici
cette
'
644
directement
Irifngation
Le liquide
Irice.
Il
est pais
s'il
s'il
MTHODES SPCIALES
est
est
rcolt
faut en avoir
suffire
la
|onctioii
i)ar
15
20
cm\
exploratrice ou
mais
s'agit
vacua-
2 cm^ peuvent
d'une ruption
les
La dfibrination immdiate
un
petit
ballon
liquide.
agite
que
leure coloration des frottis desschs est celle qu'on obtient avec
mthode panoplique ou
la
le
rsultats
La
comme pour
le
sang.
la ponction
lombaire se pratique avec de grosses aiguilles, de prfrence en
platine, de 8 10 cm. de longueur et de 2 mm. de diamtre. Bien
Liquide cphalo-rachidien.
crtes iliaques
Reprer
Rappelons que
la
ligne tangente
aux deux
qu'en
noter
les
points
ici
le
essentiels.
le
Chez
le
lom-
645
seringue.
le
chrome.
Examen du
pus.
prcautions particulires,
lisables.
Il
si
fait
avec des
frottis iniili-
241),
le
fil
pipette.
elle seule
permet
la
recherche
et la
tozoaires.
Ne
cose, les
Amibes,
etc.
frais
que
possible.
On
commence par les verser dans une grande bote de Ptri, pour
pratiquer Yexamen macroscopique sur fond noir et sur fond blanc
baire, dont l'apophyse pineuse est au-dessous de la ligne des deux crtes
pour ponctionner dans le sixime espace, enfoncer l'aiguille presque
iliaques
verticalement sur l'apophyse de la septime lombaire; pour ponctionner dans
l'espace lombo-sacr. piquer trs obliquement le long de l'apophyse de la premire sacre (Lpinay, Rcv. pathol. comparce, p. 355, 1911). Chez le Cheval, piquer
entre la dernire lombaire" et la premire sacre, d'avant en arrire et un peu
obliquement, enfoncer de 13 15 cent. (Prvt. Brissy et Barbier. Bull. Soc.
:
MTHODES SPCIALES
646
(fig.
et
de leurs ufs
on
le
pratique en exa-
Ne jamais
comme pour
le
le
la
sang.
notamment les osinophiles qui sont quelqueabondants (asthme). En outre, pour V tude de la mucine,
indispensable de colorer par les ractifs de cette substance
tiques particulires,
fois trs
il
est
ment
le
mucus
mucineux
avec
le
La
fibrine se colore
bleu de Unna.
1. Israt'ls de
Jong, tude hislo-chimique et cytologique dex crndiats. Thse de
Paris (mdecine), 156 p., 1 pi., 1907. De Jong recommande la tlxation pendant
une minute par l'acide chromique 1 p. 100, avant la coloration au bleu de Unna.
violet, et
la
647
la partie
En rsum,
bleu de
Gomme
sont
le
plus
tt possible,
est
pour soustraire
les
lments figurs
648
METHODES SPECIALES
Les centrifug-eurs les plus commodes sont ceux (jui ont deux vitesses,
une pour riimatocrite (10 000 tours), l'autre pour l'urine, les crachats,
le lait, etc. (3 000 tours la minute)
(flg'. 253). Pour centrifuger de grandes
quantits de li({uidc, on emploiera un
dispositif il quatre tubes (flg. 2.34). Ces
appareils se recommandent au travailleur isol; mais, dans les grands laboil
y a avantage avoir des
centrifugeurs lectriques qui travaillent
de
automaticjuement (centrifugeurs
Jouan).
ratoires,
naires.
Avec
que celui de
en retournant
ensuite
ou
el
cen-
dcanter
On
tubes.
les
procder
diffrentes
appareils tels
ligure 253,
minutes
tiois
trifuger
les
la
de
deux
bien
on
peut
faons
tale
le
ou bien on
tions ordinaires,
d'abord el on
Ccntrifugcur
de Krauss
deux vitesses. Au-dessus des
deux tubes on a tigur l'hma-
Fig. 253.
tocrite.
le
le
fixe
mthode
permet
la
novsky.
exactement
procde
comme pour
de
Roma-
coloration par le
On
le
lgrement,
donc appuyer
faut
trs
peu
la
centrifuger de
quantits de liquide.
pour
grandes
en
la
eommc
il
CSl
(lit
p.
*
626
(fig.
^
"
242).
'
1.
2.
ils
649
centrifugent et agitent
culot
le
Borate de sodium
Acide borique
Bianc d'uf
2 p. 100
>
aa
frachement prpar, (jui dissout les urales et hxe les lments figurs;
on centrifuge de nouveau et on examine le culot directement ou aprs
talement, dessiccation et coloration.
le procd
employ, il ne faut pas oublier que
culot Vtat frais est d'une importance capitale
diagnostic des maladies parasitaires (Protozoaires, filariose,
Quel que
soit
Yexamen du
pour
le
bilharziose, etc.)
En ce qui concerne la bilharziose, ne pas oublier que les ufs
sont souvent localiss dans les petits caillots rendus la fin de la
miction.
Au
contraire, la
dmontre bien
dixime
les
cylindres.
Employer
de
l'encre
(p.
699)
au
dilue
(p. 700).
Les recherches baclcriologigues seront
niques spciales.
tech-
le
lavant a
l'alcool
sionner.
On
avec
les
Btsc/i.
2.
650
MTHODES SPCIALES
OU
les
CHAPITRE V
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE
LMENTAIRE
Il ne
peut tre question ici de donner un aperu, mme sommaire, de la technique liislologique.
En effet, pour indiquer avec prcision la manire de colorer les
divers organes
structure,
il
et
gnrales
spciales
des cas.
majorit
Il
que
existe
je
d'excellents
ouvrages,
franais
et
dans
lesquels on Irouvera les indications de micrographie applique, ncessaires pour des tudes purement histologiques. Je ne me place donc pas ici au point de vue de l'hislolo-
trangers,
ou
tel
lesquels
L'exprimentateur
est forc de tirer
parti d'un animal quelconque, qu'il est contraint
d'tudier pour des raisons de rceptivit; il doit donc se contenter
Tissu conjonctif.
Ce
tissu
forme
la partie
faut-il s'attendre le
MTHODES SPCIALES
652
il
ncessaire de
musculaire
lisse.
fibres
Il
faut,
conjonctives proprement
lastiques (lastine),
et
les cellules.
dites
con-
le tissu
(collagne),
les
les
plasmoc}
tes
Collagne.
le
distinguer des fibres lastiques et des prolongements protoplasmiques des cellules conjonctives. Ces mthodes reposent sur la
facult que possde le collagne de se colorer par certains com-
colorants
Nous avons dj donn, parmi les mthodes gnrales, un cernombre de procds trs favorables pour la mise en vidence
tain
du collagne. L'hmatine-osine
Comme
le
van Gieson
de Weigert,
la
Voir
p. 654, note 3.
F. Curds, Mthode de coloration lective
biologie, LVIII, p. 1038-1040, 1905.
1.
2.
du
B.
l
'
653
Mlanger
au baume.
Dans une prparation russie,
jaunes,
le
'
1
p. 200 de bleu pour
sat. d'acide picrique
Sol. aq.
micrographie, n"
2.
4 cm^.
46
orcine
Colorer les coupes dans
:
heures
le
Orcine
Wasserblau
Glycrine
Eau
distille
Alcool
gr.
0,25
10
30
60
-95
plasmes prennent
le
des
G. Dubreuil,
fibrilles
1904.
2.
I^afayette, Paris.
3. On peut conseiller encore les
et Bettcndorf et
4.
105,
rue
de Schuberg (p.
collagne en bleu.
Voir de longs dtails dans Monalsh.
colorent
et
et
mthodes de Mallory
le
XXXIV,
1902.
f.
MTHODES SPCIALES
654
Fibres lastiques.
l'acide
que
les
onl
Elles
une grande
elles se colorent
affiiiil
pour
vite
beaucoup plus
tiques (soude et potasse). Les deux principales mthodes de coloration sont celles de Unna par Torcine et de Weigert par la
fuchsine-rsorcine.
Mthode orcine.
(Mthode de Taenzer modifie par Unna).
Colorer les coupes, pendant quinze minutes environ, dans une solution
d'orcine 1 p. 100 dans l'alcool chlorhydriquc 1 p. 100. On peut
chauler trs lgrement (30"). Laver l'alcool chlorhydrique et monter
au baume. On peut colorer les noyaux l'hmalun avant ou aprs avoir
diffrenci par l'alcool acide.
Mthode de Weigert^.
Le
ractif de
Weigert se prpare en
se
coupes pendant
que
soixante minutes, laver l'alcool et au xylol et monter au baume. Les
teur. Filtrer.
On
peut colorer
les
'^
Plasmocytes (Plasmazellen).
ments, Unna recommande de fixer
de ne jamais
les
sels mtalliques.
ces l-
absolu et
Pour
1.
CLXX,
p. 285,
1902 et
CLXXIl.
p.
517,
1903)
nomme
ce mlange fuchsline.
On
Un
colorants
les
moyens de
des meilleurs
655
les
le
Leucocytes osinophiles.
ration, dans lesquelles
trs bien
entre
Tontes
les
un colorant
mthodes de colo-
en est de
il
il
aux coupes.
'
100
(p.
1. p. 100 dans 50
mre d'osine dans un mlange
par l'adrnaline.
nane
1 p.
brun fonc
Les
trs rfringent,
granulations
clair.
La mthode ne
Hmaties.
mthodes o
(p.
sont colores
en brun jauntre
Trs
entre
il
comme
neutrophiles
bien
un colorant acide
tissu adi-
peux
se prsente
1.
iciss.
2.
3.
XXVI,
Woch., XXIII,
4.
f.
p. 4-28, 1909.
Ou
p. 701-702, 1010.
hxmatolofiica,
I,
p. 207, 1905).
MTHODES SPCIALES
656
ming);
le
de
girolle sont
moins
colore
graisse dans
les
tissus par
l'acide
osmique
au Bouin,
fixer
la
ce
On
La graisse
est colore
p.
673.)
1.
p. Mulon, Action de l'acide osmique sur les graisses. Histochimie et
teclmique, C. R. Association des Anatomistes, VI, p. 1-2-23, 1904; Bibl. a)iatpmique,
XIII, p. 208-213.
Voir aussi Riedder, Beutsc/ies
2. Arch. ital. bioL. XXVI, p. 143, 1896.
Archiv f. klin. Med., 1897.
3. Ztschr. f. loiss. Mikr., XXI, p. 57, 1904. Consulter aussi Fischer, Ueber die
Fettfarbung mit Sudan III und Scharlach R. Ctrlbl. f. allg. Pathol. u. paihol.
657
Tissu cartilagineux.
la subslance fondamentale du cartiun
certain nombre de colorants, notamchromotrope pour
Nous savons
lage est
ment
(p.
367) que
la thionine, le
bleu de toluidine,
et
chromatiques bleus
et violets
la
qui
Tissu osseux.
qu'organe hmatopoitique
Protozoaires
on
peut
en tant
(Plasmodium, Leislmiania,
moelle osseuse,
la
soit
la
prlever
mthode expose
p.
en
frottis,
moelle
497
avec
soit
un
petit
cette opration
trpan,
est
suivant
la
inoffensive, lors-
pour ne pas
craser les lments qui sont trs fragiles. On procde par apposition, avec la surface de section de l'os ou un petit fragment de
moelle qu'on tient au bout d'une pince. On peut aussi taler la
moelle avec une aiguille ou un fil de platine, en diluant au besoin
frottis
Romanovsky
humides,
(p.
les fixer
au Bouin
et les
(p. 376).
Pour
les
les fixe
(p.
Prcis de Microscopie.
42
MTHODES SPCIALES
658
gane
frais.
faut bien
Il
frottant
une section
On
peut
mme
avec une
surface
Ce procd est applicable tous les organes parenchynianotamment au foie, la rate, au pancras, aux ganglions
lymphatiques et mme aux centres nerveux (p. 659). Les frottis
sont desschs ou fixs humides (p. 413).
teux,
Les colorations
d'organes
obtient avec le
panoptique ou
les
la
mthode
le
Tissu nerveux.
Nous avons dj expos
des
p.
neurofibrilles.
argentique
mthodes de colorations vitales, qui ne sont pas du domaine de la
pratique courante et dont l'expos nous entranerait des dve-
supprime l'inconvnient
du
chromage
et
permet de
1. Voir ce sujet Micliailov, Die Anwcndung des Metliylenblaus in der Neurologie. Ztschr. f. vnss. Mikr., XXVII, p. 1-21, 1910. On y trouvera l'expos des
colorations vitales et de la fixation du colorant et des tissus par le molybdate
d'ammonium
formol.
Loyez, Coloration l'hmatoxyline ferriquc de pices nerveuses simplement
formoles et incluses au collodion. C. II. Soc. de biologie, LXIX, p. 511 et
Mann a dj fait remarquer depuis longtemps [Ztsckr. /'. viss Mikr.,
517, 1910.
XI, p. 494, 1894) que l'alcool absolu ou 95 fixe assez bien les cellules nerveuses
au repos, mais non celles qui sont en activit, parce que ces dernires sont
gorges de lymphe et ont un noyau volumineux. L'action dshydralantc de
l'alcool y produit des contractions normes.
2.
sec
un hmisphre
On
peut, sur la
l'hmaline-osine
On
mme
une
au collodion.
srie de colorations
\ au
peut tudier
la
d'aprs le
frottis faits
pice, faire
659
comme un
gros
ment
Romanovsky.
Coloration de la myline. Mthode de Weigert modifie par
Fixer au formol 10 p. 100 et inclure au collodion (la myline
Loyez.
2.
3.
disparatrait
1.
Hmatoxyline
Alcool 93
Solution sature de carbonate de lithium
Eau
ry
37''
fer 4 p. 100.
1 gr.
10 cm3.
.
90
distille
Mlanger A et B.
4. Laver l'eau.
dans l'alun de fer 4 p. 100,
5. Diffrenciation. Premier temps
jusqu' ce que la substance grise se dessine en plus clair.
Deuxime temps dans le diffrenciateur de Weigert en suivant au
microscope
Ferricyanure de potassium
Borate de sodium
Eau
6.
7.
2 gr. 5
2
200 cm^.
distille
le
reste bruntre.
7 p. 100
partie.
3 parties.
MTHODES SPCIALES
660
Xylol
Aniline
Laver au xylol et monter au baume. Les fibrilles et noyaux nvrog-liques sont colors en violet fonc. On peut colorer ensuite les autres
lments par l'osine i.
paraffine.
2. Colorer pendant trente minutes vingt-quatre heures dans le bleu
polychrome de Unna.
3. Laver rapidement l'eau, scher au buvard et diffrencier dans le
mlange suivant
:
Alcool absolu
16 vol.
5
Xylol
Crosote de htre
Essence de cajeput
5
4
'
Laver au xylol
On peut
de de Gothard.
de
1.
mm.
d'paisseur.
particulires la nvroglie.
2. De Gothard, Modifications la
les
mthodes de Weigert
mthode de
et
Nissl. C. B. Soc. de
de Benda
biologie,
p. 530, 1898.
3. Je ne dcris pas la mthode de Golgi au chromate d'argent qui est en
dehors de la pratique courante et ncessite un procd particulier pour le montage des coupes. Ne pas confondre cette mthode avec la nouvelle mthode do
Golgi
(p. 511)
661
Fixer
les
Imprgner'comme
il
il
Pour amliorer la teinte des coupes obtenues par toutes ces variantes,
est bon de les virer au virage de Cajal
:
Eau
100
Sulfocyanure d'ammonium
Hyposulfite de sodium
Ajouter, au
moment de
cm
3 gr.
3
Mthode de Cajal
fixer vingt-quatre heures dans le formol
10 p. 100, laver quatre heures Teau courante, puis imprgner comme
plus haut.
:
il.
Il
aprs inclusion
la
paraffine, et
la
tallin,
Il
bon
conjonctive et
la
corne et
gr.
la
Peau.
La peau est un des tissus au niveau duquel on pratique le plus
souvent des examens microscopiques, soit pour le diagnostic
1
MTHODES SPCIALES
662
des dermatoses, soit
et
cytolo-
gique ^
En ce qui concerne la peau liuniaine, les fragments sont prlevs sur des pices opratoires ou par biopsie. Dans ce dernier
cas, il faut avoir soin de prlever assez profondment, pour avoir
une ide bien exacte de
la
lsion examiner.
Pour
les biopsies
superficielles Taneslbsie
les
cellules.
mme
et tendus,
pour lesquels
la
du prlvement. Le Bouin
est le
Au
meilleur fixateur.
cas o on
en
toile
baignent
lvre.
des pices.
On y
pour l'imprgnation.
le
trs
En
observant ces
nombreuses
la
mthode
conjonctif,
recommande
suivant
surtout
la
la
nature de
la
mthode au safran
lsion
tudier;
je
la
cutanes.
recherche de
Thse
do
Paris
663
soit la pince,
de prfrence
la
pince piler,
soit
par
le bleu polychrome
bleu boracique de Sahli (p. 391) ou l'azur II alcanis (p. .389). On peut alors diagnostiquer la nature pavimenteuse ou
leucocytaire des squames. On devra aussi, dans certains cas, rechercher la fibrine (p. 674).
Laver leau, passer par les alcools, le xylol et le baume.
La recherche des parasites (Acariens, Champignons) se fait surtout par
l'examen extemporan dans la potasse 40 p. 100 et mieux encore
dans les liquides de Amann (p. 579 et 715).
Rcolte par expression ou raclage
Examen des exsudais cutans.
avec la lame de verre. taler, scher, fixer et colorer. La recherche des
graisses est trs importante. Voir p. 673 les procds employer pour
les dceler et pour distinguer les olines, les palmitines, les acides gras
Coloration par
de
Unna
ip. 427), le
CHAPITRE
VI
TECHNIQUE CYTOLOGIQUE
Il
au fond,
ensuite,
il
mthodes rationnelles.
