point sur les m thodes classiques
d'identification des mycobact ries
A. B O U R G O I N et G. A G I U S *
R~:SUMg:
L'identification classique des mycobact~ries est habituel-
lement bas~e sur l'~tude des caract~res culturaux, des
caract~res biochimiques et de la sensibilit~ aux agents
anti-bact~riens. Le d~lai de croissance, la temperature
optimale de croissance, les aspects macroscopique et
microscopique orientent le diagnostic vers le groupe des
mycobact~ries de la tuberculose ou vers celui des myco-
bact~ries "atypiques". Apr~s r~alisation de subcultures,
l'~tude des propri~t~s biochimiques, ~ventuellement com-
pl~t#~e par celle de la sensibilit~ aux anti-bact~riens
conduit ~ l'identification de l'esp~ce. L'obtention d'un tel
r~sultat requiert en g~n~ral plusieurs semaines.
Au cours de ces vingt derni~res ann~es, de nouvelles
rn~thodes se sont d~velopp~es, en particulier l'hybrida-
tion mol~culaire, permettant de raccourcir de fa¢on
notable le d~lai d'identification. Cependant, la strat~gie
classique reste la seule applicable au diagnostic de toutes
les esp~ces et r~alisable dans tout laboratoire de biologie
m~dicale.
MOTS-CLg:S
mycobact~ries - identification classique - bacilles acido-
alcoolo-r~sistants caract~res culturaux - propri~t~s bio-
-
chimiques.
Introduction
Les mycobact~ries se caract~risent par leurs propri~-
t~s structurales, culturales et biochimiques.
La strat~gie classique d'identification d'une souche
cultiv~e sur milieux solides, tels les milieux de
Loewenstein-Jensen et Coletsos, comporte deux
~tapes successives.
La premiere ~tape regroupe la v~rification de l'appar-
tenance au genre Mycobacterium et le classement de
la souche au sein du groupe des mycobact~ries de ia
tuberculose ou des mycobact~ries "atypiques" ~ l'aide
de crit~res morphologiques et culturaux.
La seconde ~tape conduit ~ I'identification de l'esp~ce
par l'~tude des caract~res biochimiques et ~ventuelle-
ment de la sensibilit~ aux antibiotiques ou ~ d'autres
substances anti-bact~riennes.
Les diff~rents tests seront envisages dans l'ordre
chronologique de leur mise en oeuvre.
Revue frangaise des laboratoires, fevrier1995, N ° 273
SUMMARY
According to traditional methods, mycobacteria are
usually identified by cultural and biochemical characteris-
tics, and antimicrobial suceptibility tests. Diagnosis is
first oriented by the optimal temperature and rate of
growth, and the macroscopic and microscopic aspects
towards Mycobacterium tuberculosis complex or "atypical
mycobacteria'. Species identification is reached after exa-
ruination of biochemical properties and drug susceptibi-
lity tests performed on subcultures. This conventional
identification usually requires several weeks.
During the last two decades, different methods, espe-
cially those using nucleic acid probes, have been develo-
ped and have markedly shortened the identification pro-
cedure. However, traditional strategy remains the only
one available for the diagnosis of all species and feasible
in every clinical laboratory.
KEY-WORDS
mycobacteria - traditional identification - acid-fast
bacilli -cultural characteristics - biochemical properties.
I. Orientation diagnostique
Les premiers renseignements sont donn~s par la
primoculture : vitesse de croissance, aspects macroscopique et
microscopique. La preparation de subcultures sur milieu de
Loewenstein-Jensen avec un inoculum standardis~ est n6ces-
saire pour confirmer les caract~ristiques de la primoculture,
~tudier la pigmentation ainsi que pour mettre en oeuvre ult~-
rieurement les tests biochimiques d'identification. Les r~gles
strictes de s~curit~ (hotte, port de gants, de masque et de sur-
blouse) seront appliqu~es pour toutes les manipulations (3, 10).
