Mémoir 2016

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA

RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE MUSTAPHA STAMBOULI DE MASCARA

FACULTE DES SCIENCES DE LA NATURE ET DE LA VIE
DEPARTEMENT DE BIOLOGIE
Thèse présentée par :
Mme BOUZIDI Nebia

Pour l’obtention du diplôme de Doctorat
Spécialité: Sciences de la Vie
Etude des activités biologiques de l’huile essentielle de l’armoise

blanche « Artemisia herba alba Asso »
Soutenue le
Devant le jury
Mr. BELABID Lakhdar Professeur, Université de Mascara Président
Mr. MEDERBAL Khalladi Professeur, Université de Tiaret Rapporteur
Mr. MEDDAH Boumediène Professeur, Université de Mascara Examinateur
Mme TIR TOUIL Aicha Professeur, Université de Mascara Examinatrice
Mr. BENABADJI Noury Professeur, Université de Tlemcen Examinateur
Mr. BENMANSOUR Djamel MCA, Université de Tlemcen Examinateur
Année universitaire 2015/2016

Etude des activités biologiques de l’huile essentielle de l’armoise blanche
« Artemisia herba alba »
Résumé
L’armoise blanche « Artemisia herba alba» est une plante médicinale est aromatique
utilisée depuis longtemps dans la médicine traditionnelle algérienne. C’est l’armoise la plus
connue en Algérie, elle est très abondante sur les Hauts Plateaux.
Cette étude a pour objectif d’examiner les activités antioxydante et antimicrobienne de

l’huile essentielle extraite de la partie aérienne de l’armoise blanche récoltée dans la région de
Saida à l’interface Tell- steppe.
L’analyse qualitative par CG/SM de l’huile essentielle obtenue nous a permis

d’identifier trente et un composés correspondant à 99,61% de la surface des pics totaux. Les
composés majoritaires de cette huile sont le camphre (29,81%), le cyclopentadiene, 1,2,5,5-
tetramethyl (15.58%), le chrysanthenone (8.21%) et Eucalyptol (6.51%).
Sur le plan biologique, l’huile essentielle examinée s’est montré active contre les six
microorganismes testés, à savoir: Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus
(ATCC 25213), Candida albicans (ATCC 10231), Fusarium oxysporum f.sp. ciceris
(fusariose du pois chiches) (FOC), Fusarium solani (pourriture des racines de pois chiches)
(FS) et Globisporangium ultimum (fonte des semis et la pourriture des racines de Pin d’Alep)
(GU). En addition, cette huile possède une capacité antioxydante, mesurée par la méthode au
DPPH et le test FRAP, très importante.
Nous avons essayé d’exploiter ces résultats obtenus in vitro dans le domaine
alimentaire, premièrement par le suivi de l’état oxydatif de l’huile de tournesol en présence de
l’huile essentielle de l’armoise blanche, et deuxièmement, par l’appréciation de l’effet de cette
huile essentielle sur l’altération totale de la viande hachée.
Cette étude a montré que l’huile essentielle testée possède des activités antioxydantes
et antimicrobiennes intéressantes
Dans l’ensemble, les résultats obtenus sont prometteurs et ouvrent de nouvelles perspectives
dans le domaine des applications naturelles qui peuvent être une alternative valable pour
remplacer les produits chimiques.
En fin, si l’armoise blanche est considérée comme matière pleine de substances

médicinales et nutritionnelles (plante fourragère), elle est aussi une source de substances
(huile essentielle) qui possèdent des effets remarquables sur le plan biologique.
Mots clés: Activité antimicrobienne, Activité antioxydante, Activité biologique, Armoise

blanche, CG/SM, Huile essentielle
Study of the biological activities of the essential oil of white wormwood
« Artemisia herba alba »
Abstract
White wormwood « Artemisia herba alba » is a medicinal and aromatic plant uses for
long time in Algerian traditional medicine. It is the most type of wormwood popularly known
in Algeria. It is very abundant in highs plateau.
This study aims to examine the antioxidant and antimicrobial activities of essential oil
squeezed out from aerial parts of white wormwood gathered in Saida region in Tell-Steppe
interface.
The qualitative analysis by CG/SM of essential oil allowed us to identify 31

composites relevant for 99.61% the total peak areas. The main composites of this oil are
Champor (29.81%), cyclopentadian 1,2,2,5 tetra methyl (15.58%), Chrysanthenone (8.21%)
and eucalyptol (6.51%).
At the biological level, the essential oil analyzed proved active against six
microorganisms, which are: Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC
25213), Candida albicans (ATCC 10231), Fusarium oxysporum f.sp. ciceris (Chickpea
Fusarium Wilt) (FOC), Fusarium solani (Chickpea root-rot) (FS) and Globisporangium
ultimum (Aleppo pine damping off and root-rot diseases) (GU). In addition, this oil has a very
important antioxidant ability measured by DPPH method and FRAP test.
We have tried to make use of results reached in vitro in the food sector, First, in
following through the oxidative state of sunflower oil with essential oil of white wormwood,
secondly, by assessing the effect of this essential oil on total alteration of minced meat.
This study has to assert that the essential oil tested has valuable antioxidant and
antimicrobial activities
Finally, if the white wormwood is regarded as a material full with medicinal and
nutritional substances (fodder plant), it contains substances with important effects on the
biological level
Key words: Antimicrobial activity, Antioxidant activity, Biological activity, Essential oil,
CG/SM, White wormwood
‫دراسة الخصائص البيولوجية للزيث األساسي للشيح » ‪« Artemisia herba alba‬‬
‫ملخص‬
‫انش‪ٛ‬ح »‪َ ْٕ « Artemisia herba alba‬ثاخ يعطز ٔ طث‪ٚ ٙ‬سرخذو يُذ سيٍ طٕ‪ٚ‬م ف‪ ٙ‬انطة انجشائز٘‬
‫انرقه‪ٛ‬ذ٘‪ ْٕ .‬انُثاخ انًعزٔف جذا يٍ جُس ‪ Artemisia‬ف‪ ٙ‬انجشائز ٔ ‪ٚ‬رٕاجذ تكثزج ف‪ ٙ‬انٓضاب انعه‪ٛ‬ا‪.‬‬
‫ذٓذف ْذِ انذراسح إنٗ فحص انخصائص انًضادج نألكسذج ٔ انًضادج نهًكزٔتاخ نهش‪ٚ‬د انًسرخهص يٍ انجشء‬
‫انٕٓائ‪ ٙ‬نُثاخ انش‪ٛ‬ح انًقرطف يٍ انًُطقح انجُٕت‪ٛ‬ح نٕال‪ٚ‬ح سع‪ٛ‬ذج ٔانر‪ ٙ‬ذفصم ت‪ ٍٛ‬انرم ٔ يُطقح انسٕٓب‪.‬‬
‫انرحه‪ٛ‬م انك‪ٛ‬ف‪ ٙ‬تطز‪ٚ‬قح ‪ CG/SM‬نهش‪ٚ‬د األساس‪ ٙ‬انذ٘ ذى انحصٕل عه‪ ّٛ‬أظٓز ٔجٕد ٔاحذ ٔ ثالثٌٕ يزكة‬
‫انًٕافق ل ‪ % 99.61‬يٍ انًساحح انقًى انكه‪ٛ‬ح‪ .‬انًزكثاخ انًٕجٕدج تُسثح عان‪ٛ‬ح ْ‪ ٙ‬انكافٕر (‪ ,) %18.92‬انثُراد‪ٍٚ‬‬
‫‪ .2.1.1.1‬ي‪ٛ‬ث‪ٛ‬م (‪ ,)% 21.19‬كز‪ٚ‬شاَرٌَٕٕ (‪ٕٚ ٔ )% 9.12‬كان‪ٛ‬ثرٕل (‪.)% 1.12‬‬
‫عهٗ انًسرٕٖ انث‪ٕٛ‬نٕج‪ ,ٙ‬فاٌ انش‪ٚ‬د األساس‪ ٙ‬أتذٖ فعان‪ٛ‬ح كث‪ٛ‬زج ضذ انًكزٔتاخ انسرح انًخرثزج‪ْٙٔ ,‬‬
‫‪Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25213), Candida albicans‬‬
‫‪(ATCC 10231), Fusarium oxysporum f.sp. ciceris, Fusarium solani, Globisporangium‬‬
‫‪ . ultimum‬تاإلضافح إنٗ دنك فاٌ ْذا انش‪ٚ‬د نّ قذرج يضادج نألكسذج عان‪ٛ‬ح جذا ٔ انر‪ ٙ‬ذى ق‪ٛ‬اسٓا تطز‪ٚ‬قر‪ٔ DPPH ٙ‬‬
‫انقذرج االرجاع‪ٛ‬ح‪.‬‬
‫نقذ حأنُا اسرغالل ْذِ انُرائج انًرحصم عه‪ٓٛ‬ا يخثز‪ٚ‬ا ف‪ ٙ‬انصُاعاخ انغذائ‪ٛ‬ح‪ ،‬أٔال يٍ خالل يراتعح حانح ذأكسذ‬
‫س‪ٚ‬د عثاد انشًس يع ٔجٕد انش‪ٚ‬د األساس‪ ٙ‬نهش‪ٛ‬ح ‪ٔ ،‬ثاَ‪ٛ‬ا عٍ طز‪ٚ‬ق ذق‪ٛٛ‬ى ذأث‪ٛ‬ز ْذِ انش‪ٚ‬د األساس‪ٛ‬ح عهٗ انرحهم انكه‪ٙ‬‬
‫نهحى انًفزٔو‪ .‬نقذ أثثرد ْذِ انذراسح عهٗ أٌ انش‪ٚ‬د نّ قذرج يضادج نألكسذج ٔيضادج نهً‪ٛ‬كزٔتاخ عان‪ٛ‬ح جذا‪.‬‬
‫انُرائج انًرحصم عه‪ٓٛ‬ا ٔاعذج ٔذفرح يجاالخ جذ‪ٚ‬ذج ف‪ ٙ‬االسرعًاالخ انطث‪ٛ‬ع‪ٛ‬ح انر‪ًٚ ٙ‬كٍ أٌ ذكٌٕ تذ‪ٚ‬ال ج‪ٛ‬ذا‬
‫نهًٕاد انك‪ًٛٛ‬ائ‪ٛ‬ح‪.‬‬
‫ف‪ ٙ‬انُٓا‪ٚ‬ح‪ ،‬ال ‪ٚ‬عرثز ش‪ٛ‬ح »‪َ « Artemisia herba alba‬ثاخ طث‪ ٔ ٙ‬غذائ‪( ٙ‬انعهف) فقظ‪ ،‬تم ْٕ أ‪ٚ‬ضا يصذر‬
‫نهًٕاد انطث‪ٛ‬ع‪ٛ‬ح (انش‪ٚ‬د األساس‪ٔ ،)ٙ‬انر‪ ٙ‬نٓا ذأث‪ٛ‬ز كث‪ٛ‬ز عهٗ انًسرٕٖ انث‪ٕٛ‬نٕج‪.ٙ‬‬
‫الكلمات المفتاحية‪ :‬انش‪ٛ‬ح‪ ,‬يضاد األكسذج‪ ,‬يضاد نهًكزٔتاخ‪ ,‬س‪ٚ‬د أساس‪ ,ٙ‬انخصائص انث‪ٕٛ‬نٕج‪ٛ‬ح‪.CG/SM ,‬‬
Table des Matières
Résumé
Tables des matières ......................................................................................................................... i
Liste des figures ............................................................................................................................. ix
Liste des tableaux ......................................................................................................................... xiii
Liste des abréviations .................................................................................................................... xv
Introduction ................................................................................................................................... 1
Partie I
Etude Bibliographique
Chapitre 01: Les huiles essentielles
I.1. Les huiles essentielles............................................................................................................... 3
I.1.1. Généralités ............................................................................................................................ 3
I.1.1.1. Genèse de l’essence ............................................................................................................ 3
I.1.1.2. Plante aromatique ............................................................................................................... 4
I.1.1.3. Mode d’obtention des matières premières de la phytothérapie ................................................ 5
1. Poudres végétales ...................................................................................................................... 5
2. Distillation................................................................................................................................. 5
I.1.2. Définition des huiles essentielles ............................................................................................ 5
I.1.3. Localisation et lieu de synthèse des huiles essentielles ............................................................. 5
I.1.4. Propriétés physico-chimiques ................................................................................................. 6
I.1.5. Composition chimique ........................................................................................................... 7
I.1.6. Méthodes d’extraction ........................................................................................................... 8
I.1.6.1. La distillation ..................................................................................................................... 8
I.1.6.2. L’expression ....................................................................................................................... 8
i
I.1.7. Méthodes d’identification chimique des huiles essentielles ...................................................... 10
I.1.8. Facteurs de variabilité des huiles essentielles ......................................................................... 10
I.1.8.1. Facteurs extrinsèques ......................................................................................................... 10
a) L’origine géographique ............................................................................................................. 10
b) Les conditions environnementales .............................................................................................. 10
c) Les facteurs technologiques ....................................................................................................... 11
I.1.8.2. Facteurs intrinsèques.......................................................................................................... 11
a) L’origine botanique ................................................................................................................... 11
b) L’organe producteur ................................................................................................................. 11
c) Le chémotype ou spécificité biochimique .................................................................................... 11
d) Le stade végétatif ...................................................................................................................... 12
I.1.9. Propriétés biologiques et pharmacologiques ........................................................................... 12
I.1.9.1. Propriétés appétentes et digestives ...................................................................................... 13
I.1.9.2. Activités antimicrobienne ................................................................................................... 13
I.1.9.2.1. Généralités ..................................................................................................................... 13
I.1.9.2.2. Activité antifongique ....................................................................................................... 14
I.1.9.2.3. Activité antibactérienne ................................................................................................... 14
a) Mode d’action contre les bactéries .............................................................................................. 15
b) Analyse de l’action thérapeutique des huiles essentielles « aromatogramme » ............................... 15
I.1.9.3. Propriétés carminatives ..................................................................................................... 16
I.1.9.4. Propriétés antioxydantes ................................................................................................... 16
I.1.9.4.1. Méthode d’évaluation de l’activité antioxydante ............................................................... 17
I.1.9.5. autres propriétés ............................................................................................................... 17
I.1.10. condition de stockage et de conservation des huiles essentielles ............................................ 18
ii
I.1.11. Toxicité des huiles essentielles ........................................................................................... 18
Chapitre 02: Artemisia herba alba
I.2. Armoise blanche (Artemisia herba alba Asso) ........................................................................ 21
I.2.1. Généralité sur la famille des Asteraceae martinov (1820) « Compositae Giseke (1971) ............. 21
I.2.1.1. Caractères botaniques ....................................................................................................... 21
1. Appareil végétatif ...................................................................................................................... 21
2. Appareil producteur................................................................................................................... 22
I.2.1.2. Applications biologiques et pharmacologiques .................................................................... 22
I.2.2. armoises « genre Artemisia »................................................................................................. 23
I.2.2.1. Activités pharmacologiques ............................................................................................... 24
I.2.2.2. composition chimiques des huiles essentielles du genre Artemisia ....................................... 24
I.2.2.3. Armoise blanche « Artemisia herba alba Asso » .................................................................. 25
1. Appellation locales .................................................................................................................... 25
2. Description morphologique ........................................................................................................ 25
3. Nomenclature et taxonomie ........................................................................................................ 26
4. Description géographique .......................................................................................................... 27
5. Ecologie ................................................................................................................................... 27
6. Composition chimique ............................................................................................................... 27
7. Médecine traditionnelle ............................................................................................................. 27
8. L’huile essentielle d’Artemisia herba alba ................................................................................. 28
9. Toxicité .................................................................................................................................... 29
iii
Chapitre 03: Altération des aliments
I.3. Altération des aliments ............................................................................................................ 30
I.3.1. Dégradation chimiques des denrées alimentaires ............................................................. 30
1. Dégradation des matières grasses ............................................................................................... 30
1.1. Mécanisme de l’oxydation ....................................................................................................... 31
1.2. Conséquences des réactions d’oxydation .................................................................................. 31
1.3. Inhibition de la peroxydation de lipides.................................................................................... 32
1.3.1 Antioxydants ........................................................................................................................ 33
1.4. Evaluation analytique de la dégradation des matières grasses ................................................... 34
2. Dégradation des protides............................................................................................................ 35
2.1. Dégradation de natures chimiques ........................................................................................... 35
2.2. Dégradation de nature enzymatique ......................................................................................... 36
3. Dégradation des sucres .............................................................................................................. 37
3.1. Altérations causées par les hydrolases (polysaccharidases) ....................................................... 37
3.2. Brunissement non enzymatique « réaction de Maillard » ........................................................... 37
3.3. Dégradation thermique des sucres ........................................................................................... 37
I.3.2. Altération d’origine microbienne ........................................................................................... 37
1. Les différentes catégories de maladies liées à la consommation des aliments ................................. 38
2. Principales altérations alimentaires d’origine microbienne ........................................................... 38
2.1. Altération des viandes et des volailles ...................................................................................... 38
2.2. Altération des fruits et des légumes .......................................................................................... 39
I.3.3. Contamination par les produits chimiques .............................................................................. 40
I.3.4. Conservation des aliments ..................................................................................................... 41
I.3.4.1. Classification des techniques .............................................................................................. 42
iv
I.3.4.1.1. Procédés physiques de conservation ................................................................................. 42
1. Inhibition ou destruction des agents biologiques d’altérations des aliments (enzymes et

microorganismes) ......................................................................................................................... 42
2. Destruction ou élimination des microorganismes......................................................................... 42
3. Abaissement de l’activité de l’eau............................................................................................... 42
I.3.4.1.2. Procédés chimiques ......................................................................................................... 42
I.3.4.1.3. Contrôle de l’atmosphère................................................................................................. 42
I.3.4.2. Conservateurs alimentaires ................................................................................................. 42
I.3.4.2.1. La bioconservation .......................................................................................................... 43
Partie II
Matériels et méthodes
II. Matériels et méthodes ............................................................................................................... 44
II.1. Présentation et état actuel de la zone d’étude ............................................................................ 46
II.2. Matériel utilisés ..................................................................................................................... 47
II.2.1. Matériel végétal .................................................................................................................. 47
II.2.2. Les souches microbienne ..................................................................................................... 48
II.2.3. Les produits alimentaires ..................................................................................................... 49
1. L’huile de tournesol................................................................................................................... 49
2. La viande hachée ...................................................................................................................... 50
II.3. l’extraction de l’huile essentielle de l’Artemisia herba alba Asso par hydrodistillation ............... 50
II.4. Cinétique d’extraction et calcul du rendement en huile essentielle ............................................. 51
II.5. Analyse physique de l’huile essentielle .................................................................................... 52
II.5.1. Détermination de la densité relative ...................................................................................... 52
II.5.2. Détermination de l’indice de réfraction ................................................................................. 52
II.6. Analyse qualitative de l’huile essentielle de l’armoise blanche .................................................. 53
v
II.7. Etude des activités biologiques ............................................................................................... 53
II.7.1. Etude de l’activité antioxydante ........................................................................................... 53
II.7.1.1. Essai de piégeage du radical libre DPPH ............................................................................ 54
II.7.1.2. Méthode de réduction de fer « Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP) » ...................... 55
II.7.2. Etude de l’activité antimicrobienne....................................................................................... 57
II.7.2.1. Etude de l’activité antimicrobienne .................................................................................... 57
II.7.2.1.1. Préparation de la concentration de l’huile essentielle ........................................................ 57
II.7.2.1.2. Préparation des suspensions microbiennes ....................................................................... 58
II.7.2.1.3. L’antibiogramme ........................................................................................................... 58
II.7.2.1.3.1. Méthode de l’aromatogramme .............................................................................................59
II.7.2.1.4. Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI) ..............................................61
II.7.2.1.4.1. Méthode de microdilution (méthode standard) .............................................................. 61
II.7.2.2. Tests antifongiques ....................................................................................................................63
II.7.2.2.1. Test de la croissance mycélienne ............................................................................................63
II.7.2.2.2. Test de sporulation ..................................................................................................................64
II.7.2.2.3. Test de la germination conidienne ..........................................................................................65
II.7.3. Essai d’application de l’huile essentielle dans les produits alimentaires ......................................65
II.7.3.1. Evaluation de la stabilité oxydative de l’huile de tournesol ......................................................65
II.7.3.1.1. Préparation des échantillons de l’huile de tournesol ...............................................................66
II.7.3.1.2. Détermination de l’indice de peroxyde ...................................................................................66
II.7.3.1.3. Détermination de l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet ................................67
II.7.3.2.Evaluation de la stabilité microbienne de la viande hachée .......................................................68
1. Préparation des échantillons ................................................................................................................70
2. Appréciation sensorielle ......................................................................................................................70
3. Analyses microbiologiques .................................................................................................................70
vi
II.8. Analyses statistiques .............................................................................................................. 74
Partie III
Résultats et discussion
III. Résultats et discussion .......................................................................................................................76
III.1. Cinétique d’extraction et calcul du rendement en huile essentielle ................................................76
III.2. Evaluation de la qualité de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba ..........................................77
III.2.1. Caractéristiques organoleptiques .................................................................................................77
III.2.2. Caractéristiques physiques ..........................................................................................................78
III.2.2.1. Indice de réfraction ...................................................................................................................78
III.2.2.2. Densité ......................................................................................................................................78
III.2.3. Analyse chimique de l’huile essentielle ......................................................................................79
III.3. Activités biologiques ......................................................................................................................85
III.3.1. activité antioxydante ....................................................................................................................85
III.3.1.1. Détermination de l’activité antioxydante par des tests chimiques « in vitro » ........................85
1. Test du radical libre DPPH ..................................................................................................................85
2. Test du pouvoir réducteur ....................................................................................................................88
III.3.2. Activité antimicrobienne .............................................................................................................89
III.3.2.1. Résultats de l’antibiogramme .......................................................................................... 90
III.3.2.1.1. Evaluation de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’A. herba alba ................ 91
III.3.2.2. Détermination de la CMI ...........................................................................................................94
III.3.3. Activité antifongique ....................................................................................................................97
III.3.3.1. Résultats du test de la croissance mycélienne ...........................................................................97
III.3.3.2. Résultats du test de la germination conidienne ........................................................................101
III.3.3.3. Résultats du test de sporulation ................................................................................................103
vii
III.4. Evaluation de l’effet stabilisateur de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba dans les denrées
alimentaires ................................................................................................................................ 103
III.4.1. Evaluation de la stabilité oxydative de l’huile essentielle de tournesol .....................................103
III.4.1.1. Indice de peroxyde ..................................................................................................................104
III.4.1.2. Détermination de l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet ................................108
III.4.2. Etude de l’effet antimicrobien de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba dans la viande
hachée ......................................................................................................................................... 110
III.4.2.1. Identification d’Escherichia coli ..................................................................................... 115
Conclusion générale ...............................................................................................................................116
Références bibliographique .....................................................................................................................118
Annexes ...................................................................................................................................... 133
viii
LISTE DES FIGURES
Figure 1: Exemples d’aldéhydes et d’alcools monoterpéniques .............................................. .9
Figure 2: Artemisia .................................................................................................................. 23
Figure 3: Structures chimiques de quelques composés rencontrés dans les H.E. ..................... 25
Figure 4: Artemisia herba alba: (A) la plante au début de la saison de floraison, (B) la plante
à la fin de la saison de floraison ............................................................................................... 26
Figure 5: Structures chimiques de quelques composés rencontrés dans l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba ............................................................................................................. 28
Figure 6: Oxydation des lipides .............................................................................................. 32
Figure 7: Formules des tocophérols ........................................................................................ 33
Figure 8: Antioxydants utilisés couramment dans les produits alimentaires .......................... 34
Figure 9: Protocole expérimental ............................................................................................ 45
Figure 10: Localisation de la commune de Sidi Ahmed dans la wilaya de Saida .................. 46
Figure 11: Artemisia herba alba Asso recueillie de la région de Sidi Ahmed (wilaya de
Saida) ........................................................................................................................................ 47
Figure 12: Réaction du DPPH avec un antioxydant ................................................................ 54
Figure 13: Schéma récapitulatif du test au DPPH ................................................................... 57
Figure 14: Réalisation pratique de l’antibiogramme par diffusion ......................................... 59
Figure 15: Schéma simplifié de la méthode de microdilution ................................................ 63
Figure 16: Schéma récapitulatif de la méthodologie expérimentale suivie pour l’étude de

l’effet de l’HE sur la stabilité microbiologique de la viande hachée ....................................... 69
Figure 17: schéma récapitulatif des étapes de l’analyse microbiologique de la viande hachée
additionnée de l’HE de l’armoise blanche ................................................................................ 75
Figure 18: Cinétique d’extraction de l’huile essentielle d’A herba alba par hydrodistillation 76
Figure 19: Les principaux composants identifiés dans l’huile essentielle d’Artemisia herba
alba analysée par la technique CG/SM sur colonne capillaire HP-5MS ................................. 79
ix
Figure 20: Distribution en fonction du pourcentage des différents composants existants dans
l’HE d’A. herba alba ............................................................................................................... 81
Figure 21: Spectre de Masse du 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl de l’huile essentielle

d’A. herba alba ......................................................................................................................... 83
Figure 22: Spectre de Masse d'eucalyptol de l’huile essentielle d’A. herba alba ................... 84
Figure 23: Spectre de Masse du camphre de l’huile essentielle d’A. herba alba ................... 84
Figure 24: Variation du pourcentage d’inhibition du radical DPPH en fonction de la

concentration de l’huile essentielle et du BHT ........................................................................ 86
Figure 25: Pouvoir réducteur de l’huile essentielle (A) et de l’acide ascorbique (B) par la
méthode de FRAP ..................................................................................................................... 89
Figure 26: Représentation graphique des diamètres des zones d’inhibition de E. coli et S.
aureus vis-à-vis de différents antibiotiques (ATM30 : aztreonam ; CT10: colistine ; GN :
gentamicine ; P10 : pénicilline) ................................................................................................ 90
Figure 27: représentation graphique des diamètres d’inhibition en mm des souches testées (1:
E coli ; 2: S. aureus ; 3: C. albicans) en présence de l’huile essentielle de l’armoise blanche 91
Figure 28: Effet de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba sur les trois souches testées ... 92
Figure 29: Effet de l’huile essentielle de l’armoise blanche sur la croissance de C. albicans . 95
Figure 30: Effet de l’huile essentielle de l’armoise blanche sur la croissance de S. aureus .... 95
Figure 31: Effet de l’huile essentielle de l’armoise blanche sur la croissance de E coli .......... 96
Figure 32: Le taux d’inhibition de la croissance mycélienne de Fusarium oxysporum f.sp.

ciceris, Fusarium solani et Globisporangium ultimum en fonction de la dose de l’huile
essentielle ................................................................................................................................. 98
Figure 33: Evolution de l’indice de peroxyde (en meq d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol
chauffée en présence de différentes doses de l’huile essentielle ............................................. 105
Figure 34: Evolution de l’indice de peroxyde (en meq d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol
chauffée en présence de différentes doses de α tocophérol. ...................................................... 106
Figure 35: Evolution des diènes conjugués dans les échantillons de l’huile de tournesol
additionnés de différentes doses de l’huile essentielle et de l’α tocophérol.............................. 109
Figure 36: Evolution des triènes conjugués dans les échantillons de l’huile de tournesol
additionnés de différentes doses de l’huile essentielle et de l’α tocophérol.............................. 110
Figure 37: Les trois formes chimiques de la myoglobine ....................................................... 111
x
Figure 38: Cinétique de la croissance de E coli en présence de l’huile essentielle de l’armoise
blanche .................................................................................................................................... 138
Figure 39: Cinétique de la croissance de S. aureus en présence de l’huile essentielle de

l’armoise blanche .................................................................................................................... 139
Figure 40: Cinétique de la croissance de C. albicans en présence de l’huile essentielle de

l’armoise blanche .................................................................................................................... 139
LISTE DES PHOTOS
Photo 1: Etat actuel de la zone d’étude ................................................................................... 47
Photo 2: Montage d’hydrodistillation employé pour l’extraction de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba ............................................................................................................. 51
Photo 3: Sensibilité des souches bactérienne vis-à-vis des antibiotiques testés: (A) S. aureus ;
(B) E. coli ................................................................................................................................ 91
Photo 4: observation microscopique de la germination conidienne de Fusarium solani
X 40 ........................................................................................................................................ 102
Photo 5: observation microscopique de la germination conidienne de Fusarium oxysporum

f.sp. ciceris X 40 ................................................................................................................... 102
Photo 6: observation microscopique de la germination conidienne de Globisporangium

ultimum X 40 .......................................................................................................................... 102
Photo 7: Effet de l’huile essentielle sur l’aspect visuelle des échantillons de viande hachée (a:
témoin, b: Viande + 5µL HE ; c: Viande + 20µL HE) ............................................................ 112
xi
LISTE DES Planches
Planche 1: L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de Fusarium
oxysporum f.sp. ciceris après 7 jours d’incubation .................................................................. 99
Planche 2: L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de Fusarium solani
après 7 jours d’incubation ....................................................................................................... 100
Planche 3: L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de

Globisporangium ultimum après 7 jours d’incubation ............................................................ 100
Planche 4: Symptômes de flétrissement vasculaire aux champs ............................................. 137
Planche 5: Photos des essais préliminaires de l’activité antifongique de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba contre : A) Fusarium sp, B) Globisporangium ultimum ................... 138
Planche 6: Aspect macroscopique des colonies apparues sur les milieux de culture non
sélectif .................................................................................................................................... 141
Planche 7: Aspect macroscopique des colonies apparues sur les milieux sélectifs ..... 142
xii
LISTE DES TABLEAUX
Tableau 1: Huiles essentielles et familles biochimiques ......................................................... 20
Tableau 2: Applications biologiques et pharmacologiques de quelques espèces de la famille

des Asteraceae en fonction de leurs principes actifs ................................................................ 22
Tableau 3: Formation des amines biogènes à partir des acides aminés correspondants ......... 36
Tableau 4: Les principaux microorganismes pathogènes d’origine alimentaire ..................... 40
Tableau 5: Quelques principes de conservation ...................................................................... 41
Tableau 6: Description et pouvoir pathogène des souches testées .......................................... 49
Tableau 7: antibiotiques d’antibiogramme .............................................................................. 60
Tableau 8: Les principaux composés identifiés par CPG/SM ................................................ 80
Tableau 9: Les principaux composés de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba de

différents pays .......................................................................................................................... 82
Tableau 10: Zone d’inhibition et concentration minimale inhibitrice de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba............................................................................................................... 96
Tableau 11: Examen macroscopie des colonies ayant poussées sur les différents milieux de
culture ...................................................................................................................................... 114
Tableau 12: Résultats d’identification de la souche E coli isolée sur milieu Hecktoen ...... 115
Tableau 13: Effet des doses sur la croissance mycéliennes de la croissance mycélienne de F.
solani ......................................................................................................................................... 143
oxysporum ................................................................................................................................. 143
Tableau 15: Effet des doses sur la croissance mycéliennes de la croissance mycélienne de G.
ultimum ...................................................................................................................................... 144
Tableau 16: Effet des doses sur la germination de F. solani, F. oxysporum, G. ultimum ...... 144
Tableau 17: Effet des doses sur la sporulation de F. solani..................................................... 145
Tableau 18: Effet des doses sur la sporulation de F. oxysporum ............................................. 145
Tableau 19: Effet des doses sur la sporulation de G. ultimum ................................................. 145
xiii
Tableau 20: Résultats de la sporulation de F.solani, F. oxysporum et G. ultimum ................ 147
Tableau 21: Résultats de la germination de F. solani, F. oxysporum et G. ultimum ............... 147
Tableau 22: Résultats de la croissance mycélienne de mycélienne de F. solani, F. oxysporum

et G. ultimum ............................................................................................................................. 148
Tableau 23: pourcentage d’inhibition de l’H. E. d’A. herba alba de la croissance mycélienne,
la germination conidienne et la sporulation de F. solanée, F. oxysporum et G. ultimum ........ 149
Tableau 24 : Analyse statistique des résultats du test au DPPH .............................................. 150
Tableau 25: Analyse statistique des résultats de l’évolution de l’indice de peroxyde (en meq
d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol chauffée en présence de différentes doses de l’huile
essentielle .................................................................................................................................. 150
Tableau 26: Analyse statistique des résultats de l’évolution de l’indice de peroxyde (en meq
d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol chauffée en présence de différentes doses de tocophérol 150
Tableau 27: Analyse statistique des résultats de l’évolution des diènes conjugués dans l’huile
de tournesol chauffée en présence de différentes doses de l’huile essentielle .......................... 151
Tableau 28: Analyse statistique des résultats de l’évolution des triènes conjugués dans l’huile
de tournesol chauffée en présence de différentes doses de l’huile essentielle .......................... 151
xiv
Liste des abréviations
AFNOR: Association Française de Normalisation
Afssaps: Agence Française de Sécurité Sanitaire des Produits de Santé
ATCC: American Type Culture Collection
BHA: butylhydroxyanisol
BHT: butylhydroxytoluène
CPG/ SM: Chromatographie en Phase Gazeuse/ Spectrométrie de Masse (CPG/SM)
CE50: Concentration Efficace (mg/ml)
CMI: Concentration Minimale Inhibitrice
DMSO: Diméthylsulfoxyde
DPPH: 2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl
f. sp: forme spéciale
H.E.: Huile essentielle
ISO: International Organization for Standardization
OMS: Organisation Mondiale de la Santé
UFC: Unité Formant Colonie
UFT: Unité Formant Trouble
xv
Introduction générale
De tout temps l’homme a cherché à lutter contre l’altération des denrées alimentaires
de base, pour des raisons vitales d’abord, mais aussi psychologiques. Ces altérations
surviennent depuis la production des denrées jusqu’à leur consommation et elles résultent des
actions physiques, chimiques ou biologiques.
Pour lutter contre ces facteurs d’altérations, plusieurs techniques de conservation sont
utilisées telles que la chaleur (pasteurisation, stérilisation), le froid (réfrigération,
congélation), le conditionnement sous atmosphère modifiée, ou par l’ajout d’un agent
conservateur (antioxydant, antimicrobien, pesticide), etc.
Les antioxydants inhibent la peroxydation des lipides et d’autres processus radicalaires

libres; par conséquent, ils sont en mesure de protéger le corps humain de plusieurs maladies
attribuées aux réactions des radicaux tels que l’arthrite, le cancer, la maladie d’alzheimer et le
vieillissement.
Les antioxydants sont également un ingrédient en plus important dans la