Si on entend par cytologie Vanaiyse chromatique, toutes les
cet ouvrage sont des mthodes cytolo-
giques.
Cette analyse peut envisager la rpartition des divers tissus
dans les organes et la coloration lective de certains d'entre eux.
Nous
utiliserons
alors
les
les
mthode de Romanovsky,
la
6C5
TECHNIQUE CYTOLOGIQUE
Dans
ne
le
il
non encore
bables, mais
dfinies.
On
s'efforce,
au contraire, de
la
structurale
soit
soit
les
gnantes en cytologie.
plus s'eiacer.
En
domaine nuclaire
et le
Or
comme
essentiel.
d'ergastoplasme, de mitochondries, d'appareil rticulaire, etc., ne sont pas colorables par les
ces formations,
(ju'il
s'agisse
de
d'autres appareils
que nous
dans
trs
commun dans
les
eaux douces,
le
pi.,
1911.
METHODES SPECIALES
666
sept tours de spire trs saillants, et orne de trois bandes spirales brun
fonc. Il prsente deux longs tentacules ingaux.
Pour mettre en vidence ce protoplasme suprieur,
Ergastoplasme.
propre aux cellules scrtrices i, on emploie les fixateurs ordinaires et,
de prfrence, des colorants basiques (bmatoxyline, safranine, bleu
et
colorer
vol.
basiques.
segmentation.
Sectionner les oviductes
1.
et les
1. Prenant. Sur le
protoplasme suprieur (archoplasme, kinoplasme, ergastoplasme). tude critique. Journ. de l'Anat. et PhijsioL, XXXIV et XXXV, 1898-1899.
Les mitochondries et l'ergastoplasme, ibid., XLVI, p. 217-285, 1910.
2. Faur-Fremiet. tudes sur les mitochondries des Protozoaires et des cellules sexuelles. Arch. Anat. viicr., XI, p. 457-648, 4 pi., 1910.
3. C. R. Soc. de biologie, LXXIII,
p. 150, 1912.
661
TECHNIQUE CYTOLOGIQUE
tiers,
maintenu Ttuve
o nagent
les
37. L'alcool
ufs, de sorte
s'chapper.
2. Prlever d'heure en heure des fragments de 5 mm. de longueur et
les fixer dans le Gilson (p. 284) pur ou additionn d'un tiers d'alcool
absolu. La fixation dure trente minutes; on laisse ensuite vingt-quatre
heures dans de l'alcool absolu lgrement iod, puis on lave pendant
deux heures dans l'alcool absolu renouvel deux ou trois fois.
3. Porter les fragments dans le tolune pur, o ils s'claircissent
rapidement, pais dans un petit cristallisoir ou un verre de montre,
rempli d'une solution de paraffine dans le tolune, fondant vers 35.
Abandonner tel quel, sans couvercle, dans l'tuve 37 pendant
plusieurs jours.
cristalliser,
que possible.
5.
(p. 377).
CHAPITRE VU
ANALYSE CHROMATIQUE
ET MlCROCH]MIE
Analyse chromatique et microcliimie sont deux mthodes qu'il
importe de ne pas confondre. La microchimie proprement dite
devrait avoir pour but de caractriser les corps par des ractions
chimiques, explicables par les lois de la chimie macroscopique.
L'analyse chromatique, au contraire, se borne gnralement
dceler certains corps par des coloralions la vrit spcifiques,
des
ractions
chapitre, les
la
donc d'abord
culires
aux
les ractions
|)rincipales
gnrales, puis celles qui sont partisubstances qu'on ]cut tre appel
Ractions gnrales.
1.
et
les
colorations
vitales,
on
emploie
les
Pour
ractifs
ordinaires
1. A. Prenant, Mthodes et
rsultats de la microchimic. Joiini. de l'Anat. et
de la PhysioL, XLVI, p. 313-401, 1910.
la
chimie (tournesol,
rouge
neutre,
rouge
congo,
669
etc.,
p. 252).
Un
ractif
empirique
et assez
Ce liquide
est violet
on les met
dans de l'eau qu'on chauffe lentement -|- 45-55''C. La matire colorante diffuse dans l'eau; lorsque la teinture parait assez fonce, on la
dcante et on la fait bouillir, pour la dbarrasser des albuminoides. On
ajoute une trace d'acide salicylique pour empcher la putrfaction. On
peut aussi faire simplement une macration alcoolique poids gaux,
comme le conseille Arnoldovs et, dfaut de Chou rouge, on peut
employer le jus d'Orange sanguine, additionn de son volume d'alcool.
Ces ractifs doivent agir pendant quelque temps sur des coupes de
tissus frais ou fixs par l'alcool. Ils conviennent aussi bien pour les
cellules vgtales
que pour
les cellules
animales.
phnomne des
reprises et on
1.
p.
4"
dit.,
Ul.
3.
dont
MTHODES SPCIALES
670
dance
comme composs
acides (basopliiles)
la
chromatine nuclaire,
les
les cellules
et
la
coloration.
cas,
Il
faut
dits
indiff-
donner
d'utiles
Nous avons vu que Hansen (p. 368) explique chimiquement ce phnomne et que, d'autre part, Pappenheim (p. 368
et 403) admet deux sortes de mtachromasie l'une basophile,
indications.
Tautre neutrophile.
mthylne).
Les corps oxydants (oxydases) sont beaucoup plus faciles
dmontrer.
Le principal
ractif est
la
qui
catchine et
le
thymol au rose,
phnolphtaline au rouge, etc.
le
le
frottis
*l.
traiter
les
une solution
et avoir
1 p.
a, acklilioniie
671
ou
la
3.
Distinction du protoplasma
mort
et vivant.
Gela
que
la vitalit
mi'tliode
la
d'Achard
et
Ramond pour
le
diagnostic de
Ractions spciales.
Fer.
Il
Pour dmasquer
caractriser.
le
dmasquer
fer,
de potassium
0,5 p. 100.
1,5 p. 100
Ou
729.
p.
1.
^2.
METHODES SPECIALES
672
gomme
iode.
10 p. 100. On
1
p. 100 qui permet d'liminer le tannin, puis
peut alors laver l'eau, car le glycogne est devenu insoluble. Colorer
la safranine aniline et monter au baume. Le glycogne seul est
d'abord
rouge
brillant.
Dgnrescence amylode.
1.
Raction de Viode.
La matire amy-
lode se
2.
fait virer
a prise au contact de
3.
l'iode.
Raction mtachromatiquc.
On
1.
Outre le travail de Prenant cit plus haut, voir encore
Vastarini {Atti d. H. Accad. mecl.-c/iir. di NapoU, 1909) et de P.
f. oiss. Mikr., p. 513, 1909).
les
revues de
Mayer
{Ztschr.
673
de cristal violet,
et
violet ple.
L'hmatine-osine met
de ces parties dgnres.
bien en vidence
trs
la
structure vitreuse
colore en
l'action
Us forment avec
l'actate de cuivre
un
sel
graisses neutres.
instants.
Unna (p.
Un des
427).
meilleurs ractifs du
M. Langeron.
mucus dans
Prcis de Microscopie.
les
coupes est
le
muci-carmin
43
METHODES SPCIALES
674
de Mayer
Bouin,
00'',
suivants
Hmatine de Geigy
Glycrine
Eau
distille
Chlorure d'aluminium
gr. 2.
40
60 cm3.
gr. 2.
en
vert.
artilicielle.
^2.
3.
675
Existe chez beaucoup d'Invertbrs, chez certains Protozoaires et certains Champignons. Insoluble dans les acides minraux
dilus, les alcalis concentrs, l'oxyde de cuivre ammoniacal (ractif de
Schweizer). Soluble dans les acides minraux concentrs et les hypochlorites de potassium et de sodium en solutions concentres. L'iode,
en solution dans le chlorure de calcium (chlorure de calcium 16,
eau 4, iodure de potassium 0,5, iode 0,05), la colore en rouge violac.
Chitine.
kratohyaline bleue.
72-3, noie 4).
Forme la masse principale des ongles, cbeveux,
Kratohyaline.
poils, couche corne, etc. Se distingue de l'ledine parce qu'elle ne se
colore ni par le congo, ni par l'alkanna, mais par l'hmatoxyline et le
carmin. Elle est insoluble dans les acides dilus et les alcalis et rsist
la digestion artificielle.
Il s'agit souvent de distinguer le pigment paluden
Pigments.
i
(hmozoine) de la mlanine. Brovvn a indiqu les ractions suivantes
les oxydants, tels que le permanganate de potassium et l'eau oxygne,
dcolorent la mlanine, mais non le pigment paluden. Ce dernier est
soluble dans la potasse alcoolique tandis que la mlanine ne l'est pas.
II faut savoir en outre que le pigment paluden est birfringent (p. 521),
qu'il est soluble dans le sulfhydrate d'ammoniaque et qu'il ne donne
le
congo
la raction du fer.
Le pigment ocre, qu'on trouve dans les organes des paludens, des
malades atteints de cirrhose de Hanot, etc., n'est pas soluble dans la
potasse et donne la raction du fer (p. 671).
Dans les ancien foyers hmorragiques, on trouve des
Bilirubine.
cristaux, en forme de rhombodres ou de fines aiguilles, qu'on dsignait
autrefois sous le nom dlimatodine il est dmontr maintenant que ce
corps est identique la bilirubine. Ces cristaux sont insolubles dans
l'eau, trs peu solubles dans l'alcool, l'ther, l'acide actique, trs
soluhles dans le chloroforme. Us sont solubles dans l'ammoniaque, la
les cristaux
potasse et la soude. L'acide azotique agit comme oxydant
s'entourent d'une zone verle, due la transformation de la bilirubine
en biliverdine. Ce corps ne donne pas la raction du fer, mais on trouve
aussi, dans les foyers hmorragiques, du pigment ferrugineux dcelable par la raction du bleu de Prusse (p. 671).
Hmine.
L'hmine, ou chlorhydrate d'hmatine, a une grande
importance pratique, car elle permet de dterminer la prsence du sang,
lorsque celui-ci n'est pas reconnaissable l'examen microscopique
direct. S'il s'agit, par exemple, de sang dessch, on l'humecte avec
une solution concentre de chlorure de sodium et on ajoute de l'acide
actique cristallisable. On chauffe lgrement, sans faire bouillir, et on
laisse refroidir. 11 se produit une double dcomposition, qui donne
naissance de l'actate de sodium et de l'acide chlorhydrique.
pas
1.
Journ. exper.
yned.,
XIII, p.
-290,
1911.
MTHODES SPCIALES
676
Celui-ci se
prcipite
reste colore.
1.
CHAPITRE
MTHODE
VIII
DES INJECTIONS
PHYSIOLOGIQUES^
Les injections de substances colores solides ou liquides,
elTeclues dans la cavit gnrale ou le systme circulatoire des
animaux
gistes,
vivants, ont t utilises, surtout par les histo-pliysiolole but de faciliter l'tude de la
phagocytose et de
dans
Texcrtion-.
Les corps
colors injects
l'organisme, se
comportent physiologiquement
normaux
l'activit
de
vitale
(lments
comme
ou
vieillis
les
dchets
mortils,
En rsum,
injections physiologiques
permet
la
mthode des
naissance.
2. Pour la recherche
des organes excrteurs, indpendamment des injections
physiologiques, on peut obtenir quelquefois de trs bons rsultats, avec certaines
espces animales, en les faisant vivre dans de l'eau colore ou tenant en suspension une poudre colore (carmin) ou encore en arrosant leur nourriture avec
une solution colore (bleu de mtliylnc). Une petite quantit des colorants peut
tre absorbe, passer dans le sang et aller s'accumuler dans les
organes excrteurs. Cette mthode de recherches est trs
prcieuse, elle est essayer quand
les animaux sont de trop petite taille
pour pouvoir tre injects.
MTHODES SPCIALES
678
D'ludier
le
mcanisme de
trangres l'organisme;
2" De dcouvrir des cellules
isoles
des substances
phagocylaires ou excrtrices,
ou groupes en organes;
De
rliminatioii
reconnatre
le
connus pour
et
Bruntz
-^
Pour exprimenter,
il
faut
I.
- RACTIFS
utilisables
sont assez nombreux. Ils doivent
1*^ n'tre
aux exigences suivantes
pas ou presque pas
2
ne
se
dans
pas
dcomposer
l'organisme, ne pas se
toxiques;
dissoudre (quand il s'agit de recherches concernant la phagocytose)
Les
ractifs
satisfaire
Kovalevsky, Beitrag zur Kentniss der Exkretionsorgane. Biol. CenSur les organes excrteurs chez les Arttiropodes terIX, p. 33, 1889.
restres. Coiifir. internat, de zool. Moscou, 'i" session, 1" partie, p. 187, 1892.
'i.
L. Cunot, tudes physiologiques sur les Gastropodes pulmons. Arch. de
ludes physiologiques sur les Oligochtes. Arch. de
biol., XII, p. 683, 1892.
L'excrtion chez les Mollusques. Arch. de biol., XVT,
biol., XV, p. 79, 1898.
1.
A.
tralbl.,
p. 49, 1900.
L. Bruntz,
p. 293, 1896.
lules (nphrocytes) qui liminent les liquides colors des injections physiologiques. Ann. se. nat. Zool., X, p. 265, 191U.
679
recherches concernant
Texcrtion) 3 tre trs vivement colors, afin que Texprimentateur ne soit pas oblig d'en injecter une grande quantit, ce qui,
;
pour
l'tude de la phagocytose.
Ractifs colors
A.
Encre de Chine.
Ce
prpare au
ractif se
moment du
meilleures
plus fines; la
faut
Il
microscope.
viter
Chine
de
d'employer
est destine la
est
le
meilleur
encres liquides
les
mthode de Burri
ractif
(p.
du
699).
employer dans la
le manie-
ment
Poudre de carmin.
morceaux.
carmin en
On
Dans
prpare
le
le
commerce, on trouve
ractif en
le
pulvrisant le
fui,
ammoniacale
dernire
et
un
recueilli sur
filtre,
On
distille.
que
la
toxique,
comme
galement
le
MTHODES SPCIALES
680
Ce ractif s'extrait de
Noir de Seiche (Encre de Seiche).
la poche de noir du Sepiu offidualis. Les Seiches pclies sont
conserves sec, pour qirelles ne rejettent pas leur encre. A la
suite d'une dissection des animaux morts, on retire les poches,
le contenu dans un rcipient. On laisse desscher
pour Tusage, au moment du besoin, on triture dans de
l'eau un peu de la masse pulvrulente.
dont on vide
Tencre
et,
On peut encore
utiliser,
moins recommandables,
comme
tels
amidon de
que
le
employ galement
triologie.
B.
Ractifs colors
pour
l'tude de l'excrtion.
Ce
on utihse de suite.
Le carmin ammoniacal
filtre et
681
Carmin
comme
l'injeclion.
Tournesol soluble.
Ce raclif se trouve dans le commerce; il
donne avec l'eau une solution limpide, qui n'est pas toujours trs bien
supporte par les animaux auxquels on Tinjecte, mais qui prsente
l'avantage d'indicfuer, par virage, la nature de la raction chimique
des cellules excrtrices.
Colorants artificiels.
Parmi
les
nombreux
colorants artificiels
la
vert
safranine,
vcsuvine,
le
employs pour l'tude hislologique du systme nerveux par la mthode d'Ehrlich. Colorer les coupes au carmin boracique.
La fuchsine acide, l'alizarine et le rouge Congo limins, indiquent
ractifs plus lins,
En
se dcolore
compltement (p. 398) et se recolore en rouge vif par addition d'acide actique. Dans le mme milieu, l'alizarine prsente une
teinte violace, le rouge Congo une coloration rougetre. En milieu
acide, l'alizarine passe au jaune ou au rouge orang et le rouge Congo
prend une coloration bleutre (p. 252).
Indpendamment des ractifs colors cits, on peut employer aussi,
dans les recherches concernant l'excrtion, des injections de solutions
aqueuses de sels organiques de fer (laclate, tartrate, saccharate, etc.).
Ces sels sont fixs par les cellules excrtrices; celles-ci sont facilement
mises en vidence, lorsqu'on les traite de faon obtenir la raction
du bleu de Prusse. La technique est la suivante injecter une petite
quantit d'une solution concentre d'un sel de fer; sacrifier l'animal
douze quinze heures aprs, dissquer et arroser les tissus avec
:
METHODES SPECIALES
682
II.
En
ce qui concerne
la
rgle
un simple tube de verre effil (voir pipette double effiLa pointe doit tre plus ou moins fine et plus
ou moins
ses tguments.
perte de sang.
L'injection se
soit
mme
fait,
dans
le
miques.
Les quantits de ractif injecter varient aussi avec la taille et
la rsistance des animaux; elles doivent toujours tre assez petites
pour ne pas troubler profondment l'tat physiologique de l'organisme. Certaines espces sont particulirement sensibles l'action
de quelques
ractifs.
soit
Il est
quelquefois avantageux, pour obtenir des prparations
bien dmonstratives, de faire subir, un mme animal, deux
injections, soit
du
mme
ractif,
soit
de
ractifs
diffrents.
La
dans
ou nphrocytes.
III.
RSULTATS
683
DES INJECTIONS
PHYSIOLOGIQUES
La phagocytose des parlicules solides injectes est toujours
rapide et quelquefois complte au bout de quelques minutes, si la
quantit de ractif utilis n'a pas t trop forte.
L'limination des liquides colors par les cellules
s'effectue plus
ou moins
vite,
excrlrices
du ractif employ. En r-'^gle gnVertbrs liminent plus vite que les Invertbrs et les
les
animaux
une
phagocytaires renferment les particules solides dans les mailles ducytoplasme ou dans de fines vacuoles. Les cellules excrtrices
montrent
IV.
Pour
par
viter
MTHODES
684
SPfclGIALES
mmes
endroits.