* Laboratoire de microbiologie B (Pr M. CASTETS)
C.H.U. La Mil~trie - B.P. 577
86021 POITIERS CEDEX
TIRES A P A R T :
Mlle le Dr A. BOURGOIN
article regu le 15 mars, accept~ le 7 d~cembre 1994.
21
 1. l~tude d e la p r i m o c u l t u r e
1.1. D61ai de croissance
II permet de distinguer deux groupes de mycobact6ries : celles
dont la culture est nettement visible en moins de 7 jours et
celles qui croissent en plus de 7 jours (figure 1). Les mycobac-
t6ries de la tuberculose appartiennent au second groupe. Les
colonies de M. tuberculosis et du BCG (bacille de Calmette et
Gu6rin) apparaissent en moyenne en deux ~ quatre semaines,
elles sont eugoniques ; celles de M. africanum et de M. bovis
sont dysgoniques, elles croissent lentement (plus de quatre
semaines) et restent de petite taille (tableau I).
1.2. Aspect macroscopique
L'aspect typique des colonies s'observe exclusivement & partir
de cultures r6alis6es sur milieu de Loewenstein-Jensen. II est
rugueux (rough) dans le cas de M. tuberculosis, du BCG, de
M. kansasii et de M. ulcerans ; il est lisse (smooth) dans le cas
de M. bovis, M. aviurn-intracellulare (MAC), de nombreuses
mycobact6ries atypiques et des souches de M. tuberculosis
r6sistantes ~ I'INH.
La taille et la forme des colonies sont not6es (tableau I). La
couleur des colonies est appr6ci6e mais l'6tude compl~te de la
pigmentation avec photo-induction sera faite sur une sub-
culture.
1.3. Examen microscopique
Cet examen permet de v6rifier le caract~re acido-alcoolo-
r6sistant et d'affirmer que les bacilles appartiennent au genre
Mycobacterium. La pr&sence de microorganismes associ6s
impose une d6contamination de la primoculture avant toute
investigation compl6mentaire.
FIGURE 1
Orientation de l'identification d'une mycobact6rie
isol6e sur milieu solide
croissance
La m6thode de coloration de r6f6rence est celle de Ziehl-
Neelsen (3). Les bacilles acido-alcoolo-r6sistants (BAAR) se
colorent en rouge alors que les contaminants potentiels appa-
raissent en bleu.
La culture de M. tuberculosis montre des BAAR fins et
gr&les, regroup6s en "cordes" serr6es, particuli~rement carac-
t6ristiques Iorsque la culture est faite en milieu liquide. Les
souches r6sistantes & I'INH pr6sentent souvent des "cordes"
atypiques.
La culture de M. xenopi montre des bacilles tr&s longs
(6-10 pm) et tr&s fins, isol6s ou en amas.
Les bacilles du complexe MAC sont petits, trapus, souvent
dispers6s mais parfois tr&s polymorphes.
M. kansasii et M. marinum sont de gros bacilles longs, stri6s
en "barreaux d'6chelle".
La morphologie des BAAR apr&s coloration de Ziehl-Neelsen
se trouve parfois modifi6e Iorsque la culture est effectu6e en
milieu liquide. On a pu ainsi observer des 6bauches de
"cordes" avec M. marinum, M. kansasii et les bacilles du
complexe MAC.
2. Pr6paration de subcultures
Dans le cas d'une primoculture tr&s pauvre, la souche peut
6tre repiqu6e dans un premier temps en milieu liquide
(Youmans, Dubos ou Middelbrook). Si la primoculture est
abondante, une suspension bacillaire & 1 mg/ml est r6alis6e
en se r6f6rant visuellement & une suspension 6talon de BCG
de m6me concentration. Des dilutions ~ 10 1, 10-3 et 10 -5 sont
r6parties a raison de 0,2 ml par tube de milieu Loewenstein-
Jensen.
- Trois tubes sont ensemenc&s avec la dilution 10 -z pour
l'observation de la vitesse et de la temp6rature de croissance
30°C, 37°C et 40°C. On pr6voira un tube suppl6mentaire
45°C si l'on est orient6 vers une esp~ce scotochromog&ne de
croissance lente comme M. xenopi. Des milieux sp&ciaux
sont requis pour la culture de M. haemopbilum et de M. mal-
moense. Leurs caract6ristiques seront d6crites dans la section
"cas particuliers".