transformation des aliments. Leur rôle essentiel est d’inhiber le développement de
rancissement oxydatif dans les produits alimentaires à base de graisse, en particulier la viande
et les aliments frits. Les antioxydants synthétiques tels que le butylhydroxyanisol (BHA) et le
butylhydroxytoluène (BHT) sont largement utilisés dans l’industrie alimentaire en raison de
leurs capacités à prévenir les détériorations des aliments et de prolonger leur durée de
conservation, mais bons nombres d’entres eux étant considérés comme néfastes pour la santé
et présentent des risques de cancérogénicité [Chang et al., 2007; Akrout et al., 2010].
Ainsi, les maladies des plantes sont principalement contrôlées par des pesticides
chimiques et dans certains cas par des pratiques culturales. Cependant, l’utilisation massive de
produits chimiques dans l’agriculture a été un sujet de préoccupation public en raison des
effets indésirables de certains produits chimiques sur les organismes non cibles et leurs effets
cancérigènes et nocifs sur l’environnement [Cook et Baker, 1983].
Face aux risques liés aux additifs chimiques et résidus des produits de synthèse en
termes de santé publique ainsi qu’aux problèmes d’acquisition de résistance des
microorganismes et l’accroissement vertigineux de la demande d’aliments contenant moins de
1
produits chimiques de synthèse, la recherche accrue d’agents naturels remplaçants ces additifs
pour améliorer la sécurité alimentaire et gérer les maladies des plantes est l’une des priorités
des chercheurs.
Une grande partie du territoire algérien se trouve en zone steppique. Cette zone se
caractérise par une diversité biologique appréciable. Mais Malheureusement, durant ces
dernières décennies, les écosystèmes steppiques connaissent une forte tendance à la
dégradation qui se traduit par la réduction du potentiel biologique et la rupture des équilibres
écologiques et socioéconomiques [Mederbal et al., 2010].
Le genre Artemisia comprend quelque 400 espèces, réparties sur les cinq continents.
En Algérie, il est présenté par dix espèces dont certaines sont rares et d’autres très répandues
[Abdelguerfi, 2003].
L’Artemisia herba alba, ou encore l’armoise blanche désignée en arabe sous le nom de
« chih » de la famille des Asteraceae, pousse généralement en touffes de tailles réduite. C'est
une plante à différents usages. Elle se caractérise par sa richesse en huile essentielle de
composition différente qui a conduit à la définition de plusieurs chémotypes; sa forte valeur
fourragère et son rôle écologique très important contre l’érosion et la désertification.
A travers notre étude, nous avons essayé d’étudier la composition chimique de l’huile
essentielle d’A. herba alba obtenue par hydrodistillation, et aussi l’évaluation de ses effets
antioxydant et antimicrobien contre six microorganismes: Escherichia coli, Staphylococcus
aureus, Candida albicans, Fusarium oxysporum f.sp. ciceris (fusariose du pois chiches),
Fusarium solani (pourriture des racines de pois chiches) et Globisporangium ultimum (fonte
des semis et la pourriture des racines de Pin d’Alep).
Notre but essentiel était d’exploiter une partie des immenses vertus et potentialités de
l’armoise blanche et son huile essentielle dans le contrôle biologique des plantes contre les
microorganismes pathogènes et savoir la possibilité de son utilisation comme agents de
stabilisation et de conservation en agroalimentaire (antioxydant et antimicrobien).
2
Partie I: Etude bibliographique Chapit re 01: Les huiles essentielles
I.1. Les huiles essentielles
I.1.1. Généralités
Le terme « huile essentielle » a été inventé au 16ème siècle par le médecin suisse
Parascelsus vonhhenheim afin de désigner le composant actif d’un remède naturel. Il existe
aujourd’hui approximativement 3000 huiles essentielles, dont environ 300 sont réellement
commercialisées, destinées principalement à l’industrie des arômes et des parfums [El-
Kalamouni, 2010].
Les huiles essentielles sont des mélanges de composés lipophiles, volatils et souvent
liquides, synthétisés et stockées dans des structures cellulaires spécialisées (cellules à huile
essentielle, poils sécréteurs, canaux sécréteurs). Ces huiles sont responsables de l’odeur de la
plante et vont servir de signaux chimiques permettant à la plante de contrôler ou réguler son
environnement et assurer leur ultime défense [Deans et Waterman, 1993; Rahini 2002;
Tenscher et al., 2005].
L’utilisation par l’homme des plantes aromatiques et donc des huiles essentielles est
très ancienne et assez universelle ; on s’en sert traditionnellement pour se soigner, se
détendre, aromatiser la nourriture et conserver les aliments.
L’utilisation des huiles essentielles exige une connaissance parfaite de leur

composition chimique. En effet, chacune d’entre elles renferme des molécules chimiques qui
peuvent se révéler toxiques, comme les phénols (hépatotoxiques et dermocaustiques), les
coumarines (risque d’hémorragie), les thuyones (neurotoxiques) les pinocamphones
(épileptisantes) ou les furocoumarines (photosensibilisantes). Les huiles essentielles résultent
d’une distillation et sont donc des substances très concentrées dont l’action est supérieure aux
autres formes phytothérapiques (tisanes, gélules, eaux florales,…). Une huile essentielle
contient en moyenne 75 molécules actives différentes, tandis que, dans le médicament de
synthèse, on ne peut évaluer les interactions que de trois molécules [Zahalka, 2010].
I.1.1.1. Genèse de l’essence
Les substances chimiques qui constituent les divers tissus végétaux et qui
interviennent dans leurs métabolismes appartiennent à deux catégories.
3
 La première catégorie comprend des molécules relativement simples, qui sont des
substances minérales (eau, métaux).
 La seconde catégorie comporte des substances organiques constituées de molécules
complexes, plus ou moins volumineuses. Dans cette catégorie, trois familles sont
particulièrement importantes, ce sont les glucides (sucres), les lipides (graisses) et les
protides.
En complément aux constituants de base de la plante, il existe de nombreuses autres

substances, dont certaines interviennent directement dans le métabolisme de la plante et
contribuent à donner à chaque individu (quelquefois à des genres entiers) son caractère
spécifique. Ainsi les huiles essentielles (essences volatiles) et les résines (gouttelettes
colloïdales) qui sont en réalité des produits résiduels ou produits d’excrétion (résultant d’un
mécanisme complexe) s’expriment par une odeur ou un arome et donne à la plante son cachet
particulier [Baba Aissa, 2000].
Les essences végétales sont élaborées par une catégorie de plantes que l’on appelle
plantes aromatiques au sein de cellules sécrétrices.
I.1.1.2. Plante aromatique
La plante aromatique est une plante qui contient des molécules aromatiques volatiles
ou odorantes dans un ou plusieurs organes producteurs que sont les feuilles, les fleurs, les
fruits, les graines, l’écorce et les racines.
Les plantes aromatiques capables de synthétiser une essence sont peu nombreuses.
Parmi les 800 000 espèces végétales, seules 10% en sont capables. Parmi les familles
aromatiques les plus représentatives ;
 Les Abiétacées (sapins, cèdres, pins),

 Les Apiacées (coriandre, cumins, anis vert,..),
 Les Astéracées (tanaisie, inule, armoise,…),
 Les Cupressacées (cyprès, genévrier, thuya,…),
 Les Ericacées (gaulthérie, ledon),
 Les Lamiacées (lavande, thyms, romarins, menthes marjolaines, mélisses, sauges,…),
 Les Lauraceés (cannelles, lauriers, camphriers,…),
 Les Myrtacées (eucalyptus, giroflier, myrte,….),
4
 Les Poacées (citronnelles, verveines, vétivers,..),

 Les Rutacées (citron, pamplemousse, mandarine,…) [Zahalka, 2010].
I.1.1.3. Mode d’obtention des matières premières de la phytothérapie
1. Poudres végétales
Les poudres végétales apportent une grande souplesse à l’utilisation thérapeutique des
plantes, permettant leur incorporation facile à toutes les formes galéniques sèches (gélules,
cachet, etc.); elles ont également une grande importance en tant que matière première pour la
préparation d’autres formes galéniques.
Après élimination des corps étrangers et des parties inertes et dessiccation soigneuse à
température peu élevée (de 25°C pour les plantes à essences à 40-45°C pour les autres), les
drogues sont réduites en poudre [Duraffourd et lapraz, 2002].
2. Distillation
La distillation est une opération pharmaceutique qui a pour but de séparer les principes
volatils de ceux qui ne le sont pas, ou le sont moins qu’eux [Duraffourd et lapraz, 2002].
I.1.2. Définition des huiles essentielles
La définition retenue, très proche de celle de la norme ISO 9235, est celle adoptée par
la commission de la pharmacopée européenne : « Produit odorant, généralement de
composition complexe, obtenu à partir d’une matière première végétale botaniquement
définie, soit par entrainement à la vapeur d’eau, soit par distillation sèche, soit par un procédé
mécanique approprié sans chauffage. L’huile essentielle est le plus souvent séparée de la
phase aqueuse par un procédé physique n’entraînant pas de changement significatif de sa
composition ». [Afnor, 1986 et Afssaps, 2008]
I.1.3. Localisation et lieu de synthèse des huiles essentielles
Toutes les parties des plantes aromatiques peuvent contenir de l’huile essentielle:
 les fleurs: oranger, rose, lavande ; le bouton floral (girofle) ou les bractées (ylang-ylang) ;
 les feuilles le plus souvent: eucalyptus, menthe, thym, laurier, sauge, aiguilles de pin
 les organes souterrains: racines, rhizomes (gingembre) ;
 les fruits: fenouil, anis, épicarpes des Citrus ;
5
 les graines: noix de muscade, coriandre ;

 le bois et les écorces: cannelle, bois de rose [El Kalamouni, 2010].
Les huiles essentielles sont produites dans le cytoplasme des cellules sécrétrices et
s’accumulent en général dans des cellules glandulaires spécialisées, situées en surface de la
cellule et recouvertes d’une cuticule. Elles sont alors soit stockées dans une cellule
transformée en cellule à essence, ou dans des poils glandulaires, des poches sécrétrices, des
canaux sécréteurs [Rahili, 2002; Tenscher, 2005].
 les poils sécréteurs épidermiques rencontrés souvent chez les Lamiacées. Ils produisent
les essences dites superficielles.
 les organes sécréteurs sous-cutanés comprenant des cellules et des poches sécrétrices qui
sont généralement disséminées au sein du tissu végétal chez les Myrtacées, ainsi que les
canaux sécréteurs chez les Apiacées [El Kalamouni, 2010].
Sur le site de stockage, les gouttelettes d’huile essentielle sont entourées de

membranes spéciales constituées d’esters d’acides gras hydroxylés hautement polymérisés,
associés à des groupements peroxydes. En raison de leur caractère lipophile et donc de leur
perméabilité extrêmement réduite vis-à-vis des gaz, ces membranes limitent fortement
l’évaporation des huiles essentielles ainsi que leur oxydation à l’air. On comprend ainsi
pourquoi les huiles essentielles des plantes aromatiques conservées entières, c’est-à-dire non
incisées, persistent sensiblement plus longtemps que lorsque les plantes sont pulvérisées et
dont les parois protectrices ont été détruites [Tenscher, 2005].
I.1.4. Propriétés physico-chimiques
Autrefois, les essences étaient appréciées pour leurs propriétés organoleptiques (odeur,
goût, couleur et aspect) vu l’usage qui en était fait comme matières aromatisantes et
parfumantes.
Aujourd’hui, les propriétés physico-chimiques sont exigées pour leurs évaluations

commerciales. Malgré leurs différences de constitution, les huiles essentielles possèdent en
commun un certain nombre de propriétés physiques :
 elles sont généralement liquides à température ordinaire;

 elles sont volatiles et entraînables à la vapeur d’eau;
6
 elles sont généralement incolores ou jaune pâle lorsqu’elles viennent d’être

préparées. Cependant, on rencontre quelques-unes d’entres elles qui sont
colorées comme l’essence de cannelle, d’absinthe et de camomille qui sont
respectivement colorées en rouge, vert et bleu;
 elles sont plus légères que l’eau. Il existe toutefois des huiles plus lourdes
comme par exemple les essences de cannelle et de girofle. Leur densité varie
de 0.8 à 1.08, leur température d’ébullition de 160°C à 240°C;
 elles sont peu solubles dans l’eau mais lui communiquent leur odeur;
 elles sont solubles dans la plupart des solvants organiques et dans les huiles
fixes;
 elles ont des indices de réfraction élevés et elles sont le plus souvent
optiquement actives car elles contiennent des molécules asymétriques;
 elles se caractérisent par des indices chimiques qui permettent d’évaluer
approximativement la quantité de fonctions chimiques (acide, ester, alcool…)
présente dans les composants de l’essence [Bruneton, 1987 in Rahili, 2002 ;
El Abed et Kambouche, 2003, Catier et Roux, 2007].
I.1.5. Composition chimique
La composition chimique des huiles essentielles est généralement très complexe d’un
double point de vue, à la fois par le nombre élevé de constituants présents et surtout par la
diversité considérable de leurs structures. En effet, elles comprennent deux classes de
composés caractérisés par des origines biogénétiques bien distinctes.
Le groupe des terpénoïdes, d’une part et le groupe des composés aromatiques dérivés du
phénylpropane d’autre part. IL existe également d’autres corps qui entrent en faible
proportion dans la constitution de certaines huiles essentielles (acides organiques, esters et
autres…) [Rahili, 2002 ; El Abed et Kambouche, 2003].
Jusqu’à présent, plus de 3000 constituants ont été isolés à partir des huiles essentielles.
La plupart d’entre eux sont des carbures monoterpéniques acycliques ou cycliques, des
aldéhydes et des alcools monoterpéniques (Figure 1), des cétones et des époxydes
monoterpéniques. On rencontre également des hydrocarbures sesquiterpéniques, des alcools
sesquiterpéniques, des cétones et des époxydes sesquiterpéniques. Parallèlement à ces
terpènes qui se différencient par la présence de doubles liaisons et par leurs diverses
7
fonctions, des dérivés du phénylpropane peuvent également exister ; ils peuvent être
accompagnés de leurs produits de dégradation comme par exemple des dérivés hydroxylés ou
méthylés du benzaldéhyde ou de l’alcool benzylique.
Une partie des composants alcooliques et phénoliques peut être estérifiée avec des
acides carboxyliques. Bien que généralement ces esters ne soient présents qu’en faible
quantité, ce sont souvent eux qui déterminent la finesse caractéristique de l’odeur d’une huile
essentielle. Les dérivés aliphatiques non ramifiés sont souvent sensibles à l’oxygène de l’air et
leurs dérivés oxygénés, particulièrement les aldéhydes ou les cétones mais aussi les alcools,
les époxydes, les esters d’acides carboxyliques, peuvent également être présents dans les
huiles essentielles.
Les composés volatils contenant du soufre et/ou de l’azote, comme ceux présents dans le
poireau ou la moutarde, sont parfois assimilés à des huiles essentielles.
La composition d’une huile essentielle est en général très complexe. Les méthodes
analytiques modernes rendent possibles, la détection, l’identification et la quantification de
plus d’une centaine de constituants pour une même huile essentielle [Tenscher et al., 2005].
I.1.6. Méthodes d’extraction
I.1.6.1. La distillation
C’est le procédé le plus ancien et le mieux adapté pour extraire les essences des
végétaux aromatiques. La méthode est basée sur la distillation des composés volatils et de
l’eau simultanément à une température inférieure à 100°C sous pression atmosphérique
normale. En conséquence, les produits aromatiques sont entraînés par la vapeur d’eau sans
subir d’altérations majeures. Il existe précisément trois différents procédés utilisant ce
principe : l’hydrodistillation, l’hydro diffusion et l’entrainement à la vapeur d’eau [Piochon,
2008].
I.1.6.2. L’expression
Cette technique s’adresse essentiellement aux agrumes (citron, pamplemousse,

oranger,…). Elle consiste à presser mécaniquement les zestes de ces agrumes pour extraire
des poches sécrétrices une substance appelée : essence. L’expression des citrons, par exemple,
s’effectue à froid : les zestes sont râpés sous jet d’eau, l’émulsion eau et essence est séparée
8
par centrifugation ; on parle ainsi d’essence de citron et non d’huile essentielle de citron car
les agrumes ne peuvent être distillés. La conservation de cette essence s’effectue au frais, car
la chaleur déstabiliserait celle-ci [Zahalka, 2010].
Figure 1: Exemples d’aldéhydes et d’alcools monoterpéniques

[Tenscher et al., 2005]
9
I.1.7. Méthodes d’identification chimiques des huiles essentielles
Une fois l’extrait le plus représentatif obtenu, l’analyse permet d’identifier et de

quantifier les produits qui le composent.
La séparation des composés s’effectue en général par Chromatographie en Phase

Gazeuse (CPG) notamment pour les composés volatils (mon- et sesquiterpènes) et par
chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) pour les composés pas ou peu
volatiles.
La méthode couramment utilisée pour l’identification des huiles essentielles est le

couplage Chromatographie en Phase Gazeuse/ Spectrométrie de Masse (CPG/SM). Il permet
de connaître, dans la grande majorité des cas, la masse moléculaire d’un composé et d’obtenir
des informations structurales relatives à une molécule à partir de sa fragmentation [Harkati,
2011].
I.1.8. Facteurs de variabilité des huiles essentielles
Les huiles essentielles obtenues de différentes ou de même espèce végétale peuvent

varier quantitativement et/ou qualitativement. Cette variation peut être due aux différents
facteurs suivants:
I.1.8.1. Facteurs extrinsèques
a) L’origine géographique
Le nom du pays ou d’une région apporte des précisions intéressantes sur le biotope de
la plante aromatique et caractérisera sa composition biochimique particulière [Zahalka,
2010].
b) les conditions environnementales
Selon les conditions environnementales, le profil chimique peut également être

modifié : la qualité et la quantité de lumière, la température, l’indice de pluviométrie, les
facteurs édaphiques et le stress (par exemple la contamination par des microorganismes
conduisant à la synthèse de phytoalexines) sont autant de facteurs influençant la composition
d’une plante donnée [Tenscher et al., 2005].
10
c) facteurs technologiques
 Le mode culture
Le mode de culture de la plante induit des variations dans la finesse de l’arôme, la

puissance d’action et la pureté [Zahalka, 2010].
 Conservation du matériel végétal
La période de récolte, traitement après récolte ainsi que la durée de stockage du

matériel végétal peuvent entraîner de profondes modifications sur l’essence [El Abed et
Kambouche, 2003 ; Tenscher et al., 2005].
 Le mode d’extraction
Le mode d’extraction d’une huile essentielle marque son empreinte la composition

chimique de celle-ci [Burt, 2004].
I.1.8.2. Facteurs intrinsèques
a) L’origine botanique
L’aromathérapie scientifique exige une connaissance parfaite de la classification

botanique des plantes aromatiques. Il faut connaître exactement l’espèce botanique (en latin)
de la plante utilisée pour la distillation. Ceci permet avec cette dénomination scientifique
internationale d’éviter les confusions et de savoir avec précision la plante à distiller [Zahalka,
2010].
b) L’organe producteur
C’est la partie utilisée du végétal pour la distillation (ou l’expression). La composition

chimique d’une plante varie selon la nature de ces organes, car la biosynthèse y est nettement
différenciée [Tenscher et al., 2005].
c) Le chémotypes ou spécificité biochimique
Les chémotypes (chimiotypes) ou les races chimiques existent chez de nombreuses

plantes aromatiques et fournissent des essences différentes par leur composition [El Abed et
Kambouche, 2003].
11
La composition chimique d’une plante est avant tout déterminée par sa biosynthèse et
son profil génétique. Ainsi, pour une même espèce, de nombreux chémotypes aux profils
chimiques différents peuvent exister. C’est le cas bien connu du thym dont l’huile essentielle
renferme majoritairement du thymol, du carvacrol, du p-cymène, du linalol ou de l’α-
terpinéol, selon la race chimique. Celle-ci sera sélectionnée selon l’usage aromatique et/ou
thérapeutique recherché.
Une plante aromatique à usage strictement culinaire sera ainsi sélectionnée en fonction
de ces qualités gustatives et odorantes, alors que des critères beaucoup plus stricts seront
imposés pour la même plante destinée à des fins thérapeutiques [Tenscher et al., 2005].
d) Le stade végétatif
Pour bénéficier du potentiel maximal offert par les plantes aromatiques, on effectuera
la récolte pendant le stade végétatif où elle est plus riche en essence [Zahalka, 2010].
I.1.9. Propriétés biologiques et pharmacologiques
Par leurs nombreuses et diverses propriétés, les plantes aromatiques et leurs essences
trouvent leur emploi dans de multiples domaines telles que : l’alimentation, la pharmacie, la
parfumerie, l’aromathérapie. En phytothérapie, elles sont utilisées pour leurs propriétés
antiseptiques contre les maladies infectieuses d’origines bactériennes.
Dans les préparations pharmaceutiques, les terpènes phénoliques, comme le thymol et

le carvacrol, sont souvent utilisés comme antiseptiques, antimicrobiens et antifongiques. Le
thymol est très irritant, astringent et caustique.
Dans les domaines phytosanitaires et agro-alimentaires, les huiles essentielles ou leurs

composés actifs pourraient être employés comme agents de protection contre les
champignons et les microorganismes envahissant les denrées alimentaires [El Abed et
Kambouche, 2003; El Kalamouni, 2010].
Les propriétés biologiques des huiles essentielles sont innombrables et variables selon
les espèces. Leurs multiples et diverses propriétés, nées de la complexité de leur structure, se
résument dans ce qui suit :
12
I.1.9.1. Propriétés appétentes et digestives
La principale activité des plantes aromatiques consiste à stimuler physiologiquement

les sécrétions enzymatiques des glandes salivaires, les sécrétions gastriques, pancréatiques et
intestinales ainsi que l’excrétion biliaire, ce qui se traduit globalement par un effet stimulant
sur la digestion [Tenscher et al., 2005].
I.1.9.2. Activités antimicrobiennes
I.1.9.2.1. Généralités
Les qualités antimicrobiennes des plantes aromatiques et médicinales sont connues

depuis l’antiquité. Toutefois, il aura fallu attendre le début du 20ième siècle pour que les
scientifiques commencent à s’y intéresser. Ces propriétés antimicrobiennes sont dues à la
fraction des huiles essentielles contenues dans les plantes. La tendance actuelle des
consommateurs à rechercher une alimentation plus naturelle, a entraîné un regain d’intérêt des
scientifiques pour ces substances [Essawi et al., 2000 in El Kalamouni, 2010].
Depuis deux décennies, des études ont été menées sur le développement de nouvelles
applications et l’exploitation des propriétés naturelles des huiles essentielles dans le domaine
alimentaire.
Les huiles essentielles, actuellement employés comme arômes alimentaires sont

également connues pour posséder des activités antimicrobiennes et pourraient donc servir
d’agents de conservations alimentaires, et ce d’autant plus qu’ils sont pour la plupart classés
« généralement reconnus comme sains », ou approuvés comme additifs alimentaires par la
Food and Drug administration. Ils n’ont, par conséquent, pas besoin d’autorisation d’emploi
dans les aliments ; cependant, des études préalables sont nécessaires afin de mieux cerner leur
activité antimicrobienne.
Les huiles essentielles ont un spectre d’action très large puisqu’elles inhibent aussi
bien la croissance des bactéries que celle des moisissures et des levures. Leur activité
antimicrobienne est principalement fonction de leur composition chimique. Elles agissent en
empêchant la multiplication des bactéries, leur sporulation et la synthèse de leurs toxines.
Pour les levures, elles agissent sur la biomasse et la production des pseudomycéliums alors
qu’elles inhibent la germination des spores, la sporulation et la production de toxines chez les
moisissures [El Kalamouni, 2010].
13
I.1.9.2.2. Activité antifongique
Plusieurs études rapportent les propriétés antifongiques des huiles essentielles

[Blraskara Reddy et al., 1998; Regnault- Roger et al., 2002 ; Chebli et al., 2003; Duru et
al., 2003; Dohou et al., 2004 et Mohammedi, 2006; Talibi et al., 2012].
Un grand nombre de composés volatils ont été testés contre une large gamme de
champignons : Candida (C. albicans), Aspergillus (A. niger, A. flavus, A. fumigatus),
Pénicillium chrysogenum. La plupart de ces composés sont également de très bons agents
antifongiques : le thymol, le carvacrol, l’eugénol, etc. [Piochon, 2008].
Benjilali et al. (1986), ont enregistré le pouvoir antifongique de 26 huiles essentielles

testées : huile essentielle de l’armoise blanche (de trois régions), du thym, d’eucalyptus et du
romarin. L’huile essentielle du thym s’est révélée la plus active sur les 37 souches de
moisissures étudiées, suivie de l’armoise blanche, celle du romarin et de l’eucalyptus étant les
moins efficaces.
Les travaux de Chebli et al. (2003), ont permis de mettre en évidence l’effet
antifongique de 25 huiles essentielles distillées à partir de plantes médicinales marocaines
contre Penicillium digitatum, Phytophthora citrophthora, Geotrichum citriaurantii et Botrytis
cinerea. L’huile essentielle de Ghrysanthemum viscidehirtum à une concentration de 150 ppm
a fortement inhibé la croissance in vitro de quatre champignons. Les 24 autres huiles réduisent
le développement des champignons à une concentration de 250ppm. Ainsi selon Mohammedi
(2006), les huiles essentielles de Lavandula stoechas et Citrus ladaniferus se sont avérées
active sur les sept moisissures testées : Rhizopus stolonifier, Mucor sp, Trichoderma sp,
Alternaria sp, Fusarium sp, Penicillium sp et Aspergillus flavus.
I.1.9.2.3. Activité antibactérienne
Origan, thym, sauge, romarin, clou de girofle sont autant de plantes aromatiques
fréquemment utilisés comme ingrédients alimentaires. Les huiles essentielles de ces plantes
ont toutes une particularité commune : elles sont riches en composés phénoliques comme
l’eugénol, le thymol et le carvacrol. Ces trois composés possèdent une forte activité
antibactérienne contre un large spectre de bactéries : Escherichia coli, Bacillus cereus,
Listeria monocytogène, Salmonella enterica, Clostridium jejuni, Lactobacillus sake,
Satphylococcus aureus et Helicobacter pyroli [Piochon, 2008].
14
a) Mode d’action contre les bactéries
L’activité antimicrobienne des huiles essentielles a fait l’objet d’un grand nombre de
publications à l’échelle internationale. Cependant, la majorité des travaux cités dans ces
publications s’arrêtent au niveau de la mise en évidence de l’activité antimicrobienne de ces
huiles essentielles.
D’une manière générale, en raison de leur caractère lipophile, les constituants des
huiles essentielles se lient aux membranes cellulaires des microorganismes. Ils inhibent
notamment les échanges d’électrons membranaires lors des phosphorylations oxydatives et
freinent ainsi le métabolisme énergétique. De fortes concentrations en huiles essentielles
conduisent également à la lyse membranaire et à la dénaturation des protéines cytoplasmiques
[Tenscher et al., 2005].
b) Analyse de l’action thérapeutique des huiles essentielles « aromatogramme »
La méthode d’aromatogramme, inspirée de la pratique des antibiogrammes, permet

d’étudier la sensibilité des germes aux huiles essentielles. On peut ainsi mesurer le pouvoir
antibactérien et antifongique des huiles essentielles de manière fiable et reproductible.
La technique se fonde sur la « méthode des disques ». Une suspension bactérienne, ou

fongique prélevée, ensemencée sur surface plane d’un milieu gélifié coulé en boite de Pétri.
Les disques imprégnés d’huiles essentielles choisies sont déposés sur le milieu.
Après un temps d’incubation à l’étuve (24h), on constate la présence ou non d’une auréole
claire et transparente et dont la mesure du diamètre (incluant le disque), permet de définir
l’activité microbienne in vitro des huiles essentielles testées.
Par cette méthode, deux catégories d’huile essentielle apparaissent:
 Les huiles essentielles actives sur les germes et qui seront utilisées dans le traitement;
 Les huiles essentielles peu actives ou inactives sur les germes ; ces derniers seront
dits : « résistants » à ces huiles essentielles qui seront écartées [Zahalka, 2010].
15
I.1.9.3. Propriétés carminatives
L’effet carminatif des épices et des aromates, qui se manifeste par une réduction des
ballonnements et des flatulences, peut impliquer trois mécanismes :
Les plantes aromatiques stimulent la sécrétion des glandes digestives. La stimulation

des sécrétions enzymatiques par les différents organes digestifs ainsi que l’augmentation des
sécrétions biliaires garantissent une bonne dégradation des aliments et limitent les
fermentations indésirables.
En raison de leur contenu en huile essentielle, les plantes aromatiques sont également
spasmolytiques. Les constituants des huiles essentielles, lipophiles et de faible poids
moléculaires, s’intègrent de manière réversible aux membranes des cellules musculaires
lisses, notamment au niveau d’entrée de l’estomac (cardia). Ils influencent négativement la
perméabilité de certains canaux ioniques, diminuant ainsi la contractibilité de ces organes. Ce
qui limite l’aérophagie et supprime les spasmes intestinaux.
L’introduction dans le gros intestin d’huiles essentielles, sous forme d’émulsions diluées,
réduit les spasmes.
Les plantes médicinales possèdent enfin des propriétés antimicrobiennes marquées qui
peuvent réduire la multiplication de bactéries pathogènes et ainsi empêcher la formation de
gaz et de métabolites toxiques au niveau intestinal.
Parmi les plantes aromatiques carminatives, citons notamment l’anis, le fenouil, le

carvi, la menthe et la cannelle [Tenscher et al., 2005].
I.1.9.4. Propriétés antioxydantes
Les plantes aromatiques élaborent des molécules caractérisées par de nombreuses

fonctions capables de piéger les radicaux libres, d’où leurs effets antioxydants.
Les antioxydants transmettent aux radicaux oxygénés l’hydrogène des fonctions

phénoliques ou forment des produits stables avec des radicaux d’acides gras et interrompent
ainsi les réactions radicalaires en chaîne.
De bons capteurs de radicaux libres sont par exemple les dérivés de l’о-dihydroxybenzène
(comme les flavonoïdes et les isoflavonoïdes), les dérivés de l’acide caféique (comme les
16
acides rosmarinique), les anthocyanes, les о-dihydroxycoumarines, les lignanes et les

dihydroxyterpènes aromatiques. C’est le cas également des huiles essentielles soufrées, des
aldéhydes mono- et diterpéniques, du tocophérol, des caroténoïdes, de l’acide ascorbique et
des monophénols (comme l’eugénol) qui peuvent former des hémiquinones relativement
stables.
Citons parmi les plantes aromatiques très antioxydantes : la sarriette, le clou de girofle,
le gingembre, le poivre, le romarin, la sauge, le thym et l’oignon [Tenscher et al., 2005].
I.1.9.4.1. Méthode d’évaluation de l’activité antioxydante
Dans la littérature, plusieurs méthodes et techniques ont été trouvées pour suivre l’état
d’oxydation des lipides et ainsi évaluer l’activité antioxydante. A cause de la propriété
essentielle de l’antioxydant (piégeur des radicaux libres), plusieurs méthodes ont été mises en
place pour évaluer l’efficacité de l’antioxydant à piéger les radicaux libres (DPPH).
Afin de choisir la bonne méthode, il faut savoir ce que l’on va mesurer et évaluer. Par
exemple, la quantité des hydroperoxydes accumulée doit être mesurée avant qu’ils ne
commencent à diminuer, après la décomposition des hydroperoxydes, le degré d’oxydation de
l’échantillon doit être mesuré en se basant sur la formation des produits d’oxydation
secondaire [El Kalamouni, 2010].
I.1.9.5. Autres propriétés
Certaines plantes aromatiques riches en huile essentielles sont utiles en cas de catarrhe
bronchique grâce à leurs propriétés bronchospasmolytique et sécrétolytique : c’est le cas
surtout de l’anis, du fenouil et du thym.
Le fenugrec, le clou de girofle, le gingembre et l’ail présentent une activité

antiulcéreuse, qui s’explique par leur potentiel d’inhibition d’Helicobacter pyroli.
Un effet hypoglycémiant à été observé avec le fenugrec et le tamarin (éventuellement

par le ralentissement de la résorption des sucres induit par les mucilages) ainsi qu’avec le
cumin, la feuille de laurier, l’olive et l’oignon.
En raison de leur composition flavonoïdique, le persil, la baie de genévrier ainsi qu’un

certain nombre d’autres plantes aromatiques ont une réputation de plantes diurétiques.
17
L’ail, la noix de muscade, l’huile de muscade, l’huile essentielle de girofle, l’olive et

l’oignon sont des antiagrégants plaquettaires qui diminuent également la formation de
thromboxane A2. L’ail et l’oignon contribuent à augmenter l’activité fibrinolytique sanguine
[Tenscher et al., 2005]. Le tableau (1) présente les principaux composés avec leurs
caractéristiques.
I.1.10. Condition de stockage et de conservation des huiles essentielles
La relative instabilité des molécules constitutives des huiles essentielles implique des
précautions particulières pour leur conservation: utilisation de flacons propres et secs en
aluminium vernissé, en acier inoxydable ou en verre teinté, presque entièrement remplis et
fermés de façon étanche (l’espace libre étant rempli d’azote ou d’un autre gaz inerte),
stockage à l’abri de la chaleur et de la lumière.
Il existe des normes spécifiques sur l’emballage, le conditionnement et le stockage des huiles
essentielles (norme AFNO NF T 75-001, 1996) [Afssaps, 2008].
I.1.11. Toxicité des huiles essentielles
Les huiles essentielles ne sont pas des produits qui peuvent être utilisés sans risque.
Comme tous les produits naturels : «ce n’est pas parce que c’est naturel que c’est sans danger
pour l’organisme ». Cet aspect des huiles essentielles est d’autant plus important que leur
utilisation, de plus en plus populaire, tend à se généraliser avec l’émergence de nouvelles
pratiques thérapeutiques telle que l’aromathérapie [Piochon, 2008].
La toxicité des huiles essentielles se manifeste par la présence de certains substances qui,
ingérées à très fortes doses, peuvent déclencher des crises épileptiformes, convulsions,
asphyxie, hémorragie utérines, … [Rahili, 2002].
Certaines huiles essentielles sont dangereuses lorsqu’elles sont appliquées sur la peau
en raison de leur pouvoir irritant (huile riches en thymol ou en carvacrol), allergène (huile
riches en cinnamaldehyde ou phototoxique (huile de citrus contenant des furocoumarines).
D’autres huiles essentielles ont un effet neurotoxique.
18
Les cétones comme l’α thujone sont particulièrement toxiques pour les tissus nerveux. Il
existe aussi quelques huiles essentielles dont certains composés sont capables d’induire la
formation de cancers. C’est le cas par exemple de dérivés d’allylbenzènes ou de
propénylbenzenes comme le safrole (sassafrus), l’estragole (Artemisia dracunculus).
Les risques de toxicité des huiles essentielles peuvent être liés à la variabilité des
matières premières ainsi qu’à d’éventuelles confusions. En effet, les matières premières
végétales évoluent au cours du temps et ces sources peuvent engendrer des variations
importantes au niveau de la composition de leurs huiles essentielles.
Les indications thérapeutiques d’une huile essentielle sont bien souvent différentes de
celles relatives aux matières premières végétales dont elles sont issues. Ainsi, la feuille de
romarin possède des vertus cholérétiques et cholagogues, alors que son huile essentielle, qui
est dépourvue des principes phénoliques responsables de ces activités sur la sphère, digestive,
est surtout antiseptique [Tenscher, 2005].
Des modifications chimiques des produits natifs peuvent également prendre naissance lors de
l’extraction, comme l’hydrolyse et l’isomérisation de composés thermolabiles, la diminution
du pH par libération des acides organiques initiaux et l’hydrolyse des liaisons esters
[Piochon, 2008]. Citons à titre d’exemple les capitules de matricaire qui biosynthétisent une
lactone sesquiterpénique, la matricaire, alors que son huile essentielle contient le chamazulène
(carbure insaturé à doubles liaisons conjuguées, de couleur bleue), un produit de dégradation
résultant de l’ouverture du cycle lactone, d’une décarboxylation et d’une aromatisation. Enfin,
les profils chimiques des huiles essentielles diffèrent selon les procédés d’extraction utilisés
[Tenscher, 2005].
Rappelons que la délivrance au public de certaines essences est réservée au pharmacien. Il

s’agit notamment des huiles essentielles neurotoxiques, qui bénéficient d’une législation
pharmaceutique spéciale, comme celles à thuyone (HE de tanaisie, d’absinthe, the thuya, de
sauge), à pinocamphone (HE d’hysope), ou à anéthole (HE de fenouil, d’anis vert) [Tenscher,
2005].
19
Tableau 1: Huiles essentielles et familles biochimiques [Roux et al., 2008]
Famille Action Exemple de principe Exemple d’huile

pharmacologique actif essentielle
Monoterpènes Antiseptique Limonène Pin sylvestre
Action révulsive α et β pinène Sapin
Genevrier
Sesquiterpènes et Anti-inflammatoire Bisabolène Matricaire

