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NOM :
UFR SCIENCES EXACTES ET NATURELLES
PRENOM :
Licence STS - Mention BGS - UEP 1.3 Structures et proprits des Biomolcules
Plier le coin
Examen semestre 3
Janvier 2007 1 heure
Les calculatrices ne sont pas autorises
Question 1 : Etude dun peptide ( 12 points - A : 5 mn, B : 15 mn, C : 10 mn, D : 10 mn)
A Aprs action du mercaptothanol, un peptide A est lu par chromatographie changeuse de cations pH 6.
Un peptide A1 est alors rcolt. Par rinage de la colonne par la soude 1M, un second peptide A2 est lu.
A1 Quel est le rle du mercaptothanol ?
0.2
A4 Dduire le schma du peptide A ?
S
|
S
0.2
0.4
B Ltude du squenage des peptides A1 et A2 donne :
Hydrolyses
HCl 6N 110C
DNFB
Carboxypeptidase A
Trypsine
Chymotrypsine
Protinase V8
PEPTIDE A1
Ala, Asp, Cys, Val, Y
DNP-Ala
Val
1 peptide
1 dipeptide + 1tripeptide
1 dipeptide + 1tripeptide
PEPTIDE A2
Ala, Cys, Gly, X, Y
DNP-Gly
Ala
1 dipeptide + 1 tripeptide
Ala + 1 ttrapeptide
1 peptide
0.2
0.2
0.2
0.2
B4 Schmatiser les donnes prcdentes en les compltant par celles apportes par laction de la
carboxypeptidase A :
Pour le peptide A1
Pour le peptide A2
Y = Tyr
1 2 3 4
5
Ala--------------------Val
Asp,Cys et Y placer
0.6
X = Arg
Y = Tyr
Cys, X et Y placer
1 2 3 4
5
Gly--------------------Ala
0.6
B5 Rle de la trypsine ?
COUPURE de type N aprs ARG ou LYS
Consquences sur le peptide A1 (donner toutes les
possibilits)
1
1
Arg
et 3 4
2 Arg et 4
5
5
0.2
X = Arg
0.4
B6 Rle de la chymotrypsine ?
COUPURE de type N aprs TYR, PHE
0.2
Tyr
et 3 4
2 Tyr et 4
5
5
Y = Tyr
0.4
0.2
B7 Rle de la Protinase V8 ?
COUPURE de type N aprs Asp , Glu
0.2
Asp et 3 4
2 Asp et 4
5
5
0.2
B8 Rcapitulatif
squences du peptide A1 (donner toutes les
possibilits)
0.4
0.4
Peptide A
DNP-Ala etDNP-Gly
Val et Ala
2 peptides dont un est un dipeptide positif au ractif des phnols
??
2 peptides dont un est un tripeptide positif au ractif des phnols
non
non
non
D En utilisant les donnes suivantes et celles apportes par lhydrolyse HCl 6N 110C et le fait que
contrairement A1, le peptide A2 est positif au ractif de sacchaguchi et que les peptides A1 et A2 sont tous les
deux positifs aux ractifs des phnols, confirmer lordre dlution des peptides A1 et A2 de la question A.
pk NH2 = 8
pk COOH= 3
pk R de lacide amin X = 11
Pk R de Asp = 4
Pk R de Cys =10
pk R de lacide amin Y = 13
COOH
-NH2
R de Cys
R de Arg
R de Tyr
Peptide
0
0
+
0
0
+
0
+
0
+
0
++
3
|
3
|
0
+
0
0
0
+
0
+
0
+
4
|
8
|
+
0
0
-
0
0
+
0
0
8
|
10
|
0
0
0
--
0
+
0
-
10
11
0
0
---
0
0
0
--
13
13
0
----
0
0
---
pHi = 9
A - Un DNA codant la synthse dune protine P est isol puis manipul afin de dterminer par
la mthode de Maxan et Gilbert le squenage dun morceau du gne codant pour cette
protine.
Complter le schma suivant rsumant la prparation du DNA en vue du squenage.
*Orienter les brins de DNA .
DNA
Etape 1
T4 polynuclotide
kinase
32
32
Etape 2
32P
32
32
0.4
Etape 3
32
Etape 4
32
Bases
Pyrimidiques
Sens de migration?
C/T
bases
Puriques
A/G
T
T
A
G
C
G
T
A
G
Sens de lecture?
5.8