Ainsi,
les
bmaties
cdent
les
les
Il
pas
tres
prises
excrteurs.
Avec un peu
diffuse des
mentale du cartilage,
le
et certaines fibres
con-
substance colorante n'a pas t excrte; il s'agit l de colorafournies par un simple phnomne de teinture,
tions dituses,
rsultant,
comme
la
la
prcipitation
de granules collodaux.
mis
685
dclare excrtrice
si
le
ment,
soit
Tindice d'un
CHAPITRE
IX
TECHNIQUE MICROSCOPIQUE
MDICO-LGALE
Recherche du sang.
Examiner
les taches
de sang
frais
en
les diluant
dans
la
de sodium 2, sublim
d).
Enfin on fera
la
d'hmine
on fera bien de
La mthode spectroscopique
les
et
devront
complter
Examen
Amann pourra
Chez
VHomyne^
les
in-8<>
Lambert
de 236
la
et Balthazard,
moyenne
et la
substance
cellules
parce que les
La couche
corticale est
beaucoup
Le poil de l'Homme
et des
dans
Au
trs
peu
visible.
11
687
la coloration.
animaux,
gnralement den-
le poil est
les saillies
paraffine.
chanlillous types.
Examen
physiologique.
l'encre de
Chine
Mthode
Mthode de Gasis'.
fragments
sublim
et les faire
1
p.
700).
(p.
la
Prconise par
macration dans
la
Mthode de Baecchi \
Colorer
la
moiti
du
le tissu,
pendant vingt-cinq
aqueuse concentre de
fuchsine acide, puis dcolorer jusqu' teinte rose ple dans l'alcool
trente
secondes,
dans
chlorhydrique ( 70)
une
1 p.
solution
100.
l'alcool
1.
2.
3.
4.
5.
Feau
et colorer.
TROISIEME SECTION
TECnj^JQUE
Nous runissons dans
cette
BOTAlSIlQll'E
techniques
(et
pour
les plantes.
encore
ils
sont
communs
Protozoaires) et que les procds de coloration, qui servent caractriser la membrane vgtale et certains drivs du protoplasme.
Les mthodes que nous allons indiquer sont donc plutt des tours
Vers ou
les
Arthropodes.
Quand on
se livre
Ttude d'un
groupe quelconque d'tres vivants, les procds gnraux se prcisent de plus en plus, si bien que la technique fine de chaque
groupe ncessiterait de trs longs dveloppements; mais il n'y a
pas, fondamentalement, plus de diirence entre la technique de
deux groupes aussi dissemblables que les Vers et les Arthropodes,
qu'entre
la
technique zoologique
et la
technique botanique.
CHAPITRE PREMIER
TECHNIQUE BACTRIOLOGIQUE
Nous serons trs bref sur ce chapitre, qu'on trouvera trait avec
de grands dtails dans d'excellents ouvrages classiques *. Nous
ne donnerons donc qu'une sorte d'aide-mmoire des colorations
les plus usuelles, en insistant sur les
procds nouveaux. Il est
bien entendu que, pour nous, la technique bactriologique est
limite
dites,
Champignons.
compltement de ct les mthodes de culture,
nous bornant aux examens les plus courants.
La mthode fondamentale^ en bactriologie, est celle des
Nous
laissons
frottis desschs
simplement
les
et
a pas
utilise
principalement
favoris
par l'inexprience de beaucoup d'oprateurs. Les Bactries rsistent tant bien que mal au flambage, l'bullilion, etc., mais
les
1.
autres
lments du
pus ou
des
liquides
organiques
sont
M. Langerox.
mdicaux.
Prcis de Microscopie.
44
MTHODES SPCIALES
690
oUenus
seraient
autremenl inslructifs
mnao;eait les
si,
et
panchrome de Pappenheim)
ou
telle Bactrie.
rapports avec
La thorie de
seulement
ici
raction de
mthode de Gram
la
qu'il
a,
la
Gram d'une
Talcali-rsistance et
la
Chaque
que
la
Fixation.
frottis
11
est d'usage
renfermant
des
Bactries.
En
principe, ce procd
les
est
il est
gnralement trs mal appliqu
transform en llambage. A l'origine, on oprait presque exclusivement sur lamelles, ce qui facilitait beaucoup la fixation par
1^ chaleur,
fois
comme
passer
la
lamelle trois
dans
la
si
secondes
on arrose
Prlvement.
le frottis
^g^
Fig. 255.
- Fabrication des
b,
tube tir;
bouche
les
(fig.
255, a).
On
691
TECHNIQUE BACTERIOLOGIQUE
strilise
et
Pour
qu'on
les
fermer
le
prlvement dans
fabriquer, on
fortement
porte
faire
la
(fig.
258).
moyenne
partie
Dans
renfle.
la
commence
de tube en TelTilant
la partie
-B
On
chaute ensuite
et,
lorsqu'elle
est
place rserve au
tampon de coton.
Travail du verre.
La fabrication des pipettes ordinaires et lioules est une opration trs facile. Tout le
secret consiste avoir une flamme assez chaude, bien
rgle et tourner continuellement le verre entre les
doigts, tant qu'il est dans la llamnie; ne le retirer
v
'''
chalumeaux
de Goster,
soit le petit
chalumeau
'.
Examen du
comme
il
^ig. 256.
est dit p.
pipette strile
pi-
ses^^'C uchondecoton
-,
'^
ment.
le
bleu de
2.
Pour emmancher un
METHODES SPECIALES
692
les Streptocoques et
Staphylocoques se colorent en violet.
Examen des fausses membranes.
les
Recherche du Bacille de
la diphtrie.
et fausses
lever avec
est fait
Fig. 257.
veilleuse.
avec un
de
fil
fer,
Bec Bunsen
Modle Cogt.
On
un tube
essai
en boucle.
bouch au coton
et
on
strihse.
Avec
les
un
fait
frottis
(P7=~^~ -^^^
Fig. 258.
_ -_
^^|^-
'
colorer par le
Romanovsky le Ziehl
ture)
dilu, l'azur
Pipette boule.
lin
ou
le
II
alca-
blcU
loluidine (Thiry).
de
Ce
Bacille prend
Examen
culose.
693
TECHNIQUE BACTERIOLOGIQUE
5"
Colorer par
le
Dposer sur
procd de Ziehl-Neelsen.
le
Recommencer
vapeurs apparaissent.
trois
fois
cette
Il
la
opration,
prparalion
il
faut se
de mthylne d'un
les Bacilles
dans
les parties
Mthode de Spengler
rechercher
minces.
l'acide picrique.
trs peu), puis, sans laver, traiter la prparation pendant deux ou trois
secondes par l'alcool picrique (parties gales d'alcool On" et de solution
Bacilles en
colorables.
Mthode de Gasis 3,
La mthode de Ziehl-Neelsen et les procds
analogues sont fonds sur Vacido-rsistance du Bacille de la tuberculose,
c'est--dire sur la proprit qu'il possde de se colorer par les couleurs
basiques et d'abandonner trs diflicilement ces couleurs sous Taction
des acides.
La mthode de Gasis
est base,
1. On a propos
acide citrique ou
l'emploi d'autres acides moins nergiques
tartrique 10 p. 100 dans l'eau, et surtout acide lactique 'J p. 100 dans l'alcool
(mthode de Ilauser). Ces produits ont une action moins brutale et sont beaucoup plus faciles employer. Malheureusement ils ne donnent pas toute scurit pour le diagnostic, car ils ne dcolorent pas les Bacilles accidentellement
acido-rsistants. La mthode de Ziehl-Neelsen donne seule une scurit absolue.
2. Dtsch. med. Woch., n" 9. -28 fvrier 1907.
3. Centi^alblatt fir Bakleriolocjic, Orig., L, p. 126, 1909.
:
METHODES SPECIALES
694
c'est--dire sur la proprit de se colorer par les colorants acides, additionns d'un mordant, et de retenir ce colorant malgr l'action des alcalis.
1. Additionner 5 cm^ de solution d'o.sine (osinc 1, alcool 5, eau 95)
d'un morceau de sublim gros comme une lentille et chauffer lentement jusqu' dissolution. Le colorant est transform en prcipit en
suspension.
2. Couvrir pendant deux minutes, avec ce liquide chaud,
fix la flamme.
3. Laver l'eau et dcolorer par
le
frottis
Soude caustique
lodure de potassium
Alcool 50 p. 100
0.5 gr.
1
100
cm3
de fond.
Colorer au Ziehl-Neelsen froid,
Coloration dans les coupes.
pendant 15 30 minutes; si on craint l'action trop brutale de l'acide
azotique, employer la mthode de Khne-Borrel aprs coloration au Ziehl,
traiter la coupe, pendant quelques secondes, par le chlorhydrate d'aniline 2 p. 100, puis dcolorer par l'alcool absolu. Colorer le fond au bleu
de mthylne.
On
Mthodes d'enrichissement.
trs rares
dans
les
(p. 691).
chappent Texamen. On a donc cherch des mthodes qui permettent d'enrichir, c'est--dire de concentrer tous les Bacilles dans
un
norme, ce qui,
d'ailleurs,
et
leur
imperfection.
1. Berger dans
Cenlralblalt fur Bakterioloijie, Orig., LUI, p. 174-208, 1910,
Rosenblatt, ibidem, LVIII, p. 173, 1911, Bohm, ibidem, LXII, p. 497, 1912, Macalister, Brit. med. journ., II, p. 111, 1912, ont donn de bonnes revues critiques des
divers procds de coloration du Bacille de la tuberculose, avec une abondante
bibliographie. Tous concluent la supriorit de la mthode de Ziehl-Ncclsen.
2.
Biot, isouvelle mtiiodc de coloration intensive des Bacilles de Koch.
C. li. Assoc. des anatomistes. Congrs de Lyon, p. 234-237, 190L
693
TECHNIQUE BACTEIUOLOCIQUE
L'enrichissement comprend deux temps
la sdimentation.
la
fluidlfcation des
crachats et
Protozoaires, mais
de
non
11
il
ne tue ni
la
les
Pepsine
Glycrine
Acide ctilorhydrique pur 22"
Fluorure de sodium
Eau
distille
Prendre 1 cm^ de
deux trois heures
ractif
pour 10 cm^
2 gr.
10 cm^.
10
3 'r-
000 cm3.
de crachats, mettre
l'tuve 37, en agitant toutes les demiheures. Centrifuger et rechercher les Bacilles en talant et colorant le culots
1.
Uhlenhuth
et
a. d. kais.
METHODES SPECIALES
696
La sdimentation prsente des difficults surtout avec les procds par les alcalis ou rantifornime, cause de la faible diffrence de densit qui existe entre les Bacilles et le liquide
d'homognisation. La densit du Bacille est de 1,010 1,080.
Il
densit du liquide,
le culot; soit employer des liquides lourds,
rcolter
et
centrifuger
centrifuger et rcolter les Bacilles la surface. Dans ce dernier cas
il est encore meilleur de les collecter dans un liquide trs lger'.
faut donc,
pour
Mthode de
l'aiitiformine
p. 100,
diminuer
la
-.
Mlanger 10 cmS
1.
50
le collecter, soit
temps en temps.
2. Ajouter 30 cm3
de
cracliats
d'alcool 60^
pour abaisser
la densit,
puis bien
mlanger.
3.
Centrifuger en tubes
effils,
la centrifugeuse lectrifjue.
4. taler et colorer le culot.
Recherche du Bacille de
Centrifuger Turine et taler
mthode
la
d' Ellermann
et
dans Turine.
le culot, ou mieux le traiter d'aprs
Erlandsen (excellente aussi pour
la tuberculose
et
centrifuger. Le
ils
3. C.
5.
dans
697
TECHNIQUE BACTRIOLOGIQUE
culot est
0,25
(p.
p.
693).
'
Eau
80
20
distille
Glycrine
Carbonate de calcium
Les organes
le diagnostic,
on y arrive
et
Erlandscu, Zischr.
p. 572, 1911.
1905.
/'.
Hyi/.,
LXI,
p. 219,
1903.
Martinelli,
'
MTHODES SPCIALKS
698
mais on suppriuie
ries cultives,
il
le
traitement an permauganate. Pour les Bactla culture non dans Peau, mais dans
faut diluer
un
liquide visqueux (srum sanguin, liquide d'ascite ou d'hydroNe jamais fixera la flamme, qui altre les capsules. Colorer
au Giemsa^, en chauffant trs lgrement. Les Bactries sont
cle).
Pour colorer
le
Pneumocoque dans
les frottis,
on emploie gnralement
Fuchsine
Alcool absolu
Eau
100
distille
gr-
monter au baume.
''
699
TECHNIQUE BACTRIOLOGIQUE
On
quinze minutes.
Proca
Il
y a
un
pr-
cieux
Ces colorations ne
lame une
la
s'taler
On
pas fixer.
srie
olilient ainsi
de tannin 20 p. 80
sat. froid de sulfate ferreux.
Alcool absolu sature de fuchsine
Sol. aq.
...
10 cra^,
5
1
Ghauier quelques secondes sur une veilleuse, puis, ds que les vapeurs
mordant
le
apparaissent,
jeter
Recommencer
trois fois,
pince
(lig.
et
laver
doucement
la
pissette.
2.
3.
tel
que nous
le
Le procd Tencre de
pratiquons maintenant, est d Burri^;
in-S"
de
4-2 p.,
3 pi., 1909.
METHODES SPCIALES
700
mais
est juslc
il
Il
on
laisse scher et
gne dans le liquide gommeux, mais elles sont facilement agglutines en flocons et prcipites, par exemple par les solutions
salines ou acides.
Toutes
les
pour tre
faut
donc
la
s'y
On
TECHNIQUE BACTRIOLOGIQUE
701
les
ccqjsules,
il
fixe
au sublim concentr
le
frottis
fait
comme
d'encre sur
"Jagic
se sert
faire
des prparations
et
le
Harrison
colla rgol.
Bactries. Fischer
sat.
de cyanosine. Ce mlange se trouve dans le commerce (Grnom de Cyanochin. De mme que l'encre de Chine,
bler) sous le
sdim ents
avant l'emploi.
1. Centralbl. f. Ba/derioL, Oriij., LVII. p. 47-2-478, 1911. Prendre de l'encre
tendue de son volume d'eau.
2. Journ. amer. med. assoc, LIV, j). 14-26, 1910.
3. Centralbl. f. BakterioL, Orig., LY et LYI, p. 183, 1910.
4. ^Yien. med. Woch., p. 3-28, 1910.
5. Centrabl. f. BakterioL, Or/., LXIII, p. 575, 1912.
6. Brit.
7.
8.
Ztschr.
CHAPITRE H
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
La
et
de leurs
je
Milieux de culture.
Lorsqu'on veut faire l'tude biologique complte d'un Champignon, il faut le cultiver sur un grand
nombre de milieux et tudier les modifications qu'il leur imprime.
Pratiquement, pour
le
On
lave
Milieux gloses.
1. Ou une racine analogue, dans les pa^ys o la carotte n'est pas connue. En
Europe, je considre la carotte comme suprieure la pomme de terre pour les
Ghampi
nons.
La betterave
703
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
Saboiiraud
tin
Pour
les
mon
le
Fig.
-259.
Tube
Fig. 260.
pour carottes.
aux pruneaux
Eau de source
Ou maltose
000 cm'^.
40 gr.
10
18
brute de Chanut suivant les cas. Sabouraud a dmontr la supdos sucres bruts sur les produits chimiquement purs. Ces sucres, ainsi
que la peptone. se trouvent chez Cogit, Paris.
1.
riorit
MTHODES SPCIALES
704
Milieu de conservation
Eau de source
000 cm-^
Glose
18 gr.
30
Eau de source
000 cm^.
20 gr.
10
18
par Sabouraudi.
1" Chauffage.
4 Strilisation.
Monter trs lentement 120 avec une seule couronne de gaz. Eteindre ds qu'on a atteint cette temprature. Aussitt
que la pression est tombe, retirer immdiatement les tubes et les
incliner en les soutenant avec un gros tube de verre (lig. 261).
1.
1908.
1910, p. 113.
705
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
Pendant toute
difier.
ne
11
la
soli-
rompre,
si
La
Fig
261.
Manire
Cultures en tubes.
su f fil pour
C'est
la
le
faut
procd
soit
les
Bezanon.
ordinaire, qui
d'incliner
employer des
fils
Des
trois
la
figure 262,
le
fil
Le
repiquage
se
de
fera
prfrence
en
de culture
et
plus facile.
I:
Ensemencer abondamment
Pinoy
donn
ce sujet
abc
Fil?.
262.
modles de
Trois
de
lils
platine, a, spatule
6, anse r, aiguille.
;
Daprcs Bezanon.
1. C'est
ce que certains ouvrages franais appellent ose. Je crois inutile
d'adopter ce terme gerraaniiiuc. suirisammcnt traduit par le substantif anse.
2. Pinoy, Conservation et envoi dos cultures de
Cliampignons infrieurs. Bail,
M. Langeron.
Prcis de Microscopie.
45
METHODES SPECIALES
706
cles)
doivent
tre
parfaitement
dessches
l)ouclis
ou
conserves
et
au coton. Pour
les
espces
Fig. 263.
Manire d'ensemencer
les
trs caractris-
gnons un cube
grand.
Cultures en cellules.
La mthode des cultures en gouttes
elle seule
pendantes est la mthode cardinale de la mycologie
:
permet d'observer
quels repose toute
In situ les
la
les-
systmatique.
mmoire
de botes
Au
miheu
le
myclium. Je ne
ncessite l'emidoi
rsultats.
de fixer
la
fructification
moment
favorable.
(elle
que nous
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
l'appliquons, est
due
Van Tiegliem
'07
Le Monnier
et
*,
qui Tont
Culture
Fig. 264.
lule
technique
me
laquelle je
sur
coll
suis arrt
pouvoir
les recouvrir
22x22.
avec
Je fais fondre
la
-.