/ ",,, - Deux tubes sont ensemenc6s avec la dilution 10 -5, entour6s

de papier d'aluminium et plac6s & l'&tuve ~ 37°C (ou 30°C
selon la temp6rature d'obtention de la primoculture) pour 6tu-
< 7 jours _>7 jours dier la production de pigment et la morphologie des colonies.
- Un tube par propri6t& biochimique & 6tudier est ensemenc&
avec la dilution 10 1 et mis ~ 37°C (ou 30°C ). On pr6parera
trois tubes (niacine, nitrate r6ductase, catalase) et six tubes
"ATYPIQUES"A pigmentation suppl&mentaires pour la recherche de caract&res compl6men-
CROISSANCERAPIDE taires si l'on suspecte une mycobact6rie atypique.

NON
J "ATYPIQUES" "ATYPIQUES"
- Trois tubes de milieu additionn6 de substance anti-bact6-
rienne (et un tube t&moin sans antibiotique) sont ensemenc&s
avec la dilution 10 -3 et mis & 37°C (ou 30°C). On testera ainsi
CHROMOGENES PHOTO- SCOTO- la sensibilit6 de ia souche ~ l'6gard de l'hydrazide de l'acide
CHROMOGENES CHROMOGENES thioph&ne-2-carboxylique (TCH ; charge ~ 2 lJg/ml), de
I
morphologie
l'acide para-aminosalicylique (PAS ; charge & 0,5 lag/ml), de
Ia pyrazinamide (PZA ; charge & 100 pg/ml) et 6ventuelle-

/ ",,, ment de la D-cyclos6rine (DCS ; charge ~ 30 pg/ml) s'il s'agit

de diff6rencier M. bovis du BCG.
On ensemencera 6galement :
GROUPEDF LA "ATYPIQUES" - un tube de milieu Coletsos (milieu enrichi en pyruvate) avec
TUBERCULOSE la dilution 10 1 pour observer la stimulation de la croissance de
certaines souches en pr6sence de pyruvate, et

TABLEAU I
Orientation de l'identification des mycobact6ries de la tuberculose & partir d'une primoculture sur milieu de Loewenstein-Jensen

eugonique dysgonique dysgonique eugonique

Aspect macroscopique rugueux rugueux lisse rugueux
"chou-fleur" plat &centre sur61ev& "gouttelette" 6ta16
Couleur beige beige cire de bougie beige
Pigmentation . . . .
Aspect microscopique apr&s • bacilles fins fins courts longs
coloration de Ziehl-Neelsen • cordes + + - -

22 Revue frangaise des laboratoires, f6vrier1995, N ° 273

 TABLEAU II
Caract~ristiques culturales des principales mycobact~ries

i i................
ii!!iiiii .....i...i.....~..~~:~,~,~~:,~,~'~i~~,~~:~:~;~:~:~:~i~~:~,~'~~;,i~~,~:~ i~ .... ~!!i!~!!iiii
: ~~:~,~:~~:~i,~,~i~,~,~~~i~ !i!i!i ~iiiiii!ii~,i ~:~,:~i !~ili~i !i ~il!!!!!~
!!%~ii!i!i i!i i !~i!ili~i!ii!! i!ili ~!i!!!iiliii[!~!i!!i!i~i!~ii~!i!!!ii~~ii!!i~ii~l!iiiiii~iiii!ii~ii!iiil iiii~ii~ifii!iili~!!i!~iiiili~ iiii~!~ii!ii!iil~i iiiiiiiilIiiilill
Iv[. tuberculosis _ _ _ + + +

Groupe M. bovis - - - + + +
tuberculosis BCG - - - + + +
M. a f r i c a n u m -- -- -- 4- -- 4-