Azulènes Anti histaminique Chamazulène
Phénols Bactéricide, virucide Thymol Thym à thymol ou

Fongicide Carvacrol carvacrol
Immunostimulant Eugénol Sariette
Tonique à faible dose Giroflier
Alcools Bactéricide, virucide Linalol Arbre à thé

monoterpénique Antifongique Géraniol Menthe poivrée
α Terpineol Géranium
Menthol
Bornéol
Alcools Tonique Farnésol Niaouli

sesquiterpéniques Décongestionnant Viridifloral Cyprès
Veineux Cédrol
et lymphatique
Aldéhydes Anti-inflammatoire Citral Mélisse

monoterpéniques Anti hypertensif Geranial Eucalyptus
Sédatif
Antiviral
antimycosique
Aldéhydes aromatiques Anti infectieux Aldéhyde cinnamique Cannelle

Antalgique Aldéhyde cummique Cumin
Sédatif
Cétones Faible dose: mucolytique Mentone Carvi

Cholagogue Carvone Menthe poivrée
Cholérétique Camphre Sauge
Thuyone Romarin à camphre
Pinocamphone
Esters Antispasmodique Acetate de linalyle Lavande

Anti inflammatoire Acetate de geranyle Carotte sauvage
Acétate de méthyl
Coumarines Sédatifs Coumarine Citrus

Anticoagulants Bergaptène
Spasmodiques
Composés soufrés Antibactériennes Composés soufrés Ail

Antiparasitaires Oignon
20
Partie I: Etude bibliographique Chapitre 02: Artemisia Herba alba Asso
I.2. Armoise blanche « Artemisia herba alba Asso »

I.2.1. Généralité sur la famille des Asteraceae martinov (1820) « Compositae
Giseke (1792)
Il s’agit de la plus vaste famille de phanérogames, avec 1530 genres et plus de 23000
espèces. Les Asteraceae peuvent se rencontrer sur toute la surface du globe. Néanmoins, elles
sont particulièrement diversifiées dans les régions sèches, comme le Bassin Méditerranéen,
l’Afrique australe, le Mexique et le Sud-Ouest des Etats-Unis, les régions arides d’Amérique
du sud. Cette famille est définie par deux caractères suivants: groupement des fleurs en
capitules et soudure des étamines par leurs anthères [Ozenda, 1983].
Les principaux genres sont Senecio, avec 1500 espèces, Vernonia, avec 1000 espèces,
Cousinia, avec 600 espèces, Eupatorium, avec 600 espèces, Hieracium, avec 500 espèces,
Helichrysum, avec 500 espèces, Artemisia, avec 400 espèces, Baccharis, avec 400
espèces……[Botineau, 2013].
I.2.1.1. Caractères botaniques

1. Appareil végétatif
L’appareil végétatif se caractérise par quatre caractères :
 Ce sont principalement des herbes, vivaces par des parties souterraines tubérisées,
mais quelquefois annuelles ; on rencontre aussi quelques espèces ligneuses : lianes,
arbustes et même arbres (Seneçon).
Les feuilles, toujours sans stipules, sont le plus souvent alternes, mais parfois
opposées (Arnica), verticillées, ou regroupées en rosette. Ces feuilles sont souvent
simples, profondément découpées, et dans les pays tropicaux, peuvent devenir
succulentes ou au contraire se réduire à des écailles.
 Les Asteraceae sont pourvues d’un appareil sécréteur :
 soit des cellules et canaux sécréteurs, responsables de l’odeur caractéristique
de certaines espèces (armoise, Camomille…)
 soit laticifères comme chez le groupe des Chicorées et plantes affines
(Pissenlit, Laiterons…). Lorsqu’on brise la tige de ces plantes, il s’exsude un
suc blanchâtre.
 Les organes de réserve contiennent de l’inuline, hydrolysable en fructose.
 Les Asteraceae sont riches en polyacétyléniques et en lactones sesquiterpéniques
[Guignard, 1998 ; Botineau, 2013]
21
2. appareil reproducteur
Celui-ci présente trois caractères originaux:
 l’inflorescence en capitule ;
 les fleurs, très particulières dont les anthères sont soudées entres elles, ce qui a valu à
cette famille le qualificatif de Synanthérées ;
 le fruits, un akène généralement surmonté d’un pappus [Gaussen et al., 1982 ;
Guignard, 1998]
I.2.1.2. Applications biologiques et pharmacologiques
Les applications biologiques et pharmacologiques des espèces de la famille des

Asteraceae sont le résultat de leur importance dans la médicine traditionnelle et le fruit de
plusieurs études chimiques et pharmacologiques.
La majorité des applications biologiques et thérapeutiques des espèces de la famille

des Asteraceae concernent des effets antimicrobiens, antifongique, ….(tableau 2).
Tableau 2: Applications biologiques et pharmacologiques de quelques espèces de la

famille des Asteraceae en fonction de leurs principes actifs [Botineau, 2013]
Espèces Propriétés Principe actif

Arctium lappa L Antimicrobienne, Dérivés acétyléniques ou
antifongique, traitement de la polyines
furonculose et dermatose
Carlina acaulis L. Antistaphylococcique,

antidermatosique
Cynara scolymus L. efficace vis-a-vis des troubles Acides - Phénols

hépatobiliaires
Chamaemelum nobile L. diurétique Coumarines

action antibiotique spécifique,
contre Brucella melitensis
Chamaemelum nobile L. stomachiques, antiprurigineux Flavonoïdes
Artemisia annua L. anti-malariques Lactones sesquiterpénique

Artemisia maritima L. molluscicides
22
I.2.2. Armoises « Genre Artemisia»
Le genre Artemisia comprend des plantes médicinales importantes qui font

actuellement l’objet d’une attention phytochimique en raison de leur diversité biologique et
chimique.
Un grand nombre d’armoises (environ 250 espèces) sont réparties à travers

l’hémisphère Nord. Plus d’une dizaine d’espèces ont été déterminées en Algérie ; certaines
sont rares et disséminées en hautes montagnes, ou cantonnées dans certaines limites; d’autres
sont au contraire particulièrement abondantes et répandues sur de grandes étendues, par
exemple : Artemisia herba alba (chih), espèce typique du paysage steppique et saharien. Leur
détermination n’est pas très délicate, d’autant qu’elles sont pour la plupart, vivaces et
aromatiques [Baba Aissa, 2000].
Figure 2: Artemisia [Ozenda, 1983]

Les dessins de détail représentent pour chaque espèce un fragment de rameau portant quelques feuilles
(X2) et un capitule très grossi (X7)
23
I.2.2.1. Activités pharmacologiques
Le genre Artemisia a fait l’objet de nombreux travaux scientifiques mettant en

évidence des activités variées. Des espèces d’Artemisia sont fréquemment utilisées pour le
traitement des maladies telles que la malaria, l’hépatite, le cancer, les inflammations et les
infections [Willcox, 2009].
 Artemisia absinthium L. est utilisée pour ses effets antiparasitaires et pour traiter
l’anorexie et l’indigestion. Les parties aériennes sont présentent dans de nombreux
préparations à base de plantes gastriques, en complément alimentaires et des boissons
alcoolisées ;
 A. afra est utilisée pour de nombreuses affections, y compris le rhume, la toux, le
diabète, les brulures d’estomac, et l’asthme ;
 A. annua L. est utilisé comme un thé pour le traitement du paludisme ;
 A. campestris L. possède une large gamme de propriétés antimicrobienne, anti-
inflammatoire et anti venin;
 A. herba alba Asso est utilisée sous forme d’une décoction contre la fièvre et les
problèmes menstruels et nerveux ;
 A. vulgaris L est largement utilisée pour ces actions anti hypertenseurs, anti
inflammatoires, antispasmodiques, carminatives et vermifuges [Abad et al., 2012].
I.2.2.2. Composition chimique des huiles essentielles du genre Artemisia
Les huiles essentielles sont des mélanges naturels très complexes qui peuvent contenir
plusieurs composés à des concentrations différentes. Elles sont caractérisées par 2 à 3
composants principaux à des concentrations assez élevées (20 – 70%) (Figure 3).
La composition chimique des huiles essentielles extraites à partir de genre Artemisia a

été largement étudiée dans plusieurs espèces partout dans le monde. L’odeur forte et
aromatique de certaines espèces de ce genre est due principalement à la haute concentration
de terpènes volatiles.
De nombreuses études ont montré que les espèces du genre Artemisia affichent des
variations intra-spécifiques significatives dans les constituants terpéniques de leurs huiles
essentielles. Dans certains cas, la variation dans les composés volatiles de ces plantes peut se
produire lors de la croissance de la plante aux différentes altitudes [Abad et al., 2012].
24
Figure 3: Structures chimiques de quelques composés rencontrés dans les huiles

essentielles [Khebri, 2011]
I.2.2.3. Armoise blanche « Artemisia herba alba Asso »
1. Appellation locales
Arabe: Chih
Tamazight: ifsi
2. Description morphologique
Sous arbrisseau tomenteux blanchâtre, de 30 à 50cm, à nombreuses tiges dressées,

ligneuses à la base; feuilles pubescentes, divisées en petites et fines languettes d’un vert
argenté; inflorescences très petits capitules jaunâtre, sessiles, groupés par 2 à 12 (suivants les
variétés); bractées de l’involucre glanduleuses. Odeur aromatique caractéristique [Ozenda,
1983; Baba Aissa, 2000].
25
3. Nomenclature et taxonomie
Règne : Plantae
Embranchemen: Spermaphytes (Phanérogames) ou « plantes à graines »
Sous- embranchement: Angiospermes (Plantes à fleurs)
Classe: Dicotyledones (Magnoliopsida)
Sous- classe: Asteridae
Ordre: Asterales
Famille: Asréracées ou composée
Tribu: Anthemideae
Sous- tribu: Aremisiinae
Genre: Artemisia
Espèce: Artemisia herba alba Asso [Guignard, 1998].
(A) (B)
Figure 4: Artemisia herba alba: (A) la plante au début de la saison de floraison, (B) la
plante à la fin de la saison de floraison [Messai, 2011]
26
4. Description géographique
 Local: les Hauts plateaux et le Sahara septentrional

 Regional: Afrique du Nord
 Mondial: Espagne, Afrique du Nord et Asie occidentale
5. Ecologie
Arbrisseau méditerranéen qui abonde au Moyen-Orient, dans le Sud Algérien et au

Maroc sur des sables profonds [Boullard, 2001].
L’armoise blanche présente une vaste répartition géographique couvrant, en Algérie,

environ 4 millions d’hectares et se développe dans les steppes argileuses et les sols tassés
relativement peu perméables. Elle se trouve sur les dayas, les dépressions et les secteurs plus
ou moins humide. Elle constitue un moyen de lutte contre l’érosion et la désertification [Ayad
et al., 2013].
6. Composition chimique
L’armoise blanche est la principale espèce végétale pâturée surtout au printemps et en

été. Elle constitue une source très importante pour le cheptel. La biomasse de cette plante
steppique constitue un aliment de substitution pour l’élevage du bétail en période de disette.
En effet la valeur énergétique de l’armoise blanche est de l’ordre de 0.45 UF/ Kg MS.
Cette plante présente un équilibre harmonieux entre le calcium (0.5%) et le phosphore
(0.07%). Elle est assez riche en cellulose (26,73%) [Ayed et al., 2014].
Il est à noter aussi que la composition biochimique d’une espèce végétale est liée
directement à la qualité du substrat (sol). Une grande variabilité de la teneur en éléments
minéraux de l’armoise blanche a été enregistrée dans différentes stations de la région de Saida
[Bouzidi, 2001].
7. Médecine traditionnelle
Artemisia herba alba, connue aussi sous l’absinthe du désert, est une plante
essentiellement fourragère, très appréciée par le bétail comme pâturage d’hiver [Messai,
2011]. Cette espèce a été utilisée dans la médecine traditionnelle par de nombreuses cultures
depuis les temps anciens pour ses actions stomachique, antispasmodique, antigastralgique,
vermifuge ....
27
C’est l’armoise la plus connue en Algérie. Le chih est un remède très populaire auquel
on a souvent recours: pour faciliter la digestion, calmer les douleurs abdominales et certains
malaises du foie et antidiabétique. Ses racines sont indiquées contre certains troubles nerveux
[Baba Aissa, 2000].
Le miel butiné sur l’armoise blanche partagerait les propriétés de la plante elle-même
[Boullard, 2001].
8. L’huile essentielle d’Artemisia herba alba
Au cours des dernières décennies, l’huile essentielle de l’armoise blanche a été

soigneusement étudiée et la diversité dans la composition de cette huile recueillie dans
différents pays a conduit à de nombreux chemotypes. Généralement, l’huile a été en grande
partie rapporté être composée de monoterpènoïdes, principalement oxygénés tels que le 1-8
cinéole, chrysanthenone, α et β thujones et le camphre comme composants majeurs
[Mohamed et al., 2010].
camphène thujone 1-8 cinéole
Figure 5: Structures chimiques de quelques composés rencontrés dans l’huile

essentielle d’Artemisia herba alba
Le Maroc détient 90% du marché mondial de l’huile essentielle extraite de l’armoise

blanche [Mounni et al., 2013].
28
L’examen de la littérature scientifique disponible publiée sur A. herba alba a montré

que l’effet antidiabétique de cette plante était similaire à celle de répaglinide et l’insuline
ordinaire [Ribnicky et al., 2004; Tastekin et al., 2006].
Des essais sur les propriétés insecticides de l’huile essentielle d’A. herba alba sont
menés dans le cadre de la lutte biologique contre Euchorthippus albolineatus, un grand
ravageur des cultures agricoles [Zaim et al., 2012]. Les résultats obtenus ont montré que cette
huile a manifesté une bonne activité acridicide. Ainsi, Sharifian et al. (2012) ont suggéré que
l’huile essentielle de l’armoise blanche pourrait avoir un effet potentiel comme agent de
contrôle contre Callosobruchus maculatus et Rhyzopertha domonica.
9. Toxicité
Manger trop de l’armoise blanche a un effet purgatif en particulier sur les moutons, et
peut causer la mort des jeunes agneaux [Ghrabi et al., 2005].
La toxicité de certaines populations de l’armoise serait liée à la concentration élevée

en thuyone. A forte dose, l’armoise blanche est abortive, neurotoxique et hémorragique
[Lahsissene et al., 2009].
29
Partie I: Etude bibliographique Chapitre 03: Altération des aliments
I.3. Altération des aliments
On entend par denrée alimentaire (ou aliment), toute substance ou produit, transformé,
partiellement transformé ou non transformé, destiné à être ingéré par l’être humain. La
fonction première de l’alimentation est de maintenir l’organisme en bonne santé. Il est donc
nécessaire d’apporter chaque jour la quantité et la qualité d’aliments dont le corps a besoin.
Les modes d’alimentation et leur évolution au cours du temps dépendent, à des degrés
divers, des interactions de quatre groupes de facteurs essentiels : socioculturels, économiques,
technologiques et scientifiques [Dupin et al., 1992].
L’aliment, considéré comme indispensable à la survie, devient incomestible en raison

de certaines modifications biologiques ou chimiques indésirables qui entraînent la perte de ses
qualités nutritionnelles et gustatives.
Ces altérations surviennent depuis la production des denrées jusqu’à leur consommation et
elles résultent de causes diverses:
 altérations physiques: les blessures, la variation de la teneur en eau, le changement de

couleur, déstabilisation des émulsions ……..
 altérations chimiques: oxydation, brunissement non enzymatique, dénaturation des
macromolécules azotées;
 altérations enzymatiques: elles se produisent surtout entre + 15°C et +50°C. Il s’agit
de réactions d’hydrolyse et d’oxydation par les enzymes propres aux produits ou
exogènes, apportées par les microorganismes [Vierling, 1998].
I.3.1. Dégradation chimique des denrées alimentaires
Les dégradations ou altérations (autres que microbiologiques) que la denrée a pu subir

avant sa consommation, sont des modifications de sa composition, qui l’ont diminuée dans sa
valeur intrinsèque, comme le rancissement, une réaction de Maillard non désirée, etc.
1. Dégradation des matières grasses
Les triglycérides, composants principaux des matières grasses, peuvent subir soit une
oxydation, soit une hydrolyse, l’oxydation pouvant être suivie d’une hydrolyse et l’hydrolyse
d’une oxydation, conduisant dans tous les cas à des produits secondaires et tertiaires odorants
caractéristiques du rancissement [Bauer et al., 2010].
30
Les réactions d’oxydation peuvent se produire même dans des aliments contenant
moins de 1% de lipides. Les principaux substrats de l’oxydation sont les acides gras non
saturés, ils s’oxydent en général plus vite à l’état libre que lorsqu’ils font partie de molécules
de triglycérides ou phospholipides. D’autres substrats non saturés peuvent subir des réactions
d’oxydation comme la vitamine A et les caroténoïdes. Les facteurs favorisant l’oxydation sont
la chaleur, l’air, la lumière et la présence de certains métaux [Alais et al., 2008].
1.1. Mécanisme de l’oxydation
On distingue dans l’oxydation des matières grasses trois types de réactions:
 les réactions d’initiation qui, à partir d’acides gras non saturés, conduisent à la
formation de radicaux libres ou de peroxydes lipidiques;
 les réactions de propagation aboutissant à une accumulation de peroxydes lipidiques ;
 les réactions de terminaison (ou d’arrêt) au cours desquelles les radicaux libres
s’associent pour donner des composés non radicalaires très divers (Figure 6) [Dilmi-
Bouras, 2004; Alais et al., 2008; Durand et al., 2010].
1.2. Conséquences des réactions d’oxydation
Les réactions d’oxydation donnent naissance à de nombreux composés. En premier

lieu, il convient de citer les aldéhydes et cétones de faible masse moléculaire qui sont
responsables de l’odeur de rance; c’est la première altération qui se manifeste d’autant que
certains d’entre eux sont perçus à des concentrations très faibles, par ailleurs, les composés
carbonylés peuvent réagir avec les protéines ou plus généralement favoriser le brunissement
non enzymatique, la présence de lipides peut aussi provoquer l’oxydation secondaire de divers
aromes [Alais et al., 2008; Cuvelier et Maillard, 2012].
Les dégradations oxydatives affectent les qualités nutritionnelles, sensorielles et

commerciales des aliments et peuvent avoir des répercussions sur la santé du consommateur.
Elles sont également mises en cause dans le vieillissement des tissus biologiques ainsi que
dans de nombreuses pathologies comme l’athérosclérose, les maladies neurodégénératives, les
complications du diabète (diabète non insulinodépendant, aussi appelé diabète gras) et
inflammation [Manchado et Cheynier, 2006; Genot et Michalski, 2010].
31
Acide gras poly insaturés RH
Température, lumière
Métaux
Radicaux libres
Peroxyde
Radical lipidique R° + H
O2
Radical Peroxyde ROO°
ROO° RH
Hydroperoxydes RO°
R° ROOH + R° R°
ROOH
Produits secondaires de réaction
Produits finaux volatils produits finaux non volatils
Figure 6: Oxydation des lipides [Durant et al., 2010]
1.3. Inhibition de la peroxydation de lipides
Depuis plusieurs années, les consommateurs exigent une sécurité alimentaire accrue,
ce qui donne une importance primordiale aux caractéristiques qualitatives des produits. Ainsi,
il convient de limiter la présence de composés défavorables à la santé humaine. Parmi ceux-ci
figurent les composés issus de la peroxydation des lipides.
32
La peroxydation de lipides ne peut jamais être totalement exclue, mais uniquement

freinée ou retardée en mettant en œuvre les moyens suivants:
 exclusion partielle de l’oxygène: possible par un emballage sous vide ou par

adjonction de glucose oxydase dont l’action est de consommer l’oxygène résiduel,
 entreposage à basse température et dans l’obscurité. Pour les fruits et les légumes qui
contiennent l’enzyme lipoxygénase, cette mesure est insuffisante ; une dégradation
peut uniquement être évitée si l’enzyme a été inactivée par un blanchiment préalable,
 addition des antioxydants [Bauer et al., 2010].
1.3.1. Antioxydants
On entend par antioxydant «toute substance qui, présente à faible concentration

comparée à celle du substrat oxydable, retarde ou prévient de manière significative
l’oxydation de ce substrat » [Bauer et al., 2010].
Les antioxydants peuvent être classés en deux groupes selon leur mode d’action :
 Les antioxydants primaires, également appelés antiradicalaires, sont des molécules

capables de bloquer les radicaux lipidiques par transfert d’un H°.
L’antioxydant devient alors lui-même porteur d’un radical, mais à la différence des
radicaux lipidiques, il est peu réactif, ce qui stoppe la propagation radicalaire.
Ce groupe d’antiradicalaires est constitué exclusivement de composés phénoliques en

raison de la grande stabilité apportée par leur cycle aromatique. On trouvera ainsi dans ce
groupes les additifs antioxydants ; BHT, BHA, gallate, mais aussi les tocophérols (vitamine
E) (Figure 7) et les polyphénols végétaux [Cuvelier et Maillard, 2012].
Figure 7: Formules des tocophérols [Berset, 2006]
33
 Les antioxydants secondaires agissant par des mécanismes indirects tels que la
chélation des ions métalliques ou la réduction d’oxygène. Les agents chélateurs de
métaux les plus couramment utilisés sont l’EDTA et l’acide citrique. Parmi les
réducteurs d’oxygène, citons principalement l’acide ascorbique (vitamine C)
[Cuvelier et Maillard, 2012].
Figure 8: Antioxydants utilisés couramment dans les produits alimentaires

[Bauer et al., 2010].
1.4. Evaluation analytique de la dégradation des matières grasses
Du point de vue pratique, la mesure de l’altération des matières grasses est appliquée
principalement dans deux cas précis :
 la détermination du taux d’altération d’une huile de friture;

 la détermination de la rancidité d’une huile ou d’une graisse [Bauer et al., 2010].
L’état d’oxydation dans lequel se trouve les matières grasses peut être mesuré de diverses
manières, selon que l’on dose l’apparition des produits primaires d’oxydation ou des produits
secondaires, la consommation d’oxygènes ou d’acides gras saturés, ou encore la co-oxydation
d’autres substrats, tels que des pigments ou des protéines.
Chaque mesure apporte ainsi une information partielle sur un phénomène global, l’idéal
étant d’évaluer l’état d’oxydation par plusieurs méthodes complémentaires permettant de
suivre en parallèle la formation des produits primaires et secondaires [Cuvelier et Maillard,
2012].
34
2. Dégradation des protides
Les dégradations des protides, principalement des protéines, qui peuvent se produire
lors des processus technologiques ou lors des préparations culinaires, sont soit de nature
chimique, soit le résultat de réactions enzymatiques.
2.1. Dégradation de natures chimiques
Lors des traitements thermiques appliqués aux denrées, diverses dégradations des
protides peuvent avoir lieu, telles que:
 la formation de ponts covalents intra- ou intermoléculaire de nature

isopeptidique ou de type lysinoalanine: baisse de la digestibilité;
 la formation des amines biogènes ;
 des changements indésirables dans la couleur et la flaveur des denrées dus à
un début de réaction de Maillard [Nout et al., 2003].
a. La réaction de Maillard
La réaction de Maillard ou brunissement non enzymatique est un ensemble de

réactions aboutissant à la formation de polymère bruns ou noirs (appelés mélanoïdines) à
partir de la condensation d’un composé carbonylé (sucre réducteur) et d’une fonction amine
libre d’une protéine ou d’un acide aminé. Elle débute par la formation de glycosylamines,
produits d’addition qui se réarrangent en des composés intermédiaires stables appelés amino-
sucres ou « composés d’Amadori » [Dilmi-Bouras, 2004].
 Conséquences et prévention de la réaction de Maillard
La réaction de Maillard affecte plusieurs aspects de la qualité des aliments, notamment :
 la couleur, l’odeur, l’arome et le gout ;

 perte de la valeur nutritionnelle due principalement à son impact sur les
protéines ;
 cependant, elle forme des composés qui ont des propriétés antioxydantes.
Les moyens de prévenir le brunissement non enzymatique sont relativement peu

nombreux. L’addition d’agents inhibiteurs est un moyen efficace de prévenir la réaction de
35
Maillard. Le seul inhibiteur efficace est, jusqu’à présent, l’anhydride sulfureux, utilisé sous
forme de gaz (SO2) ou de sels (NaHSO3).
Les sulfites réagissent avec les composés carbonylés, les bases de Schiff, les composés
instables, en donnant des sulfonates qui sont des produits stables. L’anhydride sulfureux et les
sulfites sont utilisés dans : le moût de raisin et le vin, les fruits déshydratés, les pulpes pour
confiture, les jus concentrés, la purée déshydratée de pomme de terre; les tranches de pomme
de terre déshydratées [Nout et al., 2003].
2.2. Dégradation de nature enzymatique : formation des amines biogènes
Les amines biogènes sont des substances qui se forment dans les denrées sous l’action
de certaines bactéries par décarboxylation des acides aminés, selon l’équation:
décarboxylation
R CH COOH R CH2 NH2
NH2 amines biogènes
Selon les acides aminés de départ, on obtient les amines biogènes mentionnées dans le
tableau 3 [Bauer et al., 2010].
Tableau 3: Formation des amines biogènes à partir des acides aminés correspondants
[Bauer et al., 2010].
Acides aminés Amines biogènes
Histidine histamine
Tryptophane tryptamine
Lysine cadavérine H2N-(CH2)5-NH2
Arginine putrescine H2N-(CH2)4-NH2
36
3. Dégradation des sucres
3.1. Altérations causées par les hydrolases (polysaccharidases)
Ce sont essentiellement les pectinases, les cellulases et les amylases. Elles sont
naturellement présent dans les aliments et sont aussi produites par les microorganismes. Leurs
activités influent sur la texture et le goût des aliments [Nout et al., 2003].
3.2. Brunissement non enzymatique « réaction de Maillard »
Les pentoses, et notamment le ribose, sont les sucres réducteurs les plus réactifs ; les
hexoses (glucose, fructose) sont un peu moins réactifs, et les disaccharides réducteurs
(lactose, maltose) encore moins [Nout et al., 2003].
3.3. Dégradation thermique des sucres
L’hydroxyméthylfurfural (HMF) est le principal composé qui se forme lors de la

dégradation thermique des sucres, notamment des hexoses, selon la réaction
-3 H2O
Glucose (C6H12O6) HMF (C6H6O3) [Bauer et al., 2010]
I.3.2. Altération d’origine microbienne
La plupart des produits alimentaires contiennent des microorganismes; exceptés

quelques rares produits alimentaires qui sont naturellement stériles (comme par exemple le
contenu des œufs frais) [Nout et al., 2003].
L’action microbienne sur un aliment est variée et affecte les caractères physico-
chimiques, nutritifs, et organoleptiques. La prolifération non contrôlée de microorganismes
dans un aliment peut poser des problèmes au niveau industriel mais aussi au niveau sanitaire.
Les microorganismes peuvent être les causes des maladies. Les risques encourus
varient en fonction de nombreux paramètres : nature du microorganisme, niveau de
contamination (dose infectante), nature de l’aliment, état physiologique du consommateur
[Guiraud, 2003].
37
1. Les différentes catégories de maladies liées à la consommation des aliments
 Les maladies infectieuses: sont dues à la prolifération du germe au détriment du tissu

de l’hôte. Les bactéries susceptibles d’introduire une infection chez le consommateur:
Vibrio cholerae, Salmonella typhi, Listeria monocytogenes.
 Les toxi-infections: les germes (106 -109) produisent des substances toxiques
spécifiques dont le pouvoir toxique dépend de la charge microbienne. Les bactéries
qui peuvent entraîner une toxi-infection liée à une prolifération massive de bactéries
dans l’intestin: Salmonella enteritidis, Campylobacter jejuni.
 Les intoxinations: sont dues à des exotoxines produites par des microorganismes, dans
ces cas, la présence des germes eux-mêmes dans l’organisme de l’hôte n’est pas
indispensable. Les bactéries qui peuvent provoquer une intoxication par les toxines
qu’elles produisent: toxines botuliques, hautement neurotoxique de Clostridium
botulinum, les entérotoxines de Staphylococcus aureus [Nout et al., 2003 ; Leyral et
Vierling, 2007 ; Bauer et al., 2010].
 Certaines moisissures sont capables de synthétiser des métabolites secondaires
toxiques, appelés mycotoxines, responsables d’intoxications ou de maladies diverses
regroupées sous le mon de mycotoxicoses. Les mycotoxines les plus toxiques sont
celles produites par la moisissure Aspergillus flavus; ces substances, appelées
alfatoxines [Bauer et al., 2010].
2. Principales altérations alimentaires d’origine microbienne
2.1. Altération des viandes et des volailles
Dans la filière des viandes et produits carnés, quelle que soit l’espèce, les viandes sont
naturellement contaminées. Même si les sources de contamination sont diverses, la majorité
de la contamination trouve son origine aux trois stades critiques suivants:
a) la contamination liée à l’animal vivant (cuir, peau, plumes, etc.) ;

b) la contamination au cours de l’abattage, notamment au stade de l’éviscération ;
c) celle inhérente aux différentes étapes de transformation (découpe, hachage,
conditionnement, etc.)
De par sa forte teneures eau et sa richesse en éléments nutritifs, la viande fraîche est une
matrice périssable, car propice à la contamination bactérienne qui peut conduire (selon la
charge initiale) à l’altération organoleptique du produit ou à la croissance des bactéries
38
pathogènes, potentiellement présentes lorsque les conditions optimales de conservation ne

sont pas respectées (rupture de la chaîne du froid, par exemple). La garantie de la qualité de la
viande est donc essentielle pour le consommateur et devient cruciale lorsque la viande est
consommée crue ou peu cuite, ou bien lorsqu’elle est destinée à une population à risque
(enfants, personnes âgées, femmes enceintes) [Feurer et al., 2013].
Les principales bactéries responsables de toxi-infections pouvant résulter de la

consommation de viande et de produits carnés sont Salmonella spp., Campylobacter spp.,
Yersinia enterolitica, les E. coli producteurs de shigatoxines (STEC) [Feurer et al., 2013].
2.2. Altération des fruits et des légumes
La flore microbienne des fruits et des légumes est constituée presque exclusivement de
bactéries de l’environnement. Accidentellement, peuvent s’y rajouter des microorganismes
pathogènes provenant de la fumure, de l’eau ou des manipulations: Yersinia, Campylobacter.
Les altérations exercées sur le végétal avant la récolte sont la conséquence du

développement de divers microorganismes phytopathogènes.
 Les altérations d’origine bactérienne
Elles concernent essentiellement les légumes. L’altération la plus fréquente est la

pourriture molle qui se manifeste par le rancissement, le noircissement et le dessèchement
combinés des racines et des tubercules. Deux groupes bactériens peuvent être responsables :
Erwinia et Pseudomonas.
Des bactéries cellulolytiques peuvent détruire la paroi cellulosopectique (Cellulomonas,

Arthrobacter) [Leyral et Vierling, 2007].
 Les altérations d’origine fongique
Le développement de leur mycélium entraîne l’apparition de zones colorées, puis la

dissociation des tissus sous-jacents. Quelques altérations fongiques parmi les plus fréquentes:
 la pourriture grise due à Botrytis cinereae

 la pourriture bleue ou verte (Penicillium)
 la pourriture verte (Trichoderma)
 la pourriture rouge (Fusarium)
 la pourriture brune (Sclerotina) [Leyral et Vierling, 2007].
39
Tableau 4: Les principaux microorganismes pathogènes d’origine alimentaire

[Nout et al., 2003]
Microorganisme Maladie Type Sources

Campylobacter jejuni diarrhée maladie infectieuse lait, volaille, viande
Listeria monocytogenes méningite maladie infectieuse lait cru, produits laitiers non
ou mal pasteurisés, viandes,
poissons
Shigella diarrhée et fièvre shigellose aliments crus (légumes,
salades,…)
Clostridium perfringens diarrhée, nausée toxi-infection et viandes, poissons
vomissement intoxination
E coli entéropathogène toxi-infection viandes mal cuites, produits
entérotoxique laitiers crus, pâtisseries
Salmonelles gastro-entérie et toxi-infection et viandes, volaille, poissons,
fièvre intestinal œufs
fièvre typhoïde maladie infectieuse
Clostridium botulinum troubles nerveux, botulisme conserves qui subissent un
Vomissement, traitement thermique
crampes abdominales insuffisant
troubles respiratoires
paralysie et la mort du
sujet si aucun soin adéquat
ne lui est apporté
Staphylococcus gastro-entérite, vomissement intoxination fromages, viandes,volaille,
aureus poissons séchés
I.3.3. Contamination par les produits chimiques
Les contaminants de nature chimique sont traditionnellement séparés en produits

inorganiques et produits organiques
40
 Contaminants chimiques inorganiques
Les métaux lourds sont les principaux représentants de ce type de contaminants ; parmi
ceux- ci ; ceux dont les effets délétères les plus importants sont les suivants : le mercure, le
plomb, le cadmium, les contaminants radioactifs
 Contaminants chimiques organiques

 les résidus de pesticides : insecticides, fongicides ;
 les résidus de médicaments vétérinaires ;
 les nitrates, les nitrites, les nitrosamines ;
 les phycotoxines : toxines secrétées par les algue, et qui s’accumulent dans les fruits
de mer [Bauer at al., 2010].
I.3.4. Conservation des aliments
La conservation des aliments vise à préserver leur comestibilité et leurs propriétés

gustatives et nutritives. Elle implique notamment d’empêcher la croissance de
microorganismes et de retarder l’oxydation des graisses qui provoque le rancissement. Des
techniques de conservation ont été mise au point pour modifier ou supprimer les facteurs
éventuels d’altération liés au milieu de conservation ou à l’aliment lui-même [Vierling,
1998]. Si on veut pouvoir limiter ou supprimer les mécanismes de dégradation des aliments,
on doit donc jouer sur les facteurs qui y contribuent directement ou indirectement. Quelques
principes importants de conservation sont résumés dans le tableau 5 [Nout et al., 2003].
Tableau 5: Quelques principes de conservation [Nout et al., 2003]
Facteur Niveau Procédés

