Phytotherapie (2008) 6: 160164

Springer 2008

DOI 10.1007/s10298-008-0307-1

Article original
Pharmacognosie

Etude de six huiles essentielles : composition chimique

et activite antibacterienne1
J. Kaloustian 1 , J. Chevalier 2 , C. Mikail 1 , M. Martino 2 , L. Abou 1 , M.-F. Vergnes 1
1

Laboratoire de chimie analytique, qualitologie, nutrition, Faculte de Pharmacie, Universite de la Mediterranee, 27, boulevard Jean-Moulin,
F-13385 Marseille Cedex 05, France ; UMR INSERM 476 INRA 1260 Nutrition humaine et lipides , F-13385 Marseille, France ; Universite de la
Mediterranee (Aix-Marseille 2), Faculte de medecine, IPHM-IFR 125, F-13385 Marseille, France
2
UMR-MD-1, Facultes de medecine et de pharmacie, Universite de la Mediterranee, 27, Boulevard Jean-Moulin, F-13385 Marseille Cedex 05, France
Correspondance : e-mail : Jacques.Kaloustian@pharmacie.univ-mrs.fr

Resume : Les huiles essentielles sont utilisees en medecine

traditionnelle pour leurs activites antiseptiques. Au cours
de travaux precedents, le genre Thymus avait montre de
bons resultats comme antifongique. Letude a ete poursuivie sur lactivite antibacterienne. Six huiles essentielles
(Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum
vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris chemotype carvacrol, Thymus zygis chemotype thymol) ont ete
testees sur deux souches : Escherichia coli et Staphylococcus aureus. Pour la souche Escherichia coli, les huiles
essentielles dorigan et de thym a` thymol sont les plus
efficaces.
Pour la souche Staphylococcus aureus, on note une
moindre efficacite ; lhuile essentielle dorigan est la plus
active. Ce sont les phenols presents dans les huiles essentielles
qui presentent une bonne activite antibacterienne.
Mots cles : CPG-SM Origan Thym Escherichia coli
Staphylococcus aureus

Study of six essential oils: chemical

composition and antibacterial activity
Abstract: Essential oils are used in traditional medicine for
their antiseptic action. During previous studies, the Thymus
genus had shown good results as an antifungal. Research
continued into its antibacterial activity. Six essential oils
(Lavandula angustifolia, Lavandula latifolia, Origanum
vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus vulgaris chemotype
carvacrol, Thymus zygis chemotype thymol) were tested on
two strains: Escherichia coli and Staphylcoccus aureus.
Essential oils of oregano and thyme with thymol were most
effective with respect to the strain Escherichia coli. For the
1

strain Staphylococcus aureus we observed little effect:

essential oil of oregano was the more active. Phenols present
in essential oils have a good antibacterial activity.
Keywords: GC-MS Oregano Thyme Escherichia coli
Staphylococcus aureus

Introduction
Il est connu depuis lAntiquite que les huiles essentielles
(HE) presentent une activite antiseptique non negligeable.
Elles sont utilisees dans de nombreux domaines : pharma` la fin du XIXe et au
cie, cosmetique, agro-alimentaire... A
e
de but du XX sie` cle, plusieurs travaux scientifiques
relataient de laction antiseptique de plusieurs HE [3, 4,
5, 22]. Le terme daromathe rapie apparat en 1937 [9].
Laromatogramme est une methode de mesure in vitro du
pouvoir antibacterien des huiles essentielles. Cest lequivalent dun antibiogramme ou` les antibiotiques sont
remplaces par les HE [2, 14]. Plusieurs HE presentent un
pouvoir antibacterien eleve [2] : origan dEspagne, thym
(Thymus vulgaris), cannelle (Cinnamomum zeylanicum),
sarriette (Satureia montana), girofle (Eugenia caryophyllata), par rapport a` dautres qui ont une activite moyenne :
pin (Pinus sylvestris), cajeput (Melaleuca leucadendron),
eucalyptus (Eucalyptus globulus), lavande (Lavandula
officinalis), myrthe (Myrtus communis), geranium rosat
(Pelargonium graveolens). Les HE sont connues pour leur
activite antibacterienne, notamment dans les maladies
respiratoires mais egalement contre Escherichia coli,
Salmonella enterica... [1, 6-8, 16, 26, 27, 30-32]. Les HE
presentant une bonne activite antibacterienne sont aussi
de bons antifongiques et antimycosiques [24, 25].