M. kansasii - 4- -- 4- 4- 4-

M. m a r i n u m - + V + + V
rno[ocnromogenes - V - + V +
M. s i m i a e
M. asiaticum -- 4- -- 4- 4- 4-

M. s c r o f u l a c e u m 4- 4- -- 4- 4- 4-

M. g o r d o n a e 4- 4- -- 4- 4- 4-

Scotochromog&nes M. f l a v e s c e n s + + V - + +
M. szulgai 4- 4- -- 4- 4- 4-

M. x e n o p i 4- 4- -- 4- -- 4- +

MAC I - - - + V + v
M. terrae 2 _ _ _ 4- 4- 4-

M. gastri _ _ _ 4- 4- 4-

Non M. triviale ~ - - - + V +
chromog~nes M. n o n c h r o m o g e n i c u m 2 - - + V +
M. f a r c i n o g e n e s _ _ 4- 4- 4-

M. m a l m o e n s e _ _ 4- 4- 4-

M. ulcerans - V - + + V
M. f o r t u i t u m - -- 4- 4- 4- 4-

M. peregrinurn _ _ 4- 4- 4- 4-

M. c h e l o n e i _ _ 4- 4- 4- 4-

M. abscessus _ _ 4- + + 4-

Croissance M. phlei + + + + + + +

rapide M. t h e r m o r e s i s t i b i l e V i + + + V + +

M. s m e g m a t i s - V + + + + +

M. vaccae + 4- 4- 4- 4. 4-

IV[. d i e r n h o f e r i _ _ 4. 4- 4- 4-

iV[. fallax - - + + + V

Milieuxsp~ciaux M. h a e m o p h i l u m - - - + + -
complexe M. avium-intracellulare ; 2 complexe terrae.
- une g&Iose ordinaire si l'on suspecte une mycobact&rie mois. Dans l'eventualit~ de la pr&sence de M . a f r i c a n u m ,
atypique. M. bovis, M. ulcerans ou M . m a l m o e n s e , les milieux seront
Les tubes ne seront viss&s compl&tement qu'apr&s 3-4 jours conserv&s au moins quatre mois. La temperature optimale de
d'incubation, de faqon & r~aliser une atmosph&re a~robie et croissance est notee.
permettre l'&vaporation de l'exc&s de liquide.
3.2. Aspect macroscopique
" Cas particuliers
L'aspect, la forme et la taille des colonies sont ~ nouveau
La primoculture de M . h a e m o p h i l u m ne peut &tre obtenue observ&s.
qu'& 30°C, sur un milieu contenant du sang ou du citrate de
L'utilisation d'un inoculum dilu& (104), pour l'&tude de la pig-
fer ammoniacal. Ces conditions particuli&res d'isolement
mentation, permet d'obtenir des colonies isolees et de contr6-
doivent &tre envisag~es conjointement au proced~ classique
ler ainsi la presence d'une eventuelle association mycobact~-
pour tout prelevement cutane ou de ganglion lymphatique.
rienne.
L'obtention d'une culture lente, non chromog&ne, exclusive-
ment & 30°C et sur milieu enrichi en sang ou en fer sont des
crit&res de presomption suffisants. 3.3. Production de pigment
M. m a l m o e n s e pousse difficilement & 37°C sur Loewenstein- Certaines mycobacteries synthetisent des pigments carot&-
Jensen & pH 7. II est recommande d'utiliser deux milieux de ndfdes en fonction de leur exposition & la lumi&re.
Loewenstein-Jensen modifi&s, un dont le pH est ajuste entre 3.3.1. M#thode
6 et 6,5 et un autre contenant 0,4 % de pyruvate de sodium
Lorsque la culture est suffisamment developpee sur le tube
la place de la glycerine (4). La culture est optimale ~ 30°C.
temoin non protege, le tube protege est decouvert et expos&
L'identification de ces deux mycobacteries peut ~tre compl&- trois heures sous une lampe, & 50 cm, puis laisse sur la
t~e par l'~tude de quelques caract~res biochimiques paillasse jusqu'au lendemain.
(tableau III) et par l'analyse chromatographique des acides
gras (I, 8). 3.3.2. R~sultats
Si la culture sur le tube t&moin est n o n pigmentee (blanc-
3. l~tude macroscopique de ia subculture beige) et la culture sur tube prot&ge reste identique malgre
l'exposition & la lumi&re, la souche est n o n chromog&ne.
3.1. D ~ l a i et t e m p e r a t u r e de croissance Si la culture sur tube protege n o n pigmentee & l'obscurite
La culture est surveillee tous les jours pendant les sept pre- prend une teinte jaune-orang&e apr&s illumination, la souche
miers jours, puis toutes les semaines pendant au moins trois est photochromog&ne.

