LO

EP
FE
R
Ex
em
pl
ai
re
de
Lo
ua
nn
e
KL
O
EP
FE
R
Ex
em
pl
ai
re
de
Lo
ua
nn
e
KL
O
EP
FE
R
Ex
em

Plantin
pl
ai
re
de
Lo
ua
nn
e

Version : 2021 – 2022

KL
O
UE1 – Biochimie & Génome

EP
FE
R
Ex
em
pl
ai
re
de
Lo
ua
Réplication de l’ADN (Acide DésoxyriboNucléique) -

nn
e
KL
O
EP
FE
R
 RÉPLICATION DE L’ADN : GÉNÉRALITÉS
▪ Permet la reproduction fidèle de l’information génétique (ADN)
▪ Génome : ensemble du matériel génétique d’une espèce, codé dans son ADN
▪ Chez l’Homme, existence de 2 types de séquences :
Rôle o Séquences codantes : transcrites en ARN messagers et traduites en protéines
o Séquences non codantes (98% du génome) :
- Non transcrites

R
FE
- Ou transcrites mais non traduites

EP
O
Procaryotes ▪ Mécanismes moléculaires semblables chez les Procaryotes et les Eucaryotes

KL
e
vs Eucaryotes o Malgré quelques différences

nn
ua
Lo
de
re
ai
RÉPLICATION DE L’ADN : GÉNÉRALITÉS

pl
em
PROCARYOTE VS EUCARYOTE

Ex
R
▪ Micro-organisme unicellulaire (1 seule cellule)

FE
Caractéristiques
▪ Sans noyau, ni autres organites

EP
O
KL
▪ ADN

e
o Dans le cytoplasme

nn
ua
o Sous forme de chromosome unique
Lo
Procaryote o Circulaire
de
Matériel
▪ +/- plasmide (ADN plasmidique)
re

génétique
ai

o ADN non essentiel à la survie cellulaire

pl
em

mais confèrent souvent un avantage

Ex

o Réplication autonome (indépendant de

R
FE

l’ADN génomique)
EP
O

▪ Uni ou pluricellulaires
KL

▪ Multiples organites (= structures

e
nn

spécialisées contenues dans le

ua
Lo

cytoplasme et délimitées du reste de

de

la cellule par une membrane

re

Caractéristiques phospholipidique)
ai
pl

o Noyau délimité par une

em

membrane : contient l’ADN

Ex
R

o Appareil de Golgi
FE

Eucaryote o Mitochondries
EP
O

o Réticulum endoplasmique
KL
e

▪ ADN linéaire
nn
ua

o Plusieurs molécules
Lo

Matériel - Homme : 46 chromosomes

de

génétique - Drosophile : 8 chromosomes

re
ai

- Poisson rouge : 104 chromosomes

pl
em

▪ → Le nombre de chromosomes ne dépend pas de la complexité de l’espèce

Ex
R

Caryotype ▪ = Analyse morphologique dans le nombre et la structure des chromosomes

FE
EP
LO

1|Page
 ADN : GÉNÉRALITÉS – RAPPELS
▪ Bicaténaire : deux brins antiparallèles
o Un brin de 5’ à 3’
o L’autre brin : de 3’ en 5’,
Structure
o Les 2 brins sont tête-bêche
de l’ADN
▪ Hélicoïdale : deux brins enroulés l’un autour de l'autre pour former une double hélice

R
(forme découverte par Watson et Crick)

FE
EP
▪ Un brin d’ADN = polynucléotide = polymère de nucléotides

O
KL
▪ Nucléotide = succession d’une base, d’un ose, et d’un groupe phosphate

e
nn
▪ Base nucléique = base azotée

ua
o Adénine (A) et Guanine (G) : bases puriques

Lo
de
o Cytosine (C) et Thymine (T) : bases pyrimidiques

re
▪ Ose = pentose :

ai
pl
o Relié à la base azotée par une liaison osidique

em
o Désoxyribose pour l’ADN (pas d’OH sur le carbone en 2’)

Ex
o Ribose pour l’ARN

R
FE
▪ Nucléoside = Base + pentose

EP
o Peut alors s’associer à 1, 2 ou 3 phosphates pour former le nucléotide

O
KL
Structure

e
nn
d’un

ua
Lo
nucléotide de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai

▪ Polymère de nucléotides = plusieurs nucléotides unis entre

pl
em

eux par des liaisons covalentes phosphodiester entre :

Ex

o Le désoxyribose d’un nucléotide

R
FE

o Le groupe phosphate de l’autre nucléotide

EP

Formation d’une chaîne où s’alternent oses et phosphates =

O
KL

squelette pentose-phosphate
e
nn
ua

Brin d’ADN
Lo
de
re
ai
pl

▪ Le brin de l’ADN est orienté :

em

o Extrémité 5’P : phosphate libre sur le carbone 5’

Ex
R

o Extrémité 3’OH : Le OH est libre sur le carbone 3’

FE
EP
LO

2|Page
 ADN : GÉNÉRALITÉS – RAPPELS (SUITE)
▪ Complémentarité des bases démontrées par Chargaff : autant de A que de T et autant de C que
de G
▪ Règle d’appariement : une base purique s’associe avec une base pyrimidique afin que les 2 brins
d’ADN soient bien parallèles = respect de l’encombrement stérique

o A-T

R
FE
o C-G

EP
⇒ Permet la duplication de l’information

O
KL
génétique sur les 2 brins

e
nn
ADN : ▪ Interaction des bases nucléiques d’un brin

ua
deux brins d’ADN avec l’autre brin à travers des

Lo
liaisons hydrogènes (liaisons H)

de
antiparallèles et

re
complémentaires o A-T : 2 liaisons H

ai
pl
o G-C : 3 liaisons H

em
o Impact : les origines de réplication ont

Ex
plutôt lieu dans des zones riches en A et

R
FE
T car moins de liaisons H donc

EP
dénaturation de l’ADN plus facile, les 2

O
KL
brins se séparent plus facilement

e
nn
▪ L’information génétique dépend de la

ua
séquence (ATCG)
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex

SYNTHÈSE DE L’ADN
R
FE
EP

Démarrage ▪ À partir de l’extrémité 3’

