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II.Antibiogramme.
A.Test de sensibilité aux antibiotiques.
1.Staphylocoques et bêtalactamines
2.staphylocoques et tétracyclines
3.staphylocoques et MLS
4.autres résistances
Famille: Micrococcaceae ;
Genre: Staphylococcus ;
Environ 44 espéces dont :
Chez l'homme, les espèces les plus couramment
isolées sont :
› Staphylococcus aureus, le plus pathogène,
› Staphylococcus epidermidis, souvent considéré comme un
opportuniste,
› Staphylococcus saprophyticus, responsable d'infections
urinaires chez la femme jeune (cystite)
› et à une fréquence moindre, St. haemolyticus, St. hominis,
St. capitis et St. auricularis.
La transmission intra ou interhumaine s’opère généralement
par contact direct => manuportage
Plus rarement, elle peut être indirecte à partir d’une source
environnementale (vêtements, draps, matériels médicaux).
Responsable de plusieurs infections :
Infections communautaires et nosocomiales
Infections cutanéo-muqueuses (folliculite, furonculose,
anthrax)
Septicémies, endocardites, méningites….
Intoxications alimentaires
Infections urinaires
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Cocci à Gram positif groupés en amas , immobiles , non
sporulés et ne présentent pas de capsule visible au
microscope
Aéro-anaérobie facultatif, non exigeant
Ils se développent rapidement à 37°C sur les milieux
usuels : Gélose nutritive
Milieux sélectifs: Chapman, Baird Parker
Catalase +
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La plupart des souches de S. aureus élaborent un
pigment qui donne une couleur jaune-orangé aux
colonies.
Coagulase +
Dnase (thermonuclease) +
Staphorex (test d’agglutination ) +
1.détermination de la CMI par microdilution selon les
normes ISO standard 20776-1:
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Il est préférable de ne pas mettre plus de 6 disques
d’antibiotiques sur une boîte de 90 mm de
diamètre. Les disques d’antibiotiques doivent être
espacés de 24 mm , centre à centre.
Presser chaque disque d’antibiotique à l’aide d’une
pince bactériologique stérile pour s’assurer de son
application. Une fois appliqué, le disque ne doit pas
être déplacé.
Tester la liste d’antibiotiques indiqués dans les
tableaux suivants:
LISTE STANDARD:
Pénicilline G
Céfoxitine
Gentamycine
Erythromycine
Clindamycine
Quinupristine-dalfopristine
Norfloxacine
Fluoroquinolone
Acide fusidique
Cortimoxazole
Rifampicine
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Liste complémentaire:
› Tétracyclines
› Ceftaroline › Minocycline
› Vancomycine › Tigécycline
› Teicoplanine › Linézolide
› Kanamycine › nitrofurantoine
› Fosfomycine
› Tobramycine
› Oxacilline
› Netilmicine › Daptomycine
› Trimethoprime › mupirocine
› Chloramphénicol
Mesurer avec précision les diamètres des zones
d’inhibition à l’aide d’un pied à coulisse métallique,
à l’extérieur de la boîte fermée.
Comparer ces résultats aux valeurs critiques figurant
dans la table de lecture jointe.
Classer la bactérie dans l’une des catégories :
Sensible, Intermédiaire ou Résistante.
NB : La souche de contrôle ATCC 25923 doit être testée
dans les mêmes conditions.
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Actuellement, environ 95% des souches sont résistantes à la
pénicilline G, aux aminopénicillines, aux Carboxypenicillines et
aux uréidopénicillines <=> productrices de Pénicillinase.
(Il n’existe pas de méthode fiable de détection de la production de
pénicillinase pour les espèces autres que S. aureus.)
Depuis quelques années , les Staphylocoques ont développé une
résistance à la méthicilline par modification de la cible
(modification de la plp2a géne mecA) ; ces souches sont
communément appelées souches méti-R ou SARM (S. aureus
Résistant à la Méthicilline).
En milieu hospitalier, 20 à 40% des souches sont SAMR (Ha-
SAMR )
Les souches communautaires sont, en général, sensibles à la
méthicilline,, cependant depuis quelques années, nous
observons la diffusion de souches communautaires résistantes à
la méthicilline (Co SAMR)
la ceftaroline (CS3G) et le ceftobiprole (CS5G) possèdent
une activité sur les staphylocoques résistants à l’oxacilline mais
leur activité doit être testée séparement.
Les staphylocoques résistants à la méticilline sont souvent
résistants à de multiples familles d’antibiotiques; cependant,
certaines souches ont une résistance isolée à l’oxacilline,
notamment les souches possédant le gène mecC.
Autres résistances (plus rares):
BORSA (Borderline Staphylococcus aureus) :
hypersécrétion de pénicillinase provoquant une hydrolyse des
pénicillines M.
On observe une résistance de bas niveau à l’oxacilline.
Ces enzymes sont plus ou moins inhibés par les inhibiteurs de b-
lactamases.
Ces souches restent sensibles aux céphalosporines,
carbapénèmes …
Phénotype
sauvage S S S S
Pénicillinase
R S S S
Modification
de PLP2a R R R R
gène mecA
BORSA
Pase R R R S
hyperproduite
Souches
borderline
MODSA
Modif. PLP (non S S R S
2a) 24
Absence de Pase
Technique Contrôle de Observation
qualité
Test à la -Antibiogramme S.aureus ATCC 25923 Normes NCCLS:
-MH S.aureus: R si ≤ 19mm
cefoxitine (30µg)
-0,5 Mc Farland SCN: R si ≤ 24mm
Screening test -MH 4% NaCl S.aureus ATCC 29213 Test peu reproductible pour
-Oxacilline à 6µg/ml S.aureus ATCC 43300 les SCN
MRSA
-0,5 Mc Farland S.aureus ATCC
-Ensemencement / 43866
spot
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Milieu : Gélose MH additionné de 4% de NaCl et de 6µg d’oxacilline.
Phénotype Sensible S S S S
sauvage
Modification MLSbi R S S S
de la cible
MLSbc R R R S
Inactivation L S R s S
enzymatique LSa S s/R S ?
Sa S S S ?
K R S S
KT R R S
KTG R R R
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Le principal mécanisme de résistance du
staphylocoque doré aux fluoroquinolone est une
mutation de la cible (ADN gyrase ou topoisomérase
IV). Il confère une résistance croisée à toutes les
fluoroquinolones.
D’autres mécanismes d’efflux ou de défaut de
pénétration sont plus rares.
Les souches catégorisées sensibles à la norfloxacine
peuvent être rendues sensibles à la ciprofloxacine, à
la lévofloxacine, à la moxifloxacine et à l'ofloxacine.
Pour les souches non sensibles à la norfloxacine,
chaque fluoroquinolone doit être testée
individuellement.
VISA (Vancomycin Intermediate Staphylococcus
aureus), GISA (Glycopeptide
Intermediate Staphylococcus aureus) :