Revue franqaise des laboratoires, f#vrier1995, N ° 273 23

 T A B L E A U III
Caract&res biochimiques des principales mycobact&ries

M. tuberculosis
M. bovis
BCG
M. africanum
M. kansasii + v
M. marinum v v
M. simiae + V
M. asiaticum - + +

M. scrofulaceum + v
M. gordonae + V
M. flavescens + +

M. szulgai + + V v
M. xenopi + +

MAC ~ +

M. terrae 2 + + v
M. gastri - V V
M. triviale 2 + +

M. nonchromogenicum 2 + V v
M. farcinogenes - +

M. malmoense
M. ulcerans - V
M. fortuitum + V +

M. peregrinum + + +

M. chelonei + V +

M. abscessus + + +

M. phlei + + v
M. therrnoresistibile
M. smegmatis V
M. vQccae +

M. diernhoferi - V
M. fallax
M. haernophilum +
eomplexe M. avium-intracellulare ; 2 complexe terrae.
Phos. acide : phosphatase acide ; I~glu : 6 glucosidase ; f~gal : 6 galactosidase.

Si la culture temoin est jaune ainsi que celle du tube protege
avant exposition & la lumiere, la souche est scotochromogene.
Le tableau II montre les resultats du delai de croissance, de la
temperature de croissance et de la pigmentation des mycobac-
teries les plus frequemment isol&es en laboratoire de biologie
medicale.
Au terme de l'examen macroscopique et microscopique de la
culture, le diagnostic s'oriente selon l'arbre decisionnel pr&-
sente figure 1. La distinction entre bacilles de la tuberculose,
pathog&nes stricts et mycobacteries atypiques potentiellement
pathogenes, est primordiale pour choisir des tests biochi-
miques cibles et decider de l'opportunit& d'un antibiogramme
concernant une mycobacterie atypique.
2. Identification des mycobact6ries
du groupe tuberculosis
1. Nomenclature des actes de biologie m6dicale
La nomenclature des actes de biologie medicale sous le
numero d'ordre 243 mentionne que l'identification biochi-
mique de M. tuberculosis sera effectuee par au moins deux
des trois @reuves suivantes : niacine, catalase, nitrates. Les
epreuves effectuees doivent @tre mentionnees sur le compte
rendu. La cotation est B 40. Quant & l'etude de la sensibilite
d'une mycobacterie vis-&-vis des antibiotiques, elle figure sous
le numero d'ordre 274 et la cotation par antibiotique teste est
B 60. La cotation est limitee & cinq antibiotiques.
2. Caract&res biochimiques
Les principaux caract~res biochimiques des mycobacteries
sont presentes dans le tableau III. DAVID et coll. (3) decrivent
de fa9on d~taillee l'ensemble de ces techniques. Chaque test
est valide par la realisation d'un temoin positif et d'un temoin
n~gatif.
2 . 1 . R e c h e r c h e d ' u n e c a t a l a s e (6)
Les mycobacteries synthetisent des catalases qui se caracteri-
sent par leur thermosensibilit& ou leur thermoresistance
68°C.
2.1.1. M~thode
La mise en evidence d'une activite catalasique se fait sur le
produit de raclage d'une culture jeune. Le substrat reactif uti-
lise est supplemente en tween 80 pour faciliter la dispersion
des bacilles. La hauteur du d~gagement gazeux d'oxygene
permet la semi-quantification de la reaction parfois utilisee
comme critere supplementaire d'identification.
2.1.2. R#sultats
Ce test permet de differencier les especes du groupe tuber-
culosis dont la catalase est thermolabile, des mycobacteries

24 Revue frangaise des laborateires, f~vrier1995, N ° 273

atypiques qui poss&dent, ~ de rares exceptions, une catalase 2.3. Recherche d'une nitrate r~ductase
thermostable. N~anmoins, quelques souches du groupe tuber- La mise en ~vidence de cette enzyme se fait par la r~action de
culosis r~sistantes & l'isoniazide sont d~pourvues de catalase. diazotation de Griess.