Température élevée Pasteurisation, stérilisation, cuisson, blanchiment
basse réfrigération, congélation
activité de l’eau basse séchage, lyophilisation, concentration, salage
pH bas acidification par fermentation ou addition de produits
acides (vinaigre etc.)
potentiel d’oxydoréduction bas emballage ou stockage sous vide ou sans oxygène
Stabilité par additifs alcool, produits chimiques de conservation,
bactériostatiques ou bactéricides, antibiotiques, substances de la fumée (phénols)
ou par compétition
microbiologique
41
I.3.4.1. Classification des techniques
Les modes de conservation peuvent être classés de la manière suivante:
I.3.4.1.1. Procédés physiques de conservation
1. Inhibition ou destruction des agents biologiques d’altérations des aliments (enzymes et

microorganisme)
Elles sont obtenues par
 le froid : réfrigération et congélation

 la chaleur : pasteurisation et stérilisation. Les effets de la chaleur sont fonction du
couple temps/température.
2. Destruction ou élimination des microorganismes
Elles sont obtenues par:
 les radiations électromagnétiques et l’ionisation: les rayonnements ultra-violets (10 à

400nm), les rayonnements γ (0.1 à 0.01 nm), les rayonnements X.
3. Abaissement de l’activité de l’eau
Il est obtenu par l’élimination de ce constituant par:
 concentration, séchage, déshydratation, lyophilisation;

 incorporation des solutés (sel, sucre) [Vierling, 1998 ; Guiraud, 2003].
I.3.4.1.2. Procédés chimiques
Additifs chimiques: antioxydant, antifongique, antimicrobien
I.3.4.1.3. Contrôle de l’atmosphère
Conditionnement sous vide ou sous atmosphère à forte pression partielle en dioxyde de

carbone [Vierling, 1998 ; Leyral et Vierling, 2007].
I.3.4.2. Conservateurs alimentaires
Les produits microbiostatiques ou microbicides susceptibles d’être ajoutés aux

aliments sont qualifiés de conservateurs alimentaires. Un bon conservateur alimentaire doit
être bactéricide plutôt que bactériostatique; il doit agir sur les levures et les champignons, il
doit être actif sur les germes pathogènes et sur ceux responsables d’altération, il doit être
stable et inoffensif et sans action sur la valeur nutritionnelle.
42
Les agents minéraux utilisés sont le NaCl (dans tous les aliments) ; les nitrates et
nitrites de sodium et de potassium: dans les charcuteries; l’anhydride sulfureux et sulfites ;
dans le vin et des produits végétaux. Parmi les agents organiques, les plus importants sont les
acides organiques et leurs dérivés.
On peut citer également les antioxydants (Butylhydroxytoluène BHT ou Butylhydroxyanisol

BHA) [Guiraud, 2003].
I.3.4.2.1. La bioconservation
La bioconservation, ou biopréservation, est une méthode de conservation des aliments

faisant appel à des microorganismes, appelés encore culture protectrices, ou à leurs
métabolites naturels. Ces termes sont généralement utilisés en opposition à l’ajout de
conservateurs dits «chimiques» classiquement utilisés dans les industries agro-alimentaires.
La biopréservation, comme toute autre méthode de conservation, doit permettre de maitriser
la croissance de flores pathogènes ou d’altération, tout en préservant les qualités
organoleptiques et nutritionnelles du produit au cours de sa vie. Outre les microorganismes et
leurs métabolites, La biopréservation peut faire appel à d’autres composés, comme la
lactoperoxydase, une enzyme naturellement présente dans le lait, ou à des extraits végétaux
(de romarin,thym, thé vert ou de pépin de raisin, huiles essentielles) [Zagorec et Christieans,
2013].
Les essences naturelles et les épices ont un pouvoir bactéricide lié à la présence de
composés phénoliques, d’alcools, etc. et sont souvent remplacées par leurs composés actifs
(eucalyptol, thymol, eugénol, etc.) utilisés comme conservateurs [Guiraud, 2003].
43
Partie II: Matériels et méthodes
II. Matériels et méthodes
Réalisée au niveau du laboratoire de la faculté des Sciences de la Nature et de la Vie,

cette étude menée avec l’huile essentielle de l’armoise blanche vise à valoriser cette plante
médicinale et aromatique très répandue en Algérie, ayant comme objectifs de déterminer la
qualité de l’huile essentielle de l’armoise blanche et d’étudier quelques activités biologiques
dont elle pourrait être dotée. La démarche scientifique suivie pour aboutir à ces objectifs est
schématisée dans la figure 9.
La démarche de la stratégie expérimentale est la suivante:
 Etude des activités biologiques de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba
Pour étudier les activités biologiques de l’HE d’A. herba alba, on a établi le plan suivant:
 faire l’extraction de l’huile essentielle;

 réalisation des analyses physico-chimiques et chromatographiques sur l’huile
essentielle obtenue;
 évaluation des activités antioxydantes et antimicrobiennes in vitro.
 Application de l’huile essentielle testée dans des matrices alimentaires
D’après les résultats obtenus lors du premier plan expérimental, on a effectué des essais
d’application de l’huile essentielle obtenue dans deux produits alimentaires à savoir: l’huile
de tournesol et la viande hachée. Ces applications peuvent être considérés à la fois comme
affirmation des propriétés étudiées et une valorisation de ces propriétés dans le domaine
agroalimentaire.
Pour cela on a établi le plan suivant:
 évaluation de la stabilité oxydative de l’huile de tournesol en présence de l’huile

essentielle;
 mise en application de l’effet antimicrobien de l’huile essentielle dans la viande
hachée.
44
Plante « Artemisia herba alba »

(Partie aérienne)
Extraction de l’huile essentielle

Par hydrodistillation
Evaluation de la qualité Calcul du rendement
Analyse chromatographique
Analyse physique
Densité Indice de réfraction
Etude des activités biologiques
Antioxydante Antimicrobienne Mise en application de l’effet stabilisateur dans

deux produits alimentaires
Huile de tournesol Viande hachée

(effet antioxydant) (effet antimicrobien)
Figure 9: Protocole expérimental
45
II.1. Présentation et état actuel de la zone d’étude
La zone sur laquelle s’est portée notre étude est une zone semi-aride située au Sud de
la wilaya de Saida (Algérie) à l’interface Tell-steppe et s’inscrit dans l’ensemble des Hautes
Plaines Steppiques et couvre une superficie de 1218Km2. La région de Saida Appartient à
l’étage bioclimatique semi-aride à hiver frais.
Figure 10: Localisation de la commune de Sidi Ahmed dans la wilaya de Saida
Les sols de la zone d’étude se caractérisent par une texture limono-sableuse, pH

basique et une faible qualité chimique.
La première analyse du couvert végétal existant dans la zone d’étude montre une forte
dégradation de ce couvert végétal, la présence de Noaea mucronata et Peganum harmala
[Bouzidi, 2001].
46
Photo 1: Etat actuel de la zone d’étude
II.2. Matériels utilisés

II.2.1. Matériel végétal
L’armoise blanche « Artemisia herba alba » est une plante appartenant à la famille des
Asteraceae. C’est une plante fourragère, médicinale et aromatique. Elle est utilisée comme
remède de beaucoup de maladies tel que le traitement de diabète, diarrhée et comme
vermifuge et son huile essentielle est destinée à l’industrie de la cosmétologie et de la
parfumerie.
La partie aérienne (feuilles et sommités fleuries) de l’armoise blanche a été récoltée de
la station de sidi Ahmed (wilaya de Saida) à l’interface Tell-Steppe au Nord-Ouest de
l’Algérie.
Figure 11: Artemisia herba alba Asso recueillie de la région de Sidi Ahmed (wilaya de
Saida)
47
II.2.2. Les souches microbiennes
L’activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba a été testée

contre: Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25213), Candida
albicans (ATCC 10231), Fusarium oxysporum f.sp. ciceris (fusariose du pois chiches) (FOC),
Fusarium solani (pourriture des racines de pois chiches) (FS) et Globisporangium ultimum
(fonte des semis et la pourriture des racines de Pin d’Alep) (GU).
Les souches bactériennes et la souche de C. albicans, pures et identifiées, ont été

obtenues à partir du laboratoire de biotoxicologie expérimentale, biodépollution et
phytoremédiation de l’université d’Oran.
Les moisissures utilisées pour déterminer l’activité antifongique in vitro ont été
fournies par le laboratoire de phytopathologie de la faculté des sciences de la Nature et de la
vie de l’université de Mascara.
1. Fusarium solani
Le genre Fusarium appartient au phylum des Deuteromycetes (champignons

imparfaits).
Fusarium solani cause la pourriture des racines et des tiges et même des semences,
cette pourriture et accompagnée par une production de mycotoxines [Tlemsani, 2010].
2. Fusarium oxysporum f.sp. ciceris
Fusarium oxysporum est un parasite tellurique doué d’une vie saprophytique. Il

appartient au hyphomycetes, à l’ordre des Moniliales [El Aoufir, 2001].
Parmi les maladies causées par Fusarium oxysporum, on trouve le flétrissement

vasculaire appelé fusariose vasculaire, la pourriture racinaire et du collet et la pourriture des
semis (planche 4, annexe2) [Ramirez-Suero, 2009].
Le Flétrissement vasculaire induit par Fusarium oxysporum est considéré comme la

maladie la plus grave du complexe de flétrissement et de pourriture racinaire qui affecte les
cultures du pois chiche (Cicer arietinum) [El Aoufir, 2001].
3. Globisporangium ultimum
En pépinière forestière, la fonte des semis est une maladie très connue qui affecte
principalement les essences résineuse et parfois le Hêtre. Cette maladie se caractérise par un
taux faible de levée et un affaiblissement des plantules avant qu’elles aient atteint leurs
maturités [Soutrenon et Perrin, 1988; Richard et Boivin, 1994 in Lazreg, 2014].
48
Parmi les agents responsables de cette pathologie végétale, on peut citer le

champignon Globisporangium sp.
Globisporangium sp est un champignon ubiquiste, vit sur terre (terrestre) et dans l’eau
(aquatique). L’espèce Globisporangium ultimum appartient à la classe des Oomycètes, ordre
des Péronosporales et la famille des Pythiaceae [Lazreg, 2014].
Tableau 6: Description et pouvoir pathogène des souches testées [Assous et al., 1999,
Beddou, 2015]
Groupe de genre Espèce Référe Habitat et mode de

nce contamination
Gram positif, cocci en Stapylococcus aureus ATCC Nez, peau, pénètre par les
grappe de raisin lésions de la peau et des
muqueuses, ingestion de
nourriture contenant de la
toxine
Gram négatif, bacilles, Escherichia coli ATCC Contamination fécale de
nombreuses souches se l’eau, de la nourriture,
distinguant par leurs contacts interhumains,
mécanismes pathogènes ingestion
L’espèce de levure la plus Candida albicans ATCC Tube digestif
importante et la plus
connue du genre Candida.
Champignon unicellulaire,
hétérotrophe
Champignons Fusarium oxysporum Ils sont présents dans les
filamenteux, hétérotrophe. Fusarium solani sols sous forme sporulée
Le principal caractère Globisporangium
morphologique des ultimum
Fusarium est la présence
de macro conidies
fusiformes et cloisonnées.
II.2.3. Les produits alimentaires

1. L’huile de tournesol
L’huile de tournesol est la quatrième huile par ordre d’importance dans le monde, en
raison de son prix par rapport à d’autres huiles comestibles et de sa qualité nutritionnelle. La
consommation d’huile de tournesol a enregistré une forte hausse ces dernières années [Codex
alimentarius, 2013].
49
L’huile de tournesol est extraite des graines d’Helianthus annus. Cette huile présente
une aptitude intéressante à l’oxydation de par sa teneur élevée en acide linoléique (oméga 6)
[Apfelbaum et al., 2009].
2. La viande hachée
Afin d’étudier l’effet antimicrobien de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba, notre
choix s’est porté sur un produit constituant une source importante de germes de contamination
telle que la viande hachée.
La viande est le produit de transformation du muscle après la mort de l’animal. Elle est
traditionnellement considérée comme le véhicule de nombreuses maladies d'origine
alimentaire chez l'homme à cause des défauts d’hygiène. Elle est une denrée alimentaire
hautement périssable [Salifou et al., 2013].
La viande hachée est la viande désossée qui a été soumise à une opération de hachage
en fragments.
II.3. L’extraction de l’huile essentielle de l’Artemisia herba-alba Asso par

hydrodistillation
L’extraction de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba se fait par hydrodistillation.

100g de la partie aérienne de la plante est introduite dans un ballon de 2 litres, imprégné d’eau
distillée, l’ensemble est porté à ébullition; en prenant garde de ne pas chauffer jusqu’à sec.
L’HE s’évapore avec les vapeurs d’eau dégagées qui se condensent en traversant un
réfrigérant puis elle est recueillie à l’autre bout du montage (photo 2). Les vapeurs condensées
obtenus conduisent à deux phases :
 une phase organique contenant HE à laquelle nous avons ajouté un déshydratant,

sulfate de sodium (Na2SO4), afin d’éliminer le peu d’eau susceptible d’avoir été
retenue dans cette phase. L’huile essentielle obtenue est gardée dans des bouteilles en
verre et conservée à 4°C et à l’abri de la lumière.
 une phase aqueuse (hydrolat aromatique) contient une quantité non négligeable d’huile
essentielle.
50
Entrée d'eau
Réfrigérant froide
Sortie d'eau
Ballon
tiède
Source de chaleur
Erlenmayer
Photo 2: Montage d’hydrodistillation employé pour l’extraction de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba
II.4. Cinétique d’extraction et Calcul du rendement en huile essentielle [AFNOR,

1986]
Pour étudier la cinétique d’extraction de l’huile essentielle d’A. herba alba, nous
avons récupéré des quantités de l’HE correspondantes à des intervalles de temps de 30 min.
qui s’étalent de 0 à 4 heures. Les quantités d’huile obtenues vont être exploitées dans le but de
calculer le rendement à chaque intervalle de temps.
Selon la norme AFNOR (1986), le rendement en huile essentielle est le rapport entre
le poids de l’huile extraite et le poids du matériel végétal utilisé. Le rendement, exprimé en
pourcentage (%), est calculé par la formule suivante :
R% = (m1/m0) x 100 d’où
R : rendement en huile essentielle

m1 : masse en grammes de l’huile essentielle
m0 : masse en grammes du matériel végétal
51
II.5. Analyse physique le l’huile essentielle
II.5.1. Détermination de la densité relative
Selon la norme AFNOR (1986), la densité est définie comme étant le rapport de la
masse d’un volume de l’huile essentielle à 20°C et la masse d’un égal volume de l’eau
distillée à la même température.
La densité relative est donnée par la formule suivante :
= m’ / m
m’ : la masse en gramme de l’huile essentielle
m : la masse en gramme de l’équivalent volume en eau dans les mêmes conditions.
II.5.2. Détermination de l’indice de réfraction [AFNOR, 1986]
L’indice de réfraction d’une huile essentielle est défini comme étant le rapport entre le
sinus de l’angle d’incidence et le sinus d’angle de réfraction d’un rayon lumineux de longueur
d’onde déterminée, passant de l’air dans l’huile essentielle maintenue à une température
constante. La détermination se fait grâce à un réfractomètre.
1. Protocole expérimental
 Faire passer un courant d’eau dans le réfractomètre afin de maintenir l’appareil

à la température à laquelle les lectures doivent être effectuées.
 Ajuster l’appareil de manière à donner à la température de 20°C, l’indice de
réfraction 1.3330 pour l’eau distillée.
 Avant de le placer dans l’instrument, porter l’échantillon pour essai à une
température à peu près égale à celle à laquelle le mesurage doit être effectué.
2. Expression des résultats
L’indice de réfraction, nDt à la température de référence t, est donné comme suit :
= + 0.0004 (t’ – t)
52
’
est la valeur de la lecture, obtenue à la température t’, à laquelle a été effectuée la
détermination
II.6. L’analyse qualitative de l’huile essentielle de l’armoise blanche
L’huile essentielle de l’armoise blanche a été étudiée en utilisant un

chromatographe HP (Agilent technologies) MDS 5973 couplé à un spectromètre de masse
6890, plus, équipée de colonne capillaire de silice fondue HP-5MS (30m; 0,25 mm id;
épaisseur de film 0,25 um). Les conditions opératoires étaient les suivantes: température de
l'injecteur a été maintenue à 250°C. L'hélium a été utilisé comme gaz porteur (0,5 ml / min),
le volume d'injection était de 0.2μl, rapport de division est ajusté à 1:20, la température du
four a été programmée à partir de 60 (8 min) à 280°C à raison de 2°C/min et ensuite maintenu
de façon isotherme à 280 ° C pendant 10 min. Mode d'analyse: numériser, la température de
l'interface: 280°C, le type d'ionisation: électronique, l'intensité du filament: 70eV, type
d'analyseur de masse: quadripôle, la température Source: 230°C, vide: 65m torr.
II.7. Etudes in vitro des activités biologiques
II.7.1. Evaluation de l’activité antioxydante
Les antioxydants sont devenus un sujet d’intérêt croissant récemment. Une recherche
documentaire a révélé que le nombre de publication sur les antioxydants et le stress oxydatif à
presque quadruplé ces dernières années [Huang et al., 2005].
Un antioxydant est « une substance naturelle ou synthétique ajoutée aux produits pour
prévenir ou retarder leur détérioration par action de l’oxygène de l’air ».
Sur la base des réactions mises en jeu, les principaux tests chimiques d’évaluation de la
capacité antioxydante in vitro peuvent être divisés en deux types [Huang et al., 2005 ;
Karadag et al., 2009]:
 Les dosages basés sur le transfert d’atome d’hydrogène;
ROO● + AH ROOH + A●
ROO●: radical libre

AH: antioxydant (donneur d’atome d’hydrogène)
53
ROOH: radical libre stable

A●: antioxydant stable
 Les dosages basés sur le transfert d’électron
M(n) + e (de AH) AH + M(n-1)
M(n) : oxydant (capteur d’électron)
Pour évaluer la capacité antioxydante de l’huile essentielle testée on a utilisé deux

méthodes, à savoir: le piégeage du radical 2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) et le
pouvoir réducteur de l’ion ferrique (FRAP).
II.7.1.1. Essai de piégeage du radical libre DPPH

1. Principe
DPPH, connu officiellement comme le 2,2-diphényl 1- picrylhydrazyl, est un radical
libre stable qui est couramment utilisé pour évaluer la capacité des composés à agir comme
piégeurs de radicaux libres ou des donneurs d’hydrogène et de mesurer l’activité antioxydante
des extraits. La réaction du DPPH avec un antioxydant ou un composé réducteur peut être
suivie par le changement de couleur de pourpre au jaune (absorbance à 515 – 528nm)
[Arulpriya et al., 2010].
Diphenylpicrylhydrazyl Diphenylpicrylhydrazine
Figure 12: Réaction du DPPH avec un antioxydant [Molyneux, 2004]
54
2. Mode opératoire
Dans ce test, le DPPH de couleur violette se réduit en un composé jaune, le

diphénylpicrylhydrazine, dont l’intensité de la couleur est inversement proportionnelle à la
capacité réductrice des antioxydants présents dans le milieu [Amarti et al., 2011].
1 ml d’une solution 1mM de DPPH dans du méthanol a été mélangé avec 3 ml d’huile
essentielle à tester à différentes concentrations. Les échantillons d’huile essentielle ont été
préparés par dissolution dans le méthanol à raison de 500μg/ml. Cette solution, dite solution
mère, a subis ensuite des dilutions pour avoir les concentrations suivantes : 250, 125, 62.5,
31.25µg/ml. Ces mêmes concentrations ont été préparées avec le BHT pour servir en tant que
témoin positif. On réalise également un blanc avec l’éthanol absolu seul. Pour chaque
concentration, le test est répété trois fois. Les échantillons sont ensuite laissés à l’obscurité
pendant 30 minutes, et la décoloration par rapport au témoin négatif contenant uniquement la
solution du DPPH est mesurée à 517 nm. Le pourcentage d’inhibition du radical DPPH est
calculé comme suit :
% inhibition= [(A control – A test)/A control] X 100
A control: Absorbance du DPPH
A test : absorbance de l’échantillon
Le graphique de la variation du pourcentage d’inhibition en fonction de la

concentration de l’huile essentielle permet de déterminer la IC50 (autrement appelée EC50,
concentration correspondant à 50 % d’inhibition et qui constitue l’activité antioxydante de
l’huile essentielle). Cette valeur est comparée à celle trouvée pour le composé de référence ;
BHT [Bouhdid et al., 2008; Amarti et al., 2011; Mansouri et al., 2011].
II.7.1.2. La méthode de réduction de fer « Ferric Reducing Antioxidant Power

(FRAP) »
1. Principe
Les substances qui ont un potentiel de réduction, réagissent avec le ferricyanure de

potassium (Fe3+) pour former le ferrocyanure de potassium (Fe2+) qui réagit ensuite avec le
chlorure ferrique pour former un complexe ferreux ferrique qui a un maximum d’adsorption à
700 nm [Arulpriya et al., 2010; Jayanthi et Lalitha, 2011].
55
Antioxydant
Ferricyanure de potassium + Chlorure ferrique Ferrocyanure de potassium +

chlorure ferreux.
2. Préparation de l’échantillon
 On a pris quatre doses de l’huile essentielle : 5, 10, 16 et 20 µl

 On a ajouté 1ml d’eau distillée à Chaque dose.
3. Préparation de la solution tampon
Le tampon phosphaté est préparé comme suit
 Diluer 31.2 g de NaH2Po4 2H2O à 1000 ml tampon A phosphaté

 Préparer tampon B phosphate en diluant 53.64 g de Na2HPo4 7H2O à 1000ml.
 Mélanger 62.5 % de tampon A ave c 37.5% de tampon B.
 Ajuster le pH à l’aide de Na OH et H3PO4.
4. Mode opératoire
Dans un tube à essai contenant 1ml de chaque concentration de l’huile essentielle de

l’armoise blanche, on a ajouté 0.5 ml de tampon phosphate (0.2 M, pH 6.6) et 2.5 ml
d’hexacyanoferrate de potassium (10 g/l). Le tube est chauffé à 50°C pendant 20 min. dans un
bain marie. Un volume de 2.5 ml d’acide trichloracétique (100 g/l) est ajouté au mélange qui
est centrifugé à 3000 tours/min pendant 10min. Enfin, 2,5 ml du surnageant ont été mélangé
avec 2.5 ml d’eau distillée et 0.5 ml de chlorure ferrique (1 g/l). Un contrôle sans échantillon
est préparé dans les mêmes conditions. La lecture est mesurée à 700 nm. L’acide ascorbique
est utilisé comme témoin positif [Bouhdid et al., 2008; Arulpriya et al., 2010].
56
Solution DPPH Solution testée [Xµg/ml]
méthanol
Préparation des dilutions de HE et du BHT
1 ml 3 ml
SM = 500 µg/ml
C1 = 250 µg/ml
C2 = 125 µg/ml
C3 = 62,5 µg/ml
C4 = 31,25 µg/ml
Repos 30 min.
Lecture de la densité optique à 517 nm
Figure 13: Schéma récapitulatif du test au DPPH
II.7.2. Etude de l’activité antimicrobienne

II.7.2.1. Evaluation de l’activité antimicrobienne
Dans la présente étude de l’activité antimicrobienne in vitro de l’HE d’A. herba alba
contre Escherichia coli (ATCC 25922), Staphylococcus aureus (ATCC 25213) et Candida
albicans (ATCC 10231) a été évaluée qualitativement et quantitativement par la méthode de
diffusion sur disque (aromatogramme) pour tester la sensibilité des souches et ensuite par la
méthode de micro-dilution pour déterminer les valeurs de CMI.
II.7.2.1.1. Préparation de la concentration de l’huile essentielle
La concentration de l’huile essentielle d’A. herba alba appliquée dans cette étude a été
choisie d’après des essais préliminaires sur l’efficacité de différentes concentrations sur les
microorganismes testés.
57
Pour solubiliser l’huile essentielle, on a utilisé le dimethylsulfoxyde (DMSO) qui ne

possède aucune efficacité antimicrobienne.
Les huiles essentielles sont généralement très peu solubles dans l’eau, ce qui rend leur
étude biologique et pharmacologique difficile, pour résoudre ce problème plusieurs auteurs
suggèrent l’utilisation des solvant organiques comme l’acétone, DMSO ou l’utilisation des
produits émulsifiants (tension actif comme le tween 20 ou tween 80) pour aider l’huile
essentielle de se solubiliser dans le milieu de culture [Duraffourd et Lapraz, 2002 in
Khebri, 2011].
II.7.2.1.2. Préparation des suspensions microbiennes (inoculum)

Les souches microbiennes testées sont repiquées dans des tubes à essai contenant
environ 9 ml de bouillon nutritif (BN) et incubées pendant 18 heures afin d’obtenir une
culture jeune. Après homogénéisation des suspensions microbienne, leurs opacité doit être
équivalente à 0.5 Mc Farland ou à une densité optique de 0.08 à 0.1 lue à 625 nm. Cette
densité est ajustée en ajoutant du milieu de culture (BN) si elle est trop élevée, correspond à
1.5 x 108 c/ml, ou en incubant davantage les souches si jamais elle est trop faible.
II.7.2.1.3. L’antibiogramme
L’antibiogramme repose sur le principe de la compétition entre la croissance d’une bactérie
et la diffusion d’un antibiotique dans un milieu gélosé à partir d’un support papier pré
imprégné. Le but de la réalisation d’un antibiogramme est de prédire la sensibilité d’un germe
à un ou plusieurs antibiotiques.
58
Souche
Préparation de l’inoculum
Ajustement de la turbidité de l’inoculum à l’étalon de Mac Farland

Pour obtenir après 18 heures d’incubation une culture de colonies semi-confluentes
Ensemencement des boites (Milieu: Mueller Hinton)
Par écouvillonnage Par inondation
Séchage à température ambiante
Application des disques d’antibiotiques à la pince flambée
Pré diffusion de 30 min à température ambiante
Incubation à 37°C/ 18 heures couvercle en dessous
Lecture : Mesurer les diamètres des zones d’inhibition

Interprétation des résultats
Figure 14: Réalisation pratique de l’antibiogramme par diffusion [ fauchère et Avril,

2002]
II.7.2.1.3.1. La méthode de l’aromatogramme
Appelée aussi la méthode de diffusion des disques, la méthode de l’aromatogramme est

la technique choisie pour déterminer l’activité antibactérienne de l’huile essentielle à tester à
cause de son large utilisation par les chercheurs.
59
1. Principe
La technique de l’aromatogramme utilise des disques de papier buvard imprégnés
d’une concentration donnée de l’huile testée. Ces disques sont déposés à la surface d’une
gélose spécifique (Mueller Hinton) coulée en boites de Petri uniformément ensemencée d’une
suspension microbienne. Cette méthode nous permet de mettre en évidence l’effet
antimicrobien de l’huile essentielle sur la souche étudiée. Ainsi la souche sera qualifiée de
sensible, très sensible, extrêmement sensible ou résistante [Amhis et al., 2001].
 Couler aseptiquement le milieu de culture gélosé Mueller Hinton (M.H) en

surfusion dans des boites de Pétri à raison de 15 ml par boite. On laisse refroidir et
solidifier sur la paillasse, 1ml de solution standardisée d’inoculum (0.8 à 1 X 108)
est versé dans chaque boite puis uniformément reparti. Toutes les boites sont
laissées sécher pendant 5 min.
 L’huile essentielle a été préparée à une concentration de 20 mg/ml avec le DMSO.
 Des disques stériles en papier (6 mm de diamètre) sont imprégnés avec 5 µl de HE à
la concentration de 20 mg/ml en mettant seulement en contact le bout du disque,
celui-ci va absorber progressivement l’huile essentielle jusqu’à l’imprégnation
totale du disque, puis déposer sur la gélose.
 Les boites de Petri étaient maintenues pendant 15 min. à température ambiante puis
incubées à 37°C pendant 24 h. Chaque essai a été réalisé en triplicata pour chaque
espèce bactérienne.
 L’activité antibactérienne de l’huile essentielle d’A. herba alba est comparée avec
des antibiotiques (Tableau 7), qui ont été utilisés en tant que témoins positifs
[Djenane et al., 2012].
Tableau 7: antibiotiques d’antibiogramme
Antibiotique (standard) Concentration (µg)

Pénicilline (G) 10
Aztreonam (ATM) 30
Colistine (CT) 10
Oxacilline (OX) 5
Gentamicine 10
60
3. expression des résultats
L’activité antibactérienne et anti candida de l’huile essentielle a été mise en évidence

par la mesure de diamètre de la zone d’inhibition autour des disques.
La sensibilité des souches testées envers l’huile essentielle est classée selon les diamètres des
halos d’inhibition [Ponce et al., 2003]:
 diamètre < 8mm: non sensible (-) ou résistante

 diamètre compris entre 9 à 14 mm: sensible (+)
 diamètre compris entre 15 à 19 mm: très sensible (++)
 diamètre > 20 mm: extrêmement sensible (+++).
II.7.2.1.4. Détermination de la Concentration Minimale Inhibitrice « CMI »
La sensibilité d’une bactérie est mesurée par la concentration minimale inhibitrice de

l’antibiotique considéré. C’est la méthode de référence préconisée par l’OMS [Amhis et al.,
2001].
La CMI ou concentration minimale inhibitrice, est la concentration la plus petite d’un

antibiotique qui empêche les bactéries de se multiplier. C’est le paramètre le plus utilisé pour
mesurer in vitro l’activité d’un antibiotique ; elle s’exprime en mg/l [Fauchère et avril, 2002;
Toutain, 2010]. Elle est définie par le Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de
Microbiologie (CA-SFM) comme étant la plus faible concentration d’une gamme de dilutions
d’antibiotique de demi en demi qui entraîne l’inhibition de toute croissance bactérienne
visible [Nelly et Anthony, 2003].
La CMI a été réalisée par le procédé décrit ci-dessous sur les souches testées qui ont
montré une sensibilité vis-à-vis de l’huile essentielle par la méthode de diffusion sur disque.
II.7.2.1.4.1. Méthode de Microdilution (méthode standard)
La microdilution est généralement effectuée dans des plaques de microtitration à 96

puits à fond arrondi. Le seuil de lecture ou concentration minimale inhibitrice est
61
normalement lu comme la première dilution qui ne montre pas de croissance visible

[Kahlmeter et Turnidge, 2012].
La cinétique de croissance est réalisée en microplaque de 96 puits, pour chaque germe on a

réalisé trois essais (test en triplicata).
 Dans chaque puits, on a introduit 50 µl de bouillant nutritif, par la suite, dans le

premier puits on a ajouté 50 µl de la concentration préparée de l’huile essentielle
testée. On a pris 50 µl du mélange (Bouillon + H.E.) et on les a mis dans le 2ème puits
et à partir de ce dernier, on a transféré 50 µl du mélange dans le 3ème puits et ainsi de
suite jusqu’à le 12ème puits afin de réaliser une série de dilution à ½ (figure 13);
 La dernière étape est l’ajout de 50 µl de chaque suspension microbienne ajusté à 0.5
Mac Farland dans chaque puits;
 Pour le test témoin le puits est rempli par 50 µl du bouillon nutritif et 50 µl de la
suspension microbienne ajustée;
 Les microplaques sont recouvertes par un papier aluminium stérile et incuber aux
différentes températures de croissances des souches testées.
2. Lecture des résultats
La lecture des résultats est faite par le suivie spectrométrique de la cinétique de la

croissance microbienne mesurable à 620 nm, à l’aide à un lecteur ELISA, pour déterminer la
concentration des germes (UFC/ml).
62
50 µl BN dans
chaque puits
50 µl
50 µl BN +
50µl HE
50 µl de
suspension
microbienne
dans chaque
puits
Figure 15: Schéma simplifié de la méthode de microdilution
II.7.2.2.. Tests antifongiques [Dohou et al., 2004; Mohammedi, 2006; Khaladi et

al., 2012]
II.7.2.2.1. Test de la croissance mycélienne
Les isolas fongiques sont cultivés sur un milieu PDA pendant sept jours à 25°C. Le
choix des concentrations de l'huile essentielle est effectué sur la base des essais préliminaires
(Planche 5, Annexe 2). Un volume approprié de l’huile essentielle (0.12 ml) est ajouté au
milieu PDA stérile encore liquide sous agitation afin d’obtenir les concentrations finales de
1000 ppm, 500 ppm et 250 ppm. La dispersion de l’HE dans le milieu a été facilitée par
l’ajout de 0.2% de tween 80. Après solidificationdu milieu de culture dans des boîtes de Petri
(15 ml / boîte), les disques mycéliens de 1cm de diamètre, issue d’une culture âgée de 7 jours
de chaque souche fongique sont déposés au centre de chaque boîte de Petri. Les boites de
contrôle contenant le milieu de culture et le disque de mycélium de chaque isolat sans huile
essentielle ont été réalisées. Chaque essai est répété trois fois. Après incubation à 25 ° C
63
pendant 7 jours, en tenant compte de la croissance du témoin, le pourcentage d'inhibition (PI)

est calculé par la formule suivante:
PI% = [dT-dE / dT] × 100
Où : PI (%): pourcentage d'inhibition,
dT: Diamètre moyen de la zone de croissance du témoin
DE la croissance: le diamètre moyen de la zone de croissance de l'essai.
II.7.2.2.2. Test de sporulation
Des disques de 05 mm de diamètre sont prélevés à la bordure des souches âgées de 10

jours ayant servi pour la croissance mycélienne et ont été mis dans un tube contenant 1 ml
d'eau distillée. La suspension fongique est ensuite agitée à l'aide d’un vortex afin de libérer les
spores des conidiophores. Ces expériences sont répétées trois fois. Après avoir compté le
nombre total des spores en utilisant une cellule de Malassez à un taux de 10 comptages par
suspension, les valeurs sont exprimées en nombre de spores par unité de surface (mm2).
Le pourcentage d'inhibition de la sporulation (IS %) est calculée par la formule suivante:
IS% = [N0 – Nc / N0] × 100
Où :
N0: le nombre moyen de spores estimés pour le témoin
Nc: le nombre moyen estimé en présence de l’huile essentielle
64
II.7.2.2.3. Test de la germination conidienne
La suspension recueilli des spores est ajustée à un taux de 105 spores / ml d'eau
distillée en utilisant une cellule de Malassez. Nous diffusons 0,1 ml de cette suspension sur
des boîtes de Pétri contenant du milieu de PDA additionné de l'huile essentielle aux mêmes
concentrations mentionnées précédemment. Trois répétitions sont effectuées simultanément
pour chaque concentration. Le comptage des spores germées ou non a été réalisé sur un total
de 200 spores après 5 à 18 heures d'incubation à 25 °C. Une spore est considéré germée si la
longueur du tube germinatif est supérieure à son plus petit diamètre.
Pourcentage d'inhibition de la germination des spores (Ig%) est donné selon la formule
suivante:
Ig% = [N0 - Nc / N0] × 100
Où: N0: le nombre de spores ayant germé dans le milieu de culture sans huile essentielle
(contrôle),
Nc: le nombre des spores germées en présence d'huile essentielle
II.7.3. Essais d’application de l’huile essentielle dans les produits alimentaires
De nombreuses études ont été publiées sur les activités biologiques des huiles
essentielles, mais la plupart de ces activités sont inconnues dans les conditions associées au
processus de transformation des aliments telles que la cuisson, friture, conservation,…..
Donc il est nécessaire de déterminer les capacités de ces huiles dans ces conditions.
II.7.3.1. Evaluation de la stabilité oxydative de l’huile de tournesol
L’évaluation de la stabilité oxydative des corps gras peut répondre à plusieurs objectifs
tels que:
 l’évaluation de l’efficacité des antioxydants;

 la résistance d’une matière grasse à l’oxydation ;
 la conformité à un cahier de charge ;
 la détermination de la durabilité d’un corps gras [Rahmani, 2007].
65
Plusieurs techniques sont utilisées pour le dosage des produits d’oxydation telles que :
 la détermination de l’indice de peroxyde ;

 la détermination de l’absorbance spécifique en rayonnement ultraviolet [AFNOR,
1988].
Pour obtenir une meilleure image de la stabilité de l’huile, il est recommandé que l’huile
doive être chauffée dans des conditions contrôlées (temps/température).
Le chauffage de l’huile végétale présente un double intérêt :
 accélérer l’oxydation des huiles: la température est un facteur favorisant l’oxydation ;

 voir si le chauffage peut avoir un effet négatif (peut altérer le pouvoir antioxydant) sur
l’huile essentielle.
II.7.3.1.1. Préparation des échantillons de l’huile de tournesol
Différentes dose (0.02, 0.04, 0.06, 0.08g) de l’huile essentielle ont été additionnées à
100ml d’huile de tournesol. Le choix de ces doses est effectué de telle façon qu’elles
n’altèrent pas les caractéristiques organoleptiques (couleur, odeur) de l’huile de tournesol. Les
échantillons ainsi préparés ont subi un traitement thermique à 180°C pendant 1heure. Ce
traitement thermique permet d’accélérer la vitesse de l’oxydation de l’huile de tournesol.
Nous avons procédé à une comparaison avec un antioxydant usuel le α Tocopherol.
Le suivi de l’état oxydatif de l’huile de tournesol est réalisé par la mesure de l’indice de
peroxyde et la détermination de l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet entre 225
et 320 nm.
II.7.3.1.2. Détermination de l’indice de peroxyde [AFNOR, 1988]
1. Définition
On entend par indice de peroxyde d’un corps gras le nombre de microgrammes actif
du peroxyde contenu dans un gramme de produit et oxydant l’iodure de potassium avec
libération d’iode dans les conditions de la méthode décrite.
66
2. Principe
Traitement du corps gras, en solution dans de l’acide acétique et du chloroforme, par

une solution d’iodure de potassium.
Titrage de l’iode libéré par une solution titrée de thiosulfate de sodium.
3. Mode opératoire
A une prise d’essai de 2 g, on ajoute 10 ml de chloroforme, 15 ml d’acide acétique

pure et 1 ml de solution d’iodure de potassium saturée. Le flacon est bouché, agité et laissé à
l’abri de la lumière pendant 5mn. Il s’ensuit une libération d’iode par action de peroxyde sur
l’iodure de potassium. 75 ml d’eau distillée sont ajoutés avec quelques gouttes d’empois
d’amidon puis on titre avec une solution de thiosulfate de sodium 0.01N.
Parallèlement et simultanément, on a préparé sans l’utilisation de corps gras un essai à blanc.
L’indice de peroxyde (Ip) est exprimé en milliéquivalents d’oxygène actif par kilogramme de
corps gras selon la formule suivante:
IP = [V x T/ E] x 1000 d’où
V: le volume de la solution de thiosulfate de sodium utilisée pour l’essai, corrigé compte tenu
de l’essai à blanc, exprimé en millilitres de solution.
E : la masse, en grammes, de la prise d’essai.
II.7.3.1.3. Détermination de l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet

[AFNOR, 1988.]
1. Principe
Mesurage spectrophotométrique, en rayonnement ultra-violet, dans un domaine

spécifié de longueur d’onde, de l’absorbance d’un échantillon de corps gras en solution dans
un solvant.
67
2. Mode opératoire
Dans une fiole jaugée de 25ml, dissolvez une prise d’essai (0.05g à 0.25g) avec quelques
millilitres de cyclohexane et complétez jusqu’au trait repère avec le même solvant. Puis vous
mesurez l’absorbance de la solution de matière grasse, dans une cuve en quartz, par rapport à
celle du solvant, à l’aide du spectrophotomètre à des longueurs d’onde comprises entre 225 et
320nm.
L’absorbance spécifique d’une solution à la concentration de 1% mesurée en utilisant un

parcours optique de 1cm à une longueur d’onde λ, est donnée par la formule:
= A(λ) /c x d
où:
 A(λ) est l’absorbance à la longueur d’onde λ

 c est la concentration, en gramme pour 100ml, de la solution.
 d est la concentration, en centimètre, de la solution placée dans la cuve.
II.7.3.2. Evaluation de la stabilité microbienne de la viande hachée
Un intérêt particulier a été manifesté ces dernières années pour les huiles essentielles
qui constituent une alternative effective pour les produits de conservation chimique.
Toutefois, l’application pratique des huiles essentielles dans les aliments est limitée parce que
leur efficacité est modérée en raison de l’interaction avec les ingrédients alimentaires et la
structure de l’aliment et leur toxicité.
L’objectif de cette recherche est de mettre en évidence la capacité antimicrobienne de

l’huile essentielle de l’armoise blanche appliquée sur une viande hachée bovine.
Cette étude est réalisée selon la méthodologie suivante (figure16) :

 Préparation des échantillons
 Appréciation organoleptique
 Analyse microbiologique
68
HE Viande hachée
Préparation des échantillons pour essai
Echantillon témoins Echantillons additionnés de l’HE
100 g de viande hachée non traitée 100 g de viande hachée 100g de viande hachée
+ 5 µl de l’HE + 20 µl de l’HE
Conservation des échantillons dans des récipients en

verre à température ambiante (conditions d’altération)
pendant 6 jours
Appréciation sensorielle (couleur, odeur et exsudat
Prélèvement des échantillons élémentaires pour

l’analyse microbiologique
Figure 16: Schéma récapitulatif de la méthodologie expérimentale suivie pour l’étude de

l’effet de l’huile essentielle sur la stabilité microbiologique de la viande hachée
69
1. Préparation des échantillons

500 grammes de viande hachée bovine sont achetés chez un bouché local dans la ville
de Mascara, puis transportés au laboratoire de la faculté des sciences da la nature et de la vie
dans les 15 min. qui en suivit l’achat et maintenu environ une heure à 4 °C. Ensuite
l’échantillon global est divisé en trois parties de 100 g. Deux parties ont été mélangées avec
un volume approprié de l’HE: 5µl et 20µL. Le choix de ces doses est effectué de telle façon
qu’il n’altère pas les caractéristiques organoleptiques de la viande car l’utilisation des huiles
essentielles dans les aliments est limitée par leurs propriétés sensorielles. Un échantillon
témoin n’a subit aucun traitement. Les échantillons ont été placés dans des récipients en verre
et stockés à la température ambiante afin de créer les conditions favorables à l’altération de la
viande hachée
2. Appréciation sensorielle
Une attention particulière a été accordée à la couleur, l’odeur anormale et la présence
de l’exsudat afin de suivre l’état d’altération de la viande hachée.
3. Analyse microbiologique [Leclere et al., 1995; Journal officiel N° 35, 1998;

Oumokhtal et al., 1998; Bonnefoy et al., 2002; Barthe et al., 2003; Guiraud, 2003]
3.1. But
Analyser la viande hachée cru en déterminant les microorganismes qu’elle contient et en
appréciant l’effet de l’huile essentielle sur sa contamination totale (Figure 17).
3.2. Principe
Le principe consiste en premier lieu à faire isoler la population microbienne qui se trouve
dans la viande hachée en présence ou en absence de l’huile essentielle, puis faire étaler les
différentes dilutions préparées à partir de la suspension mère sur différents milieux de cultures
pour favoriser la croissance de telle ou telle population qui se trouve dans nos échantillons, et
par la suite ça va nous donner une idée sur l’état microbiologique de notre produit.
3.3. Mode opératoire

Les paramètres microbiologiques de la viande hachée recherchés sont:
 Germes aérobies à 30°C ;
 Coliformes fécaux ; Escherichia coli ;
 Staphylococcus aureus ;
70
 Clostridium sulfito reducteur à 46°C
 Préparation des dilutions décimales AFNOR NFV08 010 de 1996/ ISO 6887
de 1983
10 g de viande hachée est mélangés avec 90 ml de l’eau peptonée tamponnée. Le mélange est
agité à l’aide d’un vortex puis laissé reposer pendant une heure à température ordinaire
(revivification).
Effectuer à partir de cette suspension les différentes dilutions décimales.
Prélever aseptiquement 1 ml de la solution mère, mettre le dans un tube contenant 9 ml d’eau
tamponnée, ce qui fait la dilution à 10-2. Après homogénéisation, reprendre 1 ml de la
première dilution, mettre le dans un autre tube qui contient 9 ml d’eau tamponnée, pour
obtenir la dilution 10-3 et ainsi de suite jusqu’à l’obtention de la dilution 10-6.
 Recherche et dénombrement de la flore aérobie mésophile totale (FAMT)

ISO 04833
La flore aérobie mésophile reflète la qualité microbiologique générale d’un produit
naturel et permet d’en suivre l’évolution. Le nombre de germes totaux pourra donner une
indication de l’état de fraîcheur ou de l’état de décomposition du produit: il peut aussi dans
certains cas constituer un indicateur de qualité sanitaire. Un nombre de germes peut être
compatible avec un produit sain alors qu’un petit nombre de germes peut correspondre à un
produit dangereux.
Le dénombrement de cette microflore est réalisé par la méthode d’ensemencement en
surface sur gélose PCA. L’incubation est conduite à 30°C pendant 72 heures (Figure 17).
Le dénombrement est exprimé en unité formant colonie par gramme. Pour calculer le
nombre de microorganismes par unité d’échantillon, on a appliqué la formule suivante :
∑
N= X
∑ : Nombre total de colonies comptées sur les boites retenues;

n1 : nombre de boites comptées à la dilution retenue la plus faible ;
n2 : nombre de boites comptées à la seconde dilution retenue ;
d : facteur de dilution à partir duquel les premiers comptages sont réalisés: la dilution la plus
faible ;
71
V : volume de la prise d’essai inoculé en ml.

Cette formule est valable aussi pour le dénombrement des autres germes étudiés.
 Recherche et dénombrement des coliformes fécaux et d’Escherichia coli

Les coliformes sont définis comme des entérobactéries fermentant rapidement le lactose et
leur mise en évidence est basée sur ce principe.
La fermentation du lactose en acide est révélée, en présence de pourpre de bromocrésol
(BCP), par le virage du bleu violacé au jaune.
Parmi les coliformes totaux, il existe un sous-groupe de bactéries, « les coliformes
fécaux » (coliformes thermotolérants) et en particulier une espèce, « Escherichia coli », qui
indiquent une contamination fécale puisqu’ils sont présents en grand nombre dans le tube
digestif des animaux supérieurs et de l’homme.
Les coliformes fécaux sont dénombrés par comptage de colonies sur milieu solide (milieu
hecktoen). Après incubation à 44°C pendant 24, les colonies jaune saumon ayant poussées
dans les boites de pétri sont comptées.
 Recherche et dénombrement de Staphylococcus aureus

Les Staphylocoques peuvent signaler des contaminations humaines par manipulation ou
par voie aérienne, ou une contamination originelle d’un produit animal.
Les intoxications alimentaires sont en majorité causées par S. aureus. Etant
thermosensible, les souches de cette dernière sont détruites au cours de la pasteurisation ou de
la cuisson des aliments; cependant, les entérotoxines thermostables peuvent résister si elles
ont été préalablement synthétisées.
Dans des boites de pétri contenant le milieu sélectif Chapman, 0.1ml des dilutions 10-5 et
10- 6 sont ajoutés. L’inoculum ainsi préparé est étalé et les boites sont ensuite retournées et
incubées à 37°C pendant 24heures.
Le milieu Chapman est recommande pour l’isolement des bactéries appartient au genre
Staphylococcus. La forte concentration en chlorure de sodium inhibe la croissance de la
plupart des bactéries autres que les Staphylocoques.
72
 Recherche des spores d’anaérobies sulfito-réducteur

Les germes anaérobies sulfito réducteurs sont des hôtes normaux de l’intestin, mais ils
peuvent se rencontrer également dans le sol et dans les matières organiques en voie de
putréfaction.
Les anaérobies sulfito réducteurs se présentent sous forme de Bactéries Gram+, se
développant sur gélose viande foie en donnant des colonies typiques réduisant le sulfite de
sodium (Na2SO3) qui se trouve dans le milieu, en sulfure qui en présence de Fe+2 donne FeS
(sulfure de fer) de couleur noire.
La suspension bactérienne mère est traitée par un choc thermique à 80°C pendant 10 min.,
puis refroidie immédiatement dans l’eau froide. Ce traitement thermique sert à tuer toutes les
formes végétatives et récupérer la forme sporulée. 1 ml de cette suspension est ajouté à 5 ml
de gélose Viande Foie, fondue puis refroidie à 45°C ± 1°c, additionnée d’une ampoule d’Alun
de fer et d’une ampoule de sulfite de sodium. Le milieu de culture et l’inoculum sont agités
doucement pour éviter la formation de bulles d’air. Les tubes sont incubés à 37°C pendant 24
à 48 Heures.
3.4. Identification de E coli [Guiraud, 2003]
L’identification d’un microorganisme ne peut avoir lieu que lorsqu’il a été isolé à
l’état pur. Les technique utilisées pour l’identification sont nombreuses et varient en fonction
de la nature du germe étudié.
L’identification d’E coli est basée essentiellement sur l’étude des caractères suivants, dont
les principaux concernent la mobilité, l’utilisation des sucres et les caractères : Indole, Citrate
(Annexe 1).
1. Mobilité
Elle est étudiée par un examen microscopique à l’état frais ou par l’utilisation de la gélose
mannitol-mobilité, qui permet aussi de tester l’utilisation du mannitol.
1.1. Etat frais
Cette préparation consiste à examiner le microorganisme vivant en milieu liquide entre
lame et lamelle. Cet examen permet d’apprécier la forme et parfois la mobilité des germes
étudiées.
2. Coloration différentielle de Gram
La coloration différentielle la plus connue est celle de Gram, qui permet de diviser les
bactéries en deux groupes ; Gram+ et Gram-. Celles qui retiennent le violet de gentiane après
lavage à l’alcool sont Gram+; celles qui sont décolorées et prennent ensuite la couleur d’un
second colorant sont dites Gram- .
73
3. Mise en évidence des enzymes respiratoires

Oxydases: elles sont mises en évidence par leur propriété de catalyser la réaction d’oxydation
d’un substrat organique par l’oxygène de l’air. Le substrat utilisé est l’oxalate de N-diméthyl
paraphénylène diamine.
4. Fermentation avec ou sans gaz, utilisation du lactose et production d’H2S
Cette étude est réalisée, soit sur des milieux distincts, milieu MEVAG additionné de
glucose, soit sur des milieux combinés spécifiques des Enterobactéries, le milieu TSI.
5. Dégradation de l’urée et production d’indole
Le milieu urée indole de Fergusson permet d’étudier simultanément la dégradation de l’urée
et la production d’indole.
6. Utilisation du citrate
Elle est testée par culture sur le milieu gélosé incliné de Simmons. Le citrate est la seule
source de carbone : son utilisation se traduit par une alcalinisation du milieu.
II.8. Analyse statistique
Toutes les expériences ont été réalisées en triplicata et les résultats sont présentés sous
formes de valeur moyennes ± écart-type. L’analyse statistique des données a été effectuée par
analyse de variance (Anova) et le test de PPDS de Scheff. Une valeur de probabilité de p 1% a
été considérée pour désigner une différence significative entre les valeurs moyennes des
résultats obtenus.
74
Préparation des solutions mères: 10 g de l’échantillon + 90 ml d’eau tamponnée
Témoin Viande + 5 µl HE Viande + 20µl HE
Préparation des dilutions décimales : 1 ml de l’échantillons + 9 ml eau tamponnée
1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Solution mère 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6
Isolement sur différents milieux de culture pour le dénombrement des flores

indicatrices de la qualité sanitaire et la recherche des bactéries responsables de
toxiinfection alimentaire
Milieu non Milieu sélectif Isolement sélectif des ASR

sélectif
PCA Hecktoen VF + alun de fer

BCP Chapman + sulfite de sodium
Incubation (37°C - 44°C /24 -48-72H)
Observation macroscopique et dénombrement des colonies
Figure17: Schéma récapitulatif des étapes de l’analyse microbiologique de la viande

hachée additionnée de l’huile essentielle de l’armoise blanche
75
Partie III: Résultats et discussion
III. Résultats et discussion
III.1. Cinétique d’extraction et rendement en l’huile essentielle d’Artemisia herba

alba
La durée d’extraction est le temps nécessaire à la récupération de la totalité de l’huile

contenue dans la matière végétale. Lors de cette étude, un suivi de la cinétique a été réalisé sur
l’extraction de l’huile essentielle.
La figure 18 présente l’évolution du rendement en huile essentielle d’armoise blanche

en fonction du temps.
Cette étude a pour but de fixer le temps nécessaire pour extraire le maximum d’huile et
pour éviter les pertes de temps et d’énergie.
L’huile essentielle est extraite à partir de la partie aérienne de l’armoise blanche par la
méthode d’hydrodistillation. Le suivi de la cinétique d’extraction de l’huile essentielle indique
que le rendement augmente en fonction du temps puis il tend à se stabiliser à partir de 3
heures et demi. On estime donc que le temps optimum de cette hydrodistillation est d’environ
3 heures.
1
0,9
0,8
0,7
0,6
Rendment %
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220 240
Temps (min)
Figure 18: Cinétique d’extraction de l’huile essentielle d’A herba alba par
hydrodistillation
76
Le rendement en huile essentielle atteint un maximum de 0.932 %. Des rendements

comparables sont obtenus chez les échantillons d’armoise blanche de différentes régions en
Algérie (de 0.2% à 0.95%) [Bezza et al., 2010 ; Belhattab et al., 2012]. Les mêmes
variations du rendement d'huile essentielle d’armoise blanche ont été notées en Espagne
(0,41% à 2,30%) [Salido et al., 2004].
Il semble donc que le rendement d’extraction d'huile essentielle de l’armoise blanche

est variable suivant l’origine géographique de la plante; En Tunisie (0.68% à 1.93%)
[Mohsen et Ferchichi, 2009] et En Jordanie (1.3%) [Hudaib et Aburjai, 2006]. Nous
pouvons aussi dire que le rendement obtenu représente une valeur moyenne par rapport à
d'autres plantes qui sont exploitées industriellement comme source d’huile essentielle. IL est
plus élevé que celui de la rose (0.1-0.35%) et plus faible que celui du thym (2.2.5%)
[Bencheqroun et al., 2012].
Le rendement et la qualité des huiles essentielles des espèces du genre Artemisia sont
influencées par le pH des sols [Abad et al., 2012]. Les sols de la zone d’étude sont
caractérisés par une texture sablo-limoneuse, pH basique et une faible qualité chimique
[Bouzidi, 2001].
III.2. Evaluation de la qualité de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba
L’analyse des huiles essentielles, l’identification des constituants, la recherche

d’éventuelles falsifications peuvent se faire à l’aide des techniques telle que la
chromatographie en phase gazeuse. Cependant, en routine et selon les référentiels classiques
(Pharmacopée Européenne, ISO, AFNOR), l’évaluation de la qualité des huiles essentielles
est réalisée par la mesure d’un certain nombre d’indice et des analyses chromatographiques :
 indices physiques: densité relative, indice de réfraction…

 analyses chromatographiques: chromatographie en phase gazeuse: c’est la méthode de
choix qui permet de réaliser le profil chromatographie de l’huile essentielle [Afssaps,
2008].
III.2.1. Caractéristiques organoleptique
Les propriétés physico-chimiques constituent un moyen de vérification et de contrôle

de qualité des huiles essentielles. Mais certaines propriétés organoleptiques comme la couleur,
l’odeur et la viscosité peuvent aussi être pertinentes pour juger la qualité d’une huile.
77
Après l’extraction, l’huile obtenue est d’une couleur jaune pâle avec un aspect liquide
et une odeur forte et agréable. Ces propriétés sont liées aux conditions climatiques et
édaphiques de la région d’étude et de l’état de la plante.
III.2.2. Caractéristiques physiques
Les mesures physiques permettent d’évaluer le degré de pureté d’une huile essentielle.
Les caractéristiques physiques étudiées de l’huile essentielle de l’armoise blanche sont la
densité et l’indice de réfraction.
III.2.2.1. Indice de réfraction
L’indice de réfraction mesuré est de l’ordre de 1.4811. Ce résultat correspond aux

normes. La valeur est supérieure à l’indice de réfraction de l’eau à 20°C (1.333) [Afssaps,
2008]. Notre résultat obtenu est supérieur à celui rapportés par Benjilali et Richard (1980),
qui ont montré que l’indice de réfraction, de 24 échantillons de l’huile essentielle d’armoise
blanche de différentes régions de Maroc, varie de 1.4562 à 1.4696.
Cela pourrait s’expliquer par la nature de la composition de l'huile essentielle. L’indice

de réfraction varie selon la composition chimique, la masse volumique et augmente avec
l’insaturation ou la présence de fonctions secondaires [Kardesking, 1992, Boukhatem et al.,
2010].
III.2.2.2. Densité
La densité relative à 20°C d’une huile essentielle est le rapport de la masse d’un
certain volume d’huile essentielle à 20°C à la masse d’un volume égal d’eau distillée à la
même température.
Nous avons remarqué que la densité de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba est
de 0.912. Ce paramètre est lié à la composition chimique de cette huile qui est affectée par un
grand nombre de facteurs tels que le phénotype, le moment de récolte, le type de terrain, la
conservation, le procédé et les conditions d’extraction [Tenscher et al., 2005].
78
III.2.3. Analyse chimique de l’huile essentielle
La composition chimique de l’huile essentielle de la partie aérienne de l’armoise

blanche obtenue par hydrodistillation a été analysée par chromatographie en phase gazeuse
couplée à la spectrométrie de masse. Les pourcentages et temps de rétention des composants
identifiés sont répertoriés dans le tableau 8 dans l’ordre de leur élution.
Figure 19: Les principaux composants identifiés dans l’huile essentielle d’Artemisia
herba alba analysée par la technique CG/SM sur colonne capillaire HP-5MS
L’analyse qualitative par CG/SM de l’huile essentielle de l’armoise blanche nous a

permis d’identifier 31 composés correspondant à 99,61% de la surface des pics totaux.
Les résultats obtenus montrent que cette huile est formée principalement du camphre
(29.8 %), 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5-tetramethyl- (15.6 %), Chrysanthenone (8.2 %),
Eucalyptol (6,5 %), Arthole (4,5 %). Ces composés sont accompagnés d’autres constituants
minoritaires qui ne sont pas dénués d’importance avec des quantités relativement faibles
comme le thujone (1,08% - 1, 40%), camphene (0.67%), eugenol (0.47%),….(Tableau 8).
Selon la base de données NIST (National Institute of Standards and Technology)

utilisée dans nos analyses CG/SM, Les composants majeurs de cette huile identifiés semblent
être des monoterpènes oxygénés, de nature C10H16O, qui est la structure du camphre. Notre
plante peut donc être considérée comme chémotype camphre.
79
Tableau 8: Les principaux composés identifiés par CPG/SM
N° Name R.T %
1 Camphene 11.102 0.66
2 Eucalyptol 16.595 6.51
3 Bicyclo [3.2.0] hept-2-ene, 2-methyl 21.806 4.31
4 Thujone (alpha)- 21.942 1.40
5 Thujone (beta)- 22.623 1.09
6 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl- 23.634 15.60
7 1,6-Dimethylhepta-1,3,5-triene 23.672 2.33
8 Camphre 25.218 29.81
9 Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1S)- 25.245 4.20
10 2(10)-Pinen-3-one- 26.066 1.10
11 Arthole 26.315 4.52
Borneol 26.439 1.16

12
13 Terpinen-4-ol 27.148 0.81
14 3-Carene 28.050 0.36
15 Bicyclo [3.1.1] hept-2-ene-2-carboxaldehyde,6,6- 28.342 0.58

dimethyl-
16 Verbenone 29.256 0.75
17 Octadiyne 31.467 0.45
18 Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol, 2,6,6-trimethyl-, acetate 32.873 0.33
19 2-Cyclohexen-1-one, 3,5,5-trimethyl- 33.657 1.08
20 1,5-Hexadiene, 2,5-dimethyl-3-methylene- 36.106 0.77
21 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-2-ethyl- 36.462 1.10
22 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-1-ethyl 37.138 3.80
23 Eugenol 39.355 0.38
24 Pipéritenone 41.204 1.07
25 Chrysanthenone 42.198 8.21
80
26 2,4-Cycloheptadien-1-one, 2,6,6-trimethyl- 42.247 2.66
27 1-Penten-3-one, 2-methyl- 45.193 2.40
28 Germacrène D 46.988 1.03
29 (-)-Spathulenol 47.875 0.22

30 g- Gurjunene 52.724 0.51
31 Heptanoic acid, phenyl ester 53.524 0.50
Total 99.61
Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1R)-
1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl
Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-6-one, 2,7,7-trimethyl-
Figure 20: Distribution en fonction du pourcentage des différents composants

existants dans l’huile essentielle d’Artemisia herba alba
En tenant compte des composés majoritaires identifiés dans l’huile essentielle que
nous avons analysée dans cette étude nous dressons un tableau de comparaison avec l’huile
essentielle de la même plante mais de provenances différentes (tableau 9).
Selon le tableau ci-dessous, les principaux composants de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba de la région de Saida sont différents de ceux rapportés par plusieurs
auteurs pour les huiles essentielles d’Artemisia herba alba de différentes provenances, dans
laquelle le α et β thuyone (7,85% à 30%) [Benjilali et Richard, 1980, Hudaib et Tallal,
2006., Akrout et al., 2010, Zouari et al., 2010., Belhattab et al., 2012], et le Cis-
chrystanthenyl acetate (10,60% à 25,12 %) [Salido et al., 2004, Zouari et al., 2010 et Bezza
et al., 210] se sont révélés les éléments les plus abondants.
81
Tableau 9: Les principaux composés de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba de

différents pays
Pays Rendement Les principaux composants Référence

%
Maroc α-pinène, camphène, β-pinène, sabinène, Benjilali et Richard,
p-cymène, cinéol-1,8, α et β-thujones, 1980
camphre, myrténal, cuminaldéhyde, ..
α et β-thujones, et camphre représentent
entre 60 et 80% de l’huile essentielle
totale
Spain 0,41- 2.30 Davanone, le 1,8-cinéole, Salido et al., 2004
chrysanthenone, cis-chrysanthenol, p-
cymène et l’acétate de cis-chrysanthenyl.
Jordan 1.3 α and β-thujones (24,7%), santolina Hudaib and Tallal ,
alcohol (13%), artemisia ketone (12,4%), 2006.
trans-sabinyl acetate (5,4%), germacrene
D (4,6%), α-eudesmol (4,2%) and
Caryophyllene acetate (5,7%).
Algeria 0,95 Cis-chrysanthenyl acetate (25,12%), (2F, Bezza et al., 210
3Z) 3,5-heptadienal-2- ethyliden-6-
methyl (8,39%), α-thujone (7,85%),
myrtenyl acetate (7,39%), verbenone
(7,19%), chrysanthenone (4,98%).
Tunisie 1 β-thujone (30%), α-thujone (25,7%), 1,8- Akrout et al., 2010
cineole (6%), bornyl acetate (5,7%) and
camphe (4,5%).
Algeria 0,2 à 0,9 Le camphre (17-33%), thuyone (7-28%) Belhattab et al., 2012
et chrysanthenone (4-19%).
Tunisie 1.45 Acetate de cis-chrysantenyl (10,60%), Zouari et al., 2010.
acetate de sabinyl (9,13%) et α-tujone
8,73%).
La composition chimique de l’huile essentielle de cette plante provenant de diverse

régions de l’Algérie a été caractérisée par la présence des pourcentages élevés de thujone
[Bezza et al., 210 et Belhattab et al., 2012].
Cette thujone (appelée aussi thuyone), un monoterpène cétone (C10H16O), est une
substance naturelle constituant des huiles essentielles d’un certains nombre de plantes
largement utilisées pour l’alimentation et/ou à des fins médicinales. Le thujone a été considéré
comme une substance neurotoxique convulsivante et hallucinante à forte dose [Zahalka,
2010]. Il est intéressant de noter que la thuyone est détectée en faible quantité dans notre
étude (1,40%).
82
Donc, cette variation dans la composition chimique de l’huile essentielle d’Artemisia

herba alba (différents chémotypes), peut être due à des facteurs exogènes comme la nature et
les composants du sol, la température, l’altitude et des facteurs endogènes tel que le
patrimoine génétique des individus [Bencheqroun et al., 2012].
Les conditions écologiques de différents pays peuvent influencer le profil chimique

des matières végétales, certains composés peuvent être accumulés à une période particulière
en réponse aux conditions environnementales. Les huiles essentielles recueillies dans
différentes régions à différentes saisons comprennent une composition chimique différente et
peuvent ainsi présenter différentes activités biologiques [Hussain et al., 2010]. Selon Rota et
al. (2008), L’activité biologique des huiles essentielles dépend de leur composition chimique
en substances actives.
Figure 21: Spectre de Masse du 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl de l’huile

essentielle d’A. herba alba
83
Figure 22: Spectre de Masse d'eucalyptol de l’huile essentielle d’A. herba alba
Figure 23: Spectre de Masse du camphre de l’huile essentielle d’A. herba alba
84
III.3. Activités biologiques
III.3.1. capacité antioxydante
III.3.1.1. Détermination de la capacité antioxydante par des tests chimiques « in

vitro »
Pour évaluer le pouvoir antioxydant de l’huile essentielle, notre choix s’est porté sur
l’utilisation de deux tests chimiques : le test évaluant le piégeage des radicaux libres et
employant le 2.2.diphenyl-1-picrylhydrazyle sous sa forme radicalaire (DPPH●), impliquant le
transfert d’atome d’hydrogène et le transfert d’électron, et le test déterminant le pouvoir
réducteur antioxydant (FRAP, Ferric Reducing Antioxydant Power) basé sur le transfert
d’électron.
1. Test de piégeage du radical libre DPPH
L’activité anti-radicalaire de l’HE vis-à-vis du radical DPPH● a été évaluée par

spectrophotométrie en suivant la réduction de ce radical qui s’accompagne par son passage de
la couleur violette à la couleur jaune mesurable à 517 nm et en comparaison avec le BHT qui
est un antioxydant standard. En calculant pour chaque concentration le pourcentage
d’inhibition correspondant (PI%), on a tracé l’histogramme de la figure 24, qui représente la
variation du pourcentage d’inhibition en fonction de la concentration de l’HE.
Cet histogramme nous montre que le pourcentage d’inhibition du radical libre

augmente avec l’augmentation de la concentration, que ce soit pour le BHT ou l’HE. Ainsi,
on remarque que l’H.E. est considérablement antiradicalaire avec un pourcentage d’inhibition
supérieur à 70%.
85
120
100
80
% d' inhibition
60
HE
40 BHT
20
0
15,62 31,25 62,5 125 250 500
Concentration
Figure 24: Variation du pourcentage de piégeage du radical DPPH en fonction de la

concentration de l’huile essentielle et du BHT
Ces résultats sont en accord avec les données de la littérature. Dans une étude réalisée
sur certaines plantes médicinales algériennes y compris Artemisia herba alba, il a été noté que
ces plantes sont de forts piégeurs de radicaux et peuvent être considérées comme une bonne
source d’antioxydant naturel à des fins médicinales et commerciales [Mohamed et al., 2010].
Abid et al. (2007) ont comparé les effets à long terme de la décoction d’armoise blanche avec
la décoction du thé vert ou noir, préparée sans sucres, sur les processus antioxydants chez les
rats. Les résultats obtenus ont montré que l’armoise blanche pourrait constituer un bon
adjuvant pour lutter contre l’obésité, l’hyperglycémie, l’hypercholestérolémie et le stress
oxydatif.
Le pouvoir de piégeage du radical libre DPPH par les huiles essentielles est
généralement présenté par la valeur IC50. Elle est définie comme étant la concentration de
l’antioxydant nécessaire pour piéger 50% du DPPH présent dans la solution d’essai. On a
déduit graphiquement la concentration correspond à 50% d’inhibition (IC50).
L’huile essentielle et le BHT ont exercé une activité antiradicalaire avec des valeurs de
IC50 de 2.66 µg/ml (Y = 11.47X + 15.76) et 1.66 µg/ml (Y = 13.51X + 27.2) respectivement.
En comparaison avec l’antioxydant standard (BHT), l’huile essentielle testée semble à
premier regard moins actifs. Mais avec une réflexion attentive et prudente, Il est intéressant de
noter que le BHT est une substance chimique pure, alors que l’huile essentielle d'A. herba
86
alba utilisée se compose de plusieurs substances naturellement actives dont l'une ou quelques
unes d'entre elles doivent posséder ce pouvoir antioxydant. Si on considère que c'est le
camphre qui a le pouvoir antioxydant dans notre huile essentielle (à cause de sa structure
cétonique), et elle est majoritaire avec 29%, on peut donc recalculer le IC50 qui devrait être
29% de la valeur de 2,66 µg/ml, et qui serrait donc 0,77 µg/ml, c'est donc une valeur qui
attribue à notre huile essentielle, qui est biologique et naturelle, un pouvoir anti-radicalaire
plus puissant que le BHT lui-même. Ce résultat nous encourage encore à donner plus
d'importance aux substances naturelles dans le domaine des additifs, des traitements divers de
stabilité et de la lutte biologique.
L'effet antiradicalaire est aussi remarqué dans les travaux de Khlifi et al. (2013) qui
ont rapporté que l’extrait d’Artemisia herba alba a montré une forte activité antioxydante
mais avec une IC50 beaucoup plus élevée que la notre qui est de 20.64 mg/l (l'équivalent de
20,64 µg/ml).
On rappelle que plus la valeur de la IC50 est faible plus l’huile essentielle est puissante
vis-à-vis des radicaux libres. En outre, il convient de noter que la valeur de la IC50 dépend de
plusieurs paramètres: le rapport entre la quantité de l’huile essentielle et la quantité de
solution de DPPH utilisée dans le mélange, la concentration de la solution du DPPH et le
temps d’incubation [Akrout et al., 2010].
Les résultats de l’analyse statistique (Tableau 26, Annexe 3) ont indiqué que l’huile
essentielle et le BHT réduisent d’une manière très significative le radical DPPH par rapport au
contrôle négatif (témoin). L’huile essentielle d’A. herba alba s’est avérée efficace quelle que
soit la dose utilisée, puisque le pourcentage d’inhibition du radical DPPH était de l’ordre
de 61.47 % à la faible dose 15.62 µl.
La différence entre les doses est très significative avec un F calculé de 44.9 contre un
F théorique à 1% de 10.97. La corrélation entre les moyennes des doses et le pourcentage
d’inhibition du DPPH semble être très significative, cette corrélation est positive indiquant
que plus la dose augmente plus le pourcentage d’inhibition augmente d’une façon très
linéaire.
L’activité antiradicalaire de l’huile essentielle de l’armoise blanche pourrait être