Communication presentee au 9e`me Symposium International dAromatherapie et Plantes Medicinales, 16-18 mars 2007, Grasse

161

Certains dentre nous avaient demontre lactivite antifongique de plusieurs huiles essentielles, notamment celles qui
proviennent du genre Thymus, en synergie avec lamphotericine B vis-a`-vis de Candida albicans [10-13]. Cette etude a ete
poursuivie par levaluation de lactivite antibacterienne.
Six huiles essentielles (Lavandula angustifolia, Lavandula
latifolia, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis, Thymus
vulgaris chemotype carvacrol, Thymus zygis chemotype
thymol) ont ete testees sur deux souches : Escherichia coli
(bacterie Gram negative) et Staphylcoccus aureus (bacterie
Gram positive). Au prealable, les differents echantillons ont
ete analyses par chromatographie en phase gazeuse couplee a`
la spectrometrie de masse (CPG-SM), selon le protocole
developpe precedemment [15, 17-19] afin de determiner la
composition chimique exacte. Cette technique est tre`s utilisee
dans lanalyse qualitative et quantitative des HE ; la RMN
donne egalement de bons resultats [21, 23, 28, 29].

Materiel et methodes
Huiles essentielles
Les huiles essentielles de lavande (Lavandula angustifolia
et Lavandula latifolia), dorigan (Origanum vulgare) et de
thym (Thymus vulgaris et Thymus zygis) ont ete fournies
par les producteurs locaux de la region Provence-AlpesCote dAzur (Paca). Elles ont ete obtenues dans le courant
de lannee 2005 a` partir de plantes cultivees dans la region
Paca et conservees a` + 4 C. Les etudes ont ete menees
dans le courant de lannee 2006.

Etalons de terpe`nes et solvant

Les etalons de terpe`nes utilises presentent une tre`s grande
purete (le plus souvent supe rieure a` 99 %) : linalol
(Fluka), acetate de linalyle (Extra Synthe`se), 1-8 cineole
(Merck), camphre (Merck), carvacrol (Aldrich), a-pine`ne
(Acros), camphe`ne (Aldrich), p-cyme`ne (Aldrich), g-terpine`ne (Aldrich), thymol (Carlo Erba). Lalcool absolu
provient de Carlo Erba.

Conditions operatoires de la CPG-SM

Nous avons utilise un appareil GC Varian 3400, MS Saturn a`
ion trap, avec les librairies commerciales disponibles Wiley,

Nist, TR, et equipe dune colonne DB5-MS (25 m* 0,32 mm

diame`tre interne* 1,0 mm epaisseur de film). La temperature
initiale de 60C est maintenue pendant 1 min, puis on realise
un chauffage a` 3 C/min jusqua` 200 C ; cette temperature
finale est maintenue 15 min. Les temperatures de linjecteur et
du detecteur sont respectivement de 250 et 285 C. Le gaz
vecteur helium est a` 138 kPa en tete de colonne. La quantite
injectee de chaque huile essentielle en solution dans lethanol
a` 1 g/L est de 1 mL en mode splitless. Le dosage a ete fait par
normalisation interne (rapport des surfaces de chaque
terpe`ne etudie/totalite des terpe`nes) pour les 6 echantillons
dHE. Seuls les composes identifies et superieurs a` 1 % seront
mentionnes dans le tableau 1.