O
KL

▪ Synthèse s’effectue à partir de dNTP (= 5’-désoxyribonucléoside triphosphate) qui donne :

e
nn

o Du dNMP = 5’-désoxyribonucléoside monophosphate

ua
Lo

- Qui sera estérifié par une fonction acide de son phosphate sur la fonction alcool libre du
de

carbone 3’ du désoxyribose de l’ADN

Processus
re

o De l’énergie : nécessaire à la condensation du nucléoside

ai
pl

o Du pyrophosphate : hydrolysé par une pyrophosphatase en phosphate inorganique

em
Ex

- Pour rendre la réaction irréversible

R

 Lors de la réplication, synthèse d’ADN par ajouts successifs de bases grâce à l’ADN polymérase
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re

Schéma
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

3|Page
 RÉPLICATION DE L’ADN : GÉNÉRALITÉS
ADN DES EUCARYOTES

▪ Pour se compacter, la double hélice de l’ADN est

enroulée sur des protéines histones pour former
des nucléosomes
Compaction

R
o Permet la compaction de l’ADN pour former la

FE
de l’ADN

EP
chromatine des chromosomes, à l’intérieur du

O
KL
noyau des cellules eucaryotes
▪ ≠ de chez les procaryotes

e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
ADN DES EUCARYOTES

Ex
NUCLÉOSOME (= ADN + PROTÉINES)

R
FE
▪ 146 paires de bases d’ADN enroulées autour d’un

EP
octamère de protéines histones

O
KL
▪ Octamère de protéines histones :

e
nn
o 2 x {H2A, H2B, H3 et H4}

ua
o Verrouillé par l’histone H1
Composition Lo
de
▪ Succession de nucléosomes reliés par une région
re

d’ADN dite de liaison

ai
pl

o La taille de l’ADN de liaison varie selon les

em
Ex

espèces et le type cellulaire

R

▪ ⇒ Formation d’une structure en collier de perles

FE
EP
O
KL
e
nn

▪ Rôle déterminant du nucléosome lors de la transcription, la

ua

réplication, la réparation, en modulant l’accessibilité de l’ADN

Lo
de

o Hétérochromatine : condensée
re

- Des histones verrouillent l’ADN

ai
pl

o Euchromatine : accessible
em

Structure
Ex

- Car moins condensée

dynamique
R

▪ Le nucléosome peut être modifié au niveau des queues des

FE
EP

histones par des marques épigénétiques

O

o Ex : acétylation, méthylation, ubiquitination

KL

o En fonction de la somme des marques apposées sur ces

e
nn

histones, la chromatine sera plus ou moins accessible

ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

4|Page
 ÉPIGÉNÉTIQUE
▪ Étudie la nature des mécanismes modifiant de
Épigénétique manière réversible, transmissible (réplication),
= discipline de et adaptative l’expression des gènes sans en
la biologie changer la séquence nucléotidique (= exclut les
mutations)

R
1. Modifications des histones

FE
EP
o Ex : acétylation ou méthylation des histones

O
modifient la compaction de l’ADN

KL
2. Méthylation de l’ADN

e
nn
3 mécanismes

ua
o Celle-ci est recopiée, lors de la réplication de
épigénétiques

Lo
l’ADN, de la molécule mère sur les molécules

de
filles

re
ai
3. Modifications post-transcriptionnelles par les

pl
em
miRNA (micro ARN)

Ex
▪ 1) Histone acétylé via histone acétyltransférase (HAT) → Stimule la transcription

R
FE
o Désacétylation des histones via les HDAC → Inhibition de la transcription

EP
Exemples
▪ 2) Méthylation de l’ADN par méthyltransférases → Compaction d’ADN → Inhibition de la

O
KL
transcription. Peut recruter d’autres protéines comme HDAC

e
nn
ua
Lo
de
re

RÉPLICATION DE L’ADN
ai
pl
em
Ex

▪ Synthèse d’Acide DésoxyriboNucléique (ADN) qui reproduit de manière complète et fidèle le

R

génome d’une cellule (duplication) au cours de la phase S du cycle cellulaire afin de préparer
FE
EP

la division de cette cellule

O

o → Création de 2 molécules filles d’ADN identiques à la molécule parentale

KL

- À gauche : cellule avec 2 chromosomes à 1 chromatide qui après réplication possède 2

e
nn

Définition
chromosomes à 2 chromatides
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

5|Page
 RÉPLICATION DE L’ADN
CYCLE CELLULAIRE
▪ Cycle cellulaire = intervalle entre chaque
Définition
division cellulaire

 G1 : 1ère phase de croissance cellulaire

o Préparation de la duplication du génome
avec la mise en place d’un complexe de

R
FE
pré-réplication
4 phases

EP
 S : phase de réplication (duplication)

O
du cycle

KL
cellulaire  G2 : 2nde phase de croissance

e
nn
o Préparation de la division cellulaire

ua
Lo
⇒ G1, S et G2 constituent l’interphase

de
 M : mitose

re
ai
pl
em
▪ Dite de quiescence

Ex
o Phase de sortie du cycle cellulaire
Phase G0

R
o N’est pas un moment où la cellule se repose, mais une phase où la cellule exerce ses fonctions de