attribuée à sa teneur élevée en monoterpènes oxygénés [El Massry et al., 2002; Akrout et
al., 2010; Riahi et al., 2010; Zouali et al., 2010]. En revanche, le camphre, prédominant dans
87
l’huile essentielle d’Artemisia herba alba de la région de sidi Ahmed (% ??), est doté d’un
pouvoir antioxydant considérable [Teixeira da Silva, 2004; Bourkhiss et al., 2010].
2. Test du pouvoir réducteur
L’essai du pouvoir réducteur est utilisé pour tester la capacité de l’huile essentielle
d’Artemisia herba alba à convertir le ferricyanure de potassium (Fe3+) en ferrocyanure de
potassium (Fe2+) qui réagit ensuite avec le chlorure ferrique pour former des complexes
ferreux. Comme le montre la figure 25, le pouvoir réducteur de l’armoise blanche augmente
avec les concentrations croissantes de l’huile essentielle. Comparativement à l’acide
ascorbique qui est utilisée comme référence, ce pouvoir semble plus faible, mais comme dans
le cas du BHT, l'acide ascorbique est une substance pure, alors que notre huile essentielle est
un ensemble qui peut comporter une ou quelques substances qui possèdent ce pouvoir
réducteur. En plus de ça, l'aspect naturel de notre extrait lui accorde plus d'importance dans
les applications futures.
L’augmentation de l’absorbance du mélange réactionnel indique une augmentation de

la capacité réductrice de l’huile testée. Cette capacité peut servir comme un indicateur
significatif de son activité antioxydante [Chang et al., 2007; Degryse et al., 2008].
Concernant alors le test du pouvoir réducteur, les résultats obtenus semblent être en
accord avec ceux du test de piégeage du radical libre DPPH.
En effet, le pouvoir réducteur de l’huile essentielle testée indique qu’elle cède des
d’électrons et peut réagir avec les radicaux libres pour les convertir en produits plus stables et
mettre fin aux réactions radicalaires en chaîne [Yen et Chen, 1995].
Selon la courbe de régression obtenue, le pouvoir réducteur montre une relation

beaucoup plus linéaire pour l’huile essentielle (R2 = 0.956) que pour le contrôle positif (R2 =
0.752). Cela peut indiquer que l'effet réducteur de l'huile d'A. herba alba est plus corrélé avec
sa concentration, son effet est directe et ne présente pas de phase affectée par l'effet de masse
(effet ou réaction qui se déclenche ou qui s'accélère qu'au-delà d'une certaine concentration).
88
1,64
3
1,62
y = 0,366x +
1,6 2,5 0,797
1,58 y = 0,034x + 1,4775 R² = 0,7524
absorbance
1,56 2
Absorbance
R² = 0,9568
1,54
1,5
1,52
a.
1,5 HE
1 ascorbique
1,48
1,46 0,5
1,44
20 40 60 80 0
Concentration 15 20 25 30
A B Concentration
Figure 25: Pouvoir réducteur de l’huile essentielle (A) et de l’acide ascorbique (B) par la
méthode de FRAP
Nos résultats sont conforme à ceux de Burt, 2004; Bruneton, 2005; Degryse et al.,
2008 et Riahi et al., 2013 qui ont déclaré qu’il y a une relation entre la capacité antioxydante
et la présence du camphre, eugénol, α -thujene, pinene.
Certaines études rapportent des activités antioxydantes faibles pour les huiles
essentielles d’autres espèces du genre Artemisia qui peut être liée à la domination des
composés non phénoliques [Burits et al., 2001].
Selon Riahi et al. (2013), l’activité antioxydante des extraits de plantes est
généralement attribuée aux composés phénoliques. Ces substances sont parmi les groupes de
composants alimentaires non essentiels qui ont été associés à l’inhibition de l’athérosclérose
et le cancer. La bio-activité de ces composés peut être liée à leur capacité à chélater les
métaux, inhiber la lipoxygénase et piéger les radicaux libres [Chang et al., 2007].
Pour conclure, on peut dire que nos résultats mettent en évidence une importante
capacité antioxydante in vitro de l’huile essentielle de l’armoise blanche du Nord-Ouest
algérien.
III.3.2. Activité antimicrobienne
Pour étudier l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba,

nous avons utilisé deux souches bactériennes qui sont : Escherichia coli (ATCC 25922), et
Staphylococcus aureus (ATCC 25213), une souche fongique : Candida albicans (ATCC
10231) et trois moisissures: Fusarium oxysporum f.sp. ciceris (fusariose du pois chiches)
(FOC), Fusarium solani (pourriture des racines de pois chiches) (FS) et Globisporangium
ultimum (fonte des semis et la pourriture des racines de Pin d’Alep) (GU).
89
III.3.2.1. Résultats de l’antibiogramme
L’antibiogramme permet de mesurer la capacité d’un antibiotique à inhiber la

croissance bactérienne in vitro.
La représentation graphique des diamètres d’inhibition des bactéries étudiées vis-à-vis

de différents antibiotique sont illustrés dans la photo 3 et reportés sur la figure 26.
diamètre d'inhibition en mm
30
25
20 ATM30
15 CT10
10 GN
5 P10
0
E. coli S. aureus
Bacterie
Figure 26: représentation graphique des diamètres des zones d’inhibition de E. coli et S.
aureus vis-à-vis de différents antibiotiques (ATM30 : aztreonam ; CT10: colistine ; GN :
gentamicine ; P10 : pénicilline)
Selon Bonnet et al. (2012), et en fonction des diamètres des zones d’inhibition
induites par les antibiotiques utilisés, les résultats obtenus révèlent que:
 S. aureus est très sensible à la gentamicine et l’aztreonam avec des diamètres

des zones d’inhibition qui varie entre 20 et 30 mm respectivement. Par contre,
elle est s’est montrée résistante à la pénicilline.
 E. coli est sensible à l’aztreonam et la colistine. Cependant, cette souche
apparait insensible à la pénicilline.
La pénicilline est un antibiotique connu pour être utilisé contre E. coli et S. aureus,
mais les résultats obtenus peuvent être expliqués par une résistance acquise par ces bactéries
vis-à-vis de cet antibiotique. Selon Fauchère et avril (2002), les antibiotiques sont de plus en
plus souvent mis en échec par les bactéries qui prennent à leur résister.
90
A B
2
1
Photo 3: Sensibilité des souches bactérienne vis-à-vis des antibiotiques testés : A :

S. aureus ; B : E. coli
1 : ATM30, 2 : GN, 3 : CT10
III.3.2.1.1. Evaluation de l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’A. herba alba
Les résultats de l’activité antibactérienne et anti candida en utilisant le test de diffusion

sur disque sont présentés dans la figure 27.
35
diamètres des zones d'inhibition
30
25
20
15
10
0
1 2 3
Bacterie
Figure 27: représentation graphique des diamètres d’inhibition en mm des

souches testées (1: E coli ; 2: S. aureus ; 3: C. albicans) en présence de l’huile essentielle
de l’armoise blanche
L’huile essentielle s’est révélée active contre tous les microorganismes testés. Comme
cela a été rapporté dans la littérature, un extrait est considéré comme actif lorsqu’il induit une
zone d’inhibition de ≥ 8 mm [Tekwu et al., 2012].
91
L’activité de l’huile essentielle varie d’une souche à une autre, cette variation peut être
observée dans les diamètres des zones d’inhibition qui montre que certaines souches sont plus
sensibles que d’autres.
Selon le classement effectué par Ponce et al. (2003) et Rota et al. (2008), nous
remarquons que Candida albicans est la souche la plus sensible à l’huile essentielle par
rapport aux souches bactériennes, car le diamètre de la zone d’inhibition était le plus grand, il
est de l’ordre de 30 ± 3.60 mm. La sensibilité de S. aureus (14.33 ± 0.57) était plus élevée que
celle de E. coli (12.83 ± 0.76 ) (Figure 27).
Ces différences de sensibilité des microorganismes contre l’huile essentielle d’A.

herba alba peuvent être expliquées par la quantité et la qualité des molécules bioactives ou la
nature et la composition de la paroi cellulaire ainsi que la puissance du système enzymatique
de la cellule qui contrôle son métabolisme.
C. albicans S. aureus E. coli
Figure 28: Effet de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba sur les trois souches testées
Selon Friedman et al. (2002), trois principaux facteurs peuvent influencer les résultats
d’un test de l’activité antimicrobienne d’une huile essentielle:
 la composition et la solubilité de l’huile essentielle;

 le microorganisme et la vitesse de sa croissance.
La comparaison de nos résultats avec ceux rapportés dans la littérature montre qu’ils sont
meilleurs que ceux de Mighri et al. (2010) qui ont testé quatre types d’huiles essentielles d’A
92
herba alba sur C. albicans et ils ont mentionné un diamètre d’inhibition varie entre 13.3 mm
à 19 mm. Ainsi, Lopes-Lutz et al. (2008) ont montré que C. albicans et E. coli ont été moins
sensible aux huiles essentielles extraites à partir de sept espèces sauvages du genre Artemisia
récoltées dans la région Ouest de Canada.
Dans le cas de S. aureus, nos résultats sont conformes à ceux publiés par Zouali et al.
(2010) qui ont également trouvé que l’huile de romarin riche en camphre présentait une action
modérée contre cette bactérie. Les huiles essentielles de camphre en tant que composant
majeur présente une action modérée sur S. aureus [Jordan et al., 2013]. Plusieurs composés
majoritaires sont plus puissants que l’action seule du premier composé majoritaire [Daroui,
2012].
Jiang et al. (2011) ont trouvé que l’activité antimicrobienne de l’huile essentielle du
romarin était supérieure à celle du pinène et 1.8 cinéole; les composés majoritaires de cette
huile. Donc, ils ont déduit que cette capacité de l’huile essentielle est l’effet synergique de ses
constituants actifs.
L’activité antimicrobienne de l’huile essentielle d’A. herba alba contre S. aureus et E.

coli peut être attribué à la combinaison des différents composants présents dans cette huile,
qui agissent en synergie pour affaiblir le métabolisme microbien et inhiber ou ralentir son
adaptation [Jordan et al., 2013].
Cette activité est liée à leur configuration structurelle, les groupes fonctionnels, les
proportions dans lesquelles ils sont présents et les interactions synergiques possibles entre eux
[Dorman et deans, 2002; Akrout et al., 2010; Jordan et al., 2013].
Les monoterpènes oxygénés comme le camphre, le bornéol, le terpinene -4- ol ont un

large spectre d’activité antimicrobienne [Salamci et al., 2007]. La présence d’une fonction
d’oxygène augmente les propriétés antimicrobiennes des terpénoïdes (cétone) [Dorman et
Deans, 200]. A la suite de leur caractère lipophile, les monoterpènes cycliques influent sur la
perméabilité des membranes cellulaires [Cox et al., 2000; Zouari et al, 2010].
Il a été rapporté aussi que les monoterpènes provoquent une inhibition du

métabolisme énergétique mitochondriale, notamment les oxydations phosphorylantes. Ce qui
entraîne des perturbations dans les processus physiologique et biochimiques dans la cellule
[Daroui, 2012].
93
Le mode d’action des huiles essentielles dépend aussi du type de microorganisme. Il

est connu que les bactéries expriment différents degrés de résistance à la présence des huiles
essentielles. En raison de leur nature hydrophobe, les huiles essentielles ont tendance à
affecter un plus grand nombre de bactéries à Gram positif, suivi par les bactéries à Gram
négatif [Dussaut et al., 2014]. La membrane extérieure des bactéries à Gram négatif est plus
riche en lipo-polysaccharides et en protéines que ceux des bactéries à Gram positif qui la rend
plus hydrophile, ce qui empêche les composés hydrophobes d’y adhérer [Cox et al., 2000;
Calsamiglia et al., 2007; Akrout et al., 2010; Khebri, 2011; Daroui, 2012]. Néanmoins,
certaines molécules de bas poids moléculaires peuvent adhérer au bactérie à Gram négatif par
fixation aux protéines et aux lipopolysaccharides membranaires grâce à leurs groupes
fonctionnels et atteindre aussi la membrane intérieure [Calsamiglia et al., 2007 ; Daroui,
2012].
Bien que l’action principale des huiles essentielles comme antibactérien semble être
centrée dans leur activité sur la membrane cellulaire, d’autres mécanismes d’action peuvent
intervenir tels que la dénaturation des protéines, inactivation des enzymes et elles peuvent
interagir avec les acides nucléiques.
III.3.2.2. Détermination de la CMI
L’huile essentielle d’Artemisia herba alba s’est révélée actives contre Candida
albicans, Staphylococcus aureus et Escherichia coli. Cela, nous a permis de déterminer la
concentration minimale inhibitrice (CMI).
La CMI est le paramètre les plus couramment utilisé par les chercheurs pour l’étude de
la bactériostase. Ce test a été réalisé par la méthode de micro-dilution sur milieu liquide. Les
résultats obtenus pour les souches étudiées nous ont permis de réaliser les courbes suivantes
(figure 29, 30 et 31).
94
Log UFC/ml
8
7
6
T
5
C1
4
C2
3
C3
2
C4
1
C5
0
t0 t2 t18 t24 t48
temps (haure)
Figure 29: effet de l’huile essentielle de l’armoise blanche sur la croissance

de Candida albicans
9
Log CFC/ml
8
7
6 T
5 C1
4 C2
3 C3
2 C4
1 C5
0
t0 t2 t18 t24 t48
temps (heure)

de S. aureus
95
9
8
7
6 Témoin
Log UFC/ml 5 C1
4 C2
3 C3
2 C4
1
C5
0
t0 t2 t18 t24 t48
temps (heure)

de E. coli
Ces figures nous montrent que l’huile essentielle exerce une activité contre E coli, S.
aureus et C. albicans, ce qui confirme les résultats obtenus de l’aromatogramme.
Les valeurs des CMI se concordent d’une manière générale avec celles des diamètres
d’inhibition, les souches sensibles à l’huile essentielle avec une zone d’inhibition importante
présentent les plus petites concentrations minimales inhibitrices (tableau 10).
Table 10: Zone d’inhibition et concentration minimale inhibitrice (µl/ml) de l’huile
essentielle d’Artemisia herba alba.
Microorganisme Zone d’inhibition MIC (µl/ml)

(mm)
Escherichia coli (ATCC 25922) 12.83 ± 0.76 12.5
Staphylococcus aureus (ATCC 14.33 ± 0.57 6.25
25213)
Candida albicans (ATCC 30 ± 3.60 3.12
10231)
96
En se référant aux résultats illustrés dans les figures 29, 30, 31, le rapport CMF/CMI
pour C. albicans (2.5 mg.ml-1 / 1.21 mg.ml-1) égale à 2, donc, l’huile essentielle d’A. herba
alba possède un effet fongicide contre cette souche.
En ce qui concerne les souches bactériennes, le rapport CMB/CMI est supérieur à 2.

Ce qui indique que cette huile est bactériostatique plutôt que bactéricide à cette concentration.
III.3.3. Activité antifongique
La difficulté de lutte contre les maladies racinaires par les pesticides de synthèse
expliquerait l’usage abusif de ces produits phytosanitaires par les producteurs. En
conséquence, cet usage abusif des pesticides pose un problème de rentabilité de culture, de
risque de résidus de produits de synthèse dans les fruits et de pollution de l’environnement
[Doumbouya et al., 2012].
Face à l’inquiétude concernant la croissance de l'utilisation des pesticides de synthèse

et l'effet de leurs résidus sur la santé des consommateurs, plusieurs études ont été axées sur
l'exploitation des extraits de plantes pour développer de nouveaux fongicides pour lutter
contre les maladies fongiques des plantes.
Cette étude a pour but d’évaluer l’activité antifongique de l’huile essentielle extraite
de l’armoise blanche « Artemisia herba alba » contre trois souches pathogènes: Fusarium
oxysporum f.sp. ciceris (FOC), Fusarium solani (FS) et Globisporangium ultimum.
III.3.3.1. Résultats du test de la croissance mycélienne
L'activité antifongique de l'huile essentielle a été testée par la méthode de diffusion et

l'appréciation des diamètres des zones d'inhibition in vitro. Les résultats obtenus sont illustrés
dans la figure 32 et les planches 1,2,3.
97
% d'inhibition
80
70
60
50
40
F. solani
30
20 F. oxysporum
10 G. ultimum
0
témoins
250ppm
500ppm
1000ppm
Dose
Figure 32: Le taux d’inhibition de la croissance mycélienne de Fusarium

oxysporum f.sp. ciceris, Fusarium solani et Globisporangium ultimum en fonction de la
dose de l’huile essentielle
L’analyse des résultats représentés sur la figure 32 montre que la croissance

mycélienne des souches testées est influencée par les différentes doses de l’huile essentielle.
En effet, plus la dose augmente plus le taux d’inhibition augmente. Un maximum d’effet est
obtenu par la dose de 1000 ppm. A cette dose, huile essentielle réduit le développement de
Fusarium oxysporum, Fusarium solani et Globisporangium ultimum avec des taux
d’inhibition qui varie de 50.61% à 78.33%.
Nous remarquons aussi, qu’il y a des différences dans la sensibilité entre les espèces
qui appartiennent au même genre (Fusarium oxysporum et Fusarium solani).
Par comparaison du comportement des espèces et souches pour chaque dose de l’HE,
des différences de sensibilité ou de résistance sont notées.
D’après les résultats statistiques (annexe 3), nous notons que la différence existe entre
le dose 1000 ppm et les autres doses et entre le témoin et les autres doses pour les trois
souches étudiées. En observant les moyennes des résultats de l’effet de 500 ppm, on peut dire
que Fusarium oxysporum est la plus résistante que les autres souches avec seulement 19,14%
d’inhibition de croissance. Pour la dose de 1000 pppm, Fusarium solani est très sensible avec
78.33% d’inhibition, alors que Fusarium oxysporum et Globisporangium ultimum ont le
même seuil de sensibilité à cette dose.
98
Les mécanismes d’action des huiles essentielles par lesquels la croissance mycélienne
peut être réduite ou totalement inhibée ont été proposés. Ainsi, Lucini et al. (2006) et El
badawy et al. (2014) ont indiqué que les huiles essentielles agiraient sur l’hyphe du
mycélium, ce qui provoque la sortie des composants du cytoplasme, la perte de la rigidité et
l'affaiblissement de l’intégrité de la paroi cellulaire de l’hyphe, entrainant son effondrement et
la mort du mycélium.
1000ppm Témoin
Témoin
500ppm 250ppm
Planche 1: L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de Fusarium
oxysporum f.sp. ciceris après 7 jours d’incubation
99
1000ppm
Témoin
500ppm 250ppm
Planche 2 : L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de Fusarium solanée
après 7 jours d’incubation
1000ppm Témoin
500ppm 250ppm
Planche 3: L’effet de l’HE d’A. herba alba sur la croissance mycélienne de Globisporangium
ultimum après 7 jours d’incubation
100
III.3.3.2. Résultats de test de la germination conidienne
L’huile essentielle a eu des activités variables sur la germination conidienne des

souches testées. Il apparaît que l'effet le plus important a été observé pour Globisporangium
ultimum. Une activité d'inhibition de 100% a été observée par l'application des deux
concentrations (500 ppm et 1000 ppm) sur la germination de ce germe.
En se basant sur les résultats du pourcentage d’inhibition de la germination

conidienne, l’huile essentielle d’A. herba alba semble être effective sur toutes les souches
testées.
L’analyse de la variance en fonction de l’espèce, l’état et la dose montre qu’il y a une

différence significative entre les deux états germé en non germé (Tableau 17, annexe 3).
Globisporangium sp est largement étudie en raison de son importance économique. En

effet, il peut causer des dégâts très importants sur les végétaux, il est considéré comme un
redoutable parasite des cultures forestières. Ainsi, avec d'autres traitements, Lazrag (2014) a
analysé la capacité antifongique de l’huile essentielle de l’inule « Inula viscosa L. », des
agents de lutte biologique Bacillus subtillus et Trichoderma atroviride et un fongicide
chimique « le bénomyl » contre Globisporangium sp. Les résultats obtenus ont montré que
ces traitements utilisés n’ont pas affecté ni la germination des conidies, ni la croissance
mycélienne de cette espèce. Cependant nos résultats ont montré une forte activité antifongique
de l’huile essentielle d’armoise blanche contre Globisporangium sp. Donc on peut dire et
affirmer avec une certaine prudence que notre plante, et à travers l'utilisation de son huile
essentielle, peut constituer une solution très efficace, et tellement attendue, pour lutter contre
ce parasite féroce et chronique.
101
Photo 4: Observation microscopique de la germination conidienne de Fusarium solani

40X
Photo 5: Observation microscopique de la germination conidienne de Fusarium

oxysporum f.sp. ciceris 40X
1000 ppm
Témoin 1000 ppm 500 ppm 250 ppm
Témoin 1000ppm 500ppm 250ppm
Photo 6: Observation microscopique de la germination conidienne de

Globisporangium ultimum 40X
102
III.3.3.3. Résultats du test de sporulation

L'analyse des résultats indique que les trois souches testées sont sensibles à l'huile
essentielle. Cette sensibilité se traduit par une réduction des spores avec l'augmentation de la
dose.
Concernant F. oxysporum, l’huile essentielle a donné un taux d’inhibition supérieur à
50% pour les différentes doses allant de 58.53 % à 91.86%.
Quand à F. solani et Globisporangium ultimum, les doses de 500 ppm et 1000 ppm ont
donné des taux d’inhibition supérieurs à 50%. D’après l’analyse statistique, nous constatons
que toutes les doses sont significativement différentes dans leurs effets sur la sporulation des
éspèces étudiées ( Annexe 3).
Suite aux résultats obtenus (ci-dessous), nous pourrions déduire que l’huile essentielle
d’armoise blanche a un large spectre d’action sur les moisissures testées. Elle a inhibé la
croissance mycélienne, la germination et la sporulation chez F. oxysporum, F. solani et
Globisporangium ultimum. Son activité antifongique est principalement fonction de sa
composition.
Beaucoup de travaux ont démontré l’efficacité antifongique des monoterpènes [Chebli
et al., 2003 ; Salamci et al., 2007; Ahmadi et al., 2010 ; Kordali et al., 2012]. Ainsi
l’activité antifongique de l’huile essenteiiel d’armoise blanche dans la présente étude peut être
attribuée à la présence des pourcentages élevés des monoterpènes oxygénés. Cependant,
d’autre composés mineurs dans l’huile testée (tableau 8) tels que: terpinene-4 –ol….. peuvent
donner lieu à une activité antifongique intéressante [Wang et al., 2005; Donman et al., 2008;
Hu et al., 2012 ; Jordant et al., 2013].
L’activité antifongique décroit selon le type de fonctions chimiques :
hydrocarbures ˂ éthers ˂ cétones ˂ aldéhydes ˂ alcools ˂ phénols [Hermandez Ochoa,

2005].
III.4. Evaluation de l’effet stabilisateur de l’huile essentielle d’Artemisia herba

alba dans les denrées alimentaires
III.4.1. Evaluation de la stabilité oxydative de l’huile de tournesol
Le traitement et la stabilisation des huiles végétales sont les facteurs critiques pour la
qualité lors de la friture et au cours du stockage. L’oxydation est le principal mécanisme de
dégradation des huiles entre 60 et 130°C en raison du contact plus intense avec l’oxygène et
la présence de catalyseurs (comme des minéraux) [Gertz et Stier, 2011].
103
Maitriser l’oxydation est indispensable pour gérer l’évolution des systèmes

biologiques dans leur complexité, en particulier dans le cas des aliments dont la dégradation
peut avoir des conséquences indésirables en sécurité alimentaire. Ainsi, la lutte contre
l’oxydation des denrées alimentaires au cours de leurs transformations technologiques, du
stockage et de la distribution s’impose. Parmi les diverses solutions technologiques possibles,
l’addition d’agents antioxydants aux huiles et aux aliments riches en lipides qui est pratiquée
depuis forts longtemps. Toutefois, les antioxydants synthétiques comme le
butylhydroxytoluène (BHT) et le butylhydroxyanisol (BHA) ont des effets négatifs sur la
santé humaine et sont facilement volatiles à haute température. L’ampleur de ce problème a
fait que les antioxydants naturels deviennent de plus en plus recommandés pour remplacer les
antioxydants synthétiques [Kahouli, 2010].
La possibilité d’utilisation des huiles essentielles, en tant qu’antioxydants, dépend de
la facilité de leur incorporation dans la matrice alimentaire et de leur efficacité à faible dose.
Elles ne doivent pas être toxiques et n’entraîner ni coloration, ni odeur, ni saveur indésirables.
Elles doivent être résistantes aux processus technologiques et stables dans le produit fini
[Himed et Barkat, 2014].
L’huile essentielle d’Artemisia herba alba contient des principes actifs doués d’une
propriété antioxydante (test in vitro). Cette huile mérite une attention particulière par son
valorisation en tant qu’un antioxydant naturel dans les huiles végétales. Dans ce travail, cette
valorisation s’est réalisée grâce à son incorporation dans l’huile de tournesol pour diminuer
l’oxydation de cette dernière en condition de chauffage.
Nous avons testé la capacité antioxydante de l’huile essentielle de d’Artemisia herba
aba dans l’huile de Tournesol et nous avons procédé à une comparaison avec un antioxydant
de référence qui est l'α-Tocophérol. L’huile végétale est chauffée à 180°C pendant 1 heure.
Un suivi de l’indice de peroxyde et de l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet de
l’huile de tournesol, en fonction du temps et pendant 15 jours de conservation en présence de
l’huile essentielle à des doses de 0.02, 0.04, 0.06 et 0.08 g, a été effectué. La comparaison
avec l'α-Tocophérol a été effectuée aux mêmes concentrations et dans les mêmes conditions.
III.4.1.1. Indice de peroxyde
Les peroxydes, ou les radicaux libres, sont des molécules chimiques comportant un ou
plusieurs atomes d’oxygène possédant un électron célibataire (R-O-O-R’).
L’indice de peroxyde est une mesure largement utilisée pour mesurer la quantité des
peroxydes formés dans les graisses et les huiles lors de l’oxydation [Ozkan et al., 2007].
104
C’est l’une des méthodes classiques et normalisées correspond au titrage iodométrique. En

milieu acide, les hydroperoxydes (réaction A) et les ROOR (réaction B) réagissent avec l’ion
iodure, pour générer de l’iode qui est titré par une solution de thiosulfate de sodium en
présence d’empois d’amidon (réaction C).
ROOH + 2 H+ + 2 I−→I2 + ROH + H2O A
+ −
ROOR + 2 H + 2 I →I2 + 2ROH B
I2 +2 S2O3-2 →S4O6-2 + 2 I− C
L’indice de peroxyde (IP) est alors défini comme étant la quantité d’oxygène actif,
exprimée en mg, contenue dans 1 g de corps gras et susceptible d’oxyder l’iodure de
potassium avec libération d’iode. L’IP atteindra un maximum durant la phase de propagation,
puis diminuera lors de la phase de terminaison [Laguerre et al., 2007].
Les valeurs de l’indice de peroxyde des différents échantillons de l’huile de tournesol
en présence de différentes doses de l’huile essentielle d’Artemisia herba alba et de l’ α-
Tocophérol sont reportés sur les figures 33 et 34.
45
40
35
indice de peroxyde
30
25
1 jour
20
15 7 jours
10 15 jours
5
0
Figure 33: Evolution de l’indice de peroxyde (en meq d’O2/Kg) dans l’huile de
tournesol chauffée en présence de différentes doses de l’huile essentielle
105
Indice de peroxyde
45
40
35
30
1 jour
25
7 jours
20
15 jours
15
10
5
0
Temoin HT+ 0,02g E HT+0,04g E HT+0,06gE HT+ 0,08g E
Figure 34: Variation de l’indice de peroxyde (en meq d’O2/Kg) dans l’huile de
tournesol chauffée en présence de différentes doses de α tocophérol.
Une augmentation remarquable de l’indice de peroxyde est constatée dans l’huile de

tournesol témoin sous l’effet du traitement thermique. L’huile de tournesol témoin, avant le
traitement thermique, possède un indice de peroxyde de 6 meq/kg. Cette valeur passe à 24.5
meq/kg après le traitement thermique à 180°C. Il semble qu’il-y-a un début d’oxydation très
fort après ce traitement. Donc, l’huile de tournesol devient très fragile et ne peut pas supporter
le traitement thermique.
En comparaison avec le témoin, nous remarquons que les autres échantillons

additionnés de l’H.E. représentent un indice de peroxyde plus réduit au 1er jour malgré le
traitement thermique. Il semble donc qu’ils sont mieux protégés que le témoin contre
l’oxydation.
Durant la période de stockage, nous avons remarqué une augmentation de l’indice de

peroxyde dans tous les échantillons. Cependant, les valeurs de l’indice de peroxyde des
échantillons additionnés de différentes doses de l’H.E. d’Artemisia herba alba restent toujours
inférieures à celui du témoin stocké dans les mêmes conditions. Il est aussi très intéressant
de remarquer un phénomène très particulier concernant la période de stockage, plus la dose de
l'huile essentielle augmente, plus la différence entre les valeurs du 7ème et 15ème jour diminue,
donnant ainsi l'impression d'une certaine stabilité à long terme contre l'oxydation.
106
De manière générale, l’oxydation plus marquée dans le cas du témoin par rapport aux
autres échantillons explique l'effet stabilisateur de l’H.E. d’A. herba alba.
Il est clair que l’H.E. d’A. herba alba a un effet sur l’oxydation par la capacité
antiradicalaire et réductrice (tests de DPPH et de FRAP) que possède les terpènes oxygénés
qu’elle contient, c’est pourquoi on observe une réduction de l’indice de peroxydes des
échantillons auxquels elle a été incorporée.
Par comparaison avec un antioxydant de référence, qui est le tocophérol, l'effet

antioxydant de l'huile essentielle ressemble à celui de l'antioxydant de synthèse, une
diminution de peroxydes en 1er jour après traitements thermiques, qui signifie une protection
contre les chocs thermiques, et aussi une réduction des valeurs entre le 7ème et le 15ème jour qui
signifie une stabilité à long terme. Mais l'effet de l'α-tocophérol est beaucoup plus
remarquable avec un indice de peroxyde à la fin de la durée de conservation égale à 24
meq/Kg pour la dose de 0.08 g. Les tocophérols ont pour rôle principale de piéger les
radicaux alkoxyles et inhibe la décomposition des hydroperoxydes ce qui diminue la
formation des aldéhydes [Ohshima, 2003; Kahouli, 2010].
Là aussi, dans ce cas comparatif, nous sommes amené à signaler que l'α-tocophérol est
une substance pure alors que l'huile essentielle employée contient des concentrations limitées
d'une ou d'un ensemble de substances ayant cet effet stabilisateur. Ceci peut nous invité à
penser que si la substance antioxydante contenue dans l'huile essentielle de l'A. herba alba
serra extraite et purifiée, elle doit avoir une efficacité extraordinaire à très faibles doses!
Le traitement statistique des résultats obtenus par l’analyse de la variance (Annexe 3),
montre une différence hautement significative entre les échantillons car le F calculé qui est
de 12.27 est supérieur au F théorique 3.88 à un risque de 1%. En se référant à l’analyse
statistique, on peut suggérer que l’H.E. d’A. herba alba exerce une influence très significative
sur la teneur en peroxyde de l’huile de tournesol.
En définitive, nous pouvons dire que l’indice de peroxyde représente un des

paramètres de qualité des huiles, mais ne peut être un indicateur seul de la stabilité oxydative
de l’huile végétale. Il faux donc surveiller son comportement et suivre son aboutissement vers
les réactions d’arrêt
Donc, pour voir plus clair sur le comportement de l’huile de tournesol concernant
l’indice de peroxyde, provenance et devenir des peroxydes, des analyses des autres substances
107
intermédiaires ou secondaires d’oxydation sont nécessaire pour ratifier les résultats obtenus de
l’analyse de l’indice de peroxyde. Les diènes conjugués et triènes conjugués qui
accompagnent la formation des peroxydes sont analysés dans la partie qui suit.
III.4.1.2. L’absorbance spécifique en rayonnement ultra violet
Cette absorbance spécifique nous renseigne sur les diènes conjugués et les triènes
conjugués qui représentent une bonne mesure de l’état d’oxydation des huiles [Mc Ginely,
1991 in Raza et al., 2009].
L’analyse des diènes conjugués est une méthode rapide réalisée par mesure
spectrophotométrique sur l’extrait lipidique dans l’hexane, le cyclohexane ou des alcools tels
que l’éthanol, le méthanol ou l’isopropanol. La détermination de l’absorbance à 225
nm ou au voisinage de 320 nm permet la détection et éventuellement le dosage des acides gras
conjugués ou des produits d’oxydation conjugués présents dans les corps gras [AFNOR,
1988].
Les diènes conjugués, produits primaires de l’oxydation des lipides se forment par
réarrangement des doubles liaisons du radical lipoyle des acides gras polyinsaturés (par
exemple l’hydroperoxyde linoléique) [Eymard, 2003].
La figure 35, illustre l’évolution des diènes conjugués dans l’huile de tournesol en
présence de différentes doses de l’HE et de l’α tocophérol.
108
Absorbance à 225nm
3,5
2,5
2 1 jour
1,5 7 jours
15 jours
1
0,5
0
T vit. E vit. E Vit. E Vit E HE HE HE HE
0,08g 0,06g 0,04g 0,02g 0,08g 0,06g 0,04g 0,02g
Figure 35: Evolution des diènes conjugués dans les échantillons de l’huile de tournesol
additionnés de différentes doses de l’huile essentielle et de l’α tocophérol.
L’analyse des résultats obtenus montre une évolution des diènes conjugués dans tous
les échantillons traités ainsi que dans celui du témoin durant toute la période de stockage.
La dégradation la plus importante a été observée dans le témoin. La forte présence des
diènes conjugués traduit une forte oxydation de cette huile. Ces résultats confirment ceux
obtenus par la détermination de l’indice de peroxyde. Il faut rappeler que les diènes conjugués
sont des substances intermédiaires, de passage, leur diminution signifie leur continuation vers
les réactions d'arrêt si l'huile n'est pas protégée, et se sont ces réactions d'arrêt qui affectent
réellement la qualité de l'huile (rancissement).
Les échantillons additionnés de 0.08 g et 0.06 g de l’huile essentielle et de l’α

tocophérol présentent une quantité de diènes conjugués inférieure à celle du témoin indiquant
ainsi et certainement une protection de l’huile de tournesol par ces additifs.
L’absorbance à 225 nm diminue avec la durée de stockage dans tous les échantillons
montrant que les diènes conjugués sont utilisés dans les réactions d’arrêts.
Nous remarquons aussi d’après l’étude statistique (Annexe 3) que la variation des
quantités de diènes conjugués est significative dans tous les échantillons.
109
L’évolution des composés secondaires d’oxydation dans tous les échantillons par la
mesure de l’absorbance à 320 nm connaît la même tendance que celle des diènes conjugués
(Figure 36). En effet, plus l’absorbance à 320 nm est forte, plus l’huile est riche en substances
secondaires.
0,7
Absorbance à 320
0,6
0,5
0,4 1 jour
0,3 7 jours
15 jours
0,2
0,1
0
T vit. E vit. E Vit. E Vit E HE HE HE HE
0,08g 0,06g 0,04g 0,02g 0,08g 0,06g 0,04g 0,02g
Figure 36: Evolution des triènes conjugués dans les échantillons de l’huile de
tournesol additionnés de différentes doses de l’huile essentielle et de l’α tocophérol.
L’étude de l’état oxydatif de l’huile de tournesol en présence de l’huile essentielle d’A.