2.2. Recherche d'acide nicotinique (niacine) 2.3.1. M~thode

La plupart des mycobact~ries m~tabolisent la niacine. Chez La recherche s'effectue sur une culture jeune. Le substrat
les rares esp~ces qui ne poss&dent pas l'~quipement enzyma- r~actif est additionn~ de tween 80. La m~thode de r~f~rence
tique n~cessaire, cet acide s'accumule dans la bact~rie puis est est ceUe de Virtanen (13).
excr~t& dans le milieu de culture o0 il peut ~tre mis en &vi-
dence. 2.3.2. R~sultats
Parmi le groupe t u b e r c u l o s i s , seul M. t u b e r c u l o s i s r~duit de
2.2.1. M&thode fagon constante les nitrates en nitrites.
La m~thode de r~f~rence est celle de Konno (5) r&alis~e sur
une culture &g&e d'au moins quatre semaines. L'extraction de
la niacine, dans de l'eau distill~e st&rile, permet de pratiquer le 3. Croissance en presence
test sur une culture d'environ 18 jours. La g~Iose est perforce de pyruvate de sodium
en plusieurs endroits et ]e tube inclin& de fagon & ce que le
La subculture effectu~e sur milieu de Coletsos ou sur milieu de
milieu soit recouvert d'eau et que la niacine y diffuse pendant
Loewenstein-Jensen suppl~ment~ en pyruvate (4,8 g/l) per-
une heure & 37°C. L'extrait (0,6 ml) est transf~r~ dans un tube
met d'am~liorer la croissance de M. a f r i c a n u m et M. bovis.
en verre & vis. La pr&sence de niacine est r~v~l&e par une
coloration jaune de l'extrait, soit avec de l'aniline et du bro-
rnure de cyanog&ne (toxique), soit & l'aide d'une bandelette 4. Sensibilit~ aux substances anti-bact~riennes
r~active (Difco).
Le plus souvent, cette 6tude s'inscrit dans le cadre d'un anti-
2.2.2. ROsultats biogramme classiquement effectu~ selon la m~thode des pro-
Ce test permet le diagnostic diff~rentiel de M. tuberculosis au portions (2). N~anmoins, l'~tude de la sensibilit~ aux TCH,
sein des mycobact~ries de son groupe ; Mo a f r i c a n u m ne PAS, PZA et ~ventueUement DCS peut completer le diagnos-
donne qu'une r~activit~ faible et inconstante. tic diff~rentiel (tableau IV).
TABLEAU IV
Croissance en presence de diff~reutes substances anti-bact~riennes,sur g~lose ordinaire
et patbog~nicit~ des principales mycobact~ries

M. tuberculosis + - 4- -- -- 4-

M. bovis ++ 4-

BCG - 4- + +

M. africanum +4- +

M. kansasii + -I- -}-

M. marinum + +,

M. simiae + + 4-
M. asiaticum + + +

M. scrofulaceum + + +

M. gordonae + + R
M. flavescens + + +

M. szulgai + + + +
M. xenopi + V +

MAC ~ + + +

M. terraJ + + R
M. gastri + V R
M. triviale2 + + R
M. nonchromogenicum 2 + + R
M. farcinogenes + R
M. malmoense + + +

M. ulcerans + + -I-
M. fortuitum + + + 4-

M. peregrinum + -I-

M. chelonei + + + +

M. abscessus +

M. phlei + + +

M. thermoresistibile +

M. smegmatis + + +

M. vaccae + + +

M. diernhoferi +

M. fallax +

M. haemophilum +
i complexe M. avium-intracellulare, 2 complexe terrae.
TCH : hydrazide de l'acide thioph~ne-2-carboxylique ; DCS : D-cyclos~rine ; PZA : pyrazinamide ;
PYR : pyruvate ; PAS : acide para-aminosalicylique.
R : exceptionnellement pathog~ne. Mycobact~rie opportuniste habituellement non pathog~ne.