Elle consiste
Prparation des cellules.
sur les lames au moyen du lut de Kronig
choisis des anneaux de
(p. 447). Je
18
Original.
coller les
anneaux
des lamelles
un peu de
lut
Au moment
on
les
flambe
support analogue
D'autre part, la lame
Pipette coude
pour ensemencement des
Fig. 265.
267.
cultures en cellule.
Ori-
sur laquelle on
ginal.
est flambe
l'ensemencement
pratiquera
et retourne sur le mme support ou simplement tenue, face
flambe en dessous, avec la
pince
Debrand
(fig.
266).
de
1.
2.
la
lame avec
-266.
Pince
de Debrand,
du milieu
la
spatule de platine.
pour
Les mycoses oculaires, Paris.
3. II est
Fig.
Pour
les
milieux liquides,
1873.
191-2; cf. p.
-38.
plus facile d'oprer avec des lames, mais, lorsqu'on doit suivre la cul-
METHODES SPCIALES
708
il
J'ai
allumer
le
liquide et
lames de
le laisser
'l'alcool et,
brler.
Ensemencement.
L'idal, pour une culture en cellule, est
d'ensemencer une seule spore. Malheureusement l'obtention de
unique est un procd long et dlicat. Pour y parvenir,
une mulsion de spores, en s'arrangeant de manire
ce que chaque goutte renferme une spore. On dpose des gouttes
sous une srie de lames llambes et on choisit au microscope
cette spore
il
faut faire
renfer-
celles
(|ui
ment
une seule
spore.
On
Fig.
peut gnrale-
ment
267.
colo-
se
dispenser
UC Cetie preCaUllOU,
surtout si on part
.
d'ensemencer un
'
trs
petit
en prenant bien soin qu'elle ne puisse toucher les bords de l'anneau de verre. On peut fermer la vaseline qu'on applique au
pinceau, en tenant le petit appareil entre le pouce et l'index. Je
trouve prfrable de lu ter la paraffine tendre qu'on applique
avec le fer lu ter (fig. 181). Il peut tre avantageux, dans certains cas, de mettre au fond de la cellule une goutte d'eau stri-
lise,
ture
un
fort
709
TECHNIQUE MYGOLOGIQUE
Conduite de
la culture.
Il
faut toujours
l'aire
un
assez
grand nombre de cellules, cause des insuccs invitables (desschement ou talement des gouttes). Les cultures la temprature
ordinaire russissent gnralement sans difficult.
mme
de
Il
de celles des
met scher
Ttuve 37
Cultures sec.
qui
se
Depuis
sont
Culture sche
Fig. 268.
on tube. D'aprs de
Bcurmann
et Gougcrot.
Culture sche
Fig. 269.
sur lame pique dans
la glose. D'aprs de
Beurmann otGougerot.
d obvier
la difficult
Culture sche
en cylindre Borrel. D'aprs de Beurmann et
Fig. 270.
Gougerot.
Tennui
ou sec ^
Il
enseir.enrait les
CJiampignons sur
le
bord d'une
gouttelette du milieu solide, place soit sur une lame, soit dans
un tube et observait le dveloppement du myclium sur le verre
sec. Ce procd a t repris rcemment, pour Ttude de la sporotrichose, par de Beurmann et Gougerot qui lui ont donn le nom
1.
p.
465,
METHODES SPECIALES
71
de procd des lames sches ils placent une lame de verre dans
un tube garni d'un doigt de bouillon sucr (fig. 268), ils la piquent
dans un tube de glose sucre (fig. 269), ou mieux encore dispo'
sent trois paires de lames dans un tube Borrel (fig. 270), en les
maintenant cartes par un lige entaill '. Aprs strilisation de
Tappareil, on
ensemence
forme de colonies
le
le
procd est bien plus expdilif que celui des cultures en cellules,
mais il est aussi moins rigoureux; le dveloppement des colonies
est livr
Il
au hasard
et
est difficile
il
Mthodes d'examen.
Nous
morphologie des Champignons, parce que leur confection fragmente le myclium, dtache les spores et brise les ramifications.
colorants
bactriologiques ne
qu'ils sont beau-
rsultats, parce
coup
trop
s'efforce
la
les
reconnaisse
outre,
ce sont des vgtaux fragiles qui, gnralement, ne suiportent
pas sans dommage les procds un peu violents des bactriologistes
(fixation la flamme, dessiccation, etc.). A part les Microsiphons
qui, pour certains points, se rapprochent des Bactries, les Champignons rclament une technique dlicate.
Lorsqu'on les tudie dans les tissus, ceux-ci doivent tre traits
par les mthodes histologiques, mais, lorsqu'on examine des Champignons en cultures ordinaires ou cellulaires, il faut viter les
manipulations qui ))euvent contracter et dformer les filaments
1.
71
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
ce liquide que devront tre excuts les dessins qui sont la base
de toute bonne description systmatique. Le montage au baume
Coupes de cultures.
difticiles
obtenir
et
Lorsque
que
la dilacration
on
la traite
dans
les
1.
Un modle
d'tudes cytologiques est le travail de Maire, Recherches cijtodo Paris sciences), in-S"
MITHODES SPCIALES
712
Quoi qu'il eu soil, daus lous les cas de mycoses, ou fera bien de
couserver d'une part du matriel sec dans des tubes striles,
d'autre part du matriel fix par uu fixateur histologique, de
prfrence
liquide de Bouin.
et coloration des
le
Examen
Champignons filamenteux.
Un
des
les claircir et
meilleurs milieux
lactopJiiol de
Amann
(p.
au besoin
les colorer.
444).
Il
suffit
souvent d'examiner
le
Champignon dans ce liquide ])0ur tudier parfaitement sa morphologie. Ce procd prsente Tavanlage de ne masquer aucun des
dtails de la
membrane. Pour
suffit
le
de chauffer doucement
C4B
monte au lactophnol, ou
gnation
impr-
])ar le
lactophnol.
Dans certains cas, on emploie avec avantage le Sudan III
en solution dans le lactophnol (solution concentre chaud), qu'on
peut additionner d'un millime de bleu coton, comme le conseille
1.
Pinoy a propos
le
milieu suivant
2.
XXI,
plomb
p. 42-16, 1905.
2 p. 100, 10
cm\
713
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
dence
Tamidon
et le
glycogne.
Il nous est
Inoculations exprimentales.
impossible de
donner ici le dtail des mthodes d'inoculation particulires
l'tude de chaque mycose. C'est d'ailleurs un champ dans lequel
l'ingniosit de l'exprimentateur devra se donner libre cours. Le
s'est
exemple que
autre ct, au
animal.
L'tude
mode
le
Pigeon,
la
et,
d'un
patte de cet
particulires
moins au dbut.
ne
11
dans
d'introduire
la
suffit
circulation
ou
dans
le
pritoine
l'agent
moment o
il
trs
il
est
mycoses
les
localises,
on emploiera uniquement
la
voie sous-cutane
MTHODES SPCIALES
714
Champignon
Bambou, sur
exprimenter.
Blastomyctes.
Les cultures seront examines dans
le lactophnol et colores
peut aussi faire des frottis et les colorer, soit
au Romanovsky, soit au bleu coton en solution aqueuse 1 p. 100,
l'azur II alcalin, etc. Dans les frottis d'organes et dans les
au bleu coton.
On
le
Pour obtenir des asques avec les Levures, faire des cultures soit
sur blocs de pltre, soit sur milieu trs peu sucr
(eau 100,
glose 1, peptone 1, glucose O.^lo), ou mieux encore sur des
'
Champignons des
teignes^.
1. Prlever les
poiis, squames ou cheveux avec la pincepiler
ou par raclage avec une lame. Conserver entre deux lames flambes, enveloppes dans une feuille de papier portant les indications
men extemporan
dans
cheveu ou
la
squame
Gorodkowa, Uober das Vcrfahren rasch die Sporcn vou Ilofepilzen zii
gcwinncn. Bull, jardin iuipvial Sainl-Pctcrsiourij YIII, p. 165, 1908.
5. Tous les dtails qui vont suivre (sauf la nouvelle mthode (|ue je
propose
pour le diagnostic) sont emprunts l'ouvrage du D'" Sabouraud, Maladies du cuir
chevelu.., III, Maladies cryptogamiques. Les leir/nes. Paris, Masson. in-8" de 8r5 p..
1.
28
pi., 1910.
715
TECUiMQUE MYCOLOGIQUE
dans
soliilion
la
fortement.
n'est pas facile, aprs le traitement par la potasse, d'obtenir
Il
les
trs
ainsi,
des
instantanment,
claircies
que par
la
prparations
jiolasse et
Le cheveu
au
725).
([).
On
obtient
dans lesquelles
est
s'crase pas.
Pour rendre
telles quelles,
quelques instants
et les
cheveux
trois
cheveux
et
bien car
ils
de squames. Mthode
de Sabouraud.
ou
la sup}ortent trs
monter au baume.
4. Mthode d'ensemencement.
Tout
le secret
de
la
russite
de Sabouraud
fragmentation
est
un centimtre Tun de
l'autre.
Cette
ments du myclium,
pas possible.
Poir riierps
circin, on
fait
sourdre du pus ou (W
la
srosit
MKTHODES SPECIALES
716
qu'on ensemence. Si
la
qu'on ensemence.
qu'on fragmente
Sabouraud recommande de faire de nombreux tubes (5 ou 6 au
moins) el de n'ensemencer que 5 ou 6 parcelles sur chaque tube.
el
Tondre entre
huitime jour
C'est vers le
parasits
surtout
Myctomes.
Le diagnostic des myctomes
Il
faut
toujours fixer
Pour
les
1.
E. Briimpt. Les
XXI,
1906.
myrtomos. Arch. de
parasitolorjie.
X.
p.
TECHNIQUE MYGOLOGIQUE
717
par inoculations locales (inlhoile de Pinoy, p. 713), de pifrence par insertion sous la peau de fragmenis de Bambou, pines,
Actinomycoses.
L'tude
le
pus ne
sissement.
On
les
transporte
dans
centrifuger et laver
le
Coloration du pus.
La coloration des Champignons de l'actinomycose prsente une difficult particulire, parce qu'il faut
mettre en vidence les filaments mycliens et les massues. On
profite
nent
le
Gram,
prennent pas
et
pren-
tandis
le
mthode ordinaire, puis colorer le fond et les massues par l'osine 1 p. 100 ou mieux par la fuchsine acide 1 p. 100, ou
encore par la fuchsine phnique de Ziehl, mais sans chauffer. La
fuchsine acide prsente l'avantage de donner une coloration intense
on arrte la
et de permettre une diffrenciation facile par l'eau
la
METHODES SPECIALES
718
comme
1.
il
suit
comme
trois
d'habi-
minutes
froid.
3.
4.
Faire
agir
5.
Sans
laver,
le
Alcool
40 cm-^.
Actone
Acide acli(iue cristallisable
^ol. aq. sat. de fuchsine acide
10
VI gouttes.
jusqu' ce que
les grains
la
au microscope).
6. Diffrencier dans de l'eau propre, jusqu' ce que les massues apparaissent en rouge vif sur un fond rose trs clair. A ce
moment, laver l'eau actifie pour arrter la dcoloration.
7.
On
et les
ou par
rubine acide 1
la
p.
comme
il
100, en diffrenciant
le
fond
est dit p.
419
comme
plus
haut.
la prparation est bien russie, les noyaux sont violaprotoplasmes ross, le collagne et les massues rouge vif,
filaments mycliens bleu violet trs fonc. Si on a soin d'ac-
Lorsque
cs, les
les
tifier le xylol, la
nant dans
l'eau strile.
2.
Ravaut
719
TECHNIQUE MYCOLOGIQUE
produit de la dissociation dans un tube de glose ordip. lUO de dextrose et liqulie 40 ou 45". Bien
naire, additionne do
le produit dans toute la masse
ag'iler avec le lit de plaliue, pour rpartir
du milieu de culture. Laisser refroidir sans incliner. Mettre l'luve
37". Les colonies se dveloppent en deux huit jours dans la profondeur de la glose.
4. Repiquage. Extraire la glose du tube et prlever les colonies en
la dcoupant avec une forte spatule de platine. Choisir les colonies au
microscope, en examinant les fragments entre lame et lamelle llambes,
un faible grossissement. Laver nouveau dans du bouillon strile.
Ensemencer comme prcdemment, dans la profondeur de la glose,
et mettre l'tuve.
Pour faciliter ces oprations, employer des tubes de Burri, ouverts
aux deux extrmits et ferms d'un cot par un bouchon de caoutchouc
il est facile d'en extraire le
cylindre de glose.
Lorsque les grains sont trs souills de Bactries, on prati([ue le
premier ensemencement comme il a t dit plus haut et, en outre, on
met quel([ues grains, bien lavs, dans des tubes secs et striles qu'on
garde l'obscurit et la temprature ordinaire, pendant deux ou trois
semaines. On fait ensuite des ensemencements avec ce matriel conserv, aprs la mort de la majorit des Bactries.
Semer
3.
le
Sporotrichose.
Le diagnostic ne peut
trs difficile
de dceler
que sous
il
n'existe
la
lre fait
que par
il
est
le
la srosit
lsions ouvertes,
fait
d'em-
ble.
le
pus peu-
MTHODES
720
(lanl(jiiel(iiies
se dveloppe
Sl'ECIALES
sec.
Il
faut bien savoir, et c'est sur quoi on n'a pas assez insist, fjue
toile qui se dveloppe n'est pas forcment une
toute colonie
colonie de Sporotrichtim.
vrification
au
une dtermination. La
faire
microscopique pourra se
faire
sur les
vrification
colonies dveloppes
au
si
on
Pour tudier la morphologie des Sporoirichum, il faut absolument faire des cultures sur lames sches, ou mieux des cultures
en cellules. Les meilleurs colorants sont l'azur
II
alcalin et le bleu
Rat (ou
la
sa bourse,
on cautrise au
que
trls
les rsultats
le
fer
tre con-
botryomycose cquine.
18 fv. 1911.
CHAPITRE
III
HISTOLOGIE ET CYTOLOGIE
VGTALES
Il
peut tre utile pour le micrographe,
de savoir examiner extemporanment
et
et
mme
pour
le
mdecin,
tissus
une
Inclusion.
paraffine et dbits
Pour un examen
rapide, ce
mode
on obtient d'excellentes coupes au microtome main ou au microtome de Lelong, aprs enrobage dans la moelle du sureau (p. 327).
Pour couper les objets durs {bois, graines), il faut prendre un
fragment; humecter
petit
de
la
glycrine,
suivant
la
le
minces
mais par
M. Laxgkcdn.
Prcis de Mioroscopie.
-iO
722
INIKTHODES SPCIALES
essayer d'achever
la
risquerait crabimer
comme
le
[iaisse
el
ou
tirer le rasoir
trs
il
a t dit p. 'SH,
minces
et
un mlange
(tig.
155, y)
et faces planes.
Pour
inent,
il
est indispensable
non
fixs histologique-
frais
et la
faites
Bain d'hypochlorite.
chlorite de
la
Il
du temps, emploie-t-on
paraffine ou dans la
est essentiel
sodium ou de potassium
et
non
les
moelle de
d'employer l'hypo-
rile,
la
liqueur
filtre.
ne faut pas prolonger trop longtemps l'action de l'hypochlosurtout avec les tissus jeunes qui |)ourraient tre dtruits.
cinq ou
dix minutes.
l'eau acidule par l'acide actique ou dans
de soude, puis l'eau ordinaire.
1" Carmin et vert d'iode.
La mthode clasColoration.
le
carmin alun
et le vert d'iode
2"
d'iode.
4"
1.
Monter
Sauf
la glycrine glatine
la glatine forraolc
ou au sirop d'Apathy.
de P. Masson
(p. 346).
lignifis sont
deux couleurs
parfait.
vert solide
la
et
Bleu
rouge carmin;
2"
12^
de
mthode donne,
Le
mme
deltapurpurine.
mthylne
mon
avis
des
et rouge de ruthnium.
Cette
\ des rsultats encore plus beaux, et
les
coupes
la
paraffine colles
Le
en bleu,
3
les
d'actate de
Monter
fig.,
au
1 p.
la glycrine glatine,
Aleurites.
1902.
p.
181, 1903.
Voici
comment Guignard
la teinture
d'alivanna. puiser
METHODES SPECIALES
724
ractif
En
alun
rsum^ avec
et le
Sudan
les
le
III
ment par
riiypochlorite de sodium.
A. la
Montage
non colors.
d'objets
rigueur,
neutre
le violet
examins
tre
coupes ou de
monts
et
petits
organes
vgtaux entiers.
Le ramollissement
fait
trs
bien dans
beaucoup de temps.
et le
le
lactophnol
2 parties
1
.......
maximum, employer
le
rsultats.
lactochloraJ
en poids.
Pour obtenir
^
le gonflement
mlange parties gales
rapidement
par
et
le
pour
les
lgrement.
On
fois le liquide,
en
l'aspi-
1.
XI,
Le
p. 16-21, 1894).
725
4
4
2
sodium
Milieux cupriques.
Pour conserver
la
couleur verte de
la
Microchimie vgtale.
Je
me
bornerai
indiquer des
ractions simples, permettant de reconnatre les principaux composs qu'on peut avoir caractriser dans des vgtaux. Je ne
puis donner
la
Aleurone.
Se colore
gommes
raction
et
xanthoprotqiie,
METHODES SPECIALES
726
Pour
rine,
Schweitzer).
Le chlorure d'lain iod (Mangin) donne une coloration bleue qui
permet de distinguer la cellulose de l'amidon; ce dernier se colore en
violet par le mme ractif. On le prpare en dcomposant par trs peu
d'eau le chlorure d'lain fumant; on ajoute un peu de solution aqueuse
d'iode et de chlorure de |otassium.
La
cellulose des
Champignons
gn-
1. A 10 cm' do soutioa
sirupeuse de ces chlorures, ajouter 5 dcigr. d'iodure
de potassium et 1 dcigr. d'iode. Conserver en flacons jaunes.