FE
EP
cellule différenciée

O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai

CARACTÉRISTIQUES DE LA RÉPLICATION
pl
em
Ex

▪ Caractère semi-conservatif : en vert ci-contre

R

▪ Lors de la réplication, chaque brin de la molécule

FE
EP

d’ADN sert de matrice pour la synthèse du brin

O

complémentaire
KL
e

o Donc obtention de 2 molécules ADN identiques

nn
ua

- Chaque nouvelle molécule « fille » (en rouge)

Réplication
Lo

conserve donc la moitié de la molécule

de

semi- « mère » (en bleu)

re

conservative
ai

▪ ≠ du mécanisme conservatif où la molécule fille est

pl
em

créée de façon indépendante de la molécule mère

Ex

▪ ≠ du mécanisme dispersif où aucun brin n’est

R
FE

conservé intact : les molécules filles sont créées à

EP

partir de fragments de la molécule mère, dispersés

O
KL

dans chacune des 2 molécules

e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

6|Page
 CARACTÉRISTIQUES DE LA REPLICATION
EXEMPLES DE DIVISION CELLULAIRE
▪ Rôle de contrôle et coordination
Réplication
précède ▪ 3 exemples de division cellulaire :
o Mitose
division
o Méiose
cellulaire
o Scissiparité

R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
▪ Réplication de l’ADN, suivie d’une division permettant :
Mitose

re
ai
o Le développement et la croissance des êtres

pl
- Ex de l’Homme : une cellule œuf aboutit à un organisme adulte de 1013 à 1014 cellules

em
Ex
o Le renouvellement, la compensation de la mort cellulaire programmée ou non

R
FE
▪ 1 cellule mère donne 2 cellules filles avec le même patrimoine génétique et les mêmes propriétés

EP
fonctionnelles

O
KL
o Assurent ainsi une continuité dans le temps de la fonction de cette cellule

e
nn
ua
Lo
▪ Permet l’obtention de gamètes (cellules reproductives) de
par :
re
ai

o Une étape de réplication

pl

- Passage d’une cellule 2n chromosomes à 1

em
Ex

chromatide à une cellule 2n chromosomes à 2

R

Méiose chromatides
FE
EP

o Suivie de 2 divisions successives

O

- Permet d’arriver à des cellules haploïdes (avec 1n

KL

chromosomes à 1 chromatine) à partir d’une

e
nn

cellule diploïde
ua
Lo

- → Patrimoine génétique différent

de
re
ai
pl

▪ Concerne les bactéries, ex : Escherichia coli (E. coli)

em

▪ Division asexuée
Ex

o Au départ : cellule avec 1 molécule d’ADN circulaire

R
FE

o Puis réplication (duplication de l’ADN) suivie d’une division qui donne 2 bactéries indépendantes
EP

Scissiparité
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

7|Page
 CARACTÉRISTIQUES DE LA RÉPLICATION
3 PHASES DE LA RÉPLICATION
▪ Les 2 brins d’ADN se séparent au niveau de l’origine de réplication (ori)
Initiation
▪ Des amorces sont synthétisées au niveau des brins d’ADN séparés

▪ Le réplisome (complexe multiprotéique) s’assemble à l’extrémité des amorces synthétisées durant

Élongation l’initiation au niveau des origines de réplication
o Puis il progresse le long du brin matrice en synthétisant le brin fils par copie du brin mère

R
FE
▪ La réplication s’arrête quand :

EP
O
Terminaison o Le réplisome se heurte à l’extrémité 5’-P d’un segment d’ADN (pour l’ADN linéaire)

KL
o Ou quand il rencontre un complexe spécifique de terminaison de réplication (ADN circulaire)

e
nn
ua
Lo
de
1ère ÉTAPE : INITIATION DE LA RÉPLICATION

re
ai
pl
em
Objectif ▪ Séparation des 2 brins d’ADN au niveau de l’origine de réplication

Ex
R
FE
EP
O
KL
e
Schéma

nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em

▪ Des séquences de reconnaissance au niveau de l’ADN (rose clair) sont reconnues par des protéines
Ex

initiatrices de la réplication (oval rose)

R
FE

▪ Ces dernières se fixent sur l’ADN, entraînent sa dénaturation (séparation des 2 brins) par rupture
EP

des liaisons hydrogène entre les nucléotides des 2 brins (zones riches en A-T)
O
KL

Explication ▪ → Création d’un œil de réplication ⇒ séparation des 2 brins d’ADN et apparition de 2 fourches de
e
nn

réplication qui se déplacent :

ua

o Dans des directions opposées : la réplication est bidirectionnelle

Lo
de

o Et à la même vitesse, formant des « réplicons »

re

- Réplicon : molécule d’ADN pouvant se répliquer à partir d’une seule origine de réplication
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

8|Page
 INITIATION DE LA RÉPLICATION
ORIGINES (ORI) DE LA RÉPLICATION
▪ Sur l’ADN au niveau de séquences riches en AT : dénaturation plus facile car seulement 2 liaisons
Localisation
hydrogènes (au lieu de 3 liaisons hydrogènes entre G et C)

▪ Nombreuses origines de réplication pour diminuer la durée de

réplication

R
o 60 fois plus d’ADN dans les cellules eucaryotes que dans les

FE
Chez les
procaryotes

EP
eucaryotes

O
o Beaucoup de protéines sur l’ADN donc plus difficile à dénaturer

KL
▪ Sur 1 chromosome : plusieurs centaines d’origines de réplication

e
5 flèches jaunes = 5

nn
o Des paquets de 20 à 80 réplicons fonctionnent en même temps

ua
yeux de réplication

Lo
de
▪ 1 seule origine de réplication

re
▪ E.coli : l’origine s’appelle oriC

ai
pl
em
o Elle contient un grand nombre de thymines

Ex
o OriC contient une boîte DnaA qui lie la protéine DnaA

R
- DnaA = facteur d’initiation de la réplication : entraîne l’ouverture de la double hélice, faisant