Activite antibacterienne
Le choix des bacteries sest porte sur deux souches de
bacteries frequentes en pathologie humaine, appartenant
a` deux categories differentes (Gram positive et Gram
negative). Lefficacite des produits testes ainsi que leur
modalite de penetration dans la bacterie sont differentes.
Les souches bacteriennes utilisees sont :
bacterie Gram negative (Escherichia coli) ;
bacterie Gram positive (Staphylococcus aureus).
Ces deux espe`ces bacteriennes sont responsables souvent
dinfections nosocomiales qui constituent un proble`me
majeur de sante publique. Lemergence de la multiresistance
chez ces bacteries est une des principales causes dechec
therapeutique. Les huiles essentielles sont preparees en
solution aqueuse sterile dagar noble a` 1 (m/v) [20].
Linoculum bacterien standardise titre 2 a` 6.105 cellules. La
methode utilisee concerne la determination des concentrations minimales inhibitrices (CMI) par dilution en bouillon
Mueller Hinton. La lecture macroscopique se fait apre`s
18 heures dincubation a` 37 C. La CMI est la plus faible
concentration en huile essentielle ne donnant pas de
croissance visible a` lil nu.

Resultats et discussion
La composition chimique des six huiles essentielles est
presentee dans le tableau 1. Lidentification a ete realisee
a` plus de 97 %. De nombreux composes a` moins de 0,5 % sont
presents dans ces huiles et sont pour la plupart identifies.

Tableau 1. Composition chimique des six huiles essentielles etudiees

Huiles essentielles

Principaux composes

Total*

Lavandula angustifolia
Lavandula latifolia
Origanum vulgare
Rosmarinus officinalis
Thymus vulgaris (chemotype carvacrol)
Thymus zygis (chemotype thymol)

Linalol 50,2 % ; acetate de linalyle 47,4 %.

1-8 cineole 18,8 % ; linalol 71,4 % ; camphre 9,3 %.
Carvacrol 98,3 %.
a-pine`ne 20,8 % ; camphe`ne 5,1 % ; 1-8 cineole 36,9 % ; camphre 34,2 %.
p-cyme`ne 10,6 % ; g-terpine`ne 13,5 % ; carvacrol 73,7 %.
p-cyme`ne 9,7 % ; g-terpine`ne 2,3 % ; linalol 1,4 % ; thymol 84,9 %.

97,6 %
99,5 %
98,3 %
97,0 %
97,8 %
98,3 %

(*) Somme des terpe`nes identifies dans les huiles essentielles.

162

Cependant, pour eviter de surcharger ce texte, seuls les

composes ayant une teneur superieure a` 1 % seront mentionnes dans le tableau de la composition chimique. Lidentification est realisee grace a` la spectrometrie de masse (deux
librairies sur les trois disponibles et a` 80-90 % de probabilite)
et la comparaison des spectres de masse ainsi que des temps
de retention observes dune part sur les echantillons a`
caracteriser et dautre part sur les etalons disponibles.
Les resultats de lactivite antibacterienne sont presentes
dans le tableau 2. Pour les deux souches testees, les HE de
L. angustifolia, L. latifolia et O. vulgare presentent une
activite moyenne, par opposition aux HE de O. vulgare,
T. vulgaris et T. zygis.
De`s 1973, J. Pellecuer [24, 25] avait demontre les proprietes
pharmacologiques des huiles essentielles obtenues a` partir de
quelques labiees (thym, sarriette, romarin). En 1974,
P. Belaiche [2] avait decrit egalement les proprietes dautres
huiles essentielles issues de la cannelle et du clou de girofle, ne
contenant pas de phenols mais des aldehydes aromatiques,
pour leurs proprietes antibacteriennes. Nous constatons
que pour la souche Escherichia coli, les huiles essentielles
dorigan et de thym a` thymol et a` carvacrol sont les
plus efficaces (CMI = 1 000 mg/mL). Pour la souche
Staphylococcus aureus, on note une moindre efficacite pour
le thym (CMI = 2 000 mg/mL) ; lhuile essentielle dOrigan est
la plus active.
Il a ete demontre que, en phase gazeuse, dans le cadre de
therapie par inhalation [16], lactivite antibacterienne de
lhuile essentielle de thym a` phenol (thymol ou carvacrol) est
meilleure que celle de la lavande sur les bacteries S. aureus et

