Les Anticorps Monoclonaux

Dr. H. KADIRI 2020-2021

 Plan

• Définitions
• Obtentions des Anticorps Monoclonaux (AcM)
• Ingénierie des AcM
• Nomenclature des AcM
• Applications diagnostiques et thérapeutiques
 Introduction
 L’introduction de la sérothérapie en 1890 par Emil von Behring fût à l’origine
d’une nouvelle approche thérapeutique: l’immunothérapie.
-> Naissance de la sérothérapie.
 La propriété de reconnaissance spécifique d’un anticorps en fait un outil idéal
pour le traitement d’un large éventail de pathologies.

 En 1972, César Milstein et Georges Köhler mettent au point une technique

d’hybridation lymphocytaire permettant de produire des anticorps dirigés contre
un déterminant antigénique unique en quantité illimitée.
-> Naissance des anticorps monoclonaux.
 Définitions
 Sérothérapie:
Utilisation de sérums d’origine animales ou humaines contenant des anticorps dirigés contre
une cible d’intérêt, dans un but thérapeutique.

 Sérums polyclonaux:
 Contenant des anticorps dirigés contre plusieurs déterminants antigéniques, qu’ils
soient portés par le même antigène ou pas.
 Produits par plusieurs clones lymphocytaires.
 Sont issus d’animaux hyperimmunisés, ou de donneurs humains immunisés ou
vaccinés.
 Exp: sérums anti-tétaniques, anti- scorpioniques, anti- hépatites B, IgIV…

 Sérums monoclonaux:
 Contenant des anticorps dirigés contre un déterminant antigénique unique.
 Produits par un clone lymphocytaire unique (hybridome).
 Sont issus de la technologie d’hybridation lymphocytaire.
 Définitions
 Anticorps monoclonaux:
Les anticorps monoclonaux sont une population
homogène d’anticorps produits par un clone cellulaire
appelé hybridome. Ils sont conçus pour être
monospécifiques: ils reconnaissent un déterminant
antigénique unique.

 Hybridome:
Une cellule hybride née de la fusion d’une cellule issue
d’une lignée continue myélomateuse et d’un
lymphocyte B différencié sécrétant des anticorps
d’une seule spécificité.
Obtention des Anticorps
Monoclonaux
Obtention des Anticorps Monoclonaux: L’hybridation
lymphocytaire

Cellule myélomateuse:
• Immortelle.
• Non sécrétrice d’Ig.
• Porteuse de déficiences
enzymatiques.

Hybridome:
• Immortel. Clonage
•Sécréteur d’une Ig
LB
LB unique. Production d’AcM

Lymphocyte B activé:
• Mortel
• Sécréteur d’Ig.
• machinerie enzymatique
complète.
 Les Techniques de Fusion

• 1ère fusion (1962) par OKADA et TADOKORO : Induction

de synticia dans les cultures eucaryotes.
Le Virus Sendaï • Méthode de fusion utilisée par Köhler et Milstein en 1975.
• Actuellement abandonnée.

• La plus couramment utilisé.

Le Poly-Ethylène • PEG 1500 le plus souvent.
Glycol (PEG) • Simple, pratique.

• Permet la fusion dirigée de deux cellules visualisées sous un

microscope.
L’Electrofusion • Évite l’emploi de lignées déficientes. Sélection non-
nécessaire car fusion contrôlée.
 Les Techniques de Sélection:
Les lignées cellulaires déficientes

Les cellules de myélome utilisées sont préalablement sélectionnées pour leur

déficience en une enzyme d métabolismes des nucléotides: l’hypoxanthine-
guanine phosphoribosyl-transférase HGPRT ou, plus rarement, la thymidine-
kinase TK.

Les cellules eucaryotes disposent de deux voies distinctes pour synthétiser les
nucléotides :
• La voie de néosynthèse: à partir de sucres et d’acides aminés.
• La voie de récupération: à partir de nucléosides.

L’HGPRT et la TK assurent une étape essentielle de la voie de récupération.

Leur déficience conduit à l’utilisation par la cellule de la voie de néosynthèse, qui
peut être bloquée par des substances telles que l’aminoptérine, l’azasérine ou le
méthotrexate.
Métabolisme des nucléotides et mécanismes de
sélection
 Les Techniques de Sélection

Cellule Fusion
Lymphocyte B :
myélomateuse:
• Mortel
• Immortelle.
• Sécréteur d’Ig.
• Non sécrétrice d’Ig.
• HGPRT +
• HGRPRT -

HAT
Culture en milieu
Culture en milieu
HAT

Cellules Cellules LB non-

Hybridomes: LB fusionnés:
myélomateuses myélomateuses fusionnés:
• HGPRT + • HGPRT +
non-fusionnées : fusionnées: • HGPRT +
• Survivent en • Mais non-
• HGPRT - • HGPRT - • Mais non-
milieu HAT. cultivables in-vitro.
•Meurent. • Meurent. cultivables in-vitro.
 Screening des Hybridomes
Les clones obtenus sont ensuite testés par analyse du surnageant
de culture pour mettre en évidence:
– La présence des anticorps monoclonaux (Par la méthode ELISA).
– Le type de l’anticorps produit .