Revue frangaise des laboratoires, f#vrier1995, N ° 2 7 3 25

 3. Identification
des mycobact@ries atypiques
Elle requiert la mise en oeuvre d'un panel complet compre-
nant outre les tests biochimiques et les tests de sensibilit6 aux
substances anti-bact6riennes utilis~s pour l'identification des
mycobact~ries du groupe de la tuberculose, des tests compl~-
mentaires dont le choix est guid6 par les r&sultats de l'~tape
d'orientation. Les d6tails techniques ont 6t6 pr6cis~s par
TISON et CARBONNELLE (11).
1. Nomenclature des actes de biologie m~dicale
Sous le num&ro d'ordre 244, la nomenclature des actes de
biologie m6dicale indique que l'identification biochimique
compl~te d'une mycobact6rie autre que M. tuberculosis (anti-
biogramme non compris ; cumulable avec l'examen 243) est
cot6e B 100.
2. Tests compl~mentaires
On peut rechercher une phosphatase acide, l'hydrolyse du
tween 80, une glucosidase, une galactosidase, une ur~ase ou
une aryl-sulfatase. II s'agit de s~lectionner parmi cette liste non
limitative les tests qui conduiront au diagnotic d'esp&ce, en
se rapportant aux caract6ristiques mentionn6es dans les
tableaux III et IV.
4. Interpretation des r sultats
1. Valeur des tests biochimiques
Ces tests tr~s sp~cifiques manquent de sensibilit&. La variation
intrins&que de certaines souches peut conduire ~ des r~sultats
inhabituels (9). II est donc n~cessaire d'~tudier un grand
nombre de param~tres pour obtenir un r~sultat discriminant.
2. Pathog~nicit~ d ' u n e mycobact~rie atypique
L'identification d'une mycobact~rie atypique doit ~tre inter-
pr~t~e avec prudence. Sa pathog~nicit~ ne sera envisag~e
BIBLIOGRAPHIE
1. BURUCOA C., BOURGOIN A., DOREP., R E C A R T D.,
VINCENT V., C A S T E T S M. - Pulmonary infection due to
Mycobacterium rnalmoense in an immunocompromised patient.
Clin. Microbiol. Newsletter, 1993, 1 5 - 86-87.
2. CANETTI G., RIST N., G R O S S E T J. - Mesure de la sensibilit~
du bacille tuberculeux aux drogues antibacillaires par la
m~thode des proportions. Rev. Tuberc. Pneumol., 1963, 2 7 :
217-272.
3. DAVID H., LEVY-FREBAULT V., THOREL M.F. - M#thodes
de laboratoire pour mycobact~riologie clinique. Institut Pasteur,
Paris, 1989, pp. 1-87.
4. KATILA M.L., MATTIL A J., B R A N D E R E. - Enhancement of
growth of Mycobacterium malmoense by acidic p H and pyruvate.
Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1989, 8 : 998-1000.
5. KONNO K. - New chemical method to differentiate human
type tubercle bacilli from other mycobacteria. Science, 1956,
124 : 985.
6. KUBICA G.P., JONES W.D., A B B O T T V.D., B E A M R.E.,
KILBURN J.O., CARTER J.C. - Differential identification of
mycobacteria. I. Test on catalase activity. Am. Rev. Respir. Dis.,
1966, 9 4 : 400-405.
7. L E B R U N L., MARTIN C., VINCENT V. - Tubercle bacilli
identification with nucleic acid probes. Lancet, 1993, 3 4 1 :
1486.
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qu'apr~s avoir r&uni les conditions suivantes :
- symptomatologie clinique et/ou radiologique compatible
avec une mycobact&riose,
- colonies relativement nombreuses,
- non associ~es & une mycobact&rie du groupe tuberculosis,