herba alba par la mesure de l’indice de peroxyde et l’absorbance de la lumière ultraviolette à
225 nm et 320 nm permet d’affirmer que l’huile essentielle testée possède une capacité
antioxydante intéressante.
III.4.2. Etude de l’effet antimicrobien de l’huile essentielle d’A. herba alba dans la
viande hachée
Plusieurs rapports sur l’efficacité antimicrobienne des huiles essentielles dans les
aliments suggèrent que l’utilisation de ces huiles peut améliorer la sécurité alimentaire.
Skandamis et al (2001) ont constaté que l’origan à inhiber la croissance des

microorganismes d’altération dans la viande hachée. Toutefois, l’application pratique des
huiles essentielle dans les aliments est limitée parce que leur efficacité est modérée en raison
des interactions avec les ingrédients alimentaires et la sécurité de l’aliment. Cette efficacité
110
limitée est causée aussi par l'application des doses très limitées des huiles essentielles, pour ne
pas affecter les caractéristiques organoleptiques de l'aliment (odeur et arôme).
En se référant aux signes d’altérations des viandes et selon nos remarques visuelles au
cours de notre expérimentation, nous avons observé un changement de couleur, présence
d’odeur et exsudat qui sont plus réduits avec la présence de l’huile essentielle.
Au cours de la conservation, la couleur de la viande dépend de deux composantes qui

peuvent modifier la teinte du produit:
 L’état chimique de la myoglobine: la myoglobine réduite (rouge pourpre),

l’oxymyoblobine (rouge vif), qui est la teinte recherchée par le consommateur,
et la metmyoglobine (couleur marron) (figure 37);
 Le développement des bactéries en surface de la viande et ses interactions
possibles avec la forme chimique du pigment [Denoyelle, 2012].
Mb MbO2
(réduite) (oxygénée)
Oxydation Oxydation
Met Mb (oxydée)
Figure 37: Les trois formes chimiques de la myoglobine [Denoyelle, 2012]
L’oxydation de myoglobine en metmyoglobine altère la couleur des viandes, sa

présence se manifeste par des taches brunes à la surface de la viande.
Nous avons remarqué que l’altération de la couleur était plus prononcée dans la viande
hachée témoin par rapport aux autres échantillons additionnés de l’huile essentielle (photo 8),
ce qui témoigne d'un effet antioxydant et stabilisateur de cette l’huile.
Effectivement, l’étude de la composition chimique de l’huile essentielle d’A. herba alba

(tableau 8) indique que cette huile contient des substances actives douées d’une capacité
antioxydante. Donc, huile peut être à l’origine de la réduction du mécanisme d’oxydation de
la myoglobine.
Ces résultats sont en accord avec ceux de Lopes Lutz et al. (2008), qui ont indiqué
que certaines espèces d’Artemisia sont ajoutées à la viande et les produits de volaille pour
prévenir ou ralentir la dégradation par oxydation.
111
(a) (b) (c)
Photo 7: Effet de l’huile essentielle sur l’aspect visuelle des échantillons de viande
hachée (a: témoin, b: Viande + 5µL HE ; c: Viande + 20µL HE)
L’évaluation microbiologique a porté sur l’appréciation de l’effet de l’huile essentielle

sur la contamination totale de la viande hachée par le dénombrement de la flore mésophile
aérobie totale, les coliformes fécaux ainsi que la recherche des germes pathogènes
responsables de l’altération des viandes hachée (Planches 6, 7, annexe 2).
L’analyse des données expérimentales montre que comparativement au témoin de

contrôle de croissance, il y a une diminution de l’altération microbienne dans les échantillons
contenant l’huile essentielle.
 La flore aérobie mésophile totale
D’après les résultats obtenus, on a remarqué un développement intense de la flore

totale mésophile dans la viande hachée témoin. Cependant, la présence de l’HE semble avoir
un effet très remarquable sur le taux de ces germes, car sont nombre diminue de façon clair
avec l’augmentation de la dose de l’HE. Les résultats affichent des taux de 7.9 x 107 et 1.6
x107 germe/g avec les doses 5µl et 20µl après 6 jours de stockage à la température ambiante.
 Les coliformes
Leur nombre peut constituer un bon indice de qualité hygiénique d’un aliment. E coli
est considéré comme un bon indicateur de contamination fécale pour les produits crus; dans
les autres cas, il s’agit d’un indicateur d’hygiène générale [Guiraud, 2003].
On a enregistré un taux élevé dans la viande hachée témoin, mais pour leur
dénombrement dans les échantillons additionnés de l’huile essentielle, il y a une réduction
remarquable du nombre de ces germes surtout pour la dose de 20µl (tableau 11).
112
 Les germes pathogènes
En ce qui concerne les germes pathogène, on a essayé de chercher certains germes tels
de Staphylococcus aureus et les anaérobies sulfito-réducteurs qui sont obligatoirement
recherchées dans la viande.
La présence des Staphylocoques dans la viande et les produits à base de viande

indique une contamination lors de l’abattage, le découpage, le hachage……Nos résultats
obtenus indiquent que ces germes sont absents dans tous les échantillons.
La recherche des anaérobies sulfito-réducteurs est nécessaire pour déterminer la

qualité hygiénique d’un aliment. Les résultats montrent la présence de ces germes dans tous
les échantillons, dont les taux sont variables entre eux. Ainsi, ce taux à tendance à diminuer
parallèlement en fonction de la dose utilisée de l’huile essentielle, plus la dose est importante
plus il y a augmentation de l’efficacité inhibitrice de cette huile (Planche 6, annexe 2).
En conclusion, les charges microbiennes enregistrées au niveau de la viande hachée et

le changement de son aspect, sont assez importants dans le témoin par rapport aux autres
échantillons additionnés de l’huile essentielle. Cela nous permet de dire que les substances
actives contenues dans l’huile essentielle testée sont responsables des ces effets protecteurs
contre l’altération de la viande hachée.
113
Tableau 11: Examen macroscopie des colonies ayant poussées sur les différents milieux
de culture
Milieux de Aspect macroscopique des colonies Bactéries

culture recherchées
Témoin 5µl H.E 20µl H.E

colonies de colonies de colonies de
différentes tailles différentes tailles, différente taille et
(petite, moyenne et de couleur blanc de couleur marron
grande) et de crème. et blanc crème, à
Milieux non sélectifs
différentes couleurs bord régulier et FTAM (Flore

PCA (marron foncé, irrégulier. Totale aérobie
marron clair et blanc mésophile)
crème), à bord
régulier et irrégulier
(annexe 2 ).
colonies de petite colonies de taille Absence totale des Colonies jaunes :
BCP taille, jaunâtres et moyenne et de colonies (aucune suspecte d’E.coli.
bleuâtres. couleur bleue. colonie n’est Colonies bleus :
observée). susception de
Salmonella sp.
Colonies saumonées Quelques 02 colonies vertes Colonies jaune
Hecktoen et verte de taille colonies jaunes de grande taille. saumonées :
moyenne. saumonées et suspecte d’E.coli.
vertes. Colonies verte
Nappe de colonies de Aucune colonie Aucune colonie Colonies blanc
Chapman petite taille, de n’est observée sur n’est observée sur crème :
Milieux sélectifs
couleur blanc crème. la surface de la la surface de la Streptococcus sp.

Aucune colonie de la gélose. gélose. Colonies dorées :
bactérie recherchée, S. aureus.
Staphylococcus
aureus, n’est
observée.
Noircissement totale Présence de 02 colonies noires Colonies à centre
de la gélose. noircissement et de petites tailles. noires : suspecte
V.F dans quelques de Clostridium sp.
parties de la
gélose.
114
III.4.2.1. Identification d’Escherichia coli
Les tests biochimiques permettent de connaitre certaines caractéristiques du

métabolisme de la bactérie analysée.
Les résultats obtenus confirment que la souche isolée sur milieu Hecktoen est l’espèce
Escherichia coli (tableau 12)
Tableau 12: résultats d’identification de la souche E coli isolée sur milieu

Hecktoen
Caractères résultat
Mobilité mobile
Coloration de Gram Bacille, Gram -
Oxydases -
Etude de la voie d’attaque du glucose +

Fermentation du lactose +
Utilisation du saccharose -
Production de gaz +
Production H2S -
Dégradation de l’urée -
Production d’Indole +
Dégradation du mannitol +
Utilisation du citrate -
115
Conclusion générale
L’armoise blanche « Artemisia herba alba » est une plante médicinale et aromatique,
utilisée depuis longtemps dans la médecine traditionnelle algérienne, mais elle est exploitée à
une échelle assez réduite, malgré ses effets biologiques potentiels.
Le présent travail est axé sur la recherche des substances naturelles qui par leur
activités antioxydantes et antimicrobiennes pourraient être utilisées pour la conservation des
aliments et la protection des plantes.
Cette étude réalisée sur la partie aérienne de l’armoise blanche, récoltée dans la région
de Saida à l’interface Tell-Steppe, a pour but de déterminer la qualité physico-chimique de
son huile essentielle extraite par hydrodistillation et de mettre en évidence quelques propriétés
biologiques de cette huile.
Après l’extraction, l’huile essentielle obtenue est de couleur jaune foncé avec une
odeur forte et un aspect liquide. Le rendement en huile essentielle obtenu est de l’ordre de
0.932%.
A travers cette étude et d’après les résultats obtenus, l’huile essentielle de l’armoise
blanche a montré, in vitro, des activités antioxydante et antimicrobienne intéressantes.
Les phénomènes d’altérations des aliments ne sont pas une préoccupation exclusive de
l’industrie alimentaire, mais un risque commun où un lipide ou substrat organique périssable
est présent !
Par le biais de ce travail, nous avons essayé d’exploiter les résultats obtenus sur les
activités antioxydantes et antimicrobiennes de l’huile essentielle d’A. herba alba dans le
domaine alimentaire. Le but de cette étude est d’augmenter la durée de vie et la stabilité des
aliments.
Pour réaliser cet objectif, notre choix s’est porté sur des matrices alimentaires à savoir: l’huile
de tournesol et la viande hachée.
116
Le suivi de l’état oxydatif de l’huile de tournesol chauffée en présence de l’huile

essentielle testée ,comme additif, a été évalué par l’analyse de quelques paramètres de qualité
dont l’indice de peroxyde et l’absorbance spécifique en rayonnement ultra-violet à 225 nm et
320 nm.
Les résultats obtenus, nous ont montré que cette huile essentielle possède une capacité
antioxydante intéressante qui peut être l’une des solutions les plus efficaces pour la stabilité
des denrées alimentaires.
L’évaluation microbiologique a porté sur l’appréciation de l’effet de L’HE de

l’armoise blanche sur l’altération totale de la viande hachée par le dénombrement des flores
indicatrices de la qualité sanitaire et la recherche des bactéries responsables de toxi-infection
alimentaire. Dans l’ensemble, cette huile testée s’est révélée très efficace et les résultats
obtenus sont prometteurs et ouvrent de nouvelles perspectives dans le domaine des
applications naturelles qui peuvent être une alternative valable pour remplacer les produits
chimiques.
L’huile essentielle d’Artemisia herba alba s’est montré biologiquement active. De ce

fait, les composés responsables de ces propriétés biologiques pourraient servir de principes
actifs dans la formulation des conservateurs naturels dans les industries alimentaires et des
biopesticides.
En fin, si l’armoise blanche est considérée comme matière pleine de substances

médicinales et nutritionnelles (plante fourragère), elle est aussi une source des substances qui
possèdent des effets remarquables sur le plan biologique. Nous pouvons prédire avec
discrétion que quels que soient les travaux de recherche et les efforts entrepris dans ce sens,
ils restent toujours insuffisants pour arriver à déchiffrer, à saisir et à bénéficier totalement de
toutes les vertus et les qualités que représentes les plantes médicinales steppiques, parmi
lesquelles on trouve une plante légendaire et historique dont l’utilisation est très bien
conservée dans nos traditions à travers des générations, cette mythique plante c’est la
fameuse armoise blanche « Artemisia herba alba ».
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132
Annexe 1
1. Normes Mc Farland (Technical Data#2900a/2013)
Préparation de l’inoculum de Candida albicans pour l’essai de l’aromatogramme

La souche de C albicans testée a été repiquée dans des tubes à essai contenant environ 9 ml
de bouillon nutritif (BN) et incubées pendant 18 heures afin d’obtenir une culture jeune.
Après homogénéisation de la suspension microbienne, son opacité doit être équivalente à 2
Mc Farland ou à une densité optique de 0.32 à 0.4 lue à 625 nm [Mighri et al., 2007]
La base 0.5 Mc Farland standard contient environ 1x107 à 1x108 UFC/ml (1x1010 à
1x1011 UFC/l).
0.5 Mc Farland Standard

Solution de chloride de barium (0.048M) 0.5 ml
Acide sulfurique (0.18M) 99.5 ml
D. O. à 625 nm 0.08-0.1
2 Mc Farland Standard
Solution de chloride de barium (0.048M) 2.0 ml
Acide sulfurique (0.18M) 98.0 ml
D. O. à 625 nm 0.32-04
2. Milieux de culture
Gélose Hektoen : La gélose Hektoen est un milieu sélectif permettant l’isolement et
différenciation des entérobactéries pathogènes à partir des prélèvements biologiques d’origine
animale, des eaux, des produits laitiers et des autres produits alimentaires.
Le milieu contient trois glucides: lactose, saccharose et salicine. La forte concentration
en lactose favorise la visualisation des entérobactéries en évitant le problème des
fermentations tardives.
Le principe de lecture est fondé sur la fermentation éventuelle des 3 glucides présents
dans le milieu. Les microorganismes qui fermentent au moins l’un d’entre eux forment des
colonies de couleur “saumon”, les autres donnant des colonies bleues ou vertes.
133
Annexe 1
Gélose lactosée au BCP

La gélose lactosée au pourpre de bromocrésol (BCP) est un milieu non sélectif, utilisé
pour les détection et isolement des entérobactériacées dans l’eau et les produits alimentaires.
La fermentation du lactose en acide est révélée, en présence de pourpre de
bromocrésol, par le virage du bleu violacé au jaune.
Les germes lactose-négatif donnent des colonies de couleur bleue.
3. Tests d’identification d’E coli [Guiraud, 2003; Meziani, 2012]
3.1. Etude morphologique

Etat frais
Une quantité d’eau est déposée sur la lame et une autre très faible quantité de produit
est prélevée à l’ose et dissociée dans la goutte. Une lamelle est ensuite appliquée sur la goutte
en évitant de créer des bulles d’air. Les grossissements utilisés sont X 40 et X 40.
La coloration différentielle de Gram

Cette méthode est basée sur la différence de structure da la paroi chez les bactéries:
forte proportion de lipides (20%) chez les Gram négatif, faibles traces chez les Gram positif,
entraînant une augmentation de la perméabilité de la paroi et l’extraction du complexe
iode/violet de gentiane ; ceci provoque la décoloration des organismes. Les parois des Gram
positif au contraire sont déshydratées par l’alcool: leur perméabilité diminue et le colorant ne
peut être extrait.
La méthodologie est la suivante. Réaliser un frottis et le fixer à la flamme. Quelques
gouttes de solution aqueuse de violet de gentiane sont répandues sur le frottis puis l’excès de
violet est jeté après une minute d’action. Le frottis est ensuite recouvert de lugol de Gram;
cette liqueur prend une teinte morderée; on la jette au bout de quelques secondes et on répète
l’opération 1 ou 2 fois jusqu’à ce que la pellicule morderée n’apparaisse plus. La lame est
ensuite décolorée à l’alcool absolu goutte à goutte en l’inclinant au dessus de l’évier, jusqu’à
ce que l’alcool ajouté n’ait plus d’action décolorante.
Après lavage à l’eau de robinet, le frottis est recoloré à la fuschine pendant une minute, puis
lavé à l’eau, séché à l’air et examiné à l’immersion. Les Gram positif apparaissent en bleu
noir et les Gram négatif en rouge.
134
Annexe 1
3.2. Mise en évidence des enzymes respiratoires

L’oxydase
La recherche de l’oxydase consiste à mettre en évidence la capacité de la bactérie
testée à oxyder la forme réduite incolore de dérivés méthylés du paraphénylène diamine, en
leur forme oxydée semi- quinonique rose violacé. L’oxydase ou cytochrome oxydase est une
enzyme présente dans certaines chaines respiratoires bactériennes, c’est une enzyme qui
catalyse une réaction d’oxydo-réduction en impliquant une molécule d’oxygène comme
accepteur d’électrons.
3.3. Fermentation avec ou sans gaz, utilisation du lactose et production d’H2S
Le milieu TSI (Triple Sugar Iron) permet l’identification des entérobactéries par la
mise en évidence rapide de la fermentation du lactose, du glucose (avec ou sans production de
gaz), du saccharose et de la production de sulfure d’hydrogène.
C’est un milieu coulé en pente et en culot, au niveau duquel nous avons recherché 4
caractères :
 la fermentation du lactose sur la pente qui se traduit par virage au jaune,
 la fermentation du saccharose également qui se matérialise par virage au jaune,
 la présence de gaz qui se matérialise par le décollement du culot et/ou la présence de
bulles d’air,
 la production de H2S qui se traduit par une coloration noire.
La pente du milieu TSI est ensemencée par stries et le culot par piqure centrale, puis
incubation à 37C° pendant 18 heures.
3.4. Dégradation de l’urée et production d’indole

Les microorganismes possédant une uréase très active transforment l’urée en ammoniac et en
carbonate d’ammonium.
CO(NH2)2 + H2O 2NH3 + CO2

CO2 + 2NH3 + H2O CO3(NH4)2
Cette réaction se traduit par une alcalinisation du milieu, décelable par un indicateur coloré.
135
Annexe 1
La recherche de l’uréase peut s’effectuer par une culture sur milieu liquide de
Ferguson (urée- indole). Ce milieu contient du rouge de phénol; après culture, ce milieu prend
une teinte rouge due à l’augmentation du pH si l’urée est dégradée. La mise en évidence de
l’uréase est faite en utilisant le milieu urée-indole. Ce dernier est inoculé avec quelques
gouttes de la suspension bactérienne. Après incubation à 37°C pendant 24 heures,
l’alcalinisation du milieu qui vire au rouge traduit la présence d’une uréase. Le milieu incubé
sert ensuite à la caractérisation de l’indole par la réaction de Kovacs.
3.5. Mannitol-mobilité
Le milieu mannitol-mobilité est une gélose molle conditionnée en tubes et qui permet
d’étudier la fermentation du mannitol et la mobilité des germes. La fermentation du mannitol
se matérialise par un virage du milieu au jaune. En ce qui concerne la mobilité, les bactéries
mobiles diffusent à partir de la ligne verticale d’ensemencement en créant un trouble.
L’ensemencement du milieu s’est fait par piqûre centrale jusqu’au fond du tube avec la
souche à tester à l’aide d’une anse de platine. Incubation à 37C° durant 18 heures.
3.6. Utilisation du citrate
Milieu gélosé incliné de simmons est ensemencé par stries à partir d’un milieu solide
et incubé durant 24 heures à 37°C. Ce milieu ne contient qu’une seule source de carbone ; le
citrate. La bactérie qui utilise le citrate, elle alcalinise le milieu, ce qui fait virer le bleu de
bromothymol du vert au bleu en milieu basique.
136
Annexe 2
A B
C D E
Planche 4 : Symptômes de flétrissement vasculaire aux champs. (A) Plantes de tomate

flétrissant suite à l’infection par Fusarium oxysporum f.sp. lycopersici. (B) Flétrissement du
bananier (maladie du panama) provoquée par F. oxysporum f. sp. cubense. (C) Coloration
sévère des tissus au long de la tige d'une plante de tomate infectée. (D) Tissus vasculaires
colorés et obstrués en coupe transversale d'une tige de plante de pastèque infecté avec F.
oxysporum f. sp. niveum (E) Flétrissement et mort de plantes de melon dans un champ
[Ramirez-Suero, 2009].
137
Annexe 2
Planche 5: Photos des essais préliminaires de l’activité antifongique de l’huile essentielle

d’Artemisia herba alba contre : A) Fusarium sp, B) Globisporangium ultimum
2
E E coli 1
E E coli 2
E E coli 3
E E coli 4
1,5 E E coli 5
Absorbance (E E coli) Doses 1
E E coli 6
0,5
0 10 20 30 40 50 60 70
Temps (h)
Figure 38: cinétique de la croissance de E. coli en présence de l’HE. de l’armoise blanche
138
Annexe 2
0,6
D Staphylo 1
D Staphylo 2
0,5 D Staphylo 3
D Staphylo 4
D Staphylo 5
Absorbance (D Staphylo) 1
D Staphylo 6
0,4
D Staphylo 1
0,3
0,2
0,1
0 10 20 30 40 50 60 70
Temps (h)
Figure 39: cinétique de la croissance de S. aureus en présence de l’HE. de l’armoise

blanche
0,5
0,4
Absorbance (G Candida) 1
0,3
G Candida 1
0,2
G Candida 1
G Candida 2
0,1 G Candida 3
G Candida 4
G Candida 5
G Candida 6
0 10 20 30 40 50 60 70
Temps (h)
Figure 40: cinétique de la croissance de C. albicans en présence de l’HE. de l’armoise

blanche
139
Annexe 2
Log UFC/ml
8
7,5 T
7
C1
6,5
C2
6
5,5 C3
5 C4
t0 t2 t18 t24 t48 C5
temps (haure)

de Candida albicans
CFC/ml
9
T
8
C1
7
C2
6
C3
5 C4
t0 t2 t18 t24 t48
C5
temps (heure)

de S. aureus
8
7,5 Témoin
7
UFC/ml
C1
6,5
C2
6
C3
5,5
5 C4
t0 t2 t18 t24 t48 C5
temps (heure)

de E. coli
140
Annexe 2
Aspect macroscopique des colonies apparues sur :
Gélose PCA
Témoin 5 µl H.E 20 µl H.E
Gélose BCP
Planche 6: Aspect macroscopique des colonies apparues sur les milieux de culture non
sélectifs
141
Annexe 2
Aspect macroscopique des colonies apparues sur :
Gélose Hecktoen
Témoin 5 µl H.E 20 µl H.E
Gélose Chapman
Gélose VF
Planche 7: Aspect macroscopique des colonies apparues sur les milieux sélectifs.
142
Annexe 3
Résultats des analyses statistiques

solani
Somme des
Source DL carrés CM F P
Dose 3 5385,32 1795,11 44,70 0,000
Journées 5 3519,47 703,89 17,53 0,000
Erreur 15 602,33 40,16
Total 23 9507,12
S = 6,337 R carré = 93,66 % R carré (ajust) = 90,29 %

Limites de confiance = 95 % distinctes pour la
moyenne en fonction de l'écart type regroupé
Dose Moyenne ---------+---------+---------+---------+
0 ppm 48,5000 (--*---)
1000ppm 6,9433 (---*--)
250 ppm 24,2783 (--*---)
500ppm 20,6667 (---*--)
---------+---------+---------+---------+
15 30 45 60
Tableau 14: Effet des doses sur la croissance mycéliennes de F. oxysporum
Somme des
Dose 3 1120,37 373,458 43,44 0,000
Journées 5 3369,81 673,962 78,40 0,000
Erreur 15 128,95 8,597
Total 23 4619,13

Dose Moyenne -------+---------+---------+---------+--
0 ppm 34,5000 (----*---)
1000ppm 16,3883 (---*----)
250 ppm 31,2783 (---*---)
500ppm 27,5567 (---*---)
-------+---------+---------+---------+--
18,0 24,0 30,0 36,0
143
Annexe 3
Tableau 15: Effet des doses sur la croissance mycéliennes de G. ultimum
Somme des
Dose 3 26008,0 8669,34 102,33 0,000
Journées 5 2864,4 572,88 6,76 0,002
Erreur 15 1270,7 84,72
Total 23 30143,2

dose Moyenne ------+---------+---------+---------+---
0 ppm 90,0000 (--*--)
1000ppm 18,7500 (---*--)
250 ppm 80,1667 (--*--)
500ppm 20,5000 (--*--)
------+---------+---------+---------+---
25 50 75 100
Tableau 16: Résultats de la germination de Fusarium solani, Fusarium oxysporum et

Globisporangium ultimum
ANOVA : Germination en fonction de Espèces; Etat; Dose
Facteur Type Niveaux Valeurs

Espèces aléatoire 3 Fox; Fs; Pu
Etat aléatoire 2 Germé; Non Germé
Dose aléatoire 4 0 ppm; 1000ppm; 250 ppm; 500ppm
Analyse de la variance pour Germination
Somme des
Espèces 2 0,1 0,0 0,00 1,000
Etat 1 10626,0 10626,0 19,71 0,000
Dose 3 0,1 0,0 0,00 1,000
Erreur 17 9162,7 539,0
Total 23 19789,0
144
Annexe 3
Tableau 17: Effet des doses sur la sporulation de F. solani
ANOVA à un facteur contrôlé : Sporulation Fs en fonction de doseSp
Somme des
Dose Sp 3 9128 3043 12,66 0,000
Erreur 16 3847 240
Total 19 12975

Niveau N Moyenne EcTyp --+---------+---------+---------+-------
0 ppm 5 64,00 20,84 (-----*----)
1000ppm 5 8,80 10,33 (-----*----)
250 ppm 5 34,60 19,63 (-----*-----)
500ppm 5 15,80 5,93 (-----*-----)
--+---------+---------+---------+-------
0 25 50 75
Ecart type regroupé = 15,51
Informations de groupement avec la méthode de Tukey
Dose Sp N Moyenne Groupement

0 ppm 5 64,00 A
250 ppm 5 34,60 B
500ppm 5 15,80 B
1000ppm 5 8,80 B
Tableau 18: Effet des doses sur la sporulation de F. oxysporum
ANOVA à un facteur contrôlé : Sporulation Fox en fonction de doseSp
Somme des
Dose Sp 3 22269 7423 14,26 0,000
Erreur 16 8330 521
Total 19 30599

Niveau N Moyenne EcTyp ----+---------+---------+---------+-----
145
Annexe 3
0 ppm 5 100,80 22,95 (-----*-----)

1000ppm 5 8,20 5,50 (-----*------)
250 ppm 5 41,80 37,52 (-----*-----)
500ppm 5 41,40 10,85 (-----*-----)
----+---------+---------+---------+-----
0 35 70 105

0 ppm 5 100,80 A
250 ppm 5 41,80 B
500ppm 5 41,40 B
1000ppm 5 8,20 B
Tableau 19: Effet des doses sur la sporulation de G. ultimum
ANOVA à un facteur contrôlé : Sporulation G ultimum en fonction de dose Sp
Somme des
Dose Sp 3 6647 2216 3,78 0,032
Erreur 16 9384 586
Total 19 16030

Niveau N Moyenne EcTyp -------+---------+---------+---------+--
0 ppm 5 54,20 46,77 (---------*--------)
1000ppm 5 5,20 5,54 (--------*--------)
250 ppm 5 35,60 10,57 (--------*--------)
500ppm 5 19,80 3,96 (--------*--------)
-------+---------+---------+---------+--
0 25 50 75


0 ppm 5 54,20 A
250 ppm 5 35,60 AB
500ppm 5 19,80 AB
1000ppm 5 5,20 B
146
Annexe 3
Tableau 20 : Résultats de la sporulation de Fusarium solani, Fusarium oxysporum et de

FS Les Fox Les Gu Les

moyen moyen moyen
s s s
Témoin 39 66 49 92 74 64 135 87 74 106 102 100.8 34 129 5 39 64 54.2
C1 : 27 03 02 06 06 8.8 12 04 10 01 14 8.2 0 3 2 7 14 5.2

1000
C2 : 500 08 22 16 21 12 15.8 46 46 22 46 47 41.4 15 20 19 26 19 19.8
C3 : 250 54 17 40 11 51 34.6 53 51 94 00 11 41.8 33 37 29 53 26 35.6
Tableau 21: Résultats de la germination de Fusarium solani, Fusarium oxysporum et de

Globisporangium ultimum « le nombre des spores est 80 »
Concentration/ Temoin 1000ppm 500ppm 250ppm

Espèce
Spore Spore Spore Spore Spore Spore Spore Spore
germé non germé non germé non germé non
germé germé germé germé
Pu 14 66 0 80 0 80 5 75
Fs 27 53 3 77 12 68 15 65
Fox 73 7 16 64 28 53 35 45
147
Annexe 3
Tableau 22: Résultats de la Croissance mycelienne de F. solani, F. oxysporum et de G.

ultimum
1er jour 2ème jour 3ème jour 4ème jour 5ème jour 6ème jour 7ème jour
Témoin 0 20 32 45 52 62 80
C1: 250 ppm 0 11 15 21 26 32.67 40
C2: 500ppm 0 0 12 19.5 23.5 30 39
C3: 1000ppm 0 0 0 0 11 13.33 17.33
Fusarium oxysporum
Témoin 0 15 22 31 38 47 54
C1: 250 ppm 0 12 19 26.67 36.00 43.33 50.67
C2: 500ppm 0 10 17.67 23.67 30.33 40.00 43.67
C3: 1000ppm 0 0 12 15.33 20 24.33 26.67
Témoin 0 90 90 90 90 90 90
C1: 250 ppm 0 49 72 90 90 90 90
C2: 500ppm 0 0 0 21.33 28.33 32.67 40.67
C3: 1000ppm 0 0 0 19 24 32.5 37
148
Annexe 3
Tableau 23: Pourcentage d’inhibition de H.E. d’A. herba alba Asso de la croissance
mycélienne, la germination conidienne et la sporulation de F. solani, F. oxysporum et de
G. ultimum
F. solani F. oxysporum G. ultimum
Germination Control 0 0 0
conidienne 250ppm
44.44 ± 9.36 52.05 ± 9.77 64.28 ± 6.68
500ppm
55.55 ± 17.54 61.64 ± 6.51 100 ± 0
1000ppm
88.88 ± 8.93 78.08 ± 1.82 100 ± 0
Croissance Control 0 0 0
mycélienne 250ppm
50 ± 13.75 6.1 ± 2.13 0
500ppm
51.25 ± 1.25 19.12 ± 5.65 54.81 ± 9.7
1000ppm
78.33 ± 1.44 50.61 ± 9.5 58.88 ± 8.88
sporulation Control 0 0 0
250ppm
45.39 ± 29.18 58.53 ± 24.07 34.31 ± 7.38
500ppm
75.51 ± 10.97 58.92 ± 13.74 63.46 ± 4.88
1000ppm
86.25 ± 22.11 91.86 ± 4.13 90.46 2.81
149
Annexe 3
Tableau 24: Analyse statistique des résultats du test au DPPH
ANALYSE DE VARIANCE
Source des Somme des Degré de Moyenne des
variations carrés liberté carrés F Probabilité F 5% F 1%
Lignes 1035,46341 1 1035,46341 22,5262987 0,00512183 6,60789097 16,258177
Colonnes 10316,9243 5 2063,38487 44,8885239 0,00037198 5,05032906 10,9670207
Erreur 229,834342 5 45,9668683
Total 11582,2221 11
Tableau 25: Analyse statistique des résultats de l’évolution de l’indice de peroxyde

(en meq d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol chauffée en présence de différentes
doses de l’huile essentielle.
ANALYSE DE VARIANCE
variations carrés liberté carrés F Probabilité F 5% F 1%
Lignes 844,688653 2 422,344327 46,7861737 3,8482E-05 4,45897011 8,64911064
Colonnes 290,244973 4 72,5612433 8,03814026 0,00662324 3,83785335 7,00607662
Erreur 72,2169467 8 9,02711833
Total 1207,15057 14
Tableau 26: Analyse statistiques des résultats de l’évolution de l’indice de peroxyde

(en meq d’O2/Kg) dans l’huile de tournesol chauffée en présence de différentes
doses de tocophérol
ANALYSE DE VARIANCE
variations carrés liberté carrés F Probabilité F5% F 1%
Lignes 675,72372 2 337,86186 44,6479936 4,5707E-05 4,45897011 8,64911064
Colonnes 467,88004 4 116,97001 15,4574306 0,00078239 3,83785335 7,00607662
Erreur 60,53788 8 7,567235
Total 1204,14164 14
150
Annexe 3
Tableau 27: Analyse statistique des résultats de l’évolution des diènes conjugués dans
les échantillons de l’huile de tournesol additionnés de différentes doses de l’huile
essentielle et de l’α tocophérol
ANALYSE DE VARIANCE
Source des Somme Degré de Moyenne
variations des carrés liberté des carrés F Probabilité F 5% F 1%
Lignes 1,12232585 2 0,56116293 43,7819614 3,2456E-07 3,63372347 6,22623528
Colonnes 0,09851763 8 0,0123147 0,96079384 0,49797001 2,59109618 3,88957214
Erreur 0,20507548 16 0,01281722
Total 1,42591896 26
Tableau 28: Analyse statistique des résultats de l’évolution des triènes conjugués
dans les échantillons de l’huile de tournesol additionnés de différentes doses de
l’huile essentielle et de l’α tocophérol
ANALYSE DE VARIANCE
Source des Somme des Degré de Moyenne des Valeur critique
variations carrés liberté carrés F Probabilité pour F
Lignes 0,25613963 8 0,03201745 2,18128205 0,08770346 2,59109618
Colonnes 0,1176743 2 0,05883715 4,00845165 0,03879929 3,63372347
Erreur 0,23485237 16 0,01467827
Total 0,6086663 26
151
J. Appl. Environ. Biol. Sci., 6(5)1-1, 2016 ISSN: 2090-4274
Journal of Applied Environmental
© 2016, TextRoad Publication
and Biological Sciences
www.textroad.com
Antioxidant Activity of Essential Oil of Artemisia herba alba