Screening Identification
Culture des Hybridomes

Culture in vitro
Les hybridomes sont faciles à cultiver in vitro:
• Adhèrent mal au plastique: transfert par simple pipetage.
• Pas de métabolites toxiques: renouvellement du milieu de culture
par simple dilution des cellules avec le milieu frais.
• A l’échelle de laboratoire, la culture se fait dans des flacons. A
l’échelle industrielle, elle se fait dans des réacteurs à cellules.

Culture in vivo (dans des liquides d’ascite)

• La culture des hybridomes se fait dans la cavité péritonéale de
souris ou de rat en association avec des substances irritantes (le
pristane , adjuvant de Freund).
• Choisir une souche d’animaux compatible avec les cellules
parentales de l’hybridome afin d’éviter les rejets.
• Pour les anticorps monoclonaux humains: souris Nude maintenue
durant la production en isolateurs stériles.
La découverte des anticorps monoclonaux suscita immédiatement de grands
espoirs thérapeutiques. Cependant, d’importants problèmes surgirent
lorsque leur utilisation chez des patients fut envisagée.

L’obtention d’anticorps de haute affinité

dirigée contre des cibles spécifiques pertinentes.

Les propriétés effectrices des anticorps de souris ne

sont pas optimales:« ADCC », activation du C’…

L’apparition d’anticorps humains anti-anticorps de

souris («Hama», pour human antimouse antibody).
Ingénierie des Anticorps
Monoclonaux
Ingénierie des Anticorps Monoclonaux :
Humanisation

AcM humains
1994-1999
AcM …mumab
humanisés
1988- 1991
…zumab
AcM
chimériques
1984
…ximab

AcM murins
1975
…momab
Humanisation Moins
Immunogènes immunogènes
 1. Construction d’AcM Chimériques (1984):

• Isoler l’ADN codant pour le domaine

VH et VL d’un anticorps monoclonal
murin et le lier à l’ADN codant pour les
domaines constants d’une Ig humaine.

• En général :
• CH1,CH2,CH3 d’une IgG1
Anticorps
• CL d’une Kappa Domaines constants
monoclonal murin d’une Ig humaine
 1. Construction d’AcM Chimériques (1984):

Toutefois, La tolérance vis-à-vis des anticorps

chimériques était insuffisante

 Apparition d’anticorps humains anti-

anticorps chimériques « HACA ».
 2. Construction d’AcM Humanisés (1989):

CDR’s murins CDR’s

CDR’s humains
murins

• Greffe de régions hypervariables

d’un AcM murin sur des régions
charpentes ( Framework) VH et
VL humaines (CDR grafting).

•Véritable difficulté: choix des

région Framework.

•Objectif: garder la conformation

spatiale des régions variables,
éviter un changement
Anticorpsd’affinité de
l’anticorps obtenu. murin Ig humaine
monoclonal
 3. Obtention de Souris Transgéniques (1994):
(AcM humains)

Souris transgéniques portant un grande

partie des gènes codant pour les chaines
lourdes et légères humaines.

 Remplacer les loci des gènes d’Ig murines

par des loci des gènes d’Ig humaines.

Ces souris peuvent être immunisées contre

un nombre illimité d’antigènes, et fournir
des LB humains comme partenaires de
fusion cellulaire  hybridomes sécrétant
des Ac humains.
Nomenclature des Anticorps
Monoclonaux
 Nomenclature des anticorps monoclonaux
(Convention OMS 2009)
Préfixe Radical A (cible) Radical B (origine) Suffixe

b(a) Bactérienne a Rat

c(i) Cardiovasculaire axo Rat/Souris
f(u) Fungique e Hamster
Propre à k(i) Interleukine i Primate
chaque l(i) Immunomodulation o Souris
mab
anticorps n(e)* Neuronale u Humain
monoclonal s(o) Os xi Chimérique
tox(a) Toxine Xizu* Chimérique/Humanisé
t(u) Tumeur zu Humanisé
v(i) Virale

mab: utilisé pour tout produit contenant un domaine variable d’immunoglobuline, qui se lie
à une cible prédéfinie (n’inclut pas les protéines de fusion contenant un fragment Fc).