FE
apparaître un œil de réplication avec les 2 fourches de réplication (ronds jaunes ci-dessous)

EP
O
Chez les puis élongation et enfin terminaison suivie de la séparation des 2 molécules d’ADN

KL
e
procaryotes

nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL

INITIATION DE LA RÉPLICATION (EUCARYOTES)

e
nn
ua

▪ Fixation de ORC : Complexe de Reconnaissance de l’Origine

Lo

o Se fixe sur les ori

de
re

▪ ORC recrute des protéines pour charger MCM

ai
pl

(MiniChromosome Maintenance)
em

o MCM : hélicase en forme d’anneau qui catalyse

Ex

Formation
R

l’ouverture de l’ADN
d’un
FE

▪ Validation du pré-RC (Complexe de pré-réplication) qui lie

EP

complexe
O

chaque origine de réplication durant la phase G1 → Ce

KL

protéique complexe est converti en complexe d’initiation actif

e
nn

permettant le recrutement du réplisome lors de la phase S

ua
Lo

o Ceci empêche de répliquer le chromosome plusieurs fois

de

compte tenu de la centaine d’ORI présents sur chaque

re

chromosome
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

9|Page
 2ème ÉTAPE : ÉLONGATION
ASSEMBLAGE DU RÉPLISOME
Réplisome : ▪ Complexe multiprotéique contenant 5 protéines différentes :
définition o Hélicases, Primases, ADN polymérases, Clamps glissants, Chargeurs de clamps

▪ Enzyme catalysant l’ouverture de l’ADN

o Utilise de l’énergie (ATP) pour briser les liaisons H unissant les paires de base
Fonction
- Permet ainsi de dérouler la double hélice d’ADN et de libérer les 2 brins durant la

R


FE
phase S

EP
Hélicase

O
Eucaryotes ▪ Permet l’ouverture de la double hélice par son activité hélicase

KL
e
nn
E. Coli ▪ Protéine DnaB (fait partie du primosome)

ua
Lo
▪ Synthétise les amorces ARN (AUCG)
Fonction

de
o Seules les ARN polymérases peuvent fabriquer directement un ARN sur de l’ADN

re
ai
▪ ADN polymérase alpha (α) qui possède 2 activités :

pl
em
o Primase : synthétise une amorce de 12 ribonucléotides (ARN)


Ex
Eucaryotes o Polymérase : synthétise ensuite 20 désoxyribonucléotides permettant ainsi la formation
Primase

R
d’une amorce mixte ARN/ADN

FE
EP
o N’a pas d’activité proofreading (3’→ 5’ exonucléase auto-correctrice)

O
▪ Protéine DnaG (fait partie du primosome comme l’hélicase)

KL
E. Coli

e
o Elle synthétise une amorce ARN d’environ 11 nucléotides (+/-1)

nn
ua
 ADN Eucaryotes ▪ 2 ADN polymérases dans le réplisome
Lo
▪ Synthétisent le brin d’ADN complémentaire au brin matrice
de
polymérases et E. Coli
re
ai

Fonction ▪ Ouvre les clamps pour pouvoir les mettre sur l’ADN
pl
em

 Chargeur
Eucaryotes ▪ Appelé RF-C : Facteur de réplication C
Ex

de clamp
R
FE

E. Coli ▪ Appelé chargeur de pince

EP

▪ Anneaux protéiques qui encerclent l’ADN et lient ce dernier aux ADN polymérase
O
KL

Structure o Permet d’augmenter la processivité des ADN polymérases : l’ADN polymérase peut
e
nn

 Deux et fonction réaliser des réactions de polymérisation successives sur la même molécule d’ADN sans
ua

la relâcher, accélérant ainsi le processus de synthèse d’ADN

Lo

clamps
de

glissants Eucaryotes ▪ Appelé PCNA (antigène nucléaire de prolifération cellulaire)

re
ai

▪ Appelé complexe β
pl

E. Coli
em

o Présents en 2 exemplaires
Ex

E. Coli Eucaryote
R
FE
EP
O
KL
e
nn

Schémas
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

10 | P a g e
 2ème ÉTAPE : ÉLONGATION
AUTRES PROTÉINES DE LA RÉPLICATION DE L’ADN
Protéines de ▪ Évitent la renaturation de l’ADN (= sa retransformation d’ADN simple brin en ADN
Fonction
double brin)
maintien de
l’ADN ouvert Eucaryotes ▪ Appelé RPA : Protéine de réplication A
(simple brin) E. Coli ▪ Appelé Single-Strand Binding protein (SSB)

R
▪ S’appellent gyrases chez les bactéries

FE
EP
▪ Enzymes intervenant en aval de la fourche (anneau vert ci-dessous)

O
▪ Enlèvent les supertours positifs engendrés par la formation de l’œil de réplication

KL
o Au fur et à mesure de la progression des fourches de réplication, l’œil de réplication grandit,

e
nn
ADN
générant des surenroulements (tensions mécaniques sous forme de torsions)

ua
topoisomérases

Lo
o Ainsi ces enzymes hydrolysent (coupant) un brin d’ADN, lui permettant d’avoir une rotation

de
libre autour de l’autre brin, puis le reconstitue (ligase)

re
ai
▪ Enfin, elles rajoutent des tours en arrière des polymérases pour reconstituer la double hélice

pl
em
▪ Essentielles à la réplication : en leur absence, arrêt de la réplication

Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
Schéma
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de

2ème ÉTAPE : ÉLONGATION

re
ai
pl
em

Définition ▪ Élongation = synthèse des deux brins d’ADN au niveau des fourches de réplication
Ex
R

▪ Réplication dite semi-discontinue car :