2. Voir p. 730, note 3.
3. Se prpare en arrosant
d'ammoniaque de la tournure de cuivre. Doit dissoudre le coton.
727
mlange d'une grande quantit de cldtinc, aussi ne donneaucune des ractions prcdentes.
I/hinalun colore plus ou moins toutes les celluloses non lignifies.
Le Sudan III en solution alcoo!i(jue les
Membranes cutinises.
raleinent
t-elle
'
l'ammoniaque
lignifies
par Buscalioni
METHODES SPECIALES
728
violet neutre (p. 723) les colore en rouge bruntre. Le bleu de nnplilylne les colore nitachromatiquement.
la cellulose pure ne se colore pas par le bleu
Bactions diffrentielles
de mthylne et les matires pectiques ne prennent pas le congo
:
ammoniacal.
Tannin. Les composs lanniques se colorent en noir bleutre par
le perchlorure de fer, en brun par le bicliromate de potassium, en
rouge
la potasse, en bleu fonc par le bleu de mthylne. Ce dernier
colorant donne une raction trs nette, mme en solution trs tendue
(1 p. 500000), avec des tissus frais, mais il ne faut pas oublier qu'il colore
par
mme
de
la
phloroglucine.
'
de Poirrier
la
gomme
pure verte.
gr.
2.
p-r.
2i
729
le thymol en solution alcooli(iue 15 p. 100, puis par l'acide sulfurique concentr. La coloration obtenue est le violet fonc avec le nnphtol
et le pourpre fonc avec le thymol. On peut aussi traiter les coupes
froid par une solution alcoolique d'oreine ', puis chaud par l'acide
ou
la
(15 30 minutes)
tre transforms
coupes par
le
les
laver avec soin, puis les plonger dans une solution 20 p. 100 d'acide
au
pyroi^allique. La coloration des parties phosphores varie du jaune
conc. de sulfate de
d'ammonium,
magnsium,
15 vol. d'eau.
On
Quinine.
D'aprs Pozzi-Escot, ce corps donne, avec le chlorure de
platine, des granulations fortement birfringentes.
Bleu coton
callose.
Bleu de mtliylne
tannin ahin bois et suber.
Carmin alunc membranes non lignilies.
:
pw
cellulose,
aux dpens de
l'orcine
l'air et
de l'ammoniaque. Le
Mlh[IODES SPKCIALIiS
730
Cyanine
suber^
bois,
membranes
cuLinises,
laoplasles,
huiles
lhres.
rifies.
Mthode de Gram
bois et suber.
les fois
qu'il ne s'agit pas de
lactophnol de Amann rend les plus
grands services, quel que soit le groupe de Cryptogames qu'on
dsire tudier. Non seulement ce ractif facilite la conservation et
Cryptogames.
Toules
recherches cytologiques,
l'tude microscopique
le
du matriel
frais,
mais encore
il
permet de
restaurer, d'une manire surprenante, le matriel dessch, conserv dans les herbiers. L'imbihilion par le lactophnol froid,
(anthrozodes),
la
mthode des
frottis
signals services, condition que ces lments soient en suspension dans une petite quantit de liquide.
Pour
les
se
reporter
Champignons^
702
720). J'ajouterai
gique (p.
la manire de colorer
les
Cette mthode^
ou desschs, sont
bouillis
dans
l'alcool
pour enlever
l'air.
Blan-
2.
731
Au luomeut
violet.
la
Aprs
glycrine.
On peut
heures par un mlange de benzoazurine ou d azurine brillante et de rosaazurine, en dissolution dans
Le mjxlium
aussi colorer
deux ou
trois
carbonate de sodium 20
le
p.
et
observer
dans de
la
Laver
et
baume. Par
cette
le
la
de
le
cytoplasme rouges.
peut encore, plus simplement, d'aprs Nol Bernard, colorer
bleu d'aniline, aprs macration dans Thydrate de chloral
On
au
sirupeux.
Pour
les collections
mot au
inclure la paraffine,
car
on ne peut les
sujet des Lichens
deviennent si cassants qu'il est
:
ils
1.
L'orseilline
BB
est
dit., 190-2
cf. p. 685.
mi':tiiodes
3 2
spciales
On
Le lactophnol
et
autres milieux de
les
(]). 725).
autre formule est
Amann donnent
les
de trs
mlanges
cuj)riques
Une
le
lactophnol cuprique de
Amann
oO gr.
95
Lactoptinol
Eau
Chlorure de cuivre
Actate de cuivre
2
2
longtemps.
Les Algues peuvent tre moules en prparations microsco]ques soit dans le lactophnol ordinaire, soit dans la glycrine
giatine, aprs imprgnation par le lactophnol. On peut faire
agir ce dernier ractif, soit sur le matriel fiais, soit sur des
mme
que pour
les
pour
la
bonne
sels calcaires
russite,
il
est indispensable
soit eflectue
que
la dissolution
des
dans
la
le
servi dans
733
procd dont
je
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tique;
il
de
telles
la
technique
mdi-
cale,
il
ments
trs
volume,
soit
dans
le
cours du
soil
L 'SI. Langeron, Flore fossile de Szannc, 3* fascicule, Nouvelles considrations sur les formations travertineuses anciennes et contemporaines. Bull. Soc.
hist. nat.
d'Autun,
XV,
p. 59-83, pi.
III-V, 190?.
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3*^
Mann, Physiological
Mcthods
histology.
and
theory.
O.xford,
et
blood parasites.
3*^
dition,
Liverpool,
University Press,
Das
botanische
Praktikum.
4"^
dition,
Jena,
Les chiffres
gras
incfiquent In
Albuminodes, 725.
Aberration chromatique,
des lentilles, 50.
51, 54.
('remdes). 51.
Acanthocphales,
5G2, 573.
Acariens, 57S.
Accentuateurs, 364.
Actone. 276, -286, 303, 395.
Achromatisme,
Acide actique,
5-2.
271,
365.
phnique, 365.
phosphomolybdique, 424,
397.
sulfureu.x:, 264.
le verre), 455.
Alun, 363.
de Ter, 363.
Amann (milieux d'observation), 444.
Ambhjstefjium ripariinn, 489.
Amibes,
Amidon,
471.
726.
671,
(polarisation),
Amba mris, 472.
coli, 472.
Umax, 472, 477.
Acidit, 668.
Acido-rsistance, 693.
717.
206-.
Amphochroraes (colorants),
Amylode, 366, 672.
Analyse chromatique, 668.
Adsorption, 354.
Ati'tage des rasoirs, 322.
Agalli, 513.
flxateurs, 270.
357.
Agents
525.
506, 725.
Aygreguta,
thylique.
Actinomycose,
tiers, 258.
271.
.302.
chromique, 271.
picrique.
au
mthylique,
Aleurone, 725.
50.
241,
322.
Angle d'ouverture,
349.
46.
limite, 48.
Angstrm
(unit), 59.
13
TABLE ALPHABETIQUE
Balantidium
Anguille,- 488.
Anguillules,
Aniline, 365.
5"L
entusooii. 532.
Balbiani, 529.
Balb'uDiia r/igaii/ea, 529.
Animaux marins,
-296.
Anisotropc, 19'5.
Ankyloslonies, T)?!.
Balfour, 632.
Antiirozodes.
Ballenger, 505.
Ballon de verre pour clairage, 32.
Antiforminc,
Apathy
Buchanan, 507.
'/oO.
697),
096.
443,
(sirop),
Barach, 516.
Barbeau, 528.
Barres de Leuckart, 309.
418.
Aplantismc, 5-2.
Apochromats, 77.
Appareils accessoires,
Baschieri, 542.
Bass. 565.
Batteries de tubes Borrel, 318.
2-27.
d'afftage, 322.
dessiner, 116.
dessiner miroir, 118.
dessiner d"Abbc, 118.
Baume du
Canada,
432,
Baumwollblau,
Beauchamp
665.
(de), 537.
mtalliquesM
506, 509.
140.
et Philibert, 696.
694.
Artbropodes, 574.
Biot, 365,
Birfringence, 194.
Bitume de Jude, 449.
Auto-agglutination des
Autopsies, 515.
Auxochrome,
Axes d'lasticit,
hmaties, 492.
250,
II, 250,
389, 470.
364, 389,
de nithylcne, 367,
Azurine
470.
386.
brillante, 730.
393.
524.
de
la lpre. 697.
pesteux, 697.
de la tuberculose, 692.
de la tuberculose dans l'urine, 696.
Bacillus hastilis, 515.
Bactries, 689.
B
Babes (safranine),
Azurophile, 388.
Babsies, 519,
Blastomjfctes, 714.
Blcpharocrids, 613.
195.
Azorubinc, 726.
I,
Blanchiment, 450.
Blaps mortisaga, 526, 527.
Blatte, 472.
357.
461,
400.
Benzoazurine, 730.
Benzopurpurine, 726.
Beurmann (de) et Gougerot, 709.
Bezanon
436,
de Sergent, 592.
Arborisations pricellulaires, 661.
Azur
420,
464.
pyognes, 691.
Borrel, 388.
coton, 40Q. 712, 729.
coton au lactophnol, 712.
de Lyon, 400.
de mthyle, 385, 400, 430.
de mthylne, 250, 251, 356, 384.
pour micrographie de .Saint-Denis,
100.
de
de
de
de
naphtylne, 728.
Nil, 250.
nuit, 400.
Paris, 400.
polychrome de Unna,
388,
390,
427.
polychrome de Martinotti, 384.
polychrome
et orcine, 429.
TABLE ALPHABETIQUE
Bleu dctoluidine,366,
711.
Victoria, 396.
Bleus basiques, 384,
acides,
400.
Blochmann,
505.
425, 529.
Bodo acertx,
479.
(coupes), 722.
Bombinator igneus,
532.
370,
chlorhydrique alcoolique, 371.
d'indigo, 400,
6S1.
et vert d'iode, 722.
4-26,
padiypus, 532.
Bonnet
737
cliinois, 493.
Carotte, 207.
(milieu de culture), 702,
Caroline, 207.
Brachycres, 596.
Bracliyclium crassicolle, 570.
Brandesia turgida. 570.
Bras porte-loupe, 111.
Breinl et Moore, 482.
476.
Helminthes, 568.
oculaire, 102.
de Ramsden,
102.
Cercopithecus
fiiliginosiis, 493.
Certes, 537.
Trichine, 573.
Chambres claires,
Puces, 595.
Punaises, 593.
viridis. 532.
Bulles
rubcr, 493.
Bruntz, 677.
532.
Bii.fo cahimita,
Brossage, 257.
d'air, 420,
Cellodine, 315.
Cellules en carton, 244.
en papier, 438.
.Centrage de
Brochet, 528.
Broquet, 697.
Brumpt Amibes,
Cartilage, 657.
441,
'i65.
116,
123.
1.38,
d'Oberhauser,
127.
coulisse, 24.
Calcite, 194.
Chercheur MaUwood,
Calcium
Chien, 456.
ChironomiJs, 613.
(sels), 671:.
Calt'at, 518.
Chitine, 578,
Callithrix, 495.
Callose, 726.
M. L.^.NGERON.
675,
229.
727.
Chlamydozoaires, 510.
634.
Champ, 50.
Champignons, 702, 730.
Changeur d'objectifs
171,180.
d'Abbc. 118.
de Maiassez, 123.
de Dumaige, 125.
de Nachet, 125.
Prcis de Microscopie.
47
TABLE ALPHABETIQUE
738
725.
salicylc. 715,
Chloralose, 458.
Chloralphnol.
Chlore, 450.
575,
715, 724.
Colorations, 352.
Cholestrine, G73.
Chou rouge,
669.
Chrombeize, 364.
Clu'omogne, 357.
Chromophore, 357.
Chromotropes, 366.
Chroinotropes de Ilochst, 399, 421.
(les
Infusoires,
5.39.
Ciment de do Groot,
451.
Lataste, 454.
Cire pour lamelles, 242.
Clart de l'image, 49.
Classification des objectifs, 76.
Claudius (mthode de), 396, 690.
Cloche de verre pour microscope, 140.
457, 487.
Coccidies, 524.
Cobaye,
en niasse, 362.
mtachromatiques, 361, 366.
monochroniatiques. 361, 665.
orthochromatiques, 366.
panoptiques, 362.
post-vitales, 251.
spcifiques, 359.
vitales, 248, 469, 534, 559, 624.
Colpidium coljwda, 534.
Schubert/i, 524.
Coccus cacti, 369.
Composs pectiques,
Cochenille, 369.
Coefticient micromtrique, 186.
Cnures,
551.
dis-
tille, 345.
la gla-
tine, 346.
Collagne,
652,
Cne d'clairage,
40, 43.
Conglation, 270,
329.
674.
727.
Callargol, 701.
Colle pour chantillons de collections, 454.
Contention, 456.
487.
Coprologio, 562.
Coralline sode,
Colorants, 356.
acides, 356,
397.
382,
50J.
cytoplasmiques, 356.
indicateurs, 250,
252.
729.
de Guarnieri, 540.
de NeQ:ri, 540.
de Prowazek, 513.
Correction des aberrations, 52, 173.
artificiels, 356.
basiques, 356,
726,
d'interfrence, 199.
TABLE ALPHABETIQUE
Couleurs do polarisation, 201.
de soustraction, 201.
262,
7.32.
Deegener, 590.
Dcetjen, 477.
73U.
Cutinc, 727.
Cuvettes dissection, 545.
460.
Diamant-fuchsine, 396.
Diapason lectrique, i57.
25, 36, 47.
347,
Culicides, 600.
Curvimtre,
578.
Dparaftiner,
Crustacs, 243.
hyaline, 672.
Delano, 501.
Deltapurpuriue, 723, 726, 729.
Demi-dessiccation, 257.
56.
Cryptogames,
collode, 673.
graisseuse, 673.
Dpigmeutation, 450.
Dermatoscope, 115.
Dshydratation des coupes, 419, 461,
Cristalviolet, 393.
Cropper. 522.
Crown-glass,
Demodex,
455.
730
Dcalcification,
652.
Diaphragme,
de champ, 50.
cylindre,
26.
pour fond noir,
iris, 29.
tiroir, 26.
tournant, 25.
209,
211.
sphrique,
du
chromatique
de marche, 199.
grossissement, 57.
Cyanine, 730.
Cyanochin, 701.
Cyanure de potassium, 588.
Cylindres Borrel, 347.
Cynocphale, 493.
Diffrenciateurs, 360.
Cysticercodes, 552.
Cysticerques, 551.
Cysticercns fasciolaris, 570.
Dimthylamidoazobenzol,
pisiformis, 570.
Cytodiagnostic, 643.
Cytologie, 664.
vgtale, 721.
Digestion
artificielle,
441.
Davidson, 505.
253.
Dammar,
695.
Diphtrie, 692.
Diplodiscns subclavatus, 570.
Diptres, 594.
260,
Dissociaieurs, i!58.
Dissociation, 254.
chimique, 258.
TABLE ALPHABETIQUE
740
Disque color,
33.
dpoli, 33.
Distance focale,
frontale, 50.
Dominici (fixateur), 283
(coloration),
420.
1.
(diffrenciation), 419.
Doublets, 110.
Dubrcuil (tissu conjonclif),
Duperie, 517.
Dysenterie, l"-?.
86.
Ergastoplasme, 666.
Van Ermengen (imprgnation
1-25.
argen-
tique), 506.
Erythrosine, 399.
Kau
d'aniline. 3G5.
347.
bouillante, 270.
de Javel, 695, 722.
oxygne, 451.
central, 75.
fond noir,
208,
469, 513.
crans colors,
33.
oculaires, 166.
Eisenberc:, 701.
lasticit optique, 193.
Elastine, 674.
leidinc, 675.
3(j6.
Jiasruca, 573.
proteus, 573.
de Unna, 427.
Etiquettes, 455.
tuve paraffine,
chinocoques, 551.
Echinorhynchus artgustalus, 573.
ther,
glycriquc
582.
271.
347,
460.
699.
455.
cellules, 708.
d'azur, 388,
402.
luter, 448.
454.
Fettponceau, 357.
Fibres lastiques, 654.
myline, 661.
nerveuses sans myline! 661.
Ensemencement des
692.
Fer, 671.
Fausses membranes,
Fantham, 592.
Fibrine, 674.
Filaires, 558.
Filet
fin,
602, 615.
Fischer, 701.
Fixateurs alcalins, 269.
Fixation, 265.
rationnelle do Rubenthaler, 296.
des animaux marins, 296.
Flacons baume, 437.
TABLE ALPHABl!:TIQUE
Glugea anomala, 528.
Flagells, 479.
(fixateur), 280.
(coloration), 425.
Flemming
208,
noir,
Glycogne, 672.
Goldorange, 253, 397.
327.
Golgi, 511.
469, 513.
508.
Foraminifres, 619.
Formaldhydc, 276.
Formaline, 276.
chromique, 454.
Formation de l'image microscopique, 98.
Formol. 276, 286, 365.
Formule
d'.Vrnetli, 613.
691.
Gouttes au
gramme
(table), 446.
l'urine, 649.
364,
394.
iodophiles, 626.
neutrophiles, 630.
Grgarines. 527.
Groot (ciment de de;, 454.
Grossissement, 170.
Grynfelt et Mestrezat (dpigmentation),
450.
Guarnieri, 540.
425.
dans
396.
iode, 672.
Gonocoque,
Gram,
difl'raction, 61.
d'interfrence, 60.
basique.
728.
Froid, 270,
Gommes,
G radie.
leucocytaire, 642.
Foyer, 4.
Francotte, 615.
Franges de
427.
Fluorine, 77.
Foie, 657.
Fond
lophii, 528.
Glycerinthermischung de Unna,
Glycrine glatine, 442, 556.
Glychmalun de Mayer, 376.
de Garazzi, 376.
Flint-glass, 56.
Fluidification, 695.