Nebia Bouzidi*1, Khalladi Mederbal2 and Bachir Raho G3
*1
University of Mascara. Faculty of Nature and life. Laboratory of research on Geo-environment and
Development. Mascara 29000. Algeria. Tel 0791182816
2
University of Tiaret. Algeria
3
University of Mascara. Algeria
Received: January 13, 2016
Accepted: March 14, 2016
ABSTRACT
Synthetic antioxidants are widely used in the food industry because of their ability to prevent deterioration of
foods and prolong their shelf life, but a good number of them will be considered harmful to health and have
carcinogenic risks. Particular interest was manifested in recent years to essential oils that are an effective
alternative to chemical preservatives. Artemisia herba alba is characterized by its wealth in essential oil of
different composition which led to the definition of several chemotypes; its high feed value and a very important
ecological role against erosion and desertification.
The objectives of this study were to evaluate the antioxidant activity of essential oils of the aerial part of
Artemisia herba alba. The essential oil was isolated by hydrodistillation using a Clevenger apparatus, and the
identification and quantification of constituents, through GC/MS analysis. Antioxidant effectiveness was
examined by the radical scavenging method (DPPH) and determination of ferric reducing antioxidant power
(FRAP). The yield obtained of essential oil is 0.932%. This oil has a density and a refractive index of the order
of 0.912 and 1.4811 respectively. In chromatographic analysis, the majority constituents found in the essential
oil of Artemisia herba alba were camphor (29.8%), 1,2,5,5-tetramethyl-1,3-Cyclopentadiene (15.6 %),
Chrysanthenone (8.2%), eucalyptol (6.5%), Arthole (4.5%). The results of the antioxidant activity obtained in
vitro with both methods showed that essential oil from A. herba alba possess an interesting antioxidant effect.
The results suggest that A. herba alba oil has promising use as a natural source of antioxidants that can be a valid
alternative to replace chemicals.
KEYWORDS: Antioxidant, chemical composition, Camphor, CG/SM, white wormwood
INTRODUCTION
Given the risks related to chemical additives in terms of public health and dizzying demand for foods with
less synthetic chemicals, increased search for substitutes natural agents such additives to improve food safety is
one priorities researchers.
Aromatic plants have been used since ancient times as well as in therapy in preserving and flavoring food,
but only in the last decade scientific research has focused its interest on their essential oils and natural extracts as
sources of antimicrobial compounds and antioxidants [1, 2, 3, 4].
A large number of medicinal plants have been reported to exhibit antioxidant activity, including Ocimum
sanctum, Piper cubeba Linn., Allium sativum Linn., Terminalia bellerica, Camellia sinensis Linn., Zingiber
officinale Roscoe and several Indian and Chinese plants [5]. Many studies report the results of using plant-derived
compounds as natural antioxidants in food products. These results led the researchers to conclude that some plant
compounds could be considered as proper alternatives to synthetic antioxidants [6]. Steppe zones occupied a large
area of Algeria, which is characterized by its appreciable biodiversity [7]. Nowadays, many researchers from
different fields namely pharmacology and nutrition are interested in the flora of the high Algerian steppe plains,
to develop, expand and valorize this floristic heritage which is dominated by three plant species namely alfa
(Stipa tenacissima) Esparto (Lygeum spartum L.) and sagebrush (Artemisia herba alba. Asso)[8, 9]. Artemisia
herba-alba is a greenish-silver perennial dwarf shrub growing in arid and semi-arid climates. It is characteristic
of the steppes and deserts of the Middle East (Egypt, desert of Israel and Sinai), North Africa (Tunisia, Morocco
and Algeria), Spain, extending into Northwestern Himalayas [10]. Artemisia herba alba, or the white wormwood
designated Arabic as the "Chih" of the Asteraceae family, usually grows in small clumps sizes. It is a plant for
different uses. A. herba-alba has traditionally been used in the treatment of diabetes, bronchitis, diarrhea,
neuralgias and hypertension [11]. The plant is reported to possess hypoglycemic [12], anticancer [13, 14], anti-
angiogenic [15], insectisidal [16], hypotensive and diuretic [17], anti-inflammatory [14, 18], antimicrobial activity [19,
20]
, and many other biological activities. Thus, the aims of the present study are to investigate the chemical
composition and to determine the antioxidant activity of the essential oil of A. herba-alba.
Corresponding author: Nebia Bouzidi, University of Mascara. Faculty of Nature and life. Laboratory of research on Geo-
environment and Development. Mascara 29000. Algeria. Tel 0791182816 lina_kholoud@yahoo.fr
Bouzidi et al.,2016
MATERIEL AND METHODS
Plant Material and essential oil extraction

The aerial part of the plant was collected in Sidi Ahmed station (Saida province), situated in the Tell steppe
interface area in North West of Algeria. The samples were submitted to hydrodistillation for 3 h. The essential
oil was dried over anhydrous sodium sulphate and stored in a sealed vial in the dark at +4 °C before analysis
tests.
Qualitative analysis of the essential oil of A. herba alba

Physical analysis of essential oil
Determination of the relative density [21]
Determination of the refractive index [21]
Gas chromatography/Mass spectrometry (GC/MS) analysis of Essential oil
The compounds of essential oil of A. herba alba were analysed by GC/MS, using a Hewlett- Packard (HP)
chromatograph (Agilent Technologies) MDS 5973 coupled to a 6890 plus mass spectrometer, equipped with fused-
silica capillary column HP-5MS (30m; 0.25mm i.d.; film thickness 0.25μm). The oven temperature was
programmed from 60°C for 1 min, to 280°C at the rate of 2°C/min, and then left at 280°C for 10 min. The injector
port temperature was held at 250°C, split: 1/20, the temperature of the detector was set at 280°C. The carrier gas
was helium with a flow rate of 0.5 ml/min and the analysed sample volume was 2 μl. The mass spectrometer (MS)
conditions were as follow: scan, Interface temperature: 280°C, Ionization type: electronic, Intensity of the filament:
70ev, Type of mass analyzer: Quadrupole, Source temperature: 230°C, Empty: 65m torr.
Determination of Antioxidant Activity

Measure of the Antioxidant activity by DPPH free radical scavenging test [22]
The antioxidant capacity of the essential oil of Artemisia herba alba was tested by the method which
uses the DPPH● like a relatively stable free radical. In this test, the DPPH● of purple color is reduced in a yellow
compound, the diphenylpicrylhydrazine, whose intensity of the color is inversely proportional to the reducing
capacity of antioxidants present in the medium. The reaction is carried out in a total volume of 2 ml containing
0,4 ml of DPPH● (0,5 mM) solubilized in ethanol.
For the test, the sample was prepared by dissolution in absolute methanol. We prepare a solution in
absolute methanol (500µg/ml). From this solution, different dilutions are made to have various concentrations
about microgram per ml (31.25, 62.5, 125, 250 and 500 µg/ml). These same concentrations were prepared with
the BHT to be useful as a positive control. a white control is also carries out with absolute ethanol only. For each
concentration, the test is repeated three times. The samples are then left in dark for 30 minutes, and discoloration
compared to the negative witness containing only the solution of DPPH● is measured at 517 nm. The antioxidant
activity is estimated according to the following equation:
AA % = ([Abs control–Abs test]/Abs control) × 100
AA : antioxidant activity, Abs : absorbance at 517 nm.
Determination of Ferric Reducing Antioxidant Power (FRAP Assay)

The antioxidant capacity was determined following the procedure described by Oyaisu [23]. one millilitre
of sample solution was added to 2,5ml of phosphate buffer (0,2 M, pH 6,6) and 2.5 ml of hexacyanoferrate of
potassium [K3Fe(CN)6] (10 g/l), and warmed in water bath at 50°C for 20 min. Then 2.5ml of trichloracetic
acid (100 g/l) was added to the mixture and centrifuged at 3000 turns/min. during 10 minutes. Finally, 2,5ml of
the supernatant were mixed with distilled water (2,5 ml) and 0.5 ml of ferric chloride [FeCl3] (1g/l). The
absorbance was measured in a spectrophotometer at 700 nm. A control without sample is prepared under the
same conditions and ascorbic acid was used as positive control.
RESULTS AND DISCUSSIONS
Evaluation of the quality of the essential oil of Artemisia herba alba

Artemisia herba-alba dried aerial part were subjected to hydrodistillation and the yellow-colored essential
oil obtained was analyzed by GC/MS techniques.
The yield of essential oil is of the order of 0.932%. Comparable yields are obtained in samples of white
wormwood different regions in Algeria [24, 25]. The yield and quality of essential oils of species of Artemisia
genus are influenced by soil pH [26]. The soils of the study area are characterized by a sandy-loam texture,
alkaline pH and low chemical quality [27]. The refractive index and density are 1.4811 and 0.912 respectively.
Chemical composition of the essential oils of the aerial parts from A. herba-alba are reported in table1. 31
components were identified, in which camphor (29.8%), 1, 2, 5, 5-tetramethyl- 1, 3-Cyclopentadiene (15.6 %),
Chrysanthenone (8.2%), eucalyptol (6.5%), Arthole (4.5%) were the most abundant components. The minor
J. Appl. Environ. Biol. Sci., 6(5)1-1, 2016
compounds detected in A. herba-alba oils were thujone (1,08% - 1, 40%), camphene (0.67%), eugenol
(0.47%),....
Camphor has been found as major compounds in the present study which is in agreement with several
research [28, 29, 30]. In other studies different dominated compounds were found like thujone, Chrysanthenone and
Cis-chrysanthenyl acetate.
Differences in chemical composition of essential oils extracted from a species often occur, since the production
of secondary metabolites, including essential oils, is strongly influenced by the environment in which the
producing organism is inserted, and the factors responsible for such variations are, seasonality, age and plant
development, as well as the different plant organs, temperature, nutrients, altitude, and attack of pathogens and
herbivores [31, 32, 33]. According Rota et al.[34], the biological activity of essential oils depends on their chemical
composition.
FIGURE 1: GC-MS Chromatogram of essential oil of Artemisia herba alba
TABLE 1. Essential oil of Artemisia herba alba

N° Compounds R.T %
(min)
1 Camphene 11.102 0.663
2 Eucalyptol 16.595 6.513
3 Bicyclo [3.2.0] hept-2-ene, 2-methyl 21.806 4.311
4 Thujone (alpha)- 21.942 1.409
5 Thujone (beta)- 22.623 1.089
6 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl- 23.634 15.582
7 1,6-Dimethylhepta-1,3,5-triene 23.672 2.333
8 Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1R)- 25.218 29.816
9 Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1S)- 25.245 4.184
10 2(10)-Pinen-3-one- 26.066 1.097
11 Arthole 26.315 4.526
Borneol 26.439 1.105

12
13 Terpinen-4-ol 27.148 0.812
14 3-Carene 28.050 0.360
15 Bicyclo [3.1.1] hept-2-ene-2-carboxaldehyde,6,6- dimethyl- 28.342 0.578

Bouzidi et al.,2016
16 Verbenone 29.256 0.755
17 Octadiyne 31.467 0.450
18 Bicyclo [3.1.1] hept-2-en-4-ol, 2,6,6-trimethyl-, acetate 32.873 0.327
19 2-Cyclohexen-1-one, 3,5,5-trimethyl- 33.657 1.074
20 1,5-Hexadiene, 2,5-dimethyl-3-methylene- 36.106 0.765
21 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-2-ethyl- 36.462 1.093
22 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-1-ethyl 37.138 3.803
23 Eugenol 39.355 0.377
24 Pipéritenone 41.204 1.063
25 Chrysanthenone 42.198 8.216
26 2,4-Cycloheptadien-1-one, 2,6,6-trimethyl- 42.247 2.659
27 1-Penten-3-one, 2-methyl- 45.193 2.381
28 Germacrène D 46.988 1.032
29 (-)-Spathulenol 47.875 0.221
30 g-Gurjunene 52.724 0.517
31 Hepatonic acid, phenyl ester 53.524 0.507
Total 99.61
Antioxidant activity Antioxidant activity

The antioxidant activity of essential oil of A. herba alba was examined by comparing it to the activity of
known antioxidants such as BHT and ascorbic acid by the following two in vitro assays; inhibition of DPPH
radical and the ferric reducing antioxidant power (FRAP). All results are reported in Figure 2, 3. These results
showed that A. herba alba essential oil was able to reduce the stable free radical DPPH with an IC50 of 2.66
µg/ml, whereas that of the synthetic antioxidant BHA was 1.66 µg/ml. A. herba alba essential oil was found to
be less active than BHA since their IC50 values were found to be higher. But with careful and cautious
consideration, it is interesting that BHT is a pure chemical substance, while the essential oil of A. herba alba
used consists of several natural active substances or a few of them must have this antioxidant capacity. If we
consider that it is the camphor which has antioxidant power in our essential oil (because of its ketone structure),
and it is the majority compond with 29%, we can recalculate the IC50 should be 29% of the value of 2.66 g / ml,
and therefore clutched 0.77 mcg / ml, so this is a value that attributes to our essential oil, which is organic and
natural, anti-radical power stronger than BHT itself. This result still encourages us to give more importance to
natural substances in the field of additives.
Khlifi et al. [14] reported that the extract of Artemisia herba alba showed strong antioxidant activity but with
an IC50 much higher than ours which is 20.64 mg / l (equivalent to 20.64 µg / ml).
The anti-radical activity of the essential oil of sagebrush could be attributed to its high content of
oxygenated monoterpenes [35., 36, 37, 38]. However, camphor, predominant in the essential oil of Artemisia herba
alba in the region of Sidi Ahmed (29%), has a considerable antioxidant power [ 39, 40 ].
120
100
% of inhibition
80
60
EO
40
BHT
20
0
15.62 31.25 62.5 125 250 500
Concentration
Figure 2: Test DPPH● histogram, expressed as a percentage inhibition, illustrating the antioxidant activity
of BHT and essential oil according to their concentrations.
The same remark was showed by FRAP test which has indicated a little antioxidant activity in comparison the
A. herba alba essential oil to ascorbic acid. In this test, the result (Figure 3) revealed that a good linearity to the
essential oil (R2 = 0.956) than the positive control (R2 = 0.752). This may indicate that the reducing effect of the
oil of A. herba alba is more correlated with its concentration, its effect is direct and does not exhibit phase
affected by the mass effect
1.65 3
Absorbance y = 0.366x +
1.6
absorbance
y = 0.034x + 1.4775 2 0.797

R² = 0.9568 R² = 0.7524
1.55
Essenti 1 ascorbi
1.5 al oil c a.
0
1.45 15 20 25 30
20 40 60 80
Concentration
Concentration
(a) (b)
Figure 3: reducing power of essential oil (a) and of the ascorbic acid (b) by the method of FRAP
The finding that the results of the DPPH and FRAP assays for plant extracts were highly correlated agrees
with the work of others, and is consistent with the view that the two assays share a similar mechanistic basis, viz.
transfer of electrons from the antioxidant to reduce an oxidant [41]. In the present study, the antioxidant activity of
essential oil could be attributed to the presence of camphor, eugenol, α -thujene, pinen. [35, 42, 43, 44]. Many
previous studies reported that the antioxidant capacity of plant extracts could be attributed to the total phenolic
content [ 45, 46, 47].
To conclude, we can say that our results show a significant antioxidant capacity of the essential oil of
sagebrush Algerian Northwest.
Conclusion
In the present study, results from antioxidant activities reflected by the DPPH and FRAP assay have
demonstrated that the Artemisia herba-alba essential oil possesses a important antioxidant activity. Thus,
Artemisia herba-alba may therefore be a good candidate for functional foods as well as plant-based
pharmaceutical products.
REFERENCES
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Available online www.jocpr.com
Journal of Chemical and Pharmaceutical Research, 2015, 7(4):458-462
ISSN : 0975-7384
Research Article CODEN(USA) : JCPRC5
Chemical composition and antimicrobial activity of the essential oil from

Artemisia herbaalba Asso growing in the north west of Algeria
Nebia Bouzidi Maghraoui1*, Khalladi Mederbal2, Kada Ibri2, Lakhdar Beladid2
and Nair Samira1
1
Laboratory of Research on Geo-environment and Development, Department of Biology, Faculty of Science at
Nature and Life (SNV), University of Mascara, Mascara, Algeria
2
Laboratory of Research on Biological Systems and Geomatics (L. R. S. B. G.), Department of Agronomy,
University of Mascara (SNV), Mascara, Algeria
_____________________________________________________________________________________________
ABSTRACT
The study was carried out on essential oil of Artemisia herbaalba. CG/SM qualitative analysis of white wormwood
essential oil allowed us to identify 99.61% of the total peak areas. The main one is Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one,
1,7,7-trimethyl-, (1R)- (29.82%). Other main components are determined as 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5-
tetramethyl- (15.58), Eucalyptol (6,51%) in the oil. On a biological level, evaluation of the essential oil revealed an
interesting antimicrobial activity towards Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Candida albicans, Fusarium
oxysporum f. sp. ciceris(Chickpea Fusarium Wilt), Fusarium solani (Chickpea root-rot) and Globisporangium
ultimum (Aleppo pine damping off and root-rot diseases).Results are also interesting for the pharmaceutical and
agro-food industry fields using essential oil and this oil can be used in disease management against these soil-borne
pathogens.
Key words: Antimicrobial activity, Essential oil, CG/SM, White wormwood.

_____________________________________________________________________________________________
INTRODUCTION
Genetic diversity of many steppe plants species is decreasing, and for some of them in a frightening way. Therefore,
as a contribution to promote steppe plants genetic inheritance, we have focused our attention on Artemisia herbaalba
(from the Asteraceae family), a medicinal steppe plant well known by the Algerian population as “white worm
wood”. Artemisia herbaalba Asso is interesting for many fields: it is a unique source of feeding for nomad herd
rearing and its essential oil is mainly used in perfumery industry. Medicinal and aromatic plants as well as their
essences have several biological activities. They are used in phytotherapy for their antiseptic properties towards
bacteria infectious diseases. In the phytosanitary and agro-alimentary fields, essential oils or their active substances
could be employed like agents of protection against fungi and micro-organisms who invade the foodstuffs. Chickpea
Fusarium wilt and Chickpea root-rot caused, respectively, by Fusarium oxysporum f. sp. ciceris (FOC) and
Fusarium solani(FS), represented the most widespread and destructive diseases of this legume crop.
Globisporangium ultimum (Trow) Uzuhashi, Tojo& Kakish. (syn. Pythium ultimum Trow, syn. P. ultimum Trow var.
ultimum) (GU) is a known oomycetal species from Pythiums. l. causing damping-off and/or root rot on Aleppo pine
(Pinushalepensis Mill). Our purpose is to study chemical composition of Artemisia herbaalba essential oil obtained
through hydro-distillation as well as to evaluate its antimicrobial effect.
458
Nebia Bouzidi Maghraoui et al J. Chem. Pharm. Res., 2015, 7(4):458-462
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EXPERIMENTAL SECTION
2.1. Plant material

Artemisia herbaalba belongs to the Asteraceae family. White wormwood is a forage, medicinal and aromatic plant.
The aerial part of the plant was collected in Sidi Ahmed station (Saidaprovince) in the Tell steppe interface area
North West Algeria.
2.2. Isolation of essential oil

We obtained Artemisia herbaalba essential oil through a hydrodistillation process from the plant material using a
Clevenger –type apparatus for 3hours. Before dark stored at 4°C, essential oil was dried up using anhydrous sodium
sulfate. The essential oil yield was calculated on a dry weight by gravimetric method.
2.3. Essential oil analysis

We analyzed A. herbaalba essential oil through chromatography coupled with mass spectrometry.
The oil was investigated using a chromatograph HP (Agilent Technologies) MDS 5973 coupled to a 6890 plus mass
spectrometer, equipped with fused-silica capillary column HP-5MS (30m; 0.25mm i.d.; film thickness 0.25µm).
2.4. Antimicrobial activity

2.4.1. Microbial strains
Antimicrobial activity of A. herbaalba essential oil was tested against: Escherichia coli (ATCC 25922),
Staphylococcus aureus (ATCC 25213), Candida albicans (ATCC 10231), Fusarium oxysporum f.sp. ciceris
(Chickpea Fusarium Wilt) (FOC), Fusarium solani (Chickpea root-rot) (FS) and Globisporangium ultimum(Aleppo
pine damping off and root-rot diseases) (GU)..
2.4.2. Disk Diffusion method

The agar diffusion method was used to evaluate the antimicrobial activity of essential oil as described previously[1].
The Microbial suspension - Escherichia coli (ATCC 25922) and Staphylococcus aureus (ATCC 25213)-was spread
on the MH agar medium. Then, absorbent disk (6 mm diameter) containing 5µl of essential oil were placed on the
culture medium surface inoculated with different microbial strains (the bacterial suspension was adjusted to 0.5Mc
Farland).
Candida albicanswas first grown on Sabouraudchlorenphenical plate at 30°C for 18-24 h prior to inoculation onto
the nutrient agar. The fungal suspension was adjusted to 2 Mac Farland. The inoculum was streaked on to
Sabouraud chlorenphenical agar. A sterile filter disc, diameter 6 mm was placed. 5 µL of essential oil was dropped
on each paper disc. The treated Petri dishes were placed at 4°C for 1-2h. After that, petri dishes were incubated at
37°C for 18-24h. Finally antimicrobial activity was evaluated by measuring inhibition zone diameter around every
disk. Experiment was conducted three times for every tested strain. To determine the minimum inhibitory
concentration (MIC), we used micro-dilution on liquid medium method with a 96 micro well plate.
2.4.3. Antifungal activity

2.4.3.1. Mycelia growth
Fungal isolates –Fusarium oxysporum f. sp. ciceris(FOC), Fusarium solani(FS) and Globisporangium ultimum
(GU)-are cultivated on PDA medium during seven days at 25°C in darkness. The choice of the concentrations of the
essential oil is carried out on the basis of preliminary test. The mycelia growth was carried out by direct contact
method, which consists in adding essential oil in PDA medium at 45°C to obtain concentrations of 1000, 500 and
250 ppm. After obtaining these various dilutions and their solidification in Petri dishes (15ml/dish), mycelia discs of
1cm of diameter, issue of 7 days old culture of each isolate, was deposited in the center of each Petri plate. Control
plates containing the culture medium and the mycelia disc of each isolate without essential oil were realized. Each
test is repeated three times. After incubation at 25°C during 7 days, by taking account of the growth of control, the
percentage of inhibition (PI) is calculated by the following formula: PI%= dT-dE/dT× 100 ; with; PI (%): percentage
of inhibition, dT: Average diameter of the growth zone of the control and dE: Average diameter of the growth zone
of the test[2, 3].
2.4.3.2. Evaluation of the sporulation

The evaluation of the sporulation was estimated from plates having been used to study the mycelia growth. Four
discs of 5 mm in diameter were cut out with a perforating punch (cookie cutter) along the diameter of the same
colony and were put in a tube containing 1 ml of distilled water. The spores suspension is then agitated using a
vortex in order to release the spores of the conidiophores. These experiments are repeated three times. After
counting the full number of the spores using a cell of Malassez at a rate of 10 counting by suspension, the values are
459
______________________________________________________________________________
expressed of number of the spores per unit of area (mm2). The percentage of inhibition of the sporulation (IS) is
calculated by the following formula: IS% = [(N0 – Nc) / N0] × 100; With N0: The mean number of the spores
estimated for the control and Nc: The mean number of the spores estimated in the presence of essential oil[3].
2.4.3.3. Evaluation of Germination

The collected suspension of the spores is adjusted at a rate of 105 spores/ml of distilled water using a cell of
Malassez. We spread out 0.1 ml of this suspension on Petri dishes containing PDA medium with essential oil at the
same concentrations previously mentioned. Three repetitions are carried out simultaneously for each concentration.
The counting of the spores germinated or not was carried out on a total of 200 spores after 5 to 18 hours of
incubation at 25°C in darkness. A spore is considered germinated if the length of the germinatif tube is higher than
its smaller diameter. Percentage of inhibition of the germination of the spores Ig is given according to the following
formula: Ig%= (N0- Nc) / N0× 100; withN0: The number of the spores having germinated in the culture medium
without essential oil (control) Nc: The number of the spores germinated in the presence of essential oil[3].
RESULTS AND DISCUSSION
3.1. Chemical composition of the essential oil

Chemical composition of white Artemisia aerial part essential oil obtained through hydrodistillation was analyzed
with GC and GC-MS.31 components were identified on HP5-MS column from the essential oil representing 99.61%
of the total (majority compounds are shown in table 1).The hydrodistillation yielded 0.93% of oil (yield (w/w)). This
output is comparable to those obtained from 5 oils Artemisia herbaalba recollected from different regions in Algeria
(0.2% to 0.95%)[4]. It is worth mentioning that the same variation was recorded with sagebrush in Spain (0.41% to
2.30%)[5].A. herbaalba extraction yield is related to plant origin: Tunisia (0.68% to1.93%) and Morocco (0.86%). It
has to be mentioned that this is an average output compared to certain plants used in industry as essential oil source:
superior to rose yield (0.10% - 0.35%) and inferior to thyme yield (2.0- 2.5%)[6].The main components of essential
oil of Artemisia from Saida region are different than those reported by several authors with Artemisia herba alba
from other regions: α and β-thujone (7.85% to 30%)[7, 8, 9, 10], Cis-chrystanthenyl acetate (10.60% à 25.12 %)[4,
8], being the most abundant components. Essential oil chemical composition of plants collected in different regions
of Algeria is characterized by presence of high thujone percentage[4, 9]. It is worth mentioning that in our study
these compounds were found in small quantities (1.41%).Therefore, A. herba alba essential oil chemical
composition variation may be due to exogenous factors such as soil types and their components, temperature,
altitude and also due to endogenous factors such as plant genetic inheritance[6].
Table 1: Essential oil of Artemisiaherba-alba
N° Majority Compounds %
1 Camphene 0.663
2 Eucalyptol 6.513
3 Bicyclo [3.2.0] hept-2-ene, 2-methyl 4.311
4 α Thujone 1.409
5 β Thujone 1.089
6 1,3-Cyclopentadiene, 1,2,5,5- tetramethyl- 15.582
7 Bicyclo [2.2.1] heptan-2-one, 1,7,7-trimethyl-, (1R)- 29.816
8 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-2-ethyl- 1.093
9 1,3-Cyclopentadiene, 5,5-dimethyl-1-ethyl 3.803
10 Chrysanthenone 8.216
11 2,4-Cycloheptadien-1-one, 2,6,6-trimethyl- 2.659
12 1-Penten-3-one, 2-methyl- 2.381
Total 99.61
Yield 0.93
3.3.2. Antimicrobial activity

Experimental results show that Artemisia herbaalba essential oil has an antimicrobial activity on all tested strains
(as presented in table 2 and 3).The antimicrobial activity varies from strain to strain and can be noticed in inhibition
zones showing that certain are more sensitive than others. According to the classification made by[11], the tested
essential oil showed strong activity (inhibition zone ≥ 20mm) against Candida albicans and moderate activity
(inhibition ˂ 20-12mm) against E. coli and Staphylococcus aureus. Several compounds are cited as responsible for
the antiseptic properties of essential oils: thymol, carvacrol, camphor…[8]. This activity of A. herbaalba essential
oil would be related to its oxygenated monoterpenes compounds. Indeed, in essential oils it was shown that
monoterpenes are able to destroy cellular integrity resulting in respiration inhibition and permeability alteration[12,
8].
460
______________________________________________________________________________
Table 2: inhibition zone (mm) and minimal inhibitory concentration (µl/ml) for essential oil of Artemisia herbaalba
Microorganism Diameter of inhibition zones (mm) MIC (µl/ml)

Escherichia coli (ATCC 25922) 12.83 ± 0.76 12.5
Staphylococcus aureus (ATCC 25213) 14.33 ± 0.57 6.25
Candida albicans (ATCC 10231) 30 ± 3.60 3.12
The antifungal activity of essential oil was tested by the method of diffusion and the appreciation of the diameters of
the inhibition zones in vitro. Obtained results of the direct contacts method show that the mycelial growth of the
various strains is affected by the various concentrations of essential oil. Indeed, more the concentration of essential
oil increases more the rate of inhibition increases. A maximum of effect is obtained with the amount of 1000 ppm,
this oil reduced the development of FS, GU and FOC with a rate of 78.33, 58.88 and 50.61% respectively (as shown
in Table 3).Differences of sensitivity or resistance are noted according to the concentrations and to the various
strains tested since it is observed that the GU strain is more resistant compared to FS and FOC at a low
concentration (250 ppm).Therefore, for the test of the mycelia growth, the most sensitive strain to essential oil is FS
(I% › à 75%). The analysis of the results indicates that the three strains tested are sensitive to the essential oil. This
sensitivity results in a reduction in the spores with the increase in the concentration. The rates of inhibition are
higher than 50% for FOC (91,87), GU (90.40%) and FS (86,25%) with the concentration of 1000ppm. The three
percentages of sporulation of each studied strain are higher than CI50 (FOC, 58.53%; GU, 63.46% and FS,
75.31%).For the low concentration (250 ppm), we find that the percentage of inhibition of FOC and FS is more or
less equal to CI50, contrary in GU which has a percentage lower than the value CI50.Therefore, this essential oil has
an inhibiting effect on the sporulation of the strains studied with concentrations of 500 and 1000 ppm. For the
germination of the spores, it appears that the most important effect was observed for GU. An inhibiting activity of
100% was noticed by the application of the two concentrations (500ppm and 1000ppm) on the germination of GU,
on the other hand the percentage of germination at the concentration of 250 ppm is lower than the value of CI50.On
the basis of percentage of germination of the conidia, essential oil appeared to be active on all strains tested and at
all the concentration of essential oil used. The antifungal activity of essential oil of A. herbaalba can be allotted the
presence of camphor (29.816%) and thujone (1.409%). Our results are in conformity with other research, who
declared that there is a relation between the antifungal capacity and the presence oxygenated monoterpenes[13, 8, 6].
Table 3: Inhibition (%) of Artemisia herba-alba essential oil on conidia germination, mycelia growth and sporulation of Fusariumsolani,
Fusariumoxysporum and Pythiumultimum
F. solani F. oxysporum P. ultimum

Control 0 0 0
250ppm 44.44 ± 9.36 52.05 ± 9.77 64.28 ± 6.68
Conidia Germination
500ppm 55.55 ± 17.54 61.64 ± 6.51 100 ± 0
1000ppm 88.88 ± 8.93 78.08 ± 1.82 100 ± 0
Control 0 0 0
250ppm 50 ± 13.75 6.1 ± 2.13 0
Croissance mycélienne
500ppm 51.25 ± 1.25 19.12 ± 5.65 54.81 ± 9.7
1000ppm 78.33 ± 1.44 50.61 ± 9.5 58.88 ± 8.88
Control 0 0 0
250ppm 45.39 ± 29.18 58.53 ± 24.07 34.31 ± 7.38
sporulation
500ppm 75.51 ± 10.97 58.92 ± 13.74 63.46 ± 4.88
1000ppm 86.25 ± 22.11 91.86 ± 4.13 90.46 ± 2.81
CONCLUSION
Medicinal and aromatic plants are an important and inexhaustible source of natural bioactive substances and
compounds. The study was conceived to assess antimicrobial activity of A. herbaalba aerial part essential oil. The
main compounds of essential oil of A. herbaalbafrom Saidaare different than those reported by several authors from
other regions. The antimicrobial activity of the essential oil of A. herbaalba was determined. The results showed that
examined oil has an important antimicrobial activity; it was found that it was active against all strains tested.
Finally, if white wormwood is regarded as having substances for human medicine and animal feeding, it has also
substances with important effects on a biological level. Whatever efforts are made in research works in this field,
they will always remain insufficient to interpret, understand and take profit of all virtues and qualities embodied by
steppe medicinal plants.
Acknowledgments
The authors would like to thank the director of faculty of Science at nature and life. This work was supported by the
Ministry of Higher Education and Scientific Research of Algeria
461
______________________________________________________________________________
REFERENCES
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462

Mémoir 2016

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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA

UNIVERSITE MUSTAPHA STAMBOULI DE MASCARA

Thèse présentée par :

Mme BOUZIDI Nebia

Etude des activités biologiques de l’huile essentielle de l’armoise

Année universitaire 2015/2016

Cette étude a pour objectif d’examiner les activités antioxydante et antimicrobienne de

L’analyse qualitative par CG/SM de l’huile essentielle obtenue nous a permis

En fin, si l’armoise blanche est considérée comme matière pleine de substances

Mots clés: Activité antimicrobienne, Activité antioxydante, Activité biologique, Armoise

The qualitative analysis by CG/SM of essential oil allowed us to identify 31

Tables des matières ......................................................................................................................... i

Liste des figures ............................................................................................................................. ix

Liste des tableaux ......................................................................................................................... xiii

Liste des abréviations .................................................................................................................... xv

Chapitre 01: Les huiles essentielles

I.1. Les huiles essentielles............................................................................................................... 3

I.1.1. Généralités ............................................................................................................................ 3

I.1.1.1. Genèse de l’essence ............................................................................................................ 3

I.1.1.2. Plante aromatique ............................................................................................................... 4

I.1.1.3. Mode d’obtention des matières premières de la phytothérapie ................................................ 5

1. Poudres végétales ...................................................................................................................... 5

I.1.2. Définition des huiles essentielles ............................................................................................ 5

I.1.3. Localisation et lieu de synthèse des huiles essentielles ............................................................. 5

I.1.4. Propriétés physico-chimiques ................................................................................................. 6

I.1.5. Composition chimique ........................................................................................................... 7

I.1.6. Méthodes d’extraction ........................................................................................................... 8

I.1.6.1. La distillation ..................................................................................................................... 8

I.1.6.2. L’expression ....................................................................................................................... 8

I.1.8. Facteurs de variabilité des huiles essentielles ......................................................................... 10

I.1.8.1. Facteurs extrinsèques ......................................................................................................... 10

a) L’origine géographique ............................................................................................................. 10

b) Les conditions environnementales .............................................................................................. 10

c) Les facteurs technologiques ....................................................................................................... 11

I.1.8.2. Facteurs intrinsèques.......................................................................................................... 11

a) L’origine botanique ................................................................................................................... 11

b) L’organe producteur ................................................................................................................. 11

c) Le chémotype ou spécificité biochimique .................................................................................... 11

d) Le stade végétatif ...................................................................................................................... 12

I.1.9. Propriétés biologiques et pharmacologiques ........................................................................... 12

I.1.9.1. Propriétés appétentes et digestives ...................................................................................... 13

I.1.9.2. Activités antimicrobienne ................................................................................................... 13

I.1.9.2.1. Généralités ..................................................................................................................... 13

I.1.9.2.2. Activité antifongique ....................................................................................................... 14

I.1.9.2.3. Activité antibactérienne ................................................................................................... 14

a) Mode d’action contre les bactéries .............................................................................................. 15

b) Analyse de l’action thérapeutique des huiles essentielles « aromatogramme » ............................... 15

I.1.9.3. Propriétés carminatives ..................................................................................................... 16

I.1.9.4. Propriétés antioxydantes ................................................................................................... 16

I.1.9.4.1. Méthode d’évaluation de l’activité antioxydante ............................................................... 17

I.1.9.5. autres propriétés ............................................................................................................... 17

I.1.10. condition de stockage et de conservation des huiles essentielles ............................................ 18

Chapitre 02: Artemisia herba alba

I.2. Armoise blanche (Artemisia herba alba Asso) ........................................................................ 21

I.2.1.1. Caractères botaniques ....................................................................................................... 21

1. Appareil végétatif ...................................................................................................................... 21

I.2.1.2. Applications biologiques et pharmacologiques .................................................................... 22

I.2.2. armoises « genre Artemisia »................................................................................................. 23

I.2.2.1. Activités pharmacologiques ............................................................................................... 24

I.2.2.2. composition chimiques des huiles essentielles du genre Artemisia ....................................... 24

I.2.2.3. Armoise blanche « Artemisia herba alba Asso » .................................................................. 25

1. Appellation locales .................................................................................................................... 25