E. coli. Lhuile essentielle de thym sauvage (renfermant plus de

80 % de carvacrol) est efficace sur les souches S. aureus et
E. coli, a` la concentration de 12,5 mg/l dair, alors que lhuile
essentielle de lavande vraie (renfermant 30 % de linalol et
37 % dacetate de linalyle) est efficace respectivement a` 100 et
a` plus de 1 600 mg/l dair. En solution aqueuse [1], les huiles
essentielles de labiees, notamment loregon, sont efficaces sur
les bacteries S. aureus et E. coli, pour une concentration
inferieure ou egale a` 1 pour 1 000, soit comparable a` nos
resultats obtenus.
Nous avons par ailleurs teste des hydrolats obtenus
apre`s entranement a` la vapeur pour la production de
lhuile essentielle et separation avec lhuile essentielle non
miscible. Les resultats sont negatifs (CMI> 5 000 mg/mL).
En revanche, nous avons observe pour les phenols testes a`
letat pur une activite similaire pour les deux souches :
thymol 200 mg/mL et carvacrol 400 mg/mL.
Les phenols (thymol et carvacrol) purs presentent une
meilleure activite que les HE pures. La presence de traces
dautres terpe`nes dans les HE pourrait expliquer cette
difference dactivite. Mais lorsque la notion de bio et de
naturalite est en pleine progression, on peut parfaitement
imaginer lutilisation de ces HE, composes naturels et bio,
dans les produits issus de lindustrie agro-alimentaire,
mais egalement dans les produits cosmetiques, en tant
quantiseptiques et/ou dantioxydants (ou conservateurs).
De nouvelles perspectives peuvent etre envisagees par une
etude plus poussee de lactivite antibacterienne, non
seulement sur les HE utilisees seules, mais egalement en
melange, permettant ainsi une eventuelle synergie.

Tableau 2. Activite antibacterienne pour les six huiles essentielles etudiees

Souche: Escherichia coli ATCC 10536
Concentration (mg/mL)
L. angustifolia
L. latifolia
O. vulgare
R. officinalis
T. vulgaris
T. zygis
Thymol
Carvacrol

5 000

4 000

3 000

2 000

1 000

800

400

200

100

50

+
-

+
-

+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+

5 000

4 000

3 000

2 000

1 000

800

400

200

100

50

+/
-

+/
+
-

+/
+
+
-

+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
-

+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+

+
+
+
+
+
+
+
+

Souche: Escherichia coli ATCC 6538

Concentration (mg/mL)
L. angustifolia
L. latifolia
O. vulgare
R. officinalis
T. vulgaris
T. zygis
Thymol
Carvacrol

Le gende : (+ croissance; +/ faible croissance; absence)