741
Glossines, 491.
506.
Guguen,
712.
Guignard, 723.
Gunter, 505.
rubine, 396.
S, 398.
Wagner,
Giinther
Gale, 579.
Hadley, 525.
Hatmatococcus pluvialis, 355.
Uxmatoxglon campechianum,
Halipegus ovocaudatus, 571.
700.
H
Ganglions lymphatiques, 657.
Gasis, 687. 693.
Gastrosteus aculeatus, 528.
Glatine (colle pour coupes la paraf-
fine), 346.
571.
509.
chromotropes, 421.
Hlianthine, 253.
Hliozoaires, 620.
Ghoreyeb,
Giemsa, 408.
mthode rapide,
Hall, 566.
Hamm, 698.
Haplometra cylindracea,
373.
Hlix
410.
lioviensis, 525.
monilifornas, 562.
Gins, 516, 700.
Hmatcinc, 373,
pomatia, 480.
Helminthes, 510.
osine,
418.
418,
Hmato'idinc, 675.
460.
418.
377.
TABLE ALPHABETIQUE
742
Ilmaties, 655.
Hmatine, 675.
Hmatoblastes, 630.
Hmatocrite, 640.
Hmatoxyline, 373,
la paraffine, 299.
Indice de rfraction, 147, 446.
de rfraction des verres d'optique
118.
56.
Infusoires, 531.
de VVeigcrt, 379.
de Morel et Bassal, 380.
Hmine,
59-2.
518.
675.
Hmozone,
Hennoguy (procd
pour
coller
les
coupes), 319.
Herxheimcr,
505.
728.
de paraffine. 415.
de ricin (pour immersion), 83.
Humeur aqueuse, 241.
Hydrolyse, 368.
(mordant),
lodosine, 399,
3i34.
669.
Irisations, 63.
613.
Hymnoptres,
locales, 716.
Hmogrgarincs, 519.
Hmosporidies,
interstitielles, 257.
physiologiques, 677.
Inoculations, 486, 493, 713, 716.
675.
Hmiptres,
677.
Isotonie, 269.
Hypochlorites, 722.
Isotrope, 193.
Ixodids, 579.
Ixodincs, 580. 582.
IxodipliiujHS Caucurtei, 614.
des corps
mmes,
62.
de diffraction, 63.
relle,
secondaire, 59, 62, 65.
virtuelle,
Immersion, 73.
eau, 83.
homogne, 83.
huile de cdre, 83.
au monobromure de
5.
Jellinek, procd
5.
K
naphtaline,
83.
--
du condensateur,
38, 214.
la
432, 506, 509. 660.
desl'argent.
ncurofiljrillcs, 433, 660.
^ des endothliums, 433.
par les sels de plomb, 509.
Inclusion, 298.
la ccUodine, 313.
mixte la cellodine et la paraffine, 317.
au collodion, 313.
la gomme glycrine, 318.
color), 33.
Kaiserling, 453.
Kala-azar, 495.
Karyokinse, 666.
Kratohyaline, 675.
Klatsch, 706.
Klossia helicina, 525.
Kohler (mthode
Kiilpin
Ravn,
de), 73.
731.
Kresylviolet R, 505.
Krnig
(lut),
447.
Krystalviolet, 393.
TABLE ALPHABETIQUE
Lactophnol de Amann, 444,
71-2,
1-U, 730.
Lame
intestinalis, 479.
Lames,
234.
"206.
23L
la),
Limnxa
86.
albo-carbon, 33.
Lampe
575.
de
de
de
de
Lindsay-Johnson, 281.
Lugol, 364,
Mann,
395,
413, 415.
285.
Perenyi,
282.
de
de
de
de
Rousselet, 619.
Teliyesniczky, 282.
von Wasielewsky,
(mthode
de
coloration
699.
Lcithiac, 673.
Longueur
i97.
iropica, 498.
trisuica, 489.
et Potrzobowski,
Lemna
Lenartowicz
.502, 506.
Lentilles, 2.
concaves, 5.
pour clairage, 32, 43,
Leporsky. 505.
Lesage, 477.
525.
Zenkcr, 284.
cils), 364,
Lper
fixation. 294.
Leucocytes basophiles.
osinophiles, 655.
iodophiles,
626.
Liquide amniotique,
de Borrel, 281.
de Bouin, 284.
do Carnoy, 284.
641.
cphalo-rachidien,
de Dominici, 283.
de Duboscq-Brasil, 285.
de Flemming, 280.
de Gilson,
284.
de van Gehuchten, 284.
do Hermaun, 281.
de Kloinenberg, 286.
Loffler
Leishmania (cultures),
indiffrents, 240.
physiologiques, 240.
Lavage aprs
(runcatiila, 570.
Lindner, 513.
Linguatulides, 578.
Liquides additionnels, 241.
conservateurs, 452.
d'examen, 210.
241.
2.
Langeron (Arthropodes),
425, 426.
727.
Lamelle,
84.
(influence de
paisseur,
86, 165, 215.
mensuration de l'paisseur,
en
236.
en glatine,
mica. 421.
400,
Lichtgriin, 383,
Lige,
pour
sches, 709.
sensibles,
743
Levures, 714.
Lzards, 519.
Lichens, 731.
orseille, 401.
cuprique, 73-2.
et Balthazar, 686.
Lambert
Lamblia
461, 557,
15.
651.
Loupes,
de Brewster, 109.
de Briickc, 110.
de Coddington, 109.
montes, 108.
de poche, 111.
de Steinheil, 110.
stroscopiques, 113.
Lovez. 659.
des
TABLE ALPHABETIQUE
744
Lugol, 364,
Lhe, 550.
Lumire
395,
Membranes
113, 415.
polarise, 192.
du jour, 31.
Luts et vernis, 4
de Kronig, 447.
--
Lutz, 728.
Macacus cynomolgus,
493, 518.
rhsus, 493.
1.
327.
519.
Marett, 612.
Marmotte, 457,
Marqueurs, 228.
Maskenlack, 449.
Massou (P.) collage des coupes
346.
paraffine,
magenta vert lumire, 426.
muci-caraiin,
673.
nettoyage des lames, 237, 315.
ufs d'Ascaris, 666.
safran, 423.
trichromique,
652.
trichromique de Cajal, 426.
xylol actique, 422.
42-1,
Maupas,
535.
hmalun,
319.
371.
glj'chraalun, 376.
muci-carmin, 073.
chlore, 450.
May-Grnwald, 403.
Mcanisme de mise an point,
Mdecine lgale, 686.
Mlanges (voir liquides).
18.
fixateurs, 279.
Mlange de Giemsa, 403.
de van Gicson, 421.
de Ira van Gieson,
de May-Grdnwald, 403.
panchromc
de
de Romanovsky,Pappenheim,
403, 502.
5'25.
675.
Mlanine,
MJophages.
594.
411.
625.
543.
d'Agalli,
d'Alfiori (dpigmentation), 451.
de l'aucsthsie
sous lamelle, 537.
d'Anglade et Morel, 659.
de l'antiformine, 696.
d'Arneth, 643.
de Baecchi, 687.
de Balfour et Buchanan, 507.
de Bass, 565.
de Benda (safranine), 425.
(mitochondries), 666.
de Biffi,
519.
de Biot, 365, 694.
siuicus, 493.
Magenta, 396, 426.
S, 398.
vert lumire, 426.
17.
cutinises, 727.
lignifies, 727.
Mensurations, 179.
la
de Blochmann, 425,
529.
brilles),
de Glaudius, 396, 690, 719.
pour les coupes, 414.
de Curtis, 425, 652.
de Deetjen, 177.
de Dominici, 283, 129.
de de Dominicis, 687.
de Dubreuil, 425, 633.
d'Ellermann et Erlandsen, 696.
de l'encre de Chine, 516, 517, 699.
d'enrichissement, 694, 561, 563.
de van Ermengen, 306, 699.
d'Eysell, 609.
de Flemming, 425.
de Francotte, 617,
de Friedlandcr, 365, 698.
de Fiilleborn, 572.
de Gasis (crachats tuberculeux), 693.
de
509.
de Ghoreyeb,
687.
Gasis
rapide de (sperme),
Giemsa, 410.
de Giemsa pour frottis humides, 413.
de Giemsa pour les Spirochtes, 504.
de van Gieson, 421.
de Ira van Gieson, 525.
do Godfrin, 723.
de
511.
do Golgi,
Gram, 364, 394, 690, 730.
de
et Mcstrczat, 450.
de Grynfelt
Hall, 566.
TABLE ALPHABETIQUE
Mthode de Hamm,
de
de
de
de
Hiuser, 693.
Hoffmann et Halle, 504.
Jacobson, 096.
lavage de Jellinek,
S71,
285,
295. 348.
de
do
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
Kaiserling, 453.
Khne,
672.
Kihne-Borrel, 694.
Leishman,
413, 504.
Lentz, 541.
Levaditi et Manouliau, 510.
Lignires, 717.
Looss, 571.
Lofrter, 364, 506,
501.
699.
Mac-Ncal,
Mallory
et
527,
Wright.
529.
175.
Mann
(osine-bleu de toluidine),
Mann
(bleu de mthyle-osine),
430.
de Pappenheim (coloration
.509,
Schuberg. 529.
et Schroder,
Schuberg
529.
Schultze, 670.
et
Seguin
Mathis, 643.
Spengler, 693.
Stephens, 607, 609.
Taenzer-Unna,
Telemann. 565.
051.
Twort, 485.
Microaquarium de Schaudinn,
246.
Microchimio, 068.
vgtale, 725.
Microfilaires, 558.
Micromtre
138.
171,
objectif,
179.
de Radais, 332.
de Ranvier, 328.
vitale),
621.
624.
Zettnow, 508.
Ziehl-Neelsen, 693.
Mcthyhvasserblau, 400.
Mica, 421.
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
de
429.
de
745
Mthode de Schilling-Torgau,
69S.
binoculaire, 113.
(choixs 134.
compos,
1.
(emploi), 160.
(entretien), 140.
inclinant, 11.
polarisant, 202.
prismes redresseurs,
113.
simple, 1, 108.
stroscopique, 113.
TABLE ALPHABETIQUE
746
Milieu
r)00.
hmoglobinis.
do liquide
Mouton, 477.
de NicoUe, 477, 497.
de Novy-Neal. 497.
au sang chauff, 503.
Milieux de Amann, 241.
cupriques,
gloses, 702.
liquides, 444.
d'observation etde conservation, 436.
de Sabourand, 703.
solides, 436.
7-25.
Minassian, 510.
Mincliin, 483.
concave,
142.
Monobromure do naphtaline,
73,
Mordanage,
bombycis, 528.
Notation des objectifs, 88.
des oculaires, 96.
Numration des lments du sang, 633.
des osinophiles, 637, 640.
des hmaties, 635.
des hmatoblastcs, 631.
des leucocytes, 637, 639.
des liquides pauvres en lments.
477.
159.
Muclimatinc, 674.
Muci-carmin, 673.
Mucilages, 728.
Mucino, 673.
la
642.
366, 673.
656,
673.
Narcotisation, 270.
Nastioukov, 453.
Observation microscopique,
Muscides, 598.
Museler, 456.
Myctomes,
716.
Myline, 659.
432.
et Stachelin, 516.
Nosema
rsolution, 72.
Mucus,
Mulon,
foie, 496.
micromtrique, 19.
19.
ancien,
nouveau, 20.
rapide, 18.
du
de la rate, 496.
Nitsche, 701.
Nggerath
362.
362.
Mouvement brownien,
506.
chromiqiies, 364.
Mouches volantes, 159.
Moyens de
353,
Mordants, 353,
136, 461.
Mouton,
141.
Nissl, 660.
Nissle et Wagener, 572.
83.
agilis, 527.
NicoUe
161.
Monocystis
(Sangsues), 490.
Neri, 542.
Nicol, 196.
Nvroglie, 659.
34.
plan, 3J.
Mise au
Nmatocres, 600.
Nmatodes, 554, 571.
Nemmser et Lissowska, 695.
Nnuphars (Amibes), 471.
Neutralit, 668.
Ncrose, 673.
Negri, 540.
171.
(altrations), 143.
(conservation), 143.
(nettoyage), 141.
(notation). 88.
145.
747
TABLE ALPHABETIQUE
Oculaires, 93, 138, 141, 158, 169.
champ quadrangulaire variable, 17.
compensateurs,
70,
95.
dessiner de Leitz,
d'Huyghens,
1-26.
93.
Paraffine, 299.
liquide, 445.
(lut),
449.
surchauffe, 306.
indicateur, 227.
Paramcies, 531.
Peau,
Pararosaniline, 394.
292,
661.
Pbrine, 528.
Pche au
(notation), 96.
Pectine, 7^7.
Pediculus vesti/nenli, 592.
Pelikantusche. 700.
intestinalis, 532.
Perry, 607.
Persulfate d'ammonium, 451.
ranarum^ 532.
253.
II, 253.
III, 397.
ammoniaco-magnsien,
IV, 253.
Orcinc.
401,
602, 615.
Pntration, 50.
obtrigona, 536.
I,
filet fin.
Pepsine, 260.
Periplancta orienialis, 472, 528.
Permanganate de potassium, 4">1.
Pronospores, 730.
Porroncito (A), 665.
370.
de Ramsden, 94.
il, 661.
ufs d'Helminthes, 562.
Oiseaux, 457, 519.
Opak-illuminator, 227.
Opalina caudata, 532.
Paracarmin de Maj'cr,
Phosphate
de calcium, 207.
Phosphoraolybdique
Phosphore, 671, 729.
Piorocarmin de Ranvier, 371.
Picro-indigo-carmin. 426.
Pied du microscope,
10.
Pigments,
ocre, 675.
paluden,
729.
729.
675.
Orthorladius, 613.
Orscilline BB, 72o, 730.
Os, 657.
Pinoy, 705.
et Magrou. 719.
Pipettes boule, GOl.
striles, 690.
Oscillaires, 471.
Ouistiti, 495.
Piroplasmes, 519.
Piscicola (jeometra, 400.
Plan de polarisation.
107.
Plankton, 615.
Planorbis, 570.
411.
appareil
do Nobert, 176.
Plasmazcllen, 654.
Plasmocytes, 654.
Plasmodium
cijnomolgi, 518.
falciparum, 409.
malavis., 521.
relictum, 518.
vivax, 521.
de
TABLE ALPHABETIQUE
748
chariot,
Protozoaires, 468.
Psychodids, 612.
Puces, 594.
Punaises, 593.
Pupille d'mergence,
do Radais, 307.
Plehn, 519.
Pleistophora blatta?, 528.
Plochrosmc, 207.
Plrocercodes, 552.
Pleurogenes clavi(jei\ 570.
mdians, 570.
Pleurosiyma angulatum,- 63, 65, 66,
48, 102.
d'entre, 47.
Pupipares, 594.
543.
Prowazek,
74,
76, 176.
Pus, 645,691.
Pus actinomycosique,
balticum, 74.
717.
509.
Q
571.
similis, 571.
Poils, 686.
Quinine, 729.
192,
521.
rectiligne, 195.
Polariseur, 197, 202.
Radiolaires, 620.
Rage, 540.
Rahlmann, 544.
Raies de Frauenhofer,
Ramon
498.
du cur du Cobaye,
du
622.
Rana
foie, 496.
esculenta, 532.
ganglionnaire, 492.
lombaire, 493, 644.
Rasoir, 319.
Rat, 457.
de la rate, 496.
Rate, 657.
Ravaut
veineuse, 623.
Porospora gigantea, 527.
Porte-aiguilles,
loupe, 111.
254.
Portunus, 526.
Poulpe, 525.
Poumon,
292.
Pouvoir dfinissant,
49,
ordinaire, 196.
Rayon
extraordinaire, 196.
ultra-violets. 73.
59.
38,
173.
leuco-activant, 625.
rsolvant, 49, 58, 63, 71, 175.
Rd avides,
Prhension, 456.
Prlvement des Bactries, 690.
des exsudais, 513.
des pices, 290.
du sang, 519.
423.
593.
Reitmann, 506.
Repassage sur
la pierre, 323.
Reprage,
228.
TABLE ALPHABETIQUE
Rseau de
Rsines,
diffraction, 63.
colles, 346.
Sdimentation, 261, 564, 695.
Sdiments urinaires, 648.
7-28.
Dammar, 41L
Seiche, 525.
Sels de calcium, 671.
Sepia. 680.
Sergent, 592.
Seringue de ^\'i^rtz, 493.
Rhizopodes,
Ricine, 516.
Srum
Robertson. 501.
Rodenwaldt, 559.
Romanovsky,
Rouge de premier
404,
386, i03,
Rosaazurine, 7.30.
Rosaniline, 39L
Rosenbuscli, 483.
Ross, 492, 522, 560,
252.
neutre, 25u,
50^, 509.
Simulids, 613.
ordre, 199.
2S 1
613.
387.
726.
pata, 493.
Sirop d'Apathy, 368, 443, 448.
Solfrino, 396.
d'orseille A, 726.
Solger, 687.
Solubilit (table), 446.
de rutlTcnium,
Rousselet, 619.
723,
730.
Row, 500.
Rubans de coupes, 336.
Rubens Duval, 283, 429.
Rubine,
artificiel. 240.
de Frey, 241.
Silicate de potassium, 455.
Simonelli et Bandi, 504.
SimuUum,
628.
618.
du bleu de mthylne,
Congo,
749
396.
solides, 351.
Sources lumineuses,
31.
Souris, 457.
Spalteholz, 454.
acide, 398.
S., 398.
Rulison, 701.
Spengler, 693.
Sperme, 687.
Sphaignes (Amibes), 471.
Sphro-cristaux, 206, 728.
balanitidis, 500, 514.
Spirochxta
Balbianii, 502.
buccalis, 515.
dentium, 515.
gallinariim, 502, 506.
(jracilis.
515.
plicatiliSj 502.
refringens, 506, 514.