En principe, seule la première lettre du radical A est utilisée. Sauf si le radical B commence
par une consonne.
Nom= Préfixe + Radical A+ Radical B + Suffixe

Exp: Ada lli u

mu mab Adalumab (si nommé après 2009)

*: En discussion. International Nonproprietary Names; WHO Drug Information Vol 23, No. 3, 2009
Applications des Anticorps
Monoclonaux
 Applications des AcM
In vitro In vivo

 Utilisation diagnostique en imagerie

Tests et dosages immunologiques: médicale.
 Immunoagglutination.
 Dosages radio-immunologiques: Traitement des pathologies:
RIA, IRMA.  Tumorales.
 Immunofluorescence: IFD, IFI.  Auto-immunes.
 Dosages immunoenzymatiques:  Infectieuses
ELISA.  Allergiques.
Immunohistochimie.  Cardiovasculaires.
Cytologie et immunotypage.  Rejet de transplantations.
Sérodiagnostique.
 Anticorps monoclonaux à usage
thérapeutique approuvés aux USA et EU.
(9 juin 2012)
Nom Type Isotype Cible Année EU (USA) Indication
Muromonab (Orthoclone OKT3) Murin IgG2a CD3 1986 (1986) Rejet de transplantaion rénale
prévention du risque thrombotique en
Abciximab (Reopro) Chimérique IgG1 Fab GPIIb/IIIa 1995 (1994) angioplastie
Rituximab (MabThera, Rituxan) Chimérique IgG1 CD20 1998 (1997) Lymphome Non-Hodjkinien
Prévention du rejet en transplantion
Basiliximab (Simulect) Chimérique IgG1 IL2R 1998 (1998) rénale
Prévention du rejet en transplantion
Daclizumab (Zenapax) Humanisé IgG1 IL2R 1999 (1997) rénale
Palivizumab (Synagis) Humanisé IgG1 RSV 1999 (1998) Prévention de l'infection au RSV
Maladie de Crohn, Polyarthrie
Infliximab (Remicade) Chimérique IgG1 TNF 1999 (1998) rhumatoîde, RCH, SPA.
Trastuzumab (Herceptin) Humanisé IgG1 HER2 2000 (1998) Cancer du sein
Gemtuzumab ozogamicin (Mylotarg) Humanisé IgG4 CD33 NA (2000 ) Leucémie myéloïde aigûe
Alemtuzumab (MabCampath,
Campath-1H) Humanisé IgG1 CD52 2001 (2001) Leucémie myéloïde chronique
Arthrite rhumatoïde, Maladie de
Adalimumab (Humira) Humain IgG1 TNF 2003 (2002) Crohn,RCH, SPA.
Tositumomab-I131 (Bexxar) Murin IgG2a CD20 NA (2003) Lymphome Non-Hodjkinien
Efalizumab (Raptiva) Humanisé IgG1 CD11a 2004 (2003); Psoriasis
Cetuximab (Erbitux) Chimérique IgG1 EGFR 2004 (2004) Cancer colorectal
Ibritumomab tiuxetan (Zevalin) Murin IgG1 CD20 2004 (2002) Lymphome Non-Hodjkinien
Omalizumab (Xolair) Humanisé IgG1 IgE 2005 (2003) Asthme
Bevacizumab (Avastin) Humanisé IgG1 VEGF 2005 (2004) Cancer colorectal
Natalizumab (Tysabri) Humanisé IgG4 a4 intégrine 2006 (2004) Sclérose en plaques
Ranibizumab (Lucentis) Humanisé IgG1 Fab VEGF 2007 (2006) Dégénéressance maculaire
Panitumumab (Vectibix) Humain IgG2 EGFR 2007 (2006) Cancer Colorectal
 Anticorps monoclonaux à usage
thérapeutique approuvés aux USA et EU.
(9 juin 2012)
Nom Type Isotype Cible Année EU (USA) Première indication
Eculizumab (Soliris) Humanisé IgG2/4 C5 2007 (2007) Hémoglobinurie paroxystique nocturne
Fab,
Certolizumab pegol (Cimzia) Humanisé pegylé TNF 2009 (2008) Maladie de Crohn
Arthrite rhumatoïde et
Golimumab (Simponi) Humain IgG1 TNF 2009 (2009) psoriasique,Spondylarthrite ankylosante
Canakinumab (Ilaris) Humain IgG1 IL1b 2009 (2009) Syndrome de Muckle-Wells
Bi-
Catumaxomab (Removab) Rat/Souris spécifique EPCAM/CD3 2009 (NA) Ascites malignes
Ustekinumab (Stelara) Humain IgG1 IL12/23 2009 (2009) Psoriasis
Tocilizumab (RoActemra,
Actemra) Humanisé IgG1 IL6R 2009 (2010) Arthrite rhumatoïde
Ofatumumab (Arzerra) Humain IgG1 CD20 2010 (2009) Leucémie lymphoïde chronique
Denosumab (Prolia) Humain IgG2 RANK-L 2010 (2010) Perte osseuse
Belimumab (Benlysta) Humain IgG1 BLyS 2011 (2011) Lupus érythémateux systémique
B. NA (en cours
Raxibacumab Humain IgG1 anthrasis PA d'évaluation) Infection à l'Anthrax
Ipilimumab (Yervoy) Humain IgG1 CTLA-4 2011 (2011) Mélanome métastatique
IgG1
Brentuximab vedotin immuno- en cours
(Adcetris) Chimérique conjugué CD30 d'évaluation (2011)Lymphome d'Hodjkin
en cours
d'évaluation
Pertuzumab (Perjeta) Humanisé IgG1 HER2 (2012) Cancer du sein