FE

o 1 brin synthétisé de manière directe = en une seule fois

EP

Réplication
O

- Appelé brin direct = principal = précoce / avancé = continu

KL

semi- - Brin représenté en bas du schéma ci-dessus

e
nn

discontinue o 1 brin synthétisé de manière indirecte = de façon retardée et discontinue : formation de

ua

fragments d’Okazaki qui seront ensuite liés les uns aux autres
Lo
de

- Appelé brin retardé = secondaire = tardif = discontinu

re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

11 | P a g e
 2ème ÉTAPE : ÉLONGATION
ADN POLYMÉRASE
▪ Elles permettent la réplication
2 ADN
o 1 ADN polymérase synthétise le brin direct (continu)
polymérases
- Chez l’homme, elle s’appelle ADN polymérase δ ; chez E. coli : ADN polymérase III (pol III)
dans le
- La polymérisation peut aussi s’effectuer par la polymérase ε
réplisome o L’autre synthétise le brin indirect (discontinu)

R
FE
Nature ▪ Enzyme du noyau cellulaire

EP
O
▪ Permet l’élongation des brins d’ADN néosynthétisés

KL
Rôle
▪ Agit en phase S du cycle cellulaire et permet de doubler l’ensemble du génome

e
nn
ua
▪ Réplication bidirectionnelle, mais l’ADN polymérase est unidirectionnelle :

Lo
Travaille dans o Processus orienté de 3’ vers 5’ sur la matrice ADN simple brin

de
- À l’inverse, nouveau brin synthétisé de 5’ vers 3’

re
un seul sens

ai
pl
- Avec respect de la complémentarité des bases

em
ADN

Ex
▪ Pour synthétiser le brin complémentaire, l’ADN polymérase δ a besoin :
polymérase δ

R
o D’une matrice d’ADN simple brin

FE
o D’une amorce dite mixte (ARN/ADN), complémentaire au brin d’ADN matrice

EP
O
- Synthétisée par la polymérase α (primase) chez les eucaryotes qui est

KL
Synthèse
ensuite remplacée par l’ADN polymérase δ

e
nn
du brin
o D’ions magnésium (Mg2+), cofacteurs de l’enzyme

ua
complémentaire
Lo
o Des désoxyribonucléosides triphosphates : dATP, dCTP, dGTP et dTTP
de
- Pour obtenir des dNMP qui seront ajoutés lors de la synthèse
re

- Cela libère de l’énergie et du pyrophosphate qui sera dégradé pour que la

ai
pl
em

réaction soit unidirectionnelle

Ex
R
FE
EP
O

2ème ÉTAPE : ÉLONGATION

KL

FONCTIONNEMENT DE L’ADN POLYMÉRASE δ

e
nn
ua

Activité ▪ Lui permet d’ajouter un dNMP à l’extrémité 3’ de l’amorce

Lo

polymérase d’ARN-ADN
de
re
ai

▪ Aussi appelée fonction d’édition (= proofreading)

pl
em

▪ L’enzyme vérifie que le nucléotide précédemment ajouté est

Ex

le « bon » nucléotide
R
FE

o Si le nucléotide est correctement apparié : elle ajoute le

EP

Activité
dNMP suivant
O

auto-correctrice
KL

o Si mésappariement, elle enlève le « mauvais » nucléotide

e

grâce à son activité 3’ ➝ 5’ exonucléase (= hydrolyse) et le

nn
ua

remplace par le « bon »

Lo
de

o Se trouve uniquement chez l’ADN polymérase δ

re
ai
pl

▪ L’enzyme « regarde vers l’avant »

em

▪ Permet la dégradation d’une base à partir de l’extrémité 5’P

Ex

Activité 5’ → 3’
▪ Lors de la jonction des segments d’ADN synthétisés sur le brin
R
FE

exonucléase
retardé (fragments d’Okazaki)
EP

▪ Activité assurée par la polymérase I chez E. Coli

LO

12 | P a g e
 2ème ÉTAPE : ÉLONGATION
HYDROLYSE DE L’ADN = ACTIVITÉ EXONUCLÉASIQUE
Survenue ▪ Lorsque le dernier nucléotide mis en place n’est pas bon

▪ Clivage de la liaison phosphodiester entre 2 nucléotides

d’un brin d’ADN

R
FE
▪ Détache le dernier nucléotide et libère le carbone 3’ du

EP
nucléotide précédent (= permet la dégradation de

O
KL
l’extrémité du brin néosynthétisé de l’ADN)

e
nn
▪ La réaction d’hydrolyse est différente de la

ua
Mécanisme pyrophosphorolyse (inverse de la réaction de la

Lo
de
polymérase)

re
o Dans cette dernière l’accepteur du nucléotide est le

ai
pl
pyrophosphate inorganique (Ppi) et non H2O comme

em
dans la réaction exonucléasique

Ex
o Rend ainsi la réaction de polymérisation irréversible

R
FE
car le PPi est dégradé par une pyrophosphatase

EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

13 | P a g e
 2ème ÉTAPE : ÉLONGATION
BRIN RETARDÉ = BRIN INDIRECT
▪ Synthèse des amorces sur le brin tardif, complémentaire à l’ADN matrice
 Synthèse E. Coli ▪ Amorce ARN synthétisée par la primase
d’une amorce
▪ Amorce ARN synthétisée par l’activité primase de ADN polymérase α
Eucaryotes
▪ Puis amorce ADN synthétisée par l’ADN polymérase α

R
▪ Fragment d’Okazaki synthétisé de l’extrémité 3’OH d’une amorce à l’extrémité 5’P de l’amorce