Vincenti, 515.
vert-lumire, 425,
Spirochtes, 502.
Spores des Bactries, 698.
de Zwaardemaker, 393.
Sporotrichose, 719.
Safrosine, 399.
Salive (procd de
Sang,
621,
f^porozoaires, 518.
la).
478, 538.
686.
Squames,
663.
Statkewistch, 533.
Sangiorgi, 701.
Stomoxes,
Sarcoptes, 579.
Sarcosporidies, 529.
598.
Sublim actique,
283.
Sucres, 729.
Sudakewitch,
Sudan
505.
656,
712, 724,
TABLE ALPHABKTIOUE
750
Sulfure de carbone, 304.
Sui-irella //cmma, 176.
Systme
imprgnation,
Tabanides, 598.
Table de concordance des objectifs, 91.
de concordance des oculaires. 92.
de dilution de l'alcool, 301, 302.
des indices de rfraction, 446.
de Ngeli et Schwendencr, 72.
du noml)re do gouttes au gramme,
416.
crassicollis, 570.
echinococcus, 570.
29.
pallidiim, 503,
209, 512.
Trinitrophnol, 271.
Tropolino, 253.
Tnjpaiioplasma
helicis, 480.
593.
tjatnbieuse, 494.
488.
Tubes Borrel,
317, 377.
de Burri, 719.
pour collections,
591.
du microscope, 18.
tirage (emploi), 87,
Tufs calcaires, 733.
Tumfaction trouble, 673.
histologique, 651.
mdico-lgale, 686.
mycologique, 702.
Teignes, 714.
Teinture d'Alkanna, 723.
de Chou rouge, 669.
137.
669.
rhlcnliutli, 695.
480.
495,
Cruzi, 491,
Trypanosomes, 480,
do l'Anguille, 480,
botanique, 688.
coprologiquc, 562.
cytologique, 664.
hmatologique, 621.
d"Orange sanguine,
Telemaun, 565.
208, 224.
575.
Terpinol, 445.
Ultramicroscope,
cardio'ide, 225.
de Cotton et Mouton,
225.
fente, 225.
objet, 176.
Ttards, 243.
Tliionine, 366,
383.
picrique, 512.
Thiry, 692.
tibia, 497.
512.
Trponme,
Tamisage, 504.
Tannin, 364, 728.
Tapotement, 261.
Taurocholatc de sodium. 506.
Tautomric, 3G7.
Technique bactriologique, 689.
serrata. 570.
Taenzer-Unna, 654.
Tambour du diaphragme-iris,
soluble, 681.
Trypanoplasmes, 481.
Tnipanosoma h'nicei.
Txnia
Trachome, 543.
Travail du verre, 691.
Trmatodes, 243, 553, 570.
Trpanation du fmur ou du
Treponema pallidulum. 515.
432.
59.
(Glycerinathermischung), 427.
cartilagineux, 657.
conjonctif, 651.
nerveux, 658.
osseux. 657.
Vaccine, 540.
Valets, 13.
Valeurs micromctriques,
187.
TABLE ALPHABETIQUE
Van Gieson
751
jonctif), 4-3].
Van Tieghem
Le Monnier,
et
707.
Verratti, 511.
Verniers, 14.
Wasielewsky
Vers, 545.
Vert acide, 728.
acide ammoniacal,
Weigert
diazine,
d'iode, 383,
Vert lumire, 383, 400, 425, 426.
de mthyle. 383.
de mthyle actique 365, 383.
solide et delta purpurine, 723.
7-27.
253.
7-2-2.
Vessie, 292.
Violet aniline, 365, 393, 505.
dahlia, 366, 505.
Wasserblau, 400.
de gentiane, 393,
de gentiane ammoniacal.
hexamthj'l, 393.
de mth3le, 366.
de mthylne, 366, 389.
neutre de Godfrin, 723.
Vis micromtrique.
19,
7-27.
165, 168.
Yamamoto,
507.
Zabel, 516.
Volutine, 676.
Zettnow. 509.
661-11.
au
505.
de l'hmaiine, 418.
dion), 351.
Zwaardemaker
(safranine), 393.
Zweig, 505.
l-lo.
collo-
MASSON ET
DITEURS
C^S
120,
VI'
Septembre
711.
ARR.
1912.
Nouveau Trait de
PATHOLOGIE GNRALE
PUBLIE PAR
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BOUCHARD
G.-H.
ROGER
Vient de paratre
Tome
I.
vol.
gr. /-8 de
(^j(^
Introduction.
le
P.-J. Cadiot
reli
Tome
et
Tratognie.
hnmimits
laxie.
P. Le Gendre
et
FatlwH. Roger
H. Roger
:
P. Vuilleniin
Path. vgtale.
logie compare.
M. Duva et P. Mulon
Etiologie et pathognie.
:
Lembryon
Hrdit et Pathologie.
Ch.
P. Courmont
prdispositions morbides.
F. Lejars
Agents mcaniques.
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le texte
10//-.
Alimentation et Digfestion
par G.-H.
I
vol.
grand
in-Q
de xi-524 pages
et
ROGER
5- figures dans
le texte
fr.
MANUEL
de Pathologie Interne
PAR
Q.
DEULAFOY
Mdecin de
l'lltel-l)ieu,
Mdecine de
Paris,
PRATIQUE MDICO-CHIRURGICALE
OUVRAGE COMPLET
Vient de paratre
La Nouvelle Pratique
Mdco=Chirurgicale
Illustre
DIRECTEURS
E.
BRISSAUD, A. PINARD,
Professeurs
la
Secrtaire gnral
RECLUS
P.
HENRY MEIGE
MEDECINE
CHIRURGIE
OBSTETRIQUE
THERAPEUTIQUE
PSYCHIATRIE
DERMATOLOGIE
OTO-RUIXOOCULISTIQUE
ODONTOLOGIE
MEDECINE MILITAIRE
MDECINE
LARYNGOLOGIE
ACCIDENTS DU TRAVAIL BACTRIOLOGIE CLINIQUE
LGALE
PURICULTURE
MDICATIONS
RGIMES
HYGINE
AGENTS PHYSIQUES FORMULAIRE
La
8
NOUVELLE
P.
M. C.
ILLUSTREE
forme
VOLUMES
maroquin rouge, tte dore,
dos plat, fers spciaux, comprenant un ensemble de 8.000 p^ges,
grand in-8% relis
Tome
Tome
I.
V.
Tome
...
44
fr.
44
fr.
44
i"r.
.... 44
fr.
Labyrinthe. Omoplate
VI.
Ongles. Peste
Tome
VII.
176
fr.
livre le plus
mme
mdecine.
MASSON ET
C'%
DITEURS
Anatome
in-8,
et Dissection,
TOME
Mdecine de Paris.
I.
p^^
rouvire,
seur arege a
la
piofes
Facult de
Membre
Tte, Cou,
TOME
II
(et
dentier)
Introduction
par G.-H.
ROGER,
sup-
12
l'tude de
la
Mdecine,
Physique
^
biologique,
o ~h
7
*'
parGWEISS
10
professeuragrgla
2" dition revue
7
'
P^^ Maurice
de Lausanne.
fr.
Facult de Pans.
(543 figures)
Physiologie
^
^
fr.
fr.
professeur l'Universit
dition
(>Sous Presse)
ARTHUS,
4^
Chimie physiologique,
p;;J^_
.^/.t
:'T^.
Biochimie
Dissection
Examens de Laboratoire
en
cunique
f"Ci%!f
L. BARD, professeur
jav
Dao-no^tc
meaicai
diagnostic mdirai
spillmann
et p.
haushalter,
Mdecine
.
infantile,1
et 2
p.nobcourt
culte de
Pans.
agrg iaFa-
2^ dition entiereinent
Chirurgie
infantile,
^
!,
'475 figures]
par
14
fr.
kirmisson, professeur la
2^
de
dition
Pans,
12 fr.
Pf^
Facult
p^^
lacassagne,
Lyon,
2 dition
P^^^- ^OR^X,
Oohtalmolo^ie
*^
^__L Lariboisire
? runiversit de
{ii2fig.et 2 pi.). 10 fr.
ophtalmologiste de l'hpital
12 fr.
fi g. et 3 pi.)
{33g
Dermatologie
^
^-
P^^
^
(Suite)
varier, mdecin de
l'hpital Broca.
12
{122 figures)
fr.
Jeanselme agrg la
p^^
exotique,
f
2
1 Facult de Pans, et E.RIST, mdecin
des hpitaux (760 figures et 2 planches)
12 fr.
Pathologie
^
-,
p^^^ richaud,
Thrapeutique et Pharmacologie,
^
professeur
agrg
la
Facult de Paris,
ParasitoloS^ie
!
2^ dition
12
fr.
Microbiologie
clinique,
!.
p^^
^^'^^^ ^ ^^
^- ^i^^^^^^'
Facult
de Pans. Deuxime di-
fr.
^p^^^ ^Jj^jj^
Tome
I.
Pathologie chirurgicale
gnrale, Maladies
Crne
des
et Rachis, p^iyECN
gnrales
Tissus,
R. PROUST, Professeurs agrgs la Facult de Paris et L. TIXIER,
Professeur agrg la Facult de Lyon, / vol. (34g figures) 10 fr.
^r...^ TT
TA+^ r^,. xi,^o^ Par MM. H. BOURGEOIS,
lOME 11.
lete, V^OU, inorax, oto-rhino-laryngologiste des
de
Paris, et CH. LENORMANT, Professeur agrg la
Hpitaux
"lO fr.
Facult de Paris. / vol. (3i2 figures)
GOSSET,
P.
LECNE,
Facult de Paris.
Ch.
/ vol.
LENORMANT,
[352 figures)
pierre DITVAL
Professeurs agrgs
10
fr.
Tome IV.
par
MM.
P.
MDECINE
Vient de paratre:
LEONS DE
Patholo:e
dgestive
(DEUXIIVIE SRIE)
PAR
M.
LPER
Professeur agrg
vol. in-8
le texte
fr.
LA MENINGITE
CRBRO-SPINALE
PAR
Arnold
NETTER
Professeur agrg la
Facult de Mdecine de
Paris, Mdecin de l'hpital
Trousseau,
l'Acadmie
membre
de
de
Mdecine.
ET
Robert
DEBR
ancien interne-laurat
des
hpitaux.
I
avec
texte
54
figures
fages,
djns
le
//.
MEDECINE
DEBOVE
G. -M.
Doyen de
la
Ch.
Facult de Mdecine,
ACHARD
J.
CASTAIQNE
Vient de paratre
Manuel des
Maladies de la Nutrition
et Intoxications
I
vol.
/;.
Manuel des
Maladies du Foie ^ * ^ *
* * et des Voies Biliaires
I
vol.
Par J. CASTAIGNE et
de SS4 pages avec 3oo figures daiis
M. CHIRAY
20
le texte
/;-.
Manuel des
Maladies du Tube digestif
Tome
vol.
grand
14 /r.
Tome II
INTESTIN, PRITOINE, GLANDES SALIVAI RES
PANCREAS
par M. LOEPER, Ch. ESMONET, X. GOT'RAUD, L.-G. SIMON,
L.
vol.
grand
in-Q"
BOIDIN
RATHERY
et F.
ib figures
dans
le texte.
14 fr.
THRAPEUTIQUE
CLINIQUE
Aide-Mmoire
^
jr
v^
*^
***
M;
^^
*v
'^
*v
de Thrapeutique
PAP
G.-M.
Doyen honoraire de
DEBOVE
G.
POUCHET
la Facult de Jldecine
Professeur de Clinique
.Alembre de l'Acadmie de Mdecine
SALLARD
A.
DEUXliVIE DITION,
I
LE TRAITEMENT
scientifique et pratique
de
Tuberculose ^ ^ ^ ^
^^^^^^^^ Pulmonare
la
Par Louis
RNON
Vdl. in-ii"
de wii-SiS pages
fr.
TRAITE ELEMENTAIRE
de
Clinique Mdicale
Par G -M.
1
vol.
grand
in-?,"
DEBOVE
et A.
SALLARD
toile.
2^ fr
THRAPEUTIQUE CLINIQUE
FORMULAIRE *
THRAPEUTIQUE
st*
vt*
A*
vt*
vV
d^
vt/-
>^
vV
vV
vj*
*'
>*'
CODEX DE 1908
PAR MM.
G.
LYON
P.
LOISEAU
Ancien prparateur
l'cole suprieure de Pharmacie
de Paris
DELHERM
L.
I
Paul-mile LV\^
maroquin
souple.
7/r.
Trait lmentaire
nV vV
de
Par
vol.
vt*
\V vV
4/'
st"
st
Clinique Thrapeutique
le D^
Gaston
vV vV
grand
in-S
la
LYON
toile
anglaise.
25
fr
Maladies de l'Estomac
Par G.
I
vol. in-8
LYON
toile.
12 /r
10
THRAPEUTIQUE CLINIQUE
THRAPEUTIQUE USUELLE
des Maladies de
^ ^ ^
Nutrition
la
^ ^ ^
t^
'i'^'*^.
P.
LE GENDRE
vol. in-Q" de
A.
MARTINET
429 pages
fr.
THRAPEUTIQUE USUELLE
des Maladies de
'^'*f*<*'**
l'Appareil Respiratoire
Par Alfred
I
pages avec
MARTINET
figures., broch
...
/;.
50
les
docteurs P.
Rgimes
LE GENDRE
et A.
MARTINET
5 /r.
pages, broch
Alimentation
artilicielle.
Clinique Hydrolog^ique
COTTET
BARADUC.
F.
Flix
BERNARD. M.
L.
A.
E.
SIMON.
BINET, J.
TARDIF.
E.
7 Jr.
THERAPEUTIQUE CLINIQUE
[suite)
LES
Mdicaments usuels
Par
le
D^ Alfred
MARTINET
vol. in-'"
le texte
/;
le D' Alfred
Prparation
MARTINET
4,/r
Les
Agents physiques
usuels
(Climatothrapie Hydrothrapie
Crnothrapie Thermothrapie
Mthode de Bicr
Kinsithrapie
Electrothrapic
Par
les
Radiumthrapie)
D" A. MARTINET, A.
MOUGEOT,
'-^;J^
P.
vol. in-Q"
et 3
planches hors
texte.
/;-
MDECINE DE L'ENFANCE
<^
'
*-
*-
du Nourrisson
* * * * * ^
PAR
Le Docteur A.
LESAGE
Le
lecteur trouvera
dans
cet
le
texte
lO/r.
nouveaux sur
Vient de paratre
Confrences pratiques
sur ralimentation des Nourrissons
par P.
NOBCOURT
Professeur agro-
la
Prface de M.
I
vol. in-6'%
le P^
2-\
Hutinel
figures dans
le
texte.
fr.
Trait des
Maladies de l'Enfance
DE UXIME DITION. REVUE ET AUGMENTE
GRANCHER
vohcmes grand
in-Q avec
J.
1
figures dans
le texte.
COMBY
.....
ii2
fr.
HYGINE
Trait
Militaire
d'Hygine LEMOINE
I
par G. H.
Mdecin principal de premire classe
Professeur d'Hygine l'Ecole d'application du Service de Sant
militaire du Val-de-Grce
.Membre du Conseil suprieur d'Hygine de France
12 fr.
vol. .i,T. 1)1-8" de xxiv-758 pages, avec Qg Jg-ures, broch
.
Trait de
vol.
grand
J.
RENNES
15
/;.
BIBLIOTHQUE
thrapeutique
d'Hygine FONDE
PAR
le
PROUST
professeur
toile
francs.
Vient de paratre
(2
le
LHygine du Goutteux
L'Hygine de l'Obse
(2"
(2^ dition),
par
dition), par le
par
le
A. Mathieu.
A. Mathieu.
le D""
1)''
P' E. Brissaud,
le D"'
Cruet.
==
14
DIVERS
Assainissement
des Villes
Annuaire-statistique international
des Installations d'puration d'eaux d'gouts
par B. BE2AULT
Ingnieur sanitaire
8 fr.
gr. in-?> de viii-175 pages, avec 20 figiu-es dans le texte.
Ce volume contient l'tude des installations d'puration des eaux d'gouts
(Systme d'puration, systme d'gout, villes, population, volume des eaux,
en Allemagne, Rpublique Argencoit de l'installation, etc.) au i" juillet igi
tine, Australie,
Autriche-Hongrie, Belgique, Brsil, Canada, Danemark,
Egypte, Espagne, Etats-Unis d'Amrique, France et Colonies, Grande-Bretagne, Indes Anglaises, etc. Il contient galement les lois et rglements en
vigueur au sujet cle cette question d'assainissement dans la plupart de ces pays.
I
vol.
Recherches de Parastologe
et de
humaines
Par C.
et
Pathologie
animales au Tonkin
MATHIS
Mdecins-majors des
Prface de
I
vol. in-?)",
de viii-451
MM.
/>.,
et
LGER
M.
coloniales
troupes
A. Calmette et F. Mesnil
et 14 planclies. Reli toile.
avecjg.
25 Jr.
^
Le Vade-Mecum
*
du Mdecin-Expert
PAR
<^
^^
*-
A.
-^
t-
'^
ir
H-
LACASSAQNE
L.
THOINOT
^tr
fr.
Mdecin de Saint-Lazare
d'Uriage.
10 fr.
de viii-640 pages, avec figures
Ce volume est divis en deux parties la premire est consacre l'tude des
mdicaments antisyphilitiques, leur mode d'administraiion et au traitement
I
volume
in-?/
NEUROLOGIE
PSYCHIATRIE
LA PRATIQUE
NEUROLOGIQUE
-
***
vt-
*$*
"^
^^'
"^
'^''
^^
^^
^^
^J
^''
PIERRE MARIE
Professeur
la
TAR MM.
O CROUZON,
G.
DELAMARE,
O.
CROUZON.
de xviii-1408
le
^.,
texte.