163

Conclusion
Lanalyse chimique de la composition dune huile essentielle est optimisee si on utilise la technique de la
chromatographie en phase gazeuse couplee a` la spectrome trie de masse. Cette analyse a e te effectue e sur
six echantillons dhuiles essentielles obtenues a` partir de
plantes cultivees dans la region Provence-Alpes-Cote
dAzur : lavande (Lavandula angustifolia et Lavandula
latifolia), origan (Origanum vulgare) et thym (Thymus
` plus de 97 %, les composants
vulgaris et Thymus zygis). A
de ces huiles ont ete identifies grace a` la comparaison des
temps de retention avec des etalons analyses dans les
memes conditions et grace a` leur spectre de masse.
Lanalyse quantitative a ete realisee par normalisation
interne. Parmi les huiles essentielles testees de lavande,
dorigan, de romarin et de thym, seuls lorigan et le thym
presentent la meilleure activite antibacterienne vis-a`-vis
des souches Escherichia coli (bacterie Gram negative) et
Staphylcoccus aureus (bacterie Gram positive). Cette etude
confirme que ce sont les phenols (thymol et carvacrol)
qui donnent a` lhuile essentielle le caracte`re antibacterien.
Les premiers travaux scientifiques publies datent dune
trentaine dannees. Il serait interessant de continuer
ces travaux notamment sur de nouvelles souches de
bacteries. Ces premiers resultats que nous avons obtenus
permettront une etude systematique de nombreux echantillons dhuiles essentielles sur des bacteries pathoge`nes
presentant une resistance accrue vis-a`-vis des antibacteriens
classiques, notamment en milieu hospitalier. Lutilisation de
produits naturels a` la place de certains conservateurs ou
antioxydants de synthe`se pourrait etre envisagee dans le
domaine de lindustrie agro-alimentaire et de la cosmetique.
Remerciements a` C. Borrely et L. Bollo pour leur
participation technique.

9.
10.

11.

12.

13.

14.
15.

16.

17.

18.

19.

20.

21.

22.

Bibliographie
1. Baydar H, Sagdic O, Ozkan G, Karadogan T (2004) Antibacterial activity
and composition of essential oils from Origanum, Thymbra and Satureja
species with commercial importance in Turkey. Food Control 15: 169-72
2. Belaiche P (1979) Traite de phytotherapie et daromatherapie. Maloine,
tome 1, dapre`s http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
3. Bertrand G (1893) Le gomenol. Bull Gen de Ther Ann Inst Pasteur,
dapre`s http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
4. Bonnaure F (1919) Essais sur les proprietes bactericides de quelques
HE. The`se de medecine, Lyon 1919, et Parfumerie moderne 12: 151
5. Chamberland M (1887) Les essences au point de vue de leurs
proprietes antiseptiques. Ann Inst Pasteur 1: 153-4
6. Chang ST, Chen PF, Chang SC (2001) Antibacterial activity of leaf
essential oils and their constituents from Cinnamomum osmophloem. J Ethnopharmacol 77: 123-7
7. De Feo V, Bruno M, Tahiri B, Napolitano F (2003) Chemical
composition and antibacterial activity of essential oils from Thymus
spinulosus. J Agric Food Chem 51: 3849-53
8. Friedman M, Henika PR, Levin CE et Mandrell RE (2004)
Antibacterial Activities of Plant Essential Oils and their Components

23.

24.

25.

26.

27.

28.

against Escherichia coli and Salmonella enterica in Apple Juice.