FE
 Début de la

EP
précédente,

O
synthèse d’un

KL
E. Coli ▪ Par la polymérase III : synthétise un fragment d’Okazaki de 100 à 200 nucléotides

e
fragment

nn
d’Okazaki ▪ Par l’ADN polymérase δ qui synthétise un fragment d’Okazaki de 1000 à 2000

ua
Eucaryotes

Lo
nucléotides

de
▪ Par l’activité exonucléasique 5’-3’ de l’ADN polymérase I

re
E. Coli

ai
 Hydrolyse

pl
em
de l’amorce ▪ Par la ribonucléase H1 (Rnase H1)
Eucaryotes

Ex
o Sauf le premier désoxynucléotide qui est éliminé par l’exonucléase FEN-1

R
FE
 Fin de la E. Coli ▪ Par l’ADN polymérase I qui achève la synthèse du fragment d’Okazaki

EP
synthèse du

O
▪ L’ADN polymérase δ achève la synthèse du fragment d’Okazaki

KL
fragment Eucaryotes

e
nn
E. Coli et ▪ Par l’ADN ligase qui lie le fragment d’Okazaki avec l’ADN du fragment précédent
 Ligature

ua
Eucaryotes o → Reconstitution du brin d’ADN
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex

Schéma
R
FE

E. Coli
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl

Schéma
em

Eucaryote
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

14 | P a g e
 ADN POLYMÉRASES : RÉSUMÉ DE LEURS CARACTÉRISTIQUES

Tableau

R
récapitulatif

FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
▪ Codée par le gène POLA et localisée dans le noyau (pour les cellules eucaryotes)

de
re
o Équivalent procaryote : ADN polymérase I

ai
ADN

pl
▪ Activité d’initiation : permet la synthèse de l’amorce ARN/ADN lors de la réplication

em
Polymérase α
▪ Pas d’activité 3’-5’ exonucléase

Ex
R
▪ Facteurs associés : Primase et RP-A

FE
EP
▪ Codée par le gène POLD1 et localisée dans le noyau (pour cellules eucaryotes)

O
KL
o Équivalent procaryote : ADN polymérase III

e
nn
ADN ▪ Activité de synthèse : polymérisation qui permet de répliquer l’ADN

ua
Polymérase δ Lo
▪ Activité 3’-5’ exonucléase : permet de corriger les mésappariements lors de la synthèse du brin
de
complémentaire
re
ai

▪ Facteurs associés : RF-C (chargeur de clamps) et PCNA (clamps glissants)

pl
em

ADN
Ex

▪ Codée par le gène POLG et localisée dans la mitochondrie (pour les cellules eucaryotes)
R

Polymérase γ
FE
EP
O
KL
e
nn
ua

CARACTÉRISTIQUES DE LA RÉPLICATION
Lo
de

▪ Lors de la réplication, la séquence doit être recopiée à l’identique

Réplication doit
re
ai

être fidèle ▪ Si des erreurs surviennent lors de la réplication, il peut y avoir un impact sur la transcription, puis la
pl
em

traduction des protéines et donc sur le phénotype cellulaire

Ex

▪ Niveau équilibré en dNTP disponible lors de la réplication

R
FE

▪ ADN polymérase (= enzyme qui catalyse la réaction de polymérisation pour synthétiser la molécule
EP

d’ADN fille à partir de la molécule matrice)

O
KL

o Très fidèle lors de la polymérisation

e
nn

Mécanismes o Possède une fonction exonucléase

ua

garantissant la - Ex : en cas de mésappariement, cette fonction permet à la polymérase de corriger et remplacer

Lo
de

fiabilité de la le mauvais nucléotide par le bon

re

réplication o Bénéficie d’une amorce ARN : Les 1ères bases synthétisées ont le plus d’erreurs -ADN
ai
pl

- Or cette amorce est dégradée avant d’une synthèse par l’ADN pol δ, ce qui diminue le risque
em

d’erreur
Ex
R

▪ Existence d’un système de réparation de l’ADN

FE
EP

 Au final : 1 mésappariement toutes les 108 à 1010 paires de bases

LO

15 | P a g e
 3ème ÉTAPE : TERMINAISON CHEZ UN PROCARYOTE
▪ Lorsque les deux fourches se heurtent à un complexe spécifique de
 Arrêt des terminaison de réplication
fourches o Région appelée « Ter » (Terminateur) est le site de fixation de
protéines « Tus » (Terminator utilization substance)

 Dissociation ▪ Chez E Coli, la partie entre les deux terminateurs n’est d’abord pas

R
FE
par une répliquée, les deux ADN circulaires sont ainsi associés, c’est une

EP
topoisomérase topoisomérase (gyrase) qui permettra de les dissocier (= décaténer)

O
KL
▪ L’ADN polymérase I complètera ensuite les parties non répliquées

e
nn
 Fin du

ua
▪ Puis, répartition des 2 chromosomes dans les deux futures cellules filles
processus

Lo
o Processus qui est couplé à la division cellulaire

de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
Schéma

KL
e
nn
ua
Lo
de
re

▪ A partir d’1 cellule mère → Obtention de 2 cellules filles identiques

ai
pl
em
Ex
R
FE
EP

3ème ÉTAPE : TERMINAISON CHEZ LES EUCARYOTES

O
KL
e
nn

▪ Lorsque deux fourches de réplication se rencontrent

ua

Survenue de la
▪ Ou lorsque le réplisome rencontre l’extrémité 5’-P d’un segment d’ADN
Lo

terminaison
de

o → Problème des télomères

re
ai

▪ Fourche de réplication active détruit sur son passage les complexes pré-
pl
em

Mécanisme RC valides ou tout complexe d’initiation non allumé

Ex

o Empêche la réplication en double d’un site

R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

16 | P a g e
 TERMINAISON CHEZ LES EUCARYOTES
TÉLOMÈRES
▪ Grec : telos = extrémité ⇒ télomères = partie située à l’extrémité des chromosomes
▪ Constitués d’une séquence d’ADN répétée en tandem, quelques centaines de fois, avant le 3’OH final
Télomères : ▪ Chez l’homme : suite de 6 nucléotides TTAGGG répétés n fois (en 3’) avec la complémentarité en 5’
définition

