La technique de PCR (pour « Polymerase Chain Reaction ») permet l’amplification de séquences d’ADN.

Elle se fait en différentes étapes :

Ajout dans le milieu réactionnel de l’ADN à amplifier, des amorces correspondantes, des désoxyribonucléotides triphosphates (dNTP) et des ADN-polymérases (Taq-polymérase).
PCR -
- A ce moment là, les molécules d’ADN à amplifier sont associées brins à brins de manière complémentaire. Pour dissocier ces brins il sera nécessaire d’augmenter la température jusqu’à
une température suffisante (95°C), afin de s’assurer que toutes les molécules sont entièrement dénaturée.
- La température est ensuite diminuée jusqu’à Tm-5°C afin de permettre l’hybridation entre les amorces et l’ADN simple brin. Tm est la température à laquelle 50% de l’ADN est dénaturé.
- Une fois les amorces liées, l’ADN complémentaire est synthétisé par la Taq-polymérase.
- Le cycle recommence ensuite en dénaturant les deux brins à 95°C … et ainsi de suite jusqu’à obtenir des millions de copies.

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’
3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

Dénaturation de la double
hélice d’ADN. 95°C

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’ 3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

Hybridation entre les
Amorce anti-sens Amorce sens
amorces et l’ADN simple
55°C
brin.
Cycle 1

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’ 5’ ATTGCACTGGC 3’

3’ CATTGCGGATA 5’ 3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

Synthèse de l’ADN
complémentaire par la Taq-
polymérase. 72°C

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’ 5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’

3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’ 3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

Dénaturation de la double
hélice…
Cycle 2

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’ 5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’

3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’ 3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’ 5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’

3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’ 3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’

SEGMENT AMPLIFIE
5’ ATTGCACTGGC GTAACGCCTAT 3’
3’ TAACGTGACCG CATTGCGGATA 5’