30 /r.
le
lomo-pathologique.
le
Enfin,
prsent volume
contient un expos des notions
ps3'chiatriques indispensables
i6
PSYCHONVROSES
des Psychonvroses
Leur traitement par la Psychothrapie
Par
DEJERINE
J.
et E.
I
vol.
grand
GAUCKLER
texte..
Sfr,
Cet ouvrag-e rsume la doctrine que quelque trente annes de contact avec
les nvropathes a permis l'un des auteurs de se faire. Une premire partie
anaivse les diffrents troubles nvropathiques; une deuxime tudie lef
deux seules psychonvroses reconnues comme lgitimes par les auteurs la
neurasthnie et l'hystrie. La troisime est consacre au traitement. Les
auteurs ne reconnaissent qu'iuie psychothrapie lgitime la psychothrapie
par persuasion. Mais ajoutons qu'ils ne croient pas aux vertus du raisonnement. Ils maintiennent le rle prpondrant du sentiment qui rveille les
nergies, qui rend aux malades l'unit de vie, condition ncessaire de la
:
L'ducation de soi-mme
Par
le P'
TROISIME DITION.
DUBOIS,
///me
1)1-8"
^fr.
Les Psychonvroses
et leur traitement
Par e P-^ DUBOIS
moral
volume
in-S
de 56o pages
/r.
Manuel de
NEUROLOGIE OCULAIRE
PAR
LAPERSONNE
F. de
Professeur de clinique
ophtalmologique
A.
CANTONNET
iKil. iti-8
le texte et
une flanche
fr.
PHYSIOLOGIE
Vient de paratre
Pressions artrielles
et Viscosit
CIRCULATION
Par
le
sanguine
NUTRITION
Docteur Alfred
DIURSE
MARTINET
Vient de paratre
fr.
Technique Opratoire
Physiologique
(TUBE DIGESTIF ET ANNEXES)
PAR
Albert
LE PLAY
vol. g-r.
in-'?j"
RICHET
Professeur Charles
le
le texte.
... 6
fr.
Trait de Physiologie
PAR
P.-J.
MORAT
5 volumes gr.
in-8,
Maurice
r
4.- ^
j
1 L niversite de
a VTProfesseur
Lyon.
r,
DOYON
et
en couleurs dans
le
texte.
I.
e.Kcrtion.
15
15
fr.
tr.
12
li.
12
Ir.
i8
DERMATOLOGIE
I
^
Prt ne ^
w. * ^ ^
Dermatologique
'^ ^' ^" ^^
^fl
^ ^
ERNEST BESNIER,
BROCQ,
L.
L.
JACQUET
illustrs de
et
.... 156
Tome
I,
36
sparment
fr.
... 40 fr
les applicaDERMATOLOGIQUE,
PRATIQUE
fr.
Tomes
II, III,
IV, chacun
Depuis la publication de la
tions lectrothrapiques ont acquis une grande importance. Aussi MM. BesNiER, Brocq et Jacquet ont-ils fait refondre entirement, en Janvier 1907,
l'article Electricit.
En outre, chacune des dermatoses justiciables de ces mthodes, on trouvera
les renvois et indications ncessaires.
SABOURAUD
Docteur R.
le
/.
vol.
gr.
in-S" avec gi
//.
figures en noir
et
en couleurs.
PITYRIASIS
et
10 /
ALOPCIES
PELLICULAIRES
1
vol.
et
en couleurs
Cryptogamiques
22
fr
30
fr
LES TEIGNES
I
vol.
gr.
/n-8 de vi-855
pages avec
43.3
fig. et 28 planches
HISTOLOGIE
19
MICROBIOLOGIE
OUVRAGE COMPLET:
Trait d'Histologie
PAR
PRENANT
A.
la
P.
Professeur
Facult de Mdecine de Paris.
L.
la
BOUIN
Professeur agrg
Facult de Mdecine de Nanc}'
MAILLARD
Tome
I
vol.
gr.
Tome
I
vol.
II
gr.
I:
in-?)",
fr.
dont
50
3i en couleurs.
/;
Technique du Diagnostic
par
mthode
la
DE DVIATION DU COMPLMENT
Par P.-F.
I
ARMAND-DELILLE
la
fr.
Prcis Elmentaire
d'Anatomie, de Physiologie
et de Patiiologie
PAR
P.
RUDAUX
la
Facult de Mdecine.
vol. in-Q".
5.^8
fgures dans
le texte.
fr.
ANATOMIE
OUVRAGE COMPLET
Abrg d'Anatomie
PAU
P.
A.
POIRIER
Professeur d'Anatomie
Facult de Mdecine de Paris.
la
B.
Professeur
Tome
T.
acrrti-c
CHARPY
Professeur d'Anatomie
a la Facult de Mdecine de Toulouse.
CUNEO
- EMBRYOLOGIE -
OSTEOLOGIE - ARTHROLOGIE
MYOLOGIE.
ARII. COEUR
TRES VEINES LYMPHATIQUES CENTRES
NERVEUX NERFS CRANIENS NERFS RACHI
Tome
LIENS.
III ORGANES DES
SENS - APPAREIL DIGESTIF ET ANNEXES -
Tome
APPAREIL RESPIRA-
Fig. cp3.
Schma de
la
gaine hypogasu-ique
(d'aprs xMarcillei.
PRITOINE.
ment
relis toile
50
fr.
ANATOMIE
POIRIER
P.
A.
CHARPY
Trait
d'Anatomie Humaine
Nouvelle dition, entirement refondue par
A.
CHARPY
NICOLAS
A.
ET
Amodo
lin
-1.
G. Delamare
^4.
TOME
I.
TOME
Embryologie. Histologie.
20
Fasc.
3*
Fasc.
2"
3'
IV.
(2
Tube
dition)
TOME
V.
fig.
{2"
dition).
121
figures
digest;f.
{:.'
(3"
dition)
...
dition)
Pritoine.
44O
I"
10
(0
(2
2
6
figures
431 ^^zo'es
tion)
2'
fr.
fr.
li'-
tr.
fr.
210 figures
digestif,
tr.
2
Q
Encphale).
.
dition)
I" Fasc.
Fasc.
Moelle.
(Mningres.
figures.
TOxME
nerveux
4
8
TOME III.
fr-
Peauciers et
'-
fr.
fr.
{2'
fr.
(2' di-
20
fr.
Fasc.
Tgument externe et drivs. Appareil de
la vision.
Muscles et capsule de Tenon. Sourcils, paupires,
conjonctive, appareil lacrymal. Oreille externe, moyenne et interne.
Embryologie du nez. Fosses nasales. Organes chromaffines. 71 figu:
25
L'ouvrag-e
complet
(5
fr.
22
ANATOMIE
CHIRURGIE
Vient de paratre
Prcis d'Anatomie
et de Dissection
Par H.
ROUVIRE
TOME
t
vol. in-8%
I.
de 481 pages,
[Tome II
et
TTE,
197 figures
dernier
COU,
dans
MEMBRE SUPRIEUR
le texte, la
plupart en couleurs. 12
fr.
doit
mna-
une
par
numration forcment
ce
aride,
qu'd va rencontrer, mais qu'il tait
ncessaire de l'avertir
au pralable des prinl'tudiant,
bonnes figures. De
I paroi externe
'orbite.
Section de l'apophyse zygomatique.
cette
CHIRURGIE
OUVRAGE COMPLET
Trait de
Technique Opratoire
PAR
CH.
MONOD
VANVERTS
J.
DEUXIME DITION
ENTIREMENT
REFONDUE
s^
volumes grand
mant ensemble
paofes
dans
avec
le texte.
ii
233;
.
xn-20i6
figures
40
fi
18
tome 1
Condenser
les descriptions
fr.
sans
dsutude,
uns
mme
Fig. 695
Crsto-entrostomie extra-pritnale
pour exstrophie
des
uretres
librs.
du rectum
Abouchement
Les uretres
vsicale.
(Peters).
rectal
sont
compltement trans-
supprimes.
Enfin l'illustration a t la fois augmente et entirement revise
nombre de clichs dp la premire dition ont fait place des figures nouvelles.
-JZ
CHIRURGIE
PRCIS DE
Technique Opratoire
PAR
LES PROSECTEURS DE LA FACULT DE MDECINE DE PARIS
AVEC INTRODUCTION
Par
'-
le
couPratique
rante et Chirurgie
Lexormaxt.
Cii.
3^
revue
dition,
et
augmente.
Thorax
et
mem-
2"
et
tion,
Abdomen,
M. GuiB
revue
et
.3'^
di-
augpar
dition,
augmente.
uri-
Appareil
l'homme, parPiER RE
Du VAL. 3^ dition, revue
et
augmente.
Appareil gni
tal de la femme,
i/par R. Proust, 2*^
iion, revue et augmente.
Membre
162.
Colpo-hystrectomie totale par voie vulvu-prinale, Agrandissement du champ opratoire par l'incision
de Schucliardt. On voit nctiemenl les bords des Releveurs.
Fig.
femme.)
inf-
Chaque
vol. illustr
.
4/;
50
CHIRURGIE
Vient de paratre
Technique chrurgfcale
infantile
INDICATIONS OPRATOIRES
OPRATIONS COURANTES
Par L. OMBREDANNE
la Facult de Mdecine de Paris,
chirurgien de l'Hpital Bretonneau.
vol. in-Q" de 342 pag-es, avec 210 figiwes.
Professeur agrg
Petite Chirurgfie
^^^^^^^^^^^^
fr.
^ ^ ^ ^
Pratique
PAR
Th.
TUFFIER
Professeur agrg
la Facult de Mdecine de Paris,
Chirurgien de l'Hpital Beaujon.
P.
DESFOSSES
^a
Priode
^ ^ ^ ^ ^
^^^^^^^^^-^^^^^^^
Post=Opratore
vol.
[en prparation)
CHIRURGIE
MDECINE OPERATOIRE
et
ALBARRAN
Par J.
Professeur de clinique des Maladies des Voies urinaires
I
FacuU de
la
Paris.
35
reli.
fr.
Vient de paratre
Oto=Rhino=Laryngologie
DU MDECIN PRATICIEN
PAR LE
D'
Georges
LAURENS
vol.
in-Q",
de
Sfr.
tous
mdecins
les
loifjfns
liste et
du
spcia-
devant se
eux-mmes.
Il donne sur les mthodes
d'exploration et de diagnossuffire
tic,
Fig.
\io.
La
seriiiffiie est remplie de liquide, puis Vair qui petit rester dans
serinoue est chass, afin d'viter sa propulsion dans le conduit
de gargouillement et
auditif,' qui dterminerait un bruit dsagrable
"
la
mmeune
les
douleur.
mdicaments, les
renseignements et
_.
dante
ligne ligne et
le
commente de
la
faon
la
,,
Une
preciS.
tration
plus vivante et
trs
le texte
plus claire.
suit
la
.f
l.lUS-
abon-
Z=.
DENTISTERIE
GYNCOLOGIE
OBSTTRIQUE Z==I=Z
Manuel de
Dentisterie Opratoire
PAR
Edward
C.
KIRK, D. D.
S.
ADAPTATION FRANAISE
PAR
Raymond LEMRE
Docteur en Mdecine et chirurgien dentiste de l'Universit de Paris,
Docteur en chirurgie dentaire l'Universit de Philadelphie.
30 fr.
vol. grand in-8 de rv-Q56 pages avecQ'-5fig. dans le texte.
Trait de Gyncologie
Clinique et Opratoire
par Samuel
POZZI
vol.
dans
grand
le texte-
in-S
JAYLE
/.7.g-C5
Relis toile
Prcis
d'Obsttrique
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RIBEMONT-DESSAIGNES
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PAR MM.
G.
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LEPAGE
SIXIME DITION
AVEC 568 FIGURES DANS LE TEXTE, DONT 4OO DESSINES PAR M. RIBEMONT-DESSAIGNES
i
vol.
grand
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toile
30/;-.
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2R
COLLECTIONS
L'UVRE MEDICO-CHIRURGICAL
(D-
CRITZMAN,
Directeur)
Chaque Monographie
Il
est accept
Physiologie
53.
54.
55.
56.
Les injections mercurielles intra-musculaires dans le traitement de la Syphilis, par le D' A. Levy-Bing.
Anticorps, antignes et Mthode de dviation du Compl-
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
Traitement chirurgical de
M""^
65.
De
Burman-Oberg.
Court ADE.
66 Les Poisons Tuberculeux
le
D"^
D.
D""
Chauvet.
69.
par H. Stapfer.
29
COLLECTIONS
Encyclopdie Scientifique
*^ des
f*-
Ade=Mmoire
Ha
LAUT,
Membre
de
l'Institvit
Broch, 2
fr.
50
Hygine
de Mdecine.
Hygine de
Laborde.
Moyens
par
E. Bodin.
le D'^ H. Bordier, professeur
Facult de Mdecine de Lyon.
Prcis lmentaire de dermatologie par MM. Brocq et Jacquet,
mdecins des hpitaux de Paris, 2^ dition, entirement revue. 5 vol.
I.
la
Pathologie gnrale cutane. II. Difformits cutanes, ruptions artificielles, dermatoses parasitaires. III. Dermatoses microbiennes et
noplasies. IV. Dermatoses inflammatoires. V. Dermatoses d'origine
nerveuse. Formulaire.
Examen
II.
les
lunettes,
par
Maladies des
La Matire vivante,
Sorbonne
(2''
dition).
par F.
Le Dantec, charg de
cours
la
3o
PRIODIQUES MDICAUX
MASSON
la Librairie
et
C''
LA
PRESSE MDICALE
Journal bi-hebdomadaire, paraissant
le
Mercredi et
le
Samedi
wMM^^^
DIRECTION SCIENTIFIQUE -
LANDOUZY
L.
F.
Mdecin
de l'hpital Saint-Antoine.
l'Htel-Dieu.
ROGER
FAURE
J.-L.
Professeur agrg
Chirurgien de l'hpital Cochin.
E.
LERMOYEZ
M.
DE LAPERSONNE
H.
LETULLE
M.
BONNAIRE
F.
JAYLE
Professeur agrg
et Professeur en chei
de la Jlaternit.
Accoucheur
REDACTION
Le Numro
Paris,
et
10
^^<,A,^ et
Dpartements, 10 fr.
cent.
Dpartements
Union postale, 15
et Etranger,
15
/r.
cent.
de Police sanitaire
MARTIN
A.-J.
A.
Organe
officiel
de
la Socit
GALMETTE
Directeur de
de
de Mdecine publique
l'Institut
Lille.
et
Pasteur
de Gnie sanitaire.
^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^^
A30NNE!V!ENT
ANNUEL
Paris,
Dpartements
27
Seine
fr.
et
Seine-et-Oise
tranger
28
fr.
25
fr.
01
PRIODIQUES MDICAUX
Revue de Gyncologie
Chirurgie Abdominale
ET DE
POZZI
S.
Secrtaires de la Rdaction
ABO.'*NEWENT ANNUEL
28
France,
JAYLE
F.
BENDER
et X.
Union postale, 30
fr.
fr.
Archives
DE
HUTINEL
V.
J.
0. LANNEL0N6UE
COMBY
GUINON
L.
D' J.
BROCA
A.-B.
E.
MARFAN
WEILL
Publication.
la
Paris et Dpartements, 16
COIWBY
Directeur de
ABONNEMENT ANNUEL
A.
NOBCOURT
P.
fr.
Union postale, 18
fr.
REVUE NEUROLOGIQUE
Organe
officiel
Publie
Comit de Direction
J.
le i5 et le 3o
Rdacteur en chef
Secrtaires de la Rdaction
ABONNEMENT ANNUEL
Forme
el
A.
Henry MEIGE
BAUER E. FEINDEL
Paris el Dpartements, 35
Le N"
ses
de chaque mois.
fr.
fr.
Union postale, 38
fr.
50
2 volumes n-O" d'environ 7uc' pages chacun, avec de nombreujures et contenant environ 70 mmoires, plus de 1600 analyses
enriron 35oo indications bibliographiques sur fiches dtachables.
ti
32
PRIODIQUES MDICAUX
JOURNAL DE
CHIRURGIE
B.
CDNO
A.
GOSSET
PAR MM
LECNE
P.
LENORMANT
Ch.
PROUST
R.
AVEC LA COLLABORATION DE MM
CARAVEN
BENDER CAPETTE
A. BAUMGARTNER
AMEUILLE BAROZZI BASSET
DENIKER
DE JONG
COTTE
CLUNET
CHIFOLIAU
CHEVRIER
M. CHEVASSD
GUYOT
GUIB
GRISEL
P. FREDET
DUJARIER
DESMAREST
DESFOSSES
LARDENNOIS
LABEY
LANGLOIS
KUSS
IMBERT
JEANBRAU
P. HALLOPEAD
MANNINGER MASCARENHAS
P. LUTAUD
LTIENNE
GEORGES LAURENS - LERICHE
MUNCH
MOUCHET
MOCQUOT
MICHEL
MERCAD
MAYER
P. MATHIEU
WIART
SENCERT
SAUV
PICOT
PATRY
OKINCZYC
:
SECRTAIRE
GNRAL
DUMONT
J.
contient
Sommaires
les
des principaux
ABONNEMENT ANNUEL
Paris,
40
fr.
Dpartements, 42
Le Numro, 4
fr.
tranger, 44
fr.
fr.
fondes par
{29"
anne),
DELEFOSSE
le D^ E.
D'UROLOGIE
JOURNAL
MDICALE ET CHIRURGICALE
PUBLI TOUS LES MOIS PAR
F.
GUYON
CARLIER
LEGUEU
RDACTEURS EN CHEF
POUSSON
RAFFIN
MM.
MM
D" MARION
Ics
SECRTAIRE DE LA RDACTION
WIDAL
D'
et
DESNOS
JEANBRAU
HEITZ-BOYER
ST-CNE
Abonnement annuel
Paris et Dpartements
Le Numro
Imprimerie Lahuhe,
3
q,
fr
36
fr.
tranger
50
40
fr.