- isolements si possible r&p~t~s de la m~me mycobacterie,
- esp&ce potentiellement pathog&ne.
Certaines mycobacteries isol~es & partir de pr&l&vements
humains sont toujours pathog&nes telles M. ulcerans, M. mal-
m o e n s e , M. m a r i n u m et M. h a e m o p h i J u m . D'autres sont
saprophytes opportunistes comme M. kansasii, M. xenopi,
M. chelonei, M. fortuiturn, M. s c r o f u l a c e u m et les mycobac-
t~ries du complexe M A C . D'autres enfin sont saprophytes et
habituellement non pathog&nes (M. gordonae, M. phlei,
M. srnegmatis) (14).
Conclusion
Les mycobact~ries responsables de la tuberculose
sont relativement faciles & identifier si i'on respecte
une strat~gie logique et des m~thodes standardis~es.
Le d~lai moyen d'identification de M. tuberculosis est
d'environ 18 jours. L'identification des mycobact~ries
atypiques & l'aide de tests compl~mentaires est plus
longue et son interpretation parfois d~licate.
Actuellement de nouvelles m~thodes diagnostiques
(respirom~trie radiom~trique, chromatographie des
acides gras, hybridation mol~culaire, amplification
g~nique) permettent une identification plus rapide
mais elles se heurtent & des contraintes mat~rielles
et n~cessitent un investissement important (12).
Certaines techniques comme la radiom~trie et l'hybri-
dation moi~culaire ne fournissent qu'une identifica-
tion partielle (groupe tuberculosis). De plus, elles ne
permettent le diagnostic que d'un hombre limit~
d'esp~ces et donnent quelquefois des r~activit~s croi-
s~es (7). Les m~thodes rapides am~liorent donc le
d~lai de r~ponse mais doivent @tre compl~t~es par les
tests classiques qui seuls permettent le diagnostic de
toutes les esp~ces et restent accessibles & tout labora-
toire d'analyse.
8. P O R T A E L S F., D A W S O N D.J., L A R S O N L., RIGOUTS L. -
Biochemical properties and fatty acid composition of
Mycobacterium haemophilum : study of 16 isolates from
Australian patients. J. Clin. Microbiol., 1993, 31 : 26-30.
9. R A N G E R S., C A S T E T S M., GIL R., FAUCHER P.,
GUILLOTEAU J. - Tuberculose urinaire ~ Mycobacterium tuber-
culosis d@ourvu de nitrate r#ductase. M~d. Mal. Infect., 1983,
1 3 . 526-528.
10. R O B E R T S G.D., K O N E M A N E.W., KIM Y.K. -Mycobacte-
rium. In : B A L O W S A., H A U S L E R W.J., Jr, H E R R M A N N K.L.,
ISENBERG H.D., S H A D O M Y H.J. Eds. Manual of clinical
microbiology, American society for microbiology, Washington,
D.C., fifth edition, 1991, pp. 304-339.
11. TISON F., C A R B O N N E L L E B. - Recherche, isolement et
#tude du bacille tuberculeux et des autres mycobact~ries en pra-
tique courante. Crouan et Roques Ed., Lille, 1972, 355 p.
12. VINCENT LEVY-FREBAULT V. - M#thodes rapides de
d~tection et de diagnostic des mycobact~ries : actualit#s et pers-
pectives. M~d. Mal. Infect., 1992, 2 2 : 391-406.
13. V I R T A N E N S. - A study of nitrate reduction by mycobacte-
ria. Acta Tuberc. Scand., 1960, Suppl. 4 8 : 111-119.
14. W A Y N E L.G., S R A M E K H.A. - Agents of newly recognized
or infrequently encountered mycobacterial diseases. Clin.
Microbiol. Rev., 1992, 5 : 1-25.
Revue frangaise des laboratoires, f#vrier1995, N ° 273