R
FE
EP
O
KL
▪ Au moment de la terminaison de la réplication

e
nn
de l’ADN des cellules eucaryotes, on pourrait

ua
Lo
avoir un problème à l’extrémité 5’ du brin

de
discontinu répliqué

re
« Problème » o À chaque réplication on pourrait avoir un

ai
pl
des télomères raccourcissement de cette extrémité 5’

em
Ex
R
▪ Explication : Lors de la synthèse du brin discontinu, il y aura un manque de synthèse au niveau 5’ de

FE
EP
ce brin. En effet, il n’y a plus la possibilité de synthétiser une amorce complémentaire au brin matrice

O
o ⇒ raccourcissement du brin discontinu à l’extrémité 5’ sur chaque molécule d’ADN

KL
e
▪ La synthèse du brin continu se poursuit jusqu’à l’extrémité 5’ du brin matrice

nn
ua
Dans les ▪ Sur le brin discontinu, il y aura un manque de quelques nucléotides
cellules Lo
de
o Le chromosome se raccourcit de plusieurs dizaines de nucléotides à chaque fois
re

somatiques - Ce raccourcissement est un phénomène réplicatif appelé sénescence réplicative, qui entraîne
ai
pl

la fin de la division des cellules et leur mort

em
Ex

▪ Phénomène de sénescence réplicative ne doit pas avoir lieu, sinon mort des cellules germinales et
R
FE

extinction des espèces

EP

Dans les o La télomérase (enzyme) permet d’allonger les chromosomes pour inhiber la mort cellulaire par
O

cellules
KL

senescence
e

germinales ▪ Phénomène aussi observé dans les cellules souches et follicules pileux
nn
ua

o Également valable pour les cellules cancéreuses dans lesquelles l’activation de la télomérase sera
Lo

essentielle à la multiplication de ces cellules et l’accumulation d’anomalie

de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

17 | P a g e
 TERMINAISON CHEZ LES EUCARYOTES : TÉLOMÈRES
TÉLOMÉRASE
▪ Partie protéique = ADN polymérase à activité réverse transcriptase
o Qui peut continuer la synthèse d’un ADN simple brin à partir d’une matrice ARN
Enzyme
▪ Un ARN matriciel constitué de 451 nucléotides dont l’extrémité 5’ terminale est 5’-
composée
CUAACCCUAACCC...
de 2 parties
o Il sert de modèle pour la télomérase en vue de la synthèse de quelques unités de la répétition

R
complémentaire TTAGGGTTAGGG : allongement du bras d’ADN

FE
EP
O
KL
e
nn
Schémas

ua
Lo
de
re
ai
pl
em
▪ Fixation de la télomérase par

Ex
complémentarité sur l’ADN

R
FE
▪ L’enzyme va synthétiser des unités

EP
allongeant le brin d’ADN

O
KL
o Puis va glisser le long du brin d’ADN

e
pour synthétiser de nouvelles unités et

nn
ua
allonger les télomères
▪ L’extrémité 3’ du brin modèle ainsi Lo
de

allongée peut servir à la pose d’une

re

Fonctionnement
ai
pl

nouvelle amorce
em

o L’extrémité 3’-OH de cette amorce

Ex

sert alors de point de départ pour

R
FE

l’ADN polymérase δ qui va synthétiser

EP

l’autre brin de manière

O
KL

complémentaire
e
nn

- Ainsi, l’extrémité 3’ des

ua

chromosomes est plus longue que

Lo

l’extrémité 5’
de
re
ai
pl
em
Ex
R

TERMINAISON CHEZ LES EUCARYOTES : TÉLOMÈRES

FE

RÔLES DES TÉLOMÈRES

EP
O

▪ L’extrémité 3’ plus longue s’enroule vers l’arrière pour réaliser une

KL

Structure des
e

boucle T
nn

télomères
ua

o Repliement grâce à des protéines spécialisées

Lo
de

▪ Maintenir l’intégrité des informations génétiques

re
ai
pl

▪ Protéger les ADN vis-à-vis des exo-nucléases (enzymes qui attaquent

em

Rôles de cette l’ADN)

Ex

structure
R

▪ Éviter les fusions des chromosomes au niveau des extrémités

FE

▪ Participent à l’organisation de la chromatine durant l’interphase par

EP
LO

interaction avec la membrane nucléaire

18 | P a g e
 TERMINAISON CHEZ LES EUCARYOTES : TÉLOMÈRES
TÉLOMÉRASE ET CANCER
▪ Télomérase active dans les cellules germinales (et
État normal
inactive dans les cellules somatiques)

▪ Télomérase peut être réactivée dans les cellules

somatiques tumorales, les rendant immortelles
o La mutation du gène codant pour la télomérase

R
FE
entraîne la réactivation de cette enzyme qui

EP
Si cancer jouerait un rôle prépondérant dans l’apparition

O
KL
et/ou le développement des cancers

e
nn
- → Lié à l’accumulation d’anomalies dans le

ua
génome

Lo
de
re
ai
RÉPLICATION DE L’ADN

pl
em
ASSEMBLAGE DES NUCLÉOSOMES

Ex
R
▪ Uniquement les eucaryotes car l’ADN est compacté

FE
Cellules o Une fois l’ADN synthétisé lors de la réplication, il faut donc

EP
O
concernées reconstituer les fibres de chromatine, par enroulement de

KL
l’ADN autour des protéines histones

e
nn
ua
Impact de la
Lo
▪ Nucléosomes existants sont déstabilisés par la fourche de
réplication sur les
de
réplication
nucléosomes
re
ai
pl

▪ Réassemblage du nucléosome après la fourche de réplication

em

o  2x {H3 et H4} néosynthétisées, sont acétylées et

Ex

déposées en tétramère sur l’ADN répliqué par le complexe

R
FE

protéique CAF-1 (Chromatin Assembly Factor-1)