J Agric Food Chem 52: 6042-8
Gattefosse R M (1937) LAromatherapie Les HE hormones
vegetales. Librairie des sciences Girardot, Paris
Giordani R, Regli P, Kaloustian J, Portugal H, Buc J (2003) In vitro
synergistic effect of a mixture of Hevea Brasiliensis latex and
essential oil from Thymus vulgaris with amphotericin B against
Candida Albicans growth. J Mycol Med 13: 87-91
Giordani R, Regli P, Kaloustian J, et al. (2004) Antifungal effect of
various essential oils against Candida albicans. Potentiation of
antifungal action of amphotericin B by essential oil from Thymus
vulgaris. Phytother Res 18: 990-5
Giordani R, Regli P, Kaloustian J, Portugal H (2006) Potentiation of
Antifungal Activity of Amphotericin B by Essential Oil from
Cinnamomum cassia. Phytother Res 20: 58-61
Giordani R, Kaloustian J (2006) Action anticandidosique des huiles
essentielles : leur utilisation concomitante avec des medicaments
antifongiques. Phytotherapie 3: 121-4
Girault M, Bourgeon J (1971) Les cahiers de biotherapie. N29,
dapre`s http://fr.wikipedia.org/wiki/Aromatogramme
Hadef Y, Kaloustian J, Chefrour A, et al. (2007) Chemical
composition and variability of the essential oil of Thymus numidicus
Poir. From Algeria. Acta Bot Gallica 154: 265-74
Inouye S, Takizawa T, Yamagushi H (2001) Antibacterial activity of
essential oils and their major constituents against respiratory tract
pathogens by gaseous contact. J Antimicrob Chemother 47: 565-73
Kaloustian J, Pauli AM, Pastor J (2000) Evolution of Camphor and
others components in the essential oils of two labiate species during
the biological cycle. Analusis (European Journal of Analytical
Chemistry) 28: 308-15
Kaloustian J, Portugal H, Pauli AM et Pastor J (2002) Chemical,
Chromatographic and Thermal Analysis of Rosemary (Rosmarinus
officinalis). J Appl Polym Sci 83: 747-56
Kaloustian J, Abou L, Mikail C, Amiot-Carlin MJ et Portugal H
(2005) Southern French thyme oils Chromatographic study of
chemotypes. J Sci Food Agric 85: 2437-44
Lens-Lisbonne C, Cremieux A, Maillard C, Balansard G (1987)
Methodes devaluation de lactivite antibacterienne des huiles
essentielles: application aux essences de thym et de cannelle.
J Pharm Belg 42: 297-302
Liu K, Rossi PG, Ferrari B, Berti L, et al. (2007) Composition, irregular
terpenoids, chemical variability and antibacterial activity of the
essential oil from Santolina corsica. Phytochemistry 68: 1698-705
Martindale W H (1910) Essential oils in relation to their antiseptic
powers as determined by their carbolic coefficient. Perfumery and
Essential Oil Research 1: 266-96
Masoudi S, Monfared A, Rustalyan A, Chalabian F (2005) Composition and Antibacterial Activity of the Essential Oils of Semenovia
dichotoma, Johreniopsis sesloides and Bunium cylindricum. J Essent
Oil Research 17: 691-4
Pellecuer J, Roussel JL, Andary C (1973) Proprietes antifongiques
comparatives des essences de trois Labiees mediterraneennes : romarin,
sarriette et thym. Travaux de la Societe de pharmacie de Montpellier 3: 584
Pellecuer J, Allegrini J, De Buochberg S (1974) Etude in vitro de
lactivite antibacterienne et antifongique de lessence de Satureia
montana. J Pharm Belg 2: 137-44
Prabuseenivasan S, Jayakumar M, Ignacimuthu S (2006) In vitro
antibacterial activity of some plant essential oils. Complement Altern
Med 6: 39
Saenz MT, Tornos MP, Alvarez A, et al. (2004) Antibacterial activity
of essential oils of Pimenta racemosa var. terebinthina and Pimenta
racemosa var. grisea. Fitoterapia 75: 599-602
Skocibusic M, Bezic N, Dunkic V et Radonic A (2004) Antibacterial
activity of Achillea clavennae essential oil against respiratory tract
pathogens. Fitoterapia 75: 733-6

164
29. Sonboli A, Salehi P, Ebrahimi SN (2005) Essential Oil Composition
and Antibacterial Activity of the Leaves of Stachys schtschegleevii
from Iran. Chemistry of Natural Compounds 41: 171-4
30. Suschke U, Geiss HK, Reichling J (2006) Antibacterial activity of the
essential oils of catnip and lemon balm against clinical isolates from
the respiratory tract. Planta Med 72: issue 11. 54th Annual Congress
on Medicinal Plant Research (Helsinki Finlande), P027

31. Viuda-Martos M, Ruiz-Navajas Y, Fernandez-Lopez J, Perez-Alvarez JA

(2008) Antibacterial activity of different essential oils obtained from
spices widely used in Mediterranean diet. International Journal of Food
Science and Technology 43: 526-31
32. Yasuo T, Hiroe K, Nobuji N (2003) Antibacterial Activity of Essential
Oils against Pathogens Bacteria in Upper Airway Respiratory Tract.
Terupen Oyobi Seiyu Kagaku 47: 303-5