EP

Après la
o  Deux dimères d’histones H2A/H2B sont ajoutés pour
O
KL

réplication
compléter le nucléosome
e
nn

o  Maturation : permet d’espacer régulièrement les

ua

nucléosomes et s’accompagne en général de la

Lo
de

désacétylation des histones nouvellement incorporées

re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O

Pas à apprendre
KL
e
nn

Résumé
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

19 | P a g e
 RÉPLICATION DE L’ADN
MÉTHYLATION (–CH3) ADN : MARQUE ÉPIGÉNÉTIQUE
Marques ▪ Mécanismes qui permettent de modifier de manière réversible, transmissible, et adaptative l’expression
épigénétique des gènes sans en changer la séquence nucléotidique
Principe de la ▪ Modification de certaines bases par l’addition d’un groupement méthyle CH3
méthylation o Marque qui est transmise lors de la réplication de l’ADN matrice vers l’ADN néosynthétisé

R
▪ Variables selon les espèces

FE
EP
o E.coli : sites de méthylation sur les GATC
Nucléotides

O
o Homme : méthylation de la cytosine en 5méthylcytosine dans les séquences CpG de l’ADN

KL
méthylés
- Ces séquences sont souvent spécifiques dans les promoteurs des gènes pour réguler l’expression

e
nn
des gènes

ua
Lo
▪ DNMTs (DNA methyl-transferase) : catalysent le

de
transfert d’un groupement méthyle d’une S-

re
ai
adénosylméthionine (SAM) sur des nucléotides

pl
em
▪ Chez l’homme, 4 DNMT :

Ex
Enzymes qui o Dnmt1 = une méthyl-transferase de maintien

R
FE
contribuent à - Elle permet la transmission de cette marque

EP
la méthylation épigénétique lors de la réplication

O
KL
o Dnmt2 : rôle encore incertain

e
nn
o Dnmt3A et 3b : permettent méthylation de novo

ua
- Ex : drogues qui agissent sur la méthylation de
promoteur de certains gènes Lo
de
re

▪ Caractère répressif de la méthylation de l’ADN lors de la transcription

ai
pl

Rôle dans la o Recrute des répresseurs de la transcription

em

transcription - Ex des HDAC qui désacétylent les histones

Ex
R

o Ou inhibe la fixation de facteurs de transcription

FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
O
KL
e
nn
ua
Lo
de
re
ai
pl
em
Ex
R
FE
EP
LO

20 | P a g e
 RÉPLICATION DE L’ADN
RÉPLICATION DE L’ADN MITOCHONDRIAL (ADNmt)
▪ Une centaine de mitochondries / cellules
o Environ 10 ADNmt / mitochondrie
Généralités
▪ Réplication de l’ADNmt :
sur l’ADN
o Indépendante de la réplication de l’ADN nucléaire
mitochondrial
o A lieu durant toute l’interphase du cycle cellulaire (G1, S et G2)

R
FE
o Unidirectionnelle, à partir de deux origines de réplication différentes sur les deux brins

EP
O
Débute à l’origine de réplication (ori) du brin H (= lourd)

KL
1.

e
o Formation d’une boucle dite de déplacement : la boucle D

nn
ua
- Réplication du brin H = flèche noire qui avance (ci-contre)

Lo
2. Synthèse par la polymérase gamma du nouveau brin

de
complémentaire du brin H → agrandissement de la boucle D

re
ai
pl
3. La boucle D atteint la séquence ori du brin L (= léger)

em
Étapes o Environ aux ⅔ du cercle

Ex
Lorsque la synthèse du nouveau brin L s’achève, la 1ère molécule

R
4.

FE
fille est libérée, tandis que se poursuit la synthèse du nouveau

EP
O
brin H (complémentaire de la matrice du brin L)

KL
5. La synthèse du nouveau brin H se poursuit jusqu’à la formation

e
nn
de la 2ème molécule fille d’ADN mitochondrial (6)

ua
Lo
de
▪ Bien que la réplication de l’ADN mitochondrial soit indépendante
re
ai

Évolution du de la réplication de l’ADN nucléaire, le nombre de molécules

pl
em

nombre d’ADN mitochondrial double à chaque cycle cellulaire

Ex

d’ADN o Ainsi, lors de la division de la cellule, on garde le même nombre

R
FE

mitochondrial d’ADN mitochondrial dans chaque cellule fille

EP

- = nombre d’ADN mitochondrial par cellule reste constant

O
KL
e
nn
ua

RÉPLICATION DE L’ADN
Lo

N’est pas à apprendre

de

selon l’enseignant RÉPLICATION : CIBLE THÉRAPEUTIQUE

re
ai

▪ Bien comprendre les mécanismes de la réplication permet de déterminer

pl
em

des cibles thérapeutiques contre des infections microbiologiques ou des

Ex

Principe cancers
R
FE

o Jouer sur la réplication, peut permettre d’inhiber la croissance tumorale

EP

/ la prolifération bactérienne ou d’entraîner la mort cellulaire

O
KL

▪ Via des agents liant les deux brins d’ADN : alkylants

e

Jouer sur la
nn

▪ Via des agents entraînant un changement de la structure locale du brin

ua

structure de
Lo

d'ADN : (intercalants
l’ADN
de

▪ Via des agents entraînant la rupture de l’ADN (sur 1 seul brin ou les 2)
re
ai

Actions ▪ Inhibition de la topoisomérase : arrêt de la réplication et mort cellulaire

pl
em

inhibitrices ▪ Inhibition des ADN polymérases

Ex
R

Action
FE

▪ En utilisant des analogues de nucléotides

sur les
EP

▪ Ou par inhibition de la synthèse de bases

LO

nucléotides

21 | P a g e